本發(fā)明是有關(guān)于使用異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(isorhamnetin-3-O-β-D-glucoside)來(lái)治療和/或預(yù)防輻射損傷(radiationinjury)。
背景技術(shù)：
：：輻射(radiation)是指能量以波(waves)或粒子(particles)的形式穿越空間(space)或一物質(zhì)介質(zhì)(materialmedium)來(lái)發(fā)射或傳遞。一般而言，輻射可被分類為：(1)游離輻射(ionizingradiation)，它是帶有高能量并且能夠?qū)⒃?atoms)或分子(molecules)游離化的電磁波(electromagneticwaves)[諸如X射線(Xray)以及伽瑪射線(gammaray)]或粒子[諸如α粒子(alphaparticle)、β粒子(betaparticle)以及中子(neutron)]；以及(2)非游離輻射(non-ionizingradiation)，它是帶有較低能量并且無(wú)法將原子或分子游離化的電磁波[諸如可見(jiàn)光(visiblelight)、紅外線(infrared)、紫外線(ultraviolet,UV)以及微波(microwave)]。當(dāng)生物體暴露于輻射時(shí)會(huì)造成DNA損傷(DNAdamage)，進(jìn)而產(chǎn)生基因突變(genemutation)以及誘發(fā)細(xì)胞凋亡(apoptosis)與細(xì)胞死亡(celldeath)，最后導(dǎo)致輻射損傷(radiationinjury)[包括游離輻射損傷(ionizingradiationinjury)以及非游離輻射損傷(non-ionizingradiationinjury)]。游離輻射損傷可依據(jù)輻射暴露的程度(degreeofradiationexposure)而被區(qū)分為：(1)急性輻射癥候群(acuteradiationsyndrome,ARS)[又被稱為輻射中毒(radiationpoisoning)以及輻射病(radiationsickness)]，它是由于人類個(gè)體的全身(wholebody)暴露于游離輻射下歷時(shí)一短時(shí)間(例如，24小時(shí))所引起，它的癥狀可被區(qū)分為下面3大類：與造血系統(tǒng)(hematopoieticsystem)有關(guān)聯(lián)的癥狀[例如再生不良性貧血(aplasticanemia)]、與胃腸系統(tǒng)(gastrointestinalsystem)有關(guān)聯(lián)的癥狀[例如惡心(nausea)以及嘔吐(vomiting)]以及與神經(jīng)血管系統(tǒng)(neurovascularsystem)有關(guān)聯(lián)的癥狀[例如暈眩(dizziness)]；(2)慢性輻射癥候群(chronicradiationsyndrome,CRS)，它是由于人類個(gè)體的全身暴露于游離輻射下歷時(shí)一長(zhǎng)時(shí)間(例如，數(shù)個(gè)月或數(shù)年)所引起，它的癥狀包括皮膚萎縮(skinatrophy)、白內(nèi)障(cataract)以及不孕(sterility)等；以及(3)輻射治療的副作用(sideeffectofradiationtherapy)，它是由于人類個(gè)體的特定部位(specificpart)暴露于游離輻射下所引起，它的癥狀包括厭食(anorexia)、疲憊(lassitude)、腹瀉(diarrhea)、紅斑(erythema)、脫屑(desquamation)、腸狹窄(bowelstenosis)、骨的壞死(necrosisofbone)以及肺的纖維化(fibrosisoflung)等。目前臨床上用于治療和/或預(yù)防輻射損傷的輻射防護(hù)劑(radioprotectiveagent)包括：自由基清除劑(freeradicalscavenger)[例如觸酶(catalase)]、抗氧化劑(antioxidant)(例如維生素E)、細(xì)胞激素(cytokine)[例如介白素-1(interleukin-1)]、硫醇(thiol)[例如阿米福汀(Amifostine)]以及類固醇(steroid)[例如5-雄甾烯二醇(5-Androstenediol)]，其中阿米福汀是唯一經(jīng)由美國(guó)食品暨藥 物管理局(FoodandDrugAdministration,FDA)所認(rèn)可的輻射防護(hù)劑。雖然阿米福汀能夠有效地保護(hù)組織對(duì)抗輻射損傷，但是它會(huì)對(duì)使用者產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用(sideeffect)[諸如惡心(nausea)、嘔吐(vomiting)以及低血壓(hypotension)]。因此，本領(lǐng)域的相關(guān)研究人員嘗試從傳統(tǒng)中藥(traditionalChinesemedicines,TCM)中來(lái)尋找可供用于治療和/或預(yù)防輻射損傷的活性組分(activecomponent)。沙棘(拉丁學(xué)名：HippophaerhamnoidesL.；英文俗名：sea-buckthorn；漢語(yǔ)拼音：shaji；中文別名：醋柳果或酸刺)是胡頹子科(Elaeagnaceae)沙棘屬(Hippophae)的落葉灌木，產(chǎn)區(qū)主要分布于中國(guó)河北、山西、陜西、甘肅以及青海等地區(qū)。已有研究指出，沙棘可被用來(lái)治療肝損傷(liverinjury)、胃潰瘍(gastriculcer)以及腫瘤(tumor)等(ChengT.J.(1992),ZhonghuaYuFangYiXueZaZhi,26:227-229；XingJ.etal.(2002),Fitoterapia,73:644-650；YasukawaK.etal.(2009),Fitoterapia,80:164-167)。近年來(lái)，有關(guān)于沙棘的萃取物在輻射防護(hù)(radioprotection)方面的研究已開(kāi)始受到關(guān)注。例如，在ChawlaR.etal.(2007),J.Med.Food,10:101-109中，ChawlaR.等人將經(jīng)干燥并且經(jīng)粉末化的沙棘的漿果以乙醇(ethanol)來(lái)進(jìn)行萃取，然后進(jìn)行過(guò)濾以及濃縮，接著將所獲得的乙醇萃取物以己烷(hexane)以及乙醚(ether)來(lái)清洗俾以移除非極性區(qū)分物(nonpolarfraction)，繼而借由使用一含有乙酸乙酯(ethylacetate)以及甲醇(methanol)[它們的相對(duì)比例是2：3(v/v)]的硅膠床(bedofsilicagel)來(lái)對(duì)殘余的區(qū)分物進(jìn)行純化。然后，借由使用一含有弱極性聚合型吸附樹(shù)脂(weaklypolarpolymericadsorbentresin)的管柱來(lái)對(duì)所獲得的部分純化的區(qū)分物進(jìn)行第二次 純化，接而以20-80％乙醇來(lái)進(jìn)行洗提而得到經(jīng)區(qū)分的萃取物(fractionatedextracts)。之后，將所收集到的經(jīng)區(qū)分的萃取物進(jìn)行合并(pooling)以及濃縮，借此而得到一富含類黃酮的區(qū)分物(flavonoid-richfraction)(它被命名為REC-1001)。接著，REC-1001經(jīng)由高效能液相層析(highperformanceliquidchromatography,HPLC)分析而被發(fā)現(xiàn)具有堪非黃酮醇(kaempferol)、異鼠李素以及槲皮素(quercetin)等成分。REC-1001進(jìn)一步被拿來(lái)進(jìn)行生物活性分析，而實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)它具有抗氧化、清除自由基以及輻射防護(hù)的活性。ChawlaR.等人據(jù)此而認(rèn)為：REC-1001所含有的堪非黃酮醇、異鼠李素以及槲皮素賦予它具有這些生物活性，因此可以作為一種安全且有效的抗氧化營(yíng)養(yǎng)品(antioxidantnutraceuticalproduct)。異鼠李素(isorhamnetin)是一種存在于藥用植物[諸如戟葉蓼(Persicariathunbergii)、沙棘(HippophaerhamnoidesL.)以及蕓苔(BrassicacampestrisL.)]中的類黃酮(flavonoid)，它具有下列化學(xué)式(I)：目前已知異鼠李素具有預(yù)防內(nèi)皮細(xì)胞損傷(endothelialcellinjury)、抗-腫瘤(anti-tumor)、抗-脂肪生成(anti-adipogenesis)以及治療腸炎(enteritis)的效用(BaoM.andLouY.(2006),Eur.J.Pharmacol.,547:22-30；TengB.S.etal.(2006),Pharmacol.Res.,54:186-194； LeeJ.etal.(2010),LifeSci.,86:416-423；CN103462957A)。異鼠李素醣苷(isorhamnetinglycosides)是異鼠李素的一種衍生物。常見(jiàn)的異鼠李素醣苷包括異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(isorhamnetin-3-O-β-D-glucoside)、異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷(isorhamnetin-3-O-β-D-rutinoside)以及異鼠李素-3-O-半乳糖苷(isorhamnetin-3-O-galactoside)等。