用于蛋白質藥物偶聯物的支鏈聯接體本申請是申請日為2012年2月23日、中國專利申請?zhí)枮?01280010479.6(國際申請?zhí)枮镻CT/EP2012/053039)、發(fā)明名稱為“用于蛋白質藥物偶聯物的支鏈聯接體”的發(fā)明專利申請的分案申請。技術領域本發(fā)明涉及用于連接蛋白質和連接藥物到蛋白質藥物偶聯物的方法，其中所述藥物通過特定的支鏈聯接體連接到蛋白質，所述支鏈聯接體包含肽鏈并衍生自鄰羥基對氨基芐醇，其中，所述肽鏈通過對氨基連接到苯基環(huán)，該藥物通過芐基醇的部分連接到苯環(huán)上，所述蛋白質通過鄰-羥基基團連接到苯環(huán)上；本發(fā)明進一步涉及通過各種中間體制備所述蛋白質-藥物-偶聯物的方法，涉及這樣的蛋白質藥物偶聯物的藥學用途，如控制不良細胞的生長的方法，涉及包含這樣的蛋白質藥物偶聯物的藥物組合物，以及涉及制備所述蛋白質藥物偶聯物的中間體。

背景技術：
大多數用于化療的藥物有嚴重的副作用，這限制了它們的療效和用途。將這樣的有效載荷(payload)(即藥物活性的化合物，如藥物)連接至靶向劑(特別是單克隆抗體)能提供新的抗體藥物偶聯物(ADC)，例如用于癌癥治療。組織特異性通常受單克隆抗體(mAb)成分控制，同時藥物提供治療效果。ADC的效率和耐受性依賴于靶抗原、藥物效價和偶聯技術之間的相互作用。特別地，聯接體的化學性質強烈地影響ADC的特異性和安全性。替代在生理細胞外的條件下具有有限穩(wěn)定性的化學性質不穩(wěn)定的聯接體，如基于腙和二硫化物的聯接體，在生理細胞外的條件下穩(wěn)定的聯接體，特別是具有高血漿穩(wěn)定性的聯接體，對于改善治療的適用性是合乎期望的，這是因為藥物應該只在細胞內釋放，該細胞由蛋白質靶向(target)，其中該藥物被連接到該蛋白質，并且不在細胞外。非裂解的聯接體具有缺點：對于有效載荷釋放，在mAb的多肽主鏈的完全水解后需要ADC內化(internalization)，并且當ADC內化差的時候，可能遇到藥效降低。因此，攜帶非裂解的聯接體的ADC高度依賴于靶細胞的生物學。此外，當有效載荷在mAb的降解后連接到mAb的最后的氨基酸時，并非所有的有效載荷保留其生物活性。為了允許ADC不僅對腫瘤細胞，而且對相鄰的抗原陰性細胞提供有效載荷(即旁觀者效應)，釋放的有效載荷必須容易擴散通過疏水性的細胞膜，但當帶有非裂解的聯接體的ADC以氨基酸的形式釋放其有效載荷時，情況并非如此，該有效載荷攜帶具有處于兩性離子狀態(tài)的氨基酸(即具有帶正電荷的銨和帶負電荷的羧酸鹽)的藥物。因此，有這樣的聯接體，其顯示出高的血漿穩(wěn)定性，并釋放藥物而在該藥物釋放之后無需將其化學改性，這是合乎期望的。此外，合乎期望的是，具有蛋白質藥物偶聯物，其顯示降低的附聚或聚集，附聚或聚集會損害其性能。EP624377中公開了一種藥物配體偶聯物，其中，所述聯接體包括線性肽。FannyGuzman等，ElectronicJournalofBiotechnology，2007，10，279-314；YoshioOkada，CurrentOrganicChemistry，2001，5，1-43；US6897289B和教科書Houben-WeylSynthesisofPeptidesandPeptidomimetics(MethodsinOrganicChemistry)"，MurrayGoodman等，ThiemePublishingGroup，2001，特別是VolumesE22a和E22b；公開了保護基團，肽鍵的形成，詳細介紹了合成多肽和蛋白質的一般和具體的方法，和用于確定肽的結構和組成的分析技術。已知的包括線性肽鏈的聯接體仍然顯示不足。顯示提高性能的聯接體和基于這樣的聯接體的蛋白質藥物偶聯物是有需要的。令人驚訝的是，衍生自鄰羥基對氨基芐醇的特定支鏈聯接體顯示出所需的性能。

技術實現要素：
在下面的文本中，如果沒有特別聲明，使用下列縮寫：DCCN,N'-二環(huán)己基碳二亞胺EDCN-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亞胺Fmoc9-芴甲氧羰基Boc叔丁氧基羰基Boc2O二-叔-丁基二碳酸酯Cit瓜氨酸NBSN-溴代丁二酰亞胺NHS式(HOSu)化合物，N-羥基琥珀酰亞胺NISN-碘代丁二酰亞胺-OTs甲苯磺酸鹽-OMs甲磺酸鹽-OTf三氟甲磺酸鹽PBS磷酸鹽緩沖鹽水Red-Al二(2-甲氧基乙氧基)氫化鋁鈉TCEP三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽Tos或Ts甲苯磺酰基或對-甲苯磺?；鵗sCl甲苯磺酰氯或對甲苯磺酰氯Z或Cbz芐氧羰基本發(fā)明的主題是一種用于連接配體LI與藥物DR的方法(MI)，LI選自：氨基酸LI-AA、單或多克隆抗體LI-Ab、抗體片段LI-AbFrag、蛋白質LI-Prot和肽LI-Pep；DR是一種藥學上的活性藥物；特征在于聯接體LIN用于共價連接LI與DR；LIN包括連接基團CG2；CG2從鄰羥基對氨基芐醇衍生，并且是式(CG2-1)連接基團；(***)表示用于連接LI的連接部位；(****)表示用于連接DR的連接部位；(******)表示連接直鏈肽的連接部位，所述肽具有2至8個氨基酸殘基；(4)表示CG2從其衍生的所述鄰羥基對氨基芐醇的對氨基基團。本發(fā)明進一步的主題是一種方法(MI)，方法(MI)如本說明書中所定義，以及所有其優(yōu)選實施方式，其中，LI與DR以式(I)化合物的形式共價連接；CG2如本說明書中所定義，并具有所有其優(yōu)選實施方式；CG1是是連接基團，其選自式(CG1-I)連接基團、(CG1-II)連接基團、(CG1-III)連接基團和式(CG1-IV)連接基團；m30和m32是相同的或不同的，并且彼此獨立地是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；在所述式CG1中的(*)表示T1和CG1之間的鍵，共價連接的LI在式(Ⅰ)化合物中形成配位體殘基LIRes，LIRes通過T1共價連接到CG1；LI如本說明書中所定義，也具有所有其優(yōu)選實施方式，并且是式(LIRes-T1-H)化合物；LIRes-T1-H(LIRes-H)LIRes選自：氨基酸殘基LIRes-AA、單或多克隆抗體殘基LIRes-Ab、抗體片段殘基LIRes-AbFrag、蛋白質殘基LIRes-Prot和肽殘基LIRes-Pep；LI具有選自SH、OH或NH2中的官能團，該官能團在式(I)中形成所述T1，所述T1通過所述鍵(*)鍵合到CG1；T1是-S-、-O-或-NH-；n1是0或1；SG是選自式(SG-II)間隔基團和式(SG-III)間隔基團中的間隔基團；m1和m2是相同的或不同的，并且彼此獨立地是0或1；m10、m11和m12是相同的或不同的，并且彼此獨立地是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；其條件為m2和m10不同時為0；其條件為m1、m11和m12不同時為0；SGPEG是式(SGPEG-I)連接基團；m20是1、2、3、4、5或6；n2是0或1；T4是-O-；CG3選自式(CG3-I)連接基團和式(CG3-II)連接基團；R5和R6是相同的或不同的，并且彼此獨立地是C1-4烷基；對于n1為1，在所述式CG1和所述式SG中的所述(**)表示CG1和SG之間的鍵，在所述式SG和所述式CG2中的所述(***)表示SG和CG2之間的鍵；如果CG1是式(CG1-I)連接基團，那么用在SG中的(**)表示的氮原子形成環(huán)內氮原子，從而所述氮原子的氫原子被內環(huán)鍵取代；對于n1為0，在所述式CG1中的所述(**)和在所述分子式CG2中的所述(***)表示CG1和CG2之間的所述鍵；其條件為，如果n1為0，那么CG1不是式(CG1-I)連接基團；對于n2為1，在所述式CG2和所述式CG3中的所述(****)表示將CG2和CG3連接到T4的鍵；且在式CG3中的所述(*****)表示CG3和T2之間的鍵；對于n2為0，所述式CG2中的所述(****)表示CG2和T2之間的鍵；所述式CG2中的所述(******)表示CG2和AAn4之間的鍵；共價連接的DR在式(I)化合物中形成藥物殘基DRRes，所述DRRes通過T2共價連接至CG2；DR如本說明書中所定義，具有所有其優(yōu)選實施方式，并且是式(DRRes-T2-H)化合物；H-T2-DRRes(DRRes-T2-H)DRRes是衍生自DR的藥物殘基；DR具有選自-N(R4)H、-OH或-SH的官能團，所述官能團在式(I)中形成所述T2；T2是-N(R4)-、-O-或-S-；R4是H或C1-4烷基；n3是2、3、4、5、6、7或8；n4是1至n3的整數；AAn4是氨基酸殘基，n4是所述氨基酸殘基的指數，且(AAn4)n3是具有n3個氨基酸殘基AAn4的直鏈肽，且n4表示從CG2開始的所述肽中的所述氨基酸殘基AAn4的位置，在所述肽中單個氨基酸殘基通過肽鍵彼此連接，AA1是所述鏈中的第一氨基酸殘基，并通過鍵(******)連接到CG2，所述鍵(******)是AA1的羧酸基團與用CG2的(4)表示的所述氨基基團中間的鍵，且AAn3是所述鏈中的最后的氨基酸殘基，單個AAn4彼此獨立地是相同或不同的；(3)表示AAn3的N-末端氨基基團；R1和R2是相同的或不同的，并且彼此獨立地選自氫、C1-4烷基，C(O)-(CH2-O-)m5-(GRPEG)m4-R3和PGN；R3是C1-4烷基；m4是0或1；m5是0或1；PGN是保護基團；GRPEG是式(GRPEG-I)連接基團；m21是1、2、3、4、5或6。LI、DR和CG2如本說明書中所定義，也具有所有其優(yōu)選實施方式。優(yōu)選地，LIN是式(LIN)化合物。優(yōu)選地，該藥物DR選自細胞毒性劑、其它化療劑和抗轉移劑。優(yōu)選地，其它化療劑和抗轉移劑選自酪氨酸激酶抑制劑和Rac1抑制劑。優(yōu)選地，酪氨酸激酶抑制劑選自由伊馬替尼(Imatinib)、拉帕替尼(Lapatimib)、舒尼替尼(Sunitimib)、尼羅替尼(Nilotimib)、達沙替尼(Dasatimib)組成的活性藥物成分(API)群組。優(yōu)選地，Rac抑制劑是NSC23766。優(yōu)選的細胞毒性劑是用于治療癌癥的細胞毒性劑。細胞毒性劑的優(yōu)選類別包括，例如，酶抑制劑，如蒽環(huán)類藥物，博萊霉素，細胞毒性核苷，二氫葉酸還原酶抑制劑，分化誘導劑，DNA裂解劑，DNA嵌入劑，烯二炔(diynenes)，絲裂霉素(mitomycins)，鬼臼毒素(podophyllotoxins)，蝶啶(pteridine)族藥物，紫杉醇(taxols)，胸苷酸合成酶(thymidylatesynthase)抑制劑，拓撲異構酶(topoisomerase)抑制劑，和長春花堿(vinca)藥物。各種類別的細胞毒性劑的優(yōu)選的有用成員選自：N8-乙酰亞精胺、放線菌素、9-氨基喜樹堿、氨基喋呤、蛇形菌素(anguidine)、蒽環(huán)類藥物、auristatin、博來霉素、卡里奇霉素(calicheamycin)、喜樹堿(內酯或開環(huán)形式的內酯)、洋紅霉素、CC-1065、氯法拉濱(clofaribine)、1-(2-氯乙基)-1,2–二甲烷磺酰酰肼、環(huán)丙苯并吲哚-4-酮(CBI)、阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷(cytosinearabinoside)、道諾霉素、二氯甲氨蝶呤、正-(5,5-二乙酰氧基戊基)多柔比星、1,8-二羥基-雙環(huán)[7.3.1]十三碳-4-9-二烯-2、6-二炔-13-酮、二氟核苷、多柔比星、倍癌霉素(duocarmycin)、表柔比星(epirubicin)、埃斯培拉霉素(esperamicin)、足葉乙甙、5-氟尿嘧啶、伊立替康、leurosideine、環(huán)氧長春堿(leurosine)、美登素、美法侖、6-巰基嘌呤、甲喋呤(methopterin)、甲氨喋呤、絲裂霉素A、絲裂霉素C、嗎啉-多柔比星、奈莫柔比星(nemorubicin)、鬼臼毒素和鬼臼毒素衍生物，如依托泊苷或磷酸依托泊苷、維甲酸、皂素、它利霉素(tallysomycin)、長春花堿、長春新堿、長春地辛、紫杉烷，如紫杉醇(Taxol)或紫杉醇(paclitaxel)、泰索帝(Taxotere)或多烯紫杉醇、和泰索帝視黃酸、以及它們的相似物和衍生物。更優(yōu)選的細胞毒性藥物，選自蒽環(huán)類藥物、auristatin、卡里奇霉素(calicheamycin)、環(huán)丙苯并吲哚-4-酮(CBI)、多柔比星、duocarmycin、美登素、絲裂霉素C、紫杉醇及其相似物和這些物質的衍生物。優(yōu)選地，R4是H。優(yōu)選地，T1是-NH-或-S-。優(yōu)選地，n2是1，T2是-NH-、-O-或-S-，并通過鍵(*****)與CG3連接；更優(yōu)選的是，T2是-NH-或-S-。多柔比星具有CAS號23214-92-8，并且是式(DOXO)化合物。式(DOXO)化合物也可以以其鹽酸鹽形式使用。多柔比星可通過其官能團中的一個相應連接到CG3或CG2，官能團中的一個如通過用在式(DOXO)中的(d1)、(d2)、(D3)和(D4)表示的官能團中的一個表示。(d1)、(d2)、(D3)和(D4)表示的官能團如在式(I)中的T2起作用。優(yōu)選地，多柔比星通過與式(DOXO)中的(d1)表示的氨基并通過所述鍵(*****)與CG3連接。美登素具有CAS號35846-53-8和式(MAYT)。美登素可以通過式(MAYT)中的(m2)表示的-OH相應連接到CG3或CG2?；蚴?MAYT)中的(m1)表示的-C(O)-CH3基團交換酰基，所述?；哂杏窒鄳B接到CG3或CG2的親核基團-SH、-NH2或-OH。(m2)表示的-OH或?；挠H核基團然后如式(I)中的T2起作用。優(yōu)選的紫杉烷是具有CAS號33069-62-4和式(TAXO)的紫杉醇。紫杉醇可以通過式(TAXO)中的(t1)、(t2)和(t3)表示的-OH中的一個相應連接到CG3或CG2。所述-OH然后如式(I)中的T2起作用。在一個優(yōu)選的實施方式中，n2是0，T2是-O-，并通過鍵(****)與CG2連接，DRRes從DR衍生，DR是式(TAXO)化合物。在另一優(yōu)選的實施方式中，n2是1，T2是-O-并通過鍵(*****)與CG3連接，CG3是式(CG3-II)連接基團，且DRRes從DR衍生，DR是式(TAXO)化合物，本實施方式的一種可能的紫杉醇中間體是式(TAXO-t1-1)化合物。喜樹堿是(S)-(+)-喜樹堿，其具有CAS號7689-03-4，并且是式(CAMPTO)化合物。喜樹堿通過在式(CAMPTO)中的(c1)中表示的官能團可以相應連接到CG3或CG2。用(c1)表示的官能團然后如式(I)中的T2起作用。在一個優(yōu)選的實施方式中，n2是0，T2是-O-，并通過鍵(****)與CG2連接，DRRes從DR衍生，DR是式(CAMPTO)化合物。在另一優(yōu)選的實施方式中，n2是1，T2是-O-，并通過鍵(*****)與CG3連接，CG3是式(CG3-II)連接基團，DRRes從DR衍生，DR是式(CAMPTO)化合物。在一個優(yōu)選的實施方式中，CG1是式(CG1-I)、(CG1-III)或(CG1-IV)連接基團，且LIRes的Cys殘基的側鏈的硫原子為T1，并通過鍵(*)連接到CG1。在另一優(yōu)選的實施方式中，CG1是式(CG1-II)連接基團，且T1是LIRes的-N-或-O-并通過鍵(*)連接到CG1。連接到CG1的這種LIRes的氨基或羥基基團優(yōu)選是LIRes的N-末端氨基基團或LIRes的氨基酸殘基的側鏈的氨基或羥基基團。優(yōu)選地，如果T1是連接到CG1的LIRes的氨基酸殘基的側鏈的氨基基團，那么所述LIRes的氨基酸殘基優(yōu)選為Lys；如果T1是連接到CG1的LIRes的氨基酸殘基的側鏈的羥基基團，那么所述LIRes的氨基酸殘基優(yōu)選為Tyr、Ser或Thr。優(yōu)選地，LI選自：單或多克隆抗體LI-Ab、抗體片段LI-AbFrag、蛋白質LI-Prot和肽LI-Pep；以及LIRes選自：單或多克隆抗體殘基LIRes-Ab、抗體片段殘基LIRes–AbFrag、蛋白質殘基LIRes-Prot和肽殘基LIRes-Pep。如果LIRes是LIRes-AA，那么LIRes優(yōu)選是α-氨基酸殘基。LIRes通過LIRes的兩種可能的官能團中的一個可以優(yōu)選地連接到CG1：通過N-末端氨基基團或通過LIRes的側鏈的官能團，前提是LIRes有這樣的具有官能團的側鏈。連接LIRes與CG1的這種官能團是T1。如果LIRes通過LIRes的側鏈的官能團連接，那么所述側鏈優(yōu)選為LIRes的Cys、Lys、Tyr、Ser或Thr殘基的側鏈。如果LIRes是LIRes-AA，那么不連接到CG1的LIAARes-AA的其余的官能團可以通過肽化學中常用的保護基團來保護，例如，非連接的氨基可攜帶醋酸，非連接的羧基可以可以用C1-4醇來酯化，側鏈的非連接官能團可攜帶肽化學中常用的側鏈保護基團。更優(yōu)選地，LIRes-AA是具有側鏈的α氨基酸殘基，所述側鏈具有官能團并通過該官能團與CG1連接，甚至更優(yōu)選地，LIRes-AA衍生自Cys、Lys、Tyr、Ser或Thr。優(yōu)選地，如果LIRes通過LIRes的Cys殘基的側鏈連接，那么T1通過所述Cys殘基的側鏈的硫原子形成，并優(yōu)選通過鍵(*)與CG1連接，CG1為式(CG1-I)，(CG1-III)或(CG1-IV)連接基團；或者如果LIRes通過LIRes的Lys、Tyr、Ser或Thr殘基的側鏈連接，那么T1通過所述Lys、Tyr、Ser或Thr殘基的側鏈的氮或氧原子形成，并通過鍵(*)與CG1連接，優(yōu)選CG1是式(CG1-II)連接基團。LIRes-Pep衍生自細胞穿透肽。LIRes-AB和LIRes-ABFrag優(yōu)選衍生自疾病治療中，優(yōu)選癌癥治療中使用的抗體和抗體片段。優(yōu)選地，m30和m32是相同或不同的，且彼此獨立地為2、3、4、5或6。優(yōu)選地，CG1是式(CG1-IV)連接基團時，m30是2。優(yōu)選地，CG1是式(CG1-II)連接基團時，m32是2。優(yōu)選地，n1是1。優(yōu)選地，m1和m2是0或1。優(yōu)選地，m10，m11和m12是相同或不同的，并且彼此獨立地是0、1、2、3、4、5或6。優(yōu)選地，m20是1，2、3或4。更優(yōu)選地，m10是6且m2是0；或m2是1，m10是0且m20是1；m1是1，m11是1，m12是1且m20是3；或m1是0，m11是3，m12是0。優(yōu)選地，R5和R6是CH3。在特定的實施方式中，CG1是式(CG1-I)連接基團，SG是式(SG-II)間隔基團，m10是6且m2是0。在另一特定的實施方式中，CG1是式(CG1-II)連接基團，m32是2；或式(CG1-III)連接基團；或式(CG1-IV)連接基團，m30為2；并且SG是式(SG-II)間隔基團，m10是0，m2是1且m20是1。在另一具體實施方式中，CG1是式(CG1-II)連接基團，m32是2；或式(CG1-III)連接基團；或式(CG1-IV)連接基團，m30為2；并且SG是式(SG-III)間隔基團，m1是1，m11為1，m12為1且m20為3；或SG是式(SG-III)間隔基團，m1為0，m11為3，且m12為0。優(yōu)選地，n3為2、3、4、5或6；更優(yōu)選為2、3或4；更優(yōu)選地，n3為2或3。優(yōu)選地，AAn4是α氨基酸殘基。更優(yōu)選地，AAn4選自：丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，苯丙氨酸，色氨酸，脯氨酸，賴氨酸，乙?；蚣柞；Ｗo的賴氨酸側鏈，精氨酸，側鏈被保護(優(yōu)選用甲苯磺酰基或硝基保護)的精氨酸，組氨酸，鳥氨酸，側鏈被保護(優(yōu)選用乙?；蚣柞；Ｗo)的鳥氨酸，和瓜氨酸。甚至更優(yōu)選地，AAn4是丙氨酸，甘氨酸，苯丙氨酸，纈氨酸，賴氨酸，亮氨酸，色氨酸，精氨酸，側鏈被保護的精氨酸或瓜氨酸，特別是丙氨酸，甘氨酸，苯丙氨酸，纈氨酸，賴氨酸或瓜氨酸。如果AAn4具有帶有官能團的側鏈，那么該官能團可被通常用于保護氨基酸側鏈的官能團的保護基來保護。在賴氨酸的情況下，側鏈最優(yōu)選用乙?；蚣柞；鶃肀Ｗo。(AAn4)n3肽鏈的肽的例子是Phe-Lys、Val-Lys、Phe-Phe-Lys、D-Phe-Phe-Lys、Gly-Phe-Lys、Ala-Lys、Val-Cit、Phe-Cit、Leu-Cit、Trp-Cit、Phe-Ala、Gly-Phe-Leu-Gly、Ala-Leu-Ala-Leu、Phe-N9-tosyl-Arg和Phe-N9-Nitro-Arg，優(yōu)選Phe-Lys、Val-Lys、Val-Cit和D-Phe-L-Phe-Lys；任何賴氨酸側鏈任選被保護，優(yōu)選用乙?；Ｌ貏e優(yōu)選地，n3為2或3，且AAn4是丙氨酸，甘氨酸，纈氨酸或瓜氨酸；更特別地，n3為2，AA1是瓜氨酸，且AA2是纈氨酸或丙氨酸；n3為3，AA1是瓜氨酸，AA2是纈氨酸且AA3是甘氨酸。優(yōu)選地，m4為1。優(yōu)選地，R3是甲基。優(yōu)選地，R1和R2是相同或不同的，并且彼此獨立地選自：氫，甲基，C(O)-(CH2-O-)m5-(GRPEG)m4-CH3和PGN。優(yōu)選地，m21是2、3或4。優(yōu)選地，PGN是在肽化學中為保護肽的N-末端或為保護用作肽合成中建構嵌段(buildingblock)的α氨基酸的α-氨基而常用的保護基團。更優(yōu)選地，PGN選自：Boc、Fmoc和Z。甚至更優(yōu)選地，R1是氫、甲基、乙酰基或C(O)-(CH2-O-)m5-(GRPEG)m4-CH3，m4是1和m21為3，且R2是氫或甲基。特別地，R1是乙?；琑2是氫；或R1和R2是甲基；或R1是C(O)-(CH2-O-)m5-(GRPEG)m4-CH3，m5為0，m4為1，且m21為3和R2是氫；或R1是C(O)-(CH2-O-)m5-(GRPEG)m4-CH3，m5為1，m4為1，且m21為2和R2是氫。