本發(fā)明涉及動物模型技術(shù)領(lǐng)域，更具體的說是涉及一種大鼠皮膚壓瘡模型的制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

創(chuàng)傷愈合在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中是古老而重要的課題之一。皮膚作為一種特殊的器官，是人類與外界接觸的第一道屏障，在創(chuàng)傷愈合中起著不容忽視的作用。皮膚損傷是一種臨床上常見病，由急、慢性損傷引起。急性損傷主要是由各種外傷所致，包括：手術(shù)創(chuàng)面、燒傷、凍傷、火器傷等：慢性損傷則常見于壓傷即褥瘡潰瘍、代謝性疾病如糖尿病足潰瘍、放化療術(shù)后皮膚慢性潰瘍等。

壓瘡即壓力性潰瘍，較早被稱為褥瘡，是由于身體局部組織長期受壓，血液循環(huán)障礙、組織營養(yǎng)缺乏，導(dǎo)致皮膚失去正常功能而引起的組織缺損和壞死。壓瘡的形成是多種因素共同作用的結(jié)果，但是缺血-再灌注循環(huán)損傷是慢性皮膚損傷(壓瘡、糖尿病潰瘍等)的主要誘因。

壓瘡的形成是一個長期、復(fù)雜的過程，關(guān)于人壓瘡的活體研究還處于“嬰兒期”，通過以病人為主要研究對象的實驗所獲得的信息仍相當(dāng)匱乏。動物模型的研究能有效模擬臨床環(huán)境，人為掌握多重影響因素，從而獲得接近臨床的壓瘡模型用于其病理生理機(jī)制以及防治措施的實驗研究。

因此，如何提供一種動物壓瘡模型可以為臨床褥瘡疾病的用藥的提供載體是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟需解決的問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種大鼠局部皮膚壓瘡模型的制備方法及其應(yīng)用，不僅提供了一種動物壓瘡模型的制備方法，而且為臨床上治療褥瘡疾病的用藥提供了載體，更為研發(fā)出有效的治療藥物奠定了基礎(chǔ)。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下的技術(shù)方案：

一種大鼠局部皮膚壓瘡模型的制備方法，包括：大鼠局部皮膚壓瘡模型是采用缺血-再灌注循環(huán)損傷法制備的，具體包括如下步驟：

(1)準(zhǔn)備工作：選取實驗備用的大鼠，并將備用大鼠在實驗前禁食12h，可以自由飲水。

(2)稱量和麻醉：稱量大鼠的體重，然后首日首次注射戊巴比妥鈉麻醉大鼠，劑量為50mg/kg大鼠，采用腹腔注射；并在之后維持麻醉狀態(tài)，同時按40mg/kg大鼠劑量酌情補(bǔ)充麻醉。

(3)模型的制備：待大鼠完全麻醉后，使大鼠俯臥，將大鼠左下肢股骨大轉(zhuǎn)子至脛骨前區(qū)皮膚持續(xù)負(fù)重6h，然后將負(fù)重的創(chuàng)面皮膚剪開，使其形成直徑1.0cm的缺損面，并在缺損面上持續(xù)三天負(fù)重，每次負(fù)重持續(xù)6h。

(4)臨床指標(biāo)檢測：通過大鼠局部表層變化情況的觀察和病理組織學(xué)檢查來評估模型建立情況；大鼠局部表層變化情況具體包括：每日觀察壓瘡皮膚表層變化、創(chuàng)面自愈狀況、創(chuàng)面自愈程度統(tǒng)計分析；病理組織學(xué)檢查具體包括：處死大鼠后取新生皮膚，并用福爾馬林固定，采用石蠟切片以及HE染色，觀察皮膚的改變和附件情況。

優(yōu)選的，在上述一種大鼠局部皮膚壓瘡模型制備方法中，所述大鼠選用體重在280-320g，雌雄各半的SD大鼠，并飼養(yǎng)在SPF潔凈級動物房內(nèi)，室溫20-24℃，相對濕度50-60％，同時可以自動調(diào)控晝夜各12h，顆粒飼養(yǎng)喂養(yǎng)，自由飲水。

優(yōu)選的，在上述一種大鼠局部皮膚壓瘡模型制備方法中，所述大鼠負(fù)重物是指接觸皮膚表面的壓瘡面直徑約1.0cm，總重量在1.37-1.39kg的物體。

優(yōu)選的，在上述一種大鼠局部皮膚壓瘡模型制備方法中，所述臨床指標(biāo)檢測是指損傷部位新生皮膚及下層肌肉組織病理學(xué)檢查，包括皮下纖維組織增生、肌肉變性、萎縮、纖維細(xì)胞、毛細(xì)血管增生、炎細(xì)胞浸潤。

