一種治療骨質(zhì)疏松的藥物組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種治療骨質(zhì)疏松的藥物組合物，包含絲帶蕨提取物和藥學上可接受的載體。本發(fā)明所述的藥物組合物對大鼠類成骨UMR 106細胞的增殖和/或分化均顯示一定的促進作用。
【專利說明】一種治療骨質(zhì)疏松的藥物組合物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體來說涉及一種治療骨質(zhì)疏松的藥物組合物。

【背景技術(shù)】
[0002] 骨質(zhì)疏松是一種以低骨量和骨組織的微細結(jié)構(gòu)受到破壞為特征，并導致骨脆性增 力口，骨折危險程度增加的全身性疾病。根據(jù)我國老年人口骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病率的報道，1992 年劉忠厚教授根據(jù)1990年人口普查的資料經(jīng)計算提出中國人患原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥6300 萬，1998年為8400萬，2001年劉忠厚教授根據(jù)2000年我國人口普查的數(shù)據(jù)推算我國患有 原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥約8800萬人，占全人口的6. 97%，男女比例1:60。2006年劉忠厚報導 中國有9060萬人患骨質(zhì)疏松，占全國人口的7. 01%。且在我國絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者的 生存質(zhì)量的調(diào)查研究中顯示，骨質(zhì)疏松癥患者生存質(zhì)量的8個亞健康領(lǐng)域得分均低于對照 組，其中在身體疼痛、健康感受、精神健康、身體功能、社會功能五項具有統(tǒng)計學意義。
[0003] 隨著我國人口的不斷老齡化和平均期望壽命增長，骨質(zhì)疏松癥將成為嚴重危害中 老年人群身心健康和生活質(zhì)量的疾病之一，一旦由于骨質(zhì)疏松癥發(fā)生骨折將給社會及家庭 帶來沉重的負擔。目前對已發(fā)生的骨質(zhì)疏松癥雖然有些藥物可以治療骨質(zhì)疏松癥，尚無規(guī) 范的治療方法，早期發(fā)現(xiàn)骨質(zhì)疏松癥的危險因素及高危人群，并早期干預(yù)，防止骨質(zhì)疏松癥 及其骨折的發(fā)生發(fā)展將有重要的意義。
[0004] 骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生與成骨細胞和破骨細胞的功能失去偶聯(lián)有關(guān)，因此在細胞水平 上觀察藥物對骨細胞功能的調(diào)整作用是評價骨質(zhì)疏松癥防治藥物的藥效的方法之一?？紤] 原代成骨細胞培養(yǎng)要求較高，耗時較長，因此選擇大鼠骨肉瘤UMR106細胞作為體外篩選 工具。
[0005] James等人通過文獻調(diào)研和實驗總結(jié)認為，在克隆的大鼠骨肉瘤細胞系中，UMR106 細胞是最具有成骨細胞特性的細胞株之一。它具有1，25-二羥基維生素 D3受體，具有很高 的堿性磷酸酶活性，還可以受到甲狀旁腺素的調(diào)節(jié)，經(jīng)過再次移植之后仍然還能表達出這 些特性，UMR106細胞還可以分泌細胞外基質(zhì)并且礦化。
[0006] T. Kenney Gray等人研究了人體內(nèi)主要的雌激素，17 β-雌二醇對UMR106細胞的 調(diào)控作用，發(fā)現(xiàn)17 β-雌二醇對細胞的生長沒有明顯的作用，但是可以顯著的促進堿性磷 酸酶的活性。這個作用并不呈現(xiàn)濃度依賴性，而是在KT8M時最強。UMR106細胞含有胰島 素樣生長因子受體，自身可以分泌胰島素樣生長因子-1。外源性IGF-I可以促進細胞的增 殖，這種增殖作用直接受到雌激素的調(diào)控。其它一些影響骨質(zhì)疏松的激素和生長因子也能 調(diào)控UMR106細胞的功能。
[0007] 因此，UMR106細胞可以用于體外快速篩選具有抗骨質(zhì)疏松活性的藥物。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的是提供一種治療骨質(zhì)疏松的藥物組合物。
[0009] 為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供絲帶蕨提取物在制備治療骨質(zhì)疏松的藥物中 的用途。
