本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，特別涉及一種凍干粉針劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：慢性腎衰竭(CRF)是指各種原因造成慢性進行性腎實質(zhì)損害，致使腎臟明顯萎縮，不能維持基本功能，臨床出現(xiàn)以代謝產(chǎn)物潴留，水、電解質(zhì)、酸堿平衡失調(diào)，全身各系統(tǒng)受累為主要表現(xiàn)的臨床綜合征。主要病因有原發(fā)性腎小球腎炎、慢性腎盂腎炎、高血壓腎小動脈硬化、糖尿病腎病、繼發(fā)性腎小球腎炎、腎小管間質(zhì)病變、遺傳性腎臟疾病以及長期服用解熱鎮(zhèn)痛劑及接觸重金屬等。全球共有幾億患者，僅中國就有1億多人。但這個疾病并未被廣泛診斷，其危害也遠不如糖尿病、高血脂被大眾耳熟能詳。但其最終結(jié)果是晚期腎衰竭。腎功能出現(xiàn)障礙后，體內(nèi)會分泌甲狀旁腺以維持血鈣和血磷的濃度，但一旦透析開始甲狀旁腺過高可能有危險的后果。甲狀旁腺增加血鈣但降低血磷，腎衰竭患者由于血鈣降低、血磷上升，所以甲狀旁腺分泌代償性增加。Velcalcetide用于接受透析的慢性腎病患者的繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進。Velcalcetide結(jié)構(gòu)如式Ⅰ所示：由于Velcalcetide屬于肽類藥物，極不穩(wěn)定，通常只能在2-8℃下保存，不利于velcalcetide的推廣和使用。且常規(guī)的凍干工藝方案不能完全解決velcalcetide凍干粉針凍干破瓶分層和萎縮現(xiàn)象。技術(shù)實現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明提供一種velcalcetide凍干粉針劑及其制備方法。該velcalcetide凍干粉針劑顯著改善了velcalcetide注射液的穩(wěn)定性，且該velcalcetide凍干粉針劑不需要在2-8℃下保存，可以在室溫下長期放置，更有利于velcalcetide的推廣和使用。此外，本發(fā)明的凍干工藝能有效的解決在凍干過程中的破瓶現(xiàn)象，本發(fā)明的凍干工藝制備的velcalcetide凍干粉針劑無破瓶。本發(fā)明提供的凍干粉針劑外觀沒有出現(xiàn)分層和萎縮現(xiàn)象，提高成品收率。為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：本發(fā)明提供了一種凍干粉針劑，由藥物有效成分與藥學上可接受的輔料冷凍干燥制成；所述冷凍干燥包括預凍、抽真空、干燥的步驟；所述預凍包括：第一預凍，所述第一預凍的溫度為-36℃～-29℃，所述第一步預凍的保溫時間為1h～3h；第二預凍，所述第二預凍的溫度為-55℃～-42℃，所述第二步預凍的保溫時間為1h～2h；第三預凍，所述第三預凍為1h-2h內(nèi)升溫至-10℃～-7℃，保溫1h～2h；第四預凍，所述第四預凍為1h-2h降溫至-36℃～-29℃，保溫1h～3h；第五預凍，所述第五預凍的溫度為-55℃～-42℃，所述第五步預凍的保溫時間為1h～3h。在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述抽真空所得的真空度為5Pa～30Pa。在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述干燥包括：第一步干燥，所述第一步干燥的溫度為-35℃～-25℃，所述第一步干燥的時間為15h～30h；第二步干燥，所述第二步干燥的溫度為-20℃～-10℃，所述第二步干燥的時間為10h～20h；第三步干燥，所述第三步干燥的溫度為-5℃～5℃，所述第三步干燥的時間為5h～10h；第四步干燥，所述第四步干燥的溫度為至25℃～40℃，所述第四步干燥的時間為5h～10h。在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述藥物有效成分為velcalcetide。在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述藥學上可接受的輔料包括賦形劑、穩(wěn)定劑、pH調(diào)節(jié)劑或注射用水中的一種或兩者以上的混合物。作為優(yōu)選，pH值調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)的pH值為3.0～5.0。在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述凍干粉針劑通過取velcalcetide、賦形劑、穩(wěn)定劑與處方量質(zhì)量百分比52.9％～99.0％的注射用水混合，加入pH值調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值為3.0～5.0后，加入余量的注射用水，混合后得velcalcetide水溶液，經(jīng)冷凍干燥，即得。