本申請依據(jù)美國法典第35篇第119(e)部分要求2013年11月20日提交的美國申請61/906,817的優(yōu)先權(quán)，將所述美國申請的整體以引用的方式并入。

背景技術(shù)：

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明的實(shí)施方案涉及姜黃根醇化合物的用途，其用于增加I類主要組織相容性復(fù)合體(MHC-I)抗原在細(xì)胞中、尤其在患病細(xì)胞如癌細(xì)胞的表面上的表達(dá)并從而提高細(xì)胞的免疫原性。還包括相關(guān)藥物組合物以及其單獨(dú)或與其它療法組合用于例如治療各種癌癥的方法。

相關(guān)技術(shù)的描述

I類主要組織相容性復(fù)合體(MHC-I)抗原見于身體幾乎所有的有核細(xì)胞上。這類主要組織相容性復(fù)合體(MHC)分子的主要功能在于向細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)呈現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的肽片段?；谶@種呈現(xiàn)，CTL將忽視健康細(xì)胞并且攻擊呈現(xiàn)結(jié)合MHC的外來肽或另外異常的肽包括疾病相關(guān)的肽(抗原)如癌癥抗原的細(xì)胞。因此，MHC-I分子的表面表達(dá)在決定標(biāo)靶細(xì)胞對CTL的敏感性方面起到重要作用。

許多癌性細(xì)胞呈現(xiàn)下調(diào)的MHC-I細(xì)胞表面表達(dá)(參見例如Wang等,JBC.283:3951-3959,2008；Chang等,Keio J.Med.52:220-9,2003；Zagzag等,Lab Invest.85:328-41,2005；和Hewitt,Immunology.110:163-69,2003)。MHC-I表達(dá)減少可至少部分地歸因于多種因子如輸送體(如TAP-1、TAP-2)、蛋白酶體組分(LMP)和在抗原呈現(xiàn)和處理通路中所涉及的其它輔助蛋白的下調(diào)。這個(gè)特征可以使癌性細(xì)胞規(guī)避免疫監(jiān)督并從而提供針對否則設(shè)計(jì)以消除細(xì)胞的免疫活性的存活優(yōu)勢。

因此，在本領(lǐng)域中需要可增加I類MHC在這些和其它類型患病細(xì)胞中的表達(dá)并從而提高免疫系統(tǒng)靶向這些細(xì)胞以進(jìn)行破壞的能力的試劑。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的實(shí)施方案包括增加I類主要組織相容性復(fù)合體(MHC-I)在細(xì)胞中的表面表達(dá)的方法，其包括使細(xì)胞與姜黃根醇化合物接觸。在某些實(shí)施方案中，相對于未經(jīng)過處理的對照細(xì)胞，MHC-I表面表達(dá)增加至少約10％。

在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞(在其未經(jīng)過處理的狀態(tài))的特征在于，相對于相同細(xì)胞類型的正?；蛄硗饨】档募?xì)胞，MHC-I表面表達(dá)減少以及任選地TAP-1表達(dá)減少。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞中的MHC-I表面表達(dá)以及任選地TAP-1表達(dá)增加到相同細(xì)胞類型的另外正?；蚪】导?xì)胞的MHC-I表面表達(dá)以及任選地TAP-1表達(dá)水平的約10％以內(nèi)。

在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞為癌細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，癌細(xì)胞為轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，癌細(xì)胞選自以下一種或多種：乳癌細(xì)胞、宮頸癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、胃腸癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、睪丸癌細(xì)胞、頭頸癌細(xì)胞、膀胱癌細(xì)胞、腎癌細(xì)胞、鱗狀細(xì)胞癌瘤、CNS或腦癌細(xì)胞、黑素瘤細(xì)胞、非黑素瘤癌細(xì)胞、甲狀腺癌細(xì)胞、子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞、上皮細(xì)胞瘤細(xì)胞、骨癌細(xì)胞和造血系癌細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，骨癌細(xì)胞為骨肉瘤、軟骨肉瘤或尤文氏肉瘤家族腫瘤(ESFT)的細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，胃腸癌細(xì)胞為食道癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、膽囊(膽管)癌細(xì)胞、小腸癌細(xì)胞、結(jié)直腸癌細(xì)胞、肛門或直腸癌細(xì)胞或胃腸道類癌或間質(zhì)腫瘤。在某些實(shí)施方案中，肺癌細(xì)胞為腺癌、鱗狀細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌或大細(xì)胞肺癌。在某些實(shí)施方案中，黑素瘤為惡性小痣、惡性小痣黑素瘤、淺表性彌散型黑素瘤、肢端雀斑樣痣黑素瘤、粘膜黑素瘤、結(jié)節(jié)性黑素瘤、息肉樣黑素瘤、促結(jié)締組織增生性黑素瘤、無黑色素性黑素瘤、軟組織黑素瘤或葡萄膜黑素瘤。在某些實(shí)施方案中，造血系癌癥細(xì)胞為淋巴瘤細(xì)胞、白血病細(xì)胞或多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞。

在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞在體外。

在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞在受試者體內(nèi)，并且所述方法包括向所述受試者施用姜黃根醇化合物。在某些實(shí)施方案中，受試者患有癌癥。在某些實(shí)施方案中，癌癥的特征在于相對于相同細(xì)胞類型的非癌性細(xì)胞，癌細(xì)胞(在未經(jīng)過處理的狀態(tài))的MHC-I表面表達(dá)減少并且任選地TAP-1表達(dá)減少。在某些實(shí)施方案中，癌細(xì)胞包括轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，相對于相同細(xì)胞類型的非癌性細(xì)胞，或相對于相同細(xì)胞類型的非轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞，轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞(在未經(jīng)過處理的狀態(tài))的MHC-I表面表達(dá)減少并且任選地TAP-1表達(dá)減少。

在某些實(shí)施方案中，相對于對照細(xì)胞，癌細(xì)胞中的MHC-I表面表達(dá)以及任選地TAP-1表達(dá)增加至少約10％。在某些實(shí)施方案中，增加的MHC-I表面表達(dá)以及任選地TAP-1表達(dá)提高了對癌細(xì)胞的CTL介導(dǎo)性免疫反應(yīng)。

在某些實(shí)施方案中，癌癥選自以下一種或多種：乳癌、宮頸癌、前列腺癌、胃腸癌、肺癌、卵巢癌、睪丸癌、頭頸癌、膀胱癌、腎癌(例如腎細(xì)胞癌)、軟組織肉瘤、鱗狀細(xì)胞癌瘤、CNS或腦癌、黑素瘤、非黑素瘤癌癥、甲狀腺癌、子宮內(nèi)膜癌、上皮細(xì)胞瘤、骨癌和造血系癌癥。在某些實(shí)施方案中，肺癌為骨肉瘤、軟骨肉瘤或尤文氏肉瘤家族腫瘤(ESFT)。在某些實(shí)施方案中，胃腸癌為食道癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、膽囊(膽管)癌、小腸癌、結(jié)直腸癌、肛門或直腸癌或胃腸道類癌或間質(zhì)腫瘤。在某些實(shí)施方案中，黑素瘤為惡性小痣、惡性小痣黑素瘤、淺表性彌散型黑素瘤、肢端雀斑樣痣黑素瘤、粘膜黑素瘤、結(jié)節(jié)性黑素瘤、息肉樣黑素瘤、促結(jié)締組織增生性黑素瘤、無黑色素性黑素瘤、軟組織黑素瘤或葡萄膜黑素瘤。在某些實(shí)施方案中，造血系癌癥為淋巴瘤、白血病或多發(fā)性骨髓瘤。在某些實(shí)施方案中，淋巴瘤為T細(xì)胞淋巴瘤、B細(xì)胞淋巴瘤、小淋巴細(xì)胞淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤、多形性大細(xì)胞淋巴瘤(ALCL)、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤。在某些實(shí)施方案中，白血病為慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)、毛細(xì)胞白血病、急性淋巴母細(xì)胞性白血病、骨髓性白血癥、急性骨髓或骨髓性白血病，或者慢性骨髓性白血病。在某些實(shí)施方案中，腦癌為神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦脊髓膜瘤、垂體腺瘤、前庭神經(jīng)鞘瘤、原發(fā)性CNS淋巴瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、原始神經(jīng)外胚層瘤(成神經(jīng)管細(xì)胞瘤)或多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤。

一些方法包括與其它癌癥療法組合施用姜黃根醇化合物。在某些實(shí)施方案中，其它癌癥療法選自以下一種或多種：抗癌劑、放療、手術(shù)、移植、光力學(xué)療法、癥狀護(hù)理和抗生素療法。在某些實(shí)施方案中，抗癌劑選自小分子和抗體。在某些實(shí)施方案中，小分子為細(xì)胞毒性劑、化學(xué)療劑或抗血管生成劑。在某些實(shí)施方案中，小分子細(xì)胞毒性劑、化學(xué)療劑或抗血管生成劑選自以下一種或多種：烷化劑、抗代謝物、蒽環(huán)霉素、抗腫瘤抗生素、鉑、I型拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、II型拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、長春花堿和紫杉烷。