本發(fā)明的進一步的主題是一種方法(MI)；其中式(I)化合物在步驟(MI)中制備；步驟(MI)包括反應(MI)，其中式(II)化合物與式(LIRes-T1-H)化合物反應；CG1M是選自式(CG1M-I)連接基團、式(CG1M-II)連接基團、式(CG1M-III)連接基團和式(CG1M-IV)連接基團中的連接基團；X1是Cl、Br或I；SG、n1、n4、n3、AAn4、(3)、R1、R2、T4、CG3、n2、T2、DRRes、m30和m32如在本說明書中所定義，并具有所有其優(yōu)選的實施方式；CG2如在本說明書中所定義，并具有所有其優(yōu)選的實施方式。優(yōu)選地，X1是Cl或Br，更優(yōu)選地X1是Br。優(yōu)選地，CG1M是式(CG1M-IV)連接基團。更優(yōu)選地，CG1M是式(CG1M-IV)連接基團，且m30是2。在特定實施方式中，CG1M是式(CG1M-I)連接基團，SG是式(SG-II)間隔基團，m10是6且m2是0。在另一具體實施方式中，CG1M是式(CG1M-II)連接基團且m32是2，或式(CG1M-Ⅲ)連接基團或式(CG1M-IV)連接基團且m30是2，并且SG是式(SG-II)間隔基團，m10是0，m2是1，m20是1。在另一具體實施方式中，CG1M是式(CG1-II)連接基團且m32是2，或式(CG1-III)連接基團，或式(CG1M-IV)連接基團且m30為2，且SG是式(SG-III)間隔基團且m1是1，m11是1，m12是1和m20是3或SG是式(SG-III)間隔基團且m1是0，m11是3，和m1是0。優(yōu)選地，該反應(MI)的反應溫度為從0至150℃，更優(yōu)選為5至50℃，更優(yōu)選為10至40℃。優(yōu)選地，該反應(MI)的反應時間是從1分鐘至168小時，更優(yōu)選為10分鐘至24小時，甚至更優(yōu)選從15分鐘至3小時。反應(MI)通常是在溶劑(MI)中進行的。優(yōu)選地，溶劑(MI)選自水，N,N-二甲基乙酰胺，N,N-二甲基甲酰胺，N,N-二甲亞砜和它們的混合物。在水的情況下，所述水可包括緩沖液(MI)，優(yōu)選的緩沖液(MI)是蛋白質化學中常規(guī)使用的緩沖液，更優(yōu)選的緩沖液(MI)是來自從下述物質中選取的緩沖物質：乙酸、檸檬酸、二硫蘇糖醇(DTT)、乙二胺四乙酸(EDTA)、甘氨酸、組氨酸、磷酸(包括磷酸緩沖生理鹽水，PBS)、聚山梨酯20、聚山梨酯80、蔗糖、氯化鈉、琥珀酸、海藻糖、三(羥甲基)氨基甲烷、它們的混合物以及它們的鹽。所述緩沖物質的鹽優(yōu)選為鈉鹽、鉀鹽或鹽酸鹽。優(yōu)選地，所述溶劑(MI)的量為化合物(LIRes-T1-H)的重量的5至10000倍，更優(yōu)選為從10至5000倍，更優(yōu)選為50至500倍。優(yōu)選地，在反應(MI)中，使用1至100摩爾當量，更優(yōu)選2至20摩爾當量，甚至更優(yōu)選3至10摩爾當量的式(II)化合物，所述摩爾當量基于式(LIRes-T1-H)化合物的摩爾數。反應(MI)可以在TCEP的存在下進行。當LI是單或多克隆抗體LI-Ab或抗體片段LI-AbFrag時，優(yōu)選使用TCEP。優(yōu)選地，在反應(MI)中，使用0.5至20摩爾當量，更優(yōu)選1至10摩爾當量，更優(yōu)選1.5至5摩爾當量的TCEP，所述摩爾當量基于式(LIRes-T1-H)化合物的摩爾數。在反應(MI)后，可以通過如洗滌、萃取、過濾、濃縮、干燥等標準方法分離出式(I)化合物。式(Ⅰ)化合物可在分離之前或之后純化，優(yōu)選通過從適當的溶劑中層析或結晶。替代地，式(I)化合物可以通過如過濾、超濾、滲濾和層析等標準方法來純化，并且可被存儲或進一步使用作為溶劑。本發(fā)明的進一步的主題是一種用于制備式(II)化合物的方法(MII)，式(II)化合物如在本說明書中所定義，并具有所有其優(yōu)選實施方式，其中，如果n2是1且CG3是式(CG3-I)連接基團，則方法(MII)包括步驟(MIIa)和步驟(MIIb)；如果n2是1且CG3是式(CG3-II)連接基團，則方法(MII)包括所述步驟(MIIa)、步驟(MIIc)、步驟(MIId)和步驟(MIIe)；如果n2是0且CG1M是式(CG1M-IV)連接基團，則方法(MII)包括一個步驟，步驟(MII0-IV)，或兩個步驟，步驟(MII0-I-IVa)和步驟(MII0-I-IVb)；如果n2是0且CG1M是式(CG1M-III)連接基團，則方法(MII)包括步驟(MII0-III)；如果n2是0且CG1M是式(CG1M-II)連接基團，則方法(MII)包括兩個步驟，步驟(MII0-IIa)和步驟(MII0-IIb)，或一個步驟，步驟(MII0-IIc)；如果n2是0且CG1M是式(CG1M-I)連接基團，則方法(MII)包括一個步驟，步驟(MII0-I)，或兩個步驟，步驟(MII0-I-IVa)和步驟(MII0-I-IVb)；步驟(MIIa)包括反應(MIIa)，其中，式(III)化合物與式(II-I)化合物反應；在式(III)中的n2如本說明書中所定義，并具有所有其優(yōu)選實施方式；式(II-I)化合物選自式(II-1)化合物、1,1'-羰二咪唑、4-硝基苯基氯甲酸酯、光氣、雙光氣、三光氣及其混合物；步驟(MIIb)包括反應(MIIb)，其中，來自所述反應(MIIa)的反應產物與式(DRRes-T2-H)化合物反應；步驟(MIIc)包括反應(MIIc)，其中，來自所述反應(MIIa)的反應產物與式(CG3M-II)化合物反應以提供式(IIc)化合物；在式(IIc)中n2如權利要求2中所定義；步驟(MIId)包括反應(MIId)，其中，在所述反應(MIIc)中制備的式(IIc)化合物與所述式(II-I)化合物反應；步驟(MIIe)包括反應(MIIe)，其中，來自所述反應(MIId)的反應產物與式(DRRes-T2-H)化合物反應；步驟(MII0-I-IVa)包括反應(MII0-I-IVa)，其中，式(III)化合物與化合物(II0-I-IVa)反應以提供式(III0-I-IVa)化合物；在式(III0-I-IVa)中n2是0；化合物(II0-I-IVa)選自對甲苯磺酰氯、對甲苯磺酸酐、甲磺酰氯、甲磺酸酐、三氟甲磺酰氯和三氟甲磺酸酐和它們的混合物；X2選自-OTs、-OMs和-OTf；步驟(MII0-I-IVb)包括反應(MII0-I-IVb)，其中，在反應(MII0-I-IVa)中制備的式(III0-I-IVa)化合物與式(DRRes-T2-H)化合物反應；對于CG1M是式(CG1M-IV)連接基團的情況，在步驟(MIII-IV)中；或對于CG1M是式(CG1M-III)連接基團的情況，在步驟(MIII-III)中；或對于CG1M是式(CG1M-II)連接基團的情況，在兩個步驟中，在步驟(MIII-IIa)和步驟(MIII-IIb)中，或在一個步驟中，在步驟(MIII-IIc)中；或對于CG1M是式(CG1M-I)連接基團的情況，在步驟(MIII-I)中；制備式(III)化合物，步驟(MIII-IV)包括式(IV)化合物與式(CG1MR-IV)化合物的反應(MIII-IV)，在式(IV)中n2如本說明書中所定義，并具有所有其優(yōu)選實施方式；m30如本說明書中所定義，并具有所有其優(yōu)選實施方式；R20是式(R20-1)的殘基；步驟(MIII-III)包括式(IV)化合物與式(CG1MR-III)化合物的反應(MIII-III)；X1如本說明書中所定義，還具有所有其優(yōu)選實施方式；步驟(MIII-IIa)包括所述式(IV)化合物與式(CG1MR-IIa)化合物的反應(MIII-IIa)以提供式(IV-IIa)化合物；m32如本說明書中所定義，還具有所有其優(yōu)選實施方式；步驟(MIII-IIb)包括步驟(MIII-IIa)中制備的(IV-IIa)化合物與式(HOSu)化合物的反應(MIII-IIb)；步驟(MIII-IIc)包括所述式(IV)化合物與式(CG1MR-IIc)化合物的反應(MIII-IIc)；m32如本說明書中所定義，還具有所有其優(yōu)選實施方式；步驟(MIII-I)包括式(IV)化合物與式(MA)化合物的反應(MIII-I)；式(IV)化合物是在步驟(MIV)中制備的；步驟(MIV)包括反應(MIV)，反應(MIV)是用化合物(IV)的式(V)化合物的還原反應；化合物(IV)選自：NaBH4、BH3、DIBAL-H、二(2-甲氧基乙氧基)氫化鋁鈉和它們的混合物；SG、n1、AA、n4、n3、(3)、R1和R2如上所定義，還具有所有它們的優(yōu)選實施方式；式(V)化合物是在步驟(MVb)中制備的；步驟(MVb)包括反應(MVb)，其中，R30用HCl從式(Va)化合物裂解；R30通過用在所述式SG中的(**)表示的所述鍵連接到SG并且是Boc；步驟(MII0-IV)包括式(III0)化合物與式(CG1MR-IV)化合物的反應(MII0-IV)；SG、CG2、n1、AA、n4、n3、(3)、R1、R2、T2和DRRes如本說明書中所定義，還具有所有它們的優(yōu)選實施方式，且在式(III0)中n2是0；步驟(MII0-III)包括式(III0)化合物與式(CG1MR-III)化合物的反應(MII0-III)；步驟(MII0-IIa)包括所述式(III0)化合物與式(CG1MR-IIa)化合物的反應(MII0-IIa)以提供式(III0-IIa)化合物；SG、CG2、n1、AA、n4、n3、(3)、R1、R2、T2和DRRes以及m32如本發(fā)明所定義，還具有所有它們的優(yōu)選實施方式，且在式(III0-IIa)中n2是0；步驟(MII0-IIb)包括在步驟(MII0-IIa)中制備的式(III0-IIa)化合物與式(HOSu)化合物的反應(MII0-IIb)；步驟(MII0-IIc)包括所述式(III0)化合物與式(CG1MR-IIc)化合物的反應(MII0-IIc)；步驟(MII0-I)包括式(III0)化合物與式(MA)化合物的反應(MII0-I)；式(III0)化合物是在步驟(MIII0)中制備的，步驟(MIII0)包括反應(MIII0)，其中，R30用HCl從式(IV0)化合物裂解；在式(IV0)中n2是0；式(IV0)化合物是在步驟(MIV0a)和步驟(MIV0b)中制備的，步驟(MIV0a)包括反應(MIV0a)，其中式(V0)化合物與(RIV0a)化合物反應以提供式(IV0a)化合物；R30、SG、CG2、n1、AA、n4、n3、(3)、R1和R2如本說明書中所定義，還具有所有它們的優(yōu)選實施方式；化合物(RIV0a)選自：對甲苯磺酰氯、對甲苯磺酸酐、甲磺酰氯、甲磺酸酐、三氟甲磺酰氯、三氟甲磺酸酐、SOCl2、(COCl)2、POCl3、PCl3、PCl5、POBr3、PBr3、PBr5、N-溴代琥珀酰亞胺、N-碘代琥珀酰亞胺、HCl、HBr、HI和它們的混合物；X3選自-OTs、-OMs、-OTf、-Cl、-Br和-I；步驟(MIV0b)包括反應(MIV0b)，其中，在反應(MIV0)中制備的式(IV0a)化合物與式(DRRes-T2-H)化合物反應；式(V0)化合物是在步驟(MV0)中制備的，步驟(MV0)包括反應(MV0)，反應(MV0)是用化合物(IV)的式(Va)化合物的還原反應；CG1M和X1如本發(fā)明所定義，還具有所有其優(yōu)選實施方式；SG、n1、n4、n3、AAn4、(3)、R1、R2、T4、CG3、n2、T2、DRRes、式(DRRes-T2-H)化合物、m30、m32、R5和R6如本說明書中所定義，還具有所有其優(yōu)選實施方式；CG2如本發(fā)明所定義，還具有所有其優(yōu)選實施方式?；衔?II-I)和式(CG3M-II)化合物是公知化合物，并且可以根據公知的方法制備，它們通常甚至可商購得到。反應(MIIA)和反應(MIID)是相似的反應，并可以在如本說明書中所定義的相似反應參數范圍下進行，彼此獨立地選擇所述兩個反應中的每個的單獨反應參數。優(yōu)選地，化合物(II-I)是式(II-1)化合物。反應(MIIa)和反應(MIId)通常是在溶劑(MIIa)中進行。優(yōu)選地，溶劑(MIIa)選自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲亞砜、乙腈、丙酮、1,4-二惡烷、THF和它們的混合物。優(yōu)選地，溶劑(MIIa)的量是式(III)化合物的重量的1至500倍，更優(yōu)選5至50倍，甚至更優(yōu)選從10至30倍。優(yōu)選地，在反應(MIIa)和在反應(MIId)中，使用0.5至20摩爾當量，更優(yōu)選1至10摩爾當量，更優(yōu)選1至2摩爾當量的(II-I)化合物，該摩爾當量基于式(III)化合物的摩爾量。反應(MIIa)和反應(MIId)可以在堿(MIIa)的存在下進行。優(yōu)選地，所述堿(MIIa)選自碳酸鉀、碳酸鈉、二異丙基乙胺、三乙胺、吡啶、4-二甲基氨基吡啶及它們的混合物。優(yōu)選地，在反應(MIIa)和反應(MIId)中，使用0.5至50摩爾當量，更優(yōu)選1至20摩爾當量，甚至更優(yōu)選2至10摩爾當量的堿(MIIa)，摩爾當量基于式(III)化合物的摩爾量。優(yōu)選地，反應(MIIa)和反應(MIId)在惰性氣氛下進行。反應(MIIa)和反應(MIId)之后，反應(MIIa)和反應(MIId)的反應產物可以通過如洗滌、萃取、過濾、濃縮、干燥等標準方法來分離。任何化合物可在分離之前或之后被純化，優(yōu)選通過從適當的溶劑中層析或結晶被純化。來自反應(MIIa)和反應(MIId)的粗反應混合物也可以直接在反應(MIIb)或反應(MIIEe)使用。更優(yōu)選的是，反應(MIIa)和反應(MIIb)以及反應(MIId)和反應(MIIe)都是在相同溶劑中，并以一鍋連續(xù)進行。反應(MIIb)和反應(MIIEe)是相似的反應，并可以在如本說明書中所定義的相似反應參數范圍下進行，彼此獨立地選擇所述兩個反應中的每個的單獨反應參數。通常是在溶劑(MIIb)中進行反應(MIIb)和反應(MIIEe)。優(yōu)選地，溶劑(MIIb)選自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲亞砜、乙腈、丙酮、1,4-二惡烷、THF、水、甲醇、乙醇和它們的混合物。優(yōu)選地，溶劑(MIIb)的量分別是反應(MIIa)的反應產物的重量或反應(MIId)的反應產物的重量的1至500倍，更優(yōu)選5至50倍，甚至更優(yōu)選10至30倍的。優(yōu)選地，在反應(MIIb)和反應(MIIEe)中，使用0.2至10摩爾當量，更優(yōu)選0.5至5摩爾當量，更優(yōu)選0.8至2摩爾當量的式(DRRes-T2-H)化合物，該摩爾當量基于反應(MIIa)的反應產物或反應(MIId)的反應產物的摩爾量。優(yōu)選地，在惰性氣氛下進行反應(MIIb)和反應(MIIEe)。反應(MII0-I-IVb)和反應(MIV0b)是相似的反應，并可以在如本說明書中所定義的相似的反應參數范圍下進行，彼此獨立地選擇所述兩個反應中的每個的單獨反應參數。反應(MII0-I-IVb)和反應(MIV0b)通常是在溶劑(MIV0b)中進行的。優(yōu)選地，溶劑(MIV0b)選自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲亞砜、乙腈、丙酮、1,4-二惡烷、THF和它們的混合物。優(yōu)選地，溶劑(MIV0b)的量分別是式(III0-I-IVb)化合物的重量或式(IV0a)化合物的重量的1至500倍，更優(yōu)選5至50倍，更優(yōu)選10至30倍。優(yōu)選地，在反應(MII0-I-IVb)和反應(MIV0b)中，使用0.2至10摩爾當量，更優(yōu)選0.5至5摩爾當量，更優(yōu)選0.8至2摩爾當量的式(DRRes-T2-H)化合物，該摩爾當量相應地基于式(III0-I-IVb)化合物或式(IV0a)化合物的摩爾量。優(yōu)選地，在惰性氣氛下進行反應(MII0-I-IVb)和反應(MIV0b)。反應(MIIc)通常是在溶劑(MIIc)中進行的。優(yōu)選地，溶劑(MIIc)選自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲亞砜、乙腈、丙酮、1,4-二惡烷、THF、水、甲醇、乙醇和它們的混合物。優(yōu)選地，溶劑(MIIc)的量優(yōu)選為反應(MIIa)的反應產物的重量的1至500倍，更優(yōu)選5至50倍，甚至更優(yōu)選10至30倍。優(yōu)選地，在反應(MIIc)中，使用0.2至20摩爾當量，更優(yōu)選0.5至10摩爾當量，更優(yōu)選0.8至5摩爾當量的式(CG3M-II)化合物，該摩爾當量基于反應(MIIa)的反應產物的摩爾量。優(yōu)選地，反應(MIIc)是在惰性氣氛下進行的。在反應(MIIc)之后，該反應(MIIc)的反應產物可以通過如洗滌、萃取、過濾、濃縮、干燥等標準方法分離。任何化合物可在分離之前或之后被純化，優(yōu)選通過從適當的溶劑中層析或結晶被純化。在反應(MIIb)、反應(MIIe)、反應(MII0-I-IVb)和反應(MIV0b)之后，式(II)化合物或式(IV0)化合物分別可以通過如洗滌、萃取、過濾、濃縮、干燥等標準方法分離。任何化合物可在分離之前或之后被純化，優(yōu)選通過從適當的溶劑中層析或結晶被純化。優(yōu)選地，CG1M是式(CG1M-IV)連接基團；更優(yōu)選地，CG1M是式(CG1M-IV)連接基團，且m30是2。式(V)化合物和式(III0)化合物可以非質子化形式或質子化形式作為鹽使用于反應(MIV)、反應(MII0-I)、反應(MII0-IIa)、反應(MII0-III)和反應(MII0-IV)中。反應(MIII-IV)和反應(MII0-IV)是相似的反應，并可以在如本說明書中所定義的相似的反應參數范圍下進行，彼此獨立地選擇所述兩個反應中的每個的單獨反應參數。反應(MIII-IV)和反應(MII0-IV)通常是在溶劑(MIII-IV)中進行的。優(yōu)選地，溶劑(MIII-IV)選自：N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲亞砜、乙腈、丙酮、1,4-二惡烷、THF、水、甲醇、乙醇以及它們的混合物。優(yōu)選地，溶劑(MIII-IV)的量是式(IV)化合物的重量的1至500倍，更優(yōu)選5至50倍，更優(yōu)選10至30倍。優(yōu)選地，在反應中(MIII-IV)和反應(MII0-IV)中，使用1至20摩爾當量，更優(yōu)選1至10摩爾當量，更優(yōu)選1至5摩爾當量的化合物(CG1MR-IV)，所述摩爾當量相應基于式(IV)或式(III0)化合物的摩爾量。優(yōu)選地，反應(MIII-IV)和反應(MII0-IV)在惰性氣氛下進行。反應(MIII-IV)和反應(MII0-IV)通常是在堿(MIII-IV)存在下進行的。優(yōu)選地，所述堿(MIII-IV)選自：碳酸鈉、碳酸鉀、二異丙基乙胺、三乙胺、吡啶、4-二甲基氨基吡啶及它們的混合物。優(yōu)選地，在反應(MIII-IV)和反應(MII0-IV)中，使用0.5至50摩爾當量，更優(yōu)選從1至20摩爾當量，甚至更優(yōu)選為2至10摩爾當量的堿(MIII-IV)，所述摩爾當量相應地基于式(IV)或式(III0)化合物的摩爾量。反應(MIII-IV)和反應(MII0-IV)之后，式(III)化合物或式(II)化合物分別可以通過如洗滌、萃取、過濾、濃縮、干燥等標準方法分離。式(III)化合物或式(II)化合物可分別在分離之前或之后被純化，優(yōu)選通過從適當的溶劑中層析或結晶被純化。反應(MIII-III)和反應(MII0-III)是相似的反應，并可以在如本說明書中所定義的相似的反應參數范圍下進行，彼此獨立地選擇所述兩個反應中的每個的單獨反應參數。反應(MIII-III)和反應(MII0-III)通常是在溶劑(MIII-III)中進行的。優(yōu)選地，溶劑(MIII-III)選自：N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲亞砜、乙腈、丙酮、1,4-二惡烷、THF、水、甲醇、乙醇以及它們的混合物。優(yōu)選地，溶劑(MIII-III)的量是式(IV)化合物的重量的1至500倍，更優(yōu)選5至50倍，更優(yōu)選10至30倍。優(yōu)選地，在反應(MIII-III)和在反應(MII0-III)中，使用1至20摩爾當量，更優(yōu)選1至10摩爾當量，甚至更優(yōu)選1至5摩爾當量的化合物(CG1MR-III)，所述摩爾當量基于式(IV)化合物或式(III0)化合物的摩爾量。優(yōu)選地，反應(MIII-III)和反應(MII0-III)在惰性氣氛下進行。反應(MIII-III)和反應(MII0-III)之后，式(III)化合物或式(II)化合物分別可以通過如洗滌、萃取、過濾、濃縮、干燥等標準方法分離。式(III)化合物或式(II)化合物可分別在分離之前或之后被純化，優(yōu)選通過從適當的溶劑中層析或結晶被純化。反應(MIII-IIa)和反應(MII0-IIa)是相似的反應，并可以在如本說明書中所定義的相似的反應參數范圍下進行，彼此獨立地選擇所述兩個反應中的每個的單獨反應參數。反應(MIII-IIa)和反應(MIII-IIa)通常是在溶劑(MIII-IIa)中進行。優(yōu)選地，溶劑(MIII-IIa)的選自：N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲亞砜、乙腈、丙酮、1,4-二惡烷、THF、水、甲醇、乙醇以及它們的混合物。優(yōu)選地，所述溶劑(MIII-IIa)的量是式(IV)化合物的重量的1到500倍，更優(yōu)選5至50倍，甚至更優(yōu)選10至30倍。優(yōu)選地，在反應(MIII-IIa)和反應(MII0-IIa)中，使用1至20摩爾當量，更優(yōu)選1至10摩爾當量，甚至更優(yōu)選1至5摩爾當量的化合物(CG1MR-IIa)，所述摩爾當量基于式(IV)化合物或式(III0)化合物的摩爾量。優(yōu)選地，反應(MIII-IIa)和反應(MII0-IIa)在惰性氣氛下進行。反應(MIII-IIa)和反應(MII0-IIa)之后，式(IV-IIa)化合物或式(III0-IIa)化合物分別可以通過如洗滌、萃取、過濾、濃縮、干燥等標準方法分離。