作為優(yōu)選，本發(fā)明提供的凍干粉針劑中，賦形劑為甘露醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖、或山梨醇中的一種或兩者以上混合物,優(yōu)選甘露醇，乳糖，蔗糖。更為優(yōu)選地，本發(fā)明提供的凍干粉針劑中的賦形劑為甘露醇，乳糖。優(yōu)選地，本發(fā)明提供的凍干粉針劑中穩(wěn)定劑為亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、抗壞血酸、硫代硫酸鈉、L-甲硫氨酸、L-甘氨酸、酪氨酸、甘氨酸、絲氨酸、L-亮氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、天冬氨酸、L-谷氨酸中的一種或者兩者以上混合物。優(yōu)選地，本發(fā)明提供的凍干粉針劑中，pH值調(diào)節(jié)劑為醋酸、醋酸鈉、鹽酸、硫酸、乳酸、蘋果酸、枸櫞酸、磷酸、氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸氫二鈉或枸櫞酸鈉中的一種或兩者以上混合物。在本發(fā)明的一些具體實施方案中，本發(fā)明提供的凍干粉針劑中velcalcetide、賦形劑、穩(wěn)定劑和注射用水的質(zhì)量比為(0.1～2)：(10～107)：(0.03～0.2)：(892.25～989.3)。本發(fā)明還提供了一種凍干粉針劑的制備方法，取藥物有效成分與藥學上可接受的輔料經(jīng)冷凍干燥，制得所述凍干粉針劑；所述冷凍干燥包括預凍、抽真空、干燥的步驟；所述預凍包括：第一步，所述第一步的溫度為-36℃～-29℃，所述第一步的保溫時間為1h～3h；第二步，所述第二步的溫度為-55℃～-42℃，所述第二步的保溫時間為1h～2h；第三步，所述第三步為1h-2h內(nèi)升溫至-10℃～-7℃，保溫1h～2h；第四步，所述第四步為1h-2h降溫至-36℃～-29℃，保溫1h～3h；第五步，所述第五步的溫度為-55℃～-42℃，所述第五步的保溫時間為1h～3h。在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述凍干粉針劑的制備方法中所述抽真空所得的真空度為5Pa～30Pa。在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述凍干粉針劑的制備方法中所述干燥包括：第一步干燥，所述第一步干燥的溫度為-35℃～-25℃，所述第一步干燥的時間為15h～30h；第二步干燥，所述第二步干燥的溫度為-20℃～-10℃，所述第二步干燥的時間為10h～20h；第三步干燥，所述第三步干燥的溫度為-5℃～5℃，所述第三步干燥的時間為5h～10h；第四步干燥，所述第四步干燥的溫度為至25℃～40℃，所述第四步干燥的時間為5h～10h。在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述凍干粉針劑的制備方法中所述藥物有效成分為velcalcetide。在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述凍干粉針劑的制備方法中所述藥學上可接受的輔料包括賦形劑、穩(wěn)定劑、pH調(diào)節(jié)劑或注射用水中的一種或兩者以上的混合物。作為優(yōu)選，pH值調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)的pH值為3.0～5.0。在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述凍干粉針劑的制備方法為取velcalcetide、賦形劑、穩(wěn)定劑與處方量質(zhì)量百分比52.9％～99.0％的注射用水混合，加入pH值調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值為3.0～5.0后，加入余量的注射用水，混合后得velcalcetide水溶液，經(jīng)冷凍干燥，即得。作為優(yōu)選，本發(fā)明提供的凍干粉針劑的制備方法中，賦形劑為甘露醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖、或山梨醇中的一種或兩者以上混合物,優(yōu)選甘露醇，乳糖。更為優(yōu)選地，本發(fā)明提供的凍干粉針劑的制備方法中的賦形劑為甘露醇，乳糖。優(yōu)選地，本發(fā)明提供的凍干粉針劑的制備方法中穩(wěn)定劑為亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、抗壞血酸、硫代硫酸鈉、L-甲硫氨酸、L-甘氨酸、酪氨酸、甘氨酸、絲氨酸、L-亮氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、天冬氨酸、L-谷氨酸中的一種或者兩者以上混合物。優(yōu)選地，本發(fā)明提供的凍干粉針劑的制備方法中，pH值調(diào)節(jié)劑為醋酸、醋酸鈉、鹽酸、硫酸、乳酸、蘋果酸、枸櫞酸、磷酸、氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸氫二鈉或枸櫞酸鈉中的一種或兩者以上混合物。