本發(fā)明涉及具有抗氧化效果的發(fā)酵植物性油脂組合物，更詳細(xì)地涉及抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物包含發(fā)酵的橄欖油、荷荷巴油、葵花籽油、玫瑰果油、山茶油、葡萄籽油、綠茶油、澳洲堅(jiān)果油及榛果油的抗氧化功能性化妝品組合物。
背景技術(shù)：
：人類(lèi)在地球上生活的期間絕對(duì)需要氧氣，但是，活性氧作為在體內(nèi)中引起強(qiáng)烈的氧化作用的有害氧氣，在生物體中攻擊細(xì)胞膜，使喪失細(xì)胞功能，并攻擊細(xì)胞內(nèi)遺傳基因，還阻止細(xì)胞再生。產(chǎn)生活性氧的原因有環(huán)境污染和化學(xué)物質(zhì)、紫外線(xiàn)、血液循環(huán)障礙、精神壓力等。因此對(duì)這種可抑制引起各種疾病及老化的活性氧的反應(yīng)性的抗氧化物質(zhì)的關(guān)心逐漸增加。包含植物性油脂的脂肪為給人類(lèi)制造能量的重要3大營(yíng)養(yǎng)素中之一。但是，若脂肪在人體內(nèi)不能順利的消化吸收及排出，則帶來(lái)健康及身體功能障礙，并成為引起生活習(xí)慣病的重要原因。當(dāng)脂肪在體內(nèi)進(jìn)行代謝時(shí)，其用于氧燃燒脂肪而分解脂肪，由于通過(guò)這種過(guò)程形成能量，但也形成活性氧。因此需要增進(jìn)植物性油脂脂本身的抗氧化功能，來(lái)最小化植物性油脂脂進(jìn)行代謝時(shí)的活性氧的產(chǎn)生或影響。為了獲取現(xiàn)有通常的植物性油脂，選別植物性油脂的原料后，進(jìn)行清洗及干燥，并通過(guò)在高溫下進(jìn)行烤炙、著油、過(guò)濾、集油及充填的過(guò)程來(lái)形成植物性油脂的生產(chǎn)。一般所謂發(fā)酵油，是指發(fā)酵人參等中藥材，并萃取脂溶性成分來(lái)添加于油中或在油中添加人參等中藥材來(lái)進(jìn)行發(fā)酵。并且，將發(fā)酵魚(yú)類(lèi)或椰子等，來(lái)萃取脂溶性成分的油、油脂種子(大豆、葵花籽、葡萄籽、芝麻等)經(jīng)過(guò)浸漬、發(fā)芽或蒸熟過(guò)程后萃取的油稱(chēng)為發(fā)酵油。在韓國(guó)公開(kāi)特許2012-0076170中公開(kāi)在培養(yǎng)基中培養(yǎng)乳化劑來(lái)制備的化妝品組合物，但目前可以說(shuō)，在大量的油中培養(yǎng)微生物，并進(jìn)行發(fā)酵來(lái)改善結(jié)構(gòu)及功能、香味的技術(shù)微弱，開(kāi)發(fā)通過(guò)改變油的組成，來(lái)可誘導(dǎo)功能的變化及 提高的各種技術(shù)，對(duì)不辜負(fù)開(kāi)發(fā)各種產(chǎn)品的產(chǎn)業(yè)要求非常重要。由此，本發(fā)明人員們?yōu)榱丝朔鲜霈F(xiàn)有技術(shù)問(wèn)題，精心進(jìn)行研究的結(jié)果確認(rèn)這些事項(xiàng)后完成的。上述結(jié)果為，在包含發(fā)酵的橄欖油、荷荷巴油、葵花籽油、玫瑰果油、山茶油、葡萄籽油、綠茶油、澳洲堅(jiān)果油及榛果油的組合物的情況下，具有突出的抗氧化能、優(yōu)秀的乳化活性及乳化穩(wěn)定度，游離脂肪酸的含量顯著增加、使用感及保濕力非常優(yōu)秀?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專(zhuān)利文獻(xiàn)1：韓國(guó)KR10-2012-0076170A技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：由此，本發(fā)明的主要目的在于，提供抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物包含發(fā)酵的橄欖油、荷荷巴油、葵花籽油、玫瑰果油、山茶油、葡萄籽油、綠茶油、澳洲堅(jiān)果油及榛果油，上述發(fā)酵的橄欖油具有抗氧化能突出、乳化活性及乳化穩(wěn)定度優(yōu)秀、游離脂肪酸的含量顯著增加且使用感及保濕力非常優(yōu)秀的效果。本發(fā)明的另一目的在于，提供皮膚外用劑組合物，上述皮膚外用劑包含上述油作為有效成分，上述油利用具有上述抗氧化效果的發(fā)酵植物性油脂組合物。根據(jù)本發(fā)明一實(shí)施方式，本發(fā)明提供抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物包含發(fā)酵的橄欖油、荷荷巴油、葵花籽油、玫瑰果油、山茶油、葡萄籽油、綠茶油、澳洲堅(jiān)果油及榛果油的榛果油。植物性油脂的抗氧化力分類(lèi)為第一抗氧化物質(zhì)(Primaryantioxidant)、活性氧去除物質(zhì)(Oxygenscavenger)、第二抗氧化物質(zhì)(Secondaryantioxidant)、抗氧化酵素(Enzymicantioxidant)和螯合劑(Chelatingagent)等5種類(lèi)別，眾所周知，其中包含較多第一抗氧化物質(zhì)的豆油、棕櫚油及花生油等較為穩(wěn)定，但隨著油化抗氧化力減少。