[0010] 優(yōu)選地，所述絲帶蕨提取物是通過下列步驟制備的：
[0011] 1)取絲帶蕨100g，粉碎，過40目篩，加入水5升，在回流的條件下加熱5小時，過 濾，得到濾渣和濾液1 ;
[0012] 2)向所述步驟1)中的濾渣中加入水3升，在回流的條件下加熱3小時，過濾，得到 濾渣和濾液2 ;
[0013] 3)向所述步驟2)中的濾渣中加入水1升，在回流的條件下加熱1小時，過濾，得到 濾渣和濾液3 ;
[0014] 4)稱取2. 5g殼聚糖粉末，再加入配制好的2重量％檸檬酸水溶液，充分攪拌使殼 聚糖完全溶解，定容250mL容量瓶中備用；
[0015] 5)合并所述濾液1、2和3,濃縮到2000毫升，加入所述步驟4)中制得的殼聚糖水 溶液〇. 2克，攪拌，在室溫靜置24小時后，然后在3500r/min下離心30min，取上層清液；
[0016] 6)向所述步驟5)中制得的上層清液中加入無水乙醇至醇含量為85體積％，室溫 封閉靜置12小時，過濾，使濾液在減壓下蒸發(fā)至恒重，得到1. 3克提取物。
[0017] 優(yōu)選地，所述藥物可以是片劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、湯劑或噴霧劑。
[0018] 本發(fā)明還提供一種治療骨質(zhì)疏松的藥物組合物的制備方法，該方法包括下列步 驟：
[0019] 1)取絲帶蕨l〇〇g，粉碎，過40目篩，加入水5升，在回流的條件下加熱5小時，過 濾，得到濾渣和濾液1 ;
[0020] 2)向所述步驟1)中的濾渣中加入水3升，在回流的條件下加熱3小時，過濾，得到 濾渣和濾液2 ;
[0021] 3)向所述步驟2)中的濾渣中加入水1升，在回流的條件下加熱1小時，過濾，得到 濾渣和濾液3 ;
[0022] 4)稱取2. 5g殼聚糖粉末，再加入配制好的2重量％檸檬酸水溶液，充分攪拌使殼 聚糖完全溶解，定容250mL容量瓶中備用；
[0023] 5)合并所述濾液1、2和3,濃縮到2000毫升，加入所述步驟4)中制得的殼聚糖水 溶液〇. 2克，攪拌，在室溫靜置24小時后，然后在3500r/min下離心30min，取上層清液；
[0024] 6)向所述步驟5)中制得的上層清液中加入無水乙醇至醇含量為85體積％，室溫 封閉靜置12小時，過濾，使濾液在減壓下蒸發(fā)至恒重。
[0025] 本發(fā)明還提供一種治療骨質(zhì)疏松的藥物組合物，包含絲帶蕨提取物和藥學上可接 受的載體。
[0026] 優(yōu)選地，所述絲帶蕨提取物是通過下列步驟制備的：
[0027] 1)取絲帶蕨100g，粉碎，過40目篩，加入水5升，在回流的條件下加熱5小時，過 濾，得到濾渣和濾液1 ;
[0028] 2)向所述步驟1)中的濾渣中加入水3升，在回流的條件下加熱3小時，過濾，得到 濾渣和濾液2 ;
[0029] 3)向所述步驟2)中的濾渣中加入水1升，在回流的條件下加熱1小時，過濾，得到 濾渣和濾液3 ;
[0030] 4)稱取2. 5g殼聚糖粉末，再加入配制好的2重量％檸檬酸水溶液，充分攪拌使殼 聚糖完全溶解，定容250mL容量瓶中備用；
[0031] 5)合并所述濾液1、2和3,濃縮到2000毫升，加入所述步驟4)中制得的殼聚糖水 溶液〇. 2克，攪拌，在室溫靜置24小時后，然后在3500r/min下離心30min，取上層清液；
[0032] 6)向所述步驟5)中制得的上層清液中加入無水乙醇至醇含量為85體積％，室溫 封閉靜置12小時，過濾，使濾液在減壓下蒸發(fā)至恒重。
[0033] 優(yōu)選地，所述藥物組合物可以是片劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、湯劑或噴霧劑。
[0034] 本發(fā)明所述的藥物組合物對大鼠類成骨UMR 106細胞的增殖和/或分化均顯示一 定的促進作用。

【具體實施方式】
[0035] 下面通過實施例進一步說明本發(fā)明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的實施例是用于說明 本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實質(zhì)對本發(fā)明進行的簡單改進都屬于本發(fā)明 要求保護的范圍。除非另有說明，否則本發(fā)明中的百分數(shù)是重量百分數(shù)。
[0036] 實施例本發(fā)明的提取物