在本發(fā)明的一些具體實施方案中，本發(fā)明提供的凍干粉針劑的制備方法中velcalcetide、賦形劑、穩(wěn)定劑、pH調(diào)節(jié)劑或注射用水的質(zhì)量比為(0.1～2)：(10～107)：(0.03～0.2)：(892.25～989.3)。本發(fā)明提供了一種velcalcetide凍干粉針劑及其制備方法。該velcalcetide凍干粉針劑由velcalcetide、賦形劑、穩(wěn)定劑、pH值調(diào)節(jié)劑和注射用水凍干制成。本發(fā)明提供的制備方法在velcalcetide制劑預凍時使用多步法，將板層降溫至-36℃～-29℃，保溫1h～3h；再降溫至-55℃～-42℃，保溫1h～2h，再用1h～2h升溫至-10℃～-7℃，保溫1h～2h，再用1h～2h降溫至-36℃～-29℃，保溫1h～3h，再降溫至-55℃～-42℃，保溫1～3h。研究發(fā)現(xiàn)，凍干工藝的參數(shù)能影響凍干后破瓶收率和制品的外觀。該velcalcetide凍干粉針劑顯著改善了velcalcetide注射液的穩(wěn)定性，且該velcalcetide凍干粉針劑不需要在2-8℃下保存，可以在室溫下長期放置，更有利于velcalcetide的推廣和使用。本發(fā)明提供的velcalcetide凍干粉針劑顯著改善了velcalcetide的復容性，本發(fā)明提供的velcalcetide凍干粉針劑質(zhì)量好、提高了velcalcetide的穩(wěn)定性，使該藥物制劑且該velcalcetide凍干粉針劑不需要在2-8℃下保存，可以在室溫下長期放置。實驗結(jié)果證實，該velcalcetide凍干粉針劑質(zhì)量好、可以在室溫下長期放置；在注射用水、0.9％氯化鈉注射液或5％葡萄糖注射液中能迅速溶 解，溶解后溶液無色澄清、無雜質(zhì)沉淀、組織相容性良好，更有利于velcalcetide的推廣和使用。此外，本發(fā)明的凍干工藝能有效的解決在凍干過程中的破瓶現(xiàn)象，凍干后無破瓶，而常規(guī)的解決方案是只能提高收率，不能完全解決凍干破瓶現(xiàn)象，依然有少量破瓶。本發(fā)明提供的凍干粉針劑外觀沒有出現(xiàn)分層和萎縮現(xiàn)象，提高成品收率。綜合上述試驗結(jié)果，處方加入穩(wěn)定劑能提高改善其對溫度的敏感性，不需要在2-8℃條件下保存，可以在25℃下保存。。凍干工藝提高成品收率，解決破瓶，分層，萎縮的現(xiàn)象，改善復溶，主要解決了普通的凍干工藝出現(xiàn)的問題。具體實施方式本發(fā)明公開了一種凍干粉針劑及其制備方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應用已經(jīng)通過較佳實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應用本發(fā)明技術(shù)。本發(fā)明提供的凍干粉針劑及其制備方法中所用原料及試劑均可由市場購得。下面結(jié)合實施例，進一步闡述本發(fā)明：實施例1velcalcetide凍干粉針劑的制備處方：按處方量稱取velcalcetide、山梨醇、抗壞血酸，用100g的注射用水溶解velcalcetide、300g的注射用水溶解山梨醇、100g的注射用水溶解抗壞血酸， 將所得velcalcetide溶液、山梨醇溶液、抗壞血酸溶液混合均勻，用醋酸調(diào)節(jié)pH值至pH3.0之后，繼續(xù)添加剩余的注射用水，得1000gvelcalcetide水溶液，0.2μm過濾器過濾除菌，以5.0mL/支分裝于西林瓶中。將所得裝有velcalcetide水溶液的西林瓶放入真空冷凍干燥機中，預凍開始，將板層降溫至-29℃，并保溫3h；再降溫至-50℃，保溫1h，再用1h升溫至-7℃，保溫2h，再用1h降溫至-29℃，并保溫3h，再降溫至-50℃，保溫1h，再即完成了預凍。預凍結(jié)束后，抽真空(真空度：5pa)、啟動升溫，進行干燥，-35℃干燥30h，升溫至-20℃，干燥10h；升溫至-5℃，干燥10h；升溫至25℃，干燥10h。壓塞，出箱，扎蓋，即得velcalcetide凍干粉針劑。實施例2velcalcetide凍干粉針劑的制備處方：按處方量稱取velcalcetide、甘露醇、L-甲硫氨酸，用100g的注射用水溶解velcalcetide、400g的注射用水溶解甘露醇、100g的注射用水溶解L-甲硫氨酸，將所得velcalcetide溶液、甘露醇溶液、L-甲硫氨酸溶液混合均勻，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至pH4.0之后，繼續(xù)添加剩余的注射用水，得1000gvelcalcetide水溶液，0.2μm過濾器過濾除菌，以5.0mL/支分裝于西林瓶中。將所得裝有velcalcetide水溶液的西林瓶放入真空冷凍干燥機中，預凍開始，將板層降溫至-31℃，保溫2h；再降溫至-55℃，保溫1h，再用2h升溫至-8℃，保溫2h，再用2h降溫至-31℃，保溫1h，再降溫至-55℃，保溫1h。