但是，本發(fā)明確認(rèn)下述事項(xiàng)并完成的。與隨著油化植物性油脂抗氧化力減少的情況相反，根據(jù)本發(fā)明的微生物發(fā)酵及植物性油脂組合所制備的油脂的抗氧化力反而更增加。上述植物性油脂意味著可用于制備植物性油脂的任意植物種子或堅(jiān)果類(lèi)， 上述植物性油脂可以是辣椒、香瓜、鱷梨、龜、玉米、貂、蘇子、蓖麻、紅花、梧桐樹(shù)、可可等，為了降低植物性油脂脂的酸價(jià)，滿(mǎn)足上述范圍，為了減少植物性油脂的酸價(jià)并滿(mǎn)足上述范圍，優(yōu)選地，利用混合由橄欖、荷荷巴、葵花籽、玫瑰果、山茶、葡萄籽、綠茶、澳洲堅(jiān)果及榛果來(lái)源的油的物性油脂。橄欖油易被皮膚吸收，給皮膚深處供給營(yíng)養(yǎng)成分和水分，因而皮膚親和力及吸收力強(qiáng)。因包含天然維生素和抗氧化物質(zhì)，從而可維持彈力和健康的皮膚。綠茶油作為由綠茶籽萃取的油，包含大量維生素A、維生素B、維生素C，可減少斑點(diǎn)，雀斑等黑色素的沉著使皮膚清透。并且，包含具有殺菌作用、皮脂調(diào)節(jié)作用的兒茶酚成分，從而緩沖和皮膚煩惱。荷荷巴油作為由荷荷巴果實(shí)以冷壓形式得到的油，其包含營(yíng)養(yǎng)成分多的非精制油和精制油，且化學(xué)結(jié)構(gòu)與皮脂成分相似，因而易浸透于皮膚，進(jìn)而不粘性，并具有皮膚保濕效果、皮膚抗皺/減少效果、遺傳性過(guò)敏癥、皮膚干裂預(yù)防效果、痤瘡鎮(zhèn)定效果等效果?？ㄗ延妥鳛閺目ǚN子采取的油，包含很多維生素A和維生素E，保濕效果好并預(yù)防皮膚老化效果好。作為皮膚鎮(zhèn)定效果突出，不引起痤瘡的油，也適用于油性皮膚，對(duì)角質(zhì)皮膚也有效果。玫瑰果油作為從智利的安第斯山脈的玫瑰樹(shù)種子萃取的油，對(duì)改善及組織再生燙傷、臉上皺紋等的效果突出，益于手術(shù)后的疤痕治療。山茶油作為從山茶樹(shù)的果實(shí)萃取的油，包含豐富的維生素A、維生素B、維生素E等營(yíng)養(yǎng)成分，并抗氧化作用突出而不易變質(zhì)。山茶油無(wú)粘性，并包含很多油酸，因而具有抗氧化作用。并且，山茶油具有乳化劑、保濕劑、收斂功能、鎮(zhèn)定功能。葡萄籽油是通過(guò)壓榨葡萄籽而得，其富含抗氧化劑的維生素E，包含高濃度的亞油酸。其保濕效果突出，滲透于皮膚深處，因而除去毛孔中的排泄物的清洗效果突出。澳洲堅(jiān)果油是從澳洲堅(jiān)果中萃取的油，易滲透于皮膚，無(wú)油光。使皮膚絲 滑并易被皮膚吸收。也被稱(chēng)為“消失(vanishing)”油(因被皮膚吸收后馬上消失)。澳洲堅(jiān)果油中所富含的棕櫚油酸單位(C16:1)，在其他所知的其他何種植物中也找不到。棕櫚油酸從人體，尤其從兒童的皮脂中發(fā)現(xiàn)。隨著年齡增長(zhǎng)，其濃度降低，因而澳洲堅(jiān)果油有益于年紀(jì)大的人的皮膚。具有營(yíng)養(yǎng)成分多，易被皮膚吸收，促進(jìn)血液循環(huán)的作用，從而利用于全身按摩。榛果油作為從榛樹(shù)萃取而得的油，油酸和亞油酸等不飽和脂肪酸的分布相當(dāng)高，易被皮膚吸收。即，根據(jù)本發(fā)明以上述油的組合進(jìn)行發(fā)酵來(lái)制備的發(fā)酵植物性油脂，尤其，可得到優(yōu)選地效果。根據(jù)本發(fā)明的抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物的特征在于，上述發(fā)酵油的含量比分別為60～70:5～10:5～10:5～10:5～10:5～10:5～10:5～10:5～10。對(duì)于上述油組合物的各油的組成比范圍是指，為了使用感、味道、功效而適用于化妝品的最佳的油的組成比，因而在上述范圍內(nèi)表示最佳的效果。根據(jù)本發(fā)明的抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物的特征在于，以上述含量比混合而成的油是用微生物進(jìn)行發(fā)酵。根據(jù)本發(fā)明的抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物的特征在于，上述微生物為擔(dān)子菌綱屬(Pseudozymasp.)，更優(yōu)選地，上述微生物為擔(dān)子菌綱屬SY16(KCTC8950P)。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)例，可以確認(rèn)在用微生物進(jìn)行發(fā)酵前的植物性油脂比用微生物發(fā)酵后的植物性油脂的情況下，進(jìn)而，以規(guī)定比率混合橄欖油、荷荷巴油、葵花籽油、玫瑰果油、山茶油、葡萄籽油、綠茶油、澳洲堅(jiān)果油及榛果油，來(lái)用微生物進(jìn)行發(fā)酵的發(fā)酵植物性油脂的情況下，抗氧化能、乳化活性及乳化穩(wěn)定度高，游離脂肪酸的含量顯著增加，并使用感及保濕力非常優(yōu)秀。