本發(fā)明涉及制藥領(lǐng)域，具體涉及一種包含二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮衍生物的組合物及其抗腫瘤用途。

背景技術(shù)：

惡性腫瘤是影響人類健康和生命的最主要的疾病之一。化療、放療與手術(shù)治療并用，是目前治療惡性腫瘤的主要手段。惡性腫瘤的化學(xué)治療藥物中，在現(xiàn)階段細(xì)胞毒類藥物仍然占主要地位。由于該類藥物的選擇性不強(qiáng)，絕大多數(shù)對(duì)骨髓都有著不同程度的抑制作用。此外，針對(duì)惡性腫瘤采用細(xì)胞毒類藥物的大劑量沖擊化療以及多周期及長(zhǎng)期應(yīng)用后，腫瘤細(xì)胞經(jīng)常對(duì)于所應(yīng)用的細(xì)胞毒類抗癌藥物產(chǎn)生耐藥性。

在先前的申請(qǐng)?zhí)枮?00710045600.X的專利中公開了一類二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮類化合物，其實(shí)一類含有1,2-二硫雜環(huán)戊烯[4,3-b]吡咯-5(4H)-酮環(huán)的化合物。并報(bào)道了該類二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮類化合物具備升高外周白細(xì)胞的活性。

迄今為止，還沒(méi)有公開將此類化合物應(yīng)用于與其他抗癌藥物形成組合物的研究報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

一方面，本發(fā)明公開了一種包含結(jié)構(gòu)式為ZL-004的二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮衍生物的組合物，該組合物還包含細(xì)胞毒類藥物。

在一種優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明組合物中的所述細(xì)胞毒類藥物選自順鉑、環(huán)磷酰胺或氟尿嘧啶等。

另一方面，本發(fā)明還公開了上述包含結(jié)構(gòu)式為ZL-004的二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮衍生物的組合物在制備抗腫瘤藥物的用途。

在一種優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明上述包含結(jié)構(gòu)式為ZL-004的二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮衍生物的組合物在制備抗腫瘤藥物的用途，所述腫瘤為實(shí)體瘤。

在一種優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明上述包含結(jié)構(gòu)式為ZL-004的二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮衍生物的組合物在制備抗腫瘤藥物的用途，所述實(shí)體瘤包括肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、 腸癌、胰腺癌、白血病等。

本發(fā)明的有益效果是：實(shí)施例中，表1的數(shù)據(jù)表明二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮衍生物ZL-004本身雖然在體內(nèi)未顯示明確的抗腫瘤作用，但是在與順鉑、環(huán)磷酰胺和5-氟嘧啶制成組合物時(shí)，不僅有使原來(lái)抗腫瘤效果增強(qiáng)了，而且顯示了優(yōu)于單一給予抗腫瘤藥物的效果。

此外，由于ZL-004溶解度差，口服生物利用度低，發(fā)明人通過(guò)采用ZL-004的納米顆粒可以明顯升高其生物利用度。

由于抗腫瘤藥物的作用機(jī)制不同，不同的抗腫瘤藥物所引起的副作用，特別是抗腫瘤藥物無(wú)論是細(xì)胞毒類抗癌藥物還是靶點(diǎn)特異性抗癌藥物，癌細(xì)胞都非常容易產(chǎn)生耐藥性。本發(fā)明的二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮衍生物ZL-004與細(xì)胞毒類藥物的組合物，使得二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮衍生物ZL-004發(fā)生協(xié)同作用，用藥后，癌細(xì)胞也較不容易產(chǎn)生耐藥性，這樣可以推遲耐藥性產(chǎn)生。

具體實(shí)施方式

通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，以下實(shí)施例僅用于更具體地說(shuō)明本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案，不用于對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行限定。上述本發(fā)明的方案均為可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的之技術(shù)方案。以下實(shí)施例所采用溫度和試劑，均可以用上述相應(yīng)溫度和試劑替代以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明之目的。

在本發(fā)明的以下的實(shí)施例中，縮寫具備以下的含義：CTX是指環(huán)磷酰胺、5-Fu是指5-氟尿嘧啶(也可以寫作5氟尿嘧啶或氟尿嘧啶)、PT是指順鉑。KM小鼠是指昆明小鼠。iv是指靜脈注射、ip是指腹腔給藥、im是指肌肉注射。