[0037] 1)取絲帶蕨100g，粉碎，過40目篩，加入水5升，在回流的條件下加熱5小時，過 濾，得到濾渣和濾液1 ;2)向所述步驟1)中的濾渣中加入水3升，在回流的條件下加熱3小 時，過濾，得到濾渣和濾液2 ;3)向所述步驟2)中的濾渣中加入水1升，在回流的條件下加 熱1小時，過濾，得到濾渣和濾液3 ;4)稱取2. 5g殼聚糖粉末，再加入配制好的2重量％檸 檬酸水溶液，充分攪拌使殼聚糖完全溶解，定容250mL容量瓶中備用；5)合并所述濾液1、2 和3,濃縮到2000毫升，加入所述步驟4)中制得的殼聚糖水溶液0. 2克，攪拌，在室溫靜置 24小時后,然后在3500r/min下離心30min,取上層清液；6)向所述步驟5)中制得的上層 清液中加入無水乙醇至醇含量為85體積％，室溫封閉靜置12小時，過濾，使濾液在減壓下 蒸發(fā)至恒重，得到1. 3克提取物。
[0038] 實驗例
[0039] 材料：a -MEM培養(yǎng)基為Gibco公司產(chǎn)品，Ifepes胰蛋白酶均為Sigma公司產(chǎn)品， UMR106細胞株購自北京大學口腔外科實驗室，源于美國麻省總醫(yī)院。胎牛血清購自中國醫(yī) 學科學院血液病研究所。
[0040] 方法：以大鼠成骨肉瘤細胞系UMR106為靶細胞，采用對照觀察的方法，以雌二醇 為陽性對照，同時設(shè)正常對照組（不加藥，只加等量細胞懸液和培養(yǎng)基）和空白對照組（不 加藥和細胞懸液，只加等量培養(yǎng)基）。配制提取物為IX 10'IX lO'l X l(T6m〇l/L 3個濃 度組，共6組。配制陽性對照和提取物使用DMS0。
[0041] UMR106細胞培養(yǎng)及形態(tài)學觀察：將UMR106細胞培養(yǎng)于含150mL/L胎牛血清、 25mmol/L H印es、100kU/L 青霉素、100mg/L 鏈霉素的 α-ΜΕΜ 培養(yǎng)基中，置 37°C、50mL/L 二 氧化碳培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。取生長狀態(tài)良好的細胞，用2. 5g/L胰蛋白酶消化，加 a-MEM培 養(yǎng)基制成細胞懸液，調(diào)整細胞濃度為4Χ IO7L'接種于4塊12孔培養(yǎng)板上，培養(yǎng)板內(nèi)放置 1. 5X1. 5cm玻片?？瞻讓φ战M、雌二醇陽性對照組、1Χ1(Γ8、1Χ1(Γ7、1Χ1(Γ6πιο1/1 3個濃度 組各設(shè)8個復(fù)孔，每孔加入細胞懸液2. 7mL，相應(yīng)藥液0. 3mL。48h后，倒置顯微鏡下觀察細 胞形態(tài)變化。
[0042] 本發(fā)明提取物對UMR106細胞增殖的影響：調(diào)整細胞濃度為2 X 1(ΛΛ接種于96孔 培養(yǎng)板，每孔加入細胞懸液180 μ L，待24h后，加入上述3個濃度的提取物，每孔20 μ L，另 設(shè)空白對照組（不加提取物，只加等量細胞懸液）。每組設(shè)8個復(fù)孔，繼續(xù)培養(yǎng)48h后，采用 四唑鹽法以490nm為測量波長，655nm為參比波長，測定各孔的吸光度A值。計算平均增殖 率。
[0043] 本發(fā)明提取物對UMR106細胞內(nèi)、外堿性磷酸酶活性的影響：調(diào)整細胞濃度為 2X 10V1，接種于2塊24孔培養(yǎng)板上，設(shè)正常對照組、雌二醇IX KT8L4陽性對照組和提取 物I X 10_8、I X 10_7、I X 10_6mol/L的3個濃度組，共5組，每組設(shè)8個復(fù)孔，按照Joha AP的 方法，加藥72h后，采用磷酸對硝基苯基質(zhì)動力學法測定細胞內(nèi)及培養(yǎng)基的堿性磷酸酶活 性。
[0044] 主要觀察指標：本發(fā)明提取物I X ΚΓ8、I X ΚΓ7、I X l(T6mol/L的3個濃度組對 UMR106細胞增殖及內(nèi)、外堿性磷酸酶活性的影響。
[0045] 統(tǒng)計學分析：由SPSS統(tǒng)計軟件完成。數(shù)據(jù)用Jts表示，進行組間t檢驗，P〈0. 05即 認為具有顯著性差異。
[0046] 結(jié)果
[0047] 不同濃度的提取物對UMR106細胞形態(tài)變化的影響
[0048] 培養(yǎng)基中加入提取物培養(yǎng)48h后，與對照組相比細胞數(shù)量明顯增多，核分裂期 多見。正常對照組在培養(yǎng)48h后，對照組UMR106細胞增殖緩慢，未見基質(zhì)堆積。加入提 取物lX10_ 8mol/L培養(yǎng)48h后，UMR106增殖明顯，細胞數(shù)增多，少量基質(zhì)堆積。加入提 取物I X KTmol/L培養(yǎng)48h后，細胞數(shù)明顯增加，重疊生長，基質(zhì)堆積明顯。加入提取物 I X l(T6m〇l/L培養(yǎng)48h后，細胞大量增殖，連接成片，基質(zhì)大量堆積，重疊生長。
