本發(fā)明是關(guān)于一種7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的制備方法，特別關(guān)于一種7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的制備方法，其可以提升7,3’,4’-大豆異黃酮的溶解度。

背景技術(shù)：

7,3’,4’-大豆異黃酮(7,3’,4’-trihydroxyisoflavone)的IUPAC命名為3-(3,4-二羥基苯基)-7-羥基苯并吡喃-4-酮(3-(3,4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxychromen-4-one)，其結(jié)構(gòu)如圖1所示。7,3’,4’-大豆異黃酮為一種植物性雌激素，主要來(lái)源為黃豆等植物中，其具有抗氧化、抗發(fā)炎及美白等活性，可以添加于化妝品中，以避免氧化壓力所造成的皮膚老化及水份喪失。

但是，7,3’,4’-大豆異黃酮的水溶解度差，故而難以為皮膚有效吸收，而影響其生理可用率。因此，有必要提供一種7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的制備方法，以改善其水溶解度不良的問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的主要目的是提供一種7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的制備方法，其可以制備一個(gè)7,3’,4’-大豆異黃酮制劑，且該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑相較于7,3’,4’-大豆異黃酮具有較佳的水溶解度。

本發(fā)明提供一種7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的制備方法，包含：提供一個(gè)混合物，包含7,3’,4’-大豆異黃酮與一個(gè)助溶劑，該助溶劑為一個(gè)吡咯烷酮衍生物；及以球磨法研磨該混合物，以制得一個(gè)7,3’,4’-大豆異黃酮制劑，該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的粒徑介于10～1000nm的范 圍。

本發(fā)明的7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的制備方法，其中，該助溶劑為聚乙烯基吡咯烷酮。

本發(fā)明的7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的制備方法，其中，以行星式球磨機(jī)研磨該混合物。

本發(fā)明的7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的制備方法，其中，該混合物包含以重量百分比計(jì)3.3～10％的7,3’,4’-大豆異黃酮及90～96.7％的該助溶劑。

本發(fā)明的7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的制備方法，其中，該混合物包含以重量百分比計(jì)3.3％的7,3’,4’-大豆異黃酮及96.7％的該助溶劑。

本發(fā)明的7,3’,4’-大豆異黃酮制劑制備方法，借助使用該吡咯烷酮衍生物做為該助溶劑，可以通過研磨方式制備具有較小粒徑的該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑。借此，本發(fā)明所制備的該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑是具有良好的水溶性，達(dá)到提升7,3’,4’-大豆異黃酮的生體可用率的功效。

附圖說明

圖1：為7,3’,4’-大豆異黃酮的結(jié)構(gòu)圖。

圖2：為聚乙烯基吡咯烷酮的結(jié)構(gòu)圖。

圖3：為第A1～A3組的平均粒徑分析結(jié)果。

圖4a：為第B1～B6組的西方點(diǎn)墨圖譜。

圖4b：為第B1～B6組的COX-2表現(xiàn)量長(zhǎng)條圖。

圖5a：為第C1～C6組的西方點(diǎn)墨圖譜。

圖5b：為第C1～C6組的COX-2表現(xiàn)量長(zhǎng)條圖。

圖6：為第D1～D6組的DPPH自由基清除率長(zhǎng)條圖。

圖7：為第D1～D6組的清除DPPH自由基半數(shù)有效濃度長(zhǎng)條圖。

具體實(shí)施方式

為讓本發(fā)明的上述及其他目的、特征及優(yōu)點(diǎn)能更明顯易懂，下文特舉本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并配合所附圖式，作詳細(xì)說明如下：

本發(fā)明的7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的制備方法，將7,3’,4’-大豆異黃酮與一個(gè)助溶劑混合，續(xù)以球磨法進(jìn)行研磨，以制備具有良好水溶性的一個(gè)7,3’,4’-大豆異黃酮制劑。