在某些實(shí)施方案中，小分子選自以下一種或多種：苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、西侖吉肽、洛莫司汀(CCNU)、美法侖、丙卡巴肼、噻替派、卡莫司汀(BCNU)、伊扎妥林、白消安、道諾霉素、多柔比星、吉非替尼、厄洛替尼伊達(dá)比星、替莫唑胺、表柔比星、米托蒽醌、博來霉、順鉑、卡波鉑、奧沙利鉑、喜樹堿、伊立替康、拓樸替康、安吖啶、依托泊苷、依托泊苷磷酸鹽、替尼泊苷、坦羅莫司、依維莫司、長春新堿、長春堿、長春瑞濱、長春地辛、CT52923、紫杉醇、伊馬替尼、達(dá)沙替尼、索拉非尼、帕唑帕尼、舒尼替尼、瓦塔拉尼、吉非替尼、厄洛替尼、AEE-788、二氯乙酸鹽、他莫昔芬、法舒地爾、SB-681323、司馬沙尼、多奈哌齊、加蘭他敏、美金剛、利伐斯的明、他克林、雷沙吉蘭、納曲酮、魯比前列酮、沙芬酰胺、伊曲茶堿、匹莫范色林、皮妥力散、伊拉地平、匹多皮啶(ACR16)、丁苯那嗪、蓓薩羅丁、乙酸格拉默、芬戈莫德和米托蒽醌，包括其藥學(xué)上可接受的鹽和酸。

在某些實(shí)施方案中，抗體選自以下一種或多種：3F8、8H9、阿巴伏單抗、阿德木單抗、阿福圖單抗、阿珠單抗(pegol)、阿來珠單抗、阿妥莫單抗噴替酸锝、阿瑪西單抗、麻安莫單抗麻芬諾托、阿泊珠單抗、阿西莫單抗、巴維昔單抗、貝妥莫單抗、貝利木單抗、貝伐單抗、比伐珠單抗(mertansine)、本圖希單抗維度汀、莫坎妥珠單抗(mertansine)、莫坎妥珠單抗(ravtansine)、卡羅單抗(噴地肽)、卡蘆單抗、卡妥索單抗、西妥昔單抗、西他土珠(bogatox)、西妥木單抗、瓦妥珠單抗(tetraxetan)、括那木單抗、達(dá)西珠單抗、達(dá)利珠單抗、達(dá)羅珠單抗、地莫單抗、決瑞圖單抗、依可瑪單抗、依決洛單抗、埃羅妥珠單抗、依那妥珠單抗、因圖昔單抗、依帕珠單抗、厄妥索單抗、伊瑞西珠單抗、法樂珠單抗、FBTA05、非吉妥珠單抗、弗蘭瓦妥單抗、加利昔單抗、吉妥珠單抗、蓋尼塔單抗、吉妥珠單抗(奧唑米星)、金妥昔單抗、吉瑞昔單抗(維度汀)、異貝莫單抗替坦、依庫單抗、伊戈伏單抗、英達(dá)西單抗ravtansine、因特圖單抗、伊珠單抗奧唑米星、伊匹單抗(MDX-101)、伊拉圖單抗、拉貝珠單抗、來沙木單抗、林妥珠單抗、羅妥珠單抗(mertansine)、魯卡木單抗、魯昔單抗、馬帕木單抗、馬妥珠單抗、米拉妥珠單抗、米妥莫單抗、莫噶木珠單抗、莫妥木單抗(pasudotox)、那可單抗(tafenatox)、那他莫單抗(estafenatox)、納爾那單抗、那遲妥單抗、尼莫妥珠單抗、尼沃魯單抗、(有或無放射性碘)、NR-LU-10、奧法木單抗、奧拉妥單抗、奧納珠單抗、莫奧珠單抗(monatox)、奧戈伏單抗、帕尼單抗、帕曲單抗、帕妥木單抗、帕妥珠單抗、普托木單抗、拉克托莫單抗、拉德單抗、雷莫蘆單抗、瑞羅妥單抗、利妥昔單抗、羅巴木單抗、撒馬利珠單抗、西羅珠單抗、西圖昔單抗、塔巴魯單抗、他尼珠單抗、他帕圖莫單抗(paptox)、特納圖莫單抗、替妥木單抗、TGN1412、替利木單抗、曲妥珠單抗、替西木單抗、替加珠單抗、TNX-650、托西莫單抗、TRBS07、圖克妥珠單抗(西莫白介素)、優(yōu)比妥昔單抗、優(yōu)魯單抗、維妥珠單抗、沃羅昔單抗、伏妥莫單抗和扎魯木單抗，包括其抗原結(jié)合片段。

還包括用于治療癌癥的組合物，其包含藥學(xué)上可接受的載體和姜黃根醇化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在某些實(shí)施方案中，癌癥的特征在于相對于相同細(xì)胞類型的非癌性細(xì)胞，癌細(xì)胞(在未經(jīng)過處理的狀態(tài))的MHC-I表面表達(dá)減少并且任選地TAP-1表達(dá)減少。

一些實(shí)施方案包括組合物(例如藥物組合物)，所述組合物包含藥學(xué)上可接受的載體、抗癌劑和姜黃根醇化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

附圖說明

圖1示出了(S)-(+)-姜黃根醇和各種其它姜黃根醇化合物的式子。

圖2A-2B示出了通過使姜黃根醇與各種羧酸偶聯(lián)所制得的姜黃根醇化合物的式子。

圖3圖解了細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)對在癌細(xì)胞上的腫瘤相關(guān)抗原的識別。

圖4A圖解了I類MHC抗原呈現(xiàn)通路，突出了TAP-1在形成肽/MHC-I復(fù)合物方面的作用。圖4B圖解了癌細(xì)胞減少肽/MHC-I復(fù)合物在細(xì)胞表面上的呈現(xiàn)并從而規(guī)避CTL介導(dǎo)性免疫監(jiān)督的各種機(jī)制，包括下調(diào)TAP-1和TAP-2輸送蛋白和蛋白酶體復(fù)合物。

圖5示出了TAP-1和MHC-I在癌細(xì)胞系以及以手術(shù)方式去除的腫瘤中頻繁下調(diào)。

圖6示出了TAP-1下調(diào)與疾病進(jìn)展和轉(zhuǎn)移強(qiáng)相關(guān)。

圖7A-7B示出了海綿提取物1會(huì)增加MHC-I的表面表達(dá)(7A)以及TAP-1啟動(dòng)子的表達(dá)(7B，如由EGFP所示)。

圖8A-8B示出了海綿提取物3會(huì)增加MHC-I的表面表達(dá)(8A)以及TAP-1啟動(dòng)子的表達(dá)(8B，如由EGFP所示)。

圖9A-9B示出了海綿提取物5會(huì)增加MHC-I的表面表達(dá)(9A)以及TAP-1啟動(dòng)子的表達(dá)(9B，如由EGFP所示)。

圖10示出了在A9鼠腫瘤細(xì)胞模型(參見實(shí)施例2)中所測試的姜黃根醇化合物的式子。

圖11A示出了在A9細(xì)胞中姜黃根醇化合物對MHC-I表達(dá)的誘導(dǎo)，并且圖11B示出了A9細(xì)胞中細(xì)胞毒性研究的結(jié)果，如由PI排斥和完整細(xì)胞數(shù)目來測量。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明的實(shí)施方案涉及姜黃根醇化合物可增加MHC-I細(xì)胞表面表達(dá)的發(fā)現(xiàn)。在一些情況下，姜黃根醇化合物通過增加TAP-1(與抗原加工1相關(guān)的輸送體)，即MHC-I抗原呈現(xiàn)通路的輸送蛋白的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)。

MHC-I/肽復(fù)合物的識別對于細(xì)胞的CTL介導(dǎo)性免疫監(jiān)督是重要的(參見圖3)。因?yàn)槟承┗疾〖?xì)胞如癌性細(xì)胞通過下調(diào)MHC-I細(xì)胞表面表達(dá)、通常通過下調(diào)抗原呈現(xiàn)通路如TAP-1的表達(dá)蛋白來規(guī)避免疫監(jiān)督(參見圖4A-4B和圖5-6)，所以姜黃根醇化合物可以通過恢復(fù)MHC-I/肽抗原復(fù)合物的MHC-I表面表達(dá)和呈現(xiàn)來提高針對這些患病細(xì)胞的CTL介導(dǎo)性免疫活性。姜黃根醇化合物因此可以用于治療與MHC-I表面表達(dá)和/或TAP-1表達(dá)減少相關(guān)的疾病，包括許多癌癥。

定義

除非另外定義，否則本文使用的所有技術(shù)術(shù)語和科學(xué)術(shù)語都具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員通常所理解相同的含義。雖然與本文所述的那些類似或等效的任何方法和材料都可用于本發(fā)明的實(shí)踐或測試，但是描述了優(yōu)選的方法和材料。為了本發(fā)明的目的，下文定義以下術(shù)語。

本文所引用的所有公布、專利和專利申請都以引用的方式整體併入本文中。

因此，冠詞“一個(gè)(種)”在本文中用以指所述冠詞的一個(gè)或一個(gè)以上(即至少一個(gè))語法對象。例如，“一種要素”意指一種要素或一種以上的要素。