優(yōu)選的，所述的一種大鼠局部皮膚壓瘡模型在篩選治療褥瘡疾病藥物中的應(yīng)用，為臨床治療褥瘡疾病的用藥提供載體。

經(jīng)由上述的技術(shù)方案可知，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明主要是采用缺血-再灌注循環(huán)損傷法建立大鼠局部皮膚壓瘡模型；通過選取實驗備用的大鼠并進(jìn)行實驗前的準(zhǔn)備工作、然后稱量和麻醉、并經(jīng)過模型的制備和臨床指標(biāo)的檢測評估模型建立情況。本發(fā)明利用大鼠局部皮膚進(jìn)行制備動物壓瘡模型，為臨床對褥瘡疾的用藥提供了研究的載體，為研發(fā)有效的治療藥物奠定了基礎(chǔ)。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)提供的附圖獲得其他的附圖。

圖1附圖為不同性別的大鼠創(chuàng)面自愈指數(shù)：模型建立后，每間隔兩天，檢測創(chuàng)面的愈合速度，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

圖2附圖為大鼠創(chuàng)面變化情況觀察：隨時間推移，肉眼觀察表層創(chuàng)面皮膚變化。

圖3附圖是病理檢查模型建立3周后創(chuàng)面皮膚和里層肌肉的病理改變情況圖。

具體實施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

本發(fā)明實施例公開了一種大鼠局部皮膚壓瘡模型的制備方法及其應(yīng)用，不僅提供了一種動物壓瘡模型的制備方法，而且為臨床上治療褥瘡疾病的用藥提供了載體，更為研發(fā)出有效的治療藥物奠定了基礎(chǔ)。

本發(fā)明提供的一種大鼠局部皮膚壓瘡模型的制備方法，采用大鼠局部皮膚壓瘡模型是采用缺血-再灌注循環(huán)損傷法制備的，具體包括如下步驟：

(1)準(zhǔn)備工作：選取實驗備用的大鼠，并將備用大鼠在實驗前禁食12h，可以自由飲水。

(2)稱量和麻醉：稱量大鼠的體重，然后首日首次注射戊巴比妥鈉麻醉大鼠，劑量為50mg/kg大鼠，采用腹腔注射；并在之后維持麻醉狀態(tài)，同時按40mg/kg大鼠劑量酌情補(bǔ)充麻醉。

(3)模型的制備：待大鼠完全麻醉后，使大鼠俯臥，將大鼠左下肢股骨大轉(zhuǎn)子至脛骨前區(qū)皮膚持續(xù)負(fù)重6h，然后將負(fù)重的創(chuàng)面皮膚剪開，使其形成直徑1.0cm的缺損面，并在缺損面上持續(xù)三天負(fù)重，每次負(fù)重持續(xù)6h。

(4)臨床指標(biāo)檢測：通過大鼠局部表層變化情況的觀察和病理組織學(xué)檢查來評估模型建立情況；大鼠局部表層變化情況具體包括：每日觀察壓瘡皮膚表層變化、創(chuàng)面自愈狀況、創(chuàng)面自愈程度統(tǒng)計分析；病理組織學(xué)檢查具體包括：處死大鼠后取新生皮膚，并用福爾馬林固定，采用石蠟切片以及HE染色，觀察皮膚的改變和附件情況。

為了進(jìn)一步優(yōu)化上述技術(shù)方案，大鼠選用體重在280-320g，雌雄各半的SD大鼠，并飼養(yǎng)在SPF潔凈級動物房內(nèi)，室溫20-24℃，相對濕度50-60％，同時可以自動調(diào)控晝夜各12h，顆粒飼養(yǎng)喂養(yǎng)，自由飲水。

為了進(jìn)一步優(yōu)化上述技術(shù)方案，大鼠負(fù)重物是指接觸皮膚表面的壓瘡面直徑約1.0cm，總重量在1.37-1.39kg的物體。

為了進(jìn)一步優(yōu)化上述技術(shù)方案，臨床指標(biāo)檢測是指損傷部位新生皮膚及下層肌肉組織病理學(xué)檢查，包括皮下纖維組織增生、肌肉變性、萎縮、纖維細(xì)胞、毛細(xì)血管增生、炎細(xì)胞浸潤。

為了進(jìn)一步優(yōu)化上述技術(shù)方案，一種大鼠局部皮膚壓瘡模型在篩選治療褥瘡疾病藥物中的應(yīng)用，為臨床治療褥瘡疾病的用藥提供載體。

本說明書中各個實施例采用遞進(jìn)的方式描述，每個實施例重點說明的都是與其他實施例的不同之處，各個實施例之間相同相似部分互相參見即可。對于實施例公開的裝置而言，由于其與實施例公開的方法相對應(yīng)，所以描述的比較簡單，相關(guān)之處參見方法部分說明即可。

對所公開的實施例的上述說明，使本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員能夠?qū)崿F(xiàn)或使用本發(fā)明。對這些實施例的多種修改對本領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員來說將是顯而易見的，本文中所定義的一般原理可以在不脫離本發(fā)明的精神或范圍的情況下， 在其它實施例中實現(xiàn)。因此，本發(fā)明將不會被限制于本文所示的這些實施例，而是要符合與本文所公開的原理和新穎特點相一致的最寬的范圍。