異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷可從沙棘、彎子木(Cochlospermumreligiosum)以及蕓苔中被分離出，它是一種具有下列化學(xué)式(II)的類黃酮葡萄糖苷(flavonoidalglucoside)：已有研究指出，異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷具有治療腫瘤與糖尿病、預(yù)防肝損傷以及延緩硒性白內(nèi)障(selenitecataract)的效用(CN1518986A；LeeY.S.etal.(2005),Biol.PharmBull.,28:916-918；IgarashiK.etal.(2008),Biosci.Biotechnol.Biochem.,72:856-860；DeviV.G.etal.(2010),ToxicolInVitro.,24:1662-1669)。就申請(qǐng)人所知，迄今尚無(wú)任何文獻(xiàn)或?qū)＠暾?qǐng)?jiān)?jīng)揭示異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷可被用來(lái)治療和/或預(yù)防輻射損傷。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：于是，在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷供應(yīng)用于制備一用來(lái)治療和/或預(yù)防輻射損傷的醫(yī)藥品的用途。在第二個(gè)方面，本發(fā)明提供一種用于治療一具有或被懷疑具有輻射損傷的個(gè)體的方法，其包括對(duì)該個(gè)體投藥以異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷。在第三個(gè)方面，本發(fā)明提供異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷供應(yīng)用于制備一用來(lái)輻射防護(hù)的化妝品的用途。附圖說(shuō)明下面結(jié)合附圖及實(shí)施例來(lái)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，所以本發(fā)明在上述以及其他目的與特征，可借由參照下文的描述、隨文所附的權(quán)利要求書(shū)和伴隨的附圖而變得更為明顯，附圖中：圖1顯示BNLCL.2細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物借由細(xì)胞群落分析所測(cè)得的存活率，其中“*”表示：當(dāng)與X射線對(duì)照組3作比較，p＜0.05；圖2顯示NMuMG細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物借由細(xì)胞群落分析所測(cè)得的存活率；圖3顯示BNLCL.2細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物借由西方墨點(diǎn)分析所測(cè)得的經(jīng)裂解的半胱-天冬胺酸蛋白酶-9的表現(xiàn)情形；以及圖4顯示NMuMG細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物借由西方墨點(diǎn)分析所測(cè)得的經(jīng)裂解的半胱-天冬胺酸蛋白酶-9的表現(xiàn)情形，其中“*”表示：當(dāng)與正常對(duì)照組作比較，p＜0.05；以及“#”表示：當(dāng)與X射線對(duì)照組作比較，p＜0.05。具體實(shí)施方式本發(fā)明的上述以及其它目的、特征與優(yōu)點(diǎn)，在參照以下的詳細(xì)說(shuō)明與較佳實(shí)施例后，將變得明顯。除非另外有所定義，在本文中所使用的所有技術(shù)性與科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有熟悉本發(fā)明所屬領(lǐng)域的人士所共同了解的意義。一熟悉本領(lǐng)域者會(huì)認(rèn)知到許多與那些被描述于本文中者相似或等效的方法和材料，它們可被用于實(shí)施本發(fā)明。當(dāng)然，本發(fā)明決不受到所描述的方法和材料的限制。在開(kāi)發(fā)可用于治療和/或預(yù)防輻射損傷的藥物上，申請(qǐng)人意外地發(fā)現(xiàn)：異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷具有這方面的產(chǎn)業(yè)應(yīng)用潛力。于是，本發(fā)明揭示異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷供應(yīng)用于制備一用來(lái)治療和/或預(yù)防輻射損傷的醫(yī)藥品的用途。依據(jù)本發(fā)明，異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷已借由活體外試驗(yàn)(invitrotest)而被證實(shí)可以有效地保護(hù)細(xì)胞(包括小鼠肝細(xì)胞、小鼠乳腺上皮細(xì)胞以及人類皮膚角質(zhì)細(xì)胞)對(duì)抗X射線-誘發(fā)的死亡(Xray-induceddeath)、X射線-誘發(fā)的細(xì)胞死亡(Xray-inducedcelldeath)、X射線-誘發(fā)的細(xì)胞凋亡(Xray-inducedapoptosis)以及紫外線-誘發(fā)的細(xì)胞凋亡(ultraviolet-inducedapoptosis)。因此，本發(fā)明提供一種用于治療和/或預(yù)防輻射損傷的醫(yī)藥品，其包含有異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“治療(treating)”或“治療(treatment)”意指減少(reducing)、減輕(alleviating)、改善(ameliorating)、緩解(relieving)或控制(controlling)一疾病(disease)或障礙(disorder)的一或多個(gè)臨床征兆(clinicalsign)，以及降低(lowering)、停止(stopping) 或逆轉(zhuǎn)(reversing)一正在被治療中的病況(condition)或癥狀(symptom)的嚴(yán)重性的進(jìn)展(progressionofseverity)。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“預(yù)防(preventing)”或“預(yù)防(prevention)”意指當(dāng)一藥物被使用于一沒(méi)有疾病發(fā)病(diseaseonset)的癥狀但具有疾病發(fā)病的高風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體時(shí)，停止或延緩(delaying)疾病發(fā)病的癥狀。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“輻射損傷(radiationinjury)”意指生物體的任何部位在經(jīng)過(guò)輻射暴露后所造成的損傷(injury)或損害(damage)。依據(jù)本發(fā)明，該輻射損傷是一游離輻射損傷(ionizingradiationinjury)或一非游離輻射損傷(non-ionizingradiationinjury)。依據(jù)本發(fā)明，該游離輻射損傷是下列的至少一種：急性輻射癥候群(acuteradiationsyndrome,ARS)、慢性輻射癥候群(chronicradiationsyndrome,CRS)以及輻射治療的副作用(sideeffectofradiationtherapy)。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“急性輻射癥候群”意指生物體的全身(wholebody)在暴露于游離輻射下歷時(shí)一短時(shí)間(例如，24小時(shí))后所引起的急性癥狀(acutesymptoms)，這包括，但不限于：與造血系統(tǒng)(hematopoieticsystem)有關(guān)聯(lián)的癥狀[例如，再生不良性貧血(aplasticanemia)、溶血(hemolysis)以及淋巴結(jié)的萎縮(atrophyoflymphnodes)]、與胃腸系統(tǒng)(gastrointestinalsystem)有關(guān)聯(lián)的癥狀[例如，惡心(nausea)、嘔吐(vomiting)以及腹痛(abdominalpain)]以及與神經(jīng)血管系統(tǒng)(neurovascularsystem)有關(guān)聯(lián)的癥狀[例如，暈眩(dizziness)、頭痛(headache)以及意識(shí)水平降低(decreasedlevelof consciousness)]。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“慢性輻射癥候群”意指生物體的全身在暴露于游離輻射下歷時(shí)一長(zhǎng)時(shí)間(例如，數(shù)個(gè)月或數(shù)年)后所引起的慢性癥狀(chronicsymptoms)，這包括，但不限于：皮膚萎縮(skinatrophy)、白內(nèi)障(cataract)、復(fù)發(fā)性感染(recurrentinfection)、輕度發(fā)燒(lowgradefever)、食欲缺乏(lossofappetite)、疲勞(fatigue)、暈厥(fainting)以及掉發(fā)(hairloss)。