“約”意指相對于參考量(quantity)、水平、值、數(shù)目、頻率、百分比、尺寸、大小、量(amount)、重量或長度變化多達(dá)30％、25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的量、水平、值、數(shù)目、頻率、百分比、尺寸、大小、量、重量或長度。

貫穿本說明書，除非上下文另外需要，否則將措詞“包含(包括)”理解成表明包括所述步驟或要素或者步驟或要素組，但是不排除任何其它步驟或要素或者步驟或要素組?！坝?..組成”意指包括并且限于接著詞語“由...組成”之后的任何詞。因此，詞語“由...組成”表示所列要素是需要的或強(qiáng)制性的，并且不可以存在其它要素?！盎旧嫌?..組成”意指包括在所述詞語之后所列的任何要素，并且限于不干擾或有助于在本公開中對所列要素所規(guī)定的活性或作用的其它要素。因此，詞語“基本上由...組成”表示所列要素是需要的或強(qiáng)制性的，但是其它要素是任選的并且可以存在或者可以不存在，這取決于其是否會(huì)實(shí)質(zhì)性影響所列要素的活性或作用。

術(shù)語“調(diào)節(jié)”和“改變”包括相對于對照物“提高”、“增強(qiáng)”或“刺激”以及“降低”或“減少”典型地在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著或在生理學(xué)上顯著的量或程度?！疤岣叩摹薄ⅰ笆艽碳さ摹被颉霸鰪?qiáng)的”量典型地是“在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的”量，并且可以包括：相對于在無組合物下或由對照組合物、樣本、狀態(tài)或測試受試者所產(chǎn)生的量，提高1.1、1.2、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30倍或更多倍(例如500倍、1000倍)(包括在其間以及大于1的所有整數(shù)和小數(shù)和范圍，例如1.5、1.6、1.7、1.8等)?！敖档偷摹被颉皽p少的”量典型地是“在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的”量，并且可以包括：相對于在無組合物下或由對照組合物、樣本、狀態(tài)或測試受試者所產(chǎn)生的量，降低1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％(包括其間的所有整數(shù)和范圍)。

“任選的”或“任選地”意指隨后描述的事件或情況可能發(fā)生或可能不發(fā)生，并且描述同時(shí)包括所述事件或情況發(fā)生或者不發(fā)生的情形。

“藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑”非限制地包括已經(jīng)由美國食品與藥物管理局批準(zhǔn)的如可為人用或家畜用所接受的任何佐劑、載體、賦形劑、助流劑、甜味劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、增味劑、表面活性劑、潤濕劑、分散劑、懸浮劑、穩(wěn)定劑、等滲劑、溶劑或乳化劑。

“藥學(xué)上可接受的鹽”包括酸加成鹽與堿加成鹽。

“藥學(xué)上可接受的酸加成鹽”是指保留游離堿的生物效用和性質(zhì)(不會(huì)在生物學(xué)上或以其它方式不合需要)以及與以下酸形成的的那些鹽：無機(jī)酸，如但并不限于鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，以及有機(jī)酸，如但不限于乙酸、2,2-二氯乙酸、己二酸、海藻酸、抗壞血酸、天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、樟腦酸、樟腦-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、碳酸、肉桂酸、檸檬酸、環(huán)拉酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙烷磺酸、2-羥基乙烷磺酸、甲酸、反丁烯二酸、半乳糖二酸、龍膽酸、葡萄庚酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、2-氧代-戊二酸、甘油磷酸、乙醇酸、馬尿酸、異丁酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、順丁烯二酸、蘋果酸、丙二酸、杏仁酸、甲烷磺酸、粘酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、1-羥基-2-萘甲酸、煙酸、油酸、乳清酸、草酸、棕櫚酸、帕莫酸、丙酸、焦谷氨酸、丙酮酸、水楊酸、4-氨基水楊酸、癸二酸、硬脂酸、丁二酸、酒石酸、硫氰酸、對甲苯磺酸、三氟乙酸、十一烯酸等。

術(shù)語“藥學(xué)上可接受的堿加成鹽”是指保留游離酸的生物效用和性質(zhì)(不會(huì)在生物學(xué)上或以其它方式不合需要)的那些鹽。通過將無機(jī)堿或有機(jī)堿添加到游離酸中來制備這些鹽。衍生自無機(jī)堿的鹽包括但不限于鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、錳、鋁鹽等。優(yōu)選的無機(jī)鹽是銨鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽和鎂鹽。衍生自有機(jī)堿的鹽包括但不限于以下鹽：伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺包括天然存在的取代胺、環(huán)胺和堿離子交換樹脂如氨、異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、二乙醇胺、乙醇胺、丹醇、2-二甲胺基乙醇、2-二乙胺基乙醇、二環(huán)己胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、普魯卡因、海卓胺、膽堿、甜菜堿、芐苯乙胺、本乍生、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡萄糖胺、可可豆堿、三乙醇胺、氨丁三醇、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、多胺樹脂等。特別優(yōu)選的有機(jī)堿是異丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二環(huán)己胺、膽堿和咖啡因。

通常結(jié)晶會(huì)產(chǎn)生姜黃根醇化合物的溶劑合物。如本文中所用，術(shù)語“溶劑合物”是指包含一個(gè)或多個(gè)姜黃根醇化合物分子與一個(gè)或多個(gè)溶劑分子的聚集體。溶劑可為水，在這種情況下溶劑合物可為水合物?；蛘撸軇┛蔀橛袡C(jī)溶劑。因此，姜黃根醇化合物可以作為水合物存在，包括單水合物、二水合物、半水化合物、倍半水合物、三水合物、四水合物等，以及相應(yīng)溶劑化形式。在一些情況下，姜黃根醇化合物可為真溶劑合物，而在其它情況下，化合物僅可保留偶生水或?yàn)樗由弦恍┡忌軇┑幕旌衔铩?/p>

“藥物組合物”是指姜黃根醇化合物和在本領(lǐng)域中公認(rèn)用于向哺乳動(dòng)物例如人遞送生物學(xué)上活性化合物的介質(zhì)的制劑。這種介質(zhì)因此包括所有藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。

姜黃根醇化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可以含有一個(gè)或多個(gè)不對稱中心，因此可以產(chǎn)生對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體和其它立體異構(gòu)形式，其就絕對立體化學(xué)來說可以針對氨基酸而定義為(R)-或(S)-，或者(D)-或(L)-。本發(fā)明意在包括所有這些可能的異構(gòu)體，以及其外消旋形式和光學(xué)純形式。光學(xué)活性(+)和(-)、(R)-和(S)-，或者(D)-和(L)-異構(gòu)體可以使用手性合成子或者手性試劑來制備，或者使用常規(guī)技術(shù)如色譜和分段結(jié)晶來拆分。用于制備/分離個(gè)別對映異構(gòu)體的常規(guī)技術(shù)包括從合適的光學(xué)純前體進(jìn)行手性合成，或者使用例如手性高壓液相層析(HPLC)來拆分外消旋體(或者鹽或衍生物的外消旋體)。當(dāng)本文所述的化合物含有烯系雙鍵或其它幾何不對稱中心時(shí)，并且除非另外規(guī)定，否則旨在使化合物包括E與Z幾何異構(gòu)體。同樣地，還旨在包括姜黃根醇的互變異構(gòu)體形式。

“前藥”意在表示可以在生理?xiàng)l件下或通過溶劑分解轉(zhuǎn)化成生物學(xué)上活性化合物的姜黃根醇化合物。因此，術(shù)語“前藥”是指藥學(xué)上可接受的姜黃根醇代謝前體。當(dāng)向有需要的受試者施用時(shí)前藥可能無活性，但是會(huì)體內(nèi)轉(zhuǎn)化成活性化合物。前藥典型地進(jìn)行快速體內(nèi)轉(zhuǎn)型以得到母體化合物，例如通過在血液中水解來實(shí)現(xiàn)。前藥化合物通常在哺乳動(dòng)物生物體中提供溶解度、組織相容性或延遲釋放的優(yōu)勢(參見Bundgard,H.,《前藥設(shè)計(jì)(Design of Prodrugs)》(1985),第7-9、21-24頁(Elsevier,Amsterdam))。在Higuchi,T.等,《A.C.S.專題研討會(huì)文集》,第14卷中并且在《藥物設(shè)計(jì)中的生物可逆性載體(Bioreversible Carriers in Drug Design)》,Edward B.Roche編,American Pharmaceutical Association and Pergamon Press,1987中提供了對前藥的討論。

術(shù)語“前藥”還意在包括任何共價(jià)結(jié)合的載體，當(dāng)向哺乳動(dòng)物受試者施用這種前藥時(shí)，所述載體會(huì)體內(nèi)釋放活性化合物?？梢匀缦轮苽浣S根醇前藥：以修飾會(huì)在常規(guī)操縱中或在體內(nèi)裂解成母體化合物的方式修飾化合物中存在的官能團(tuán)。前藥包括姜黃根醇化合物，其中羥基、氨基或巰基鍵結(jié)于當(dāng)向哺乳動(dòng)物受試者施用前藥時(shí)，會(huì)裂解以分別形成游離羥基、游離氨基或游離巰基的任何基團(tuán)。前藥的實(shí)例包括但不限于姜黃根醇中胺官能團(tuán)的醇或酰胺衍生物的乙酸鹽、甲酸鹽和苯甲酸鹽衍生物，等。

