人參皂苷Rf的新應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體的說(shuō)是涉及人參皂苷Rf的新應(yīng)用，尤其是作為TRPV1的拮抗劑的應(yīng)用。本發(fā)明所述人參皂苷Rf在細(xì)胞水平上，能夠顯著的抑制TRPV1蛋白表達(dá)，且在動(dòng)物水平上，人參皂苷Rf能夠顯著的延長(zhǎng)辣椒素(capsaicin，CAP)誘導(dǎo)的大鼠的縮爪潛伏期，降低大鼠的痛覺(jué)敏感程度。表明人參皂苷Rf可以作為TRPV1的拮抗劑用于以TRPV1為靶點(diǎn)的鎮(zhèn)痛，可用于制備治療與TRPV1受體相關(guān)的疾病的鎮(zhèn)痛藥物。
【專利說(shuō)明】人參皂苷Rf的新應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體的說(shuō)是涉及人參皂苷Rf?的新應(yīng)用，尤其是其作為 TRPV1拮抗劑的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 1994年，國(guó)際疼痛研究協(xié)會(huì)（International Association for the Study Pain， IASP)將疼痛定義為"一種與組織損傷或潛在的與損傷相關(guān)的不愉快的主觀感覺(jué)和情感體 驗(yàn)"，與臨床上包括糖尿病、關(guān)節(jié)炎、癌癥以及手術(shù)后的多種疼痛過(guò)程密切相關(guān)。疼痛醫(yī)學(xué)逐 漸成為目前醫(yī)學(xué)界最為活躍的領(lǐng)域。據(jù)2005年中國(guó)鎮(zhèn)痛周（10月11日-17日）公布的一 組數(shù)據(jù)顯示：我國(guó)至少有1億的病人正在忍受疼痛的折磨，疼痛不僅能夠嚴(yán)重的影響人們 的身心健康外，還會(huì)造成病人家屬經(jīng)濟(jì)上的極大負(fù)擔(dān)。據(jù)調(diào)查顯示，在英國(guó)因疼痛所致生產(chǎn) 時(shí)間流失的量為4.6小時(shí)/周；而在美國(guó)，因疼痛導(dǎo)致生產(chǎn)時(shí)間流失而造成的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá) 612億美元/年。鑒于疼痛給人類和社會(huì)所造成的各項(xiàng)損失，目前，國(guó)際上已經(jīng)將疼痛定義 為繼呼吸、脈搏、體溫、血壓四大生命體征之后的第五大生命體征。因此，作為"人類第五大 生命體征"之一的疼痛問(wèn)題，因其普遍性和多發(fā)性已成為一個(gè)全球共同關(guān)注的話題。
[0003] 目前，疼痛的治療藥物主要是以阿片類和非甾體抗炎類（Non-Steroidal Anti-Inflammatory Drugs, NSAIDs)為主，代表藥物分別為嗎啡和阿司匹林，前者具有成癮 性，后者可引起機(jī)體嚴(yán)重的胃腸道反應(yīng)，并且對(duì)神經(jīng)傷害性疼痛的療效欠佳，因此研究和解 決慢性難治性疼痛的發(fā)病機(jī)理和治療方案，尋找毒副作用小、成癮性低的藥物是21世紀(jì)醫(yī) 藥學(xué)上的一個(gè)重要課題。
[0004] 當(dāng)機(jī)體受到外界傷害性刺激的時(shí)候，最先感知這些刺激的部位是傷害性感受器 (nociptor)。傷害性感受器是一些位于初級(jí)感覺(jué)神經(jīng)元上的離子通道，他們對(duì)某些強(qiáng)烈的、 可引起機(jī)體損傷的外界刺激具有特異的感知功能，這些刺激包括機(jī)械刺激、溫度刺激以及 某些化學(xué)物質(zhì)的刺激。這些離子通道又稱為傳感器，可感知和量化有害刺激，并將這些刺激 以機(jī)體自身產(chǎn)生內(nèi)向電流的形式發(fā)送信息。這一信息從初級(jí)感覺(jué)神經(jīng)元傳遞到高級(jí)神經(jīng)中 樞，促使機(jī)體做出相應(yīng)的反應(yīng)。