式(IV-IIa)化合物或式(III0-IIa)化合物可分別在分離之前或之后被純化，優(yōu)選通過從適當的溶劑中層析或結晶被純化。反應(MIII-IIb)和反應(MII0-IIa)是相似的反應，并可以在如本說明書中所定義的相似的反應參數范圍下進行，彼此獨立地選擇所述兩個反應中的每個的單獨反應參數。。優(yōu)選地，反應(MIII-IIb)和反應(MII0-IIb)在化合物(COUPADD)的存在下進行?；衔?COUPADD)是肽化學中常規(guī)使用的耦合添加劑，所述肽化學用于通過酰胺鍵的形成使氨基酸偶聯反應成肽。優(yōu)選地，化合物(COUPADD)選自DCC、EDC和它們的混合物。優(yōu)選地，在反應(MIII-IIb)和反應(MII0-IIb)中，使用1至20摩爾當量，更優(yōu)選1至10摩爾當量，甚至更優(yōu)選1至5摩爾當量的化合物(COUPADD)，所述摩爾當量相應基于式(IV-IIa)化合物或式(III0-IIa)化合物的摩爾量。反應(MIII-IIb)和反應(MII0-IIb)通常是在溶劑(MIII-IIb)中進行的。優(yōu)選地，溶劑(MIII-IIb)選自：N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲亞砜、乙腈、丙酮、1,4-二惡烷、THF和它們的混合物。優(yōu)選地，所述溶劑(MIII-IIb)的量是式(IV-IIa)化合物的重量的1至500倍，更優(yōu)選5至50倍，更優(yōu)選10至30倍。優(yōu)選地，在反應(MIII-IIb)和反應(MII0-IIb)中，使用1至20摩爾當量，更優(yōu)選1至10摩爾當量，甚至更優(yōu)選1至5摩爾當量的式(HOSu)化合物，所述摩爾當量相應地基于式(IV-IIa)化合物或式(III0-IIa)的摩爾量。優(yōu)選地，反應(MIII-IIb)和反應(MII0-IIb)在惰性氣氛下進行。反應(MIII-IIb)和反應(MII0-IIb)之后，式(III)化合物或式(II)化合物分別可以通過如洗滌、萃取、過濾、濃縮和干燥等標準方法分離。式(III)化合物或式(II)化合物可分別在分離之前或之后被純化，優(yōu)選通過從適當的溶劑中層析或結晶被純化。反應(MIII-IIc)和反應(MII0-IIc)是相似的反應，并可以在如本說明書中所定義的相似的反應參數范圍下進行，彼此獨立地選擇所述兩個反應中的每個的單獨反應參數。反應(MIII-IIc)和反應(MII0-IIc)通常在溶劑(MIII-IIc)中進行。優(yōu)選地，溶劑(MIII-IIc)選自：N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲亞砜、乙腈、丙酮、1,4-二惡烷、THF、水、甲醇、乙醇以及它們的混合物。優(yōu)選地，溶劑(MIII-IIc)的量是式(IV)化合物的重量的1至500倍，更優(yōu)選5至50倍，甚至更優(yōu)選10至30倍。優(yōu)選地，在反應(MIII-IIc)和在反應(MII0-IIc)中，使用1至20摩爾當量，更優(yōu)選1至10摩爾當量，甚至更優(yōu)選1至5摩爾當量的化合物(CG1MR-IIa)，所述摩爾當量相應地基于式(IV)化合物或式(III0)化合物的摩爾量。優(yōu)選地，反應(MIII-IIc)和反應(MII0-IIc)在惰性氣氛下進行。反應(MIII-IIc)和反應(MII0-IIc)通常是在堿(MIII-IIc)的存在下進行。優(yōu)選地，所述堿(MIII-IIc)選自：碳酸鉀、碳酸鈉、二異丙基乙胺、三乙胺、吡啶、4-二甲基氨基吡啶和它們的混合物。優(yōu)選地，在反應(MIII-IIc)和反應(MII0-IIc)中，使用0.5至50摩爾當量，更優(yōu)選1至20摩爾當量，甚至更優(yōu)選2至10摩爾當量的堿(MIII-IIc)，所述摩爾當量相應地基于式(IV)化合物或式(III0)化合物的摩爾量。在反應(MIII-IIc)和反應(MII0-IIc)之后，式(III)化合物或式(II)化合物分別可以通過如洗滌、萃取、過濾、濃縮和干燥等標準方法分離。式(III)化合物或式(II)化合物可分別在分離之前或之后被純化，優(yōu)選通過從適當的溶劑中層析或結晶被純化。反應(MIII-I)和反應(MII0-I)是相似的反應，并可以在如本說明書中所定義的相似的反應參數范圍下進行，彼此獨立地選擇所述兩個反應中的每個的單獨反應參數。優(yōu)選地，反應(MIII-I)和反應(MII0-I)的反應時間是1分鐘至168小時，更優(yōu)選是2至144小時，甚至更優(yōu)選是12到120小時。反應(MIII-I)和反應(MII0-I)通常是在溶劑(MIII-I)中進行。優(yōu)選地，溶劑(MIII-I)選自：N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲亞砜、乙腈、丙酮、1,4-二惡烷、THF和它們的混合物。優(yōu)選地，溶劑(MIII-I)的量分別是式(IV)化合物或式(III0)化合物的重量的1至500倍，更優(yōu)選5至50倍，甚至更優(yōu)選10至30倍。優(yōu)選地，在反應(MIII-I)和反應(MII0-I)中，使用1至20摩爾當量，更優(yōu)選1至10摩爾當量，更優(yōu)選1至5摩爾當量的式(MA)化合物，所述摩爾當量相應基于式(IV)化合物或式(III0)化合物的摩爾量。優(yōu)選地，反應(MIII-I)和反應(MII0-I)在惰性氣氛下進行。優(yōu)選地，反應(MIII-I)和反應(MII0-I)在化合物(COUPADD)的存在下進行。優(yōu)選地，在反應(MIII-I)和反應(MII0-I)中使用1至20摩爾當量，更優(yōu)選1至10摩爾當量，甚至更優(yōu)選1至5摩爾當量的化合物(COUPADD)，所述摩爾當量相應基于式(IV)化合物或式(III0)化合物的摩爾量。優(yōu)選地，反應(MIII-I)和反應(MII0-I)在式(HOSu)化合物的存在下進行。優(yōu)選地，反應(MIII-I)和反應(MII0-I)在化合物(COUPADD)和式(HOSu)化合物的存在下進行。優(yōu)選地，在反應(MIII-I)和反應(MII0-I)中，使用1至20摩爾當量，更優(yōu)選1至10摩爾當量，甚至更優(yōu)選1至5摩爾當量的式(HOSu)化合物，所述摩爾當量相應基于式(IV)化合物或式(III0)化合物的摩爾量。反應(MIII-I)和反應(MII0-I)之后，式(III)化合物或式(II)化合物分別可以通過如洗滌、萃取、過濾、濃縮和干燥等標準方法分離。式(III)化合物或式(II)化合物可分別在分離之前或之后被純化，優(yōu)選通過從適當的溶劑中層析或結晶被純化。反應(MIV)和反應(MV0)是相似的反應，并可以在如本說明書中所定義的相似的反應參數范圍下進行，彼此獨立地選擇所述兩個反應中的每個的單個反應參數。優(yōu)選地，反應(MIV)和反應(MV0)的反應時間是從1分鐘至168小時，更優(yōu)選為1至120小時，甚至更優(yōu)選為6至48小時。反應(MIV)和反應(MV0)通常是在溶劑(MIV)中進行。優(yōu)選地，溶劑(MIV)選自：水、甲醇、乙醇、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲亞砜、乙腈、丙酮，1,4-二惡烷，THF、水、甲醇、乙醇及它們的混合物。優(yōu)選地，溶劑(MIV)的量分別是式(V)或式(Va)化合物的重量的1至500倍，更優(yōu)選5至50倍，甚至更優(yōu)選10至30倍。優(yōu)選地，反應(MIV)和反應(MV0)在惰性氣氛下進行。優(yōu)選地，化合物(IV)選自硼氫化鈉，DIBAL-H和它們的混合物。在反應(MIV)中使用的化合物(IV)和在反應(MV0)中使用的化合物(IV)可以彼此獨立地相同或不同。優(yōu)選地，在反應(MIV)和反應(MV0)中，使用1至50摩爾當量，更優(yōu)選1至20摩爾當量，甚至更優(yōu)選2至10摩爾當量的化合物(IV)，所述摩爾當量相應基于式(V)化合物或式(Va)化合物的摩爾量。反應(MIV)和反應(MV0)可以在鹽(MIV)的存在下進行，鹽(MIV)可以選自氯化鋰、氯化鈣、氯化鋁、氯化鋅和它們的混合物。優(yōu)選地，如果在反應(MIV)和反應(MV0)中使用鹽(MIV)，那么使用1至20摩爾當量，更優(yōu)選1至10摩爾當量，甚至更優(yōu)選1.5至5摩爾當量的鹽(MIV)，所述摩爾當量相應基于式(V)化合物或式(Va)化合物的摩爾量。反應(MIV)和反應(MV0)之后，式(IV)化合物或式(V0)化合物分別可以通過如洗滌、萃取、過濾、濃縮和干燥等標準方法分離。式(IV)化合物或式(V0)化合物可分別在分離之前或之后被純化，優(yōu)選通過從適當的溶劑中層析或結晶被純化。反應(MII0-IVa)和反應(MIV0a)是相似的反應，并可以在如本說明書中所定義的相似的反應參數范圍下進行，彼此獨立地選擇所述兩個反應中的每個的單獨反應參數。優(yōu)選地，反應(MII0-I-IVa)和反應(MIV0a)的反應時間是1分鐘至168小時，更優(yōu)選為2至144小時，甚至更優(yōu)選為12至120小時。反應(MII0-I-IVa)和反應(MIV0a)通常是在溶劑(MIV0a)中進行的。優(yōu)選地，溶劑(MIV0a)選自：N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲亞砜、乙腈、丙酮、1,4-二惡烷、THF、水、甲醇、乙醇和它們的混合物。優(yōu)選地，溶劑(MIV0a)的量是式(V0)化合物的重量的1至500倍，更優(yōu)選5至50倍，甚至更優(yōu)選10至30倍。優(yōu)選地，在反應(MII0-I-IVa)和反應(MIV0a)中，分別使用1至20摩爾當量，更優(yōu)選1至10摩爾當量，甚至更優(yōu)選1至5摩爾當量的化合物(II0-I-IVa)的或化合物(RIV0a)，所述摩爾當量基于式(V0)化合物的摩爾量。優(yōu)選地，反應(MII0-I-IVa)和反應(MIV0a)在惰性氣氛下進行。優(yōu)選地，反應(MII0-I-IVa)和反應(MIV0a)在式(HOSu)化合物的存在下進行。優(yōu)選地，在反應(MII0-I-IVa)和反應(MIV0a)中使用1至20摩爾當量，更優(yōu)選1至10摩爾當量，甚至更優(yōu)選1至5摩爾當量的式(HOSu)化合物，所述摩爾當量相應基于化合物(II0-I-IVa)或化合物(RIV0a)的摩爾量。反應(MII0-I-IVa)和反應(MIV0a)之后，式(III0-I-IVa)化合物或式(IV0a)化合物分別可以通過如洗滌、萃取、過濾、濃縮和干燥等標準方法分離。任何化合物可在分離之前或之后被純化，優(yōu)選通過從適當的溶劑中層析或結晶被純化。本發(fā)明的進一步的主題是一種用于制備式(Va)化合物的方法(MVa)，式(Va)化合物如在本說明書中所定義，并具有所有其優(yōu)選實施方式；方法(MVa)包括步驟(MVa)；步驟(MVa)包括反應(MVa)，其中式(VI)化合物與式(SGM)化合物反應；R31通過在式SG中用(***)表示的所述鍵連接到式SG，且為-OTs、-OMs、-OTf、-Br、-Cl或-I；R30如本說明書中所定義，還包括所有其優(yōu)選實施方式；SG、n4、n3、AAn4、(3)、R1、R2如本說明書中所定義，還包括所有其優(yōu)選實施方式。優(yōu)選地，方法(MII)包括作為進一步步驟的步驟(MVa)，在所述步驟(MVa)中制備式(Va)化合物。優(yōu)選地，反應(MVa)的反應溫度是從0至150℃，更優(yōu)選為20至100℃，甚至更優(yōu)選為30至60℃。優(yōu)選地，反應(MVa)的反應時間是從1分鐘至168小時，更優(yōu)選為1至144小時，更優(yōu)選為12至120小時。反應(MVa)通常是在溶劑(MVa)中進行的。優(yōu)選地，溶劑(MVa)選自：N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲亞砜、乙腈、丙酮、1,4-二惡烷，THF，和它們的混合物。優(yōu)選地，溶劑(MVa)的量是式(VI)化合物的重量的1至500倍，更優(yōu)選5至50倍，更優(yōu)選10至30倍。優(yōu)選地，在反應(MVa)中，使用1至20摩爾當量，更優(yōu)選1至10摩爾當量，甚至更優(yōu)選1.5至5摩爾當量的化合物(SGM)，所述摩爾當量基于化合物(VI)的摩爾量。優(yōu)選地，反應(MVa)在惰性氣氛下進行。反應(MVa)通常在堿(MVa)的存在下進行。優(yōu)選地，所述堿(MVa)選自：碳酸鉀、碳酸鈉、二異丙基乙胺、三乙胺、吡啶、4-二甲基氨基吡啶及它們的混合物。優(yōu)選地，在反應(MVa)中，使用1至20摩爾當量，更優(yōu)選1至10摩爾當量，更優(yōu)選1.5至5摩爾當量的堿(MVa)，所述摩爾當量基于式(VI)化合物的摩爾量。反應(MVa)之后，式(Va)化合物可以通過如洗滌、萃取、過濾、濃縮和干燥等標準方法分離。任何化合物可在分離之前或之后被純化，優(yōu)選通過從適當的溶劑中層析或結晶被純化。反應(MVb)和反應(MIII0)是相似的反應，并可以在如本說明書中所定義的相似的反應參數范圍下進行，彼此獨立地選擇所述兩個反應中的每個的單獨反應參數。優(yōu)選地，在反應(MVb)和反應(MIII0)中，使用1至500摩爾當量，更優(yōu)選5至100摩爾當量，甚至更優(yōu)選10至50摩爾當量的HCl，所述摩爾當量分別基于式(Va)化合物或式(IV0)化合物的摩爾量。優(yōu)選地，反應(MVb)和反應(MIII0)的反應時間是從1分鐘到168小時，更優(yōu)選是1至48小時，甚至更優(yōu)選是從2至24小時。反應(MVb)和反應(MIII0)通常在溶劑(MVb)中進行。優(yōu)選地，溶劑(MVb)選自：N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲亞砜、乙腈、丙酮、1,4-二惡烷、THF、水、甲醇、乙醇和它們的混合物。優(yōu)選地，溶劑(MVb)的量是式(Va)化合物或式(IV0)化合物的重量的1至500倍，更優(yōu)選5至50倍，甚至更優(yōu)選10至30倍。優(yōu)選地，反應(MVb)和反應(MIII0)在惰性氣氛下進行。反應(MVb)和反應(MIII0)之后，式(V)化合物或式(III0)化合物分別可以通過如洗滌、萃取、過濾、濃縮和干燥等標準方法分離。它們可以以它們的鹽的質子形式或非質子形式分離。任何化合物可在分離之前或之后被純化，優(yōu)選通過從適當的溶劑中層析或結晶被純化。本發(fā)明的另一主題是用于制備式(VI)化合物的方法，式(VI)化合物如本說明書中所定義，也具有所有其優(yōu)選實施方式；方法(MVI)包括步驟(MVIa)和可選的步驟(MVIb)；在步驟(MVIa)中所述n3AAn4通過肽偶聯反應連續(xù)地連接到式(VII-1)化合物并且然后連接到如前述的肽偶聯反應的相應的產物；步驟(MVIb)包括反應(MVIb)，其中，用式(VI)中的(3)表示的AAn3的所述N-末端氨基基團與化合物NTermProt反應；NTermProt選自C1-4烷基碘、C1-4烷基溴、Cl-C(O)-(GRPEG)m4-R3、R3-C(O)-O-C(O)-R3和PGNPrec；PGNPrec是在用式(VI)中的(3)表示的AAn3的所述N-末端氨基基團上引入PGN的試劑；GRPEG、m4、R3和PGN具有如上相同的定義，也具有所有其優(yōu)選實施方式；n4、n3、AAn4和(3)如本說明書中所定義，也具有所有其優(yōu)選實施方式。優(yōu)選地，方法(MII)包括作為進一步步驟的步驟(MVa)，以及步驟(MVIa)和可選的步驟(MVIb)，在步驟(MVa)中制備式(Va)化合物，在步驟(MVIa)和可選的步驟(MVIb)中制備式(VI)化合物。式(VII-1)化合物是公知的化合物，且可以通過公知的方法來制備。為簡單起見，在本文中，AAn4既使用于共價連接的氨基酸殘基，(例如在式(II)中)，又使用于方法(MVIa)中使用的氨基酸。如果AAn4具有帶有官能團的側鏈，該官能團可被通常用于保護氨基酸側鏈官能團的保護基保護。優(yōu)選地，NTermProt是Ac2O。優(yōu)選地，PGNPrec是Boc2O、FmocCl或CbzCl。方法(MVIa)通過使用在肽合成中常用的并且是本領域技術人員是公知的方法、參數和試劑進行。以上引用的參考文獻提供必要的信息。優(yōu)選地，反應(MVIb)的反應時間是從1分鐘到168小時，更優(yōu)選是1至48小時，甚至更優(yōu)選是從2至24小時。反應(MVIb)通常是在溶劑(MVIb)中進行的。優(yōu)選地，溶劑(MVIb)選自：N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲亞砜、乙腈、丙酮、1,4-二惡烷、THF、水、甲醇、乙醇和它們的混合物。優(yōu)選地，所述溶劑(MVIb)的量是式(Ⅶ-1)化合物的重量的1至500倍，更優(yōu)選2至50倍，甚至更優(yōu)選5至20倍。更優(yōu)選地，方法(MVIa)和反應(MVIb)在相同溶劑中連續(xù)地進行。更優(yōu)選的地，方法(MVIa)和反應(MVIb)在相同溶劑中且在一鍋中連續(xù)地進行。優(yōu)選地，在該方法(MVIa)中，使用1至20摩爾當量，更優(yōu)選1至10摩爾當量，甚至更優(yōu)選1至5摩爾當量的NTermProt，所述摩爾當量基于式(VII-1)化合物的摩爾量。優(yōu)選地，反應(MVIb)在惰性氣氛下進行。方法(MVIa)或反應(MVIb)之后，方法(MVIa)或反應(MVIb)的反應產物，其中每個是相應的式(VI)化合物，可以通過如洗滌、萃取、過濾、濃縮和干燥等標準方法分離。任何化合物可在分離之前或之后被純化，優(yōu)選通過從適當的溶劑中層析或結晶被純化。式(SGM)化合物是公知的化合物，可以根據公知的方法制備。優(yōu)選地，式(SGM)化合物選自化合物SGM-II和化合物SGM-III。優(yōu)選地，化合物SGM-II通過將式(HSGH-II)化合物首先與Boc2O反應，然后與化合物(SGM-II-R31)反應來制備?；衔?SGM-II-R31)選自：對甲苯磺酰氯、對甲苯磺酸酐、甲磺酰氯、甲磺酸酐、三氟甲磺酰氯和三氟甲磺酸酐、SOCl2、(COCl)2、POCl3、PCl3、PCl5、POBr3、PBr3、PBr5、N-溴代丁二酰亞胺、N-碘代琥珀酰亞胺、HCl、HBr、HI和它們的混合物。優(yōu)選地，化合物(SGM-II-R31)是TsCl。優(yōu)選地，化合物SGM-III是通過將式(HSGH-III)化合物首先與Boc2O反應，然后與式(HSGHReac-1)化合物進行反應來制備的。式(HSGH-II)化合物優(yōu)選是式(HSGH-II-1)化合物或式(HSGH-II-2)化合物?；衔颯GM-II優(yōu)選是式(SGM-II-1)化合物或式(SGM-II-2)化合物。式(HSGH-III)化合物優(yōu)選是式(HSGH-III-1)化合物或式(HSGH-III-2)化合物。化合物SGM-III優(yōu)選是式(SGM-III-1)化合物或式(SGM-III-2)化合物。式(HSGH-II)化合物與式(HSGH-III)化合物是公知的化合物，可以根據公知的方法來制備，并且常商購獲得。式(CG1MR-IV)化合物、式(CG1MR-Ⅲ)化合物、式(CG1MR-IIa)化合物、式(HOSu)化合物和式(COUPADD)化合物是公知的化合物，可以通過公知方法來制備，并且常商購獲得。優(yōu)選地，式(CG1MR-IV)化合物通過將式(CG1MR-IV-OH)化合物與式(HOSu)化合物反應來制備；式(HOSu)化合物如本說明書中所定義；優(yōu)選地，式(CG1MR-IV-OH)化合物通過將式(MA)化合物與式(AC)化合物反應來制備；式(MA)化合物和m30如本說明書中所定義，也具有所有其優(yōu)選實施方式。任何上面定義的反應可以在相似的反應條件下進行，對于這些反應中的每個彼此獨立地選擇反應參數：關于壓強：任何上述定義的反應可以在真空下進行，在大氣壓下或甚至在有例如可高達10巴的壓強下進行，優(yōu)選它們在大氣壓下進行；關于溫度：優(yōu)選地，任何上述定義的反應的反應溫度為-20至100℃，更優(yōu)選為0至75℃，甚至更優(yōu)選為10至50℃；關于反應時間：任何上述定義的反應的反應時間為1分鐘至168小時，更優(yōu)選為0.5至24小時，甚至更優(yōu)選為1至12小時；其前提是，對于任何上述定義的反應，沒有另外的說明。特別地，式(I)化合物選自：式(10)化合物、式(11)化合物、式(12)化合物、式(12-101)化合物、式(13)化合物、式(14)化合物、式(15)化合物、式(15-102)化合物和式(16)化合物；在小鼠中產生的單克隆抗白介素-1β抗體在小鼠中產生的單克隆抗白介素-1β抗體其中，多柔比星是式(DOXO)化合物，其通過分別在式(10)、(11)、(12)、(12-101)、(13)、(14)、(15)、(15-102)和(16)中并且在式(DOXO)中的(d1)表示的氨基連接。特別地，式(II)化合物選自：式(20)化合物、式(21)化合物、式(22)化合物、式(23)化合物、式(24)化合物、式(25)化合物、式(26)化合物、式(20-CAMPTO)化合物、式(21-CAMPTO)化合物、式(22-CAMPTO)化合物、式(23-CAMPTO)和式(21-TAXO-t1-1)化合物；其中，多柔比星是式(DOXO)化合物，其通過分別在式(20)、(21)、(22)、(23)、(24)、(25)和(26)中并且在式(DOXO)中的(d1)表示的氨基連接；喜樹堿是式(CAMPTO)化合物，其通過分別在式(20-CAMPTO)、(21-CAMPTO)、(22-CAMPTO)、(23-CAMPTO)中并且在式(CAMPTO)中的(c1)表示的羥基連接；taxo-t1-1是式(TAXO)化合物，其通過在式(21-TAXO-t1-1)、式(TAXO-t1-1)中并且在式(TAXO)中的(t1)表示的羥基連接。