還包括姜黃根醇化合物的體內(nèi)代謝產(chǎn)物。這些產(chǎn)物可以由所施用化合物的例如氧化、還原、水解、酰氨化、酯化等、主要因酶促過程而產(chǎn)生。因此，本發(fā)明包括通過包括以下的過程所產(chǎn)生的姜黃根醇化合物：向哺乳動(dòng)物施用本發(fā)明的化合物，持續(xù)足以得到其代謝產(chǎn)物的一段時(shí)間。典型地如下鑒別這些產(chǎn)物：向動(dòng)物如大鼠、小鼠、豚鼠、猴或向人施用可檢測劑量的放射性同位素標(biāo)記的化合物，留出足夠的時(shí)間來進(jìn)行代謝，并且從尿液、血液或其它生物樣本中分離其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。

可以具體定義組合物中任何給定姜黃根醇化合物或姜黃根醇化合物混合物的“純度”。例如，如通過高壓液相層析(HPLC)測量，某些組合物可以包含至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％(包括其間的所有小數(shù))純的姜黃根醇化合物。

“穩(wěn)定化合物”和“穩(wěn)定結(jié)構(gòu)”意在表示足夠穩(wěn)健以在以下操作后仍存在的化合物：從反應(yīng)混合物分離到適用純度，以及配制成有效治療試劑。

“在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著”意指所述結(jié)果不可能已經(jīng)碰巧發(fā)生。統(tǒng)計(jì)顯著性可由本領(lǐng)域中已知的任何方法來測定。常用顯著性測量項(xiàng)包括p值，其為虛無假設(shè)是真的時(shí)所觀測到的事件將發(fā)生的頻率或概率。如果所得p值小于顯著性水平，那么駁回所述虛無假設(shè)。在簡單的情況下，在0.05或更小的p值下定義顯著性水平。

如本文中所用的“受試者”包括任何顯示癥狀或處于顯示癥狀的風(fēng)險(xiǎn)中的動(dòng)物，其可用本文所述的組合物進(jìn)行治療或診斷。合適的受試者(患者)包括實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(如小鼠、大鼠、兔或豚鼠)、農(nóng)畜和家畜或?qū)櫸?如貓或狗)。包括哺乳動(dòng)物，其包括非人靈長類動(dòng)物，以及優(yōu)選地，人患者。

“大致上”或“基本上”意指幾乎全部或完全，例如某給定量的95％、96％、97％、98％、99％或更大。

“大致上沒有”是指幾乎完全或者完全不存在給定量，例如小于某給定量的約10％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或更少。例如，某些組合物可以“大致上沒有”細(xì)胞蛋白、膜、核酸、內(nèi)毒素或其它污染物。

“立體異構(gòu)體”是指由相同鍵所鍵結(jié)的相同原子組成，但是具有不可互變的不同三維結(jié)構(gòu)的化合物。本發(fā)明涵蓋各種立體異構(gòu)體和其混合物，并且包括“對映異構(gòu)體”，這是指兩種立體異構(gòu)體，其分子彼此是不可重疊的鏡像。

“互變異構(gòu)體”是指質(zhì)子從分子的一個(gè)原子移到同一分子的另一原子上。本發(fā)明包括任何所述化合物的互變異構(gòu)體。

“治療有效劑量”或“有效量”包括當(dāng)向哺乳動(dòng)物優(yōu)選人施用時(shí)足以增加MHC-I在一種或多種細(xì)胞中的表面表達(dá)和/或足以治療任何一種或多種本文所述的其它病狀的姜黃根醇化合物的量。構(gòu)成“治療有效劑量”的姜黃根醇化合物的量將根據(jù)化合物、病狀和其嚴(yán)重度、施用方式以及待治療哺乳動(dòng)物的年齡而變化，但是可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在考慮其自身知識和本公開后常規(guī)地確定。

如本文中所用的“治療”包括對疾病或病狀的癥狀或病理任何所需的效果，并且可以包括所治療的疾病或病狀的一種或多種可測量標(biāo)記的甚至最小的變化或改進(jìn)?！爸委煛蔽幢乇硎就耆蛑斡黾膊』虿罨蚱湎嚓P(guān)癥狀。接受這種治療的受試者是任何有需要的受試者。臨床改進(jìn)的示例性標(biāo)記將對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見。

方法和藥物組合物

本文所述的方法和組合物利用或包含一種或多種姜黃根醇化合物?！敖S根醇化合物”的實(shí)例包括姜黃根醇和其對映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體和其它立體異構(gòu)形式、外消旋體、互變異構(gòu)體、代謝物，以及可增加細(xì)胞中MHC-I表面表達(dá)的前藥。還包括前述物質(zhì)的藥學(xué)上可接受的鹽，包括酸加成鹽和堿加成鹽。

姜黃根醇是從屬于Didiscus屬的不同海綿分離的倍半萜類酚(參見El Sayed等,J Nat Prod.65:1547-53,2002,其以引用的方式整體并入)。其還稱為酚,2-(1,5-二甲基-4-己烯基)-5-甲基-,(S)-；酚,2-[(1S)-1,5-二甲基-4-己烯基]-5-甲基-(9CI)；(+)-姜黃根醇；(S)-(+)-姜黃根醇；和(S)-姜黃根醇。

在某些實(shí)施方案中，姜黃根醇化合物具有下式(I-A)：

在一些實(shí)施方案中，姜黃根醇化合物具有下式(I-B)：

在一些實(shí)施方案中，姜黃根醇化合物具有下式(II)，還稱為PC-02-113：

在一些實(shí)施方案中，姜黃根醇化合物具有下式(III)，還稱為PC-02-113：

在一些實(shí)施方案中，姜黃根醇化合物具有下式(IV)，還稱為PC-02-116：

在一些實(shí)施方案中，姜黃根醇化合物具有下式(V)，還稱為PC-02-123：

特異性實(shí)施方案采用(S)-(+)-姜黃根醇或其類似物。例如，某些實(shí)施方案包括以下一種或多種：(S)-(+)-15-羥基姜黃根醇、(S)-(+)-12-羥基姜黃根醇、(S)-(+)-12,15-二羥基姜黃根醇、(S)-(+)-15-羥基姜黃根醇-12-al、(S)-(+)-12-羧基-10,11-二氫姜黃根醇、(S)-(+)-12-羥基-10,11-二氫姜黃根醇、(S)-(+)-4-[1-(2-羥基-4-甲基)苯基)]戊酸(11)、(S)-姜黃根醇-1α-D-葡萄哌喃糖苷、(S)-(+)-4-硝基姜黃根醇(14)、(S)-(+)-2-硝基姜黃根醇、(S)-(+)-姜黃根醇-1-O-異煙堿酸鹽(參見El Sayed等,2002,前述)。圖1示出了(S)-(+)-姜黃根醇和各種其它姜黃根醇化合物的式子。圖2A-2B示出了通過使姜黃根醇與各種羧酸偶聯(lián)所制得的姜黃根醇化合物的式子。姜黃根醇化合物的其它實(shí)例例如描述于Gul等,Biochim Biophys Acta.1770:1513-1519,2007；Ono等,Chem.Pharm.Bull.49:1581-1585,2001；以及Plano等,Chem Biodivers.8:1098-1111,2011中，所述文獻(xiàn)以引用的方式整體并入。圖10示出了示例性姜黃根醇化合物(包括姜黃根醇和其類似物)的式子。某些實(shí)施方案可以采用任何本文所述的姜黃根醇化合物的混合物。

在一些實(shí)施方案中，姜黃根醇化合物是化學(xué)合成的。各種姜黃根醇化合物的合成描述于例如El Sayed等,2002,前述；Gul等,2007,前述；Ono等,2001,前述；以及Plano等,2011,前述中。

在某些實(shí)施方案中，姜黃根醇化合物獲自海綿提取物或陸生植物提取物，所述提取物例如為Didiscus、Myrmekioderma、Epipolapsis、Pseudopterogorgia、Elvira或Laisanthaea屬。這些海綿和陸生植物的示例性物種包括Didiscus oxeata、Myrmekioderma styx、Pseudopterogorgia rigida、Elvira biflora和Laisanthaea podocephala。某些方面因此包括施用包含一種或多種姜黃根醇化合物的海綿或陸生植物提取物。在一些情況下，提取物中姜黃根醇化合物的純度為約或至少約50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。

某些實(shí)施方案采用姜黃根醇化合物或包含其的組合物以增加細(xì)胞中的MHC-I表達(dá)，并從而提高細(xì)胞的免疫原性，也即免疫系統(tǒng)(例如經(jīng)由與CTL相互作用)靶向細(xì)胞以進(jìn)行破壞的能力。一些實(shí)施方案因此涉及增加I類主要組織相容性復(fù)合體(MHC-I)在細(xì)胞中的表面表達(dá)的方法，其包括使細(xì)胞與一種或多種姜黃根醇化合物或包含其的組合物接觸。在一些方面，相對于未經(jīng)過處理的對照細(xì)胞，MHC-I表面表達(dá)增加約或至少約10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％或1000％或更多。