本發(fā)明所述的7,3’,4’-大豆異黃酮可以自大豆等植物中萃取，或者直接購(gòu)買商業(yè)來(lái)源的7,3’,4’-大豆異黃酮，但不以此為限。一般市售的7,3’,4’-大豆異黃酮為粉末狀，且其平均粒徑約為4000～6000nm。

該助溶劑為一個(gè)吡咯烷酮衍生物，指包含吡咯烷酮結(jié)構(gòu)的化合物，可以為單體或聚合物等。借助吡咯烷酮的結(jié)構(gòu)，可以包覆7,3’,4’-大豆異黃酮，并維持其穩(wěn)定性。于本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，該助溶劑為聚乙烯基吡咯烷酮(polyethenylpyrrolidinone)，其結(jié)構(gòu)如圖2所示。借助聚乙烯基吡咯烷酮的聚合結(jié)構(gòu)，可以更進(jìn)一步幫助分散7,3’,4’-大豆異黃酮。

詳言之，本發(fā)明的7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的制備方法先將7,3’,4’-大豆異黃酮及該助溶劑混合以獲得一混合物，續(xù)以球磨機(jī)研磨該混合物，以制得粒徑介于10～1000nm的范圍的該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑。上述球磨機(jī)可以為直線式球磨機(jī)或行星式球磨機(jī)等，本發(fā)明不加以限制。于本實(shí)施例中，以行星式球磨機(jī)進(jìn)行研磨，其所需時(shí)間較短，且研 磨后該混合物的粒徑較為均勻。

由于該助溶劑可以包覆7,3’,4’-大豆異黃酮，以穩(wěn)定該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的結(jié)構(gòu)，其不會(huì)在研磨后再度聚集成為粒徑較大的分子，因此，本發(fā)明的7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的制備方法，可以制備具有較小粒徑的該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑，以提升該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的溶解度，進(jìn)而提升其生體可用率。

為證實(shí)經(jīng)由本發(fā)明的7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的制備方法確實(shí)可以獲得具有較小粒徑的該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑，且該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑相較于7,3’,4’-大豆異黃酮具有較佳水溶性及生體可用率，遂進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。

(A)7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的粒徑測(cè)試

以聚乙烯基吡咯烷酮做為該助溶劑，分別以不同比例混合市售的7,3’,4’-大豆異黃酮(平均粒徑約為4850nm)，以制備第A1～A3組的該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑，各組的添加比例如下第1表所示。本實(shí)驗(yàn)是以RetschGmbh Type:PM100的行星式球磨機(jī)進(jìn)行研磨，設(shè)定轉(zhuǎn)速每分鐘400轉(zhuǎn)，研磨時(shí)間20分鐘。

第1表：第A1～A3組7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的組成

本實(shí)驗(yàn)中，以粒徑分析儀zetasizer 3000Has(Malvern Instruments)。 分別針對(duì)第A1～A3組進(jìn)行三次測(cè)量后，取其平均粒徑記錄如圖3。由上述結(jié)果可以得知，本發(fā)明借助添加該吡咯烷酮衍生物作為該助溶劑，可以經(jīng)由研磨有效降低該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的粒徑，以生成粒徑大小介于10～1000nm之7,3’,4’-大豆異黃酮。

(B)7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的溶解度測(cè)試

精秤1mg未經(jīng)處理的7,3’,4’-大豆異黃酮(第A0組)，及包含等量7,3’,4’-大豆異黃酮的上述第A1～A3組該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑，分別溶解于1ml的純水溶液中，震蕩10分鐘。續(xù)以孔徑為0.45μm的濾膜過濾，并以HPLC分析其7,3’,4’-大豆異黃酮含量，以測(cè)試第A0～A4組的溶解度，記錄結(jié)果如下第2表所示。

第2表：第A0～A3組的水溶解度

由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得知，本發(fā)明的7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的制備方法，確實(shí)可以透過該助溶劑之添加，以研磨方式制備具有較小粒徑的該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑。借此，本發(fā)明制備的該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑具有良好的水溶性。