特別地，式(IIc)化合物是式(20c)化合物。特別地，式(III)化合物選自：式(30)化合物、式(31)化合物、式(32)化合物、式(33)化合物、式(34)化合物、式(35)化合物和式(36)化合物。特別地，式(III0)化合物是式(300)化合物；其中，喜樹堿是式(CAMPTO)化合物，其通過用相應地在式(300)中并且在式(CAMPTO)中的(c1)表示的羥基連接。特別地，式(III0-I-Ⅳa)化合物是式(320)化合物。特別地，式(IV)化合物選自：式(40)化合物、式(41)化合物、式(42)化合物、式(43)化合物、式(44)化合物、式(45)化合物和式(46)化合物。特別地，式(IV0)化合物是式(400)化合物；其中，喜樹堿是式(CAMPTO)化合物，其通過用相應地在式(400)中并且在式(CAMPTO)中的(c1)表示的羥基連接。特別地，式(IV0a)化合物是式(400a)化合物。特別地，式(V)化合物選自：式(50)化合物、式(50-1)化合物、式(51)化合物、式(51-1)化合物、式(52)化合物、式(52-1)化合物、式(53)化合物、式(53-1)化合物、式(54)化合物、式(54-1)化合物、式(54-2)化合物、式(54-3)化合物、式(55)化合物、式(55-1)化合物、式(56)化合物和式(56-1)化合物。特別地，式(V0)化合物是式(500)化合物。特別地，式(VI)化合物選自：式(6)化合物、式(6-1)化合物、式(6-2)化合物、式(6-3)化合物、式(6-4)化合物、式(6b)化合物、式(6b-1)化合物、式(6b-2)化合物、式(6b-3)化合物、式(6b-4)化合物、式(6c)化合物和式(6-5)化合物。本發(fā)明的進一步的主題是化合物，其選自：式(I)化合物、式(II)化合物、式(IIc)化合物、式(III)化合物、式(IV)化合物、式(IV-IIa)化合物、式(V)化合物、式(Va)化合物、式(VI)化合物、式(III0-IIa)化合物、式(III0)化合物、式(IV0)化合物、式(IV0a)化合物、式(V0)化合物和式(III0-I-IVa)化合物；這些化合物如本說明書中所定義，并具有所有其優(yōu)選實施方式。本發(fā)明的進一步的主題是化合物，其選自式(10)化合物、式(11)化合物、式(12)化合物、式(12-101)化合物、式(13)化合物、式(14)化合物、式(15)化合物、式(15-102)化合物、式(16)化合物、式(20c)化合物、式(20)化合物、式(21)化合物、式(22)化合物、式(23)化合物、式(24)化合物、式(25)化合物、式(26)化合物、式(20-CAMPTO)化合物、式(21-CAMPTO)化合物、式(22-CAMPTO)化合物、式(23-CAMPTO)化合物、式(21-TAXO-t1-1)化合物、式(30)化合物、式(31)化合物、式(32)化合物、式(33)化合物、式(34)化合物、式(35)化合物、式(36)化合物、式(300)化合物、式(320)化合物、式(40)化合物、式(41)化合物、式(42)化合物、式(43)化合物、式(44)化合物、式(45)化合物、式(46)化合物、式(400)化合物、式(400a)化合物、式(50)化合物、式(50-1)化合物、式(51)化合物、式(51-1)化合物、式(52)化合物、式(52-1)化合物、式(53)化合物、式(53-1)化合物、式(54)化合物、式(54-1)化合物、式(54-2)化合物、式(54-3)化合物、式(55)化合物、式(55-1)化合物、式(56)化合物、式(56-1)化合物、式(500)化合物、式(6)化合物、式(6-1)化合物、式(6-2)化合物、式(6-3)化合物、式(6-4)化合物、式(6b)化合物、式(6b-1)化合物、式(6b-2)化合物、式(6b-3)化合物、式(6b-4)化合物、式(6c)化合物和式(6-5)化合物；這些化合物如本說明書中所定義。本發(fā)明的另一主題是式(I)化合物作為制備藥物組合物或藥物的用途，所述式(I)化合物如本說明書中所定義，且如在所有它們的優(yōu)選實施方式中所定義。本發(fā)明的進一步的主題是一種藥物組合物或藥物，其中所述藥物組合物和藥物包括式(I)化合物，所述式(I)化合物如本說明書中所定義，也如所有它們的優(yōu)選實施方式中所定義。本發(fā)明的進一步的主題是式(I)化合物、藥物組合物或藥物，其在治療疾病或疾病中的用途，優(yōu)選在治療癌癥中的用途，其中所述藥物組合物和所述藥物包括式(I)化合物，所述式(I)化合物如本說明書中所定義，也如在所有其優(yōu)選實施方式中所定義。式(II)化合物可以很容易地共價連接到配位體LI。令人吃驚的是，本發(fā)明所述的蛋白藥物偶聯物包括連接基團CG2，CG2來自鄰-羥-對-氨基芐醇，且所述蛋白藥物偶聯物包括線性肽殘基，特別是式(I)化合物顯示增強的血漿穩(wěn)定性，并且釋放藥物而沒有讓藥物化學改性，而且，它們表現出良好的水溶性和低團聚。具體實施方式縮略語DCM二氯甲烷DIBAL-H二異丁基氫化鋁DIPEAN,N-二異丙基乙胺DMAN,N-二甲基乙酰胺DMAP4-二甲基氨基吡啶DMFN,N-二甲基甲酰胺EDTA乙二胺四乙酸EEDQ2-乙氧基-1-乙氧羰基-1，2-二氫喹啉ESI-MS電噴霧電離質譜EtOAc乙酸乙酯HIC疏水作用色譜MeCN乙腈NAP-25柱GEHealthcare的NAP-25柱是用SephadexTMG-25DNA級預包裝的一次性用柱且運行只需要重力NMR核磁共振PE石油醚Rf在TLC中的保留因子RP-HPLC反相HPLCRT室溫SAFCSigmaAldrich公司精細化學品SEC-HPLC尺寸排阻色譜法HPLCTBTU2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四氟硼酸四甲基銨THF四氫呋喃TFA三氟乙酸TLC薄層色譜法原材料式(DOXO)化合物多柔比星，作為鹽酸鹽可從北京中碩藥業(yè)科技發(fā)展有限公司購得道諾霉素(daunorubicin)作為鹽酸鹽可從Aldrich商購PBS實驗中所用的PBS具有以下成分，KH2PO4:144mg/L，NaCl:9000mg/L和Na2HPO4:795mg/L實施例1在0℃向對-氨基水楊酸(15.0克)和甲醇(113.0毫升)的混合物中逐滴加入濃硫酸(30.0毫升)。將得到的混合物加熱回流并攪拌2小時，以形成均勻的溶液。然后將反應混合物冷卻至室溫。加入水(360毫升)，接著加入固體碳酸氫鈉直至pH值為7。將所得混合物過濾，用水洗滌(3次，每次用80毫升)濕濾餅，并在55℃下真空干燥，得到14.7克的為固體的式(VII-1)化合物(收率89％)。1HNMR(400MHz，CDCl3，20℃)δ3.90(1H，s)，4.12(2H，brs)，6.16至6.19(2H，m)，7.62至7.65(1H，m).ESI-MS:168.0(M+H)+實施例2向H-Cit-OH(40.0克，1.0當量)和碳酸鈉(50.0克，2.0當量)在水(300毫升)和THF(150毫升)中的混合物在1小時內逐滴加入二-叔-丁基二碳酸酯(60.0克，1.2當量)在THF(100毫升)中的溶液。將得到的混合物在RT下攪拌過夜。之后，用PE(聚乙烯)洗滌(2次，每次用150毫升)懸浮液，然后將混合物在真空下濃縮至約300毫升。用4.0M硫酸氫鉀水溶液將混合物酸化至pH為2，然后用EtOAc萃取(5次，每次用150毫升)。合并有機相，并用飽和鹽水(100毫升)洗滌，用無水硫酸鈉干燥并過濾。將濾液蒸發(fā)至干燥，得到52.0克的Boc-Cit-OH，其為白色固體(收率83％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ1.38(9H，s)，1.36至1.43(2H，m)，1.47至1.69(2H，m)，2.93(2H，q，J＝6.3Hz)，3.82至3.87(1H，m)，5.36(2H，brs)，5.92(1H，t，J＝5.6Hz)，7.07(1H，d，J＝8.0Hz)，12.44(1H，brs).ESI-MS:275.8(M+H)+，550.8(2M+H)+實施例3將EEDQ(72.0克，1.5當量)和根據實施例2制備的Boc-Cit-OH(53.0克，1.0當量)加入THF(400毫升)中。然后向此混合物中加入根據實施例1制備的式(VII-1)化合物(49.0克，1.5當量)。將得到的混合物在室溫下攪拌14小時。然后將反應混合物用水(500毫升)稀釋，用EtOAc萃取(3次，每次用250毫升)。合并有機相，并用1.0M的檸檬酸水溶液洗滌(2次，每次用150毫升)和飽和鹽水(150毫升)洗滌。之后，用無水Na2SO4干燥有機相，然后濃縮至干燥，粗產物通過硅膠柱色譜法純化(洗脫劑PE：EtOAc＝4:1至2:1至1:1(體積/體積)至純EtOAc)并分離，得到62.5克的式(6-4)化合物，其為黃色固體(收率76％)。通過硅膠TLC分析：EtOAc為洗脫液(Rf＝0.3，UV254)。1HNMR(400MHz，CDCl3，20℃)δ1.40(9H，s)，1.57至1.83(4H，m)，3.08至3.16(2H，m)，3.90(3H，s)，4.43(1H，s)，5.26(2H，s)，5.85(2H，s)，7.11(1H，d，J＝8.8Hz)，7.28(1H，s)，7.68(1H，d，J＝8.8Hz)，9.74(1H，s)，10.82(1H，brs).ESI-MS:325.2(M-tBuOCO+2H)+實施例4將根據實施例3制備的式(6-4)化合物(62.0克，1當量)懸置在15％(重量/重量)的鹽酸在1,4-二惡烷(100毫升)中的溶液中，將產生的混合物在室溫下攪拌1小時。然后將反應混合物在真空下濃縮，得到51.6克的HCl鹽形式的式(6-3)化合物，其為白色固體(收率98％)。實施例5將根據實施例4中制備的HCl鹽形式的式(6-3)化合物(75.6克，1.0當量)，Boc-L-Val(43.0克，1.0當量)和TBTU(135.5克，2.0當量)溶解在DMF(250毫升)中。然后，加入DIPEA(71.2克，2.6當量)。將得到的溶液在室溫下攪拌17小時。然后將反應混合物用水(750毫升)稀釋，用EtOAc萃取(5次，每次200毫升)，合并有機相，用1.0MNaHCO3水溶液洗滌(3次，每次用300毫升)，然后用飽和鹽水(150毫升)洗滌。收集有機相并濃縮至干燥，然后將粗產物用硅膠色譜法純化(洗脫液DCM：甲醇MeOH＝20：1至10：1至7：1(體積/體積)并分離，得到62.0克的為固體的式(6-2)化合物(收率57％)。通過硅膠TLC分析：DCM：MeOH＝6:1(V/V)作為洗脫劑(Rf＝0.4，UV254)1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.84(6H，dd，J1＝17.2Hz，J2＝6.8Hz)，1.39(9H，s)，1.42至1.51(2H，m)，1.55至1.73(2H，m)，1.93至1.98(1H，m)，2.90至3.08(2H，m)，3.82至3.84(1H，m)，3.88(3H，s)，4.39至4.45(1H，m)，5.43(2H，s)，6.01(1H，t，J＝5.8Hz)，6.72(1H，d，J＝8.8Hz)，7.09(1H，dd，J1＝8.8Hz，J2＝2.0Hz)，7.73(1H，d，J＝8.8Hz)，8.08(1H，d，J＝7.2Hz)，10.34(1H，s)，10.62(1H，brs)。ESI-MS:524.3(M+H)+，424.3(M-tBuOCO+2H)+實施例6將根據實施例5制備的式(6-2)化合物(62.0克，1當量)懸置在15％(重量/重量)的鹽酸在1,4-二惡烷(200毫升)中的溶液中，將產生的混合物在室溫下攪拌1小時。然后將反應混合物在真空下濃縮，得到52.4克的HCl鹽形式的式(6-1)化合物，其為白色固體(收率97％)。實施例7將根據實施例6制備的HCl鹽形式的式(6-1)化合物(52.4克，1.0當量)，乙酸酐(60.0克，5.0當量)，吡啶(100.0克，11.0當量)和甲醇(150毫升)混合，并在室溫下攪拌7天。過濾懸浮液，將所得的濕濾餅用MeOH洗滌(4次，每次200毫升)，然后在真空下干燥，得到32.9克式(6)化合物，其為白色固體(收率62％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.86(6H，dd，J1＝12.4Hz，J2＝6.8Hz)，1.35至1.50(2H，m)，1.56至1.74(2H，m)，1.87(3H，s)，1.94至2.00(1H，m)，2.93至3.06(2H，m)，3.87(3H，s)，4.20(1H，t，J＝7.6Hz)，4.34至4.39(1H，m)，5.43(2H，s)，6.00(1H，t，J＝5.2Hz)，7.11(1H，dd，J1＝8.8Hz，J2＝1.6Hz)，7.41(1H，d，J＝1.6Hz)，7.73(1H，d，J＝8.8Hz)，7.89(1H，d，J＝8.4Hz)，8.21(1H，d，J＝7.2Hz)，10.24(1H，s)，10.62(1H，s).ESI-MS:466.3(M+H)+，931.3(2M+H)+實施例8在氮氣氛下將式(MA)化合物(5.5克，1.0當量)和β-丙氨酸(5.0克，1.0當量)在DMF(30.0毫升)中攪拌2小時。然后將混合物冷卻至0℃。加入式(HOSu)化合物(8.0克，1.3當量)和DCC(24.0克，2.0當量)。然后將反應混合物溫熱至室溫，并在室溫下攪拌過夜。然后將反應混合物過濾，將所得的濕濾餅用DMF(40.0毫升)洗滌，合并有機相，然后用水(120毫升)稀釋并用DCM(3次，每次50毫升)萃取。合并有機相，用水(50毫升)洗滌，然后用5％(重量/重量)的碳酸氫鈉水溶液(50毫升)洗滌，然后用飽和鹽水(50毫升)洗滌。將有機相用無水硫酸鈉干燥，然后濃縮，直到固體開始沉淀。然后，將PE(20毫升)加入到混合物中，并將得到的混合物在室溫下攪拌10分鐘。然后將混合物過濾，濕濾餅用PE(20毫升)洗滌，然后在真空下干燥，在40℃下過夜，得到4.0克的式(CG1MR-IV-1)化合物，其為白色固體(收率27％)。1HNMR(400MHz，CDCl3，20℃)δ2.84(4H，s)，3.04(2H，t，J＝7.0Hz)，3.95(2H，t，J＝7.0Hz)，6.75(2H，s).ESI-MS:267.2(M+H)+，289.4(M+Na)+實施例9向式(HSGH-II-1)化合物(10.0克，1.0當量)、甲醇(50毫升)和Et3N(10.7克，1.1當量)的混合物逐滴加入Boc2O在MeOH(22.8克，1.1當量Boc2O在50毫升甲醇中)中的溶液。然后將所得混合物在室溫下攪拌15小時，然后在真空下干燥，得到20.0克的式(Boc-HSGH-II-1)化合物，其為淺黃色油狀物(定量收率)。1HNMR(400MHz，CDCl3，20℃)δ1.44(9H，s)，2.73(1H，brs)，3.32(2H，q，J＝5.2Hz)，3.54至3.58(4H，m)，3.72至3.74(2H，m)，5.15(1H，brs)。實施例10在0℃向根據實施例9制備的式(Boc-HSGH-II-1)化合物(6.17克，1當量)，吡啶(2.86克，1.2當量)和DCM(30毫升)的混合物中加入DMAP(0.366克，0.1當量)。逐滴加入甲苯磺酰氯(6.31克，1.1當量)和DCM(45毫升)的混合物。將得到的混合物在室溫下攪拌8天。然后將所得混合物倒入DCM(100毫升)，將所得混合物用水洗滌(1次，用100毫升)，然后將有機相用無水硫酸鈉干燥。將得到的溶液進一步濃縮，并通過硅膠色譜法純化(PE:EtOAc＝6:1至PE:EtOAc＝1:1(體積/體積))，得到8.1克的式(SGM-II-1)化合物，其為無色油狀物(收率75％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.86(6H，dd，J1＝12.4Hz，J2＝6.8Hz)，1.35至1.50(2H，m)，1.56至1.74(2H，m)，1.87(3H，s)，1.94至2.00(1H，m)，2.93至3.06(2H，m)，3.87(3H，s)，4.20(1H，t，J＝7.6Hz)，4.34至4.39(1H，m)，5.43(2H，s)，6.00(1H，t，J＝5.2Hz)，7.11(1H，dd，J1＝8.8Hz，J2＝1.6Hz)，7.41(1H，d，J＝1.6Hz)，7.73(1H，d，J＝8.8Hz)，7.89(1H，d，J＝8.4Hz)，8.21(1H，d，J＝7.2Hz)，10.24(1H，s)，10.62(1H，s)。實施例11將根據實施例7制備的式(6)化合物(3.00克，1當量)，根據實施例10制備的式(SGM-II-1)化合物(4.65克，2當量)、K2CO3(1.82克，2當量)和無水DMF(30毫升)的混合物加熱至50℃，并在氮氣氛下攪拌7天。然后將反應混合物在真空下濃縮至干燥。向殘余物加入甲醇(30毫升)，將所得混合物攪拌10分鐘，然后過濾。將濕濾餅用甲醇洗滌(3次，每次10毫升)。合并有機相，然后濃縮。殘余物通過硅膠柱色譜法純化(DCM：甲醇＝7:1(體積/體積))，得到3.40克的式(50-1)化合物，為淺黃色固體(收率81％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.86(6H，dd，J1＝12.8Hz，J2＝6.8Hz)，1.38至1.51(2H，m)，1.56至1.80(2H，m)，1.89(3H，s)，1.92至2.01(1H，m)，2.92至3.05(2H，m)，3.07至3.12(2H，m)，3.50(2H，t，J＝6.0Hz)，3.75至3.77(5H，m)，4.08至4.10(2H，m)，4.20(1H，dd，J1＝8.4Hz，J2＝6.8Hz)，4.34至4.40(1H，m)，5.42(2H，s)，5.99(1H，t，J＝5.8Hz)，6.74(1H，t，J＝5.6Hz)，7.26(1H，dd，J1＝8.4Hz，J2＝1.6Hz)，7.49(1H，d，J＝2.0Hz)，7.68(1H，d，J＝8.8Hz)，7.91(1H，d，J＝8.4Hz)，8.19(1H，d，J＝7.6Hz)，10.20(1H，s)。ESI-MS:653.4(M+H)+，675.5(M+Na)+，553.5(M-tBuOCO+2H)+實施例12將根據實施例11制備的式(50-1)化合物(500毫克)，和10％(重量/重量)的HCl在1,4-二惡烷(10毫升)中的溶液的混合物在室溫下攪拌15小時。真空下除去溶劑，得到431毫克的HCl鹽形式的式(50)化合物，其為微黃色固體(定量收率)。ESI-MS:553.5(M+H)+，1105.2(2M+H)+實施例13在-30℃下向根據實施例12制備的HCl鹽形式的式(50)化合物(1.10克，1.0當量)和無水THF(20毫升)的混合物中加入DIBAL-H在己烷中的溶液(1M，11.9ml，6.0當量)。然后將得到的混合物加熱至0℃，并在氮氣氛下攪拌15小時。然后加入甲醇(2.0毫升)。然后將飽和酒石酸鈉鉀水溶液(10毫升)加入到混合物中，并將該混合物在室溫下攪拌30分鐘。將所得的混合物蒸發(fā)至干燥，以產生白色的殘余物，用甲醇洗滌(5次，每次10毫升)該殘余物。濃縮合并的有機相，并用硅膠柱色譜法純化(DCM：MeOH：Et3N＝65：33：2(體積/體積))，得到0.65g的式(40)化合物，其為白色固體(收率72％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，60℃)δ0.86(6H，t，J＝6.6Hz)，1.37至1.53(2H，m)，1.63至1.79(2H，m)，1.92(3H，s)，1.99至2.07(1H，m)，2.70(2H，brs)，2.99至3.02(2H，m)，3.47(2H，t，J＝5.6Hz)，4.07(2H，t，J＝5.8Hz)，4.18(1H，t，J＝7.6Hz)，4.34至4.41(1H，m)，5.25(2H，s)，5.90(1H，brs)，7.16(1H，d，J＝8.0Hz)，7.26(2H，d，J＝8.0Hz)，7.32(1H，s)，7.76(1H，d，J＝7.6Hz)，7.91(1H，d，J＝4.4Hz)，9.69(1H，s).ESI-MS:525.6(M+H)+實施例14在室溫下向根據實施例13制備的式(40)化合物(500.2毫克，1.0當量)，根據實施例8制備的式(CG1MR-IV-1)化合物(281.0毫克，1.1當量)和DMF(9.5毫升)的混合物中加入DIPEA(140.3毫克，1.1當量)。將得到的混合物在室溫下攪拌17小時。然后，在真空下除去DMF，得到淺黃色殘余物。然后將殘余物與丙酮(10毫升)混合，并在室溫下攪拌18小時。將混合物過濾，用丙酮洗滌(2次，每次用5毫升)濕濾餅，然后在真空下干燥，得到515.0毫克的式(30)化合物，其為淺黃色固體(收率80％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.86(6H，dd，J1＝11.2Hz，J2＝6.8Hz)，1.32至1.48(2H，m)，1.55至1.76(2H，m)，1.89(3H，s)，1.94至2.02(1H，m)，2.33(2H，t，J＝7.2Hz)，2.93至3.04(2H，m)，3.16至3.20(2H，q，J＝5.6Hz)，3.46(2H，t，J＝5.8Hz)，3.60(2H，t，J＝7.8Hz)，3.73(2H，t，J＝4.6Hz)，4.04(2H，t，J＝4.6Hz)，4.18(1H，dd，J1＝8.4Hz，J2＝6.8Hz)，4.34至4.39(1H，m)，4.44(2H，s)，4.88(1H，brs)，5.42(2H，s)，6.00(1H，t，J＝5.4Hz)，7.00(2H，s)，7.16(1H，dd，J1＝8.4Hz，J2＝2.0Hz)，7.26(1H，d，J＝8.4Hz)，7.32(1H，d，J＝1.6Hz)，7.92(1H，d，J＝8.4Hz)，8.05(1H，t，J＝5.6Hz)，8.12(1H，d，J＝7.6Hz)，9.88(1H，s)。實施例15將根據實施例14制備的式(30)化合物(400毫克，1.0當量)，DIPEA(231.0毫克，3.0當量)，4埃分子篩(800毫克)和無水DMF(8.0毫升)的混合物攪拌5分鐘。