燈盞花素和甘草酸在制備預(yù)防和治療電離輻射損傷藥物方面的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，名稱為“燈盞花素和甘草酸在制備預(yù)防和治療電離輻射損傷藥物方面的應(yīng)用”，公開了從植物燈盞花Erigeronbrevisca-pus中提取而來的黃酮類有效成分燈盞花素，化學(xué)名為4，5，6，三羥基甲酮-7-葡萄糖醛酸苷和從植物甘草中提取而來的一種皂甙成分(可人工合成)甘草酸，英文名Glycyrrhizin在制備預(yù)防和治療電離輻射損傷藥物方面的應(yīng)用。本發(fā)明公開了兩種活性物質(zhì)在細(xì)胞水平和動(dòng)物活體水平發(fā)揮輻射保護(hù)作用，并且在致死劑量、亞致死劑量以及低劑量輻射的廣泛劑量范圍下，均有保護(hù)作用，兩種物質(zhì)均質(zhì)量穩(wěn)定，成本低廉，來源廣泛，可用于制備預(yù)防和治療電離輻射造成的相關(guān)損傷救治和疾病治療方面的藥物。
【專利說明】燈盞花素和甘草酸在制備預(yù)防和治療電離輻射損傷藥物方 面的應(yīng)用
[0001] 涉及領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體在于從植物燈蓋花Erigeronbrevisca-pus中提取而 來的黃酮類有效成分燈盞花素，化學(xué)名為4, 5,6,三羥基甲酮-7-葡萄糖醛酸苷和從植物甘 草中提取而來的一種阜式成分或可由人工合成的甘草酸，英文名Glycyrrhizin在制備用 于預(yù)防和治療電離輻射造成的相關(guān)損傷救治和疾病治療方面的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0003] 隨著全球核事業(yè)的蓬勃發(fā)展，核技術(shù)已在核電站、航天事業(yè)、國(guó)防和生物醫(yī)藥等各 個(gè)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，人類接觸電離輻射并導(dǎo)致?lián)p傷的機(jī)會(huì)增加，同時(shí)隨著世界核安全形勢(shì)緊 張帶來的核戰(zhàn)爭(zhēng)和核恐怖事件隱憂，電離輻射造成的機(jī)體損傷（簡(jiǎn)稱為輻射損傷）的防護(hù) 與救治正在受到越來越多的重視。
[0004] 另一方面，惡性腫瘤的發(fā)病率和患者數(shù)量近年來一直呈持續(xù)上升的趨勢(shì)，放射治 療作為主要治療手段之一，起著不可或缺的作用，但是高劑量輻射照射難免會(huì)導(dǎo)致的腫瘤 周邊正常組織和器官乃至全身的急性輻射損傷，輻射損傷帶來的副反應(yīng)嚴(yán)重地限制了放射 治療在腫瘤治療中的廣泛應(yīng)用，也明顯影響了腫瘤患者放射治療療效和治療后的生活質(zhì) 量。
[0005] 目前投放市場(chǎng)的輻射損傷救治相關(guān)藥物主要有：含硫化合物、激素類、細(xì)胞因子類 以及中草藥等，它們分別存在各自的固有缺陷：比如含硫化合物普遍副作用較大，氨磷汀 (又名Amifostine)作為此類化合物的代表是目前公認(rèn)的防護(hù)效果最好的化合物，是國(guó)際 管理機(jī)構(gòu)通過的第一個(gè)有選擇性的廣譜細(xì)胞保護(hù)劑，但是半衰期極短（7分鐘）和價(jià)格昂貴 (國(guó)內(nèi)醫(yī)療市場(chǎng)價(jià)格在400-500元/支）限制了它的應(yīng)用；而激素類藥物對(duì)輻射損傷的防 治主要是對(duì)骨髓有核細(xì)胞、造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞，此類藥物對(duì)性器官和生殖系統(tǒng)的影響限 制了它的廣泛使用；細(xì)胞因子類藥物例如白介素類、集落刺激因子類藥物能夠緩解和救治 輻射導(dǎo)致的骨髓造血功能系統(tǒng)損傷，但是其輻射防護(hù)作用與給藥時(shí)間密切相關(guān)（在用于預(yù) 防和救治的醫(yī)療實(shí)踐中，此類藥物對(duì)醫(yī)護(hù)檢測(cè)水平和關(guān)注程度要求高），存在明顯的致炎作 用，且價(jià)格昂貴，難以常溫保存；中草藥類抗輻射成分主要有酚類、多糖類、天然黃酮類，具 有活性成分不明確、低毒等特點(diǎn)，經(jīng)多年研究，至今無上市或待上市的同類藥物。