預凍結(jié)束后，抽真空(真空度：10pa)、啟動升溫，進行干燥，-30℃干燥20h，升溫至-15℃，干燥15h；升溫至0℃，干燥10h；升溫至28℃，干燥10h。壓塞，出箱，扎蓋，即得velcalcetide凍干粉針劑。實施例3velcalcetide凍干粉針劑的制備處方：按處方量稱取velcalcetide、乳糖、L-亮氨酸，用100g的注射用水溶解velcalcetide、500g的注射用水溶解乳糖、50g的注射用水溶解L-亮氨酸、將所得velcalcetide溶液、乳糖溶液、L-亮氨酸溶液、混合均勻，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至pH3.5之后，繼續(xù)添加剩余的注射用水，得1000gvelcalcetide水溶液，0.2μm過濾器過濾除菌，以5.0mL/支分裝于西林瓶中。將所得裝有velcalcetide水溶液的西林瓶放入真空冷凍干燥機中，預凍開始，將板層降溫至-32℃，保溫1h；再降溫至-48℃，保溫2h，再用2h升溫至-9℃，保溫2h，再用2h降溫至-32℃，保溫1h，再降溫至-48℃，保溫2h。預凍結(jié)束后，抽真空(真空度：12pa)、啟動升溫，進行干燥，-25℃干燥20h，升溫至-10℃，干燥15h；升溫至5℃，干燥5h；升溫至30℃，干燥8h。壓塞，出箱，扎蓋，即得velcalcetide凍干粉針劑。實施例4velcalcetide凍干粉針劑的制備處方：按處方量稱取velcalcetide、甘露醇、精氨酸，用100g的注射用水溶解velcalcetide、700g的注射用水溶解甘露醇、100g的注射用水溶解精氨酸，將所得velcalcetide溶液、甘露醇溶液、精氨酸溶液混合均勻，用醋酸調(diào)節(jié)pH值至pH3.0之后，繼續(xù)添加剩余的注射用水，得1000gvelcalcetide水溶液，0.2μm過濾器過濾除菌，以5.0mL/支分裝于西林瓶中。將所得裝有velcalcetide水溶液的西林瓶放入真空冷凍干燥機中，預凍開始，將板層降溫至-33℃，保溫1h；再降溫至-45℃，保溫1h，再用2h升溫至-10℃，保溫1h，再用1h降溫至-33℃，保溫1h，再降溫至-45℃，保溫3h。預凍結(jié)束后，抽真空(真空度：22pa)、啟動升溫，進行干燥，-27℃干燥15h，升溫至-18℃，干燥15h；升溫至0℃，干燥8h；升溫至35℃，干燥6h。壓塞，出箱，扎蓋，即得velcalcetide凍干粉針劑。實施例5velcalcetide凍干粉針劑的制備處方：按處方量稱取velcalcetide、甘露醇、L-谷氨酸，用100g的注射用水溶解 velcalcetide、500g的注射用水溶解甘露醇、100g的注射用水溶解L-谷氨酸，將所得velcalcetide溶液、甘露醇溶液、L-谷氨酸溶液混合均勻，用醋酸調(diào)節(jié)pH值至pH3.3之后，繼續(xù)添加剩余的注射用水，得1000gvelcalcetide水溶液，0.2μm過濾器過濾除菌，以5.0mL/支分裝于西林瓶中。將所得裝有velcalcetide水溶液的西林瓶放入真空冷凍干燥機中，預凍開始，將板層降溫至-34℃，保溫1h；再降溫至-48℃，保溫2h，再用1h升溫至-10℃，保溫1h，再用2h降溫至-34℃，保溫1h，再降溫至-48℃，保溫3h。預凍結(jié)束后，抽真空(真空度：25pa)、啟動升溫，進行干燥-25℃干燥30h，升溫至-20℃干燥18h；升溫至0℃，干燥5h；升溫至40℃，干燥5h。壓塞，出箱，扎蓋，即得velcalcetide凍干粉針劑。實施例6velcalcetide凍干粉針劑的制備處方：按處方量稱取velcalcetide、乳糖、L-甘氨酸，用100g的注射用水溶解velcalcetide、400g的注射用水溶解乳糖、100g的注射用水溶解L-甘氨酸，將所得velcalcetide溶液、甘露醇溶液、L-甘氨酸溶液混合均勻，用醋酸、氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至pH3.5之后，繼續(xù)添加剩余的注射用水，得1000gvelcalcetide水溶液，0.2μm過濾器過濾除菌，以5.0mL/支分裝于西林瓶中。將所得裝有velcalcetide水溶液的西林瓶放入真空冷凍干燥機中降溫，預凍開始，將板層降溫至-35℃，并保溫1h；再將制品的溫度至-43℃，保溫1h；再用1h升溫至-10℃，保溫1h，再用2h降溫至-35℃，保溫1h，再降溫至-43℃，保溫3h。預凍結(jié)束后，抽真空(真空度：20pa)、啟動升溫，進行干燥-25℃干燥15h，升溫至-20℃干燥17h；升溫至0℃，干燥7h；升溫至40℃，干燥6h。壓塞，出箱，扎蓋，即得velcalcetide凍干粉針劑。實施例7velcalcetide凍干粉針劑的制備處方：按處方量稱取velcalcetide、甘露醇、L-甲硫氨酸，用100g的注射用水溶解velcalcetide、400g的注射用水溶解甘露醇、100g的注射用水溶解L-甲硫氨酸，將所得velcalcetide溶液、甘露醇溶液、L-甲硫氨酸溶液混合均勻，用磷酸二氫鈉調(diào)節(jié)pH值至pH4.0之后，繼續(xù)添加剩余注射用水，得1000gvelcalcetide水溶液，0.2μm過濾器過濾除菌，以5.0mL/支分裝于西林瓶中。