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“輻射治療的副作用”意指人類個(gè)體的特定部位在經(jīng)過(guò)游離輻射暴露后所引起的癥狀，這包括：但不限于：厭食(anorexia)、疲憊(lassitude)、腹瀉(diarrhea)、紅斑(erythema)、脫屑(desquamation)、腸狹窄(bowelstenosis)、骨的壞死(necrosisofbone)以及肺的纖維化(fibrosisoflung)。依據(jù)本發(fā)明，該非游離輻射損傷是一紫外線傷害(ultravioletdamage)。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“紫外線傷害”意指人類個(gè)體的任何部位在經(jīng)過(guò)紫外線過(guò)度暴露(ultravioletoverexposure)后所引起的癥狀，這包括，但不限于：皮膚發(fā)炎(skininflammation)、延遲性曬黑反應(yīng)(delayedtanningreaction)、關(guān)節(jié)與肌肉內(nèi)以及眼部周圍的嚴(yán)重疼痛(severepainsinthejointsandmusclesandaroundtheeyes)、休克(shock)、發(fā)燒(fever)、惡心(nausea)、嘔吐(vomiting)以及全身無(wú)力(generalizedweakness)。依據(jù)本發(fā)明，異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷可以利用化學(xué)家所熟知的合成技術(shù)而被制得。另外地，異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷也可利用本領(lǐng)域中所慣 用的分離純化方法而從一天然來(lái)源(naturalsource)中被分離純化出來(lái)。在此方面，可以參考，例如LeeY.S.etal.(2005)(同上述)以及IgarashiK.etal.(2008)(同上述)。依據(jù)本發(fā)明，該天然來(lái)源可以是下列的至少一種：蕓苔(BrassicacampestrisL.)、太白美花草(Callianthemumtaipaicum)、茴香(FoeniculumvulgareMill.)、沙棘(HippophaerhamnoidesL.)、大花旋覆花(Inulabritannica)、臺(tái)灣佛甲草(Sedumformosanum)、芥菜(Brassicajuncea)、大金雀花(CaraganaarborescensLam.)、梨果仙人掌[Opuntiadillenii(Ker-Gawl)Haw.]以及草綠鹽角草(Salicorniaherbacea)。依據(jù)本發(fā)明，該醫(yī)藥品可利用熟習(xí)此領(lǐng)域者所詳知的技術(shù)而被制造成一適合于非經(jīng)腸道地(parenterally)、口服地(orally)或局部地(topically)投藥的劑型(dosageform)，這包括，但不限于：注射品(injection)[例如，無(wú)菌的水性溶液(sterileaqueoussolution)或分散液(dispersion)]、無(wú)菌的粉末(sterilepowder)、錠劑(tablet)、片劑(troche)、口含錠(lozenge)、膠囊(capsule)、分散性粉末(dispersiblepowder)或細(xì)顆粒(granule)、溶液、懸浮液(suspension)、乳劑(emulsion)、糖漿(syrup)、酏劑(elixir)、濃漿(slurry)、外部制劑(externalpreparation)以及類似物。依據(jù)本發(fā)明，該醫(yī)藥品可進(jìn)一步包含有一被廣泛地使用于藥物制造技術(shù)的藥學(xué)上可接受的載劑(pharmaceuticallyacceptablecarrier)。例如，該藥學(xué)上可接受的載劑可包含一或多種選自于由下列所構(gòu)成的群組中的試劑：溶劑(solvent)、緩沖液(buffer)、懸浮劑(suspendingagent)、分解劑(decomposer)、崩解劑(disintegrating agent)、分散劑(dispersingagent)、粘結(jié)劑(bindingagent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizingagent)、螯合劑(chelatingagent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gellingagent)、防腐劑(preservative)、潤(rùn)滑劑(lubricant)、吸收延遲劑(absorptiondelayingagent)、脂質(zhì)體(liposome)以及類似物。有關(guān)這些試劑的選用與數(shù)量是落在熟習(xí)此項(xiàng)技術(shù)的人士的專業(yè)素養(yǎng)與例行技術(shù)范疇內(nèi)。依據(jù)本發(fā)明，該醫(yī)藥品可以一選自于由下列所構(gòu)成的群組中的非經(jīng)腸道途徑(parenteralroutes)來(lái)投藥：腹膜內(nèi)注射(intraperitonealinjection)、皮下注射(subcutaneousinjection)、肌肉內(nèi)注射(intramuscularinjection)以及靜脈內(nèi)注射(intravenousinjection)。較佳地，該醫(yī)藥品被制造成適于以皮下注射而被投藥的劑型。依據(jù)本發(fā)明，該醫(yī)藥品可利用熟習(xí)此領(lǐng)域者所詳知的技術(shù)而被制造成一適合于局部地施用于皮膚上的外部制劑，這包括，但不限于：乳劑(emulsion)、凝膠(gel)、軟膏(ointment)、乳霜(cream)、貼片(patch)、擦劑(liniment)、粉末(powder)、氣溶膠(aerosol)、噴霧(spray)、乳液(lotion)、乳漿(serum)、糊劑(paste)、泡沫(foam)、滴劑(drop)、懸浮液(suspension)、油膏(salve)以及繃帶(bandage)。依據(jù)本發(fā)明，該外部制劑是借由將本發(fā)明的醫(yī)藥品與一為熟習(xí)此項(xiàng)技藝者所詳知的基底(base)相混合而被制備。依據(jù)本發(fā)明，該基底可包含有一或多種選自于下列的添加劑(additives)：水、醇(alcohols)、甘醇(glycol)、碳?xì)浠衔?hydrocarbons)[諸如石油膠(petroleumjelly)以及白凡士林(whitepetrolatum)]、蠟(wax)[諸如石蠟(paraffin)以及黃蠟(yellowwax)]、保存劑(preservingagents)、抗氧化劑(antioxidants)、界面活性劑 (surfactants)、吸收增強(qiáng)劑(absorptionenhancers)、安定劑(stabilizingagents)、膠凝劑(gellingagents)[諸如卡波普(941)、微結(jié)晶纖維素(microcrystallinecellulose)以及羧基甲基纖維素(carboxymethylcellulose)]、活性劑(activeagents)、保濕劑(humectants)、氣味吸收劑(odorabsorbers)、香料(fragrances)、pH調(diào)整劑(pHadjustingagents)、螯合劑(chelatingagents)、乳化劑(emulsifiers)、閉塞劑(occlusiveagents)、軟化劑(emollients)、增稠劑(thickeners)、助溶劑(solubilizingagents)、滲透增強(qiáng)劑(penetrationenhancers)、抗刺激劑(anti-irritants)、著色劑(colorants)以及推進(jìn)劑(propellants)等。有關(guān)這些添加劑的選用與數(shù)量是落在熟習(xí)此項(xiàng)技術(shù)的人士的專業(yè)素養(yǎng)與例行技術(shù)范疇內(nèi)。較佳地，該醫(yī)藥品包含有一藥學(xué)上可接受的溶劑，并且該溶劑是下列的任一種：水、生理鹽水(normalsaline)、磷酸鹽緩沖生理鹽水(phosphatebufferedsaline,PBS)、含糖溶液以及含有醇的水性溶液(aqueoussolutioncontainingalcohol)。本發(fā)明也提供一種用于治療一具有或被懷疑具有輻射損傷的個(gè)體的方法，其包括對(duì)該個(gè)體投藥以異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷。依據(jù)本發(fā)明，異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的投藥劑量與投藥次數(shù)會(huì)視下列因素而變化：要被治療的疾病的嚴(yán)重性，投藥途徑，以及要被治療的個(gè)體的年齡、身體狀況與反應(yīng)。一般而言，當(dāng)依據(jù)本發(fā)明的醫(yī)藥品是被局部地投藥時(shí)，每次投藥劑量通常是0.01至0.05mg/平方厘米的皮膚面積，每天大約1至3次。