[0049] 本發(fā)明提取物對UMR106細胞的促增殖作用見下表
[0050]

【權(quán)利要求】
1. 絲帶蕨提取物在制備治療骨質(zhì)疏松的藥物中的用途。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述絲帶蕨提取物是通過下列步驟制備 的： 1) 取絲帶蕨l〇〇g，粉碎，過40目篩，加入水5升，在回流的條件下加熱5小時，過濾，得 到濾渣和濾液1 ; 2) 向所述步驟1)中的濾渣中加入水3升，在回流的條件下加熱3小時，過濾，得到濾渣 和濾液2 ; 3) 向所述步驟2)中的濾渣中加入水1升，在回流的條件下加熱1小時，過濾，得到濾渣 和濾液3 ; 4) 稱取2. 5g殼聚糖粉末，再加入配制好的2重量％檸檬酸水溶液，充分攪拌使殼聚糖 完全溶解，定容250mL容量瓶中備用； 5) 合并所述濾液1、2和3,濃縮到2000毫升，加入所述步驟4)中制得的殼聚糖水溶液 〇. 2克，攪拌，在室溫靜置24小時后，然后在3500r/min下離心30min，取上層清液； 6) 向所述步驟5)中制得的上層清液中加入無水乙醇至醇含量為85體積％，室溫封閉 靜置12小時，過濾，使濾液在減壓下蒸發(fā)至恒重，得到1. 3克提取物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的治療骨質(zhì)疏松的藥物組合物，其特征在于，所述藥物可以 是片劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、湯劑或噴霧劑。
4. 一種治療骨質(zhì)疏松的藥物組合物的制備方法，其特征在于，該方法包括下列步驟： 1) 取絲帶蕨l〇〇g，粉碎，過40目篩，加入水5升，在回流的條件下加熱5小時，過濾，得 到濾渣和濾液1 ; 2) 向所述步驟1)中的濾渣中加入水3升，在回流的條件下加熱3小時，過濾，得到濾渣 和濾液2 ; 3) 向所述步驟2)中的濾渣中加入水1升，在回流的條件下加熱1小時，過濾，得到濾渣 和濾液3 ; 4) 稱取2. 5g殼聚糖粉末，再加入配制好的2重量％檸檬酸水溶液，充分攪拌使殼聚糖 完全溶解，定容250mL容量瓶中備用； 5) 合并所述濾液1、2和3,濃縮到2000毫升，加入所述步驟4)中制得的殼聚糖水溶液 〇. 2克，攪拌，在室溫靜置24小時后，然后在3500r/min下離心30min，取上層清液； 6) 向所述步驟5)中制得的上層清液中加入無水乙醇至醇含量為85體積％，室溫封閉 靜置12小時，過濾，使濾液在減壓下蒸發(fā)至恒重。
5. -種治療骨質(zhì)疏松的藥物組合物，其特征在于，包含絲帶蕨提取物和藥學上可接受 的載體。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的治療骨質(zhì)疏松的藥物組合物，其特征在于，所述絲帶蕨提取 物是通過下列步驟制備的： 1) 取絲帶蕨l〇〇g，粉碎，過40目篩，加入水5升，在回流的條件下加熱5小時，過濾，得 到濾渣和濾液1 ; 2) 向所述步驟1)中的濾渣中加入水3升，在回流的條件下加熱3小時，過濾，得到濾渣 和濾液2 ; 3) 向所述步驟2)中的濾渣中加入水1升，在回流的條件下加熱1小時，過濾，得到濾渣 和濾液3 ; 4) 稱取2. 5g殼聚糖粉末，再加入配制好的2重量％檸檬酸水溶液，充分攪拌使殼聚糖 完全溶解，定容250mL容量瓶中備用； 5) 合并所述濾液1、2和3,濃縮到2000毫升，加入所述步驟4)中制得的殼聚糖水溶液 〇. 2克，攪拌，在室溫靜置24小時后，然后在3500r/min下離心30min，取上層清液； 6) 向所述步驟5)中制得的上層清液中加入無水乙醇至醇含量為85體積％，室溫封閉 靜置12小時，過濾，使濾液在減壓下蒸發(fā)至恒重。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的治療骨質(zhì)疏松的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合 物可以是片劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、湯劑或噴霧劑。
【文檔編號】A61P19/10GK104352536SQ201410668245
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月20日
【發(fā)明者】屈勝環(huán) 申請人:屈勝環(huán)