在一些方面，姜黃根醇化合物通過增加與抗原加工1相關(guān)的輸送體(TAP-1)，即MHC-I抗原呈現(xiàn)通路的輸送蛋白的表達(dá)來增加MHC-I表面表達(dá)。因此，在某些方面，相對于未經(jīng)過處理的對照細(xì)胞，TAP-1表達(dá)增加約或至少約10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％或1000％或更多。

在某些方面，細(xì)胞是特征在于相對于相同細(xì)胞類型的非患病或另外正?；蚪】档募?xì)胞，MHC-I表面表達(dá)(在其未經(jīng)過處理的狀態(tài))減少的(患病)細(xì)胞。在一些方面，在患病細(xì)胞中MHC-I表面表達(dá)減少與TAP-1表達(dá)減少相關(guān)或由TAP-1表達(dá)減少引起。因此，在一些方面，細(xì)胞是特征在于相對于相同細(xì)胞類型的非患病或另外正常或健康的細(xì)胞，TAP-1表達(dá)(在其未經(jīng)過處理的狀態(tài))減少的(患病)細(xì)胞。

在一些方面，在與一種或多種姜黃根醇化合物接觸之后，經(jīng)過處理的細(xì)胞中的MHC-I表面表達(dá)和/或TAP-1表達(dá)提高到與相同細(xì)胞類型的另外正常或健康細(xì)胞的MHC-I表面表達(dá)和/或TAP-1表達(dá)相當(dāng)?shù)乃健＠?，在這些方面和相關(guān)方面，MHC-I表面表達(dá)和/或TAP-1表達(dá)可提高到相同細(xì)胞類型的另外正常或健康細(xì)胞的MHC-I表面表達(dá)水平的約50％、40％、30％、20％、10％或5％或在其約50％、40％、30％、20％、10％或5％內(nèi)。

在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞是癌細(xì)胞或癌性細(xì)胞。在特定實(shí)施方案中，癌細(xì)胞是轉(zhuǎn)移性或侵襲性癌細(xì)胞。癌細(xì)胞的實(shí)例包括乳癌細(xì)胞、宮頸癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、胃腸癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、睪丸癌細(xì)胞、頭頸癌細(xì)胞、膀胱癌細(xì)胞、腎癌細(xì)胞(例如腎細(xì)胞癌)、鱗狀細(xì)胞癌瘤、CNS或腦癌細(xì)胞、黑素瘤細(xì)胞、非黑素瘤癌細(xì)胞、甲狀腺癌細(xì)胞、子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞、上皮細(xì)胞瘤細(xì)胞、骨癌細(xì)胞或造血系癌細(xì)胞。

原發(fā)性骨癌細(xì)胞的實(shí)例包括骨肉瘤、軟骨肉瘤和尤文氏肉瘤家族腫瘤(ESFT)的細(xì)胞。胃腸癌細(xì)胞的實(shí)例包括食道癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、膽囊(膽管)癌細(xì)胞、小腸癌細(xì)胞、結(jié)直腸癌細(xì)胞、肛門或直腸癌細(xì)胞和胃腸道類癌或間質(zhì)腫瘤。

肺癌細(xì)胞的實(shí)例包括腺癌、鱗狀細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌和大細(xì)胞肺癌。

CNS或腦癌細(xì)胞的具體實(shí)例包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦脊髓膜瘤、垂體腺瘤、前庭神經(jīng)鞘瘤、原發(fā)性CNS淋巴瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤和原始神經(jīng)外胚層瘤(成神經(jīng)管細(xì)胞瘤)。在一些實(shí)施方案中，神經(jīng)膠質(zhì)瘤是星形細(xì)胞瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、室管膜瘤或脈絡(luò)叢乳頭狀瘤。在一些方面，腦癌細(xì)胞是多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤。在一些實(shí)施方案中，多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是巨細(xì)胞膠質(zhì)母細(xì)胞瘤或膠質(zhì)肉瘤。在特定實(shí)施方案中，癌細(xì)胞是CNS的轉(zhuǎn)移性癌癥，例如已經(jīng)轉(zhuǎn)移到腦部的癌細(xì)胞。這些癌細(xì)胞的實(shí)例包括不限于轉(zhuǎn)移性乳癌細(xì)胞、轉(zhuǎn)移性肺癌細(xì)胞、轉(zhuǎn)移性泌尿生殖道癌細(xì)胞、轉(zhuǎn)移性胃腸道癌細(xì)胞(例如結(jié)直腸癌細(xì)胞、胰腺癌)、骨肉瘤、黑素瘤、轉(zhuǎn)移性頭頸癌細(xì)胞、轉(zhuǎn)移性前列腺癌細(xì)胞(例如前列腺癌)，以及轉(zhuǎn)移性淋巴瘤。

黑素瘤細(xì)胞的實(shí)例包括源于以下的那些：惡性小痣、惡性小痣黑素瘤、淺表性彌散型黑素瘤、肢端雀斑樣痣黑素瘤、粘膜黑素瘤、結(jié)節(jié)性黑素瘤、息肉樣黑素瘤、促結(jié)締組織增生性黑素瘤、無黑色素性黑素瘤、軟組織黑素瘤和葡萄膜黑素瘤。

造血系癌細(xì)胞的實(shí)例包括淋巴瘤細(xì)胞、白血病細(xì)胞和多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞。在一些情況下，淋巴瘤細(xì)胞為T細(xì)胞淋巴瘤、B細(xì)胞淋巴瘤、小淋巴細(xì)胞淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤、多形性大細(xì)胞淋巴瘤(ALCL)、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤。在具體情況下，白血病細(xì)胞為慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)、毛細(xì)胞白血病、急性淋巴母細(xì)胞性白血病、骨髓性白血癥、急性骨髓或骨髓性白血病，或者慢性骨髓性白血病。

在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞在體外，例如在組織培養(yǎng)物中。在本領(lǐng)域中熟知培養(yǎng)細(xì)胞(包括癌細(xì)胞或轉(zhuǎn)型細(xì)胞)的方法(參見例如《動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)(Animal Cell Culture)》(R.Freshney編,1986)；Freshney,R.I.(2005)《動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：基礎(chǔ)技術(shù)手冊(Culture of Animal Cells,a Manual of Basic Technique)》,第5版.Hoboken NJ,John Wiley&Sons)。

在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞在受試者體內(nèi)，并且所述方法包括向所述受試者施用姜黃根醇化合物或相關(guān)組合物。為了施用目的，姜黃根醇化合物可以作為原料化學(xué)品向患者或受試者施用或者可以配制成藥物組合物。藥物組合物通常包含姜黃根醇化合物和藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。姜黃根醇化合物典型地以有效治療如本文所述的具體的相關(guān)疾病或病狀并且優(yōu)選地對受試者有可接受的毒性的量存在于組合物中。化合物活性可由本領(lǐng)域技術(shù)人員測定，例如在下文實(shí)施例中所述。適當(dāng)濃度和劑量可由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地確定。

姜黃根醇化合物或相關(guān)組合物可以用于治療受試者的基本上任何受益于MHC-I分子表面表達(dá)增加的疾病或其它病狀的方法中。在特定實(shí)施方案中，受試者患有癌癥，并且所述方法包括通過向所述受試者施用一種或多種姜黃根醇化合物來治療癌癥。如圖5中所圖解，TAP-1在癌細(xì)胞系以及以手術(shù)方式去除的腫瘤細(xì)胞中頻繁下調(diào)。不希望受任一種理論束縛，據(jù)信TAP-1下調(diào)與MHC-I表面表達(dá)減少和因此癌細(xì)胞的CTL介導(dǎo)性殺死減少相關(guān)。例如經(jīng)由恢復(fù)TAP-1表達(dá)來恢復(fù)MHC-I已經(jīng)顯示會(huì)增加體外癌細(xì)胞的CTL介導(dǎo)性殺死以及對體內(nèi)腫瘤生長的抑制(參見例如Zhang等,2007；Lou等,2007；Lou等,2005；Alimonti等,2000)。

因此，在一些方面，癌癥的特征在于相對于相同細(xì)胞類型的非癌性細(xì)胞，癌細(xì)胞具有減少的MHC-I表面表達(dá)(在未經(jīng)過處理的狀態(tài))以及任選地減少的TAP-1表達(dá)(在未經(jīng)過處理的狀態(tài))。在具體的方面，癌癥的特征在于癌細(xì)胞的MHC-I表面表達(dá)和任選地TAP-1表達(dá)水平為相同細(xì)胞類型的非癌性細(xì)胞的約或小于約80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、5％。

在一些方面，受試者患有轉(zhuǎn)移性或侵襲性癌癥或者處于所述癌癥的風(fēng)險(xiǎn)中。如圖6中所圖解，TAP-1下調(diào)與疾病進(jìn)展和轉(zhuǎn)移強(qiáng)相關(guān)。因此，在一些方面，轉(zhuǎn)移性癌癥的特征在于相對于相同細(xì)胞類型的非癌性細(xì)胞，或者相對于相同細(xì)胞類型的非轉(zhuǎn)移性癌性，癌細(xì)胞具有減少的MHC-I表面表達(dá)(在未經(jīng)過處理的狀態(tài))以及任選地減少的TAP-1表達(dá)(在未經(jīng)過處理的狀態(tài))。在具體的方面，癌癥的特征在于轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞的MHC-I表面表達(dá)和任選地TAP-1表達(dá)水平為相同細(xì)胞類型的非癌性細(xì)胞或相同細(xì)胞類型的非轉(zhuǎn)移性癌性的約或小于約80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、5％。