(C)7,3’,4’-大豆異黃酮制劑的抗發(fā)炎活性測(cè)試

本實(shí)驗(yàn)選用人類HaCaT角質(zhì)細(xì)胞株，以該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑對(duì)該HaCaT細(xì)胞株進(jìn)行前處理1小時(shí)，續(xù)加入50μg/cm²的PM2.5空氣懸浮粒子以誘發(fā)該HaCaT細(xì)胞株的COX-2發(fā)炎蛋白表現(xiàn)，測(cè)試該 7,3’,4’-大豆異黃酮制劑對(duì)于COX-2發(fā)炎蛋白表現(xiàn)的抑制能力。其中，第B1～B6組是以未經(jīng)制程的7,3’,4’-大豆異黃酮作為對(duì)照，而第C1～C6組使用本發(fā)明所制備的7,3’,4’-大豆異黃酮制劑。各組的空氣懸浮粒子及7,3’,4’-大豆異黃酮添加情形如下第3、4表所示。

第3表：第B1～B6組的添加情形

第4表：第C1～C6組的添加情形

本實(shí)驗(yàn)是以西方點(diǎn)墨法檢測(cè)前述各組的COX-2發(fā)炎蛋白表現(xiàn)情形，并以GAPDH作為內(nèi)控制組，其結(jié)果分別如圖4a(第B1～B6組)及圖5a(第C1～C6組)所示，另分別以第B1組及第C1組的COX-2發(fā)炎蛋白表現(xiàn)量作為1，各組的COX-2發(fā)炎蛋白相對(duì)表現(xiàn)量則分別如圖4b(第B1～B6組)及圖5b(第C1～C6組)所示。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得知，PM2.5空氣懸浮粒子的添加可以誘發(fā)該HaCaT細(xì)胞株表現(xiàn) COX-2發(fā)炎蛋白，而前處理本發(fā)明所制備的7,3’,4’-大豆異黃酮制劑則能夠有效預(yù)防COX-2發(fā)炎蛋白的表現(xiàn)，且具有劑量依賴性。

(D)7,3’,4’-大豆異黃酮制劑之DPPH自由基清除率測(cè)試

請(qǐng)參照第5表所示，本實(shí)驗(yàn)則混合不同比例的7,3’,4’-大豆異黃酮及聚乙烯基吡咯烷酮后，分別以球磨及攪拌的方式制備第D1～D6組的該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑。

續(xù)吸取200μM之DPPH溶液125μl，分別混合不同濃度的第D1～D6組7,3’,4’-大豆異黃酮制劑125μl，于室溫下震蕩反應(yīng)30分鐘后，以ELISA reader測(cè)量各組于波長(zhǎng)517nm的吸光值，以換算DPPH自由基清除率，紀(jì)錄結(jié)果如圖6。另計(jì)算各組的清除DPPH自由基半數(shù)有效濃度(SC₅₀)，如圖7所示。

第5表：第D1～D6組的組成及混合方式

依據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得知，本發(fā)明所制備的該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑(第D1～D3組)，相較于僅以攪拌混合的7,3’,4’-大豆異黃酮制劑(第D4～D6組)具有較好的DPPH自由基清除能力。此外，特別是以重量百分比計(jì)3.3％的7,3’,4’-大豆異黃酮混合96.7％的該助溶劑(第D3組)，其清除DPPH自由基的能力最佳。

綜合上述，本發(fā)明的7,3’,4’-大豆異黃酮制劑制備方法，借助使用該吡咯烷酮衍生物做為該助溶劑，可以通過研磨方式制備具有較小粒徑的該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑。借此，本發(fā)明所制備的該7,3’,4’-大豆異黃酮制劑具有良好的水溶性，達(dá)到提升7,3’,4’-大豆異黃酮的生體可用率的功效。

以上僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，不得以此限定本發(fā)明實(shí)施的保護(hù)范圍，因此凡參考本發(fā)明的說明書內(nèi)容所作的簡(jiǎn)單等效變化與修飾，仍屬本發(fā)明的保護(hù)范圍。