本發(fā)明涉及天然產(chǎn)物化學(xué)和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及去氫紫堇堿在制備抗炎鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)背景

疼痛是一個(gè)世界性的難題，眾多研究表明，炎癥反應(yīng)參與了疼痛的產(chǎn)生與維持。炎癥反應(yīng)是一種警戒信號(hào)和機(jī)體自我保護(hù)的一種防御反應(yīng)，表示機(jī)體已經(jīng)發(fā)生損傷或預(yù)示即將遭受損傷，炎癥反應(yīng)的持續(xù)性存在可以導(dǎo)致長(zhǎng)期的慢性疼痛的產(chǎn)生，嚴(yán)重降低患者生活質(zhì)量甚至產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)問題。炎癥與疼痛是一個(gè)連鎖反應(yīng)，二者互相影響，由此產(chǎn)生了抗炎鎮(zhèn)痛藥物，目前市場(chǎng)上主流抗炎鎮(zhèn)痛藥物為非甾體抗炎藥物(NSAIDS)，其通過抑制環(huán)氧合酶，減少前列腺素的合成而發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛作用。然而，非甾體抗炎藥物的眾多嚴(yán)重副反應(yīng)如胃腸道損害，腎臟毒性等限制了其應(yīng)用。因此，開發(fā)新的抗炎鎮(zhèn)痛藥物刻不容緩。

去氫紫堇堿屬于異喹啉衍生物類生物堿，是來源于延胡索的塊莖、細(xì)深山紫堇全草的黃色粉末狀化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如(Ⅰ)所示。

研究表明，去氫紫堇堿有廣泛的生理活性，在心肌保護(hù)、擴(kuò)張冠脈、抗?jié)兗翱鼓[瘤方面有顯著效果，但目前尚未有將去氫紫堇堿用作抗炎鎮(zhèn)痛藥的相關(guān)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種去氫紫堇堿在制備抗炎鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的上述目的是通過如下方案予以實(shí)現(xiàn)的：

去氫紫堇堿在市面上有純品銷售。因此，本發(fā)明對(duì)去氫紫堇堿的制備不做權(quán)利要求。本發(fā)明采用市售的去氫紫堇堿(批號(hào):VIC449,微科曼得生物有限公司)進(jìn)行鎮(zhèn)痛、抗炎的活性檢測(cè)。

本發(fā)明與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

1、本發(fā)明的去氫紫堇堿對(duì)炎癥性疼痛有較好的治療作用；

2、本發(fā)明的去氫紫堇堿有較好的抗炎作用；

3、本發(fā)明的去氫紫堇堿對(duì)重要臟器無明顯毒性作用。

附圖說明

圖1為醋酸扭體法測(cè)定去氫紫堇堿鎮(zhèn)痛活性折線圖(a)和柱狀圖(b)(其中，*表示與對(duì)照組相比p<0.05，**表示與對(duì)照組相比p<0.01)。

圖2為醋酸扭體法測(cè)定去氫紫堇堿抑制小鼠首次扭體時(shí)間柱狀圖。

圖3為福爾馬林足底炎性痛法測(cè)定去氫紫堇堿鎮(zhèn)痛活性折線圖(a)和柱狀圖(b)(其中，*表示與對(duì)照組相比p<0.05，**表示與對(duì)照組相比p<0.01)。

圖4為福爾馬林足底腫脹法測(cè)定去氫紫堇堿抗炎活性柱狀圖(其中，*表示與對(duì)照組相比p<0.05，**表示與對(duì)照組相比p<0.01)。

圖5為去氫紫堇堿對(duì)重要臟器的毒性作用柱狀圖(其中，*表示與對(duì)照組相比p<0.05，**表示與對(duì)照組相比p<0.01)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步解釋，但具體實(shí)例并不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成任何限定。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)雄性ICR小鼠，體重20-30g，由南京大學(xué)附屬鼓樓醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供

本實(shí)例設(shè)計(jì)的各實(shí)驗(yàn)試劑如下：甲醛，冰醋酸，二甲基亞砜(DMSO)，雙氯芬酸鈉注射液，鹽酸嗎啡注射液。

各實(shí)驗(yàn)組的劑量設(shè)置：

(1)去氫紫堇堿藥理實(shí)驗(yàn)設(shè)高中低三個(gè)劑量組，分別為10mg/kg、6mg/kg、3.6mg/kg；

(2)對(duì)照組給10％DMSO；

(3)嗎啡給藥濃度為1mg/kg(實(shí)施例1)、10mg/kg(實(shí)施例2、3)；

(4)雙氯芬酸鈉給藥濃度為10mg/kg(實(shí)施例1)、20mg/kg(實(shí)施例2、3)；

上述各組均為腹腔注射給藥(i.p.)