而當(dāng)依據(jù)本發(fā)明的醫(yī)藥品是被非經(jīng)腸道地或口服地投藥時(shí)，每次投藥劑量通常是25至50mg/Kg體重，每天大約1次。在本發(fā)明中，申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的預(yù)處理能夠有效地保護(hù)人類皮膚角質(zhì)細(xì)胞對(duì)抗紫外線-誘發(fā)的細(xì)胞凋亡。因此，本發(fā)明也預(yù)期異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷供應(yīng)用于制備一用來(lái)輻射防護(hù)(radioprotection)的化妝品的用途。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“輻射防護(hù)”意指阻斷或減輕輻射暴露所造成的有害的臨床、組織學(xué)以及免疫學(xué)的效應(yīng)(adverseclinical,histologicalandimmunologicaleffect)。這些效應(yīng)包括急性的效應(yīng)(例如，再生不良性貧血、紅斑、腹痛以及頭痛)以及慢性的效應(yīng)(例如，皮膚萎縮、白內(nèi)障以及掉發(fā))。依據(jù)本發(fā)明，該化妝品可進(jìn)一步包含有一被廣泛地使用于化妝品制造技術(shù)的化妝品上可接受的佐劑(cosmeticallyacceptableadjuvant)。例如，該化妝品上可接受的佐劑可包含有一或多種選自于下列的試劑：溶劑、膠凝劑、活性劑、防腐劑、抗氧化劑、遮蔽劑(screeningagent)、螯合劑、界面活性劑、染色試劑(coloringagent)、增稠劑(thickeningagent)、填料(filler)、香料以及氣味吸收劑。有關(guān)這些試劑的選用與數(shù)量是落在熟習(xí)此項(xiàng)技術(shù)的人士的專業(yè)素養(yǎng)與例行技術(shù)范疇內(nèi)。依據(jù)本發(fā)明，該化妝品可利用熟習(xí)此領(lǐng)域者所詳知的技術(shù)而被制造成一適合于護(hù)膚(skincare)或化妝(makeup)的形式，這包括，但不限于：水性溶液(aqueoussolution)、水-醇溶液(aqueous-alcoholsolution)或油性溶液(oilysolution)、呈水包油型(oil-in-watertype)、油包水型(water-in-oiltype)或復(fù)合型的乳劑、凝膠、軟膏、乳霜、面膜(mask)、貼片、貼布(pack)、擦劑、粉末、氣溶膠、噴霧、乳液、乳漿、糊劑、泡沫、分散液、滴劑、慕斯(mousse)、防曬油(sunblock)、 化妝水(tonicwater)、粉底(foundation)、眼影(eyeshadow)、卸妝產(chǎn)品(makeupremoverproducts)、肥皂(soap)以及其他身體清潔產(chǎn)品(bodycleansingproducts)等。依據(jù)本發(fā)明，該化妝品也可與一或多種選自于下列的已知活性的外用劑(externaluseagents)一起合并使用：美白劑(whiteningagents)[諸如維生素A酸(tretinoin)、兒茶素(catechin)、曲酸(kojicacid)、熊果苷(arbutin)以及維生素C(vitaminC)]、保濕劑、抗發(fā)炎劑(anti-inflammatoryagents)、殺菌劑(bactericides)、紫外線吸收劑(ultravioletabsorbers)、植物萃取物(plantextracts)[諸如蘆薈萃取物(aloeextract)]、皮膚營(yíng)養(yǎng)劑(skinnutrients)、麻醉劑(anesthetics)、抗痘劑(anti-acneagent)、止癢劑(antipruritic)、止痛劑(analgesic)、抗皮膚炎劑(antidermatitisagents)、抗過(guò)角化劑(antihyperkeratolyticagents)、抗干皮膚劑(anti-dryskinagents)、抗汗劑(antipsoriaticagents)、抗老化劑(antiager)、抗皺劑(antiwrinkleagents)、抗皮脂溢出劑(antiseborrheicagents)、傷口治療劑(wound-healingagents)、皮質(zhì)類固醇(corticosteroids)、激素(hormones)、自由基清除劑(例如觸酶)、抗氧化劑(例如維生素E)、細(xì)胞激素(例如介白素-1)、硫醇(例如阿米福汀)以及類固醇(例如5-雄甾烯二醇)。有關(guān)這些外用劑的選用與數(shù)量是落在熟習(xí)此項(xiàng)技術(shù)的人士的專業(yè)素養(yǎng)與例行技術(shù)范疇內(nèi)。依據(jù)本發(fā)明，該化妝品是呈一供局部施用的形式。一般而言，依據(jù)本發(fā)明的化妝品的每次施用劑量通常是1至5μg/平方厘米的皮膚面積，每天大約2至5次。本發(fā)明將就下面的實(shí)施例來(lái)做進(jìn)一步說(shuō)明，但應(yīng)了解的是，這 些實(shí)施例只是供例示說(shuō)明用，而不應(yīng)被解釋為本發(fā)明的實(shí)施上的限制。<實(shí)施例>一般實(shí)驗(yàn)材料：1.細(xì)胞株的來(lái)源與培養(yǎng)：在下面實(shí)施例中所使用的小鼠肝細(xì)胞株(mouselivercellline)BNLCL.2(BCRC60180)以及小鼠乳腺上皮細(xì)胞株(mousemammaryglandepithelialcellline)NMuMG(BCRC60087)皆是購(gòu)自于中國(guó)臺(tái)灣的食品工業(yè)發(fā)展研究所(FoodIndustryResearchandDevelopmentInstitute,FIRDI)的生物資源保存及研究中心(BiosourceCollectionandResearchCenter,BCRC)；以及人類皮膚角質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞株(humanskinkeratinocytecellline)HaCaT是由中國(guó)醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所的黃志揚(yáng)教授所提供。這3種細(xì)胞分別依照下面表1所示的培養(yǎng)基而被培養(yǎng)于6-cm培養(yǎng)皿(6-cmpetridish)中，并在培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到約80-90％匯聚(confluence)時(shí)，移除培養(yǎng)基并以磷酸鹽緩沖生理鹽水(phosphatebufferedsaline,PBS)(pH7.4)(Gibco)來(lái)清洗細(xì)胞1次，接著加入胰蛋白酶-EDTA(trypsin-EDTA)以使細(xì)胞自培養(yǎng)皿的底部脫離。之后，加入新鮮的培養(yǎng)基來(lái)中和胰蛋白酶的活性并以量吸管(pipette)反復(fù)地吸沖培養(yǎng)基以充分打散細(xì)胞，然后將所形成的細(xì)胞懸浮液分配到新的培養(yǎng)瓶中，并在培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。表1.用于培養(yǎng)3種細(xì)胞株的培養(yǎng)基2.儲(chǔ)備溶液(stocksolution)的制備：在下面的實(shí)施例中所使用的2種儲(chǔ)備溶液的制備方法是分別如下所述：(1)異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的儲(chǔ)備溶液：將異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(購(gòu)自于上海倍卓生物科技有限公司，Cat.No.5041-82-7)溶于二甲亞砜(dimethylsulfoxide,DMSO)中，而得到一濃度為10mM的儲(chǔ)備溶液。(2)異鼠李素的儲(chǔ)備溶液：將異鼠李素(購(gòu)自于上海源葉生物科技有限公司，Cat.No.480-19-3)溶于DMSO中，而得到一濃度為10mM的儲(chǔ)備溶液。一般實(shí)驗(yàn)方法：1.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(statisticalanalysis)：在下面的實(shí)施例中，各組的實(shí)驗(yàn)被重復(fù)3次，而實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)是以平均值±平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差(standarderrorofthemean,SEM)來(lái)表示。所有的數(shù)據(jù)是借由成對(duì)的史徒登氏t-試驗(yàn)(pairedStudent’s t-test)來(lái)作分析，俾以評(píng)估各組間的差異性。若所得到的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果是p＜0.05，這表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(statisticalsignificance)。實(shí)施例1.