在一些方面，相對于對照細(xì)胞或?qū)φ占?xì)胞群體，施用姜黃根醇化合物會(huì)在約或至少約10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的癌細(xì)胞中使MHC-I表面表達(dá)以及任選地TAP-1表達(dá)增加約或至少約10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％、150％、200％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％或1000％或更多。在一些情況下，對照細(xì)胞來自未經(jīng)過處理的狀態(tài)，例如在任何治療之前，或來自一種或多種先前經(jīng)過處理的狀態(tài)，例如在一系列施用或治療之后。

在一些情況下，施用姜黃根醇化合物會(huì)在約或至少約10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的癌細(xì)胞中使MHC-I表面表達(dá)以及任選地TAP-1表達(dá)增加到與參考標(biāo)準(zhǔn)相當(dāng)(如參考標(biāo)準(zhǔn)的約50％、40％、30％、20％、10％或5％或在其約50％、40％、30％、20％、10％或5％內(nèi))的水平，所述參考標(biāo)準(zhǔn)例如為來自健康(非癌性)個(gè)體的相同類型細(xì)胞中的平均MHC-I表面表達(dá)或TAP-1表達(dá)的參考標(biāo)準(zhǔn)。

在一些實(shí)施方案中，增加的MHC-I表面表達(dá)以及任選地增加的TAP-1表達(dá)提高了癌細(xì)胞的免疫原性，并從而提高了對癌細(xì)胞的免疫反應(yīng)。在一些情況下，免疫反應(yīng)為細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)介導(dǎo)性免疫反應(yīng)，并且可包括例如CTL活化、克隆擴(kuò)增以及CTL效應(yīng)功能提高。CTL效應(yīng)功能的實(shí)例包括釋放細(xì)胞毒素穿孔素、顆粒酶和顆粒溶素，以及CTL表面蛋白FAS配體(FasL)的表達(dá)增加。在一些情況下，癌細(xì)胞中增加的MHC-I表面表達(dá)以及任選地增加的TAP-1表達(dá)會(huì)提高對癌細(xì)胞的CTL介導(dǎo)性破壞。對于實(shí)體瘤，相對于未經(jīng)過處理的狀態(tài)或先前經(jīng)過處理的狀態(tài)，施用一種或多種姜黃根醇化合物可減少腫瘤擴(kuò)大或減小腫瘤大小，例如減小約或至少約10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。

在一些實(shí)施方案中，受試者患有選自以下一種或多種的癌癥：乳癌、宮頸癌、前列腺癌、胃腸癌、肺癌、卵巢癌、睪丸癌、頭頸癌、膀胱癌、腎癌(例如腎細(xì)胞癌)、軟組織肉瘤、鱗狀細(xì)胞癌瘤、CNS或腦癌、黑素瘤、非黑素瘤癌癥、甲狀腺癌、子宮內(nèi)膜癌、上皮細(xì)胞瘤、骨癌或造血系癌癥。

肺癌的實(shí)例包括腺癌、鱗狀細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌和大細(xì)胞肺癌。

原發(fā)性骨癌的實(shí)例包括骨肉瘤、軟骨肉瘤和尤文氏肉瘤家族腫瘤(ESFT)。

胃腸癌的實(shí)例包括食道癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、膽囊(膽管)癌、小腸癌、結(jié)直腸癌、肛門或直腸癌以及胃腸道類癌或間質(zhì)腫瘤。

CNS或腦癌的實(shí)例包括原發(fā)性腦癌以及轉(zhuǎn)移性腦癌。腦癌的具體實(shí)例包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦脊髓膜瘤、垂體腺瘤、前庭神經(jīng)鞘瘤、原發(fā)性CNS淋巴瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤和原始神經(jīng)外胚層瘤(成神經(jīng)管細(xì)胞瘤)。在一些實(shí)施方案中，神經(jīng)膠質(zhì)瘤為星形細(xì)胞瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、室管膜瘤或脈絡(luò)叢乳頭狀瘤。在一些方面，受試者患有多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤。在特定方面，多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是巨細(xì)胞膠質(zhì)母細(xì)胞瘤或膠質(zhì)肉瘤。在特定實(shí)施方案中，癌細(xì)胞是CNS的轉(zhuǎn)移性癌癥，例如已經(jīng)轉(zhuǎn)移到腦部的癌癥。這些癌癥的實(shí)例包括不限于乳癌、肺癌、泌尿生殖道癌、胃腸道癌(例如結(jié)直腸癌、胰腺癌)、骨肉瘤、黑素瘤、頭頸癌、前列腺癌(例如前列腺癌)以及淋巴瘤。

黑素瘤的實(shí)例包括惡性小痣、惡性小痣黑素瘤、淺表性彌散型黑素瘤、肢端雀斑樣痣黑素瘤、粘膜黑素瘤、結(jié)節(jié)性黑素瘤、息肉樣黑素瘤、促結(jié)締組織增生性黑素瘤、無黑色素性黑素瘤、軟組織黑素瘤和葡萄膜黑素瘤。

造血系癌癥的實(shí)例包括淋巴瘤、白血病和多發(fā)性骨髓瘤。在一些情況下，淋巴瘤為T細(xì)胞淋巴瘤、B細(xì)胞淋巴瘤、小淋巴細(xì)胞淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤、多形性大細(xì)胞淋巴瘤(ALCL)、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤。在具體情況下，白血病為慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)、毛細(xì)胞白血病、急性淋巴母細(xì)胞性白血病、骨髓性白血癥、急性骨髓或骨髓性白血病，或者慢性骨髓性白血病。

姜黃根醇化合物用于治療癌癥的用途可與其它治療劑形式組合。例如，可在其它治療性介入(包括癥狀護(hù)理、放療、手術(shù)、移植、激素療法、免疫療法、光力學(xué)療法、抗生素療法)以及施用抗癌劑(包括其任意組合)之前、期間或之后向受試者施用一種或多種姜黃根醇化合物。癥狀護(hù)理包括施用皮質(zhì)類固醇，以減輕腦水腫、頭痛、認(rèn)知功能障礙和嘔吐，以及施用抗驚厥劑，以減輕發(fā)作。放療包括全腦輻射、分次放療和放射外科手術(shù)如立體定向放射外科手術(shù)，其可進(jìn)一步與傳統(tǒng)手術(shù)組合。

抗癌劑的實(shí)例包括本領(lǐng)域中已知的小分子和治療抗體等。在某些實(shí)施方案中，小分子為細(xì)胞毒性劑或化學(xué)治療劑或抗血管生成劑。具體實(shí)例包括烷化劑、抗代謝物、蒽環(huán)霉素、抗腫瘤抗生素、鉑、I型拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、II型拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、長春花堿和紫杉烷。在某些實(shí)施方案中，小分子選自苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、西侖吉肽、洛莫司汀(CCNU)、美法侖、丙卡巴肼、噻替派、卡莫司汀(BCNU)、伊扎妥林、白消安、道諾霉素、多柔比星、吉非替尼、厄洛替尼伊達(dá)比星、替莫唑胺、表柔比星、米托蒽醌、博來霉、順鉑、卡波鉑、奧沙利鉑、喜樹堿、伊立替康、拓樸替康、安吖啶、依托泊苷、依托泊苷磷酸鹽、替尼泊苷、坦羅莫司、依維莫司、長春新堿、長春堿、長春瑞濱、長春地辛、CT52923、紫杉醇、伊馬替尼、達(dá)沙替尼、索拉非尼、帕唑帕尼、舒尼替尼、瓦塔拉尼、吉非替尼、厄洛替尼、AEE-788、二氯乙酸鹽、他莫昔芬、法舒地爾、SB-681323、司馬沙尼、多奈哌齊、加蘭他敏、美金剛、利伐斯的明、他克林、雷沙吉蘭、納曲酮、魯比前列酮、沙芬酰胺、伊曲茶堿、匹莫范色林、皮妥力散、伊拉地平、匹多皮啶(ACR16)、丁苯那嗪、蓓薩羅丁、乙酸格拉默、芬戈莫德和米托蒽醌，包括其藥學(xué)上可接受的鹽和酸。

