含有稠李多糖的輔助降血糖保健品的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種含有稠李多糖的輔助降血糖保健品。按重量百分比組成為：稠李多糖40％-60％，稠李花色苷10％-30％，高粱米多肽5％-10％，板栗多肽5％-10％，枸杞提取物5％-10％、葛根提取物5％-10％、當歸提取物5％-10％、山藥提取物5％-10％。本發(fā)明具開創(chuàng)性的技術是將稠李多糖的組合物作為降血糖的核心功能性原料，根據現代營養(yǎng)學模型合理搭配、科學組合應用，形成具有顯著降血糖功效的多糖、花色苷、多肽類的保健品。
【專利說明】含有稠李多糖的輔助降血糖保健品

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于保健品領域，具體的涉及一種具有輔助降血糖功能的含有稠李多糖的 保健品。

【背景技術】
[0002] 糖尿病是一組以血糖升高及多種代謝紊亂為特征的癥狀群，是代謝性疾病。在中 國傳統(tǒng)醫(yī)學中稱為"消渴病"，早在公元2000多年前的《黃帝內經》中已有描述。在臨床上 以高血糖為主要特點，典型病例可出現多飲、多食、多尿、消瘦等表現，即"三多一少"癥狀。 目前，我國糖尿病患病人數居世界第二位，在糖尿病患病人群中，2型糖尿病占90%以上，1 型糖尿病約5 %，妊娠糖尿病接近5 %，其他類型僅0. 7 %，世界衛(wèi)生組織（WHO)預測到2025 年全球糖尿病人數將突破3. 00億。并且，如果不采取有效的措施進行治療，糖尿病還會帶 來一系列的并發(fā)癥，如：足?。ㄗ悴繅木?、截肢）、眼?。：磺?、失明）、腎?。I功能衰 竭、尿毒癥）、腦?。X血管病變）、心臟病等。
[0003] 目前，市場上降血糖的藥物有很多，如磺脲類的甲磺丁脲（D860)、優(yōu)降糖、甲磺吡 脲（達美康）、克糖利、糖適平，雙胍類的降糖靈、降糖片，α-葡萄糖苷酶抑制劑類的拜糖平 等，但是，這些藥物都有一定的副作用；因此，從天然產物中提取無副作用的降血糖活性成 分是目前功能食品研發(fā)的重要方面。


【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的是以東北地區(qū)觀賞性植物稠李出發(fā)，制備稠李多糖、稠李花色苷，與 高粱米多肽、板栗多肽、枸杞、葛根、當歸和山藥混合，提供一種降血糖的保健品。
[0005] 以稠李花色苷、稠李多糖、高粱米多肽、板栗多肽、枸杞提取物、葛根提取物、當歸 提取物、山藥提取物混合使用作為輔助降血糖天然保健品，按重量百分比各組成如下：稠李 多糖40% -60%、稠李花色苷10% -30%、高粱米多肽5% -10%、板栗多肽5% -10%、枸杞 提取物5% -10%、葛根提取物5% -10%、當歸提取物5% -10%、山藥提取物5% -10%。
[0006] 本發(fā)明涉及的稠李花色苷是由稠李提取的，采用超聲波-微波-復合酶酶解分步 法的工藝組合提取稠李花色苷。稠李多糖也是由稠李提取的，采用超聲波-微波-復合酶 酶解分步法的工藝組合提取稠李多糖。高粱米多肽、板栗多肽是酶解高粱米蛋白、板栗蛋白 制備的。
[0007] 采用復合酶酶解-微波-超聲波分步法的工藝組合提取稠李花色苷并用ΑΒ-8大 孔樹脂進行靜態(tài)純化的步驟如下：
[0008] 1)復合酶酶解提?。簩⒊砝罟麑嵢ケ扑?，去核，放入零下80°C冰箱冷凍過夜， 在冷凍干燥機中干燥，待干燥之后取出，研磨成粉。料液比按質量比1:10-1:50,將稠李凍干 粉溶于水，復合酶加入量為稠李凍干粉的總重量的1. 〇% -5. 0%，進行熱水浸提，控制溫度 為30-70°C，pH范圍值3. 0-6. 0酶解時間為30min-60min，離心，過濾，提取液備用，沉淀物 繼續(xù)進行微波提?。凰玫膹秃厦甘抢w維素酶與果膠酶按質量比1:0. 5?2的混合；
