本發(fā)明涉及天然藥物領(lǐng)域，涉及一種異喹啉生物堿的治療或預(yù)防高血脂癥和非酒精性脂肪肝的用途，具體涉及黃柏堿的治療或預(yù)防高血脂癥和非酒精性脂肪肝的用途。

背景技術(shù)：

糖尿病是一種由于胰島素分泌缺陷及(或)其生物學(xué)作用障礙引起的以高血糖為特征的代謝疾病，是在遺傳基礎(chǔ)上，有環(huán)境因素參與的遺傳易感性疾病，是一種慢性全身性代謝疾病，嚴重危害人類健康，積極開展糖尿病的防治工作已成為主要的社會公共衛(wèi)生問題。

I型糖尿病的發(fā)病原因主要是由于胰島素分泌絕對缺少，II型糖尿病是從胰島素抵抗為主伴胰島素相對不足到胰島素分泌不足為主伴胰島素抵抗的病理過程。目前公認II型糖尿病是一種在環(huán)境因素、生活方式的改變的作用下由多個基因分別或相互作用所導(dǎo)致的復(fù)雜遺傳病，但是II型糖尿病的病因尚未完全闡明。

西醫(yī)目前常采用飲食、運動療法磺酰脲類、雙胍類、噻唑烷二酮類、α-葡萄糖苷酶抑制劑、瑞格列奈、胰島素等來治療II型糖尿病，僅噻唑烷二酮類可改善胰島素抵抗。病人在用西藥治療的同時，又不斷地出現(xiàn)動脈硬化、冠心病和高血壓等并發(fā)癥，II型糖尿病的復(fù)雜機制及其導(dǎo)致的全身病變是西藥治療的薄弱環(huán)節(jié)。不論是磺脈類的促泌劑還是噻唑烷二酮類的增敏劑在實驗和臨床研究中都不具備明顯的減肥功效，而肥胖是2型糖尿病乃至代謝綜合征的重要病理基礎(chǔ)。

II型糖尿病不僅是糖代謝紊亂疾病，還是脂肪代謝紊亂疾病。肥胖引起的II型糖尿病患者通常都有高糖和高脂飲食，并常伴有高脂血癥。有研究表明提示血糖“正?！钡姆逝只颊咭延笑录毎置诠δ艿漠惓?。但是，大部分的肥胖者并不發(fā)展為糖尿病，說明機體的自身狀況起重要作用。在同樣的毒性作用下，易感人群很容易發(fā)展成II型糖尿病，而不敏感人群可能終身不發(fā)病，或者延遲發(fā)病?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)并不能夠改變機體的易感性，但可以通過改變生活方式，減肥 等手段來盡可能地減少早期的誘因，盡量的延長代償期，從而延遲2型糖尿病的發(fā)生，甚至避免發(fā)病。

現(xiàn)代II型糖尿病的治療觀點已從已往的單純控制血糖轉(zhuǎn)為降糖、降脂、降壓、改善胰島素抵抗等多環(huán)節(jié)治療。但是，對于II型糖尿病患者，藥量需逐漸增加，投藥種類也常由單一用藥逐漸變?yōu)槁?lián)合用藥，這不可避免地要考慮藥物代謝對肝腎的副作用。故從傳統(tǒng)中藥中尋找低毒、療效肯定的天然藥物來治療是目前研糖尿病究熱點之一。

衛(wèi)生部制定頒布的《中藥新藥治療消渴病(糖尿病)的臨床研究指導(dǎo)原則》中所制定的分類標準是目前采用最廣泛的分類方法，即陰虛熱盛證、氣陰兩虛證、陰陽兩虛證和血疲氣滯證四型。