將所得裝有velcalcetide水溶液的西林瓶放入真空冷凍干燥機中，預凍開始，將板層降溫至-36℃，并保溫2h；再降溫至-42℃，保溫1h，再用1.5h升溫至-9℃，保溫2h，再用1.5h降溫至-36℃，保溫3h，再降溫至-42℃，保溫1h。預凍結(jié)束后，抽真空(真空度：30pa)、啟動升溫，先升溫至-28℃，干燥20h；再升溫至-18℃，干燥20h；再升溫至3℃，干燥5h；再升溫至38℃，干燥5h。壓塞，出箱，扎蓋，即得velcalcetide凍干粉針劑。實施例8velcalcetide制劑對照組的制備以對照組1至對照組3制備獲得的velcalcetide制劑為對照。對照組1為velcalcetid注射液，對照組2和對照組3為采用常規(guī)的冷凍干燥工藝制備獲得velcalcetide制劑，各個對照組的velcalcetide制劑的制備方法如下：對照組1：處方：按處方量稱取velcalcetide、甘露醇，用注射用水分別溶解velcalcetide，甘露醇，并混勻。繼續(xù)添加注射用水至總重，0.2μm過濾，以5.0mL/支分裝于西林瓶中。對照組2：處方：按處方量稱取velcalcetide、甘露醇，用注射用水分別溶解velcalcetide，甘露醇，并混勻，用磷酸氫二鈉調(diào)pH值pH7.2。繼續(xù)添加注射用水至總重，0.2μm過濾，以5.0mL/支分裝于西林瓶中。將所得裝有velcalcetide水溶液的西林瓶放入真空冷凍干燥機中，預凍開始，經(jīng)1h，將板層降溫至-42℃，保溫3h。預凍結(jié)束，開始抽真空，當真空達到24Pa時，開始升溫，先升溫至-35℃，干燥2h；再升溫至-20℃，干燥2h；再升溫至-5℃，干燥2h；再升溫至10℃，干燥12小時，壓塞，出箱，扎蓋，即得。對照組3：處方：按處方量稱取velcalcetide、甘露醇，用注射用水分別溶解velcalcetide，甘露醇，并混勻，用鹽酸調(diào)pH值pH2.5。繼續(xù)添加注射用水至總重，0.2μm過濾，以5.0mL/支分裝于西林瓶中。將所得裝有velcalcetide水溶液的西林瓶放入真空冷凍干燥機中，預凍開始，經(jīng)1h，將板層降溫至-45℃，保溫3h。預凍結(jié)束，開始抽真空，當真空達到20Pa時，先升溫至-28℃，干燥14h；再升溫至-18℃，干燥8h；再升溫至3℃，干燥4h；再升溫至38℃，干燥5h，壓塞，出箱，扎蓋，即得velcalcetide凍干粉針劑。實施例9凍干后的破瓶率和成品收率凍干后的破瓶率和成品收率見表1。表1凍干后破瓶率和成品收率結(jié)果采用多步法預凍，完全解決了velcalcetide凍干制劑破瓶的問題。凍干后無破瓶，而常規(guī)的解決方案是不能完全解決凍干破瓶現(xiàn)象，依然有少量破瓶；且采用本發(fā)明的凍干工藝成品外觀好，無萎縮和分層現(xiàn)象，明顯提高成品收率。實施例10穩(wěn)定性試驗穩(wěn)定性試驗：分別取實施例1至實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑、各個對照組提供的velcalcetide制劑，于溫度25±2℃、相對濕度60±10％、光照強度：200±10LX的試驗箱中，放置6個月，分別在第0、1、2、3、6個月的月末取樣進行穩(wěn)定性重點項目考察，結(jié)果見表2。表2穩(wěn)定性試驗檢測結(jié)果從表2中試驗結(jié)果可知，對照組1(velcalcetide注射液)隨著時間的延長，雜質(zhì)含量大幅增加，，澄清度不合格，復溶所得溶液變黃，不溶性微粒超標；對照組2和對照組3制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑在0月進行復溶時就出現(xiàn)復溶困難、分層、沉淀等現(xiàn)象，澄清度不合格；所以，對照組1、對照組2和對照組3制備獲得的velcalcetide制劑質(zhì)量差，不合格。本發(fā)明實施例1至實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑質(zhì)量更穩(wěn)定，放置6月后，復溶性良好，所得復溶后澄清度良好，而velcalcetide注射液溶液變黃、有不溶性微粒產(chǎn)生。實施例1至實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑在放置6個月后，總雜質(zhì)的質(zhì)量百分含量不超過1.5％，最大單雜不超過0.5％，而對照組1.對照組2.對照組3制備的velcalcetide制劑的總雜質(zhì)均超過了3％，單個雜質(zhì)均超過了2％，差異顯著(P＜0.05)，說明實施例1至實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑穩(wěn)定性高于velcalcetide注射液，也優(yōu)于常規(guī)方法制備的凍干制劑。