[0009] 2)微波輔助提取：料液比按質量比1:10-1:15,將酶解后的沉淀物溶于水，微波功 率300W-500W，微波時間為20min-60min，離心，過濾，提取液備用，沉淀物繼續(xù)進行超聲浸 提；
[0010] 3)超聲浸提：料液比按質量比1:10-1:15,將微波后的沉淀物溶于乙醇中，超聲波 功率為100W-500W，超聲時間為10min-50min，pH值為2-6,抽濾，提取液備用；
[0011] 4)合并復合酶酶解的提取液、微波輔助的提取液和超聲浸提的提取液，提取液旋 轉蒸發(fā)濃縮，冷凍干燥后得到粗稠李花色苷干粉；
[0012] 5)大孔樹脂靜態(tài)純化：粗稠李花色苷干粉配成8mg/ml的水溶液，靜態(tài)吸附條件 是 ：溫度20°0，樹脂的添加量為0.168/1111;解析條件是：解吸劑70%乙醇，？!1值為3，溫度為 60 °C，得稠李花色苷干粉。
[0013] 采用超聲波-微波-復合酶酶解分步法的工藝組合提取稠李多糖并通過Sephadex G-200層析純化的步驟如下：
[0014] 1)超聲浸提：將稠李果實去柄，破碎，去核，放入零下80°C冰箱冷凍過夜，在冷 凍干燥機中干燥，待干燥之后取出，研磨成粉。將稠李凍干粉溶于水中，料液比按質量比 1:10-1:50,控制溫度為50-90 °C，pH值5. 0-9. 0,超聲波功率為100W-500W，超聲時間為 10min-50min，離心，收集提取液繼續(xù)進行微波提取；
[0015] 2)微波輔助提?。喝√崛∫?，微波功率300W-500W，微波時間為20min-60min，離 心，收集提取液繼續(xù)進行復合酶酶解；
[0016] 3)復合酶酶解提取：取提取液，加入提取液重量1. 0% -5. 0 %的復合酶，控制溫 度為30-60°C，pH 3. 0-6. 0,酶解時間為30min-60min，離心，抽濾，取濾液，濾液旋轉蒸發(fā)濃 縮，加入4倍體積的95%乙醇沉淀多糖，3000r/min離心后去除上清液，沉淀冷凍干燥，得稠 李粗多糖。所述的復合酶是纖維素酶與果膠酶按質量比1:0. 5?2的混合；
[0017] 4)將冷凍干燥的稠李粗多糖加入適量蒸餾水重新溶解，S印hadex G-200層析進行 分離純化，用蒸餾水洗脫，流速為lml/min，每2ml收集一試管，用硫酸-蒽酮法跟蹤檢測至 無糖，收集含量最多的多糖組分在蒸餾水中透析24h，冷凍干燥，進行后續(xù)實驗。用DEAE-32 進一步純化，磷酸鹽緩沖液-水作為流動相，梯度模式進行洗脫，流速為0. 8ml/min，每2ml 收集一試管，用硫酸-蒽酮法跟蹤檢測至無糖，收集含量最多的多糖組分。
[0018] 本發(fā)明具開創(chuàng)性的技術是將稠李多糖的組合物作為降血糖的核心功能性原料，根 據現代營養(yǎng)學模型合理搭配、科學組合應用，形成具有顯著降血糖功效的多糖、花色苷、多 肽類的復合保健品。

【具體實施方式】
[0019] 為了便于理解本發(fā)明，特例舉以下實施例。其作用被理解為是對本發(fā)明的闡釋而 非對本發(fā)明的任何形式的限制。
[0020] 實施例1含有稠李多糖的輔助降血糖保健品
[0021] (一）稠李花色苷的制備
[0022] 本實施例采用超聲波-微波-混合酶酶解分步法的工藝組合提取稠李花色苷并用 AB-8大孔樹脂進行靜態(tài)純化，步驟如下：
[0023] 1)復合酶酶解提?。簩⒊砝罟麑嵢ケ?，破碎，去核，放入零下80°C冰箱冷凍過夜， 在冷凍干燥機中干燥，待干燥之后取出，研磨成粉。將稠李凍干粉溶于水，料液比按質量比 1:30,所用的復合酶是纖維素酶與果膠酶按質量比1:1的混合，復合酶加入量為稠李凍干 粉的總重量的3. 0%，進行熱水浸提，控制溫度為50°C，pH范圍值5. 0酶解時間為50min， 6000r/min進行離心lOmin，過濾，提取液備用，沉淀物繼續(xù)進行微波提??；
