一種可作抗腫瘤藥物或食品的化合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種用作抗腫瘤藥物或腫瘤預(yù)防保健食品的化合物，其以下述結(jié)構(gòu)式所示：I。
【專利說明】一種可作抗腫瘤藥物或食品的化合物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及新型化合物、抗腫瘤劑以及具有抗腫瘤作用的醫(yī)藥品、食品或化妝品。

【背景技術(shù)】
[0002] 抗腫瘤劑?癌抑制劑?抗癌劑大體上是選擇選擇性地作用于腫瘤細(xì)胞而對正常細(xì) 胞毒性較小的制劑，但是還有很多使用上的問題仍未得到解決，例如由骨髓抑制引起的白 血球減少、血小板減少、中性粒細(xì)胞減少等致命副作用的出現(xiàn)，惡心?嘔吐等消化系統(tǒng)障礙 的副作用的出現(xiàn)，及脫發(fā)等副作用的出現(xiàn)，抗藥性的出現(xiàn)，以及因?yàn)殡y于口服給藥的藥劑多 而使給藥途徑受到限制等。因此，期望開發(fā)出選擇性地作用于腫瘤細(xì)胞而對正常細(xì)胞毒性 極少、給藥途徑限制少的抗腫瘤劑?癌抑制劑?抗癌劑。
[0003] 作為從天然物中得到的抗腫瘤劑，已知有大量的化合物，例如有絲裂霉素C、喜樹 堿、三萜化合物等大量的報(bào)道。此外，作為以天然物為先導(dǎo)化合物的抗腫瘤劑，已知有紫杉 醇衍生物、紫杉烷衍生物等。作為有關(guān)預(yù)測與本化合物相關(guān)、或者與本化合物的生物合成體 系、分解體系相關(guān)的萘醌系的抗腫瘤劑的內(nèi)容，有關(guān)于來自白花蛇舌草的報(bào)道。此外，作為 與萘醌系抗腫瘤劑相關(guān)的合成化合物，已知有與呋喃萘醌衍生物相關(guān)的抗腫瘤劑。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的新型化合物，可將白花蛇舌草作為原料通過提取?純化工序得到，也可從 其它植物體內(nèi)得到。此外，也可使用通過合成得到的新型化合物。而且還可使用白花蛇舌 草、從含有新型化合物的其它植物體中提取得到的提取物、粗純化物、或植物體的干燥物、 植物體的漿料。
[0005] 從白花蛇舌草等植物體中提取?純化本發(fā)明的新型化合物時(shí)，可使用通常工業(yè)上 使用的任何提取?純化工序。將作為原料的植物葉、莖、根、花等在適當(dāng)時(shí)期采集后，直接或 者實(shí)施通常通風(fēng)干燥等的干燥工序，制成提取原料。
[0006] S卩：將原料粉碎或切碎后，用溶劑進(jìn)行提取，作為提取溶劑，可將水，乙醇、甲醇、異 丙醇等醇類，丙酮、甲基乙基酮等酮類，乙酸甲酯、乙酸乙酯等酯類，己烷、氯仿等親油性的 溶劑單獨(dú)使用或形成混合溶劑使用。提取溫度通常為〇?100°c，優(yōu)選為5?50°C。提取 時(shí)間為1小時(shí)?10天左右，溶劑量為平均每份干燥原料通常為1?30倍重量,優(yōu)選為5? 10倍重量。提取操作可通過攪拌，也可通過浸漬放置進(jìn)行。提取操作可根據(jù)需要重復(fù)進(jìn)行 2?3次。從用上述操作得到的粗提取液中通過過濾或離心分離而除去不溶性殘?jiān)蟮奶?取液中、或者從植物的榨汁液中純化各新型化合物的方法，只要是公知的生藥分離純化方 法，可采用任何方法，但優(yōu)選單獨(dú)或組合使用兩相溶劑分配法、逆流分配法、柱色譜法、制備 型高效液相色譜法等。例如作為兩相溶劑分配法，可例舉通過在正己烷、氯仿、甲基乙基酮、 乙酸乙酯、乙酸甲酯等溶劑和水中進(jìn)行分配，從而將目標(biāo)化合物從上述提取液中回收到溶 劑相中的方法等。作為柱色譜法，可例舉離子交換柱色譜法、使用正相或反相硅膠作為載 體的方法、使用DIAION HP-20等的吸附柱色譜法、使用S印hadexLH-20等的修飾葡聚糖凝 膠作為載體的凝膠過濾法等，可以將這些方法單獨(dú)或組合使用、或者反復(fù)地使用。作為制備 型高效液相色譜法，可例舉使用十八烷基硅等的反相柱的方法，使用硅膠等的正相柱的方 法等。