實(shí)施例1、ZL-004的納米顆粒的制備

參照專利CN201210195057.2，可以制備得到ZL-004的納米顆粒。例如：該專利的說(shuō)明書第4頁(yè)第[0070]段至第11頁(yè)第[0213]段的實(shí)施例1-8中就公開了制備二硫雜環(huán)戊烯并吡咯酮衍生物ZL-004的納米粒的方法。納米粒，也可以成為納米顆粒；有的還是納米結(jié)晶粒。

實(shí)施例2、ZL-004納米顆粒體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)

取生長(zhǎng)旺盛期的S180腹水瘤小鼠，頸椎脫臼致死后，無(wú)菌條件下抽取腹水，記數(shù)細(xì)胞，用生理鹽水稀釋為1-2×107個(gè)/ml，按0.2ml/只給小鼠腋下皮下接種，然后隨機(jī)分組。于接種后次日給藥。

取KM小鼠40只，按上述方法造模后，隨機(jī)分為5組，每組8只，分別為5mg/kg、3mg/kg、1mg/kg組，以上各組靜脈注射相應(yīng)濃度的ZL-004納米顆粒每天一次，連續(xù)給藥7天，環(huán)磷酰胺(以下簡(jiǎn)稱CTX)陽(yáng)性對(duì)照組(30mg/kg)靜脈注射，每天一次，連續(xù)給藥7天，模型對(duì)照組(以等容積的生理鹽水代替),連續(xù)給藥7天。末次給藥后次日處死動(dòng)物，解剖取瘤，稱重，計(jì)算抑瘤率，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)(t檢驗(yàn))處理。抑瘤率計(jì)算方法見如下公式。

表1：ZL-004口服給藥對(duì)小鼠S180移植瘤的影響

Tab2：Inhibition of ZL-004on S180tumor in vivo

說(shuō)明ZL-004納米顆粒本身并不具有抗腫瘤效果。

實(shí)施例3.ZL-004納米顆粒與CTX、5-Fu以及順鉑分別制成組合物(或稱為組合物)

將ZL-004納米顆粒分別與CTX、5-Fu以及順鉑混合，溶于不同濃度的磷酸緩沖液中，得到ZL-004納米顆粒分別與CTX、5-Fu以及順鉑的組合物。

不同PH值的磷酸緩沖液的制備方法是通過(guò)用磷酸鹽或磷酸氫鹽與氫氧化鈉/鉀，調(diào)節(jié)PH值用并用PH計(jì)測(cè)量得到。例如：

磷酸鹽緩沖液(pH5.0)：取0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液一定量,用氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH值至5.0，即得。

磷酸鹽緩沖液(pH6.8)：取0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液250ml，加0.2mol/L氫氧化鈉溶液118ml，用水稀釋至1000ml，搖勻，即得。

磷酸鹽緩沖液(含胰酶)(pH6.8)：取磷酸二氫鉀6.8g,加水500ml使溶解,用0.1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8；另取胰酶10g，加水適量使溶解，將兩液混合后,加水稀釋至1000ml，即得。

磷酸鹽緩沖液(pH7.8～8.0)：取磷酸氫二鉀5.59g與磷酸二氫鉀0.41g，加水使溶解成1000ml，即得。

以下表2-4中，注明了ZL-004與環(huán)磷酰胺CTX、ZL-004與5-氟尿嘧啶5-Fu及ZL-004與順鉑形成的組合物配比。這些組合物通過(guò)實(shí)施例1所述方法制備得到的ZL-004的納米顆粒與CTX、5-Fu及順鉑分別混合得到。

表2、ZL-004與CTX的組合物配比

表3、ZL-004與5-Fu的組合物配比

表4、ZL-004與順鉑的組合物配比

實(shí)驗(yàn)表明：ZL-004在酸性條件下與其它抗癌藥物混合后溶解度較好，但如需應(yīng)用到臨床，則選擇pH值接近中性的濃度。因此，pH值為6.8的溶液中，可與其他抗癌藥物組成組合物。

實(shí)施例4.ZL-004納米顆粒和其它抗瘤藥物形成的組合物的抑瘤試驗(yàn)

取生長(zhǎng)旺盛期的小鼠S180腹水瘤，無(wú)菌條件下抽取，用生理鹽水按1：5稀釋，按0.2ml/只給小鼠腋皮下接種。次日將小鼠隨機(jī)均分為9組，每組10只。