[0024] 2)微波輔助提?。毫弦罕劝促|量比1:10,將酶解后的沉淀物溶于水中，微波功率 400W，微波時間為40min，6000r/min進行離心lOmin，過濾，提取液備用，沉淀物繼續(xù)進行超 聲浸提；
[0025] 3)超聲浸提：料液比按質量比1:10,將微波后的沉淀物溶于60%乙醇中，超聲波 功率為400W，超聲時間為30min，pH值為4,抽濾，提取液備用；
[0026] 4)合并復合酶酶解的提取液、微波輔助的提取液和超聲浸提的提取液，提取液旋 轉蒸發(fā)濃縮，冷凍干燥后得到粗稠李花色苷干粉；
[0027] 5)大孔樹脂靜態(tài)純化：粗稠李花色苷干粉配成8mg/ml的水溶液，靜態(tài)吸附條件 是 ：溫度20°0，樹脂的添加量為0.168/1111;解析條件是：解吸劑70%乙醇，？!1值為3，溫度為 60 °C，得稠李花色苷干粉。
[0028] (二）稠李多糖的制備
[0029] 采用超聲波-微波-復合酶酶解分步法的工藝組合提取稠李多糖并通過Sephadex G-200層析純化的步驟如下：
[0030] 1)超聲浸提：將稠李果實去柄，破碎，去核，放入零下80°C冰箱冷凍過夜，在冷凍 干燥機中干燥，待干燥之后取出，研磨成粉。將稠李凍干粉溶于水中，料液比按質量比1:30， 控制溫度為60°C，pH值7. 0,超聲波功率為400W，超聲時間為40min，3000r/min進行離心 15min，收集提取液繼續(xù)進行微波提??；
[0031] 2)微波輔助提?。喝〕暫蟮奶崛∫?，微波功率400W，微波時間為40min，3000r/ min進行離心15min，收集提取液繼續(xù)進行復合酶酶解；
[0032] 3)復合酶酶解提?。喝∥⒉ê蟮奶崛∫海尤肫淇傊亓?. 0%的復合酶，控制溫度 為50°C，pH 4. 0,酶解時間為40min，3000r/min進行離心15min，抽濾，濾液旋轉蒸發(fā)濃縮， 加入4倍體積的95 %乙醇沉淀多糖，3000r/min離心后去除上清液，冷凍干燥，得稠李粗多 糖。所述的復合酶是纖維素酶與果膠酶按質量比1:1的混合；
[0033] 4)將冷凍干燥的稠李粗多糖加入適量蒸餾水重新溶解，S印hadex G-200層析進行 分離純化，用蒸餾水洗脫，流速為lml/min，每2ml收集一試管，用硫酸-蒽酮法跟蹤檢測至 無糖，收集含量最多的多糖組分在蒸餾水中透析24h，冷凍干燥，進行后續(xù)實驗。用DEAE-32 進一步純化，磷酸鹽緩沖液-水作為流動相，梯度模式進行洗脫，流速為0. 8ml/min，每2ml 收集一試管，用硫酸-蒽酮法跟蹤檢測至無糖，收集含量最多的多糖組分。
[0034] (三）高粱米多肽的制備
[0035] 采用木瓜蛋白酶提取高粱米多肽，具體操作步驟如下：
[0036] 1)將高粱米粉碎，按料液比為1:15,在pH為10的氫氧化鈉溶液中浸泡3h，提取溫 度為50 <€，500〇1'/1]1；[11離心201]1；[11，取上清液，用90%硫酸按進行沉淀，再次離心，分離得到 沉淀，進行冷凍干燥得到高粱米蛋白；
[0037] 2)將高粱米蛋白配成8%的水溶液，pH調節(jié)為6. 5,酶活添加量為6000u/g料，溫 度為60°C，提取時間為3h，然后沸水浴IOmin滅酶，3500r/min離心15min，取上清，純凈水 透析、采用截留分子量為IOkDa超濾板超濾后進行冷凍干燥，得到高粱米多肽粉末。
[0038](四）制備板栗多肽
[0039] 采用復合酶提取板栗多肽，具體操作步驟如下：
[0040] 1)板栗去皮干燥后，用粉碎機粉碎，按料液比為1:10,加入pH 11的NaOH，提取溫 度為50°C，時間為3h，離心收集沉淀，冷凍干燥制備板栗蛋白。