黃柏為我國常用的傳統(tǒng)中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，原名“檗木”，列為上品，其性味苦、寒，主歸腎、膀胱經(jīng)，具有清熱燥濕，灣火除蒸，解毒療疫之功效，用于濕熱汚痢，黃疸尿赤，帶下陰癢，熱淋淫痛，腳氣痿蹵，骨蒸勞熱，盜汗，遺精，腫毒，濕疹?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃柏具有抗菌、抗真菌、抗炎、抗肝炎、抗腎炎、抗?jié)⒉?、抗氧化、抗痛風(fēng)、降血壓、降血糖、抗腫瘤、抗心力衰竭、抑制細胞免疫等作用。目前黃柏制劑在臨床上已經(jīng)廣泛運用，如治療鼻竇炎、急慢性膿耳、急慢性骨髓炎、慢性結(jié)腸炎、皮膚糜爛、膿拖性皮損、濕疫皮炎、潰竊性口腔炎、外痔腫痛、肛痛以及術(shù)后外洗、治療軟組織挫傷、消腫等病癥。(《黃柏中黃柏堿的提取純化工藝研究》，《西南交通大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文》，羅鴻，2012年)。

黃柏堿(Phellodendrine)是從蕓香科植物黃柏(Phelhdendron chinensis Schneid.)、威氏黃柏的莖皮中提取分離出來的一種異喹啉生物堿，其具有降血壓、抗腎炎、抑制細胞免疫反應(yīng)、中樞神經(jīng)抑制等作用。

黃柏堿的藥理作用主要有：降壓作用，主要表現(xiàn)為靜注于貓和鼠和犬均可引起降壓，并能增強腎上腺素和去甲腎上腺素的升壓反應(yīng)，抑制人工窒息及刺激迷走神經(jīng)向中端的升壓反應(yīng)，抑制刺激節(jié)前纖維而起的貓瞬膜收縮。隨劑量增大，降壓作用強度及持續(xù)時間也增加；植物神經(jīng)阻斷作用，表現(xiàn)為黃柏堿對中樞神經(jīng)有抑制作用，能抑制小鼠的自發(fā)活動和各種反射；肌肉松馳作用；對細胞免疫應(yīng)答期的誘導(dǎo)期有抑制作用。

《黃柏中幾種生物堿的分離、鑒定及促胰島素分泌活性篩選》(《中國醫(yī)藥指南》，2011年3月，第9卷，第7期，第54-55頁，周明偉、范明松、季宇斌、唐意紅)記載了：從黃柏的生物堿部分分離得到3個化合物，分別為小檗堿、藥根堿、黃柏堿。研究發(fā)現(xiàn)，在葡萄糖濃度為5.6mmol/L時，黃柏總堿中的3種生物堿對胰島素的分泌均無明顯的促進作用；而當葡萄糖濃度為16.7mmol/L時，小檗堿能夠明顯的促進細胞的胰島素分泌。陽性藥格列美脲在低糖濃度和高糖濃度時，都能夠促進胰島素分泌。

未見有關(guān)黃柏堿對于糖尿病有預(yù)防或治療作用的報道。

未見有關(guān)黃柏堿對于高脂血癥有預(yù)防或治療作用的報道。

未見有關(guān)黃柏堿對于非酒精性脂肪肝有預(yù)防或治療作用的報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開一種異喹啉生物堿的預(yù)防或治療高脂血癥的用途；

本發(fā)明公開一種異喹啉生物堿的預(yù)防或治療非酒精性脂肪肝的用途；

本發(fā)明公開的組合物，異喹啉生物堿為黃柏堿。

本發(fā)明公開的組合物，為市售或按已知方法制備的黃柏堿或其藥用鹽、水合物或無水物。

本發(fā)明公開的組合物，其中黃柏堿藥用鹽包括：無機酸鹽例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽和磷酸鹽；有機酸鹽例如乙酸鹽，苯甲酸鹽，馬來酸鹽，富馬酸鹽，蘋果酸鹽，檸檬酸鹽，草酸鹽，乳酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽，烷基磺酸鹽或芳基磺酸鹽，半胱氨酸鹽或其它氨基酸鹽。還包括堿式鹽如鈉鹽、鉀鹽和鈣鹽。

水合物包括含n個結(jié)晶水，n＝1-12。

本發(fā)明公開的組合物，為：藥物、保健品、或功能性食品，賦形劑或載體為制藥或食品領(lǐng)域中常用的賦形劑或載體，如稀釋劑，崩解劑，潤滑劑等。

本發(fā)明中所述黃柏堿的有效量可是目前黃柏堿應(yīng)用領(lǐng)域中的常用量或劑量。

本發(fā)明的黃柏堿可通過口服或注射形式使用。

本發(fā)明所述的黃柏堿(Phellodendrine)，CAS號為6873-13-18，其分子式是C₂₀H₂₄NO₄，相對分子質(zhì)量342，具有式如下的結(jié)構(gòu)：