[0005] 瞬時(shí)感受器電位離子通道蛋白（Transient receptor potential ion channel protein，TRPs)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的存在于胞內(nèi)細(xì)胞器膜上或細(xì)胞膜上的一類非選擇性陽(yáng)離子 通道蛋白。作為果蠅的光感受器異常變異株基因一TRP基因于1989年被Montell等人首 先用于描述在黑腹果蠅上。隨后，Hardie等人發(fā)現(xiàn)，trp基因能夠編碼一種通透Ca 2+的陽(yáng) 離子通道，并將這種通道命名為TRP通道。目前，TRP通道家族是治療疼痛，焦慮，瘙癢，腸 道及呼吸道病變的重要蛋白。并且，有研究表明TRP家族還是天然的相關(guān)病變治療藥物的 傳遞器，它們均可高選擇性針對(duì)靶細(xì)胞。因此，它的發(fā)現(xiàn)對(duì)于人們認(rèn)識(shí)和了解感官知覺(jué)具有 突破性意義。
[0006] TRP家族是感受體系中的門控分子，是外部環(huán)境與內(nèi)部神經(jīng)系統(tǒng)之間的中介，其 可將機(jī)械性刺激、熱刺激、化學(xué)刺激轉(zhuǎn)換為內(nèi)向電流，以信息的形式傳遞給機(jī)體的中樞神經(jīng) 系統(tǒng)。目前，TRP家族分為7個(gè)亞族，根據(jù)其序列同源性分為兩大類，分別是跨膜結(jié)構(gòu)域具 有序列同源性的 TRPs 類，其中包括 TRPV(vanilloid)、TRPA(ANKTMl)、TRPM(melastatin， long-TRP)、TRPN(NOMPC)和TRPC(canonical TRP)，他們不僅具有序列同源性還在第6個(gè)跨 膜域均含有一個(gè)C短23-25氨基酸的"TRPs結(jié)構(gòu)域";和與第一類TRPs有較少的序列同源性 并且在其第1和第2跨膜域之間存在一個(gè)胞外環(huán)的TRPML(mucolipin)、TRPP(polycystin)。 機(jī)體就是通過(guò)這些感受器全面的感知外界環(huán)境對(duì)機(jī)體所造成的各種傷害性刺激，發(fā)出預(yù) 警，使機(jī)體做出相關(guān)反應(yīng)。
[0007] 1997年Caterina及其同事成功克隆了一種能被辣椒素（capsaicin)激活的受體， 即香草酸瞬時(shí)受體亞型 1 (Transient receptor potential cation channel，subfamily V， member 1，TRPV1)。TRPV1是最初發(fā)現(xiàn)的對(duì)傷害性熱敏感的疼痛靶點(diǎn)，也是目前研究較多的 一種非選擇性陽(yáng)離子通道。它屬于香草酸受體（transient receptor potential, TRP)家 族，該通道在介導(dǎo)神經(jīng)性痛、深部組織痛、炎性痛、術(shù)后痛等多種疼痛中均起到重要的作用。 它可被多種化學(xué)物理刺激興奮，其中包括辣椒素（capsaicin)、熱刺激43°C )、酸和多種 天然成分。TRPV1的成功克隆開(kāi)啟了研究疼痛的新時(shí)代。在此之后，研究者們又相繼發(fā)現(xiàn)了 多個(gè)能夠感知外界傷害性刺激，并參與其所引起的疼痛發(fā)生和發(fā)展的受體通道。
[0008] TRPV1是一種配體門控的非選擇性陽(yáng)離子通道，當(dāng)其與配體結(jié)合后離子通道開(kāi) 放，Ca 2+、Na+等陽(yáng)離子從胞外進(jìn)入胞內(nèi)，尤其是對(duì)Ca2+的通透性較大，進(jìn)而會(huì)引發(fā)機(jī)體的一 系列生物學(xué)反應(yīng)。該受體編碼蛋白由838個(gè)氨基酸組成，是一個(gè)四聚體膜蛋白伴有四個(gè)相 同或不同的亞單位，每個(gè)亞單位都含有TRP家族所共有的6個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，在第5個(gè)和第 6個(gè)跨膜區(qū)域之間有1個(gè)短的孔環(huán)樣的疏水結(jié)構(gòu)，此結(jié)構(gòu)參與并調(diào)控了辣椒素激活TRPV1 引起鈣離子內(nèi)流的過(guò)程，而與氫離子和溫度的關(guān)系不大，在疏水端富含氨基酸的區(qū)域可參 與PH相關(guān)的刺激。TRPV1的C端和N端也均在胞內(nèi)，N端有3個(gè)錨蛋白結(jié)構(gòu)域，該區(qū)域介 導(dǎo)溶質(zhì)蛋白間的相互作用并將共同片段暴露給蛋白激酶。而C端攜帶磷酸肌醇、鈣調(diào)蛋 白（CAM)結(jié)合域以及磷酸化位點(diǎn)。TRPV1受二磷酸磷脂?；迹≒hosphatidylinositol 4, 5-bisphosphate，PIP2)調(diào)節(jié)的影響，PIP2既可以參與TRPV1的脫敏環(huán)節(jié)，又是炎性因子 增敏TRPV1途徑中不可或缺的重要環(huán)節(jié)。