從上述結(jié)果可知，在用微生物發(fā)酵植物性油脂的情況下，可得多樣并得到提高的效果(實(shí)驗(yàn)例1至實(shí)驗(yàn)例6)。根據(jù)本發(fā)明的抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合 物的特征在于，上述發(fā)酵油具有抗氧化效果。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)例，可以確認(rèn)在根據(jù)本發(fā)明的油組成制備的發(fā)酵油的情況下，與不按上述組成制備的油相比，自由基消除活性及羥基自由基清除活性更高。從上述結(jié)果可知，本發(fā)明的發(fā)酵植物性油脂通過(guò)消除自由基及羥基自由基，表示突出的抗氧化效果，從而具有可抑制因活性氧的產(chǎn)生所引起的疾病及老化的抗氧化物質(zhì)的效果(實(shí)驗(yàn)例1及實(shí)驗(yàn)例2)。根據(jù)本發(fā)明的抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物的特征在于，上述發(fā)酵油可提高乳化活性、乳化穩(wěn)定性、保濕效果及使用感。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)例，可以確認(rèn)在根據(jù)本發(fā)明的油組成制備的發(fā)酵油的情況下，與不按上述組成所制備的油相比，可提高乳化活性、乳化穩(wěn)定性、保濕效果及使用感。根據(jù)本發(fā)明的抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物的特征在于，上述發(fā)酵油的游離脂肪酸含量與發(fā)酵前相比增加5～140倍。上述游離脂肪酸脂是指，作為脂肪酸甘油酯的未結(jié)合形態(tài)。若游離脂肪酸的含量變高，則粘性減少?gòu)亩岣呤褂酶?，并有效改善使用后光亮亮的?wèn)題。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)例，可以確認(rèn)在根據(jù)本發(fā)明的油組成制備的發(fā)酵油的情況下，與不按上述組成所制備的油相比，具有更高的游離脂肪酸含量。從上述結(jié)果可知，本發(fā)明的發(fā)酵植物性油脂包含高的游離脂肪酸，從而影響對(duì)使用感，進(jìn)而可帶來(lái)好的使用感(實(shí)驗(yàn)例5)。根據(jù)本發(fā)明的抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物的特征在于，相對(duì)于總重量包含10～30重量百分比的上述發(fā)酵油。上述范圍是指，當(dāng)發(fā)酵的油添加于化妝品劑型時(shí)，使用感及功效最好的濃度，在小于10～30重量百分比的濃度中特征有可能不明顯，若大于10～30重量百分比的濃度，則制備時(shí)油的比率過(guò)分上升，從而難以進(jìn)行乳化過(guò)程。根據(jù)本發(fā)明的抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物的特征在于，上述組合物具有選自由潤(rùn)膚液、柔膚水、爽膚水、收斂水、乳液、牛奶乳液、保濕乳液、營(yíng)養(yǎng)乳液、按摩霜、營(yíng)養(yǎng)霜、保濕乳霜、護(hù)手霜、 粉底、精華素、營(yíng)養(yǎng)精華素、面膜、香皂、洗面奶、卸妝乳、潔面霜、潤(rùn)膚露及沐浴露組成的組中的一種劑型。根據(jù)本發(fā)明另一實(shí)施方式，本發(fā)明提供包含上述發(fā)酵油作為有效成分的皮膚外用劑組合物。包含于本發(fā)明的皮膚外用劑或化妝品組合物的成分，除了上述發(fā)酵植物性油脂以外，還包含皮膚外用劑或通常利用于化妝品組合物成分，例如，包含抗氧化劑、穩(wěn)定劑、增溶劑、維生素、顏料及香料之類(lèi)的普通助劑和載體。本發(fā)明的皮膚外用劑或化妝品組合物可由本領(lǐng)域中通常制備的任何劑型制備，例如，可由溶液、懸浮液、乳濁液、糊劑、凝膠、乳霜、乳液、粉、香皂、界面活性劑-包含去污劑、油、粉末粉底、乳濁液粉底，蠟粉底及噴霧等劑型化，但不局限于此。包含于本發(fā)明的皮膚外用劑或化妝品組合物的載體，根據(jù)劑型可利用本領(lǐng)域中通常利用的載體。在本發(fā)明的劑型為軟膏、糊劑、乳霜或凝膠的情況下，作為載體成分可利用動(dòng)物性油、植物性油脂、糊劑、石蠟、淀粉、胺黃樹(shù)膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、硅、膨潤(rùn)土、二氧化硅、滑石或氧化鋅等。在本發(fā)明的劑型為粉或噴霧的情況下，作為載體成分可利用乳糖、滑石、二氧化硅、氫氧化鋁、硅酸鈣或聚酰胺粉，尤其，在劑型為噴霧的情況下，還可包含氯氟烴(chloro-fluoro-hydrocarbons)、丙烷(Propane)/丁烷(butane)或二甲醚(dimethylether)之類(lèi)的推進(jìn)劑。