設(shè)置環(huán)磷酰胺(以下簡(jiǎn)稱CTX)15mg、CTX 15mg-ZL-0045mg、5-氟尿嘧啶(以下簡(jiǎn)稱5-Fu)12.5mg、5-Fu 12.5mg-ZL-0045mg、順鉑1mg、順鉑1mg-ZL-0045mg、ZL-0045mg7個(gè)試驗(yàn)組。

陽(yáng)性對(duì)照組順鉑劑量為2mg/kg。

另設(shè)空白對(duì)照組。

動(dòng)物接種次日開始按體重給藥，0.5ml/20g，連續(xù)給藥9天，接種后第10天處死，取瘤塊稱重，按照以下公式計(jì)算抑瘤率：

給藥方式為：靜脈注射

結(jié)果：實(shí)驗(yàn)期間各組動(dòng)物均未見死亡。

備注：以下表5-7中，i.vx9qd是指靜脈注射，每天一次，連續(xù)9天；

瘤重取值，即平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差；

表5、ZL-004與CTX組合物對(duì)小鼠S180的抑制作用

表6、ZL-004與順鉑組合物對(duì)小鼠S180的抑制作用

表7、ZL-004與5-Fu組合物對(duì)小鼠S180的抑制作用

注：以接種當(dāng)天為第0天；

**表示與Control相比P值＜0.01

根據(jù)計(jì)算協(xié)同作用公式1－(1－a)×(1－b)≤ab；其中：a與b分別指兩個(gè)單一藥物使用后的作用效果，ab指兩個(gè)藥物聯(lián)合使用后的作用效果。若測(cè)得值大于理論值，說(shuō)明有協(xié)同作用。

1－(1－CTX15mg)×(1－ZL-0045mg/kg)×100％＝59.94％＜68.18％

1－(1－5-Fu12.5mg)×(1－ZL-0045mg/kg)×100％＝55.00％＜60.21％

1－(1－順鉑1mg)×(1－ZL-0045mg/kg)×100％＝51.52％＜59.93％

由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得出結(jié)論為：

ZL-004納米顆粒與順鉑、5氟脲嘧啶以及環(huán)磷酰胺形成的組合物，抗腫瘤效果優(yōu)于單一抗腫瘤藥物。

ZL-004納米顆粒在于順鉑、環(huán)磷酰胺等有代表性的細(xì)胞周期非特異性的抗腫瘤藥物和5-氟尿嘧啶等細(xì)胞周期特異性的抗腫瘤藥物都優(yōu)于單一使用抗腫瘤藥物。而且ZL-004有升高外周血白細(xì)胞的作用，對(duì)于化療所產(chǎn)生的白細(xì)胞下降有治療作用。因此，該組合物有一定臨床應(yīng)用意義。

實(shí)施例5、ZL-004急性毒性實(shí)驗(yàn)(KM小鼠LD50的測(cè)定)

取KM小鼠15只,隨機(jī)分為5組，每組3只,單次給予ZL-004口服灌胃，選擇濃度間距較大的一系列劑量，觀察出現(xiàn)的癥狀并記錄死亡數(shù)，直至引出0％死亡率(可縮寫為L(zhǎng)D0)和100％死亡率劑量的所在范圍。類似地，LD50是指50％死亡率的劑量。

ZL-004的參考計(jì)量：LD100為400mg/kg、LD0為80mg/kg，ZL-004的參考計(jì)量：LD100為720mg/kg、LD0為160mg/kg。

在預(yù)試驗(yàn)所獲得的0％和100％致死量的范圍內(nèi)，選擇5個(gè)劑量組，每組20只小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分配。單次給予ZL-001(劑量按1：0.7設(shè)置，即400mg/kg、280mg/kg、196mg/kg、137mg/kg、96mg/kg)ZL-004口服灌胃(劑量按1：0.7設(shè)置，即720mg/kg、504mg/kg、352mg/kg、247mg/kg、173mg/kg)。觀察14天。

ZL-004樣品經(jīng)bliss法計(jì)算出LD50值為356mg/kg，說(shuō)明ZL-004在臨床應(yīng)用方面有較寬的治療窗，在和其他抗癌藥物形成組合物方面有較好的安全性。