本發(fā)明涉及阿可拉定在制備用于治療GP80相關(guān)疾病藥物中的用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

GP80又稱為IL-6R或IL-6Rα，白介素-6受體，其分子量為80kDa，是含有449個(gè)氨基酸的跨膜糖蛋白。GP80作為細(xì)胞因子IL-6的受體，細(xì)胞因子IL-6通過它的受體GP80和分子GP130發(fā)揮其生物活性。與GP130表達(dá)在所有細(xì)胞上不同的是，GP80僅在人體內(nèi)包括肝細(xì)胞和白血病細(xì)胞在內(nèi)的很少細(xì)胞上有表達(dá)。

已經(jīng)有研究證實(shí)，IL-6/GP130(IL-6/GP130)信號(hào)通路的異?；罨诙喾N腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用。在《臨床調(diào)查》(“The Journal of Clinical Investigation”)中公開了名稱為“肝臟細(xì)胞中的IL6-GP130-STAT3通路形成了T-細(xì)胞調(diào)節(jié)的肝損傷肝保護(hù)”的文章(The IL-6-GP130-STAT3Pathway in Hepatocytes Triggers Liver Protection in T Cell-mediated Liver Injury)。文中提到IL-6引發(fā)導(dǎo)致肝保護(hù)的分子機(jī)制還不能完全清楚，對(duì)于信號(hào)轉(zhuǎn)換，IL-6結(jié)合其受體GP80，形成的IL-6-GP80二聚體復(fù)合物與GP130 相互作用，進(jìn)行信號(hào)傳導(dǎo)。

在申請(qǐng)?zhí)枮?01110376649.X的中國專利申請(qǐng)中公開了名稱為“拮抗和/或阻斷白介素-6/白介素-6R/GP130信號(hào)通路在抗肝癌治療中的用途?！蔽闹刑岬桨捉樗?6/白介素-6受體/GP 130信號(hào)途徑的拮抗劑和/或阻斷劑用于抗肝癌。因此可以看出，IL-6受體，即作為標(biāo)志物在肝癌治療中起著非常重要的作用。

阿可拉定，又名淫羊藿素，是從中藥淫羊藿中提取分離得到的主要活性成分淫羊藿苷經(jīng)酶轉(zhuǎn)化得到的新的有效單體，其結(jié)構(gòu)式如下式(I)所示：

該化合物的制備方法公開于CN101302548，該方法以淫羊藿苷為原料，以β-葡萄糖苷酶進(jìn)行水解，水解產(chǎn)物離心得到的沉淀用丙酮溶解，離心過濾得到上清液。再將離心得到的上清液用水進(jìn)行重結(jié)晶，得到阿可拉定純品。

在申請(qǐng)?zhí)枮?00780039276.9的中國專利中公開了一種用于治療與雌激素受體相關(guān)的疾病的化合物和方法，該專利中公開了阿可拉定用于治療與雌激素受體ER-α36相關(guān)的肝癌。

在現(xiàn)有技術(shù)中，并沒有針對(duì)阿可拉定對(duì)ER-α36以外的其他靶點(diǎn)的進(jìn)一步研究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，阿可拉定能夠治療與GP80相關(guān)的疾病。

本發(fā)明的目的是提供阿可拉定在制備用于治療與GP80相關(guān)疾病的藥物中的用途。

本發(fā)明一方面提供了阿可拉定在制備用于治療與GP80相關(guān)疾病的藥物中的用途。

優(yōu)選地，所述的GP80相關(guān)疾病包括與GP80相關(guān)的肝癌。

優(yōu)選地，所述的藥物為口服制劑或注射劑。

優(yōu)選地，所述的注射劑為肌肉注射劑或靜脈注射劑。

本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明的阿可拉定在治療與GP80相關(guān)疾病中取得了非常好的效果，特別是對(duì)于與GP80相關(guān)的肝癌，阿可拉定都表現(xiàn)出了良好的藥學(xué)效果。因此，本發(fā)明為阿可拉定在治療癌癥中的靶向提供了進(jìn)一步的研究方向。

附圖說明

圖1表示實(shí)施例2的阿可拉定對(duì)肝癌細(xì)胞PLC/PRF/5中的GP80蛋白抑制圖。

圖2表示實(shí)施例3的阿可拉定對(duì)肝癌細(xì)胞HUH-7中的GP80蛋白抑制圖。

圖3表示阿可拉定抑制PLC/PRF/5肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。

圖4表示阿可拉定抑制HUH-7肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。

具體實(shí)施方式

以下實(shí)施例僅用于對(duì)本發(fā)明進(jìn)行示例性說明，不用于限制本發(fā)明，在本發(fā)明保護(hù)范圍內(nèi)所做的修改、改變、變型等都在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。