在本發(fā)明的劑型為溶液或乳濁液的情況下，作為載體成分利用溶劑、增溶劑或乳濁化劑，例如，水、乙醇(ethanol)、異丙醇(isopropanol)、碳酸乙酯(ethylcarbonate)、乙酸乙酯(ethylacetate)、苯甲醇(benzylalcohol)、苯甲酸苯甲酯(benzylbenzoate)、丙二醇(propyleneglycol)、1，3-丁基乙二醇(1,3-butylglycol)油、尤其具有棉籽油、花生油、玉米提胚油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油、甘油脂肪族酯、聚乙二醇(polyethyleneglycol)或山梨糖醇酐脂肪酸酯。在本發(fā)明的劑型為懸浮液的情況下，作為載體成分可利用水、乙醇或丙二醇之類(lèi)的液相的稀釋劑、乙氧基化異硬脂醇(ethoxylatedisostearylalcohol)、聚氧乙烯山梨醇酯(polyoxyethylenesorbitolester)及聚氧乙烯山梨醇酯之類(lèi)的懸浮劑、微晶纖維素、甲基氫氧化鋁(aluminummeta-hydroxide)、膨潤(rùn)土，瓊脂或胺黃樹(shù)膠等。在本發(fā)明的劑型為含有界面-活性劑的潔面霜的情況下，作為載體成分可利用脂肪醇硫酸鹽(fattyalcoholsulfate)、脂肪醇醚硫酸鹽(fattyalcoholethersulfate)、磺基琥珀酸單酯(sulfosuccineicacidmonoester)、羥乙基磺酸鹽(isethionate)、咪唑啉(imidazole)衍生物、甲基?；撬猁}(methyltaurate)、肌氨酸鹽(sarcosinate)、脂肪酸酰胺醚硫酸鹽(fattyacidamideethersulfate)、烷基酰胺甜菜堿(alkylamidobetaine)、脂肪醇(脂肪醇)、脂肪酸甘油酯(fattyacidglycerides)、脂肪酸二乙醇酰胺(fattyaciddiethanolamide)、植物性油脂、羊毛脂衍生物或乙氧基化甘油脂肪酸酯(ethoxylatedglycerolfattyacidesters)等。在本發(fā)明的劑型為香皂的情況下，作為載體成分可利用脂肪酸的堿性金屬鹽、脂肪酸半酯鹽、脂肪酸蛋白質(zhì)水解物、羥乙基磺酸鹽、羊毛脂衍生物、脂肪醇、植物性油脂、甘油、糖等。進(jìn)而，本發(fā)明的化妝品組合物除了載體之外，還可包含其他助劑，例如，本發(fā)明的化妝品組合物可包含保鮮劑、抗氧化劑、穩(wěn)定劑、增溶劑、維生素、顏料及香料等。以下，按步驟詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的發(fā)酵植物性油脂的制備方法。通過(guò)以下制備方法制備本發(fā)明的發(fā)酵植物性油脂。本發(fā)明提供發(fā)酵植物性油脂的制備方法，上述發(fā)酵植物性油脂的制備方法包括：第一次發(fā)酵步驟(a)，在好氣條件下，培養(yǎng)液中培養(yǎng)擔(dān)子菌綱屬微生物；第二次發(fā)酵步驟(b)，在上述植物性油脂中添加分別從橄欖、荷荷巴、葵花、玫瑰果、山茶、葡萄籽、綠茶、澳洲堅(jiān)果及榛果來(lái)源的油形成油，并進(jìn)行培養(yǎng)；以及從完成上述第二次發(fā)酵過(guò)程的發(fā)酵液中榨油植物性油脂步驟(c)。首先，在好氣條件下，培養(yǎng)液中培養(yǎng)擔(dān)子菌綱屬微生物，來(lái)進(jìn)行第一次發(fā)酵(a)。本發(fā)明的發(fā)酵植物性油脂的特征在于，用微生物進(jìn)行發(fā)酵。其中，優(yōu)選地，上述微生物為擔(dān)子菌綱屬SY16(KCTC8950P)，上述擔(dān)子菌綱屬SY16(KCTC8950P)呈圓筒形狀，并以極性發(fā)芽形式進(jìn)行增殖，且形成與菌絲及子囊孢子區(qū)別的分生孢子。發(fā)酵/培養(yǎng)典型的可在(脂質(zhì)，一般為水性)包含培養(yǎng)基的適當(dāng)?shù)陌l(fā)酵槽(或發(fā)酵容器)中進(jìn)行。主要發(fā)酵容器一般從小原料槽進(jìn)行無(wú)菌接種。典型的，利用液內(nèi)和/或好氧性發(fā)酵工序。其在深的發(fā)酵槽中進(jìn)行。發(fā)酵槽可具有監(jiān)視pH和/或用于進(jìn)行變換的裝置。容器可由以使還可執(zhí)行混合通氣和/或溶液的攪拌之類(lèi)的細(xì)胞及脂質(zhì)的方式組成，或執(zhí)行。例如，可利用機(jī)械方法來(lái)解決。為了幫助促進(jìn)通氣，培養(yǎng)基在發(fā)酵期間進(jìn)行典型的攪拌。水溶液及細(xì)胞進(jìn)行適當(dāng)?shù)幕旌匣驍嚢?。例如，使空氣之?lèi)的氣體經(jīng)過(guò)通氣，從而急性通氣。其還可幫助向菌類(lèi)細(xì)胞提供氧氣的目的。由此，本發(fā)明中的發(fā)酵在好氣條件下來(lái)完成。攪拌或混合的另一方法，例如，包括使用葉輪進(jìn)行攪拌。其可以為翼型軸流(hydrofoilaxial)流動(dòng)設(shè)計(jì)或從水性培養(yǎng)基(如渦輪)以放射狀向外部的方式設(shè)計(jì)。