異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(isorhamnetin-3-O-β-D-glucoside)的預(yù)處理(pretreatment)對(duì)于細(xì)胞在對(duì)抗X射線-誘發(fā)的死亡(Xray-induceddeath)上的效用評(píng)估實(shí)驗(yàn)方法：A、以異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷來(lái)處理小鼠肝細(xì)胞株BNLCL.2以及小鼠乳腺上皮細(xì)胞株NMuMG：首先，將依據(jù)上面“一般實(shí)驗(yàn)材料”的第1項(xiàng)“細(xì)胞株的來(lái)源與培養(yǎng)”來(lái)進(jìn)行繼代培養(yǎng)的BNLCL.2細(xì)胞以及NMuMG細(xì)胞各自分成8組，其中包括1個(gè)正常對(duì)照組(normalcontrol)、1個(gè)異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷組、3個(gè)X射線對(duì)照組(Xraycontrol)(也就是X射線對(duì)照組1、2以及3)以及3個(gè)實(shí)驗(yàn)組(也就是實(shí)驗(yàn)組1、2以及3)。將各組的BNLCL.2細(xì)胞以一為2×105細(xì)胞的數(shù)量以及將各組的NMuMG細(xì)胞以一為2.5×105細(xì)胞的數(shù)量分別培養(yǎng)于含有5mL的細(xì)胞培養(yǎng)基(有關(guān)各個(gè)細(xì)胞所使用的培養(yǎng)基是如上面表1當(dāng)中所述)的6-cm培養(yǎng)皿中，并在培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)歷時(shí)24小時(shí)。接著，將各組的細(xì)胞培養(yǎng)物分別更換以新鮮的培養(yǎng)基，繼而將適量的異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的儲(chǔ)備溶液分別添加至異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷組以及各個(gè)實(shí)驗(yàn)組中，而使得異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷組以及各個(gè)實(shí)驗(yàn)組皆具有一最終濃度為30μM的異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷。至于正常對(duì)照組以及各個(gè)X射線 對(duì)照組的細(xì)胞培養(yǎng)物則不作任何處理。各組細(xì)胞培養(yǎng)物在培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)歷時(shí)2小時(shí)后，所得到的細(xì)胞培養(yǎng)物被拿來(lái)進(jìn)行下面第B項(xiàng)的細(xì)胞群落分析(clonogenicassay)。B、細(xì)胞群落分析：首先，使用一直線加速器(linearaccelerator)(ELEKTA)并依據(jù)下面表2所示的劑量來(lái)分別對(duì)依據(jù)本實(shí)施例的“實(shí)驗(yàn)方法”的第A項(xiàng)當(dāng)中所得到的實(shí)驗(yàn)組1至3以及X射線對(duì)照組1至3的細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行X射線照射(Xrayirradiation)(能量為6MeV)。至于正常對(duì)照組以及異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷組的細(xì)胞培養(yǎng)物則不作任何處理。表2.各個(gè)實(shí)驗(yàn)組以及X射線對(duì)照組被進(jìn)行X射線照射的劑量組別劑量(Gy)X射線對(duì)照組12X射線對(duì)照組24X射線對(duì)照組36實(shí)驗(yàn)組12實(shí)驗(yàn)組24實(shí)驗(yàn)組36各組細(xì)胞培養(yǎng)物在培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)歷時(shí)2小時(shí)后，對(duì)各組細(xì)胞培養(yǎng)物分別加入0.5mL胰蛋白酶-EDTA以使細(xì)胞自培養(yǎng)皿的底部脫離，繼而加入2mL的新鮮培養(yǎng)基(有關(guān)各個(gè)細(xì)胞所使用的培養(yǎng)基是如上面表1當(dāng)中所述)來(lái)中和胰蛋白酶的活性并以量吸管反復(fù)地吸沖培養(yǎng)基以充分打散細(xì)胞，然后將所形成的細(xì) 胞懸浮液平盤培養(yǎng)(plating)于新的6-cm培養(yǎng)皿中，其中異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷組與正常對(duì)照組是以一為2.0×102細(xì)胞的數(shù)量來(lái)培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組1與X射線對(duì)照組1是以一為4.0×102細(xì)胞的數(shù)量來(lái)培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組2與X射線對(duì)照組2是以一為8.0×102細(xì)胞的數(shù)量來(lái)培養(yǎng)，以及實(shí)驗(yàn)組3與X射線對(duì)照組3是以一為1.6×103細(xì)胞的數(shù)量來(lái)培養(yǎng)。各組細(xì)胞在培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)歷時(shí)2周后，以5mL的4％(w/v)甲醛(formaldehyde)來(lái)固定所形成的細(xì)胞群落(cellcolony)，接而加入5mL的0.005％(w/v)結(jié)晶紫(crystalviolet)并于25℃下反應(yīng)歷時(shí)30分鐘。之后，使用一倒立顯微鏡(OlympusCH40)并在一為100倍的放大倍數(shù)下來(lái)進(jìn)行觀察與細(xì)胞群落的計(jì)數(shù)。平盤培養(yǎng)效能(platingefficiency,PE)(％)是借由將各組所測(cè)得的細(xì)胞群落數(shù)量以及初始被平盤培養(yǎng)(plated)的細(xì)胞數(shù)量分別代入下列公式(1)而被計(jì)算出：公式(1)：A＝(B/C)×100其中：A＝平盤培養(yǎng)效能(％)B＝細(xì)胞群落的數(shù)量C＝被平盤培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量實(shí)驗(yàn)組1至3以及異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷組的存活率(survivalfraction)是借由將實(shí)驗(yàn)組1至3以及異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷組的平盤培養(yǎng)效能分別除以異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷組的平盤培養(yǎng)效能而被計(jì)算出。另外，X射線對(duì)照組1至3以及正常對(duì)照組的存活率是借由將X射線對(duì)照組1至3以及正常對(duì)照組的平盤培養(yǎng)效能分別除以正常對(duì)照組的平盤培養(yǎng)效能而被計(jì)算出。之 后，依照上面“一般實(shí)驗(yàn)方法”的第1項(xiàng)“統(tǒng)計(jì)學(xué)分析”當(dāng)中所述的方法來(lái)分析所得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。結(jié)果：圖1與圖2分別顯示BNLCL.2細(xì)胞以及NMuMG細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物借由細(xì)胞群落分析所測(cè)得的存活率。從圖1與圖2可見(jiàn)，無(wú)論是BNLCL.2細(xì)胞或是NMuMG細(xì)胞，X射線對(duì)照組1至3的存活率相較于正常對(duì)照組所具者都有顯著的降低，而實(shí)驗(yàn)組1至3的存活率相較于異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷組所具者也有顯著的降低，并且會(huì)隨著X射線照射的劑量的增加而更趨于明顯，這表示X射線會(huì)抑制BNLCL.2細(xì)胞以及NMuMG細(xì)胞的生長(zhǎng)。另外，當(dāng)使用相同的細(xì)胞株并以相同的劑量來(lái)進(jìn)行X射線照射時(shí)，實(shí)驗(yàn)組的存活率會(huì)高于X射線對(duì)照組所具者。這個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：對(duì)細(xì)胞進(jìn)行異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的預(yù)處理可以保護(hù)細(xì)胞對(duì)抗X射線-誘發(fā)的死亡。實(shí)施例2.