然后，加入式(II-1)化合物(361.2毫克，2當量)。將得到的混合物在室溫下攪拌3小時。然后加入HCl鹽形式的式(DOXO)化合物(342.8毫克，1.0當量)，并將該混合物攪拌4小時。然后加入MeCN(40.0毫升)。形成沉淀，并過濾，用MeCN和DMF(5：1(體積/體積)，2次，每次用5毫升)的混合物洗滌。合并濾液，并在45℃真空干燥，得到暗紅色殘余物。將殘余物用MeCN洗滌(2次，每次用10毫升)，然后將殘余物溶解在丙酮和水的混合物(20：1(體積/體積))中，并通過制備型硅膠TLC純化(DCM：MeOH＝5：1(體積/體積)，Rf＝0.15)。將產物由丙酮和水的混合物(20：1(體積/體積)，6次，每次20毫升)從硅膠萃取，將合并的萃取液在真空下干燥，得到為紅色固體的粗產物。然后將粗產物與乙腈(5.0毫升)混合，將混合物在室溫下攪拌5小時，然后過濾。將濾餅與乙腈(5.0毫升)混合，將混合物在室溫下攪拌3小時。然后將混合物過濾。在室溫下將濾餅真空干燥，得到48.0毫克的式(20)化合物，其為紅色固體(收率7％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.85(6H，dd，J1＝11.2Hz，J2＝6.8Hz)，1.13(3H，d，J＝6.4Hz)，1.34至1.47(3H，m)，1.57至1.72(2H，m)，1.82至1.90(1H，m)，1.90(3H，s)，1.93至1.98(1H，m)，2.08至2.22(2H，m)，2.29(2H，t，J＝7.2Hz)，2.91至3.01(4H，m)，3.11至3.16(2H，m)，3.41(2H，t，J＝5.6Hz)，3.45至3.46(1H，m)，3.54(2H，t，J＝7.2Hz)，3.68至3.74(3H，m)，3.98(3H，s)，4.03(2H，t，J＝4.0Hz)，4.17(2H，t，J＝7.6Hz)，4.32至4.38(1H，m)，4.58(2H，d，J＝5.2Hz)，4.69(2H，d，J＝5.6Hz)，4.85至4.89(2H，m)，4.94(1H，brs)，5.22(1H，brs)，5.40(2H，s)，5.46(1H，brs)，5.98(1H，t，J＝4.8Hz)，6.80(1H，d，J＝8.0Hz)，6.95(2H，s)，7.12(1H，d，J＝8.4Hz)，7.19(1H，d，J＝8.4Hz)，7.36(1H，s)，7.64(1H，brs)，7.89至7.91(3H，m)，7.99(1H，t，J＝5.2Hz)，8.10(1H，d，J＝7.2Hz)，9.92(1H，s)，13.26(1H，s)，14.02(1H，s)。ESI-MS:1245.5(M+H)+實施例16在0℃下向式(HSGH-III-1)化合物(110.16克，5當量)和二惡烷(400毫升)的混合物逐滴加入Boc2O(22.10克，1當量)在二惡烷(200毫升)中的混合物。然后將所得混合物加熱至室溫，然后攪拌20小時。然后在真空下除去溶劑。將得到的殘余物加入水(300毫升)中，將所得混合物用DCM萃取(2次，每次用300毫升)。將有機層用無水硫酸鈉干燥，然后蒸發(fā)至干燥。殘余物通過硅膠柱色譜法純化(DCM：乙酸乙酯＝1：1(體積/體積)，然后用DCM：MeOH：Et3N＝89：9：2(體積/體積))，得到17.7克的式(Boc-HSGH-III-1)化合物，其為淺黃色油狀物(收率55％)。1HNMR(400MHz，CDCl3，20℃)δ1.44(9H，s)，1.64(2H，s)，1.72-1.78(4H，m)，2.81(2H，t，J＝6.6Hz)，3.23(2H，q，J＝6.0Hz)，3.55-3.62(8H，m)，3.64-3.66(4H，m)，5.14(1H，brs)。實施例17在0℃下在1小時內向根據實施例18制備的式(Boc-HSGH-III-1)化合物(5.00克，1.0當量)、K2CO3(4.30克，2.0當量)和DCM(40毫升)的混合物逐滴加入式(HSGHReac-1)化合物(2.17克，1.2當量)在DCM(20毫升)中的混合物。將得到的混合物溫熱至室溫并攪拌20小時。然后將固體過濾，用DCM(2次，每次用5ml)洗滌濾餅。合并濾液并蒸發(fā)至干燥。然后將殘留物用硅膠柱色譜法純化(洗脫劑：EtOAc：PE＝3：1)，得到5.6克的式(SGM-III-1)化合物，其為淺黃色油狀物(收率90％)。1HNMR(400MHz，CDCl3，20℃)δ1.44(9H，s)，1.64(2H，s)，1.73-1.86(4H，m)，3.23(2H，q，J＝6.0Hz)，3.44(2H，q，J＝6.0Hz)，3.54(2H，t，J＝6.0Hz)，3.58-3.66(10H，m)，4.04(2H，s)，4.98(1H，brs)，7.31(1H，brs).實施例18將根據實施例7制備的式(6)化合物(5.80克，1.0當量)、K2CO3(5.18克，2.0當量)、根據制備例17制備的式(SGM-III-1)化合物(9.95克，2.0當量)和DMF(45ml)混合。然后將得到的混合物加熱至50℃，并在氮氣氛下攪拌7天。將得到的反應混合物在真空下蒸發(fā)至干燥。向殘留物中加入甲醇(40毫升)，將所得混合物攪拌10分鐘，然后過濾。將濕濾餅用甲醇洗滌(3次，每次10毫升)。將有機濾液收集并合并，然后蒸發(fā)。殘余物通過硅膠柱色譜法純化(DCM：MeOH＝7:1(體積/體積))，得到7.20克式(51-1)化合物，其為淺黃色固體(收率70％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.86(6H，dd，J1＝13.6Hz，J2＝6.8Hz)，1.32至1.49(2H，m)，1.37(9H，s)，1.55至1.78(6H，m)，1.89(3H，s)，1.94至1.99(1H，m)，2.93至3.07(4H，m)，3.26(2H，q，J＝6.8Hz)，3.37(2H，t，J＝6.4Hz)，3.43至3.52(10H，m)，3.81(3H，s)，4.20(1H，dd，J1＝8.4Hz，J2＝6.8Hz)，4.35至4.41(1H，m)，4.53(2H，s)，5.44(2H，s)，6.03(1H，t，J＝5.6Hz)，6.74(1H，t，J＝5.6Hz)，7.36(1H，dd，J1＝8.4Hz，J2＝2.0Hz)，7.41(1H，d，J＝2.0Hz)，7.80(1H，d，J＝8.8Hz)，7.90(1H，d，J＝8.4Hz)，8.06(1H，t，J＝5.6Hz)，8.21(1H，d，J＝7.2Hz)，10.32(1H，s)。ESI-MS:726.6(M-tBuOCO+2H)+，826.3(M+H)+，848.5(M+Na)+實施例19將根據實施例18制備的式(51-1)化合物(1.00克)和15％(體積/體積)的鹽酸在1,4-二惡烷(10毫升)中的溶液混合。將混合物在室溫下攪拌3小時。真空下除去溶劑，得到0.99克的HCl鹽形式的式(51)化合物，其為微黃色固體(定量收率)。ESI-MS:726.6(M+H)+實施例20將根據實施例19制備的HCl鹽形式的式(51)化合物(6.08克，1當量)、水(100毫升)、氯化鈣(1.86克，2.0當量)、和硼氫化鈉(1.27克，4.0當量)的混合物在室溫下攪拌。分批加入另外的硼氫化鈉(1.27克，4.0當量，經過共15個小時的攪拌后；1.27克，4.0當量，經過共20個小時的攪拌后；1.27克，4.0當量，經過共24個小時的攪拌后)。經過共36個小時的攪拌后，向混合物中加入甲醇(30毫升)。然后將反應混合物過濾，用甲醇洗滌(3次，每次用10毫升)濕濾餅。將液相收集、合并、并接著蒸發(fā)至干燥。將殘余物通過硅膠柱色譜法純化(洗脫液DCM：MeOH：Et3N＝65：33：2(體積/體積))，得到2.70克的式(41)化合物，其為淺黃色固體(收率48％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.86(6H，dd，J1＝10.8Hz，J2＝6.8Hz)，1.31至1.49(2H，m)，1.55至1.82(6H，m)，1.90(3H，s)，1.93至2.02(1H，m)，2.82(2H，t，J＝7.4Hz)，2.98至3.05(2H，m)，3.15至3.20(2H，q，J＝6.8Hz)，3.34至3.51(12H，m)，4.16至4.20(1H，m)，4.34至4.41(1H，m)，4.46(2H，s)，4.50(2H，s)，5.47(2H，s)，6.13(1H，t，J＝5.6Hz)，7.25(2H，s)，7.26(1H，s)，7.95(1H，d，J＝8.8Hz)，8.10(1H，t，J＝5.6Hz)，8.14(1H，d，J＝7.6Hz)，10.01(1H，s)。ESI-MS:698.7(M+H)+實施例21將根據實施例20制備的式(41)化合物(2.78克，1.0當量)、根據實施例8制備的式(CG1MR-IV-1)化合物(1.18克，1.1當量)、和DMF(30毫升)在室溫下混合。然后加入DIPEA(0.58克，1.1當量)。將得到的混合物在室溫下攪拌16小時。然后在真空下除去DMF，得到淺黃色殘余物。然后將殘余物與丙酮(30毫升)混合，并將該混合物在室溫下攪拌5小時。然后將混合物過濾，濕濾餅用丙酮洗滌(2次，每次用15毫升)，然后在真空下干燥，得到2.55克的式(31)化合物，其為淺黃色固體(收率75％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.86(6H，dd，J1＝11.2Hz，J2＝6.8Hz)，1.32至1.48(2H，m)，1.55至1.73(2H，m)，1.89(3H，s)，1.93至2.01(1H，m)，2.31(2H，t，J＝7.2Hz)，2.90至3.11(4H，m)，3.17(2H，q，J＝6.4Hz)，3.36(2H，t，J＝6.4Hz)，3.44至3.60(8H，m)，3.60(2H，t，J＝7.2Hz)，4.19(1H，dd，J1＝8.4Hz，J2＝6.8Hz)，4.35至4.40(1H，m)，4.46(2H，s)，4.51(2H，s)，5.08(1H，brs)，5.42(2H，s)，6.00(1H，t，J＝5.6Hz)，7.00(2H，s)，7.22(1H，s)，7.25(1H，s)，7.89至7.91(1H，m)，8.04(1H，t，J＝5.6Hz)，8.10(1H，d，J＝7.6Hz)，9.92(1H，s).ESI-MS:831.6(M-OH)+，849.4(M+H)+實施例22將根據實施例21制備的式(31)化合物(500.4毫克，1.0當量)、DIPEA(305.7毫克，4.0當量)、4埃分子篩(500.5毫克)和無水DMF(10.0毫升)的混合物攪拌5分鐘。然后，加入式(II-1)化合物(271.1毫克，1.5當量)。將得到的混合物在室溫下攪拌5小時。然后，加入HCl鹽形式的式(DOXO)化合物(342.8毫克，1.0當量)，將所得混合物攪拌3.5小時。然后加入MeCN(50.0毫升)。形成沉淀，過濾，并用MeCN與DMF(5：1(體積/體積)，3次，每次10毫升)洗滌。將濾液合并，在45℃下真空干燥，得到暗紅色殘余物。將殘余物溶解在DCM與MeOH(7：1(體積/體積))的混合物中，并通過制備型硅膠TLC(DCM：MeOH＝7:1(體積/體積)，Rf＝0.15)純化。用丙酮與水的混合物(20：1(體積/體積)，5次，每次用50毫升)將產物從硅膠萃取，將合并的萃取液在真空下干燥，得到為紅色固體的粗產物。然后將粗產物與乙腈(30毫升)混合，將混合物在室溫下攪拌18小時，然后過濾。將濾餅與乙腈(10毫升)混合，并在室溫下攪拌該混合物3小時。然后將混合物過濾。在室溫下，將濾餅在真空下干燥，得到100.3毫克的式(21)化合物，其為紅色固體(收率12％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.85(6H，dd，J1＝11.8Hz，J2＝6.8Hz)，1.13(3H，d，J＝6.4Hz)，1.34至1.68(9H，m)，1.82至1.90(1H，m)，1.90(3H，s)，1.93至2.00(1H，m)，2.13至2.24(2H，m)，2.30(2H，t，J＝7.2Hz)，2.91至3.04(6H，m)，3.10至3.15(2H，m)，3.29(2H，t，J＝6.0Hz)，3.37至3.49(11H，m)，3.59(2H，t，J＝7.2Hz)，3.68至3.76(1H，m)，3.99(3H，s)，4.13至4.19(2H，m)，4.33至4.41(3H，m)，4.58(2H，d，J＝5.6Hz)，4.71(1H，d，J＝5.2Hz)，4.86(1H，t，J＝5.8Hz)，4.95(1H，brs)，5.02(2H，s)，5.23(1H，brs)，5.41(2H，s)，5.46(1H，brs)，5.99(1H，t，J＝4.6Hz)，6.87(1H，d，J＝7.2Hz)，7.00(2H，s)，7.21至7.25(3H，m)，7.66(1H，t，J＝4.6Hz)，8.11(1H，d，J＝7.2Hz)，9.97(1H，s)，13.28(1H，s)，14.04(1H，s).ESI-MS:1417.8(M+H)+實施例23在室溫下2小時內向式(HSGH-III-2)化合物(84.9克，5.0當量)和CHCl3(500毫升)的混合物中逐滴加入Boc2O(50.0克，1.0當量)在CHCl3(200毫升)中的混合物。在室溫下將得到的溶液攪拌16小時。將所得懸浮液過濾，并用DCM(50毫升)洗滌濕濾餅。將濾液合并，蒸發(fā)至干燥，得到無色油狀物。然后將該油狀物溶于DCM(200毫升)中，用水(300毫升)洗滌，并用無水硫酸鈉干燥。然后將所得的有機相蒸發(fā)至干燥，產物用硅膠柱色譜法純化(洗脫液DCM：MeOH＝20：1至5：1(體積/體積))，得到13.0克的式(Boc-HSGH-III-2)化合物(收率33％)。1HNMR(400MHz，CDCl3，20℃)δ1.32(9H，s)，1.46-1.53(4H，m)，2.64(2H，t，J＝6.4Hz)，3.06至3.09(2H，m)，5.22(1H，brs).實施例24在0℃下在40分鐘內向根據實施例23制備的式(Boc-HSGH-III-2)化合物(11.3克)，K2CO3(18.0克)和DCM(200毫升)的混合物中逐滴加入式(HSGHReac-1)化合物與DCM(50毫升)的混合物。然后將所得混合物加熱至室溫并攪拌2小時。然后，加入檸檬酸水溶液(％(重量)，基于溶液的重量，180毫升)。分離有機相，用飽和鹽水(100毫升)洗滌，用無水硫酸鈉干燥，然后蒸發(fā)至干燥。然后殘留物通過硅膠柱色譜法純化(洗脫劑PE：EtOAc2：1至1：1至1：2(體積/體積))，得到13.9克的式(SGM-III-2)化合物，其為白色固體(收率89％)。1HNMR(400MHz，CDCl3，20℃)δ1.46(9H，s)，1.68至1.71(2H，m)，3.20(2H，q，J＝6.2Hz)，3.39(2H，q，J＝6.4Hz)，4.07(2H，s)，4.87(1H，brs)，7.17(1H，brs).實施例25將根據實施例7制備的式(6)化合物(5.51克，1.0當量)、根據實施例24制備的式(SGM-III-2)化合物(6.02克，2.0當量)、K2CO3(3.31克，2.0當量)、和無水DMF(30毫升)的混合物加熱至50℃，并在氮氣氣氛下攪拌7天。然后將反應混合物在真空下濃縮至干燥。將MeOH(40毫升)加入到殘余物中，將所得混合物攪拌10分鐘，然后過濾。將濕濾餅用甲醇洗滌(3次，每次用10毫升)。收集濾液，合并，然后濃縮。殘余物通過硅膠柱色譜法(洗脫液DCM：MeOH＝7:1(體積/體積))純化，得到3.8克的式(52-1)化合物，其為淺黃色固體(收率46％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.88(6H，dd，J1＝9.6Hz，J2＝6.8Hz)，1.32至1.50(2H，m)，1.52至1.82(4H，m)，1.90(3H，s)，1.92至1.97(1H，m)，2.91至3.05(4H，m)，3.17至3.22(2H，m)，3.81(3H，s)，4.13(1H，t，J＝7.6Hz)，4.33至4.39(1H，m)，5.42(2H，s)，5.98(1H，t，J＝5.8Hz)，6.80(1H，t，J＝5.4Hz)，7.45(1H，dd，J1＝8.6Hz，J2＝1.8Hz)，7.50(1H，d，J＝1.6Hz)，7.80(1H，d，J＝8.6Hz)，8.02至8.05(2H，m)，8.50(1H，d，J＝11.6Hz)，10.14(1H，s).ESI-MS:580.5(M-tBuOCO+2H)+，680.4(M+H)+，1359.0(2M+H)+實施例26在室溫下將根據實施例25制備的式(52-1)化合物(3.40克)，和10％(重量/重量)的鹽酸在1,4-二惡烷(50毫升)中的溶液的混合物攪拌15小時。然后將反應混合物在真空下濃縮，得到3.20克HCl鹽形式的式(52)化合物，其為白色固體(定量收率)。在下一步驟中直接使用該粗混合物。實施例27將根據實施例26制備的HCl鹽形式的式(52)化合物(3.00克，1當量)、水(60毫升)、氯化鈣(1.09克，2.0當量)和硼氫化鈉(0.75克，4.0當量)的混合物在室溫下攪拌。分批加入額外的硼氫化鈉(0.75克，4.0當量，經過共15個小時的攪拌后；0.74克，4.0當量，經過共19小時的攪拌后；0.74克，4.0當量，經過共23小時的攪拌后)。經過共40小時的攪拌后，向混合物中加入甲醇(15毫升)。然后將反應混合物過濾，濕濾餅用甲醇洗滌(3次，每次用10毫升)。將濾液收集，合并，然后蒸發(fā)至干燥。殘余物通過硅膠柱色譜法純化(洗脫液DCM：MeOH：Et3N＝65：33：2(體積/體積))，得到1.05克的式(42)化合物，其為淺黃色固體(收率39％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.86(6H，dd，J1＝11.0Hz，J2＝6.8Hz)，1.30至1.46(2H，m)，1.48至1.73(4H，m)，1.89(3H，s)，1.93至2.01(1H，m)，2.56(1H，t，J＝6.8Hz)，2.91至3.06(4H，m)，3.13至3.22(2H，m)，4.16至4.20(1H，m)，4.34至4.39(1H，m)，4.46(2H，s)，4.50(2H，s)，5.45(2H，s)，6.06(1H，t，J＝5.6Hz)，7.22至7.27(3H，m)，7.94(1H，d，J＝8.4Hz)，8.16至8.19(2H，m)，9.96(1H，s).ESI-MS:534.2(M-OH)+，552.2(M+H)+實施例28將根據實施例27制備的式(42)化合物(940.4毫克，1.0當量)、根據實施例8制備的式(CG1MR-IV-1)化合物(501.2毫克，1.1當量)、和DMF(10毫升)混合。然后，在室溫下加入DIPEA(247.0毫克，1.1當量)。將得到的混合物在室溫下攪拌4小時。然后在真空下除去DMF，得到淺黃色殘余物。然后將殘留物與丙酮(20毫升)混合，并將得到的混合物在室溫下攪拌2小時。然后將混合物過濾，濕濾餅用丙酮洗滌(3次，每次用5毫升)，然后在真空下干燥，得到950.0毫克的式(32)化合物，其為淺黃色固體(收率79％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.86(6H，dd，J1＝11.2Hz，J2＝6.8Hz)，1.34至1.46(2H，m)，1.47至1.73(4H，m)，1.89(3H，s)，1.94至2.01(1H，m)，2.32(2H，t，J＝7.6Hz)，2.92至3.05(4H，m)，3.10至3.15(2H，m)，3.60(2H，t，J＝7.2Hz)，4.17至4.20(1H，m)，4.34至4.42(1H，m)，4.46(2H，s)，4.52(2H，s)，5.08(1H，brs)，5.42(2H，s)，5.99(1H，t，J＝5.6Hz)，7.00(2H，s)，7.21(1H，s)，7.25(2H，s)，7.90(1H，d，J＝8.4Hz)，7.95(1H，t，J＝5.6Hz)，8.05(1H，t，J＝5.6Hz)，8.11(1H，d，J＝7.6Hz)，9.92(1H，s)。實施例29將根據實施例28制備的式(32)化合物(402.5毫克，1.0當量)、4埃分子篩(800.0毫克)、無水DMF(8.0毫升)和式(II-1)化合物(347.3毫克，2.0當量)的混合物攪拌5分鐘。然后，加入DIPEA(297.7毫克，4.0當量)。將得到的混合物在室溫下攪拌5小時。然后，加入HCl鹽形式的式(DOXO)化合物(332.2毫克，1.0當量)，然后將混合物攪拌4小時。然后加入MeCN(40.0毫升)。形成沉淀，過濾并用MeCN和DMF(5：1(體積/體積)，2次，每次用5毫升)的混合物洗滌。合并濾液，在45℃下真空干燥，得到暗紅色殘余物。將殘余物溶于DCM和MeOH(10：1(體積/體積))的混合物，并通過制備型硅膠薄層色譜法純化(DCM：MeOH＝7:1(體積/體積)中，Rf＝0.15)。用丙酮和水的混合物(20：1(體積/體積)，5次，每次用50毫升)從硅膠萃取該產物，將合并的萃取液在真空下干燥，得到為紅色固體的粗產物。然后將粗產物與乙腈(20毫升)混合，將混合物在室溫下攪拌2小時，然后過濾。在室溫下將濾餅在真空下干燥，得到74.0毫克的式(22)化合物，其為紅色固體(收率10％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.84(6H，dd，J1＝10.8Hz，J2＝6.8Hz)，1.13(3H，d，J＝6.4Hz)，1.30至1.49(5H，m)，1.56至1.69(2H，m)，1.81至1.88(4H，m)，1.93至1.98(1H，m)，2.13至2.25(2H，m)，2.28(2H，t，J＝7.2Hz)，2.92至3.07(8H，m)，3.45(1H，brs)，3.56(2H，t，J＝7.2Hz)，3.73(1H，brs)，3.99(3H，s)，4.15至4.19(2H，m)，4.35至4.38(1H，m)，4.41(2H，s)，4.58(2H，d，J＝5.8Hz)，4.71(1H，d，J＝5.6Hz)，4.85(1H，t，J＝6.0Hz)，4.94(1H，brs)，5.03(2H，s)，5.22(1H，brs)，5.42(2H，s)，5.47(1H，brs)，6.02(1H，t，J＝4.6Hz)，6.87(1H，d，J＝8.0Hz)，6.97(2H，s)，7.22至7.25(3H，m)，7.65(1H，t，J＝4.8Hz)，7.88至7.90(5H，m)，8.11(1H，d，J＝7.6Hz)，9.98(1H，s)，13.27(1H，s)，14.02(1H，s).ESI-MS:1271.9(M+H)+，1294.4(M+Na)+實施例30在0℃在1小時內向式(HSGH-II-2)化合物(21.24克，1.0當量)和在MeOH(100毫升)中的Et3N(21.03克，1.1當量)的混合物中逐滴加入Boc2O(43.83克，1.1當量)在MeOH(50毫升)中的溶液。