一種含有th多肽的新型豬瘟疫苗的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物疫苗的設(shè)計與研制【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及一種含有TH多肽的新型豬瘟疫苗的制備方法，該方法包括下述步驟：步驟1：豬瘟病毒E2蛋白和TH多肽按照1~4∶1~3的配比成抗原液，備用；步驟2：將步驟1中制備好的抗原液與563VG佐劑按質(zhì)量比1∶1制成抗原液與佐劑的混合液，采用均質(zhì)機，在12000-15000rpm條件下，將混合液均質(zhì)，時間為10-15min，即制成含有TH多肽的新型豬瘟疫苗。本發(fā)明主要用于豬瘟病毒預(yù)防與免疫。
【專利說明】一種含有TH多肽的新型豬瘟疫苗的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物疫苗的設(shè)計與研制【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及一種含有TH多肽的新 型豬瘟疫苗的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 目前豬瘟疫苗為豬瘟兔化弱毒疫苗和豬瘟病毒E2重組桿狀病毒滅活疫苗。豬瘟 兔化弱毒疫苗具有良好的免疫原性，但是在臨床使用過程中不能區(qū)分是免疫疫苗產(chǎn)生的抗 體，還是由感染野毒產(chǎn)生的抗體，不能夠鑒別診斷，凈化豬瘟病毒；豬瘟病毒E2重組桿狀病 毒滅活疫苗亦具有良好的免疫原性，免疫豬后可通過抗體檢測，來區(qū)分疫苗免疫產(chǎn)生的抗 體和野毒感染產(chǎn)生的抗體，可用于鑒別診斷；但豬瘟病毒E2重組桿狀病毒滅活疫苗，免疫 豬后只產(chǎn)生體液免疫，不產(chǎn)生細胞免疫，而TH多肽可刺激豬產(chǎn)生細胞免疫。
[0003] 文獻檢索披露：生產(chǎn)豬瘟病毒E2重組桿狀病毒滅活疫苗的SOP，豬瘟病毒E2重組 桿狀病毒感染昆蟲細胞后，表達豬瘟病毒E2蛋白，經(jīng)豬瘟病毒E2蛋白的定量、滅活、乳化制 成油包水劑型的疫苗，當豬瘟病毒E2蛋白含量多20 y g時，免疫豬后可產(chǎn)生良好的保護；TH 多肽在口蹄疫合成肽疫苗中添加后，可顯著提高疫苗的效力。國內(nèi)尚無機構(gòu)和學(xué)者在豬瘟 病毒E2蛋白中添加TH多肽進行疫苗的研制。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于：研制的新型豬瘟病毒E2蛋白添加TH多肽疫苗，在不減少或減 少豬瘟病毒E2蛋白使用量的情況下，添加TH多肽使豬只產(chǎn)生細胞免疫，以提高或保持豬瘟 病毒E2滅活疫苗的效果，以期為今后豬瘟病毒的預(yù)防和凈化提供有力的物質(zhì)保障。
[0005] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下：一種含有TH多肽的新型豬瘟疫苗的制備方法，該方法包 括下述步驟：步驟1:豬瘟病毒E2蛋白和TH多肽按照1?4 : 1?3的配比成抗原液，備 用；步驟2:將步驟1中制備好的抗原液與563VG佐劑按質(zhì)量比I : 1制成抗原液與佐劑的 混合液，采用均質(zhì)機，在12000-15000rpm條件下，將混合液均質(zhì)，時間為10-15min，即制成 含有TH多肽的新型豬瘟疫苗；其中，步驟1中所述的豬瘟病毒E2蛋白如SEQ ID NO. 1所 示，按照常規(guī)公知的生物學(xué)方法制備而成的；所述的TH多肽如SEQ ID NO. 2所示，按照常規(guī) 公知的生物學(xué)方法制備而成；步驟2中所述的563VG佐劑為法國賽比克公司生產(chǎn)市售的產(chǎn) 品。
[0007] 本發(fā)明的有益效果：取豬瘟抗體為陰性的健康豬65頭，其中60頭分別免疫不同配 比的含有TH多肽的豬瘟病毒E2蛋白疫苗，另5頭為對照組，免疫組每頭耳后頸部肌肉注射 豬瘟病毒E2重組桿狀病毒滅活疫苗2ml，一免后21d以相同劑量和方式進行二免，二免后 14d，連同對照豬5頭，各注射豬瘟病毒石門系血毒I. Oml/頭（含IO5 tlMLD)，觀察16d，對照 豬應(yīng)全部發(fā)病，且至少死亡3頭，免疫豬應(yīng)全部健活或稍有體溫反應(yīng)，但無豬瘟臨床癥狀， 證明了豬瘟病毒E2蛋白添加TH多肽疫苗具有良好的免疫效力，可減少E2蛋白的添加量， 降低生產(chǎn)成本，同時為今后豬瘟病毒的凈化提供物質(zhì)保障。