[0009] TRPV1廣泛的分布在傷害性感受器（nociceptor)上，它參與急性炎癥痛敏的 形成。疼痛形成的大致過(guò)程是：首先是傷害感受器的痛覺(jué)傳感（transduction),其次是 一級(jí)傳入纖維、脊髓背角、脊髓_丘腦束等上行束的痛覺(jué)傳遞（transmission)，再次是皮 層和邊緣系統(tǒng)的痛覺(jué)整合（interpretation)，最后是下行控制和神經(jīng)介質(zhì)的痛覺(jué)控制 (modulation)。神經(jīng)生理學(xué)家曾做了單個(gè)神經(jīng)纖維的傳入放電試驗(yàn)，他們發(fā)現(xiàn)有相當(dāng)數(shù)量 的傳入神經(jīng)纖維在只有給予皮膚傷害性刺激的時(shí)候才會(huì)發(fā)生放電反應(yīng)，說(shuō)明這些發(fā)生反應(yīng) 的傳入神經(jīng)纖維外周末端所形成的感受器是專一的痛覺(jué)感受器，并發(fā)現(xiàn)這些傳遞痛覺(jué)的神 經(jīng)纖維一般是較細(xì)的神經(jīng)纖維，包括AS纖維和C纖維，AS纖維傳導(dǎo)快痛，C纖維傳導(dǎo)慢 痛。
[0010] TRPV1主要介導(dǎo)炎性痛，神經(jīng)病理性痛，機(jī)械性，化學(xué)性和溫度等傷害性刺激，引起 傷害性信號(hào)向中樞神經(jīng)系統(tǒng)傳遞并最終產(chǎn)生痛覺(jué)。在TRPV1缺乏的小鼠上，由炎癥介導(dǎo)的 熱痛敏會(huì)明顯減少，說(shuō)明其在介導(dǎo)炎性痛熱痛覺(jué)過(guò)敏中起著重要的作用。在糖尿病神經(jīng)病 理性疼痛模型中，利用DNA干擾技術(shù)抑制單側(cè)坐骨神經(jīng)結(jié)扎大鼠模型的TRPV1的表達(dá)，可 明顯緩解模型中冷刺激誘導(dǎo)的疼痛，說(shuō)明TRPV1在神經(jīng)病理性疼痛方面也發(fā)揮著重要的作 用。利用TRPV1的拮抗劑預(yù)處理，也可減輕肌肉注射TRPV1激動(dòng)劑導(dǎo)致的急性傷害性感受 和后期的機(jī)械性痛覺(jué)過(guò)敏，Christoph等人發(fā)現(xiàn)，TRPV1缺失的關(guān)節(jié)炎小鼠機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏減 弱，說(shuō)明TRPV1在機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏中起重要作用。TRPV1是治療疼痛的重要靶點(diǎn)。
[0011]人參皂苷 Rf，英文名為 Ginsenoside Rf，又名（3 P，6 a，12 P ) -3, 12, 20-Trihydr oxydammar-24-en-6-yl 2_0_3 -D-glucopyranosyl-3 -D-glucopyranoside,分子式為 C42H72014，分子量為801. 01，結(jié)構(gòu)式為

【權(quán)利要求】
1. 人參皂苷Rf作為TRPV1的拮抗劑的應(yīng)用。
2. 人參皂苷Rf在制備治療與TRPV1受體相關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其中所述與TRPV1受體相關(guān)的疾病包括傷害感受性疼 痛、神經(jīng)原性疼痛、癌性疼痛、頭痛、膀胱功能障礙、炎癥。
4. 一種藥物組合物，包括治療有效量的人參皂苷Rf。
5. -種藥物制劑，包括治療有效量的人參皂苷Rf和藥學(xué)上可接受的輔料。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物制劑，其為口服制劑、注射制劑或外用制劑。
【文檔編號(hào)】A61P25/00GK104382920SQ201410709529
【公開(kāi)日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2014年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月27日
【發(fā)明者】張文生, 劉曉麗, 王勝蘭, 辛文鋒 申請(qǐng)人:北京師范大學(xué), 北京師大科技園科技發(fā)展有限責(zé)任公司