本發(fā)明涉及山麥冬提取技術，具體地說，涉及一種山麥冬總皂苷的制備方法。
背景技術：
山麥冬為百合科沿階草屬植物Ophiopogonjaponicus(L．f．)ker—Gawl的干燥塊根，是一味常用滋陰中藥，《中國藥典}2005版收載中藥制劑中約有40多種藥劑處方含有麥冬。麥冬具有養(yǎng)陰生津，潤肺清心的功能，可用于熱病傷津，心煩口渴等證。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)：麥冬含有甾體皂苷、高異黃酮、多糖、氨基酸等成分。皂苷類成分是其有效成分之一，具有改善心肌收縮力、保護心肌細胞、抗心肌缺血、抗心律失常作用，臨床用于冠心病心絞痛，并取得了一定的療效。其主要苷元是薯蕷苷元和魯斯可苷元。
《中國藥典》2005版中缺乏對麥冬皂苷類成分的提取辦法的記載，而文獻報道提取麥冬總皂苷方法則豐要為醇提法和水提法。
《中成藥》2005年第27卷第5期的論文“正交設計研究麥冬皂苷提取工藝”中，優(yōu)選出60℃下，50％乙醇提取三次，每次2h的提取工藝。雖然其提取溫度比較低，但是提取時間長，一共需要提取6個小時，能耗大，提取效率低。
《中草藥》2002年第33卷第12期的論文“麥冬總皂苷提取工藝的研究”中，優(yōu)選出了一種醇提方法，是用5-10目藥材，加10倍量80％乙醇，回流提取3次，每次1h。同樣顯示出是提取次數(shù)多，時間長的缺點，一共需要提取3個小時。
綜合上述文獻，發(fā)現(xiàn)所用方法提取基本完全，但同時存在消耗溶劑多，提取次數(shù)多，純度不高，活性不穩(wěn)定，污染嚴重的缺點，為了更能節(jié)省溶劑和能源的消耗，減少環(huán)境污染，節(jié)約原材料，有必要改進山麥冬總皂苷的提取及制備方法。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術存在的不足，提供一種節(jié)約原材料、提取效率高、純度高、消耗溶劑少、無污染的山麥冬總皂苷的制備方法。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案：
一種山麥冬總皂苷的制備方法，包括如下步驟：將山麥冬藥材取洗干凈山麥冬藥材，加入軟水進行納米級水磨，置于植物提取罐中，加入嗜堿菌進行24h分解，加入乙醇濃度為60％，藥材與溶劑的重量體積比為1：15，提取溫度65℃，提取時問120min，提取液經過抽濾或離心，清液進行濃縮，二氯甲烷萃取制備后得稠膏，加入乙醇進行制備色譜分離，得到山麥冬總皂苷。
在上述山麥冬總皂苷的制備方法中，所述醇溶液優(yōu)選為甲醇或乙醇溶液。
在上述山麥冬總皂苷的制備方法中，所述乙醇溶液體積濃度優(yōu)選為65％-75％。
在上述山麥冬總皂苷的制備方法中，所用山麥冬藥材粗粉粒度優(yōu)選為納米級水磨。由于山麥冬干燥藥材比較堅硬，而嗜堿菌分解提取效率高，溫度低，所以有必要對藥材進行納米級水磨，增加藥材與溶劑接觸的面積，提高總皂苷的提取率。
在上述山麥冬總皂苷的制備方法中，山麥冬藥材與溶劑的重量體積比優(yōu)選為1：15-1：20。
在上述山麥冬總皂苷的制備方法中，納米級水磨、嗜堿菌。
在上述山麥冬總皂苷的制備方法中，溫度優(yōu)選為60-70℃。
在上述山麥冬總皂苷的制備方法中，提取時間優(yōu)選為120-150min。
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有如下有益效果：
1.該發(fā)明在提取過程中，利用納米級水磨、嗜堿菌的分解效應、機械效應及熱效應等增強溶劑對藥材的穿透力，有助于藥材中有效成分的溶出，從而提高有效成分的提取率，節(jié)約原材料，降低提取溫度，降低能耗，提高提取效率，減少對環(huán)境污染。
2．該發(fā)明的制備工藝中溶劑用量少，既節(jié)約溶劑又節(jié)約能源，降低生產成本，對環(huán)境零污染。