【具體實施方式】
[0008] 下面將結(jié)合實施例對發(fā)明作進一步說明。 實施例1、一種含有TH多肽的新型豬瘟疫苗的制備方法，該方法包括下述步驟：步驟1 : 豬瘟病毒E2蛋白和TH多肽按照1?4 : 1?3的配比成抗原液，備用；步驟2 :將步驟1 中制備好的抗原液與563VG佐劑按質(zhì)量比I : 1制成抗原液與佐劑的混合液，采用均質(zhì)機， 在12000-15000rpm條件下，將混合液均質(zhì)，時間為10-15min，即制成含有TH多肽的新型豬 瘟疫苗；其中，步驟1中所述的豬瘟病毒E2蛋白如SEQ ID NO. 1所示，按照常規(guī)公知的生物 學(xué)方法制備而成的；所述的TH多肽如SEQ ID NO. 2所示，按照常規(guī)公知的生物學(xué)方法制備 而成；步驟2中所述的563VG佐劑為法國賽比克公司生產(chǎn)市售的產(chǎn)品。
[0009] 具體實踐驗證：豬瘟病毒E2蛋白和TH多肽的配比：分別按20 y g+0 y g/ml、 20 y g+5 y g/ml、20 y g+10 y g/ml、20 y g+15 y g/ml、15 y g+0 yg/ml、15ii g+5 y g/ml、 15 y g+10 y g/ml、15 y g+15 y g/ml、10 y g+0 yg/ml、10ii g+5 y g/ml、10 y g+10 y g/ml、 10 y g+15 y g/ml進行配置成抗原液；然后將配比好的抗原液與佐劑按質(zhì)量比I: I混合；首 先將563VG佐劑倒入500ml燒杯中，在乳化機中以3000rpm低速攪拌1分鐘，然后加入配置 好的與佐劑等量的抗原，再把乳化機轉(zhuǎn)速提高至12000rpm，攪拌時間為lOmin，即制成含有 TH多肽的豬瘟病毒E2蛋白疫苗；
[0010] 1、疫苗的效力檢驗：1. 1、效力檢驗用豬的篩選。采集4?5周齡健康仔豬血液，分 離血清，按如下方法測定豬是否為豬瘟抗體陰性。首先將豬瘟病毒兔化弱毒（抗原）用滅菌 生理鹽水稀釋成100個兔MID/ml，作為工作抗原（如果抗原對兔的MID為10_ 5_°/ml，則將抗 原稀釋成1000倍使用）。然后將被檢豬血清分別用滅菌生理鹽水作2倍稀釋，與含有100 個兔MID/ml的工作抗原等量混合，搖勻后，置10-15°C中和2小時，其間振搖2-3次。同時 設(shè)含有相同工作抗原量加等量生理鹽水（不加血清）的對照組，與被檢組在同樣條件下處 理。中和完畢，被檢組各注射兔1-2只，對照組注射兔2只，每只兔耳靜脈注射I. 0ml，觀察 體溫反應(yīng)，并判定結(jié)果。體溫反應(yīng)標準同《豬瘟活疫苗（傳代細胞源）質(zhì)量標準》中"兔的 體溫反應(yīng)標準"。當對照組2只兔均呈定型熱反應(yīng)（++)，或1只兔呈定型熱反應(yīng)（++)、另一 只兔呈輕熱反應(yīng)（+)時，方能判定結(jié)果。被檢組如果用1只兔，須呈定型熱反應(yīng)；如果用2 只兔，每只兔應(yīng)呈定型熱或輕熱反應(yīng)，被檢血清判為陰性。
[0011] 1. 2、效力檢驗用豬的分組及免疫，見表1。 表1效力檢驗用豬的分組及免疫

【權(quán)利要求】
1. 一種含有TH多肽的新型豬瘟疫苗的制備方法，其特征在于：該方法包括下述步驟： 步驟1 :豬瘟病毒E2蛋白和TH多肽按照1~4 : 1~3的配比成抗原液，備用； 步驟2 :將步驟1中制備好的抗原液與563VG佐劑按質(zhì)量比1 : 1制成抗原液與佐劑 的混合液，采用均質(zhì)機，在12000-15000rpm條件下，將混合液均質(zhì)，時間為10-15min，即制 成含有TH多肽的新型豬瘟疫苗； 其中，步驟1中所述的豬瘟病毒E2蛋白如SEQ ID NO. 1所示，按照常規(guī)公知的生物學(xué) 方法制備而成；所述的TH多肽如SEQ ID NO. 2所示，按照常規(guī)公知的生物學(xué)方法制備而成； 步驟2中所述的563VG佐劑為法國賽比克公司生產(chǎn)市售的產(chǎn)品。
【文檔編號】A61P31/14GK104474544SQ201410710803
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月28日
【發(fā)明者】李俊輝, 趙毅 申請人:新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司