然后將混合物溫熱至室溫并攪拌24小時。然后將得到的混合物在真空下蒸發(fā)至干燥，得到43.05克的式(Boc-HSGH-II-2)化合物，其為黃色油狀物(定量收率)。1HNMR(400MHz，CDCl3，20℃)δ1.30至1.43(4H，m)，1.45(9H，s)，1.48至1.61(4H，m)，1.70(1H，brs)，3.12(2H，q，J＝6.8Hz)，3.64(2H，t，J＝6.8Hz)，4.57(1H，brs).實施例31在0℃向根據實施例30制備的式(Boc-HSGH-II-2)化合物(20.02克，1.0當量)、吡啶(8.02克，1.1當量)和二氯甲烷(50毫升)的混合物中在2小時內逐滴加入TSCl(19.33克，1.1當量)在二氯甲烷(75mL)中的混合物。將得到的混合物在室溫下攪拌7天。然后將溶液蒸發(fā)至干燥。將殘余物與溶劑的混合物洗滌(PE：乙酸乙酯＝6:1(體積/體積)，4次，每次用100毫升)，并過濾。合并濾液，然后蒸發(fā)至干燥。進一步將粗產物用硅膠柱色譜法純化(PE：乙酸乙酯＝6:1(體積/體積))，得到14.20克式(SGM-II-2)化合物，其為白色固體(收率41％)。1HNMR(400MHz，CDCl3，20℃)δ1.22至1.37(4H，m)，1.39至1.47(11H，ms)，1.62至1.68(2H，m)，2.46(3H，s)，3.07(2H，t，J＝6.6Hz)，4.02(2H，t，J＝6.4Hz)，4.52(1H，brs)，7.36(2H，d，J＝8.0Hz)，7.78至7.82(2H，m).實施例32將根據實施例7制備的式(6)化合物(9.31克，1.0當量)、根據實施例31制備的式(SGM-II-2)化合物(14.90克，2.0當量)、K2CO3(5.65克，2.0當量)和無水DMF(60毫升)的混合物加熱至50℃，并在氮氣氣氛下攪拌9天。將反應混合物蒸發(fā)至干燥。向該殘余物加入甲醇(40毫升)，并將得到的混合物攪拌10分鐘，然后過濾，進一步將濾餅用MeOH洗滌(3次，每次用15毫升)。合并濾液，蒸發(fā)至干燥。將殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到6.35克的式(53-1)化合物，其為微黃色固體(收率48％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.86(6H，dd，J1＝12.0Hz，J2＝6.8Hz)，1.24至1.33(2H，m)，1.35至1.48(15H，m)，1.56至1.76(4H，m)，1.89(3H，s)，1.92至2.01(1H，m)，2.89至3.05(4H，m)，3.75(3H，s)，3.97(2H，t，J＝6.2Hz)，4.17至4.21(1H，m)，4.34至4.39(1H，m)，5.41(2H，s)，5.99(1H，t，J＝5.8Hz)，6.77(1H，t，J＝5.2Hz)，7.24(1H，dd，J1＝8.6Hz，J2＝1.8Hz)，7.47至7.48(1H，m)，7.67(1H，d，J＝8.6Hz)，7.90(1H，d，J＝8.6Hz)，8.18(1H，d，J＝7.4Hz)，10.17(1H，s).ESI-MS:565.0(M-tBuOCO+2H)+，664.8(M+H)+，1329.1(2M+H)+實施例33將根據實施例32制備的式(53-1)化合物(8.10克)和10％(重量/重量)的HCl在1,4-二惡烷(50毫升)中的溶液進行混合。將混合物在室溫下攪拌1.5小時。真空下除去溶劑，得到9.00克HCl鹽形式的式(53)化合物，其為白色固體(定量收率)。實施例34在-30℃下向根據實施例33制備的HCl鹽形式的式(53)化合物(4.01克，1.0當量)和無水THF(40毫升)的混合物中加入DIBAL-H在己烷(1M，51.1毫升，8.1當量)中的溶液。然后將得到的混合物加熱至0℃，并在氮氣氣氛下攪拌2.5小時，然后自然地溫熱至室溫并攪拌16小時。然后將該混合物冷卻至0℃。加入甲醇(10毫升)。然后將飽和酒石酸鈉鉀(100毫升)水溶液加入到混合物中，將該混合物在室溫下攪拌1小時。將所得的混合物蒸發(fā)至干燥，產生白色的殘余物，將該白色殘余物與甲醇(60毫升)混合，并攪拌1小時。過濾所得懸浮液，用甲醇進一步洗滌(3次，每次用30毫升)濾餅。將合并的濾液濃縮并通過硅膠柱色譜法純化(DCM：甲醇：Et3N＝66：32：2(體積/體積))，得到1.81克的式(43)化合物，其為白色固體(收率53％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.86(6H，dd，J1＝10.4Hz，J2＝6.8Hz)，1.31至1.46(8H，m)，1.55至1.74(4H，m)，1.90(3H，s)，1.94至2.02(1H，m)，2.60(2H，t，J＝6.8Hz)，2.91至3.05(2H，m)，3.92(2H，t，J＝6.4Hz)，4.16至4.20(1H，m)，4.34至4.39(1H，m)，4.44(2H，s)，5.43(2H，s)，6.07(1H，t，J＝5.6Hz)，7.14至7.17(1H，m)，7.25(1H，d，J＝8.0Hz)，7.32(1H，d，J＝2.0Hz)，7.94(1H，d，J＝8.4Hz)，8.13(1H，d，J＝7.6Hz)，9.90(1H，s).ESI-MS:519.9(M-OH-)+，538.0(M+H)+，1129.5(2M+H)+實施例35將根據實施例34制備的式(43)化合物(1.13克，1.0當量)、馬來酸酐(207.3毫克，1.1當量)、和DMF(10毫升)的混合物在室溫下攪拌20小時。向所得的溶液中加入式(HOSu)化合物(225.1毫克，1.0當量)和EDC(以其單氫氯化物的形式存在)(745.0毫克，2.0當量)。將得到的混合物進一步在室溫下攪拌4天。將混合物蒸發(fā)至干燥，然后與丙酮(30毫升)混合。將得到的混合物在室溫攪拌20小時，然后過濾。將濾餅用丙酮洗滌(3次，每次用15毫升)，然后在真空下干燥，得到1.10克的式(33)化合物，其為淺黃色固體(收率90％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.86(6H，dd，J1＝10.2Hz，J2＝6.8Hz)，1.26至1.55(8H，m)，1.59至1.78(4H，m)，1.90(3H，s)，1.93至2.02(1H，m)，2.95至3.06(2H，m)，3.41(2H，t，J＝7.0Hz)，3.89(2H，t，J＝6.2Hz)，4.16至4.20(1H，m)，4.34至4.40(1H，m)，4.43(2H，s)，5.42(2H，brs)，6.05(1H，brs)，7.00(2H，s)，7.15至7.18(1H，m)，7.24至7.29(2H，m)，7.93(1H，d，J＝8.4Hz)，8.11(1H，d，J＝7.6Hz)，9.87(1H，s).ESI-MS:599.6(M-OH-)+，639.8(M+Na)+實施例36將根據實施例35制備的式(33)化合物(50.2毫克，1.0當量)、4埃分子篩(100.0毫克)、無水DMF(1.0毫升)和式(II-1)化合物(37.0毫克，1.6當量)的混合物在室溫下攪拌5分鐘。然后加入DIPEA(46.5毫克，4.4當量)。將得到的混合物在室溫下攪拌3.5小時。然后，加入HCl鹽形式的式(DOXO)化合物(37.8毫克，0.86當量)，并且然后將混合物攪拌4.5小時。然后，加入MeCN(5.0毫升)。形成沉淀，并過濾，并用MeCN和DMF的混合物(5:1(體積/體積)，分2次，每次用1毫升)洗滌。合并濾液，在45℃下真空干燥，得到暗的殘余物。將殘余物溶解在DCM和MeOH的混合物(10:1，體積/體積，3毫升)中，并通過制備型硅膠TLC純化(DCM：MeOH＝7:1(體積/體積)，Rf＝0.35)。通過丙酮和水的混合物(20:1，體積/體積，6次，每次用3毫升)將產物從硅膠中萃取。將合并的萃取液在真空下干燥，得到為紅色固體的粗產物。將粗產物與乙腈(5ml)混合，將混合物在室溫下攪拌2小時，然后過濾。濾餅用乙腈洗滌(2次，每次用1毫升)，然后在25℃下真空干燥，得到9.0毫克的式(23)化合物，其為紅色固體(收率9％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.84(6H，dd，J1＝10.2Hz，J2＝6.8Hz)，1.13(3H，d，J＝6.4Hz)，1.19至1.23(2H，m)，1.35至1.50(7H，m)，1.56至1.68(4H，m)，1.81至1.86(1H，m)，1.88(3H，s)，1.91至2.01(1H，m)，2.11至2.23(2H，m)，2.91至3.01(4H，m)，3.32(2H，t，J＝6.8Hz)，3.45至3.47(1H，m)，3.69至3.74(1H，m)，3.98(3H，s)，4.15至4.19(2H，m)，4.32至4.37(1H，m)，4.58(2H，d，J＝5.8Hz)，4.66(2H，d，J＝6.8Hz)，4.82至4.93(4H，m)，5.23(1H，brs)，5.39(2H，s)，5.46(1H，brs)，5.96(1H，t，J＝5.6Hz)，6.74(1H，d，J＝8.0Hz)，6.93(2H，s)，7.10至7.18(2H，m)，7.31(1H，brs)，7.62至7.65(1H，m)，7.89至7.90(3H，m)，8.09(1H，d，J＝7.4Hz)，9.88(1H，s)，13.26(1H，s)，14.02(1H，s).ESI-MS:1185.8(M+H)+，1208.4(M+Na)+實施例37將Z-L-Val(1.47克，0.95當量)、無水DMF(15毫升)、TBTU(2.97克，1.5當量)和DIPEA(2.00克，2.5當量)的混合物在室溫下攪拌15分鐘。向所得的混合物中加入根據實施例4制備的HCl鹽形式的式(6-3)化合物(2.23克，1.0當量)。將混合物進一步在室溫下攪拌14小時，然后在45℃蒸發(fā)至干燥。然后加入水(150毫升)，將所得混合物用EtOAc萃取(3次，每次用200毫升)。用250毫升飽和鹽水洗滌合并的有機相，然后用無水硫酸鈉干燥。將得到的溶液濃縮，然后用硅膠柱色譜法純化(PE：EA＝1:2至DCM：MeOH＝10:1(體積/體積))，得到2.92克的式(6-5)化合物，其為白色固體(收率85％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.87(6H，dd，J1＝17.6Hz，J2＝6.8Hz)，1.36至1.50(2H，m)，1.58至1.74(2H，m)，1.94至2.02(1H，m)，2.91至3.08(2H，m)，3.87(3H，s)，3.90至3.96(1H，m)，4.37至4.43(1H，m)，5.04(2H，s)，5.43(2H，s)，5.99(1H，t，J＝5.6Hz)，7.10(1H，dd，J1＝8.8Hz，J2＝2.0Hz)，7.30至7.37(6H，m)，7.41(1H，d，J＝2.0Hz)，7.74(1H，d，J＝8.8Hz)，8.19(1H，d，J＝7.2Hz)，10.32(1H，s)，10.62(1H，s).ESI-MS:557.6(M+H)+，579.9(M+Na)+，1114.8(2M+H)+，1136.5(2M+Na)+實施例38混合根據實施例37制備的式(6-5)化合物(20.00克，1.0當量)、K2CO3(9.91克，2.0當量)和無水DMF(80毫升)。將得到的混合物加熱到50℃，并攪拌0.5小時。在2小時內分4份將根據實施例10制備的式(SGM-II-1)化合物(25.79克，2.0當量)加入到反應混合物中。將反應混合物在50℃下攪拌3天，然后在45℃蒸發(fā)至干燥。用MeOH洗滌(4次，每次用20毫升)殘余物，合并濾液，然后濃縮至干燥。進一步將殘余物通過硅膠柱色譜法純化(DCM：MeOH＝20：1，體積/體積)，得到22.17克的式(54-1)化合物，其為白色固體(收率83％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.87(6H，dd，J1＝17.6Hz，J2＝6.8Hz)，1.36至1.49(11H，m)，1.59至1.73(2H，m)，1.96至2.03(1H，m)，2.92至3.14(4H，m)，3.50(2H，t，J＝6.0Hz)，3.74至3.76(5H，m)，3.93至3.97(1H，m)，4.08(2H，t，J＝4.6Hz)，4.39至4.44(1H，m)，5.05(2H，s)，5.42(2H，s)，5.98(1H，t，J＝5.6Hz)，6.73(1H，t，J＝5.4Hz)，7.25(1H，dd，J1＝8.6Hz，J2＝1.56Hz)，7.30至7.36(6H，m)，7.48(1H，s)，7.69(1H，d，J＝8.6Hz)，8.15(1H，d，J＝7.2Hz)，10.28(1H，s).ESI-MS:745.0(M+H)+，1488.8(2M+H)+，645.3(M-tBuOCO+2H)+實施例39將根據實施例38制備的式(54-1)化合物(4.80克，1.0當量)、甲醇(200毫升)和Pd/C(5％，0.24克)的混合物脫氣三次，然后在氫氣氣氛(6巴)下在30℃下攪拌18小時。將所得混合物過濾，將濾液在真空下濃縮至干燥，得到3.96克的式(54-2)化合物，其為白色固體(定量收率)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.81(3H，d，J＝6.8Hz)，0.90(3H，d，J＝6.8Hz)，1.36至1.49(11H，m)，1.58至1.78(2H，m)，1.91至1.99(1H，m)，2.92至3.12(5H，m)，3.50(2H，t，J＝6.0Hz)，3.75至3.77(5H，m)，4.09(2H，t，J＝4.8Hz)，4.47(1H，s)，5.45(2H，s)，6.07(1H，t，J＝5.6Hz)，6.72(1H，t，J＝5.2Hz)，7.24(1H，dd，J1＝8.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.51(1H，d，J＝1.4Hz)，7.69(1H，d，J＝8.6Hz)，8.24(1H，d，J＝8.6Hz)，10.42(1H，s).ESI-MS:611.8(M+H)+，1221.4(2M+Na)+，512.0(M-tBuOCO+2H)+實施例40將N,N-二甲基甘氨酸(0.48克，1.0當量)、DMF(15毫升)和TBTU(3.01克，2.0當量)的混合物冷卻至0℃。然后將得到的混合物攪拌15分鐘，接著加入根據實施例39制備的式(54-2)化合物(2.86克，1.0當量)。然后將混合物自然升至室溫，進一步攪拌18小時。然后將所得的混合物蒸發(fā)至干燥。所得的殘余物通過硅膠柱色譜法純化(DCM：MeOH＝7:1(體積/體積))，得到2.78克的式(54-3)化合物，其為白色固體(收率85％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.82(3H，d，J＝6.8Hz)，0.89(3H，d，J＝6.8Hz)，1.36至1.49(11H，m)，1.56至1.75(sH，m)，1.98至2.06(1H，m)，2.33(6H，s)，2.92至3.04(2H，m)，3.06至3.11(4H，m)，3.50(2H，t，J＝6.0Hz)，3.74至3.77(5H，m)，4.09(2H，t，J＝4.6Hz)，4.30至4.34(1H，m)，4.36至4.41(1H，m)，5.43(2H，s)，6.01(1H，t，J＝5.8Hz)，6.73(1H，t，J＝5.2Hz)，7.25(1H，dd，J1＝8.6Hz，J2＝1.8Hz)，7.28至7.32(1H，m)，7.35至7.39(1H，m)，7.46(1H，d，J＝1.6Hz)，7.55(1H，d，J＝8.4Hz)，7.68(1H，d，J＝8.6Hz)，7.82(1H，d，J＝9.0Hz)，7.85至7.87(1H，m)，8.38(1H，d，J＝7.2Hz)，10.30(1H，s).ESI-MS:696.2(M+H)+，1391.1(2M+H)+，596.3(M-tBuOCO+2H)+實施例41將根據實施例40制備的式(54-3)化合物和10％(重量/重量)的HCl在1,4-二惡烷(50毫升)中的溶液的混合物在室溫下攪拌18小時。真空下除去溶劑，得到5.60克二鹽酸鹽形式的式(54)化合物，其為白色固體(定量收率)。ESI-MS：596.4(M+H)+，1191.3(2M+H)+實施例42在0℃向根據實施例41制備的二鹽酸鹽形式的式(54)化合物(1.00克，1.0當量)與無水THF(15毫升)的混合物中加入DIBAL-H在己烷(1M，10毫升，6.7當量)中的溶液。將得到的混合物在0℃進一步攪拌1.5小時。然后逐滴加入甲醇(10毫升)。然后加入飽和酒石酸鉀鈉水溶液(30毫升)，并在室溫下攪拌1小時。將所得的混合物蒸發(fā)至干燥。將所得殘余物用甲醇洗滌(3次，每次10毫升)。將合并的濾液濃縮，然后用硅膠柱色譜法純化(DCM：MeOH：Et3N＝65：33：2(體積/體積))，得到0.43克的式(44)化合物，其為白色固體(收率51％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，60℃)δ0.82(3H，d，J＝6.8Hz)，0.87(3H，d，J＝6.8Hz)，1.32至1.50(2H，m)，1.55至1.74(2H，m)，1.97至2.06(1H，m)，2.23(6H，s)，2.73(2H，t，J＝5.6Hz)，2.91(2H，brs)，2.93至3.06(2H，m)，3.50(2H，t，J＝5.6Hz)，3.75(2H，t，J＝4.6Hz)，4.05至4.07(2H，m)，4.29至4.33(1H，m)，4.35至4.40(1H，m)，4.45(2H，s)，5.41(2H，s)，6.02(1H，t，J＝5.6Hz)，7.15(1H，dd，J1＝8.4Hz，J2＝1.6Hz)，7.26(1H，d，J＝8.0Hz)，7.31(1H，d，J＝1.6Hz)，7.63(1H，d，J＝9.2Hz)，8.31(1H，d，J＝7.4Hz)，9.97(1H，s).ESI-MS:550.3((M-OH-)+，568.2(M+H)+，1134.7(2M+H)+實施例43在室溫下向根據實施例42制備的式(44)化合物(1.10克，1.0當量)、根據實施例8制備的式(CG1MR-IV-1)化合物(0.57克，1.1當量)、和DMF(4.0毫升)的混合物中加入DIPEA(0.28克，1.1當量)。將得到的混合物在室溫下攪拌18小時。然后，在真空下除去DMF，得到淺黃色殘余物，然后與丙酮(20毫升)混合，并在室溫下攪拌18小時。將混合物過濾，用丙酮洗滌(2次，每次用5ml)濾餅，然后在真空下干燥，得到1.11克的式(34)化合物(收率80％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.82(3H，d，J＝6.8Hz)，0.88(3H，d，J＝6.8Hz)，1.34至1.46(2H，m)，1.55至1.73(2H，m)，1.97至2.05(1H，m)，2.25(6H，s)，2.34(2H，t，J＝7.0Hz)，2.95至3.06(4H，m)，3.17至3.21(2H，m)，3.46(2H，t，J＝5.8Hz)，3.60(2H，t，J＝7.2Hz)，3.73(2H，t，J＝4.4Hz)，4.03(2H，t，J＝4.4Hz)，4.29至4.33(1H，m)，4.35至4.40(1H，m)，4.45(2H，s)，4.86(1H，brs)，5.41(2H，s)，5.99(1H，t，J＝5.6Hz)，7.00(2H，s)，7.14至7.16(1H，m)，7.26至7.30(2H，m)，7.67(1H，d，J＝9.2Hz)，8.03(1H，t，J＝5.2Hz)，8.30(1H，d，J＝7.4Hz)，9.95(1H，s).ESI-MS:701.3(M-OH-)+，719.2(M+H)+，1436.7(2M+H)+實施例44將式(II-1)化合物(169.4毫克，2.0當量)、無水DMF(4.0毫升)和4埃分子篩(400.0毫克)的混合物在室溫下攪拌15分鐘。向所得的混合物中加入DIPEA(107.9毫克，3.0當量)和根據實施例43制備的式(34)化合物(200.0毫克，1.0當量)。將得到的混合物再攪拌2.5小時。然后加入HCl鹽形式的式(DOXO)化合物(161.8毫克，1.0當量)，并進一步攪拌2小時。然后，加入乙腈(20毫升)。形成沉淀，過濾，并用MeCN和DMF的混合物(5：1(體積/體積)，3次，每次用3ml)洗滌。將濾液合并，并在48℃下真空干燥。將所得的殘留物溶解于DCM和MeOH的混合物(5：1(體積/體積)，5毫升)，并通過制備型硅膠TLC純化(DCM：MeOH＝4:1(體積/體積)，Rf＝0.5)。由丙酮和水的混合物(7：1(體積/體積)，6次，每次用10毫升)將產物從硅膠萃取。將合并的萃取液在真空下干燥，得到為紅色固體的粗產物。然后將粗產物與乙腈(5ml)混合，在室溫下攪拌2小時，然后過濾。