由于山麥冬在《中國藥典》2005舨中缺乏含量測定項，所以參考文獻報道，山麥冬皂苷主要苷元是薯蕷苷元和魯斯可苷元，并結合實驗驗證，確定山麥冬總皂甘的質量指標以薯蕷皂苷元為對照品，采用的測定方法為分光光度法。具體方法為：取2g藥材的提取液，濃縮至干，10ml水溶解，用水飽和正丁醇萃取4次，洗滌萃取液，合并正丁醇液，濃縮至干用甲醇定容至10m1。取甲醇液0.5ml，水浴揮干，加高氯酸10ml，65℃水浴15min，冰水冷卻終止反應，制得樣品液。以高氯酸(分析純)為空白，在409nm下測定吸光度。
本發(fā)明所說的山麥冬總皂苷得率=(總皂苷重量/投入的藥材重量)×100％
山麥冬總皂苷提取率=(麥冬總皂苷提取物中的總皂苷含量×總皂苷重量/投入的山麥冬藥材總皂苷含量×投入的藥材重量)×100％
下面通過具體實施例進一步闡述本發(fā)明的技術方案。
具體實施方式
以下實施例所用的山麥冬總皂苷含量為3.06‰。
如下乙醇百分比均為體積百分比。
實施例1提取工藝條件的選擇
(1)納米水磨、嗜堿菌分解的時間對山麥冬總皂苷提取效果的影響
實驗方法：取山麥冬500g納米級水磨，置于植物提取罐中，加入嗜堿菌溶液，加入量為總量的3.5%，分解24h,加入60％乙醇作為提取溶劑，藥材與溶劑的重量體積比為1：15，提取溫度65℃，選擇不同的分解時間提取一次，分解提取后的提取液經過抽濾或離心，清液進行濃縮，二氯甲烷萃取制備后得稠膏，干燥，即得麥冬提取物。考察不同提取時間下麥冬總皂苷的提取效果。結果如表1所示：
表1
時問提取率(％)
10h24.2
14h30.1
18h45.6
20h73.5
24h90.3
實驗結果顯示延長分解時間能增加總皂苷的提取率，24h時含量就已經達到最高。所以選取24h作為最佳提取時間。
(2)提取溫度對山麥冬總皂苷提取效果的影響
實驗方法：取500g山麥冬藥材納米級粉末，置于植物提取罐中，嗜堿菌分解24h,加入60%乙醇作為提取溶劑，藥材與溶劑的重量體積比為1：15，選擇不同的提取溫度提取一次，超聲提取后的提取液經過抽濾或離心，清液進行濃縮，二氯甲烷萃取制備后得稠膏，干燥，即得麥冬提取物。考察不同提取時間下山麥冬總皂苷的提取效果。結果如表2所示：
表2
溫度提取率(％)
20℃58.5
30℃60.9
40℃60.9
50℃84.7
60℃87.8
實驗結果顯示，隨著提取溫度的升高，山麥冬總皂苷的提取率也不斷提高，綜合考慮成本，故選取60℃作為最佳超聲提取溫度。
(3)提取溶劑對山麥冬總皂苷提取效果的影響
實驗方法：取500g山麥冬藥材納米級粉末，置于植物提取罐中，嗜堿菌分解24h,加入60%乙醇作為提取溶劑，藥材與溶劑的重量體積比為1：15，選擇不同的提取溶劑提取一次，超聲提取后的提取液經過抽濾或離心，清液進行濃縮，二氯甲烷萃取制備后得稠膏，干燥，即得麥冬提取物?？疾觳煌崛r間下山麥冬總皂苷的提取效果。結果如表3所示：
表3
溶劑提取率(％)
水55．6
30％乙醇63．7
40％乙醇70．9
50％乙醇76．5
60％乙醇87．4
70％乙醇88．3
甲醇78．4
實驗結果顯示，選擇60％乙醇、70％乙醇和甲醇作為提取溶劑都具有較好的提取
效果。但甲醇毒性較大，不利于工業(yè)化生產，而50％乙醇提取出雜質相對較多，過濾比較困難，所以綜合生產成本等因素，選取60％乙醇作為提取溶劑。
(4)提取溶劑體積對麥冬總皂苷提取效果的影響
實驗方法：取500g山麥冬藥材納米級粉末，置于植物提取罐中，嗜堿菌分解24h,加入60%乙醇作為提取溶劑，藥材與溶劑的重量體積比為1：15，選擇不同的提取溶劑比例提取一次，超聲提取后的提取液經過抽濾或離心，清液進行濃縮，二氯甲烷萃取制備后得稠膏，干燥，即得麥冬提取物?？疾觳煌崛r間下山麥冬總皂苷的提取效果。結果如表4所示：
表4
溶劑提取率（%）
10倍 88.6
15倍 90.7