[0007] 作為本發(fā)明抗腫瘤劑的給藥途徑，無特別限定，例如可例舉口服給藥?直腸內(nèi)給藥 等腸內(nèi)給藥，經(jīng)鼻給藥等的粘膜給藥，靜脈內(nèi)給藥?皮下給藥等的注射給藥等。作為本發(fā)明 抗腫瘤劑的劑型，可采取任何與給藥方法相適合的制劑的形態(tài)，例如可例舉片劑、散劑、細(xì) 粒劑、顆粒劑、膠囊劑、粉末、丸劑、含片劑等固體制劑，溶液、懸浮液、乳劑、糖漿劑、注射劑 等液體制劑，凝膠制劑等?？蓪⒏餍滦突衔锏募兤贰⒓兓?、粗純化物等直接給藥，也可與 藥理上允許的賦型劑一同給藥。作為賦型劑，只要是單糖類、二糖類、多糖類、無機(jī)鹽類、油 月旨、蒸餾水等作為制劑通?？墒褂玫馁x型劑，可使用任何賦型劑。進(jìn)行制劑化時(shí)，也可使用 粘合劑、潤滑劑、分散劑、懸浮劑、乳化劑、稀釋劑、緩沖劑、抗氧化劑、細(xì)菌抑制劑等添加劑。
[0008] 各新型化合物的有效給藥量，根據(jù)給藥途徑、劑型、疾病的癥狀、對象的年齡等的 不同而不同，通常成人平均每天為〇. 1?l〇〇〇mg、優(yōu)選為0. 5?300mg、進(jìn)一步優(yōu)選為1? l〇〇mg。本發(fā)明的口服抗腫瘤劑中的各新型化合物的含量，可根據(jù)制劑的形態(tài)?有效給藥 量?作為制劑的給藥量的數(shù)據(jù)來設(shè)定與各給藥形態(tài)最適合的制劑中的有效成分含量。
[0009] 作為食品的形態(tài)，可例舉將白花蛇舌草及含有各新型化合物的植物體的干燥物制 成茶的形態(tài)，或配合有各新型化合物的純品、該新型化合物的部分純化品、從含有該新型化 合物的植物中提取的該新型化合物的粗提取物、含有該新型化合物的植物體漿料、含有該 新型化合物的植物體干燥物的食品等。
[0010] 作為茶，可單獨(dú)或與其他茶原料混合使用。作為其它茶原料，只要是綠茶、烏龍茶、 普洱茶、紅茶、煎茶、糙米茶、杜仲茶、柿葉茶、桑葉茶等通常作為茶可食用的原料，可使用 任何茶原料。
[0011] 要得到植物提取物時(shí)，只要是用熱水提取，用乙醇、含水乙醇提取等通常食品提取 中可使用的方法，可使用任何方法。可通過常法從植物體中得到各新型化合物的粗提取物、 部分純化品。
[0012] 作為本發(fā)明的具有抗腫瘤作用的食品的形態(tài)，除茶以外，只要是保健飲料、果凍、 餅干、片劑、丸劑、軟膠囊劑、硬膠囊劑、散劑、細(xì)粒劑、顆粒劑等通常作為食品可提供的形 態(tài)，可使用任何形態(tài)。作為副原料，也可使用賦型劑、粘合劑、潤滑劑、分散劑、懸浮劑、乳化 齊IJ、稀釋劑、緩沖劑、抗氧化劑、細(xì)菌抑制劑等添加劑。
[0013] 本發(fā)明具有抗腫瘤作用的食品的各新型化合物的有效攝取量，根據(jù)攝取形態(tài)、對 象的健康狀態(tài)、對象的年齡等的不同而不同，但通常成人平均每天為0.001?l〇〇mg，優(yōu)選 為0. 01?10mg，進(jìn)一步優(yōu)選為0. 1?lmg。
[0014] 本發(fā)明具有抗腫瘤作用的食品中的各新型化合物的含量，根據(jù)食品形態(tài)的不同而 不同，但通常為〇? 0001?lwt%，優(yōu)選為0? 001?0? 5wt%，更優(yōu)選為0? 01?0? lwt%。
[0015] 作為本發(fā)明的外用醫(yī)藥品及化妝品的形態(tài)的例子，無特別限定。
[0016] 作為外用醫(yī)藥品的形態(tài)，例如可例舉軟膏劑、霜?jiǎng)?、糊劑、膠帶劑、外用劑等。本發(fā) 明的醫(yī)藥品，在各新型化合物的基礎(chǔ)上，可根據(jù)需要含有其它醫(yī)藥成分，此外，也可使用粘 合劑、分散劑、懸浮劑、乳化劑、稀釋劑、緩沖劑、抗氧化劑、細(xì)菌抑制劑等添加劑。
[0017] 作為化妝品的形態(tài)，可使用化妝水、美容液、乳液、乳霜、凝膠、面膜、美容粉餅、洗 面奶、浴用劑等作為外用劑?化妝品制劑可使用的任何形態(tài)。在上述化妝品中，在各新型化 合物的純品、該新型化合物的部分純化品、從植物中提取的該新型化合物的粗提取物、或含 有該新型化合物的植物體等必需成分的基礎(chǔ)上，也可根據(jù)需要含有可在化妝品制劑中配合 的成分。作為配合成分，例如可例舉固體油、半固體油、液體油、低分子保濕劑、高分子保濕 齊IJ、脂溶性保濕劑、潤膚劑、表面活性劑、防腐劑、抗氧化劑、PH調(diào)節(jié)劑、乙醇、水等。