非酒精性脂肪肝是一種無過量飲酒史，由各種原因引起的肝細胞內(nèi)脂肪堆積，以肝細胞脂肪變性和脂質(zhì)蓄積為主要特征的臨床病理綜合征，也是一種臨床常見病癥。

在黃柏堿的藥理活性研究中，本發(fā)明意外地發(fā)現(xiàn)黃柏堿具有顯著的減低血糖作用。本發(fā)明通過(1)STZ造模的糖尿病小鼠，通過(2)高脂誘導(dǎo)的2型糖尿病動物模型(DIO小鼠)，進行了禁食血糖檢測(FBG)。

在黃柏堿的藥理活性研究中，本發(fā)明意外地發(fā)現(xiàn)黃柏堿具有顯著的減低血脂作用，意外地發(fā)現(xiàn)黃柏堿能降低膽固醇，甘油三酯和低密度脂蛋白的水平，出人意料地發(fā)現(xiàn)黃柏堿能提升高密度脂蛋白的水平，從而可用于預(yù)防和、或治療與高血脂有關(guān)的疾病或癥狀。

在黃柏堿的藥理活性研究中，本發(fā)明意外地發(fā)現(xiàn)黃柏堿具有顯著的治療或預(yù)防非酒精性脂肪肝作用，意外地發(fā)現(xiàn)黃柏堿有效緩解高脂飼料引起的非酒精性脂肪肝變性，改善因脂肪變性而導(dǎo)致的肝功能損害。

基于上述發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明現(xiàn)已完成。為了便于理解，下面通過附圖和具體實施例對本發(fā)明的黃柏堿在治療糖尿病藥物中的用途進行詳細的描述。需要特別指出的是，具體實施例和附圖僅是為了說明，顯然本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以根據(jù)本文說明，對本發(fā)明進行各種修正或改變，這些修正和改變也將納入本發(fā)明范圍之內(nèi)。

附圖說明

圖1.黃柏堿對I型糖尿病小鼠胰腺組織的影響

圖2.黃柏堿對II型糖尿病小鼠口服糖耐量的影響

圖3.黃柏堿對II型糖尿病小鼠胰島素耐量的影響

圖4.黃柏堿對非酒精性脂肪肝小鼠肝臟組織的影響

圖1的詳細說明

圖1通過上中下三個部分展示黃柏堿對I型糖尿病小鼠胰腺組織的影響；

圖1的上部展示正常組小鼠胰腺組織；

圖1的中部展示STZ組小鼠胰腺組織；

圖1的下部展示STZ+黃柏堿組小鼠胰腺組織。

圖2的詳細說明

圖2展示黃柏堿對II型糖尿病小鼠口服糖耐量的影響；

圖2中，control為正常飲食組，HFD為高脂飲食組，HFD+Phellodendrine為高脂+Phellodendrine組。圖3的詳細說明

圖3展示黃柏堿對II型糖尿病小鼠胰島素耐量的影響

圖3中，control為正常飲食組，HFD為高脂飲食組，HFD+Phellodendrine為高脂+Phellodendrine組。

圖4的詳細說明

圖4通過左上、右上、左下、右下四個部分展示黃柏堿對非酒精性脂肪肝小鼠肝臟組織的影響；

圖4的左上部展示正常組小鼠肝臟組織；

圖4的右上部展示高脂組小鼠肝臟組織；

圖4的左下部展示洛伐他汀組小鼠肝臟組織；

圖4的右下部展示黃柏堿小鼠肝臟組織。

本發(fā)明涉及如下表格

表1.黃柏堿對STZ造模的I型糖尿病小鼠的禁食血糖的影響。

表2.黃柏堿對STZ造模的小鼠胰島數(shù)目的影響

表3.黃柏堿對高脂造模的II型糖尿病禁食血糖的影響

表4.正常組小鼠糖耐量原始數(shù)據(jù)及相應(yīng)線下面積

表5.高脂組小鼠糖耐量原始數(shù)據(jù)及相應(yīng)線下面積

表6.黃柏堿治療高脂飲食小鼠糖耐量原始數(shù)據(jù)及線下面積

表7.黃柏堿對口服糖耐量線下面積數(shù)據(jù)分析

表8.正常組小鼠糖胰島素耐量原始數(shù)據(jù)及線下面積

表9.高脂組小鼠糖胰島素耐量原始數(shù)據(jù)及線下面積

表10.黃柏堿治療高脂飲食小鼠糖胰島素耐量原始數(shù)據(jù)