實驗結果顯示，使用藥材與溶劑的重量體積比1：15的時候，提取率能得到較大的提高。因此選取1：15作為最佳藥材與溶劑的重量體積比。
(5)藥材目數(shù)對麥冬總皂苷提取效果的影響
實驗方法：取500g山麥冬藥材納米級粉末，置于植物提取罐中，嗜堿菌分解24h,加入60%乙醇作為提取溶劑，藥材與溶劑的重量體積比為1：15，選擇不同的提取細度提取一次，超聲提取后的提取液經過抽濾或離心，清液進行濃縮，二氯甲烷萃取制備后得稠膏，干燥，即得麥冬提取物?？疾觳煌崛r間下山麥冬總皂苷的提取效果。結果如表5所示：
表5
納米級水磨提取率（%）
納米級無水 90.8
納米級含水 99.5
實驗結果顯示，利用經過納米級含水的藥材進行嗜堿菌提取比納米級無水的提取率更高，所以選定納米含水作為最佳工藝。
最后，歸納納米水磨、嗜堿菌法提取最佳提取工藝為：取納米水磨的山麥冬藥材，置于植物提取罐中，嗜堿菌加入量為總量的3.5%，分解24h,乙醇濃度為60％，藥材與溶劑的重量體積比為1：15，提取溫度60℃，提取時間120min，提取后的提取液經過抽濾或離心，清液進行濃縮，二氯甲烷萃取制備后得稠膏，加入乙醇進行C18-制備色譜分離得到麥冬總皂苷。
實施例2
取500g取納米水磨的山麥冬藥材，置于植物提取罐中，嗜堿菌加入量為總量的3.5%，分解24h,乙醇濃度為60％，藥材與溶劑的重量體積比為1：15，提取溫度60℃，提取時間120min，提取后的提取液經過抽濾或離心，清液進行濃縮，二氯甲烷萃取制備后得稠膏，加入乙醇進行C18-制備色譜分離得到山麥冬稠膏，干燥，即得麥冬總皂苷。結果：干膏得率為2.5％，含量25.0％，提取率99.7％。
實施例3
同實施例2所示，不同的是：實施例2中藥材與溶劑的重量體積比為1：20，而實施例3中藥材與溶劑的重量體積比為1：10。結果：干膏得率為1.9％，含量16.7％，提取率91．7％。
實施例4
同實施例3所示，不同的是：實施例3中藥材粉碎達納米級，而實施例4中藥材粉碎達納米級。結果：干膏得率為1.9％，含量15.7％，提取率85.8％。
實施例5
同實施例4所示，不同的是：實施例4中乙醇濃度為60%，提取時間為24h，而實施例5中乙醇濃度為50％，提取時間為12h。結果：干膏得率為2.3％，含量15.7％，提取率79．6％。
實施例6
同實施例4所示，不同的是：實施例4中提取時間為12h，而實施例6中提取時間為8h。結果：干膏得率為1.5％，含量11.7％，提取率40.1％。
實施例7
取500g取納米水磨的山麥冬藥材，置于植物提取罐中，嗜堿菌加入量為總量的3.5%，分解24h,乙醇濃度為60％，藥材與溶劑的重量體積比為1：10，提取溫度60℃，提取時間40min，提取后的提取液經過抽濾或離心，清液進行濃縮，二氯甲烷萃取制備后得稠膏，加入乙醇進行C18-制備色譜分離得到山麥冬稠膏，干燥，即得麥冬總皂苷。結果：干膏得率為1.3％，含量18.7％，提取率73.4％,C18-制備色譜后純度達95%以上。
實施例8
同實施例3所示，不同的是：實施例3使用植物提取一次，實施例8使用水浴熱回流提取3次，每次60min。結果：干膏得率為2.4％，含量15.7％。
由以上實施例可知，納米級水磨、嗜堿菌分解提取山麥冬藥材，其最優(yōu)條件為：納米級水磨的山麥冬藥材，置于植物提取罐中，加入嗜堿菌的量為總量3.5%,分解24h,乙醇濃度為60-80％，藥材與溶劑的重量體積比為1：10-1：18，60-75℃，提取時間60-150min，提取液經過抽濾或離心，清液進行濃縮，二氯甲烷萃取制備后得稠膏，加入乙醇進行C18-制備色譜分離即得95%以上山麥冬總皂苷。而常規(guī)回流提取則需要在較高提取溫度下長時間和多次數(shù)地進行提取，才能達到本工藝一次提取的效果。因此，納米水磨、嗜堿菌分解提取具有減少提取溶劑用量，降低提取溫度，節(jié)約原材料，減少環(huán)境污染，不破壞藥物的活性成分，提取山麥冬總皂苷純度高的特點。