優(yōu)選地，在不進(jìn)行攪拌的情況下，進(jìn)行發(fā)酵期間向微生物細(xì)胞提供氧氣，這種通氣(例如，通氣空氣，氧氣或含有其他氧氣的氣體)有利。通氣為0.1至2.0vvm，例如，通氣可為0.5至1.0vvm。接著，在完成第一次發(fā)酵的培養(yǎng)液中添加植物性油脂，來(lái)進(jìn)行第二次發(fā)酵。在本發(fā)明的化妝品組合物的特征在于，上述發(fā)酵植物性油脂利用包含酸價(jià)為0.1～1.0的植物性油脂的培養(yǎng)基，用上述微生物發(fā)酵來(lái)進(jìn)行發(fā)酵。幾乎不存在酸價(jià)小于0.1的植物性油脂，在上述酸價(jià)大于1.0的情況下，存在發(fā)酵效率降低的問(wèn)題。其中，用于培養(yǎng)基，來(lái)進(jìn)行發(fā)酵的植物性油脂的酸價(jià)越低發(fā)酵效率越高，上述酸價(jià)優(yōu)選為0.1～0.7范圍。在步驟(b)中，相對(duì)于100重量百分比的培養(yǎng)液，可投入50～150重量百分比的植物性油脂。上述植物性油脂可根據(jù)發(fā)酵植物性油脂的目標(biāo)量可適當(dāng)調(diào)節(jié)，但是，若相對(duì)于100重量百分比的培養(yǎng)液投入大于150重量百分比的植物性油脂，則油有可能不充分地進(jìn)行發(fā)酵。在本發(fā)明中，上述第一次發(fā)酵可在30～40℃溫度條件下，進(jìn)行36～60小時(shí)的發(fā)酵。培養(yǎng)液使用普通的生產(chǎn)培養(yǎng)基，第一次發(fā)酵時(shí)間為24～72小時(shí)，優(yōu)選地，第一次發(fā)酵時(shí)間可以為30～60小時(shí)。在上述范圍內(nèi)，脂肪酶的活性最高。其中，第二次發(fā)酵可在30～40℃條件下，進(jìn)行48～96小時(shí)的發(fā)酵。由于隨著進(jìn)行第二次發(fā)酵，需要確保以使游離脂肪酸出現(xiàn)最大程度的時(shí)間。并且，上述時(shí)間根據(jù)植物性油脂的種類(lèi)不同，因而測(cè)定游離脂肪酸的隨時(shí)間的增加量，進(jìn)而當(dāng)?shù)竭_(dá)游離脂肪酸不再增加的時(shí)間時(shí)，可結(jié)束第二次發(fā)酵。最后，(c)從完成上述第二次發(fā)酵的發(fā)酵液榨油植物性油脂，并回收?；厥辗椒](méi)有特別的限制，可在高溫及高壓條件下進(jìn)行，優(yōu)選地，在不發(fā)生苯并芘(benzopyrene)或植物性脂肪的變形程度的低溫下進(jìn)行為優(yōu)選，可根據(jù)上述發(fā)酵的種子或堅(jiān)果類(lèi)的種類(lèi)而不同。例如，上述榨油溫度可以為約70～150℃，優(yōu)選地，上述榨油溫度可以為90～105℃，更有選地，上述榨油溫度可以為約95～100℃?？赏ㄟ^(guò)進(jìn)行過(guò)濾及集油過(guò)程來(lái)回收上述榨油的油。被回收的植物性油脂作為已完成發(fā)酵的，可利用于皮膚外用劑或化妝品組合物的有效成分。根據(jù)本發(fā)明的發(fā)酵植物性油脂的抗氧化能突出，乳化活性及乳化穩(wěn)定度優(yōu)秀，游離脂肪酸的含量明顯增加，并使用感及保濕力非常優(yōu)秀。附圖說(shuō)明圖1為表示本發(fā)明一實(shí)施例油的乳化穩(wěn)定度。圖2作為測(cè)定細(xì)胞增殖及毒性對(duì)人成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的影響的結(jié)果，表示發(fā)明一實(shí)施例的細(xì)胞存活率。具體實(shí)施方式以下，通過(guò)實(shí)施例更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明。但以下實(shí)施例只用于例本發(fā)明，本發(fā)明的發(fā)明要求保護(hù)范圍不局限于這些實(shí)施例。實(shí)施例1：利用微生物制備發(fā)酵油1)第一次發(fā)酵1L的培養(yǎng)液(10g/L的葡萄糖、100g/L的橄欖油、3g/L的酵母抽提物(yeastextract)、3g/L的麥芽膏(maltextract)、3g/L的蛋白胨(peptone)、3g/L 的大豆粉(soyabeanmeal)、2g/L的(NH42SO4，1g/L的KH2PO4、0.5g/L的MgSO4、0.1g/L的CaCl2、0.1g/L的NaCl：上述組成4的培養(yǎng)基)中接種擔(dān)子菌綱屬SY16[KCTC8950P]，并在25℃溫度、300rpm、好氣條件進(jìn)行了培養(yǎng)。進(jìn)行培養(yǎng)后，分別在每個(gè)時(shí)間段(3、7、12、24、48、72、96h)取1ml的培養(yǎng)液，并利用分光光度計(jì)在660nm下測(cè)定了微生物的成長(zhǎng)度及脂肪酶的活性。測(cè)定脂肪酶活性的結(jié)果，確認(rèn)脂肪酶活性最高的第一次發(fā)酵時(shí)間為48小時(shí)。