表11.黃柏堿對高脂飲食小鼠糖胰島素耐量線下統(tǒng)計分析

表12.各組小鼠血脂指標的變化

表13.各組小鼠肝功能相關(guān)指標的變化

具體實施方式

實施例1

為了研究黃柏堿對I型糖尿病血糖影響，本實驗采用經(jīng)典的I型糖尿病模型，使用C57BL小鼠隨機分為3組，正常對照組(10只)，STZ組(20只)。STZ組連續(xù)腹腔注射STZ(50mg/Kg)5天，兩周后測定禁食血糖，血糖大于等于13.8mmol/L為造模成功，將STZ組隨機分為模型組和黃柏堿治療組，黃柏堿治療組采用口服灌胃(15mg/kg)10周后，禁食4h后測定禁食血糖結(jié)果如圖1所示，具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。

動物的一般情況：

胰島組織病理學(xué)檢查：石蠟切片、HE染色，觀察病理變化

表1.黃柏堿對STZ造模的I型糖尿病血糖的影響.

注：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，與STZ組相比。

結(jié)果表明黃柏堿能夠有效的降低STZ造成的I型糖尿病的血糖

表2.黃柏堿對STZ造模的小鼠胰島數(shù)目的影響

注：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，與STZ組相比。

隨機選取胰腺病理切片9個視野進行統(tǒng)計。附圖1的結(jié)果顯示STZ造模后胰腺萎縮，組織結(jié)構(gòu)壞死，通過黃柏堿治療后胰島組織形態(tài)結(jié)構(gòu)恢復(fù)明顯。注：標尺為2μm，放大倍數(shù)400倍。

實施例2

為了研究黃柏堿對II型糖尿病的影響，本實驗采用經(jīng)典的II型糖尿病模型，使用C57BL小鼠隨機分為3組，正常對照組(10只)，模型組(10只)，黃柏堿治療組(10只)，其中模型組和黃柏堿治療組采用高脂飲食(基礎(chǔ)飼料加入20％豬油)造模8周，黃柏堿治療組在高脂飲食同時采用口服灌胃(50mg/kg)方式給藥，給藥結(jié)束后測定禁食過夜測定、空腹血糖、葡萄糖耐量和胰島素耐量。實驗數(shù)據(jù)進行方差分析，結(jié)果以x±s表示。結(jié)果顯示，黃柏堿治療效果明顯，具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。

動物的一般情況

實驗結(jié)果：

表3.黃柏堿對高脂造模的II型糖尿病禁食血糖的影響

注：***P＜0.001，與正常組相比；*P＜0.05，***P＜0.001，與高脂組相比

糖耐量試驗是一種口服葡萄糖負荷試驗，用以了解機體對進食葡萄糖后的血糖調(diào)節(jié)能力。通過糖耐量試驗，可以早期發(fā)現(xiàn)糖代謝異常，是目前公認的診斷糖尿病的金標準，在血糖增高但尚未達到糖尿病診斷標準時，為明確是否患糖尿病，可以采用OGTT進行鑒別診斷。正常情況下，機體有一套維持血糖的機制，口服葡萄糖，血糖短暫升高后迅速恢復(fù)正常，即糖耐量正常，相應(yīng)的口服糖耐量曲線線下面積較小，糖尿病患者糖的利用障礙，口服葡萄糖后血糖迅速升高，血糖下降速度較慢，即糖耐量減退相應(yīng)的線下面積較大，該實驗中糖耐 量減退，