實(shí)施例1醋酸扭體法測(cè)定去氫紫堇堿鎮(zhèn)痛活性

本實(shí)例由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過醋酸扭體法對(duì)去氫紫堇堿的鎮(zhèn)痛活性進(jìn)行測(cè)定。

選擇60只雄性小鼠，分為10％DMSO組、雙氯芬酸鈉組、嗎啡組、去氫紫堇堿低劑量組(3.6mg/kg)、去氫紫堇堿中劑量組(6mg/kg)、去氫紫堇堿高劑量組(10mg/kg)，其中10％DMSO組為對(duì)照組，雙氯芬酸鈉和嗎啡組為陽性對(duì)照組。

給藥15min后，腹腔注射1％的醋酸，體積為10ml/kg，記錄小鼠首次扭體時(shí)間，并且計(jì)數(shù)30min內(nèi)每5min小鼠的扭體次數(shù)，扭體反應(yīng)具體表現(xiàn)為腹部收縮伴隨后肢的伸展和軀干的拉長(zhǎng)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：如圖1、2所示，去氫紫堇堿和陽性藥物都顯著的抑制醋酸引起的扭體反應(yīng)，使小鼠扭體次數(shù)減少，延長(zhǎng)小鼠首次扭體時(shí)間，說明使用藥物都有鎮(zhèn)痛作用。去氫紫堇堿的鎮(zhèn)痛活性具有劑量依賴性，其中低中高劑量組的抑制率分別為16.5％、34.0％、52.6％，雙氯芬酸鈉和嗎啡的抑制率分別為52.0％和54.6％。

實(shí)施例2福爾馬林足底炎性痛法測(cè)定去氫紫堇堿鎮(zhèn)痛活性

本實(shí)例由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過福爾馬林足底炎性痛法對(duì)去氫紫堇堿的鎮(zhèn)痛活性進(jìn)行測(cè)定。

選擇48只雄性小鼠，分為10％DMSO組、雙氯芬酸鈉組、嗎啡組、去氫紫堇堿低劑量組(3.6mg/kg)、去氫紫堇堿中劑量組(6mg/kg)、去氫紫堇堿高劑量組(10mg/kg)，其中10％DMSO組為對(duì)照組，雙氯芬酸鈉和嗎啡組為陽性對(duì)照組。

給藥10min后，足底注射20μl 5％福爾馬林，記錄45min內(nèi)每5min小鼠舔/咬腳時(shí)間。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：如圖3所示，去氫紫堇堿在10mg/kg的劑量下對(duì)該模型的第一相痛有顯著的鎮(zhèn)痛效果，去氫紫堇堿在10mg/kg、6mg/kg、3.6mg/kg的劑量下對(duì)第二相痛有顯著的鎮(zhèn)痛效果。其中10mg/kg的去氫紫堇堿抑制福爾馬林炎性疼痛的效果優(yōu)于陽性對(duì)照藥——嗎啡和雙氯芬酸鈉。說明了去氫紫堇堿對(duì)急慢性痛均有療效。

實(shí)施例3福爾馬林足底腫脹法測(cè)定去氫紫堇堿抗炎活性

本實(shí)例由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過福爾馬林足底腫脹法對(duì)去氫紫堇堿的抗炎活性進(jìn)行測(cè)定。選擇48只雄性小鼠，分為10％DMSO組、雙氯芬酸鈉組、嗎啡組、去氫紫堇堿低劑量組(3.6mg/kg)、去氫紫堇堿中劑量組(6mg/kg)、去氫紫堇堿高劑量組(10mg/kg)，其中10％DMSO組為對(duì)照組，雙氯芬酸鈉和嗎啡組為陽性對(duì)照組。

給藥10min后，足底注射20μl 5％福爾馬林液，記錄福爾馬林注射前和注射后60min小鼠腳掌厚度。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：如圖4所示，去氫紫堇堿可以劑量依賴性的降低福爾馬林導(dǎo)致的足底腫脹， 其中10mg/kg的去氫紫堇堿抑制足底腫脹的效果優(yōu)于陽性對(duì)照藥雙氯芬酸鈉。

實(shí)施例4去氫紫堇堿對(duì)重要臟器的毒性作用

本實(shí)例由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)操作對(duì)去氫紫堇堿引起的臟器毒性進(jìn)行測(cè)定。

選擇24只雄性小鼠，分為10％DMSO組、去氫紫堇堿高劑量組(10mg/kg)

給藥后，觀察24h，包括小鼠的行為、活動(dòng)、飲食、體重、毛發(fā)、糞便，然后處死小鼠，觀察大體解剖，取肝、腎、心、肺、腎、脾、腦測(cè)量臟器的濕重

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：給藥后小鼠沒有顯示出行為、活動(dòng)、飲食、體重、毛發(fā)、糞便的異常，大體解剖無明顯異常，肝、腎、心、肺、腎、脾、腦測(cè)量臟器無明顯的改變，如圖5所示，臟器系數(shù)與對(duì)照組相比無顯著差異。說明了去氫紫堇堿對(duì)重要臟器無明顯的毒性作用。