在某些實(shí)施方案中，抗體選自以下一種或多種：3F8、8H9、阿巴伏單抗、阿德木單抗、阿福圖單抗、阿珠單抗(pegol)、阿來珠單抗、阿妥莫單抗噴替酸锝、阿瑪西單抗、麻安莫單抗麻芬諾托、阿泊珠單抗、阿西莫單抗、巴維昔單抗、貝妥莫單抗、貝利木單抗、貝伐單抗、比伐珠單抗(mertansine)、本圖希單抗維度汀、莫坎妥珠單抗(mertansine)、莫坎妥珠單抗(ravtansine)、卡羅單抗(噴地肽)、卡蘆單抗、卡妥索單抗、西妥昔單抗、西他土珠(bogatox)、西妥木單抗、瓦妥珠單抗(tetraxetan)、括那木單抗、達(dá)西珠單抗、達(dá)利珠單抗、達(dá)羅珠單抗、地莫單抗、決瑞圖單抗、依可瑪單抗、依決洛單抗、埃羅妥珠單抗、依那妥珠單抗、因圖昔單抗、依帕珠單抗、厄妥索單抗、伊瑞西珠單抗、法樂珠單抗、FBTA05、非吉妥珠單抗、弗蘭瓦妥單抗、加利昔單抗、吉妥珠單抗、蓋尼塔單抗、吉妥珠單抗(奧唑米星)、金妥昔單抗、吉瑞昔單抗(維度汀)、異貝莫單抗替坦、依庫單抗、伊戈伏單抗、英達(dá)西單抗ravtansine、因特圖單抗、伊珠單抗奧唑米星、伊匹單抗(MDX-101)、伊拉圖單抗、拉貝珠單抗、來沙木單抗、林妥珠單抗、羅妥珠單抗(mertansine)、魯卡木單抗、魯昔單抗、馬帕木單抗、馬妥珠單抗、米拉妥珠單抗、米妥莫單抗、莫噶木珠單抗、莫妥木單抗(pasudotox)、那可單抗(tafenatox)、那他莫單抗(estafenatox)、納爾那單抗、那遲妥單抗、尼莫妥珠單抗、尼沃魯單抗、(有或無放射性碘)、NR-LU-10、奧法木單抗、奧拉妥單抗、奧納珠單抗、莫奧珠單抗(monatox)、奧戈伏單抗、帕尼單抗、帕曲單抗、帕妥木單抗、帕妥珠單抗、普托木單抗、拉克托莫單抗、拉德單抗、雷莫蘆單抗、瑞羅妥單抗、利妥昔單抗、羅巴木單抗、撒馬利珠單抗、西羅珠單抗、西圖昔單抗、塔巴魯單抗、他尼珠單抗、他帕圖莫單抗(paptox)、特納圖莫單抗、替妥木單抗、TGN1412、替利木單抗、曲妥珠單抗、替西木單抗、替加珠單抗、TNX-650、托西莫單抗、TRBS07、圖克妥珠單抗(西莫白介素)、優(yōu)比妥昔單抗、優(yōu)魯單抗、維妥珠單抗、沃羅昔單抗、伏妥莫單抗和扎魯木單抗，包括其抗原結(jié)合片段。

如上所述，某些實(shí)施方案包括藥物組合物，所述藥物組合物包含如本文所述的姜黃根醇化合物和藥學(xué)上可接受的載體。這些藥物組合物還可包含一種或多種如本文所述的其它試劑，包括例如抗癌劑。

施用呈純形式或在適當(dāng)藥物組合物中的姜黃根醇化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可經(jīng)由施用提供類似效用的試劑的已接受模式中的任一種來進(jìn)行。藥物組合物可通過組合姜黃根醇化合物與適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑來制備，并且可以配制成呈固體、半固體、液體或氣態(tài)形式的制劑，如片劑、膠囊、散劑、粒劑、軟膏劑、溶液、栓劑、注射劑、吸入劑、凝膠劑、微球劑和氣霧劑。

施用這些藥物組合物的典型途徑包括不限于口服、表面、透皮、吸入、胃腸外、舌下、經(jīng)頰、經(jīng)直腸、經(jīng)陰道和鼻內(nèi)。如本文中所用的術(shù)語胃腸外包括皮下注射、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、胸骨內(nèi)注射或輸注技術(shù)。配制藥物組合物以使其中所含的活性成分在向受試者施用組合物后生物可用。將向受試者或患者施用的組合物采取一個(gè)或多個(gè)劑量單位的形式，其中例如片劑可為單次劑量單位，并且呈氣霧劑形式的本發(fā)明的化合物的容器可以容納多個(gè)劑量單位。制備這些劑型的實(shí)際方法為已知的或?qū)Ρ绢I(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見；例如參見《雷明頓：藥劑科學(xué)和實(shí)踐(Remington:The Science and Practice of Pharmacy)》第20版(Philadelphia College of Pharmacy and Science,2000)。待施用的組合物將在任何情況下都含有治療有效量的姜黃根醇化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，用于根據(jù)本文的教導(dǎo)治療相關(guān)疾病或病狀。

藥物組合物可以呈固體或液體形式。一方面，載體為微粒，以使組合物例如呈片劑或散劑形式。載體可為液體，組合物為例如口服糖漿、可注射液體或氣霧劑，其適用于例如吸入施用。

當(dāng)預(yù)期用于口服施用時(shí)，藥物組合物優(yōu)選地呈固體或液體形式，其中將半固體、半液體、混懸液和凝膠形式包括在本文中視為固體或者液體的形式內(nèi)。

作為用于口服施用的固體組合物，可以將藥物組合物配制成散劑、粒劑、壓片、丸劑、膠囊、口香糖、薄片等形式。這種固體組合物將典型地含有一種或多種惰性稀釋劑或可食用載體。另外，可以存在以下一種或多種：粘合劑如羧甲基纖維素、乙基纖維素、微晶纖維素、黃芪膠或明膠；賦形劑如淀粉、乳糖或糊精；崩解劑如海藻酸、海藻酸鈉、淀粉羥基乙酸鈉(Primogel)、玉米淀粉等；潤滑劑如硬脂酸鎂或Sterotex；助流劑如膠態(tài)二氧化硅；甜味劑如蔗糖或糖精；矯味劑如薄荷、水楊酸甲酯或橙味調(diào)味劑；和著色劑。

當(dāng)藥物組合物呈膠囊例如明膠膠囊形式時(shí)，其除上述類型的材料以外還可以含有液體載體如聚乙二醇或油。

藥物組合物可以呈液體形式，例如酏劑、糖漿、溶液、乳劑或混懸液。舉兩個(gè)實(shí)例來說，液體可以用于口服施用或注射遞送。當(dāng)預(yù)期用于口服施用時(shí)，優(yōu)選的組合物除本發(fā)明的化合物以外還含有甜味劑、防腐劑、染料/著色劑和增味劑中的一種或多種。在預(yù)期通過注射施用的組合物中，可以包括表面活性劑、防腐劑、潤濕劑、分散劑、懸浮劑、緩沖劑、穩(wěn)定劑和等滲劑中的一種或幾種。

液體藥物組合物無論為溶液、混懸液或其它類似形式都可以包括以下佐劑中的一種或多種：無菌稀釋劑如注射用水、鹽溶液優(yōu)選生理食鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)、等滲氯化鈉、不揮發(fā)性油如可以充當(dāng)溶劑或懸浮介質(zhì)的合成單酸甘油酯或二酸甘油酯、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它溶劑；抗菌劑如苯甲醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑如乙二胺四乙酸；緩沖劑如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽以及用于調(diào)節(jié)張力的試劑如氯化鈉或葡萄糖。胃腸外制劑可封裝于由玻璃或塑料制成的安瓿、可棄置注射器或多次劑量小瓶中。生理食鹽水為優(yōu)選的佐劑?？勺⑸渌幬锝M合物優(yōu)選為無菌的。

預(yù)期用于胃腸外或口服施用的液體藥物組合物應(yīng)含有一定量的姜黃根醇化合物以獲得合適劑量。

藥物組合物可以預(yù)期用于表面施用，在這種情況下載體可以適當(dāng)?shù)匕ㄈ芤?、乳劑、軟膏劑或凝膠基劑?；鶆├缈梢园ㄒ韵乱环N或多種：石油脂、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蠟、礦物油、稀釋劑如水和醇以及乳化劑和穩(wěn)定劑。增稠劑可以存在于用于表面施用的藥物組合物中。如果預(yù)期用于透皮施用，那么組合物可以包括透皮貼片或離子電滲裝置。

藥物組合物可以預(yù)期以例如將在直腸中熔化并且釋放藥物的栓劑的形式用于經(jīng)直腸施用。用于經(jīng)直腸施用的組合物可以含有油脂性基劑作為合適的無刺激性賦形劑。這些基劑包括不限于羊毛脂、可可脂和聚乙二醇。

藥物組合物可以包括修飾固體或液體劑量單位的實(shí)體形式的各種物質(zhì)。例如，組合物可以包括圍繞活性成分形成涂層外殼的物質(zhì)。形成涂層外殼的物質(zhì)典型地具有惰性，并且可以選自例如糖、蟲膠和其它腸溶涂布劑?；蛘?，活性成分可以包裹在明膠膠囊中。

呈固體或液體形式的藥物組合物可以包括結(jié)合于本發(fā)明的化合物并從而幫助遞送化合物的試劑。可以在這種能力中起作用的合適試劑包括單克隆抗體或多克隆抗體、蛋白質(zhì)或脂質(zhì)體。

