本發(fā)明涉及阿可拉定在制備用于治療GP130相關(guān)疾病的藥物中的用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

糖蛋白GP130是一種跨膜蛋白，是一類細胞因子的受體。它形成IL-6受體家族的一類細胞因子受體的次級單元。并且GP130對于細胞因子結(jié)合途徑的信號傳導非常重要。

已經(jīng)有研究證實，白介素-6/GP130(IL-6/GP130)的信號通路的異?；罨诙喾N腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用。在《臨床調(diào)查》(“The Journal of Clinical Investigation”)中公開了名稱為“肝臟細胞中的IL6-GP130-STAT3通路形成了T-細胞調(diào)節(jié)的肝損傷引發(fā)肝保護”的文章，(The IL-6-GP130-STAT3Pathway in Hepatocytes Triggers Liver Protection in T Cell-mediated Liver Injury)文中提到肝細胞中依賴IL-6-GP-130的信號通路對于肝損傷的保護作用。

在申請?zhí)枮?01110376649.X的中國專利申請中公開了名稱為“拮抗和/或阻斷白介素-6/白介素-6R/GP130信號通路在抗肝癌治 療中的用途?！蔽闹刑岬桨捉樗?6/白介素-6受體/GP130信號途徑的拮抗劑和/或阻斷劑用于抗肝癌。因此可以看出，GP130作為標志物在肝癌治療中起著非常重要的作用。

阿可拉定，又名淫羊藿素，是從中藥淫羊藿中提取分離得到的主要活性成分淫羊藿苷經(jīng)酶轉(zhuǎn)化得到的新的有效單體，其結(jié)構(gòu)式如下式(I)所示：

。

該化合物的制備方法公開于CN101302548，該方法以淫羊藿苷為原料，以β-葡萄糖苷酶進行水解，水解產(chǎn)物離心得到的沉淀用丙酮溶解，離心過濾得到上清液。再將離心得到的上清液用水進行重結(jié)晶，得到阿可拉定純品。

在申請?zhí)枮?00780039276.9的中國專利中公開了一種用于治療與雌激素受體相關(guān)的疾病化合物和方法，該專利中公開了阿可拉定用于治療與雌激素受體ER-α36相關(guān)的肝癌。

在現(xiàn)有技術(shù)中，并沒有針對阿可拉定對ER-α36以外的其他靶點的進一步研究。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，阿可拉定能夠治療與GP130相關(guān)的疾 病。

本發(fā)明的目的是提供阿可拉定在制備用于治療GP130相關(guān)疾病的藥物中的用途。

本發(fā)明一方面提供了阿可拉定在制備用于治療GP130相關(guān)疾病的藥物中的用途。

優(yōu)選地，所述的GP130相關(guān)疾病包括與GP130相關(guān)的肝癌。

優(yōu)選地，所述的藥物為口服制劑或注射劑。

優(yōu)選地，所述的注射劑為肌肉注射劑或靜脈注射劑。

本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明的阿可拉定在治療與GP130相關(guān)疾病中取得了非常好的效果，特別是對于與GP130相關(guān)的肝癌，阿可拉定都表現(xiàn)出了良好的藥學效果。因此，本發(fā)明為阿可拉定在治療癌癥中的靶向提供了進一步的研究方向。

附圖說明

圖1表示實施例2的阿可拉定對肝癌細胞PLC/PRF/5中的GP130蛋白抑制圖。

圖2表示實施例3的阿可拉定對肝癌細胞HUH7中的GP130蛋白抑制圖。

圖3表示阿可拉定抑制PLC/PRF/5肝癌細胞的生長曲線。

圖4表示阿可拉定抑制HUH-7肝癌細胞的生長曲線。

具體實施方式

以下實施例僅用于對本發(fā)明進行示例性說明，不用于限制本 發(fā)明，在本發(fā)明保護范圍內(nèi)所做的修改、改變、變型等都在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。

術(shù)語“GP130相關(guān)疾病”指的是在與疾病相關(guān)的組織細胞中的GP130表達超過正常水平。

術(shù)語“治療GP130相關(guān)疾病的藥物”指的是在治療前，疾病細胞中的GP130表達超過正常水平，通過藥物治療，疾病細胞中的GP130表達達到正常值。

術(shù)語“肌肉注射劑”指的是注射于肌肉組織中的注射劑。

術(shù)語“靜脈注射劑”指的是注入靜脈進入血液的注射劑。

本發(fā)明中的“人肝癌細胞PLC/PRF/5“購自于日本癌癥研究銀行Japanese Cancer Research Bank(JCRB),Tokyo,Japan，商品名稱PLC/PRF/5，商品編號為JCRB0406。

本發(fā)明中的“肝癌細胞株Huh-7”購自于日本癌癥研究銀行Japanese Cancer Research Bank(JCRB),Tokyo,Japan，商品名稱Huh-7，商品編號為JCRB0403。

肝癌細胞株P(guān)LC/PRF/5和肝癌細胞株Huh-7的區(qū)別為均為人肝細胞肝癌，來源于不同的人。

除非另外說明，本發(fā)明中“阿可拉定”通過實施例1方法制備。

實施例1

阿可拉定的制備

阿可拉定又名淫羊藿素，是從中藥淫羊藿中提取分離得到。

在公開號為CN 101302548的專利中公開了淫羊藿的制備方法。該方法以淫羊藿苷為原料，以β-葡萄糖苷酶進行水解，水解 產(chǎn)物離心得到的沉淀用丙酮溶解，離心過濾得到上清液。再將離心得到的上清液用水進行重結(jié)晶，得到淫羊藿純品。本發(fā)明中的淫羊藿苷購自陜西嘉禾植物化工有限責任公司，純度90％。