[0018] 各新型化合物在外用時(shí)的有效給藥量，根據(jù)對象的癥狀、對象的年齡的不同而不 同，但通常成人平均每天為0. 001?lOOmg，優(yōu)選為0. 01?10mg，進(jìn)一步優(yōu)選為0. 1?lmg。
[0019] 本發(fā)明的抗腫瘤劑、醫(yī)藥品、化妝品中的各新型化合物的含量，單獨(dú)或作為混合物 時(shí)通常為〇? 0001?lwt%，優(yōu)選為0? 001?0? 5wt%，更優(yōu)選為0? 01?0? lwt%。 實(shí)施例
[0020] 下面通過實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明實(shí)施例所述方 法僅僅是用于說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明的限制，在本發(fā)明的構(gòu)思前提下對本發(fā)明制備 方法的簡單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。實(shí)施例中用到的所有原料和溶劑均購自 Sigma Biochemical and Organic Compounds for Research and Diagnostic Clinical Reagents 公司。
[0021] 實(shí)施例1 :式I化合物的制備 在室溫下，用25L的90% (v/v)乙醇對干燥白花蛇舌草（5Kg)進(jìn)行每次24小時(shí)共計(jì) 3次的提取，將這些合并在一起后進(jìn)行濃縮，得到干固物（407g)。接著，使其在7L的90%(v/v)甲醇中懸浮溶解后，用等量的己烷進(jìn)行3次分配后，取出 90% (v/v)甲醇相進(jìn)行減壓 濃縮。在該減壓濃縮物中加入純水至5L，移入分液漏斗中用氯仿進(jìn)行3次兩相溶劑分配。 接著將通過該操作得到的氯仿相合并在一起，得到干固物69. 3g。將其中69. 0g供給將己 烷/乙酸乙酯作為洗脫溶劑的硅膠柱色譜法（SOmmct X 150mm、關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制）。即： 用3BV的洗脫溶劑己烷/乙酸乙酯（9 : 1)、及2BV的洗脫溶劑己烷/乙酸乙酯（8 : 2) 依次將柱洗滌后，用2BV的洗脫溶劑己烷/乙酸乙酯（7 : 3)洗脫，得到組分B(干固物 5. 66g)。接著，對于組分B (干固物2. 8g)，將甲醇作為洗脫溶劑而實(shí)施S印hadexLH-20柱色 譜法（20mmX200mm、Pharmacia公司制）。即：用1. 5BV的甲醇將柱洗漆后，用0? 5BV的 甲醇洗脫，得到組分B-1 (干固物1. 16g)。接著，將組分B-1 (干固物1. lg)供給將水/甲 醇作為洗脫溶劑的Flash 0DS柱色譜法（20mm(j5 X 100mm、野村化學(xué)公司制）。即：用180ml 的50% (v/v)甲醇將Flash 0DS柱洗漆后，逐步地依次用60% (v/v)甲醇、70% (v/v)甲 醇洗滌，然后用80% (v/v)甲醇洗脫，得到含有目標(biāo)新型化合物F的組分B-l-2(干固物 429mg)。接著，用將己燒/乙酸乙酯作為洗脫溶劑的娃膠柱色譜法（20mmX 150mm、關(guān)東 化學(xué)株式會(huì)社制）將組分B-1-2 (干固物429mg)區(qū)分。即：用2BV的洗脫溶劑己烷/乙酸 乙酯（8 : 2)將硅膠柱洗滌后，用1BV的洗脫溶劑己烷/乙酸乙酯（7 : 3)洗脫，得到組分 B-1-2-2 (干固物32. 9mg)。用制備型高效液相色譜法（0DS柱、20_$ X 250_、野村化學(xué)公 司制，流動(dòng)相：55% (v/v)乙腈，檢測：280nm UV檢測器）對組分B-l-2-2(干固物32.9mg) 進(jìn)行純化，通過進(jìn)一步用制備型高效液相色譜法（C-30柱、20mmX250mm、野村化學(xué)公司 制，流動(dòng)相：55% (v/v)乙腈，檢測：254nm UV檢測器）進(jìn)行純化，得到式I化合物（干固物 10. 3mg)。