異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的預(yù)處理對(duì)于X射線-誘發(fā)的細(xì)胞死亡(Xray-inducedcelldeath)的影響實(shí)驗(yàn)方法：A、以異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷來(lái)處理小鼠乳腺上皮細(xì)胞株NMuMG：首先，將依據(jù)上面“一般實(shí)驗(yàn)材料”的第1項(xiàng)“細(xì)胞株的來(lái)源與培養(yǎng)”來(lái)進(jìn)行繼代培養(yǎng)的NMuMG細(xì)胞分成4組，其中包括1個(gè)正常對(duì)照組、1個(gè)X射線對(duì)照組以及2個(gè)實(shí)驗(yàn)組(也就是實(shí)驗(yàn)組1與2)。將各組的NMuMG細(xì)胞以一為2.5×105細(xì)胞的數(shù)量培養(yǎng)于含有 5mL的細(xì)胞培養(yǎng)基(有關(guān)NMuMG細(xì)胞所使用的培養(yǎng)基是如上面表1當(dāng)中所述)的6-cm培養(yǎng)皿中，并在培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)歷時(shí)24小時(shí)。接著，將各組的細(xì)胞培養(yǎng)物分別更換以新鮮的培養(yǎng)基，繼而將適量的異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的儲(chǔ)備溶液分別添加至實(shí)驗(yàn)組1與2中，而使得實(shí)驗(yàn)組1與2分別具有一最終濃度為15μM以及30μM的異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷。至于正常對(duì)照組以及X射線對(duì)照組的細(xì)胞培養(yǎng)物則不作任何處理。各組細(xì)胞培養(yǎng)物在培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)歷時(shí)2小時(shí)后，所得到的細(xì)胞培養(yǎng)物被拿來(lái)進(jìn)行下面第B項(xiàng)的細(xì)胞周期分析(cellcycleanalysis)。B、細(xì)胞周期分析：首先，使用一直線加速器并在一為20Gy的劑量下對(duì)依據(jù)本實(shí)施例的“實(shí)驗(yàn)方法”的第A項(xiàng)當(dāng)中所得到的X射線對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組1以及實(shí)驗(yàn)組2的細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行X射線照射。至于正常對(duì)照組的細(xì)胞培養(yǎng)物則不作任何處理。各組細(xì)胞培養(yǎng)物在培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)歷時(shí)96小時(shí)后，將各組細(xì)胞培養(yǎng)物于25℃下以1200rpm進(jìn)行離心歷時(shí)3分鐘。在移除上澄液后，以冰冷的PBS(pH7.4)來(lái)清洗所得到的沉淀物，繼而以1mL冰冷的甲醇(methanol)來(lái)固定細(xì)胞，然后在-20℃下將經(jīng)固定的細(xì)胞靜置過(guò)夜。接著，以冰冷的PBS(pH7.4)來(lái)清洗經(jīng)固定的細(xì)胞，繼而加入250μL冰冷的DNA染色溶液[配于二次水中，含有200μg/mL的RNaseA溶液(Sigma-Aldrich)、50μg/mL的碘化丙錠(propidiumiodide,PI)(Sigma-Aldrich)以及0.1％(v/v)TritonX-100]以散浮細(xì)胞，然后 在37℃下進(jìn)行避光作用歷時(shí)30分鐘。之后，以BDAccuriTMC6流式細(xì)胞分析儀(BDAccuriTMC6flowcytometer)(BDBiosciences)來(lái)對(duì)所得到的經(jīng)染色的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞周期分析，每次分析1.0×106個(gè)細(xì)胞。細(xì)胞以氬離子的激光光束488nm激發(fā)而發(fā)出熒光，并在一為585nm的波長(zhǎng)下來(lái)檢測(cè)熒光強(qiáng)度。所得到的數(shù)據(jù)以BDAccuriTMC6軟體(BDAccuriTMC6software)(BDBiosciences)來(lái)分析處于各個(gè)細(xì)胞周期階段的細(xì)胞的百分比。最后，依照上面“一般實(shí)驗(yàn)方法”的第1項(xiàng)“統(tǒng)計(jì)學(xué)分析”當(dāng)中所述的方法來(lái)分析所得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。結(jié)果：下面表3顯示NMuMG細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物借由細(xì)胞周期分析所測(cè)得的細(xì)胞周期分布。從表3可見(jiàn)，與正常對(duì)照組相比較下，X射線對(duì)照組的細(xì)胞當(dāng)中有較高的比例是處于Sub-G1期(Sub-G1phase)，這表示X射線會(huì)促使NMuMG細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞死亡。另外，與X射線對(duì)照組相比較下，實(shí)驗(yàn)組1與2的細(xì)胞當(dāng)中有較低的比例是處于Sub-G1期，并且會(huì)隨著異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的濃度的增加而更趨于明顯。這個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：對(duì)細(xì)胞進(jìn)行異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的預(yù)處理可以保護(hù)細(xì)胞對(duì)抗X射線-誘發(fā)的細(xì)胞死亡。表3.NMuMG細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物借由細(xì)胞周期分析所測(cè)得的細(xì)胞周期分布*：當(dāng)與正常對(duì)照組作比較，p＜0.05。**：當(dāng)與正常對(duì)照組作比較，p＜0.01。#：當(dāng)與X射線對(duì)照組作比較，p＜0.05。##：當(dāng)與X射線對(duì)照組作比較，p＜0.01。實(shí)施例3.異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的預(yù)處理對(duì)于X射線-誘發(fā)的細(xì)胞凋亡(Xray-inducedapoptosis)的影響在本實(shí)施例中，申請(qǐng)人分別使用異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷以及異鼠李素來(lái)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理，并探討它們對(duì)于X射線-誘發(fā)的細(xì)胞凋亡的影響。實(shí)驗(yàn)方法：A、小鼠肝細(xì)胞株BNLCL.2以及小鼠乳腺上皮細(xì)胞株NMuMG的預(yù)處理：首先，將依據(jù)上面“一般實(shí)驗(yàn)材料”的第1項(xiàng)“細(xì)胞株的來(lái)源與培養(yǎng)”來(lái)進(jìn)行繼代培養(yǎng)的BNLCL.2細(xì)胞分成4組，其中包括1 個(gè)正常對(duì)照組、1個(gè)X射線對(duì)照組以及2個(gè)實(shí)驗(yàn)組(也就是實(shí)驗(yàn)組1與2)。另外，將依據(jù)上面“一般實(shí)驗(yàn)材料”的第1項(xiàng)“細(xì)胞株的來(lái)源與培養(yǎng)”來(lái)進(jìn)行繼代培養(yǎng)的NMuMG細(xì)胞分成6組，其中包括1個(gè)正常對(duì)照組、1個(gè)X射線對(duì)照組、2個(gè)異鼠李素組(也就是異鼠李素組1與2)以及2個(gè)實(shí)驗(yàn)組(也就是實(shí)驗(yàn)組1與2)。將各組BNLCL.2細(xì)胞以一為2×105細(xì)胞的數(shù)量以及將各組NMuMG細(xì)胞以一為2.5×105細(xì)胞的數(shù)量分別培養(yǎng)于含有5mL的細(xì)胞培養(yǎng)基(有關(guān)各個(gè)細(xì)胞所使用的培養(yǎng)基是如上面表1當(dāng)中所述)的6-cm培養(yǎng)皿中，并在培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)歷時(shí)24小時(shí)。接著，將各組的細(xì)胞培養(yǎng)物分別更換以新鮮的培養(yǎng)基，繼而將異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷以及異鼠李素的儲(chǔ)備溶液分別拿來(lái)與各組的細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行預(yù)處理，有關(guān)各組的細(xì)胞培養(yǎng)物的預(yù)處理?xiàng)l件被顯示于下面的表4中。表4.