術(shù)語“GP80”又稱為IL-6R或IL-6Rα，白介素-6受體，其分子量為80kDa，是含有449個(gè)氨基酸的跨膜糖蛋白。GP80作為細(xì)胞因子IL-6的受體，細(xì)胞因子IL-6通過它的受體GP80和分子GP130發(fā)揮其生物活性。與GP130表達(dá)在所有細(xì)胞上不同的是，GP80僅在人體內(nèi)包括肝細(xì)胞和白血病細(xì)胞在內(nèi)的很少細(xì)胞上有表達(dá)

術(shù)語“GP80相關(guān)疾病”指的是在與疾病相關(guān)的組織細(xì)胞中的GP80表達(dá)超過正常水平。

術(shù)語“治療GP80相關(guān)疾病的藥物”指的是在治療前，疾病細(xì)胞中的GP80表達(dá)超過正常水平，通過藥物治療，疾病細(xì)胞中的GP80表達(dá)達(dá)到正常值。

術(shù)語“肌肉注射劑”指的是注射于肌肉組織中的注射劑。

術(shù)語“靜脈注射劑”指的是注入靜脈進(jìn)入血液的注射劑。

本發(fā)明中的“人肝癌細(xì)胞PLC/PRF/5”購自于日本癌癥研究銀行Japanese Cancer Research Bank(JCRB)，Tokyo,Japan，商品名稱PLC/PRF/5，商品編號(hào)為JCRB0406。

本發(fā)明中的“肝癌細(xì)胞株HUH-7”購自于日本癌癥研究銀行Japanese Cancer Research Bank(JCRB),Tokyo,Japan，商品名稱Huh-7，商品編號(hào)為JCRB0403。

肝癌細(xì)胞株P(guān)LC/PRF/5和肝癌細(xì)胞株HUH-7的區(qū)別為均為人肝細(xì)胞肝癌，來源于不同的人。

除非另外說明，本發(fā)明中“阿可拉定”通過實(shí)施例1方法制備。

實(shí)施例1

阿可拉定的制備

阿可拉定又名淫羊藿素，是從中藥淫羊藿中提取分離得到。

在公開號(hào)為CN 101302548的專利中公開了淫羊藿的制備方法。該方法以淫羊藿苷為原料，以β-葡萄糖苷酶進(jìn)行水解，水解產(chǎn)物離心得到的沉淀用丙酮溶解，離心過濾得到上清液。再將離心得到的上清液用水進(jìn)行重結(jié)晶，得到淫羊藿純品。本發(fā)明中的淫羊藿苷購自陜西嘉禾植物化工有限責(zé)任公司，純度90％。

實(shí)施例2

檢測(cè)阿可拉定對(duì)肝癌細(xì)胞PLC/PRF/5細(xì)胞的抑制。

實(shí)驗(yàn)步驟：細(xì)胞培養(yǎng)：首先將PLC/PRF/5肝癌細(xì)胞在含有體積濃度為10％胎牛血清的氨基酸和葡萄糖培養(yǎng)基(即DMEM培養(yǎng)基)中培養(yǎng)至細(xì)胞密度為80％；再將培養(yǎng)后的細(xì)胞分至含有活性炭處理的體積濃度為2.5％體積濃度的胎牛血清的無酚紅培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24小時(shí)。

加入二甲基亞砜(DMSO)和阿可拉定：在培養(yǎng)體系中分別加入DMSO對(duì)照(即不含有阿可拉定的DMSO溶液)和5μM阿可拉定DMSO溶液，并使每個(gè)反應(yīng)體系中DMSO的體積終濃度為0.1％。

分別于12、24和48小時(shí)收細(xì)胞，分別向細(xì)胞加入甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)抗體和GP80(IL-6R)抗體進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡法(western blot)進(jìn)行檢測(cè)。

檢測(cè)結(jié)果通過圖1上半圖可見，加入阿可拉定12小時(shí)、24小時(shí)和48小時(shí)，肝癌細(xì)胞PLC/PRF/5中的GP80蛋白表達(dá)明顯降低，即 藥物作用具有時(shí)間依賴性。阿可拉定處理細(xì)胞12小時(shí)后，隨著藥物濃度的提高，GP80蛋白水平下調(diào)越明顯。通過圖1下半圖可見，阿可拉定對(duì)于細(xì)胞中GAPDH不產(chǎn)生任何改變。