實施例2

檢測阿可拉定對肝癌細胞PLC/PRF/5細胞的抑制。

實驗步驟：細胞培養(yǎng)：首先將PLC/PRF/5肝癌細胞在含有體積濃度為10％胎牛血清的氨基酸和葡萄糖培養(yǎng)基(即DMEM培養(yǎng)基)中培養(yǎng)至細胞密度為80％；再將培養(yǎng)后的細胞分至含有活性炭處理的體積濃度為2.5％的胎牛血清的無酚紅培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24小時。

加入二甲基亞砜(DMSO)和阿可拉定：在培養(yǎng)體系中分別加入DMSO對照(即不含有阿可拉定的DMSO溶液)和5μmol/L阿可拉定DMSO溶液，并使每個反應(yīng)體系中DMSO體積濃度的終值為0.1％。

分別于12、24和48小時收細胞，分別向細胞加入甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)和GP130抗體進行蛋白質(zhì)印跡法(western blot)進行檢測。

檢測結(jié)果通過圖1上半圖可見，加入阿可拉定12、24和48小時，肝癌細胞PLC/PRF/5中的GP130蛋白表達明顯降低，即藥物作用具有時間依賴性。通過圖1下半圖可見，阿可拉定對于細胞中GAPDH不產(chǎn)生任何改變。

實施例3

檢測阿可拉定對肝癌細胞HUH7細胞的抑制。

實驗步驟：細胞培養(yǎng)：首先將HUH7細胞在含有10％體積濃度 胎牛血清的氨基酸和葡萄糖培養(yǎng)基(即DMEM培養(yǎng)基)中培養(yǎng)至細胞密度80％；再將培養(yǎng)后的細胞分至含有活性炭處理的體積濃度為2.5％胎牛血清的無酚紅培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24小時。

加入二甲基亞砜(DMSO)和阿可拉定：在培養(yǎng)體系中分別加入DMSO對照(即不含有阿可拉定的DMSO溶液)和5μM濃度的阿可拉定DMSO溶液，并使每個反應(yīng)體系中DMSO體積濃度的終值為0.1％。

分別于12、24和48小時收細胞，分別向細胞加入甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)和GP130抗體進行蛋白質(zhì)印跡法(western blot)進行檢測。

檢測結(jié)果通過圖2上半圖可見，加入阿可拉定24小時和48小時，肝癌細胞HUH7中的GP130蛋白表達明顯降低，即藥物作用具有時間依賴性。通過圖2下半圖可見，阿可拉定對于細胞中GAPDH不產(chǎn)生任何改變。

實施例4

PLC/PRF/5肝癌細胞在阿可拉定作用下的增殖能力受到抑制

實驗步驟：

1.PCL/PRF/5肝癌細胞培養(yǎng)在含有10％體積濃度胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)至細胞密度80％。

2.將細胞分至含有活性炭處理的2.5％體積濃度的胎牛血清的無酚紅培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24小時。

3.分別將2.5、5.0、7.5及10.0μM的阿可拉定加入到培養(yǎng)體系中，并使每個反應(yīng)體系中DMSO體積濃度的終值為0.1％。將不含有阿可拉定的DMSO加入到培養(yǎng)體系中，作為空白對照組。

4.使用細胞計數(shù)試劑盒(CCK-8)檢測細胞的增殖能力

4.1將步驟3的培養(yǎng)體系培養(yǎng)48小時后，加入10μM的2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽(CCK-8液)；

4.237℃孵育2小時，酶標儀檢測檢測450及630nM處的吸光度；

4.3以阿可拉定的濃度做橫坐標，并以相對于空白對照組的細胞比例為縱坐標，繪制出藥物抑制PLC/PRF/5肝癌腫瘤細胞的生長曲線，見圖3。

5.由圖3可見，阿可拉定處理PLC/PRF/5肝癌細胞48小時，隨著藥物濃度的升高，活細胞被抑制的程度加深，呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系，阿可拉定對PLC/PRF/5細胞的IC₅₀值為4.5μM。

實施例5

HUH-7肝癌細胞在阿可拉定作用下的增殖能力受到抑制

實驗步驟：

1.HUH-7肝癌細胞培養(yǎng)在含有10％體積濃度胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)至細胞密度80％。

2.將細胞分至含有活性炭處理的2.5％體積濃度胎牛血清的無酚紅培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24小時。

3.分別將2.5、5.0、7.5及10.0μM濃度的阿可拉定加入到培養(yǎng)體系中，并使每個反應(yīng)體系中DMSO的體積終濃度為0.1％。將不含有阿可拉定的DMSO加入到培養(yǎng)體系中，作為空白對照組。

4.使用細胞計數(shù)試劑盒(CCK-8)檢測細胞的增殖能力

4.1將步驟3的培養(yǎng)體系培養(yǎng)48小時后，加入10μM的2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽(CCK-8液)；

4.237℃孵育2小時，酶標儀檢測檢測450及630nM處的吸光度；

4.3以阿可拉定的濃度做橫坐標，并以相對于空白對照組的細胞比例為縱坐標，繪制出藥物抑制HUH-7肝癌腫瘤細胞的生長曲線，見圖4。

5.由圖4可見，阿可拉定處理HUH-7肝癌細胞48小時，隨著藥物濃度的升高，活細胞被抑制的程度加深，呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系，阿可拉定對HUH-7肝癌細胞的IC₅₀值為4.5μM。