2)第二次發(fā)酵及發(fā)酵油的生產(chǎn)在100L的如上所述的培養(yǎng)液中接種擔(dān)子菌綱屬SY16[KCTC8950P]來(lái)進(jìn)行48小時(shí)的第一次發(fā)酵，并在上述第一次發(fā)酵液中添加100L的植物性油脂(發(fā)酵植物性油脂)，并在25℃、500rpm、好氣條件下進(jìn)行第二次發(fā)酵，上述植物性油脂為分別從橄欖、荷荷巴、葵花、玫瑰果、山茶、葡萄籽、綠茶、澳洲堅(jiān)果及榛果來(lái)源的油的含量比(v/v)為60:5:5:5:5:5:5:5:5的植物性油脂。進(jìn)行第二次發(fā)酵后，分別在各時(shí)間段(3、7、12、24、48、72、96、120h)取0.3～0.5L的發(fā)酵液，并只回收油部分。通過(guò)測(cè)定回收的油的游離脂肪酸，來(lái)確認(rèn)了油的發(fā)酵程度。測(cè)定游離脂肪酸增加量的結(jié)果，確認(rèn)添加油之后在培養(yǎng)72小時(shí)時(shí)中游離脂肪酸的量最大，之后不再增加。比較例1：未進(jìn)行發(fā)酵的植物性油脂的制備不進(jìn)行第一次發(fā)酵及第二次發(fā)酵，以分別從橄欖、荷荷巴、葵花、玫瑰果、山茶、葡萄籽、綠茶、澳洲堅(jiān)果及榛果來(lái)源的油的含量比(v/v)為60:5:5:5:5:5:5:5:5的植物性油脂為比較例1。比較例2：發(fā)酵橄欖油的制備使用橄欖油成分為100％的植物性油脂，以與實(shí)施例1相同的方法制備了發(fā)酵橄欖油。比較例3：根據(jù)油的組成變化的發(fā)酵油制備使用橄欖油和綠茶油的含量比為60:40的植物性油脂，以與實(shí)施例1相同的方法制備了發(fā)酵油。比較例4：根據(jù)油組成變化的發(fā)酵油的制備使用以60:10:10:10:10的含量比混合橄欖油、綠茶油、荷荷巴油、山茶油、 葡萄籽油的油，以與實(shí)施例1相同的方法制備發(fā)酵油。實(shí)驗(yàn)例1：抗氧化能的評(píng)價(jià)利用1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH，1，1-diphenyl1-2-picry1hydrazy1)法與比較例1至比較例4的油一同試驗(yàn)了實(shí)施例1的油的抗氧化能?？寡趸茉u(píng)價(jià)為了測(cè)定自由基(freeradical)消除活性，利用了1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(1，1-diphenyl1-2-picry1hydrazy1)。即，2.4mL的4.0×10-4M1，1-二苯基-2-三硝基苯肼溶液中，分別添加0.6mL的實(shí)施例1、參考例1至參考例4的油之后，利用漩渦混合器振蕩10秒鐘，并在常溫下放置30分鐘，接著，在517nm下測(cè)定吸光度，并以對(duì)于對(duì)比組的吸光度的減少比率來(lái)表示抗氧化活性度。此時(shí)，用于決定吸光度減少比率的對(duì)比組使用了抗氧化劑的抗壞血酸(ascorbicacid)，并添加與試料相同含量的抗壞血酸，以相同的方法進(jìn)行測(cè)定后，并表示在下列表一中。表1其結(jié)果，如上述表1所示，可以確認(rèn)，在根據(jù)本發(fā)明的油組成制備的發(fā)酵油的情況下，與其他比較例的植物性油脂相比具有更突出的抗氧化能效果。實(shí)驗(yàn)例2：羥基(hydroxylradical)消除能評(píng)價(jià)在本實(shí)驗(yàn)例6中，為了測(cè)定上述實(shí)施例的抗氧化活性，而測(cè)定了羥基(hydroxylradical)消除能。在3mL的0.02M磷酸鹽緩沖液(Potassiumphosphatebuffer)(pH7.0)中，依次加入用于基質(zhì)的0.5mL的亞油酸(Linoleicacid)、各個(gè)稀釋的0.5mL的各稀釋的試料、0.5mL的0.1mMFeSO4·7H2O、0.5mL的100mMH2O2，來(lái)均勻地混合后，在37℃溫度下，反應(yīng)1小時(shí)。此時(shí)，對(duì)比組使用蒸餾水來(lái)替代試料添加而進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，在上述反應(yīng)液中分別添加1mL的2.8％三氯乙酸鈉(TCA，Trichloroaceticacid)和1mL的1％硫代巴比妥酸(TBA，Thiobarbituricacid)，并在100℃溫度的開(kāi)水中反應(yīng)10分鐘。上 述反應(yīng)液進(jìn)行冷卻后，在2000rpm中，離心分離10分鐘，接著，在532nm中測(cè)定了吸光度。各試料的羥基消除能，通過(guò)以下計(jì)算式算出了各試料的羥基消除能，羥基消除能抑制50％的濃度用IC50表示出。作為比較組使用阿爾法麥胚酚。其結(jié)果在表2中示出。公式1羥基消除能(％)＝100－{(試料吸光度－試料blank吸光度)}/(control吸光度)}×100表2其結(jié)果，如表2所示，可以確認(rèn)，在根據(jù)本發(fā)明的油組成制備的發(fā)酵油的情況下，表示與對(duì)比組相似水平的羥基消除能，并且，與其他外比較例的植物性油脂相比具有更加突出的羥基消除能效果。