[0006] 本發(fā)明涉及兩種可從天然植物中提取，也可人工合成的化合物在制備預(yù)防和治療 電離輻射損傷救治和腫瘤放射治療輔助藥物方面的應(yīng)用。
[0007] 燈盞花素是一種可提取于天然植物的有效成分，是從菊科短莛屬植物燈盞花 Erigeronbrevisca-pus全株植物中提取分離的黃酮類有效成分，分子式為C25H24O 12，分子量 為462. 21，可溶于水，化學(xué)名為4, 5,6,三羥基甲酮-7-葡萄糖醛酸苷，具有擴(kuò)張腦血管的作 用，降低腦血管阻力，增加腦血流量，改善微循環(huán)，并有對(duì)抗血小板聚集的作用。臨床用于治 療突發(fā)性耳聾，閉塞性動(dòng)脈硬化皮質(zhì)盲，糖尿病周圍神經(jīng)病變，股骨頭缺血性壞死，類風(fēng)濕 關(guān)節(jié)炎，后天性麻痹性斜視，腎病綜合征等。
[0008] 甘草酸一種可提取于天然植物并可大量人工合成的單一化合物，亦稱甘草皂甙、 甘草甜素，是從中藥甘草中分離的一種皂甙成分，是甘草中的主要成分，也是有效成分，存 在于豆科植物甘草Glycyrrhizina uralensis Fisch.根及根莖、光果甘草Glycyrrhiza glabraL.根及根莖、相思子Abrus precatoriusL.葉等。甘草具有多種藥理功能及人體保 健作用，被國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)列入既是食品又是藥品的保健食品名單。甘草酸，又 名甘草甜素，英文名稱 Glycyrrhizin，Glycyrrhizic acid,分子式 C12H22O16，分于量 833. 94， CAS號(hào)1405-86-3,白色至淡黃色粉末，味甜，甜度約為蔗糖的150-200倍，且甜味留存時(shí)間 長(zhǎng)，易溶于水，溶于稀乙醇、甘油、丙二醇，不溶于無水乙醇、乙醚、氯仿和油脂，在工業(yè)和食 品行業(yè)用作矯味劑和調(diào)味劑，成本低廉、安全無毒。該化合物被廣泛報(bào)道具有抗腫瘤、治療 心腦血管缺血再灌注損傷、神經(jīng)退行疾病、炎性疾病等領(lǐng)域。
[0009] 迄今為止，燈盞花素、甘草酸，以及兩者的組合物在制備用于預(yù)防和治療電離輻射 損傷救治和腫瘤放射治療輔助藥物方面的應(yīng)用尚未見報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的目的是提供燈盞花素和甘草酸組合用藥的新用途。
[0011] 本發(fā)明所提供的燈盞花素和甘草酸的新用途在于：制備用于預(yù)防和治療電離輻射 損傷救治和腫瘤放射治療輔助藥物方面的應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明所述的電離輻射損傷包括致死劑量照射、亞致死劑量和低劑量照射損傷， 也包括腫瘤放射治療所產(chǎn)生的輻射損傷。
[0013] 本發(fā)明提供的燈盞花素和甘草酸使用形式，可根據(jù)臨床需要，加入相應(yīng)輔料，以片 齊?、丸劑、膠囊、懸浮液、溶液、糖漿、注射劑、溶劑、霜?jiǎng)?、軟膏、噴霧劑等制劑形式存在。
[0014] 本發(fā)明所提供的燈盞花素和甘草酸新用途的使用劑量在l-10g/Kg體重（人），但 不限于此范圍，兩者的優(yōu)選比例為1 : 4?1 : 10,優(yōu)選制劑形式為口服+注射劑。
[0015] 本發(fā)明的目的和優(yōu)點(diǎn)將通過以下優(yōu)先實(shí)施例的非限制性說明進(jìn)行圖示和解釋，這 些實(shí)施例是參照附圖作為例子給出的。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016] 圖1燈盞花素和甘草酸顯著延長(zhǎng)C57鼠致死劑量照射（X射線照射：圖la，γ射 線照射：圖Ib)后存活天數(shù)。
[0017] 圖2燈盞花素和甘草酸顯著提高C57鼠亞致死劑量（9Gy Y射線）照射后30天生 存率。
[0018] 圖3燈盞花素和甘草酸對(duì)低劑量（5Gy Y射線）照射造成的輻射損傷的造血保護(hù) 作用。