各組細(xì)胞培養(yǎng)物的預(yù)處理?xiàng)l件各組細(xì)胞培養(yǎng)物在培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)歷時(shí)2小時(shí)后，所得到的細(xì)胞培養(yǎng)物分別被拿來(lái)進(jìn)行下面第B至D項(xiàng)的實(shí)驗(yàn)。B、細(xì)胞凋亡分析：首先，使用一直線加速器并在一為15Gy的劑量下對(duì)依據(jù)本實(shí)施例的“實(shí)驗(yàn)方法”的第A項(xiàng)當(dāng)中所得到的BNLCL.2細(xì)胞的X射線對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組1與實(shí)驗(yàn)組2的細(xì)胞培養(yǎng)物以及NMuMG細(xì)胞的X射線對(duì)照組、異鼠李素組1、異鼠李素組2、實(shí)驗(yàn)組1與實(shí)驗(yàn)組2的細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行X射線照射。至于這2種細(xì)胞株的正常對(duì)照組的細(xì)胞培養(yǎng)物則不作任何處理。之后，將BNLCL.2細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物置于培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)歷時(shí)96小時(shí)，以及將NMuMG細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物置于培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)歷時(shí)72小時(shí)。接著，對(duì)這2種細(xì)胞株的各組細(xì)胞培養(yǎng)物分別加入1mL胰蛋白酶-EDTA以使細(xì)胞自培養(yǎng)皿的底部脫離，繼而加入1mL新鮮的培養(yǎng)基(有關(guān)各個(gè)細(xì)胞所使用的培養(yǎng)基是如上面表1當(dāng)中所述)來(lái)中和胰蛋白酶的活性，然后以量吸管將所形成的細(xì)胞懸浮液吸取至離心管中并于1200rpm下予以離心歷時(shí)3分鐘。在移除上澄液后，以冰冷的PBS(pH7.4)來(lái)清洗細(xì)胞1次，然后于1200rpm下進(jìn)行離心歷時(shí)3分鐘。接著，移除上澄液并加入100μL冰冷的膜聯(lián)蛋白V結(jié)合緩沖液(AnnexinVbindingbuffer)(BDPharmingenTM)以充分散浮細(xì)胞沉淀物(cellpellet)，借此而得到一細(xì)胞濃度為1.0×106細(xì)胞/mL的細(xì)胞懸浮液，然后對(duì)所得到的細(xì)胞懸浮液分別加入5μL的FITC膜聯(lián)蛋白V(FITCAnnexinV)(BDPharmingenTM)以及5μL的碘化丙錠(PI)染色溶液[propidiumiodide(PI)stainingsolution](BDPharmingenTM)并予以充分混合均勻，繼而在4℃下進(jìn) 行避光作用歷時(shí)30分鐘。之后，所得到的經(jīng)染色的細(xì)胞是以BDAccuriTMC6流式細(xì)胞分析儀來(lái)進(jìn)行分析，其中有被FITC膜聯(lián)蛋白V染色但無(wú)法被PI染色[也就是FITC膜聯(lián)蛋白V陽(yáng)性(FITCAnnexinVpositive)以及PI陰性(PInegative)]的細(xì)胞即表示被誘發(fā)早期細(xì)胞凋亡(earlyapoptosis)的細(xì)胞，有被FITC膜聯(lián)蛋白V以及PI染色[也就是FITC膜聯(lián)蛋白V陽(yáng)性以及PI陽(yáng)性(PIpositive)]的細(xì)胞即表示被誘發(fā)晚期細(xì)胞凋亡(lateapoptosis)的細(xì)胞，而無(wú)法被FITC膜聯(lián)蛋白V以及PI染色[也就是FITC膜聯(lián)蛋白V陰性(FITCAnnexinVnegative)以及PI陰性]的細(xì)胞則表示活細(xì)胞(viablecell)。有關(guān)被FITC膜聯(lián)蛋白V以及PI染色的細(xì)胞數(shù)目是借由使用BDAccuriTMC6軟體而被計(jì)算出。各組的細(xì)胞凋亡百分比(apoptosispercentage)(％)是借由將所測(cè)得的細(xì)胞數(shù)目代入下列公式(2)而被計(jì)算出：公式(2)：D＝[(E+F)/G]×100其中：D＝細(xì)胞凋亡百分比(％)E＝被FITC膜聯(lián)蛋白V染色但無(wú)法被PI染色的細(xì)胞數(shù)目F＝被FITC膜聯(lián)蛋白V以及PI染色的細(xì)胞數(shù)目G＝全部的細(xì)胞數(shù)目之后，依照上面“一般實(shí)驗(yàn)方法”的第1項(xiàng)“統(tǒng)計(jì)學(xué)分析”當(dāng)中所述的方法來(lái)分析所得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。C、粒線體膜電位分析：已知粒線體膜電位的去極化(depolarization)是在細(xì)胞凋亡過(guò)程 中的一個(gè)早期標(biāo)記性現(xiàn)象(earlymarkevent)，因此，為了探討異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷是否會(huì)影響B(tài)NLCL.2細(xì)胞以及NMuMG細(xì)胞的粒線體膜電位，進(jìn)而保護(hù)這些細(xì)胞對(duì)抗X射線-誘發(fā)的細(xì)胞凋亡，下面的實(shí)驗(yàn)被進(jìn)行。首先，使用一直線加速器并在一為15Gy的劑量下對(duì)依據(jù)本實(shí)施例的“實(shí)驗(yàn)方法”的第A項(xiàng)當(dāng)中所得到的BNLCL.2細(xì)胞的X射線對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組1的細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行X射線照射，以及在一為10Gy的劑量下對(duì)NMuMG細(xì)胞的X射線對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組1的細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行X射線照射。至于這2種細(xì)胞株的正常對(duì)照組的細(xì)胞培養(yǎng)物則不作任何處理。之后，將BNLCL.2細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物置于培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)歷時(shí)120小時(shí)，以及將NMuMG細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物置于培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)歷時(shí)48小時(shí)。接著，將這2種細(xì)胞株的各組細(xì)胞培養(yǎng)物以PBS予以清洗1次，繼而對(duì)這2種細(xì)胞株的各組細(xì)胞培養(yǎng)物分別加入1mL胰蛋白酶-EDTA以使細(xì)胞自培養(yǎng)皿的底部脫離。接著，加入1mL新鮮的培養(yǎng)基來(lái)中和胰蛋白酶的活性，繼而以量吸管將所形成的混合溶液吸取至離心管中，然后于400×g下予以離心歷時(shí)5分鐘。在移除上澄液后，加入500μL的1XJC-1染色緩沖液(stainingbuffer)并于37℃下進(jìn)行避光作用歷時(shí)15分鐘。接著，加入1mLJC-1分析緩沖液(assaybuffer)來(lái)清洗經(jīng)染色的細(xì)胞，然后于400×g下進(jìn)行離心歷時(shí)5分鐘。在移除上澄液后，加入500μL的JC-1染色緩沖液來(lái)散浮細(xì)胞，然后以BDAccuriTMC6流式細(xì)胞分析儀來(lái)進(jìn)行粒線體膜電位分析，繼而以BDAccuriTMC6軟體來(lái)計(jì)算出細(xì)胞的粒線體膜電位去極化百分比 (mitochondrialmembranepotentialdepolarizationpercentage)(％)。之后，依照上面“一般實(shí)驗(yàn)方法”的第1項(xiàng)“統(tǒng)計(jì)學(xué)分析”當(dāng)中所述的方法來(lái)分析所得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。D、經(jīng)裂解的半胱-天冬胺酸蛋白酶-9的表現(xiàn)情形：首先，使用一直線加速器并在一為15Gy的劑量下對(duì)依據(jù)本實(shí)施例的“實(shí)驗(yàn)方法”的第A項(xiàng)當(dāng)中所得到的BNLCL.2細(xì)胞以及NMuMG細(xì)胞的X射線對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組1與實(shí)驗(yàn)組2的細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行X射線照射。至于這2種細(xì)胞株的正常對(duì)照組的細(xì)胞培養(yǎng)物則不作任何處理。