在室溫下將濕濾餅真空干燥，得到7.0毫克的式(24)化合物，其為紅色固體(收率2％)1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.80(3H，d，J＝6.8Hz)，0.86(3H，d，J＝6.6Hz)，1.13(3H，d，J＝6.4Hz)，1.32至1.52(3H，m)，1.57至1.69(2H，m)，1.82至1.88(1H，m)，1.95至2.04(1H，m)，2.10至2.18(2H，m)，2.24(6H，s)，2.29(2H，t，J＝7.4Hz)，2.92至3.02(6H，m)，3.12至3.16(2H，m)，3.41(2H，t，J＝5.6Hz)，3.45(1H，brs)，3.55(2H，t，J＝7.2Hz)，3.69至3.74(3H，m)，3.99(3H，s)，4.03(2H，brs)，4.13至4.17(1H，m)，4.28至4.31(1H，m)，4.33至4.38(1H，m)，4.58(2H，d，J＝5.2Hz)，4.69(1H，d，J＝5.6Hz)，4.86(1H，t，J＝6.0Hz)，4.90(1H，s)，4.95(1H，t，J＝4.4Hz)，5.23(1H，brs)，5.40(2H，s)，5.47(1H，s)，6.00(1H，t，J＝5.6Hz)，6.79(1H，d，J＝8.0Hz)，6.95(2H，s)，7.12(1H，d，J＝8.2Hz)，7.19(1H，d，J＝8.2Hz)，7.34(1H，s)，7.64至7.68(2H，m)，7.91(2H，d，J＝4.8Hz)，7.98(1H，t，J＝5.2Hz)，8.30(1H，d，J＝7.2Hz)，10.02(1H，s)，13.27(1H，s)，14.02(1H，s).ESI-MS:1288.3(M+H)+實施例45將根據實施例1制備的式(VII-1)化合物(26.10克，1.5當量)、THF(150毫升)、Boc-L-Lys(Ac)-OH(30.00克，1.0當量)和EEDQ(51.45克，2.0當量)的混合物在室溫下攪拌24小時。然后將混合物蒸發(fā)至干燥。將殘余物通過硅膠柱色譜法純化(PE：EtOAc＝2：1(體積/體積)至純EtOAc)，得到26.00克的式(6b-4)化合物，其為淺黃色固體(收率57％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ1.21至1.34(4H，m)，1.38(9H，s)，1.58至1.66(2H，m)，1.77(3H，s)，3.00至3.04(2H，m)，3.87(3H，s)，3.99至4.07(1H，m)，7.08至7.11(2H，m)，7.40(1H，d，J＝2.0Hz)，7.74(1H，d，J＝8.8Hz)，7.78至7.81(1H，m)，10.20(1H，s)，10.62(1H，s).ESI-MS:437.9(M+H)+，460.3(M+Na)+，875.1(2M+H)+，896.9(2M+Na)+，338.1(M-tBuOCO+2H)+實施例46將根據實施例45制備的式(6b-4)化合物(26.00克)懸置在10％(重量/重量)的HCl在1,4-二惡烷(150毫升)中的溶液中，將所得混合物在室溫下攪拌3小時。然后將反應混合物在真空下濃縮，得到22.05克HCl鹽形式的式(6b-3)化合物，其為黃色固體(定量收率)。ESI-MS：339.2(M+H)+實施例47將根據實施例46制備的HCl鹽形式的式(6b-3)化合物(25.21克，1.0當量)、Boc-L-Val-OH(13.25克，1.0當量)、TBTU(23.66克，1.1當量18小時)、DIPEA(19.05克，2.2eq)和DMF(100毫升)的混合物在室溫下攪拌18小時。將所得的混合物蒸發(fā)至干燥，然后用硅膠色譜法純化(DCM：MeOH＝10：1至7：1(體積/體積))，得到30.80克的式(6b-2)化合物，其為淺黃色固體(收率90％)。1HNMR(400MHz，CDCl3，20℃)δ1.39至1.46(14H，m)，1.49至1.56(2H，m)，1.74至1.83(1H，m)，1.95至2.02(4H，m)，3.17至3.30(2H，m)，3.92(3H，s)，4.17至4.22(1H，m)，4.54至4.60(1H，m)，5.53(1H，brs)，6.32(1H，brs)，7.15(1H，d，J＝8.0Hz)，7.31(1H，brs)，7.38(1H，s)，7.72(1H，dd，J1＝8.8Hz，J2＝1.0Hz)，9.38(1H，brs)，10.80(1H，s).ESI-MS:509.3(M+H)+，1017.0(2M+H)+，1038.8(2M+Na)+，409.5(M-tBuOCO+2H)+實施例48將根據實施例47制備的式(6b-2)化合物(30.80克)懸置于10％(重量/重量)的HCl在1,4-二惡烷(150毫升)的溶液中，將所得混合物在室溫下攪拌23小時。然后將反應混合物在真空下濃縮，得到25.90克HCl鹽形式的式(6b-1)化合物，其為白色固體(收率96％)。ESI-MS：409.0(M+H)+實施例49將根據實施例48制備的鹽酸鹽形式的式(6b-1)化合物(15.32克，1.0當量)、甲醇(100毫升)、吡啶(9.0毫升，3.2當量)和乙酸酐(14.0毫升，4.3當量)的混合物在室溫下攪拌60小時。將得到的混合物在真空下蒸發(fā)至干燥。殘余物通過硅膠柱色譜法純化(DCM：MeOH＝15：1至7：1(體積/體積))，得到12.51克的式(6b)化合物，其為淺黃色固體(收率80％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ1.21(3H，d，J＝7.0Hz)，1.29至1.38(4H，m)，1.61至1.74(2H，m)，1.78(3H，s)，1.86(3H，s)，2.99至3.04(2H，m)，3.87(3H，s)，4.27至4.34(2H，m)，7.14(1H，d，J＝8.8Hz)，7.42(1H，brs)，7.73(1H，d，J＝8.6Hz)，7.81(1H，t，J＝5.2Hz)，8.09(1H，d，J＝7.0Hz)，10.18(1H，s)，10.62(1H，s).ESI-MS:451.3(M+H)+，473.6(M+Na)+，900.9(2M+H)+，923.1(2M+Na)+實施例50將根據實施例49制備的式(6b)化合物(6.73克，1.0當量)、根據實施例10制備的式(SGM-II-1)化合物(11.50克，2.1當量)、K2CO3(4.40克，2.1當量)和無水DMF(60毫升)的混合物加熱至0℃，并在氮氣氣氛下攪拌8天。將所得的混合物蒸發(fā)至干燥，殘余物用MeOH洗滌(3次，每次用15毫升)。合并濾液，并蒸發(fā)至干燥。將殘余物通過硅膠柱色譜法純化(DCM：MeOH＝15：1至7：1(體積/體積))，得到7.64克的式(55-1)化合物，其為白色固體(收率81％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ1.21(3H，d，J＝7.2Hz)，1.25至1.40(13H，m)，1.59至1.74(2H，m)，1.78(3H，s)，1.87(3H，s)，2.99至3.04(2H，m)，3.08至3.12(2H，m)，3.50(2H，t，J＝6.0Hz)，3.75至3.77(5H，m)，4.09(2H，t，J＝4.6Hz)，4.24至4.34(2H，m)，6.74(1H，t，J＝5.4Hz)，7.28(1H，dd，J1＝8.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.51(1H，d，J＝1.6Hz)，7.69(1H，d，J＝8.6Hz)，7.81(1H，t，J＝5.2Hz)，8.08至8.13(2H，m)，10.14(1H，s).ESI-MS:638.2(M+H)+，660.4(M+Na)+，1275.0(2M+H)+，538.4(M-tBuOCO+2H)+實施例51將根據實施例50制備的式(55-1)化合物(7.60克)懸置在10％(重量/重量)的鹽酸在1,4-二惡烷(50毫升)中的溶液中，將所得混合物在室溫下攪拌5小時。然后將反應混合物在真空下濃縮，得到6.72克HCl鹽形式的式(55)化合物，其為白色固體(收率98％)。ESI-MS:538.5(M+H)+，1074.8(2M+H)+，1097.0(2M+Na)+實施例52在0℃向根據實施例51制備的HCl鹽形式的式(55)化合物(6.00克，1.0當量)和無水THF(50毫升)的混合物中加入DIBAL-H在己烷(1M，63.0毫升，6.0當量)中的溶液。然后將得到的混合物加熱至0℃，并在氮氣氣氛下攪拌6小時。然后加入甲醇(10毫升)。之后，將飽和酒石酸鈉鉀(150毫升)水溶液加入到混合物中，并將該混合物在室溫下攪拌15小時。將所得的混合物蒸發(fā)至干燥，產生白色殘留物，將該殘留物進一步用甲醇洗滌(3次，每次用50毫升)。合并濾液，然后濃縮，通過硅膠柱色譜法純化(DCM：甲醇：Et3N＝75：25：2(體積/體積))，得到3.27克式(45)化合物，其為白色固體(收率61％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ1.22(3H，d，J＝4.4Hz)，1.27至1.41(4H，m)，1.62至1.78(2H，m)，1.79(3H，s)，1.88(3H，s)，2.68(2H，t，J＝5.6Hz)，2.99至3.03(2H，m)，3.46(2H，t，J＝5.6Hz)，3.73(2H，t，J＝4.4Hz)，4.04(2H，t，J＝4.4Hz)，4.21至4.38(2H，m)，4.45(2H，s)，5.36(1H，s)，7.22至7.28(2H，m)，7.40(1H，s)，8.00(1H，t，J＝5.4Hz)，8.16(1H，d，J＝8.0Hz)，8.27(1H，d，J＝6.8Hz)，10.05(1H，s).ESI-MS:510.5(M+H)+，1019.6(2M+H)+，492.6(M-OH-)+實施例53在室溫下向根據實施例52制備的式(45)化合物(1.20克，1.0當量)、根據實施例8制備的式(CG1MR-IV-1)化合物(0.69克，1.1當量)、和DMF(25ml)的混合物中加入DIPEA(0.34克，1.1當量)。將得到的混合物在室溫下攪拌2小時。然后，在真空下除去DMF，得到淺黃色殘余物，然后將該殘余物與丙酮(50毫升)混合，并在室溫下攪拌1小時。將混合物過濾，濾餅用丙酮(2次，每次用10毫升)洗滌，然后在真空下干燥，得到1.12克的式(35)化合物(收率72％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ1.20(3H，d，J＝7.2Hz)，1.24至1.40(4H，m)，1.58至1.75(2H，m)，1.78(3H，s)，1.87(3H，s)，2.33(2H，t，J＝7.2Hz)，2.98至3.03(2H，m)，3.16至3.21(2H，m)，3.46(2H，t，J＝5.8Hz)，3.60(2H，t，J＝7.2Hz)，3.72至3.75(2H，m)，4.04(2H，t，J＝4.4Hz)，4.24至4.36(2H，m)，4.44(2H，d，J＝5.6Hz)，4.86(1H，t，J＝5.6Hz)，7.00(2H，s)，7.16至7.18(1H，m)，7.26至7.28(1H，m)，7.34(1H，d，J＝1.4Hz)，7.80(1H，t，J＝5.4Hz)，7.99(1H，d，J＝8.0Hz)，8.03(1H，t，J＝5.4Hz)，8.10(1H，d，J＝6.8Hz)，9.79(1H，s).ESI-MS:661.5(M+H)+，643.6(M-OH-)+實施例54將根據實施例53制備的式(35)化合物(400.0毫克，1.0當量)、4埃分子篩(800.0毫克)、無水DMF(4.0毫升)和式(II-1)化合物(373.0毫克，2.0當量)的混合物在室溫下攪拌5分鐘。然后加入DIPEA(313.5毫克，4.0當量)。將得到的混合物在室溫下攪拌5小時。然后，加入HCl鹽形式的式(DOXO)化合物(328.0毫克，0.9當量)，然后將混合物攪拌4小時。然后，加入乙腈(20毫升)。形成沉淀，過濾，并用MeCN和DMF的混合物洗滌(5：1(體積/體積)，2次，每次用10毫升)。合并濾液，在45℃下真空干燥，得到暗色殘余物。將殘余物溶解在DCM和MeOH混合物(7：1，體積/體積，5ml)中，并通過制備型硅膠薄層色譜法純化(DCM：MeOH＝7:1(體積/體積)，Rf＝0.15)。由丙酮和水的混合物(20:1，體積/體積，10次，每次20毫升)將產物從硅膠中萃取。將合并的萃取液在真空下干燥，得到為紅色固體的粗產物。然后粗產物與乙腈(10毫升)混合，將混合物在室溫下攪拌0.5小時，然后過濾。濾餅用乙腈(5ml)洗滌，然后在室溫下真空干燥，得到100.7毫克的式(25)化合物，其為紅色固體(收率13％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ1.13(3H，d，J＝6.4Hz)，1.20(3H，d，J＝7.2Hz)，1.24至1.38(4H，m)，1.48至1.51(1H，m)，1.59至1.73(2H，m)，1.77(3H，s)，1.82至1.86(4H，m)，2.12至2.23(2H，m)，2.29(2H，t，J＝7.2Hz)，2.89至3.02(4H，m)，3.11至3.15(2H，m)，3.41(2H，t，J＝5.6Hz)，3.46(1H，brs)，3.54(2H，t，J＝7.2Hz)，3.68至3.76(3H，m)，3.98(3H，s)，4.03(2H，brs)，4.14至4.18(1H，m)，4.22至4.34(2H，m)，4.58(2H，d，J＝5.2Hz)，4.70(1H，d，J＝5.8Hz)，4.85至4.92(4H，m)，5.22(1H，brs)，5.46(1H，s)，6.81(1H，d，J＝8.0Hz)，6.95(2H，s)，7.14至7.20(2H，m)，7.39(1H，s)，7.61至7.64(1H，m)，7.82(1H，t，J＝5.2Hz)，7.88至7.91(2H，m)，7.98至8.03(2H，m)，8.12(1H，d，J＝6.8Hz)，9.89(1H，s)，13.24(1H，s)，14.00(1H，s).ESI-MS:1252.1(M+Na)+實施例55將根據實施例6制備的HCl鹽形式的式(6-1)化合物(22.81克，1.0當量)、購自Aldrich的2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙酸(8.00克，0.9當量)、TBTU(24.00克，1.5當量)和DIPEA(16.00克)溶解在DMF(100毫升)中。將得到的溶液在室溫下攪拌20小時。將反應混合物濃縮至干燥，然后將殘留物用硅膠柱色譜法純化(洗脫液DCM：MeOH＝10：1至7：1(體積/體積))，得到12.02克的式(6c)化合物，其為淺黃色固體(收率41％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.86(6H，dd，J1＝24.4Hz，J2＝6.8Hz)，1.37(9H，s)，1.39至1.52(2H，m)，1.56至1.75(4H，m)，1.97至2.06(1H，m)，2.91至3.07(4H，m)，3.19至3.22(2H，m)，3.42至3.47(2H，m)，3.52至3.64(6H，m)，3.81(3H，s)，3.95(2H，brs)，4.30至4.34(1H，m)，4.36至4.41(1H，m)，4.53(2H，s)，5.43(2H，s)，6.01(1H，t，J＝5.8Hz)，6.78(1H，t，J＝5.2Hz)，7.34至7.40(2H，m)，7.45(1H，d，J＝8.8Hz)，7.79(1H，d，J＝8.4Hz)，8.04(1H，t，J＝5.6Hz)，8.38(1H，d，J＝7.2Hz)，10.36(1H，s).ESI-MS:584.7(M+H)+，1167.2(2M+H)+實施例56將根據實施例55制備的式(6c)化合物(8.01克，1.0當量)、根據實施例24制備的式(SGM-III-2)化合物(6.89克，2.0當量)、K2CO3(3.80克，2.0當量)和無水DMF(60毫升)的混合物加熱至50℃，并在氮氣氣氛下攪拌7天。然后將反應混合物在真空下濃縮至干燥。將二氯甲烷(15ml)加入到殘余物中，得到的混合物用硅膠柱色譜法純化(洗脫劑：DCM：MeOH＝7:1(體積/體積))，得到5.52克的式(56-1)化合物，其為微黃色固體(收率50％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.86(6H，dd，J1＝24.4Hz，J2＝6.8Hz)，1.37(9H，s)，1.39至1.52(2H，m)，1.56至1.75(4H，m)，1.97至2.06(1H，m)，2.91至3.07(4H，m)，3.19至3.22(2H，m)，3.42至3.47(2H，m)，3.52至3.64(6H，m)，3.81(3H，s)，3.95(2H，brs)，4.30至4.34(1H，m)，4.36至4.41(1H，m)，4.53(2H，s)，5.43(2H，s)，6.01(1H，t，J＝5.8Hz)，6.78(1H，t，J＝5.2Hz)，7.34至7.40(2H，m)，7.45(1H，d，J＝8.8Hz)，7.79(1H，d，J＝8.4Hz)，8.04(1H，t，J＝5.6Hz)，8.38(1H，d，J＝7.2Hz)，10.36(1H，s).ESI-MS:698.7(M-tBuOCO+2H)+，798.3(M+H)+，820.7(M+Na)+，1595.7(2M+H)+實施例57將根據實施例56制備的式(56-1)化合物懸置在10％(重量/重量)的HCl在1,4-二惡烷(60毫升)中的溶液中。將得到的混合物在室溫下攪拌8小時，然后濃縮，得到4.99克的式(56)化合物，其為白色固體(定量收率)。ESI-MS:698.4(M+H)+，1394.6(2M+H)+實施例58將根據實施例57中制備的HCl鹽形式的式(56)化合物(4.91克，1.0當量)、水(45毫升)、氯化鈣(1.49克，2.0當量)和硼氫化鈉(1.02克，4.0當量)的混合物在室溫下攪拌。分批加入額外量的硼氫化鈉(1.02克，4.0當量，經過共2.5小時的攪拌后；1.01克，4.0當量，經過共4小時的攪拌后；1.03克，4.0當量，經過共6小時的攪拌后)。共攪拌22小時后，向混合物中加入甲醇(20毫升)。然后將反應混合物過濾，濕濾餅用甲醇洗滌(3次，每次用15毫升)。收集濾液，合并，然后蒸發(fā)至干燥。殘余物通過硅膠柱色譜法純化(洗脫液DCM：MeOH：Et3N＝80：20：2.5(體積/體積))，得到1.12克的式(46)化合物，其為淺黃色固體(收率25％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.86(6H，dd，J1＝22.8Hz，J2＝6.8Hz)，1.32至1.48(4H，m)，1.51至1.73(4H，m)，1.96至2.06(1H，m)，2.58(2H，t，J＝6.8Hz)，2.91至3.06(2H，m)，3.16至3.21(2H，m)，3.22(3H，s)，3.52至3.64(8H，m)，3.95(2H，brs)，4.29至4.33(1H，m)，4.36至4.41(2H，m)，4.46(2H，s)，4.51(2H，s)，5.44(2H，s)，6.10(1H，t，J＝5.6Hz)，7.22至7.27(3H，m)，7.48(1H，d，J＝8.8Hz)，8.19(1H，t，J＝5.4Hz)，8.34(1H，d，J＝7.6Hz)，10.05(1H，s).ESI-MS:652.4(M-OH-)+，670.4(M+H)+，1338.7(2M+H)+實施例59向根據實施例58制備的式(46)化合物(250.7毫克，1.0當量)、根據實施例8制備的式(CG1MR-IV-1)化合物(103.1克，1.1當量)、和DMF(4ml)的混合物在室溫下加入DIPEA(53.6毫克，1.1當量)。將得到的混合物在室溫下攪拌1小時。然后，在真空下除去DMF，得到淺黃色殘余物，然后將該殘余物有與丙酮(5ml)混合，并在室溫下攪拌1小時。將混合物過濾，濾餅用丙酮洗滌(3次，每次用3毫升)，然后在真空下干燥，得到253.7克的式(36)化合物(收率83％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.85(6H，dd，J1＝23.0Hz，J2＝6.8Hz)，1.36至1.54(4H，m)，1.58至1.72(2H，m)，1.97至2.05(1H，m)，2.32(2H，t，J＝7.2Hz)，2.92至3.05(4H，m)，3.08至3.13(2H，m)，3.22(3H，s)，3.44(2H，t，J＝4.8Hz)，3.52至3.62(8H，m)，3.95(2H，s)，4.29至4.33(1H，m)，4.35至4.40(1H，m)，4.46(2H，s)，4.52(2H，d，J＝5.2Hz)，5.08(1H，t，J＝5.6Hz)，5.42(2H，s)，6.01(1H，t，J＝5.2Hz)，6.99(2H，s)，7.20至7.27(3H，m)，7.46(1H，d，J＝8.8Hz)，7.95(1H，t，J＝5.4Hz)，8.05(1H，t，J＝5.8Hz)，8.31(1H，d，J＝7.6Hz)，10.00(1H，s).ESI-MS:803.4(M-OH-)+，821.1(M+H)+，1641.1(2M+H)+實施例60將根據實施例59制備的式(36)化合物(201.3毫克，1.0當量)、4埃分子篩(400.0毫克)、無水DMF(4.0毫升)和式(II-1)化合物(146.9毫克，2.0當量)的混合物在室溫下攪拌10分鐘。然后加入DIPEA(105.7毫克，3.3當量)。將得到的混合物在室溫下攪拌4.5小時。然后，加入HCl鹽形式的式(DOXO)化合物(142.1毫克，1.0當量)，然后將混合物攪拌2.5小時。然后，加入MeCN(20毫升)。形成沉淀，過濾，并用MeCN和DMF的混合物洗滌(5：1(體積/體積)，4次，每次用4ml)。合并濾液，在45℃下真空干燥，得到暗色殘余物。將殘余物溶解在DCM和甲醇的混合物(7：1，體積/體積，3毫升)中，并通過制備型硅膠薄層色譜法純化(DCM：甲醇＝7:1(體積/體積)，Rf＝0.3)。由丙酮和水的混合物(10:1，體積/體積，6次，每次10毫升)將產物從硅膠中萃取。將合并的萃取液在真空下干燥，得到為紅色固體的粗產物。然后將該粗產物與乙腈(5ml)混合，將混合物在室溫下攪拌2小時，然后過濾。