[0041] 2)復合酶分步水解：首先，復合風味蛋白酶進行水解，然后再以堿性蛋白酶進行 水解制備板栗多肽，復合風味蛋白酶酶解條件為：pH6,酶活添加量為6000u/g料，時間lh， 溫度55°C，堿性蛋白酶酶解條件為：pH 8,酶活添加量為6000u/g料，時間3h，溫度50°C ;將 水解液加熱到l〇〇°C，保持IOmin殺滅酶的活力；采用截留分子量為IOkDa超濾板超濾得到 的酶解液，收集分子量為IOkDa以下的酶解液；將酶解液用低溫冷凍干燥機制得板栗多肽 粉末。
[0042] (五）枸杞提取物的制備
[0043] 在室溫條件下，稱量粉碎成200目的枸杞固體粉末；按質量比1:10比例稱取枸杞 固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌 冷凍干燥，得枸杞提取物。
[0044](六）葛根提取物的制備
[0045] 在室溫條件下，稱量粉碎成200目的葛根固體粉末；按質量比1:10比例稱取葛根 固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌 冷凍干燥，得葛根提取物。
[0046] (七）當歸提取物的制備
[0047] 在室溫條件下，稱量粉碎成200目的當歸固體粉末；按質量比1:10比例稱取當歸 固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌 冷凍干燥，得當歸提取物。
[0048] (八）山藥提取物的制備
[0049] 在室溫條件下，稱量粉碎成200目的山藥固體粉末；按質量比1:10比例稱取山藥 固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌 冷凍干燥，得山藥提取物。
[0050] (九）含有稠李多糖的輔助降血糖保健品組合物
[0051] 按重量百分比組成如下：
[0052] 稠李多糖40%、稠李花色苷20%、高粱米多肽10%、板栗多肽10%、
[0053] 枸杞提取物5%、葛根提取物5%、當歸提取物5%、山藥提取物5%。
[0054] (十）含有稠李多糖的輔助降血糖保健品組合物在體外促進大鼠胰島樣細胞生長 分化作用
[0055] 選用大鼠胰島樣（INS-I)細胞系，采用MTT法測定了稠李多糖組合物體外促進細 胞增殖的活性，測定濃度為0-100 μ g/ml，處理時間為72小時。稠李多糖組合物對于胰島樣 具有明顯的促進生長、分化作用。T-test進行統(tǒng)計學分析，p〈0. 05具有顯著性差異，結果見 表1。
[0056] 表1稠李多糖對大鼠胰島樣細胞的生長促進作用（％) (M±SE)
[0057]

【權利要求】
1. 含有稠李多糖的輔助降血糖保健品，其特征在于由以下原料按重量百分比組成： 稠李多糖40% -60%、稠李花色苷10% -30%、高粱米多肽5% -10%、板栗多肽 5% -10%, 枸杞提取物5% -10%、葛根提取物5% -10%、當歸提取物5% -10%、山藥提取物 5% -10%〇
2. 如權利要求1所述的含有稠李多糖的輔助降血糖保健品，其特征在于：所述的稠李 多糖的制備方法如下： 1) 超聲浸提：料液比按質量比1:10-1:50,將稠李凍干粉溶于水中，控制溫度為 50-90°C，pH值5. 0-9. 0,超聲波功率為100W-500W，超聲時間為10min-50min，離心，取提取 液繼續(xù)進行微波提取； 2) 微波輔助提?。喝√崛∫?，微波功率300W-500W，微波時間為20min-60min，離心，取 提取液繼續(xù)進行復合酶酶解； 3) 復合酶酶解提取：取提取液，復合酶加入量為提取液重量的1. 0% -5. 0%，控制溫度 為30-60°C，pH 3. 0-6. 0,酶解時間為30min-60min ;抽濾，濾液旋轉蒸發(fā)濃縮，加入4倍體積 的95%乙醇沉淀多糖，離心，去除上清液，冷凍干燥。