綜上所述，本發(fā)明實施例1至實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑的復溶性好、可以在室溫下長期放置。實施例11velcalcetide凍干粉針劑動物安全性試驗(1)血管刺激性試驗受試對象：選取雙耳無損傷的健康家兔(來源于第三軍醫(yī)大學實驗動物中心)42只，隨機分為7組，每組6只，標記為試驗組1至試驗組7。受試藥物：實施例1至實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑。試驗方法：取實施例1至實施例7制備獲得velcalcetide凍干粉針劑，每個西林瓶中分別加入1mL的5％的葡萄糖進行復溶，得velcalcetide注射液備用。所有受試對象的左側(cè)耳緣靜脈注射velcalcetide注射液1mL，右耳注射1mL的5％葡萄糖注射液，每天1次，連續(xù)注射7天，其中試驗組1的受試對象注射實施例1制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試 驗組2的受試對象注射實施例2制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組3的受試對象注射實施例3制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組4的受試對象注射實施例4制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組5的受試對象注射實施例5制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組6的受試對象注射實施例6制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組7的受試對象注射實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液。檢測方法和試驗結(jié)果：注射期間，每天定時觀察耳緣靜脈的刺激性反應。第8天處死家兔，取雙側(cè)耳緣靜脈及周圍組織，用甲醛固定，在距注射部位分別為110cm、215cm、315cm的近心端作常規(guī)組織切片，光鏡下觀察有無病理變化。血管刺激性的觀察指標、評分標準及判斷標準見表3，各個組別受試對象的左耳血管刺激性檢測結(jié)果表4，各個組別受試對象的右耳血管刺激性檢測結(jié)果見表4。表3血管刺激性觀察指標、評分標準及判斷標準表4各個組別受試對象的血管刺激性檢測結(jié)果從表4檢測結(jié)果可知，所有組別的左耳和右耳的評價結(jié)果類似，肉眼觀察，均未見血管充血，周圍組織水腫等炎癥反應；組織切片檢查，也未見血管結(jié)構(gòu)異常，內(nèi)皮損傷，血栓形成及其他病理變化。即實施例1至實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑配制成的注射液的刺激性與溶媒相比，差異不顯著(P＞0.05)，均沒有產(chǎn)生刺激性，說明本發(fā)明實施例1至實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑對血管無刺激性。(2)肌肉刺激性試驗受試對象：取健康家兔(來源于第三軍醫(yī)大學實驗動物中心)42只，隨機分為7組，每組6只，標記為試驗組1至試驗組7。受試藥物：實施例1至實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑；試驗方法：取實施例1至實施例7制備獲得velcalcetide凍干粉針劑，每個西林瓶中分別加入1mL的生理鹽水進行復溶，得velcalcetide注射液備用。所有受試對象的左側(cè)股四頭肌注射velcalcetide注射液1mL，右側(cè)股四頭肌注射1mL的生理鹽水，其中試驗組1的受試對象注射實施例1制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組2的受試對象注射實施例2制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗 組3的受試對象注射實施例3制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組4的受試對象注射實施例4制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組5的受試對象注射實施例5制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組6的受試對象注射實施例6制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組7的受試對象注射實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液。檢測方法和試驗結(jié)果：注射后，觀察注射部位肌肉有無充血，水腫等反應，半數(shù)動物48h后(第3天)放血處死，縱向切開皮膚，肉眼觀察兩側(cè)注射部位有無充血，水腫等反應，并取其組織做病理檢查。