如圖2所示黃柏堿治療組和正常組的糖耐量曲線均在模型組曲線下，相應(yīng)的線下面積也均低于模型組，且具有統(tǒng)計意義。

糖耐量實驗方法：小鼠禁食過夜，小鼠口服血糖2g/kg后分別在0，15，30，60，90，120min時，尾尖采血測定相應(yīng)血糖，使用GraphPad Prism軟件計算相應(yīng)線下面積(AUC)

胰島素耐受實驗方法：小鼠禁食過夜，小鼠腹腔注射胰島素0.75IU/kg后分別在0，30，60，90，120，150min時，尾尖采血測定相應(yīng)血糖，使用GraphPad Prism軟件計算相應(yīng)線下面積(AUC)

糖耐量原始數(shù)據(jù)如下：

表4.正常組小鼠糖耐量原始數(shù)據(jù)

表5.高脂組小鼠糖耐量原始數(shù)及相應(yīng)線下面積

表6.黃柏堿治療高脂飲食小鼠糖耐量原始數(shù)及線下面積

圖2.黃柏堿對II型糖尿病小鼠口服糖耐量的影響

注：control為正常飲食組，HFD為高脂飲食組，HFD+Phellodendrine組為高脂

表7.黃柏堿對口服糖耐量線下面積數(shù)據(jù)分析

胰島素耐量試驗是反映機體對胰島素敏感性的實驗，II型糖尿病的主要特征為胰島素抵抗，對胰島素敏感性降低，即注射相同胰島素相同時間內(nèi)血糖高于正常機體，如圖3所示，高脂造模后對胰島素敏感性降低，注射相同量的胰島素后各個點的血糖值均高于正常組，其相應(yīng)的線下面積也高于正常組，給予黃柏堿治療后各個時間點的血糖數(shù)值低于模型組，相應(yīng)線下面積低于高脂誘導(dǎo)的模型組。結(jié)果表明黃柏堿能夠有效的增加胰島素敏感性改善糖尿病。

表8.正常組小鼠糖胰島素耐量原始數(shù)據(jù)

表9.高脂組小鼠糖胰島素耐量原始數(shù)據(jù)

表10.黃柏堿治療組小鼠糖胰島素耐量原始數(shù)據(jù)

圖3.黃柏堿對II型糖尿病小鼠胰島素耐量的影響

表11.黃柏堿對II型糖尿病小鼠糖胰島素耐量線下統(tǒng)計分析

注：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，與高脂組比較

可見：與正常組相比，模型組小鼠空腹血糖值顯著升高，說明II型糖尿病模型造模成功。同時，與模型組相比，黃柏堿有顯著的降低空腹血糖的作用和增加葡萄糖耐受、增強胰島素敏感性。

實施例3

黃柏堿對高脂血癥和非酒精性脂肪肝的治療作用，

1、實驗動物及方法：

C57BL小鼠，SPF級，雄性，體重(20±2)g，隨機分成兩組，第一組12只，為正常組，給與正常飼料，其余小鼠(44只)分為第二組，給與高脂飼料(基礎(chǔ)飼料加入20％豬油，1.25％膽固醇，0.5％的膽酸鈉)自由攝食、飲水。連續(xù)喂養(yǎng)8周后，從正常對照組和脂肪肝模型組分別處死4只小鼠，比較兩組小鼠的血清和肝臟生化指標，以及肝臟組織病理切片，判斷非酒精性脂肪肝模型小鼠是否建立成功。

將造模成功小鼠32只隨機分為4組，分別為正常對照組(8只)，模型組(8只)，黃柏堿治療組(8只)，陽性對照組(洛伐他汀組8只)，連續(xù)灌胃給藥8周。給藥期間，除正常對照組標準飼料飼養(yǎng)外，其余各組繼續(xù)給予高脂飲食，直到實驗結(jié)束。黃柏堿治療組在高脂飲食同時采用口服灌胃(50mg/kg)方式給藥，陽性對照組在高脂飲食同時采用口服灌胃洛伐他汀(60mg/kg)方式 給藥)