實(shí)驗(yàn)例3：乳化活性及乳化穩(wěn)定度評(píng)價(jià)乳化穩(wěn)定度是指，形成乳化物后，或在混合、高溫、離心分離等條件下，穩(wěn)定化乳化物的乳化劑的能力(ability)。為了測(cè)定乳化活性，在10ml的根據(jù)pH的各個(gè)緩沖液(buffer)中溶解1ml的實(shí)施例1的油和比較例1至比較例4的油后，進(jìn)行完全攪拌2分鐘來(lái)乳化。之后，放置10分鐘后，在620nm中測(cè)定吸光度，從而測(cè)定了乳化活性，相對(duì)于初期吸光度，經(jīng)過(guò)24小時(shí)后的吸光度百分率來(lái)算出乳化穩(wěn)定度。在下列表3中表示了對(duì)于實(shí)施例1及比較例1至比較例4的油的pH的乳化活性。表3緩沖液pH實(shí)施例1比較例1比較例2比較例3比較例45.02.9720.5312.6332.6872.7027.03.0260.5272.8002.7532.7899.04.5011.6134.2154.2074.234其結(jié)果，如上述表3所示，可以確認(rèn)實(shí)施例1的油在pH5～pH9的范圍內(nèi)乳化活性最為優(yōu)秀，尤其，在pH5、pH7中與比較例1的油相比，高5倍以上，與比較例2至比較例4相比約高10％。在下列表4中表示了根據(jù)發(fā)酵前后的油的種類(lèi)的乳化活性。表4緩沖液pH7.0發(fā)酵前(O.D)發(fā)酵后(O.D)比較例20.5172.800比較例30.6802.729實(shí)施例10.5143.026其結(jié)果，如上述表4所示，可以確認(rèn)，發(fā)酵后的植物性油脂的乳化活性與發(fā)酵前的乳化活性相比高約5倍，由此可知乳化力越好，實(shí)施例1的油與發(fā)酵橄欖油的比較例2和混合橄欖和綠茶油來(lái)進(jìn)行發(fā)酵的比較例3相比乳化力上升了10％以上。在圖1中表示了對(duì)于實(shí)施例1的油的乳化穩(wěn)定度的結(jié)果。實(shí)施例1的油在經(jīng)過(guò)24小時(shí)之后也表現(xiàn)優(yōu)秀的乳化穩(wěn)定度。實(shí)驗(yàn)例4：官能評(píng)價(jià)對(duì)于上述實(shí)施例1及比較例1至比較例4的油進(jìn)行了皮膚觸感(保濕感、粘性、油光等)等各項(xiàng)目的官能評(píng)價(jià)。以男女各24名，總48名的經(jīng)過(guò)訓(xùn)練的檢查員為對(duì)象，對(duì)關(guān)于使用上述油的使用感的項(xiàng)目進(jìn)行了記號(hào)檢查并求出其平均(以5為標(biāo)準(zhǔn)？，1：非常不好、2：不好、3：普通、4：好、5：非常好)。在下列表5中表示了其結(jié)果。表5評(píng)價(jià)項(xiàng)目實(shí)施例1比較例1比較例2比較例3比較例4保濕感3.82.23.53.23.3粘性4.32.44.03.94.0油光3.81.43.33.53.5其結(jié)果，如上述表5所示，可以確認(rèn)，與發(fā)酵前相比，發(fā)酵后保濕感好、油光少、無(wú)粘性，尤其，實(shí)施例1的油在保濕感、粘性、油光的皮膚使用感的所有項(xiàng)目中優(yōu)秀于使用比較例的油的情況。實(shí)驗(yàn)例5：游離脂肪酸的測(cè)定評(píng)價(jià)酸價(jià)是指作為脂肪酸的甘油酯，測(cè)定以未結(jié)合形態(tài)的存在的游離脂肪酸的量。利用萬(wàn)通(metrohm)公司的自動(dòng)電位滴定儀(Titrino)測(cè)定了用于確認(rèn)第一游離脂肪酸有無(wú)變化的酸價(jià)。以使滴定液(KOH0.05mol/L)的滴至預(yù)想消費(fèi)量的1～10ml之間，并投入對(duì)應(yīng)于上述滴定液的試料。使試料的性狀均勻，并投入50ml的補(bǔ)助溶液(甲醇:蒸餾水＝3:1)。選擇設(shè)備的MET模式，并選擇測(cè)定值中U(電壓)，加載METU模式，電極和滴定管頭置于燒杯中后，開(kāi)始進(jìn)行試驗(yàn)。若確認(rèn)當(dāng)量點(diǎn)，則終止實(shí)驗(yàn)。在未投入試料的狀態(tài)下，以同一方法進(jìn)行實(shí)施并算出了空試驗(yàn)值。用于測(cè)定比較各個(gè)油的游離脂肪酸含量的酸價(jià)的第二測(cè)定利用了韓國(guó)食品標(biāo)準(zhǔn)法典中的酸價(jià)實(shí)驗(yàn)法。精確測(cè)定5～10g的油放入帶蓋的錐形瓶中，并加入100mL的中性乙醇-醚混合液(1:2)來(lái)溶解后，以酚酞(phenolphthalein)試液作為指示液，用0.1N氫氧化鉀(potassiumhydroxide)溶液滴定至持續(xù)30秒淺紅色為止。通過(guò)以下公式2計(jì)算酸價(jià)。在實(shí)施例1的油的發(fā)酵過(guò)程中，為了比較游離脂肪酸含量而測(cè)定了酸價(jià)，并在下列表6中表示了其結(jié)果。