藥物組合物可以由可作為氣霧劑施用的劑量單位組成。使用術(shù)語氣霧劑來表示在以下范圍內(nèi)的多種系統(tǒng)：從具有膠體本質(zhì)的系統(tǒng)到由加壓包裝組成的系統(tǒng)。遞送可以通過液化或壓縮氣體或通過分配活性成分的合適泵系統(tǒng)來進(jìn)行。本發(fā)明的化合物的氣霧劑可以在單相、雙相或三相系統(tǒng)中遞送以遞送活性成分。氣霧劑的遞送包括必需的容器、啟動(dòng)器、閥門、子容器等，其在一起可以形成試紙盒。本領(lǐng)域技術(shù)人員在無不當(dāng)實(shí)驗(yàn)的情況下可以確定優(yōu)選的氣霧劑。

藥物組合物可以通過藥物領(lǐng)域所熟知的方法來制備。例如，預(yù)期通過注射施用的藥物組合物可通過組合本發(fā)明的化合物與無菌蒸餾水以形成溶液來制備?？梢蕴砑颖砻婊钚詣┮杂兄谛纬删鶆蛉芤夯蚧鞈乙骸１砻婊钚詣榕c本發(fā)明的化合物非共價(jià)相互作用以有助于化合物溶解或均勻懸浮于含水遞送系統(tǒng)中的化合物。

以治療有效劑量施用姜黃根醇化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，所述治療有效劑量將根據(jù)多種因素而變，包括所用特定化合物的活性；化合物的代謝穩(wěn)定性和作用時(shí)長；患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別和膳食；施用模式和時(shí)間；排泄速率；藥物組合；具體病癥或病狀的嚴(yán)重度；以及經(jīng)歷療法的受試者。

在某些實(shí)施方案中，姜黃根醇化合物的典型劑量可以在每天約0.2mg與每天約2g之間或在每天約1mg與約1g之間，或在約5mg與約500mg之間，或在每天約10mg與約250mg之間，向需要治療的受試者施用。

本文所述的化合物和組合物的施用頻率可以在一天一次(QD)至一天兩次(BID)或一天三次(TID)等變化，精確的施用頻率隨例如患者的狀況、劑量等而變。

姜黃根醇化合物也可以與施用一種或多種其它治療劑或生物活性劑、膳食補(bǔ)充劑或其任意組合同時(shí)、在其之前或在其之后施用。這些組合療法包括施用含有姜黃根醇化合物和一種或多種其它活性劑的單次藥物劑量制劑，以及施用呈自身獨(dú)立藥物劑量制劑的姜黃根醇化合物和每一活性劑。例如，姜黃根醇化合物和其它活性劑可呈單次劑量組合物一起向受試者施用，或者每一試劑以獨(dú)立劑量組合物施用。當(dāng)使用獨(dú)立劑量組合物時(shí)，姜黃根醇化合物和一種或多種其它活性劑可基本上在相同時(shí)間施用，即同時(shí)或在獨(dú)立參差的時(shí)間即依次施用；將組合療法理解為包括所有這些方案。

應(yīng)了解，在本說明書中，只有當(dāng)這些貢獻(xiàn)得到穩(wěn)定或合理地穩(wěn)定的化合物時(shí)才可允許所描繪的式子的取代基和/或變量的組合。

本領(lǐng)域技術(shù)人員還將了解，在本文所述的方法中，中間化合物的官能團(tuán)可能需要由合適的保護(hù)基進(jìn)行保護(hù)。這些官能團(tuán)包括羥基、氨基、巰基和羧酸。適用于羥基的保護(hù)基包括三烷基硅烷基或二芳基烷基硅烷基(如叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或三甲基硅烷基)、四氫哌喃基、苯甲基等。適用于氨基、甲脒基和胍基的保護(hù)基包括叔丁氧羰基、苯甲氧基羰基等。適用于巰基的保護(hù)基包括-C(O)-R"(其中R"是烷基、芳基或芳基烷基)、對甲氧基苯甲基、三苯甲基等。適用于羧酸的保護(hù)基包括烷基、芳基或芳基烷基酯?？梢愿鶕?jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知并且如本文所述的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)添加或去除保護(hù)基。保護(hù)基的用途詳述于Green,T.W.和P.G.M.Wutz,《有機(jī)合成中的保護(hù)基(Protective Groups in Organic Synthesis)》(1999),第3版,Wiley中。如本領(lǐng)域技術(shù)人員將了解，保護(hù)基也可以為聚合物樹脂如Wang樹脂、Rink樹脂或2-氯三苯甲基氯樹脂。

本領(lǐng)域技術(shù)人員還將了解，雖然姜黃根醇化合物的這些受保護(hù)衍生物可能本身不具有藥理活性，但是其可以向哺乳動(dòng)物施用并且此后在體內(nèi)代謝形成具有藥理活性的本發(fā)明的化合物。因此可以將這些衍生物描述成“前藥”。本發(fā)明的化合物的所有前藥都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

此外，以游離堿或游離酸形式存在的姜黃根醇化合物可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法用適當(dāng)?shù)臒o機(jī)或有機(jī)堿或酸進(jìn)行處理而轉(zhuǎn)化成其藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明的化合物的鹽可通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)轉(zhuǎn)化成其游離堿或游離酸形式。

實(shí)施例

實(shí)施例1

含姜黃根醇的提取物誘導(dǎo)TAP-1啟動(dòng)子表達(dá)和MHC-I表面表達(dá)

進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以鑒別誘導(dǎo)LMD:TAP報(bào)導(dǎo)細(xì)胞中的TAP-1啟動(dòng)子表達(dá)和MHC-I表面表達(dá)的海綿提取物。從轉(zhuǎn)移性TAP-1和I類MHC缺陷型鼠前列腺癌細(xì)胞獲得LMD:TAP報(bào)導(dǎo)細(xì)胞，并且修飾以含有在TAP-1啟動(dòng)子控制下表達(dá)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)的載體。

使LMD:TAP報(bào)導(dǎo)細(xì)胞暴露于海綿提取物。使用流式細(xì)胞術(shù)以測量TAP-1啟動(dòng)子的表達(dá)(EGFP表達(dá))以及MHC-I細(xì)胞表面水平(MAb染色)。如圖7A和7B中所示，提取物1增加了MHC-I的表面表達(dá)(7A)以及TAP-1啟動(dòng)子的表達(dá)(7B，如由EGFP表示)。如圖8A和8B中所示，提取物3增加了MHC-I的表面表達(dá)(8A)以及TAP-1啟動(dòng)子的表達(dá)(8B，如由EGFP表示)。如圖9A和9B中所示，提取物5還增加了MHC-I的表面表達(dá)(9A)以及在TAP-1啟動(dòng)子的表達(dá)(9B，如由EGFP表示)。對于提取物2顯示類似的結(jié)果。

將提取物1-3和5進(jìn)一步分級分離成純化的提取物，并且通過連續(xù)稀釋來測試以鑒別具有最高活性百分比和最低毒性的化合物和濃度。鑒別為分離份1A-b(0.018mg/mL)的相對純的提取物顯示明顯的增加TAP-1啟動(dòng)子活性與MHC-I表達(dá)的能力(相對于IFN-γ陽性對照物具有110％的活性；活性％＝x-μn/μp-μn，其中x是平均GFP熒光強(qiáng)度，并且μn和μp表示DMSO陰性對照物與IFN-γ陽性對照物的平均值)和最小的毒性(細(xì)胞數(shù)目在陰性DMSO對照物的平均細(xì)胞數(shù)目減去3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差以下最多20％)。將這種萃取物中的活性化合物鑒別為姜黃根醇。

實(shí)施例2

姜黃根醇和類似物誘導(dǎo)肺腫瘤細(xì)胞中的MHC-I表達(dá)

合成姜黃根醇和四種姜黃根醇類似物(參見圖10)并且測試其增加TC1/A9鼠肺腫瘤細(xì)胞中MHC-I表達(dá)的能力。毒性也通過碘化丙啶(PI)排斥來測量。

結(jié)果示于圖11A和11B中。圖11A示出了姜黃根醇和類似物PC-02/113具有最好的活性，這通過相對于對照物明顯增加MHC-I表達(dá)來證明。圖11B示出了這些化合物也具有可接受的毒性水平，其中PC-02/113示出了活性與毒性的最好組合。

實(shí)施例3

在小鼠腫瘤模型中測試姜黃根醇化合物

選擇化合物PC-02-113以在動(dòng)物研究中進(jìn)行進(jìn)一步測試。測試這種化合物在小鼠中的最大可耐受劑量(MTD)。如下表E1中所示施用單一腹膜內(nèi)(IP)劑量，接著臨床觀測14天。

還測試了這種化合物在被注射A9腫瘤細(xì)胞的小鼠中的抗腫瘤效果，如下表E2中所示。

通過腹膜內(nèi)(IP)注射來施用姜黃根醇化合物1周3次(M、W、F)，持續(xù)4周。腫瘤1周測量3次：收集4只小鼠/組的腫瘤以進(jìn)行免疫組織化學(xué)(IHC)分析，并且收集其它4只小鼠/組的腫瘤以進(jìn)行腫瘤浸潤性淋巴細(xì)胞(TIL)分析。從小鼠收集淋巴結(jié)、肝臟、腦、腎上腺、脾臟和血液，并且在研究結(jié)束時(shí)進(jìn)行分析。