余下動物繼續(xù)觀察14天，于第18天放血處死后重復上述操作。velcalcetide注射液對肌肉刺激性反應評價標準見表5，第3天檢測結(jié)果見表6，第18天的檢測結(jié)果見表7。表5肌肉刺激性反應評價標準級別刺激反應現(xiàn)象0級給藥部位無明顯反應。1級給藥部位輕度充血，直徑小于0.15cm。2級給藥部位中度充血，直徑0.15～1.0cm。3級給藥部位重度充血，紅腫，肌肉有變性。4級出現(xiàn)肌肉褐色變性，壞死。5級肌肉嚴重變性，出現(xiàn)大面積壞死。表6第3天各個組別受試對象肌肉刺激性反應檢測結(jié)果表7第18天各個組別受試對象肌肉刺激性反應檢測結(jié)果從表6、表7中檢測結(jié)果可知，家兔左側(cè)股四頭肌內(nèi)注射本發(fā)明實施例1至7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的注射液后，肉眼觀察注射部位肌肉無充血，水腫等反應，病理組織檢查亦未見組織變性或壞死等明顯性刺 激反應，與生理鹽水相比無顯著性差異(P＞0.05)。說明本發(fā)明實施例1至實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑對肌肉沒有刺激性，使用安全。(3)對豚鼠的致敏試驗受試對象：選取健康豚鼠(來源于廣東省實驗動物中心)54只，隨機分為9組，每組6只，分別標記為陰性對照組、陽性對照組、試驗組1至試驗組7。受試藥物：試驗組為實施例1至實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑；陰性對照組為溶媒；陽性對照組給予牛血清白蛋白(已知致敏陽性物質(zhì))。試驗方法和檢測方法：取實施例1至實施例7制備獲得velcalcetide凍干粉針劑，每個西林瓶中分別加入1mL的5％的葡萄糖注射液進行復溶，得velcalcetide注射液備用。各個組別受試對象在腹腔注射受試藥物，隔日注射1次，共注射3次，然后隨機分為2組，分別再在第1次給藥后14天，靜脈注射受試藥物，觀察豚鼠有無豎毛，噴嚏，干嘔，咳嗽，呼吸困難等過敏癥狀，如出現(xiàn)兩種或兩種以上癥狀，或有抽搐，虛脫，死亡現(xiàn)象之一者，判為陽性。檢測結(jié)果見表8。其中試驗組1的受試對象注射實施例1制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組2的受試對象注射實施例2制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組3的受試對象注射實施例3制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組4的受試對象注射實施例4制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組5的受試對象注射實施例5制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組6的受試對象注射實施例6制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組7的受試對象注射實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、陰性對照組注射5％的葡萄糖注射液、陽性對照組注射牛血清白蛋白。表8致敏試驗檢測結(jié)果組別檢測結(jié)果試驗組1受試對象均為陰性試驗組2受試對象均為陰性試驗組3受試對象均為陰性試驗組4受試對象均為陰性試驗組5受試對象均為陰性試驗組6受試對象均為陰性試驗組7受試對象均為陰性陰性對照組受試對象均為陰性陽性對照組受試對象均為陽性結(jié)果表明，陽性試驗組豚鼠均產(chǎn)生了過敏反應、而陰性對照組和試驗組1至試驗組7受試對象均活動正常，未見呼吸異常等反應，即未有過敏反應。說明本發(fā)明實施例1至實施例7制備獲得velcalcetide凍干粉針劑對豚鼠沒有致敏反應，使用安全。(4)體外溶血實驗受試材料：取家兔血液，制備紅細胞壓積百分比為2％的紅細胞混懸液：制備方法為：取新鮮兔血15mL，放入盛有玻璃珠的三角燒瓶中振搖10分鐘，除去纖維蛋白質(zhì)，使成脫纖血液。加入生理鹽水100mL，搖勻，1500r/min離心15分鐘，除去上清液，沉淀的紅細胞再用生理鹽水按上述方法洗滌3次，至上清液不顯紅色為止。將所得紅細胞用生理鹽水配成2％的混懸液(紅細胞2mL，加生理鹽水至100mL)，供試驗用。受試藥物：實施例1至實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑，每個西林瓶中分別加入1mL的0.9％氯化鈉注射液進行復溶，得velcalcetide注射液。