濾餅用乙腈(2次，每次用2毫升)洗滌，然后在室溫下真空干燥，得到33.2毫克的式(26)化合物，其為紅色固體(收率10％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.84(6H，dd，J1＝23.2Hz，J2＝6.8Hz)，1.13(3H，d，J＝6.4Hz)，1.30至1.70(7H，m)，1.82至1.87(4H，m)，1.97至2.04(1H，m)，2.08至2.22(2H，m)，2.28(2H，t，J＝7.2Hz)，2.91至3.09(8H，m)，3.22(3H，s)，3.42至3.46(3H，m)，3.52至3.61(8H，m)，3.70至3.76(1H，m)，3.95(2H，s)，3.99(3H，s)，4.13至4.18(2H，m)，4.28至4.32(1H，m)，4.34至4.41(3H，m)，4.58(2H，d，J＝5.6Hz)，4.70(1H，d，J＝5.2Hz)，4.85(1H，t，J＝5.8Hz)，4.94(1H，brs)，5.03(2H，s)，5.22(1H，brs)，5.41(2H，s)，5.46(1H，brs)，5.99(1H，t，J＝5.4Hz)，6.86(1H，d，J＝8.0Hz)，6.97(2H，s)，7.19-7.24(3H，m)，7.44(1H，d，J＝8.8Hz)，7.65(1H，t，J＝4.8Hz)，7.85至7.91(4H，m)，8.30(1H，d，J＝7.2Hz)，10.04(1H，s)，13.26(1H，s)，14.02(1H，s).ESI-MS:1390.2(M+H)+實施例61將式(TAXO)化合物(200.0毫克，1.0當量)、4埃分子篩(100.0毫克)、無水DCM(4.0毫升)和式(II-1)化合物(146.9毫克，2.0當量)的混合物在0℃攪拌10分鐘。然后向混合物中加入吡啶(28.1毫克，1.5當量)。在0℃在氮氣下，將所得混合物再攪拌41小時。然后在0℃在氮氣下向混合物中加入N,N'-二甲基-1，2-乙二胺(102.0毫克，5.0當量)。攪拌2小時后，將混合物過濾。用二氯甲烷(1毫升)洗滌濾餅。合并濾液，然后蒸發(fā)至干燥，得到黃色殘余物。將殘余物進一步通過制備型硅膠薄層色譜法純化(DCM：甲醇＝7:1(體積/體積))，以96％的分離收率，得到220.0毫克的式(TAXO-t1-1)化合物，其為淺黃色固體。ESI-MS:968.5(M+Na)+實施例62將根據實施例21制備的式(31)化合物(252.0毫克，1.2當量)、式(II-1)化合物(136.0毫克，1.8當量)、4埃分子篩(100.0毫克)和無水DMF(1毫升)的混合物在室溫下攪拌10分鐘。然后加入DIPEA(80.1毫克，2.5當量)。將得到的混合物在室溫下攪拌2小時。然后，加入根據實施例61制備的式(XXXX)化合物。將得到的混合物攪拌2小時。將所得懸浮液過濾；進一步用DCM洗滌(3次，每次用10毫升)濾餅。合并濾液，然后在35℃蒸發(fā)至干燥。將所得殘余物與DCM(30毫升)混合，并攪拌0.5小時。將所得懸浮液過濾，將濾餅進一步用DCM洗滌(2次，每次用5毫升)。在室溫下，將濾液在真空下干燥。將粗產物溶解在CH2Cl2-MeOH混合溶劑(8:1(體積/體積))中，并進一步用制備型硅膠薄層色譜法純化(DCM：MeOH＝8:1(體積/體積))。通過THF-水(20:1(體積/體積)，6次，每次用30毫升)的混合物將該產物從凝膠萃取，在真空下干燥，得到為白色固體的粗產物。然后將粗產物與Et2O(5毫升)混合，在25℃下攪拌0.5小時，然后過濾。用Et2O洗滌(3次，每次用5毫升)濾餅，然后在室溫下真空干燥，以21％分離收率，得到100.0毫克的式(21-TAXO-t1-1)化合物，其為白色固體。ESI-MS:1842.1(M+H)+，1864.5(M+Na)+比較例1向根據實施例2制備的Boc-Cit-OH(1.00克，1.0當量)、EEDQ(1.35克，1.5當量)和THF(15毫升)的混合物中加入對-氨基苯甲酸甲酯(0.82克，1.5當量)。將得到的混合物在室溫下攪拌14小時。然后，在真空下除去溶劑，并將殘余物通過硅膠柱色譜法純化(洗脫劑：PE：EtOAc＝6:1(體積/體積)，然后DCM：MeOH＝10：1(體積/體積))，得到1.2克的式(Comp-6-4)化合物，其為白色固體(收率81％)。硅膠TLC分析：洗脫液EtOAc(Rf＝0.35，UV254)1HNMR(400MHz，CDCl3，20℃)δ1.28至1.45(11H，m)，1.55至1.65(2H，m)，2.91至3.08(2H，m)，3.83(3H，s)，4.09至4.14(1H，m)，5.43(2H，s)，5.99(1H，t，J＝5.6Hz)，7.10(1H，d，J＝7.6Hz)，7.75至7.77(2H，m)，7.91至7.93(2H，m)，10.32(1H，s).ESI-MS:309.3(M-tBuOCO+2H)+，409.2(M+H)+，817.1(2M+H)+比較例2將根據比較例1制備的式(Comp-6-4)化合物(1.66克)和15％(重量/重量)的HC1在1,4-二惡烷(10毫升)中的溶液的混合物在室溫下攪拌3小時。然后將反應混合物在真空下濃縮，得到1.38g的HCl鹽形式的式(Comp-6-3)化合物，其為白色固體(收率98％)。比較例3向根據比較例2制備的HCl鹽形式的式(Comp-6-3)化合物(14.50克，1.0當量)、Boc-L-Val(10.05克，1.1當量)、TBTU(27.00克，2.0當量)和DMF(80毫升)的混合物中加入DIPEA(16.31克，3.0當量)。將得到的混合物在室溫下攪拌16小時。然后將混合物用水(120毫升)稀釋，然后用EtOAc萃取(5次，每次用100毫升)，合并有機相并蒸發(fā)至干燥，將所得殘余物通過硅膠柱色譜法純化(洗脫劑：DCM：MeOH＝20：1至10：1至7：1(體積/體積))，得到12.9克的式(Comp-6-2)化合物，其為固體(收率60％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.85(6H，dd，J1＝17.4Hz，J2＝6.6Hz)，1.39(9H，s)，1.43至1.50(2H，m)，1.57至1.76(2H，m)，1.91至1.97(1H，m)，2.91至3.09(2H，m)，3.83(3H，s)，3.85至3.88(1H，m)，4.43至4.48(1H，m)，5.43(2H，s)，5.99(1H，t，J＝5.8Hz)，6.72(1H，d，J＝8.8Hz)，7.73至7.76(2H，m)，7.90至7.94(2H，m)，8.07(1H，d，J＝7.6Hz)，10.39(1H，s).比較例4將根據比較例3制備的式(Comp-6-2)化合物(12.3克)和10％(重量/重量)的鹽酸在二惡烷(60毫升)中的溶液的混合物在室溫下攪拌3小時。然后將混合物在真空下濃縮，得到10.9克HCl鹽形式的式(Comp-6-1)化合物，其為白色固體(定量收率)。比較例5在-20℃向根據比較例4制備的HCl鹽形式的式(Comp-6-1)化合物(10.20克，1.0當量)和無水THF(150毫升)的混合物中加入DIBAL-H的己烷溶液(1M，120.0毫升，6.2當量)。將混合物溫熱至室溫并攪拌14小時。然后加入MeOH(20毫升)，接著加入飽和酒石酸鉀鈉溶液(180毫升)，并將該混合物在室溫下攪拌30分鐘。將所得的混合物蒸發(fā)至干燥，得到白色殘余物，用MeOH洗滌(5次，每次用50毫升)。將洗脫液合并，濃縮，通過硅膠柱色譜法純化(洗脫液DCM：MeOH＝10:1至7:1至5:1(體積/體積))，得到5.10克的式(Comp-10)化合物，其為白色固體(收率58％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.89(6H，dd，J1＝24.0Hz，J2＝6.8Hz)，1.33至1.50(2H，m)，1.56至1.77(2H，m)，1.96至2.04(1H，m)，2.92至3.07(2H，m)，3.30(1H，d，J＝5.2Hz)，4.12(2H，brs)，4.43(2H，s)，4.47至4.52(1H，m)，5.12(1H，brs)，5.50(2H，s)，6.10(1H，t，J＝5.6Hz)，7.24(2H，d，J＝8.8Hz)，7.54至7.57(2H，m)，8.37(1H，d，J＝5.8Hz)，10.11(1H，s).ESI-MS:380.4(M+H)+，759.2(2M+H)+比較例6向根據比較例5制備的式(Comp-10)化合物(1.02克，1.0當量)、式(CG1MR-IV-2)化合物(0.92克，1.1當量)、和DMF(15毫升)的混合物中在室溫下加入DIPEA(0.39克，1.1當量)。將得到的混合物在室溫下攪拌16小時。然后，在真空下除去DMF，得到淺黃色殘余物。然后將殘留物與丙酮(20毫升)混合，然后將混合物在室溫下攪拌5小時。將混合物過濾，將濕濾餅用丙酮洗滌(2次，每次用10毫升)，然后在真空下干燥，得到1.05克的式(Comp-11)化合物，其為淺黃色固體(收率67％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.84(6H，dd，J1＝12.2Hz，J2＝6.6Hz)，1.17至1.31(2H，m)，1.37至1.75(8H，m)，1.95至2.00(1H，m)，2.11至2.21(2H，m)，2.92至3.06(2H，m)，3.38(2H，t，J＝6.8Hz)，4.18至4.22(1H，m)，4.38至4.39(1H，m)，4.43(2H，d，J＝4.8Hz)，5.09(1H，t，J＝5.2Hz)，5.41(2H，s)，5.98(1H，t，J＝5.6Hz)，7.00(2H，s)，7.23(2H，d，J＝8.0Hz)，7.55(2H，d，J＝8.2Hz)，7.81(2H，d，J＝8.4Hz)，8.06(1H，d，J＝7.2Hz)，9.90(1H，s).比較例7將根據比較例6制備的式(Comp-11)化合物(350.0毫克，1.0當量)、DIPEA(307.0毫克，3.9當量)、500.0毫克的4埃分子篩和無水DMF(5.0毫升)的混合物攪拌25分鐘。然后，加入式(II-1)化合物(280.0毫克，1.5當量)。將得到的混合物在室溫下攪拌3小時。然后，加入HCl鹽形式的式(DOXO)化合物(368.8毫克，1.0當量)，然后將混合物攪拌12小時。然后，將MeCN(25.0毫升)加入到反應混合物中。形成沉淀，過濾，并用MeCN和DMF的混合物洗滌(5：1(體積/體積)，3次，每次用5毫升)。將濾液合并，在45℃下在真空下干燥，得到暗紅色殘余物。將殘余物溶于DCM和甲醇(7：1(體積/體積))的混合物，通過制備型硅膠TLC純化(DCM：MeOH＝7:1(體積/體積)，Rf＝0.15)。由丙酮和水的混合物(20：1(體積/體積)，10次，每次用50毫升)將產物從硅膠中萃取，將合并的萃取液在真空下干燥，得到為紅色固體的粗產物。然后將粗產物與乙腈(20毫升)混合，將混合物在室溫下攪拌18小時，然后過濾。將濾餅與乙腈(10毫升)混合，在室溫下攪拌該混合物3小時。然后將混合物過濾。在室溫下將濾餅在真空下干燥，得到61.0毫克的式(Comp-12)化合物，其為紅色固體(收率8.7％)；在式(Comp-12)中，多柔比星(doxorubicin)是式(DOXO)化合物，其通過在式(Comp-12)中并且在式(DOXO)中的(d1)表示的氨基連接。1HNMR(400MHz，DMSO-d6，20℃)δ0.85(6H，dd，J1＝12.0Hz，J2＝6.8Hz)，1.12(3H，d，J＝6.4Hz)，1.16至1.22(2H，m)，1.31至1.50(7H，m)，1.54至1.71(2H，m)，1.82至1.88(1H，m)，1.91至2.01(1H，m)，2.10至2.22(4H，m)，2.89至3.03(4H，m)，3.38(2H，t，J＝6.8Hz)，3.44(1H，m)，3.71至3.75(1H，m)，3.99(3H，s)，4.16至4.20(2H，m)，4.33至4.39(1H，m)，4.58(2H，d，J＝5.6Hz)，4.71(1H，d，J＝5.6Hz)，4.86(1H，t，J＝6.0Hz)，4.89(2H，s)，4.95(1H，brs)，5.22(1H，d，J＝2.8Hz)，5.40(2H，s)，5.47(1H，s)，5.99(1H，t，J＝4.8Hz)，6.84(1H，d，J＝8.0Hz)，7.00(2H，s)，7.24(2H，d，J＝8.4Hz)，7.55(2H，d，J＝8.4Hz)，7.66(1H，t，J＝4.8Hz)，7.80(1H，d，J＝8.4Hz)，7.92(2H，d，J＝4.8Hz)，8.06(1H，d，J＝7.6Hz)，9.97(1H，s)，13.28(1H，s)，14.04(1H，s).ESI-MS:1141.7(M+H)+實施例100在表1中給出的式(I)化合物的制備的通常方法說明：向10mM的N-乙酰-半胱氨酸水溶液(2500微升，5當量)中加入10mM相應的式(Ⅱ)化合物在N,N-二甲基乙酰胺(500微升)中的溶液。用0.3M的磷酸氫鈉溶液將pH值調節(jié)至7.5，將反應混合物在20℃下攪拌2小時。所產生的相應的式(I)化合物的溶液無需進一步純化即可使用/測試。詳情列于表(1)表1實施例式(II)化合物式(I)化合物100-1根據比較實施例7制備的式(Comp-12)化合物式(Comp-13)化合物100-2根據實施例36制備的式(23)化合物式(13)化合物100-3根據實施例15制備的式(20)化合物式(10)化合物100-4根據實施例22制備的式(21)化合物式(11)化合物100-5根據實施例29制備的式(22)化合物式(12)化合物100-6根據實施例54制備的式(25)化合物式(15)化合物100-7根據實施例60制備的式(26)化合物式(16)化合物100-8根據實施例44制備的式(24)化合物式(14)化合物方法RP-HPLC使用以下參數完成根據實施例100制備的相應的式(I)化合物的溶液的RP-HPLC分析：Luna5UC18250×4.6mm柱(從Phenomenex公司購買)，溶劑A：0.1％(體積/體積)的TFA在水中，溶劑B：0.1％(體積/體積)的TFA在乙腈中，100％溶劑A持續(xù)10分鐘，在接下來的70分鐘內梯度從0到70％的溶劑B，且在接下來的3分鐘內到100％，1毫升/分鐘，在254nm處檢測。RT＝保留時間在表2中給出的值表2RT式(DOXO)化合物44.9分鐘式(Comp-13)化合物54.5分鐘式(13)化合物55.1分鐘式(10)化合物51.2分鐘式(11)化合物51.7分鐘式(12)化合物50.7分鐘式(15)化合物50.6分鐘式(16)化合物52.2分鐘式(14)化合物48.3分鐘溶解性測試將根據實施例100制備相應的式(I)化合物的溶液(分別15，48和96微升)與水(分別135，102和54微升)混合，以得到共150微升的相應的三種稀釋溶液。根據各溶液中的水的總體積，這三種稀釋液的DMA濃度分別為1.5％，5.0％和10.0％，該百分比為體積百分比。將這些稀釋液在20℃下攪拌1小時，然后通過方法RP-HPLC進行分析。通過比較峰面積(相對于最易溶解的偶聯物，即式(11)化合物，其峰面積被設置為100％，用表3中的(*ref)表示)對式(I)化合物的溶解度進行評估，值如表3所示：表31.5％DMA5.0％DMA10.0％DMA式(Comp-13)化合物8％41％77％式(13)化合物17％53％82％式(10)化合物15％47％84％式(11)化合物19％58％100％(*ref)式(12)化合物16％49％85％式(15)化合物16％45％77％式(16)化合物16％47％80％式(14)化合物12％36％66％與基準連接式(Comp-13)化合物相比，式(Ⅰ)化合物特別地在更相關的低DMA濃度的情況下的較高的溶解度提供了兩個優(yōu)點：1)由于減少了聚合，在合成式(I)化合物時的較高收率2)優(yōu)良的藥代動力學式(DOXO)化合物的組織蛋白酶B釋放將牛脾組織蛋白酶B(SAFCC6286-10UN，10單位)溶解在1毫升pH值為5.0的醋酸鹽緩沖液(25mM的醋酸鹽和1mM的EDTA)以提供組織蛋白酶B原液。將該組織蛋白酶B原液(16微升)與30mM的二硫蘇糖醇以及15mM的EDTA的水溶液(32微升)混合，在20℃下將所得溶液靜置不攪拌持續(xù)15分鐘。然后加入25mM的醋酸鹽和1mM的EDTA的水溶液(1175微升)、相應的式(I)化合物的溶液(142微升，根據實施例100制備)、N,N-二甲基乙酰胺(53.7微升)、和根據保留時間作為內標用于分配峰的10mM道諾霉素的水溶液(157.7微升)。將所得溶液在37℃下培養(yǎng)2天。如表4中給出的，定期取出并通過方法RP-HPLC分析未稀釋的等分試樣(100微升)。在實驗過程中，相對于相應的式(I)化合物，式(DOXO)化合物釋放的相對百分比在表4中給出：表40h4h8h24h48h式(13)化合物<0.1％18.0％24.4％32.2％33.8％式(10)化合物<0.1％15.8％23.5％35.5％41.4％式(11)化合物<0.1％6.4％8.7％13.5％15.4％式(12)化合物<0.1％3.0％3.8％5.3％5.0％式(15)化合物<0.1％1.3％1.6％2.3％4.1％式(16)化合物<0.1％0.6％1.0％2.0％2.2％式(14)化合物<0.1％<0.1％1.0％1.7％2.2％在組織蛋白酶B的存在下所有化合物顯示藥物釋放。在人血清中的穩(wěn)定性向人血清(SAFCH4522，950微升)中加入相應的式(I)化合物的溶液(950微升，根據實施例100制備)和10mM道諾霉素的水溶液作為內標(100微升)。將所得溶液在37℃下溫育7天。如列于表4，定期取出等分試樣(100微升)，用0到5℃的甲醇(400微升)稀釋，過濾，將得到的濾液通過方法RP-HPLC分析。相對于道諾霉素(內標)將釋放的式(DOXO)化合物進行定量，值在表5中給出：表50小時4小時8小時24小時48小時72小時式(13)化合物<0.1％<0.1％<0.1％4.4％6.3％6.9％式(10)化合物<0.1％<0.1％<0.1％2.4％4.3％4.3％式(11)化合物<0.1％<0.1％<0.1％<0.1％<0.1％<0.1％式(12)化合物<0.1％<0.1％<0.1％<0.1％<0.1％<0.1％式(15)化合物<0.1％<0.1％0.2％3.2％5.2％6.0％式(16)化合物<0.1％1.3％1.2％1.9％3.2％1.6％式(14)化合物<0.1％<0.1％<0.1％1.1％2.5％2.6％所有支鏈聯接體被證明具有良好的穩(wěn)定性。實施例101衍生自式(22)化合物和單克隆抗白介素-1β抗體的式(12-101)化合物的制備方法如下：將在小鼠中產生的單克隆抗白介素-1β抗體(5毫克，Sigma貨號I3642)混合在PBS(8.0毫升)中。向等份溶液(3ml)中加入1.0mM的三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(25微升，2.0當量)的水溶液，并將該混合物在20℃下攪拌90分鐘。加入根據實施例29制備的1.0mM的式(22)化合物在N,N-二甲基乙酰胺(64.4微升，5.15當量)中的溶液，并進一步將所得混合物在20℃下攪拌30分鐘。加入1.0mM的N-乙酰-半胱氨酸(64.4微升，5.15當量)的水溶液，并將所得混合物在20℃再攪拌36分鐘，以產生所謂的偶聯物混合物。NAP-25柱用PBS(25ml)漂洗，裝填偶聯物混合物(2.5毫升)，并用PBS(5.0毫升)洗脫。收集部分，匯集那些含有蛋白質的部分。用懸浮在PBS中的單克隆抗白介素-1β抗體通過方法SEC-HPLC(結果列于表6)和方法HIC分析包括式(12-101)化合物的所匯集的蛋白質溶液。實施例102衍生自式(25)化合物和單克隆抗白介素-1β抗體的式(15-102)化合物的制備方法如下：將在小鼠中產生的單克隆抗白介素-1β抗體(5毫克，Sigma貨號I3642，如實施例101中所用)混合在PBS(8.0毫升)中。向等份溶液(3ml)中加入1.0mM的三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(25微升，2.0當量)的水溶液，并將該混合物在20℃下攪拌90分鐘。加入根據實施例54制備的1.0mM的式(25)化合物在N,N-二甲基乙酰胺(64.4微升，5.15當量)中的溶液，并進一步將所得混合物在20℃下攪拌30分鐘。加入1.0mM的N-乙酰-半胱氨酸(64.4微升，5.15當量)的水溶液，并將所得混合物在20℃再攪拌42分鐘，以產生所謂的偶聯物混合物。NAP-25柱用PBS(25ml)漂洗，裝填偶聯物混合物(2.5毫升)，并用PBS(5.0毫升)洗脫。收集部分，匯集那些含有蛋白質的部分。用懸浮在PBS中的單克隆抗白介素-1β抗體通過方法SEC-HPLC(結果列于表6)和方法HIC分析包括式(15-102)化合物的所匯集的蛋白質溶液。方法SEC-HPLC使用以下參數完成相應的所匯集的蛋白質溶液的SEC-HPLC分析：TSKG3000SWXL300×7.8mm柱(平均孔徑為250埃，平均顆粒尺寸為5微米，購自TosohBioscience公司的基于二氧化硅的柱)，洗脫劑：10％(體積/體積)異丙醇的0.2M磷酸鉀緩沖液，0.5毫升/分鐘，在280nm處檢測。RT＝保留時間通過比較未修飾的單克隆抗白介素-1β抗體來確定相應的式(I)化合物的峰值和及其保留時間，未修飾的單克隆抗白介素-1β抗體用作實施例101和102中的培養(yǎng)基。HMW＝高分子量部分，未分配LMW＝低分子量部分，未分配方法HIC使用以下參數完成相應的所匯集的蛋白質溶液的HIC分析：TSK-凝膠丁基-NPR4.6毫米×35mm柱(NPR指非多孔樹脂，具有平均粒徑2.5微米的聚甲基丙烯酸酯的基體材料，購自TosohBioscience公司)，溶劑A：50mM磷酸鈉緩沖液，溶劑B：25％(體積/體積)異丙醇在50mM的磷酸鈉緩沖液中，在12分鐘內溶劑梯度從100％溶劑A至100％溶劑B，0.8毫升/分鐘，在280nm處檢測。圖1示出了所得到的色譜圖。圖1所用符號說明：連續(xù)線----在實施例101和102中使用的單克隆抗白介素-1β抗體短劃線───根據實施例101制備的式(12-101)化合物點線■■■■■■■根據實施例102制備的式(15-102)化合物AU吸收單位