[0019] 圖4燈盞花素和甘草酸對(duì)乳腺癌腫瘤細(xì)胞的輻射保護(hù)作用（顯微鏡下MCF-7細(xì)胞 圖，1.對(duì)照組；2.照射組；3燈盞花素0. lmg/ml ;4.照射+燈盞花素0. lmg/ml ;5.對(duì)照組； 6.照射組；7.甘草酸0. 1 μ M ;8.照射+燈盞花素甘草酸0. 1 μ M)。

【具體實(shí)施方式】
[0020] 實(shí)施例一
[0021] 單次致死劑量（13Gy X射線/ Y射線）照射造成的輻射損傷救治
[0022] 燈盞花素，可參考已公開的發(fā)明專利說明書或相關(guān)文獻(xiàn)自行制備，也可購(gòu)買于醫(yī) 藥市場(chǎng)，給藥方式為腹腔注射，用藥劑量為3?6mg/Kg體重（鼠）。
[0023] 甘草酸，Glycyrrhizin，購(gòu)自 TCI 公司，貨號(hào)G0150,批號(hào) 8XM3D-EJ，純度> 93. 0%， 給藥方式為腹腔注射，用藥劑量為20?40mg/Kg體重。
[0024] X射線照射裝置X-Rad RS-2000輻照儀，電壓160KV，波段射線能量為50KeV，劑量 率 I. 01Gy/min。
[0025] Y射線照射裝置137Cs輻照儀，劑量率0. 5Gy/min。
[0026] C57BL/6小鼠，雌雄各半，體重18-20g，合格證號(hào)SCXK(京）2012-0001,分組情況 為：不照射組、照射并給生理鹽水組、照射并給燈盞花素組、照射并給甘草酸組、照射并給燈 盞花素+甘草酸組，每組10只。
[0027] 采用單次致死劑量全身照射，單藥組給藥方案為照射前30分鐘腹腔給藥，照射后 立即補(bǔ)充給藥一次，之后每24小時(shí)給藥一次，連續(xù)14天。組合用藥組給藥方案為照射前30 分鐘腹腔給藥燈盞花素：甘草酸（1 : 10,4mg/Kg體重：40mg/Kg體重），照射后立即補(bǔ)充給 藥甘草酸（40mg/Kg體重）一次，8小時(shí)后按照燈盞花素 ：甘草酸（1 : 5)給藥，繼而每24小 時(shí)按1 : 5的比例繼續(xù)給藥，連續(xù)14天。
[0028] 檢測(cè)指標(biāo)：存活天數(shù)。
[0029] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1，燈盞花素和甘草酸組合給藥可顯著延長(zhǎng)C57鼠致死劑量照射后 的存活天數(shù)，優(yōu)于兩者分別單獨(dú)給藥。
[0030] 實(shí)施例二
[0031] 亞致死劑量（9Gy Y射線）照射造成的輻射損傷救治
[0032] 藥品信息、動(dòng)物信息、輻照裝置和參數(shù)、給藥方式與實(shí)施例一相同。
[0033] 照射劑量為9Gy。
[0034] 檢測(cè)指標(biāo)：30天生存率。
[0035] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖2,燈盞花素和甘草酸組合給藥可顯著提高C57鼠亞致死劑量照射 后的生存率，優(yōu)于兩者分別單獨(dú)給藥。
[0036] 實(shí)施例三
[0037] 低劑量（5Gy Y射線）照射造成的輻射損傷的造血保護(hù)作用
[0038] 藥品信息、動(dòng)物信息、輻照裝置和參數(shù)、給藥方式與實(shí)施例一相同。
[0039] 照射劑量為5Gy。
[0040] 檢測(cè)指標(biāo)：體重、外周血計(jì)數(shù)、單側(cè)股骨計(jì)數(shù)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落形成單位、脾臟 指數(shù)、胸腺指數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3,燈盞花素和甘草酸組合給藥可顯著著緩解低劑量照射引 起的動(dòng)物的造血系統(tǒng)損傷。
[0041] 實(shí)施例四
[0042] 燈盞花素、甘草酸對(duì)多種腫瘤細(xì)胞/正常細(xì)胞的輻射保護(hù)作用
[0043] 藥品信息，輻照裝置和參數(shù)與實(shí)施例一相同。