公式2酸價(jià)＝5.611×a×f/SS：檢體的采取量(g)、a：0.1N氫氧化鉀溶液的消費(fèi)量(mL)、f：0.1N氫氧化鉀溶液滴定量。表6發(fā)酵前(O.D)發(fā)酵后(O.D)比較例20.3539.54比較例30.4535.59實(shí)施例10.4444.01其結(jié)果，如上述表6所示，所有油與發(fā)酵前相比游離脂肪酸含量增加了約50～140倍以上，尤其，實(shí)施例1油的酸價(jià)最高。并從上述結(jié)果可知，實(shí)施例1的油通過(guò)發(fā)酵工序，游離脂肪酸的含量變高，因而粘性減少、使用感提高，并對(duì)使用后的改善油光有效。實(shí)驗(yàn)例6：對(duì)人成纖維細(xì)胞(HumanDermalFibroblastNeonatal)的增殖產(chǎn)生影響的效果驗(yàn)證在培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞中，處理不同濃度的實(shí)施例1的油后，比較細(xì)胞生存率，來(lái)驗(yàn)證了發(fā)酵工序?qū)?xì)胞的增殖及毒性產(chǎn)生的影響。3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽(MTT，3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliumbromide)物質(zhì)吸收于細(xì)胞內(nèi)，在線(xiàn)粒體(mitochondria)內(nèi)通過(guò)琥珀酸脫氫酶(succinatedehydrogenase)形成甲簪(formazan)，但在細(xì)胞內(nèi)積累其物質(zhì)是指線(xiàn)粒體的活性，廣泛的是指細(xì)胞的活性，因而可進(jìn)行細(xì)胞的增殖及毒性評(píng)價(jià)。在96孔板(wellplate)中培養(yǎng)的細(xì)胞中，處理0.5％～0.0019％濃度的實(shí)施例1的油后，在5％CO2、37℃溫度的培養(yǎng)器中培養(yǎng)48小時(shí)。用3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽溶液中反應(yīng)3～4小時(shí)，接著利用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定儀(ELISA，enzymelinkedimmunosorbentassay)在540nm中測(cè)定了O.D值。在以下公式中表示了算出細(xì)胞生存率的公式。公式3細(xì)胞生存率(％)＝(試料添加組的O.Dat540nm)/無(wú)試料添加組的O.Dat540nm)×100在圖2中表示了發(fā)酵前植物性油脂(比較例1)與添加發(fā)酵植物性油脂(實(shí)施例1)來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。試驗(yàn)結(jié)果，當(dāng)比較發(fā)酵后的植物性油脂處理組與發(fā)酵前的植物性油脂的處理組的細(xì)胞生存率時(shí)，發(fā)酵后油處理組的生存率更高。從以上結(jié)果，可以確認(rèn)，即使油經(jīng)過(guò)發(fā)酵過(guò)程，也對(duì)細(xì)胞的增殖及毒性不產(chǎn)生影響。劑型例1：外用乳霜?jiǎng)┮韵铝斜?的組成劑型化外用乳霜?jiǎng)Ｊ紫?，在純化水中加入保濕劑，? 熱調(diào)整至70℃溫度、并進(jìn)行調(diào)整來(lái)制備了水相。加熱溶解實(shí)施例1的油及其余的油成分后，加入乳化劑、防腐劑等，并調(diào)整至70℃溫度。將其加入上述水相中，并利用攪拌機(jī)均勻化乳化粒子，接著進(jìn)行了脫泡、過(guò)濾、冷卻。表7劑型例2：外用乳液劑的組成以下列表8的組成劑型化用乳液劑。首先，在純化水中加入保濕劑，加熱至70℃，并進(jìn)行調(diào)整來(lái)制備了水相。加熱溶解實(shí)施例1的油及其余的油成分后，加入乳化劑、防腐劑等，并調(diào)整為70℃溫度。將其加入上述水相中，并利用攪拌機(jī)進(jìn)行乳化攪后，添加透明質(zhì)酸1水溶液，并利用攪拌機(jī)混合均勻，接著進(jìn)行了脫泡、過(guò)濾、冷卻。表8以上對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)行了說(shuō)明，但本發(fā)明并不局限于上述實(shí)施例，能夠以各種相互不同的方式制備，本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能夠理解本發(fā)明在不變更技術(shù)思想或必要的特征的情況下，能夠以其他具體的形態(tài)實(shí)施。因此，應(yīng)理解為以上記載的實(shí)施例在所有方面僅是例示性的，而非限定。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3