[0022] 屮匪R(CDC13,500MHz) : S 1. 〇〇(H_12and H_13,6H，s)、1. 08(H_10'，3H，s)、 1. 13(H-8'，3H，d)、1. 46(H-5'，lH，m)、1. 66(H-5'，lH，m)、1. 79(H-9'，3H，s)、2. 08(H-4'，1H， m)、2. 23(H-4'，lH，m)、2. 69(H-9,2H，s)、3. 20(6'，3H，s)、3. 80(H-7'，1H，q)、3. 89(H-11，2H， s)、6. 70 (H-3,，1H，t)、7. 66 (H-7,1H，t)、7. 73 (H-6,1H，t)、8. 06 (H-8，1H，d)、8. 09 (H-5,1H， d). 實(shí)施例2 :抗腫瘤活性測試 抗腫瘤作用試驗(yàn)通過測定對于來自人體的黑色素瘤細(xì)胞株HMV-II的增殖抑制活性來 進(jìn)行。
[0023] 使用含有10% (v/v)胎牛血清的Ham F12培養(yǎng)基，在96孔培養(yǎng)平板（NUNC)上以 1 X 104Cells/90 yl的細(xì)胞濃度接種來自人體的黑色素瘤細(xì)胞株HMV-II，在37°C、5%二氧 化碳?xì)怏w存在下，進(jìn)行24小時(shí)培養(yǎng)。培養(yǎng)24小時(shí)后，加入本發(fā)明的式I化合物（溶解在 DMS0中，培養(yǎng)基中的最終DMS0濃度=0. 1% (v/v)，此外，將在僅添加1/1000體積量的DMS0 的培養(yǎng)基上培養(yǎng)的細(xì)胞株作為對照組），進(jìn)而在37°C、5%二氧化碳?xì)怏w存在下培養(yǎng)24小 時(shí)。細(xì)胞增殖度的測定使用噻唑藍(lán)（MTT) [3-(4, 5-二甲基噻唑-2-基）-2, 5-二苯基溴化 四氮唑 Nacalai Tesque] [ (3-(4, 5-Dimethylthiazol-2-yl) ~2, 5-diphenyltetrazol ium bromide)]的方法進(jìn)行[參照株式會(huì)社東京化學(xué)同人發(fā)行，新生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)講座12分子免 疫學(xué)I免疫細(xì)胞?細(xì)胞因子358-359頁]。即：加入上述各新型化合物培養(yǎng)24小時(shí)后，在 96孔培養(yǎng)平板（0. 33cm2/Well)的各孔的培養(yǎng)液90 yl中加入10 yl的MTT溶液{5mg/ml ; 在無I丐?緩PBS[杜氏憐酸緩沖液（Dulbecco，s Phosphate-Buffered Saline)]溶液中溶 解后，經(jīng)膜過濾器（〇.22i!m)過濾后的溶液}，進(jìn)行振蕩使其均勻，在37°C、5%二氧化碳?xì)?體存在下培養(yǎng)4小時(shí)。培養(yǎng)4小時(shí)后在各孔中加入10% (w/v)SDS-50% (v/v)N，N-二甲基 甲酰胺-0. 005N鹽酸溶液lOOiU，在37°C、5%二氧化碳?xì)怏w存在下靜置18小時(shí)后，使用免 疫檢測儀（immuno reader)(大日本制藥株式會(huì)社制），以750nm作為對照，測定590nm處 的吸光度，作為細(xì)胞增殖度的指標(biāo)。本發(fā)明的式I化合物在10 U g/ml的濃度下，增值率為 81%?？梢源_認(rèn)本發(fā)明式I化合物對來自人體的黑色素瘤細(xì)胞株（HMV-II)的優(yōu)異增殖抑制 活性。
【權(quán)利要求】
1. 一種化合物，其特征在于其以下述結(jié)構(gòu)式所示：
2. -種抗腫瘤的組合物，其特征在于含有式I所示的化合物以及藥物上可接受的助 劑。
3. -種保健食品，其特征在于含有式I所示的化合物。
【文檔編號(hào)】A61K31/216GK104447335SQ201410707860
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月1日
【發(fā)明者】謝建奎 申請人:謝建奎