[0044] 細(xì)胞系采用乳腺癌MCF-7細(xì)胞、乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞、肝癌H印G2細(xì)胞、肺癌 A549細(xì)胞、人胚腎HEK293細(xì)胞、人微血管內(nèi)皮HMEC-I細(xì)胞。
[0045] 實(shí)驗(yàn)過程：
[0046] 1.細(xì)胞系及培養(yǎng)
[0047] 采用人肝癌！fepG2細(xì)胞、人肺癌A549細(xì)胞，分別用含10 % FBS (Gibico， 1?卩10099-141)，含10(^8/1111鏈霉素和10(^/1111青霉素，高糖01^]\1(辦(31〇116,3!130243.018) 和PRMI1640(Hyclone，SH30809. 01B)培養(yǎng)，置于37°C，5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中常規(guī)傳代培 養(yǎng)。
[0048] 2.藥物處理及照射
[0049] 細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，更換含不同濃度藥物的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，接受 不同劑量Y射線照射。
[0050] 3.克隆形成實(shí)驗(yàn)
[0051] 細(xì)胞照射后，按不同的照射劑量接種不同細(xì)胞數(shù)量接種到60mm培養(yǎng)皿。細(xì)胞連續(xù) 培養(yǎng)3周后用甲醇固定，加姬姆薩應(yīng)用液染色30分鐘，流水洗凈，計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)> 50的克隆 個(gè)數(shù)。通過克隆形成率PE=(對(duì)照組克隆數(shù)/實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)）X 100%和存活分?jǐn)?shù)=克隆 數(shù)八實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)XPE)計(jì)算克隆形成率和存活分?jǐn)?shù)。并按多靶單擊模型擬合繪制細(xì)胞 存活曲線。
[0052] 檢測(cè)指標(biāo)：IC50 (殺死50 %細(xì)胞的放射劑量）
[0053] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖4和表1?2,燈盞花素和甘草酸分別可提高多種腫瘤細(xì)胞或正常細(xì) 胞的輻射耐受劑量，有一定的輻射保護(hù)作用。
[0054] 表1燈盞花素對(duì)多種腫瘤細(xì)胞/正常細(xì)胞Y射線照射IC50的影響（Gy)
[0055]

【權(quán)利要求】
1. 燈盞花素和甘草酸在制備預(yù)防和治療電離輻射損傷救治藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述的電離輻射損傷救治包括但不限于單次致死 劑量照射造成的急性電離輻射損傷救治。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述的電離輻射損傷救治包括但不限于單次/多 次低劑量照射造成的造血系統(tǒng)損傷救治。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中燈盞花素和甘草酸的使用優(yōu)選比例在1 : 4? 1 : 10。
5. 燈盞花素和甘草酸在制備腫瘤放射治療輔助藥物中的應(yīng)用。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述的腫瘤放射治療包括但不限于乳腺癌。
【文檔編號(hào)】A61P39/00GK104490913SQ201410858049
【公開日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2014年12月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月30日
【發(fā)明者】樊賽軍, 賀欣 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所