3. 按照權利要求2所述的含有稠李多糖的輔助降血糖保健品，其特征在于：所述的復 合酶是纖維素酶與果膠酶按質量比1:0. 5?2的混合。
4. 如權利要求1所述的含有稠李多糖的輔助降血糖保健品，其特征在于：所述的稠李 花色苷的制備方法如下： 1) 復合酶酶解提?。毫弦罕劝促|量比1:10-1:50,將稠李凍干粉溶于水，復合酶加入 量為稠李凍干粉的總重量的1. 〇% -5. 0%，進行熱水浸提，控制溫度為30-70°C，pH范圍值 3. 0-6. 0,酶解時間為30min-60min，離心，過濾，提取液備用，沉淀物繼續(xù)進行微波提??； 2) 微波輔助提取：料液比按質量比1:10-1:15,將沉淀物溶于水，微波功率300W-500W， 微波時間為20min-60min，離心，過濾，提取液備用，沉淀物繼續(xù)進行超聲浸提； 3) 超聲浸提：料液比按質量比1:10-1:15,將沉淀物溶于乙醇中，超聲波功率為 100W-500W，超聲時間為10min-50min，pH值為2-6,抽濾，提取液備用； 4) 合并復合酶酶解的提取液、微波輔助的提取液和超聲浸提的提取液，提取液旋轉蒸 發(fā)濃縮，冷凍干燥后得到粗稠李花色苷干粉； 5) 大孔樹脂靜態(tài)純化：粗稠李花色苷干粉配成8mg/ml的水溶液，靜態(tài)吸附條件是：溫 度20°C，樹脂的添加量為0. 16g/ml ;解析條件是：解吸劑70%乙醇，？11值為3，溫度為60°〇， 得稠李花色苷干粉。
5. 如權利要求4所述的含有稠李多糖的輔助降血糖保健品，其特征在于：所述的復合 酶是纖維素酶與果膠酶按質量比1:0. 5?2的混合。
6. 如權利要求1所述的含有稠李多糖的輔助降血糖保健品，其特征在于：所述的枸杞 提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的枸杞固體粉末；按質量比1:10比 例稱取枸杞固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾， 超濾液無菌冷凍干燥，得枸杞提取物。
7. 如權利要求1所述的含有稠李多糖的輔助降血糖保健品，其特征在于：所述的葛根 提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的葛根固體粉末；按質量比1:10比 例稱取葛根固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾， 超濾液無菌冷凍干燥，得葛根提取物。
8. 如權利要求1所述的含有稠李多糖的輔助降血糖保健品，其特征在于：所述的當歸 提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的當歸固體粉末；按質量比1:10比 例稱取當歸固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾， 超濾液無菌冷凍干燥，得當歸提取物。
9. 如權利要求1所述的含有稠李多糖的輔助降血糖保健品，其特征在于：所述的山藥 提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的山藥固體粉末；按質量比1:10比 例稱取山藥固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾， 超濾液無菌冷凍干燥，得山藥提取物。
【文檔編號】A61P3/10GK104491835SQ201410675559
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年11月21日 優(yōu)先權日:2014年11月21日
【發(fā)明者】曹向宇, 劉曉, 劉劍利, 楊思敏, 于慧, 孫宇航, 楊威 申請人:遼寧大學