2、觀察指標：

a動物的一般情況

實驗動物在SPF動物房中飼養(yǎng)，12h光照12h黑夜，自由飲食飲水，實驗期間動物狀態(tài)正常。

b肝功能相關(guān)指標：血清ALT、AST，

c血脂相關(guān)指標：TC、TG、HDL、LDL

d病理學(xué)檢查：HE染色

3、實驗結(jié)果：

結(jié)果表明：黃柏堿均可明顯降低血漿中的總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)，升高高密度脂蛋白(HDL)，降低低密度脂蛋白(LDL)，降低血漿中天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)，丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)，病理切片結(jié)果顯示有效緩解高脂飼料引起的非酒精性脂肪肝變性，改善因脂肪變性而導(dǎo)致的肝功能損害。

給藥結(jié)束后測定小鼠、而脂水平。實驗數(shù)據(jù)進行方差分析，結(jié)果以x±s表示。結(jié)果顯示，黃柏堿對降低高脂效果明顯，具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。

表12.各組小鼠血脂指標的變化

表13各組小鼠肝功能相關(guān)指標的變化

實施例4

黃柏堿的制劑

黃柏堿片劑

黃柏堿10mg，淀粉88g，硬脂酸鎂3g

制備工藝：取黃柏堿過100目篩，加淀粉、硬脂酸鎂混合均勻，制成顆粒，干燥，壓片，即得。

黃柏堿膠囊

黃柏堿10mg，淀粉88g，硬脂酸鎂3g

制備工藝：取黃柏堿過100目篩，加淀粉、硬脂酸鎂混合均勻，制成顆粒，干燥，裝膠囊，即得。

黃柏堿注射液

黃柏堿47mg，注射用氯化鈉7mg

制備工藝：取黃柏堿過100目篩，加1.9mL注射用水溶解，加入注射用氯化鈉至等滲，調(diào)節(jié)pH值至7～7.1，濾過，冷藏24小時，加注射用水至規(guī)定量，濾過，灌封，滅菌，即得。

實施例4

黃柏堿的食品制劑

干酵母5g、溫水90ml、水少許、面粉150g、黃柏堿5mg，植物油10g、低鈉鹽少許

餅干做法：把酵母撒在溫水里攪拌倒溶化，加入黃柏堿。加入面粉攪拌，再加入植物油，揉成光滑的面團；面團制成0.2cm厚的薄片；壓出造型，刺洞，表面撒上水，撒上一點低鈉鹽，室溫發(fā)酵10分鐘；烤箱預(yù)熱120度，放在上層，烤約10分鐘，得到含黃柏堿的食品。

實施例5

黃柏堿單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL0.1M HCL氯仿溶液，析出沉淀，過濾干燥，得到鹽酸黃柏堿單體，用1ml乙醇溶解，置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過濾干燥，得到鹽酸黃柏堿單 體。

黃柏堿單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL0.1M H₂SO₄氯仿溶液，析出沉淀，過濾干燥，得到硫酸黃柏堿單體，用1ml乙醇溶解，過濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過濾干燥，得到硫酸黃柏堿單體。

黃柏堿單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL0.1M磷酸氯仿溶液，析出沉淀，過濾干燥，得到磷酸黃柏堿單體，用1ml乙醇溶解，過濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過濾干燥，得到磷酸黃柏堿單體。

黃柏堿單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL0.1M果酸氯仿溶液，析出沉淀，過濾干燥，得到果酸黃柏堿單體，用1ml乙醇溶解，過濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過濾干燥，得到果酸黃柏堿單體。

黃柏堿單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL0.1M草酸氯仿溶液，析出沉淀，過濾干燥，得到草酸黃柏堿單體，用1ml乙醇溶解，過濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過濾干燥，得到草酸黃柏堿單體。

黃柏堿單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL0.1M琥珀酸氯仿溶液，析出沉淀，過濾干燥，得到琥珀酸黃柏堿單體，用1ml乙醇溶解，過濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過濾干燥，得到琥珀酸黃柏堿單體。

黃柏堿單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL0.1M醋酸氯仿溶液，析出沉淀，過濾干燥，得到醋酸黃柏堿單體，用1ml乙醇溶解，過濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過濾干燥，得到醋酸黃柏堿單體。

黃柏堿單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL0.1M丙酸氯仿溶液，析出沉淀，過濾干燥，得到丙酸黃柏堿單體，用1ml乙醇溶解，過濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過濾干燥，得到丙酸黃柏堿單體。