實(shí)施例3

檢測(cè)阿可拉定對(duì)肝癌細(xì)胞HUH-7細(xì)胞的抑制。

實(shí)驗(yàn)步驟：細(xì)胞培養(yǎng)：首先將HUH-7細(xì)胞在含有10％體積濃度胎牛血清的氨基酸和葡萄糖培養(yǎng)基(即DMEM培養(yǎng)基)中培養(yǎng)至細(xì)胞密度80％左右；再將培養(yǎng)后的細(xì)胞分至含有活性炭處理的體積濃度為2.5％的胎牛血清的無酚紅培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24小時(shí)。

加入二甲基亞砜(DMSO)和阿可拉定：在培養(yǎng)體系中分別加入DMSO對(duì)照(即不含有阿可拉定的DMSO溶液)和5μM濃度的阿可拉定DMSO溶液，并使每個(gè)反應(yīng)體系中DMSO的體積終濃度為0.1％。

分別于12、24和48小時(shí)收細(xì)胞，分別向細(xì)胞加入甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)和GP80抗體進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡法(western blot)進(jìn)行檢測(cè)。

檢測(cè)結(jié)果通過圖2上半圖可見，加入阿可拉定24小時(shí)和48小時(shí)，肝癌細(xì)胞HUH-7中的GP80蛋白表達(dá)明顯降低，并且隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞內(nèi)GP80蛋白水平下調(diào)越明顯，即藥物作用具有時(shí)間依賴性。通過圖2下半圖可見，阿可拉定對(duì)于細(xì)胞中GAPDH不產(chǎn)生任何改變。

實(shí)施例4

PLC/PRF/5肝癌細(xì)胞在阿可拉定作用下的增殖能力受到抑制

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.PCL/PRF/5肝癌細(xì)胞培養(yǎng)在含有10％體積濃度胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)至細(xì)胞密度80％。

2.將細(xì)胞分至含有活性炭處理的2.5％體積濃度的胎牛血清的無酚紅培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24小時(shí)。

3.分別將2.5、5.0、7.5及10.0μM的阿可拉定加入到培養(yǎng)體系中，并使每個(gè)反應(yīng)體系中DMSO體積濃度的終濃度為0.1％。將不含有阿可拉定的DMSO加入到培養(yǎng)體系中，作為空白對(duì)照組。

4.使用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(CCK-8)檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力

4.1將步驟3的培養(yǎng)體系培養(yǎng)48小時(shí)后，加入10μM的2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽(CCK-8液)；

4.237℃孵育2小時(shí)，酶標(biāo)儀檢測(cè)檢測(cè)450及630nM處的吸光度；

4.3以阿可拉定的濃度做橫坐標(biāo)，并以相對(duì)于空白對(duì)照組的細(xì)胞比例為縱坐標(biāo)，繪制出藥物抑制PLC/PRF/5肝癌腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，見圖3。

5.由圖3可見，阿可拉定處理PLC/PRF/5肝癌細(xì)胞48小時(shí)，隨著藥物濃度的升高，活細(xì)胞被抑制的程度加深，呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系，阿可拉定對(duì)PLC/PRF/5細(xì)胞的IC₅₀值為4.5μM。

實(shí)施例5

HUH-7肝癌細(xì)胞在阿可拉定作用下的增殖能力受到抑制

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.HUH-7肝癌細(xì)胞培養(yǎng)在含有10％體積濃度的胎牛血清DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)至細(xì)胞密度80％。

2.將細(xì)胞分至含有活性炭處理的2.5％體積濃度胎牛血清的無酚紅培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24小時(shí)。

3.分別將2.5、5.0、7.5及10.0μM濃度的阿可拉定加入到培養(yǎng)體系中，并使每個(gè)反應(yīng)體系中DMSO的體積終濃度為0.1％。將不含有阿可拉定的DMSO加入到培養(yǎng)體系中，作為空白對(duì)照組。

4.使用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(CCK-8)檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力

4.1將步驟3的培養(yǎng)體系培養(yǎng)48小時(shí)后，加入10μM的2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽(CCK-8液)；

4.237℃孵育2小時(shí)，酶標(biāo)儀檢測(cè)檢測(cè)450及630nM處的吸光度；

4.3以阿可拉定的濃度做橫坐標(biāo)，并以相對(duì)于空白對(duì)照組的細(xì)胞比例為縱坐標(biāo)，繪制出藥物抑制HUH-7肝癌腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，見圖4。

5.由圖4可見，阿可拉定處理HUH-7肝癌細(xì)胞48小時(shí)，隨著藥物濃度的升高，活細(xì)胞被抑制的程度加深，呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系，阿可拉定對(duì)HUH-7肝癌細(xì)胞的IC₅₀值為4.5μM。