試驗方法：試驗共分為7組，試驗組1至試驗組7，分別進行各個組別的velcalcetide注射液的溶血實驗，其中試驗組1使用實施例1制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組2使用實施例2制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組3使用實 施例3制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組4使用實施例4制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組5使用實施例5制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組6使用實施例6制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組7使用實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液。試驗操作具體為：各個組別分別取試管7支，進行編號，然后按表9加入各種液體，將各試管輕輕搖勻，置37℃恒溫水浴中孵育，觀察0.5、1、2、3小時的結(jié)果，記錄各個時間點的檢測結(jié)果。紅細胞體外凝集與溶血的判斷標準見表10，各個組別的檢測結(jié)果見表11。表9注射液體外溶血試驗加樣表表10紅細胞體外凝集與溶血的判斷標準表11各個組別的檢測結(jié)果注：“--”代表該待測樣品在3h之內(nèi)沒有出現(xiàn)溶血現(xiàn)象從表11中的實驗結(jié)果可知，所有組別蒸餾水對照管，即7號試管，在0.5小時完全溶血和發(fā)生了細胞凝集反應；而其他試管在3小時內(nèi)均沒有發(fā)生溶血現(xiàn)象、也沒有發(fā)生細胞凝集反應。說明本發(fā)明實施例1至實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑沒有產(chǎn)生溶血現(xiàn)象，使用安全。(5)急性全身毒性試驗受試對象：取健康小鼠(來源于廣東省實驗動物中心)40只，將小鼠隨機分為8組，每組5只，標記為對照組、試驗組1至試驗組7，分別放入固定器內(nèi)。受試藥物：實施例1至實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑。試驗方法：取實施例1實施例7制備獲得velcalcetide凍干粉針劑，每個西林瓶中分別加入1mL的注射用水進行復溶，得velcalcetide注射液備用。試驗組1至試驗組7分別注射入本發(fā)明實施例1至實施例7制備的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液，對照組注入注射用水，注射速度均為0.1mL/s，注射劑量為50mL/kg。其中試驗組1的受試對象注射實施例1制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組2的受試對象注射實施例2制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組3的受試對象注射實施例3制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組4的受試對象注射實施例4制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組5的受試對象注射實施例5制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組6的受試對象注射實施例6制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液、試驗組7的受試對象注射實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液。檢測方法和試驗結(jié)果：注射完畢后，觀察小鼠即時反應，并于4h、24h、48h和72h時，分別觀察和記錄試驗組1至試驗組7、對照組動物的一般狀態(tài)、毒性表現(xiàn)和死亡動物數(shù)，最后統(tǒng)計各個組別的受試對象的中毒反應情況。判斷動物是否發(fā)生中毒反應的觀察指標見表12。各個組別的受試對象受試72h之后的檢測結(jié)果見表13。表12注射受試藥物后判斷動物中毒反應的觀察指標表13各個組別的受試對象的急性全身毒性試驗檢測結(jié)果從表13中數(shù)據(jù)可知，在72小時觀察期內(nèi)，與對照組相比、試驗組1至實驗組7的受試動物均沒有發(fā)生中毒反應，無動物死亡，體質(zhì)量無明顯變化。說明實施例1實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑對小鼠沒有產(chǎn)生中毒反應，使用安全。綜上所述，注射本發(fā)明實施例1至實施例7制備獲得的velcalcetide凍干粉針劑制成的velcalcetide注射液具有良好的組織相容性，表明本發(fā)明制備的velcalcetide凍干粉針劑質(zhì)量穩(wěn)定、組織相容性好、安全性好，可供臨床注射使用。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發(fā)明的保護范圍。當前第1頁1 2 3