之后，將BNLCL.2細(xì)胞以及NMuMG細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物置于培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)歷時(shí)48小時(shí)，接著對(duì)這2種細(xì)胞株的各組細(xì)胞培養(yǎng)物分別加入120μL的溶解緩沖液(lysisbuffer)[含有CelLyticTMM蛋白質(zhì)萃取試劑(CelLyticTMMproteinextractionreagent)(Sigma-Aldrich)以及蛋白酶抑制劑雞尾酒(proteinaseinhibitorcocktail)(Sigma-Aldrich)]并予以混合均勻。接著，將所形成的細(xì)胞混合物置于微量離心管中，并于4℃下以13000rpm進(jìn)行離心歷時(shí)10分鐘，然后收集上澄液并以此作為總蛋白質(zhì)樣品，接著借由Bio-Rad蛋白質(zhì)分析套組(Bio-RadProteinAssayKit)來(lái)測(cè)定總蛋白質(zhì)濃度。之后，各組細(xì)胞的總蛋白質(zhì)樣品是采用熟習(xí)此項(xiàng)領(lǐng)域者所詳知且慣用的技術(shù)來(lái)進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodiumdodecylsulfate-polyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE)分析以及西方墨點(diǎn)分析(WesternBlotting)，其中各組細(xì)胞的總蛋白質(zhì)樣品是針對(duì)經(jīng)裂解的半胱-天冬胺酸蛋白酶-9來(lái)進(jìn)行西方墨點(diǎn)分析。另外，β -肌動(dòng)蛋白(β-actin)被用來(lái)作為內(nèi)部對(duì)照組(internalcontrol)。有關(guān)SDS-PAGE分析以及西方墨點(diǎn)分析所使用的儀器與試劑分別如下所述：(1)SDS-PAGE分析是使用一電泳系統(tǒng)(electrophoresissystem)(Bio-Rad)來(lái)進(jìn)行。(2)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印(proteintransfer)是使用半干式電泳轉(zhuǎn)印槽(semi-dryelectrophoretictransfercell)(Bio-Rad)以及聚二氟乙烯(PVDF)膜[polyvinylidenedifluoride(PVDF)membrane]來(lái)進(jìn)行。(3)在西方墨點(diǎn)分析中，針對(duì)各個(gè)蛋白質(zhì)所使用的一次抗體(primaryantibody)以及二次抗體(secondaryantibody)分別被顯示于下面表5中。表5.用于進(jìn)行西方墨點(diǎn)分析的一次抗體與二次抗體(4)化學(xué)發(fā)光染色(chemiluminescencestaining)是使用化學(xué)發(fā)光HRP受質(zhì)(chemiluminescentHRPsubstrate)(Millipore,Cat.No.WBKLS0500)來(lái)進(jìn)行，并使用一ImageScanner成像軟體(ImageScannerImagingSoftware)(GEHealthcareLifeSciences)來(lái)檢測(cè)訊號(hào)。之后，使用ImageScanner成像軟體來(lái)進(jìn)行分析，借此蛋白質(zhì)帶(proteinband)能夠被半-定量地計(jì)算出所對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)表現(xiàn)量，各組的經(jīng)裂解的半胱-天冬胺酸蛋白酶-9的表現(xiàn)量接而以其所對(duì)應(yīng)的β- 肌動(dòng)蛋白蛋白質(zhì)表現(xiàn)量來(lái)予以標(biāo)準(zhǔn)化(normalized)，然后將正常對(duì)照組的經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化的經(jīng)裂解的半胱-天冬胺酸蛋白酶-9的表現(xiàn)量當(dāng)作100％，而其他各組相對(duì)于正常對(duì)照組的經(jīng)裂解的半胱-天冬胺酸蛋白酶-9的表現(xiàn)量百分比可被計(jì)算出來(lái)。之后，依照上面“一般實(shí)驗(yàn)方法”的第1項(xiàng)“統(tǒng)計(jì)學(xué)分析”當(dāng)中所述的方法來(lái)分析所得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。結(jié)果：A、細(xì)胞凋亡分析：下面表6顯示BNLCL.2細(xì)胞以及NMuMG細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物借由細(xì)胞凋亡分析所測(cè)得的細(xì)胞凋亡百分比。從表6可見(jiàn)，無(wú)論是BNLCL.2細(xì)胞或是NMuMG細(xì)胞，X射線對(duì)照組的細(xì)胞凋亡百分比相較于正常對(duì)照組所具者都有顯著的升高，這表示X射線會(huì)誘發(fā)BNLCL.2細(xì)胞以及NMuMG細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞凋亡。另外，實(shí)驗(yàn)組1與2的細(xì)胞凋亡百分比相較于X射線對(duì)照組所具者都有顯著的下降，并且會(huì)隨著異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的濃度的增加而更趨于明顯。而就NMuMG細(xì)胞而言，實(shí)驗(yàn)組1與2的細(xì)胞凋亡百分比皆低于異鼠李素組所具者。這個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：對(duì)細(xì)胞進(jìn)行異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的預(yù)處理更能夠有效地保護(hù)細(xì)胞對(duì)抗X射線-誘發(fā)的細(xì)胞凋亡。表6.BNLCL.2細(xì)胞以及NMuMG細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物借由細(xì)胞凋亡分析所測(cè)得的細(xì)胞凋亡百分比**：當(dāng)與正常對(duì)照組作比較，p＜0.01。#：當(dāng)與X射線對(duì)照組作比較，p＜0.05。##：當(dāng)與X射線對(duì)照組作比較，p＜0.01。B、粒線體膜電位分析：下面表7顯示BNLCL.2細(xì)胞以及NMuMG細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物借由粒線體膜電位分析所測(cè)得的粒線體膜電位去極化百分比。從表7可見(jiàn)，無(wú)論是BNLCL.2細(xì)胞或是NMuMG細(xì)胞，X射線對(duì)照組的粒線體膜電位去極化百分比相較于正常對(duì)照組所具者都有顯著的升高，這表示X射線會(huì)促使BNLCL.2細(xì)胞以及NMuMG細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞凋亡。另外，實(shí)驗(yàn)組1的粒線體膜電位去極化百分比相較于X射線對(duì)照組所具者有顯著的降低。這個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：對(duì)細(xì)胞進(jìn)行異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的預(yù)處理可以抑制細(xì)胞在被進(jìn)行X射線照射后所造成的粒線體膜電位的去極化，進(jìn)而達(dá)到對(duì)抗X射 線-誘發(fā)的細(xì)胞凋亡的效用。表7.BNLCL.2細(xì)胞以及NMuMG細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物借由粒線體膜電位分析所測(cè)得的粒線體膜電位去極化百分比*：當(dāng)與正常對(duì)照組作比較，p＜0.05。**：當(dāng)與正常對(duì)照組作比較，p＜0.01。#：當(dāng)與X射線對(duì)照組作比較，p＜0.05。C、經(jīng)裂解的半胱-天冬胺酸蛋白酶-9的表現(xiàn)情形：圖3與圖4分別顯示BNLCL.2細(xì)胞以及NMuMG細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物借由西方墨點(diǎn)分析所測(cè)得的經(jīng)裂解的半胱-天冬胺酸蛋白酶-9的表現(xiàn)情形。從圖3與圖4可見(jiàn)，無(wú)論是BNLCL.2細(xì)胞或是NMuMG細(xì)胞，X射線對(duì)照組的經(jīng)裂解的半胱-天冬胺酸蛋白酶-9的表現(xiàn)量相較于正常對(duì)照組所具者(將正常對(duì)照組的經(jīng)裂解的半胱-天冬胺酸蛋白酶-9的表現(xiàn)量當(dāng)作100％)都有顯著的升高，這表示X射線會(huì)誘發(fā)BNLCL.2細(xì)胞以及NMuMG細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞凋亡。另外，實(shí)驗(yàn)組1與2的經(jīng)裂解的半胱-天冬胺酸蛋白酶-9的表現(xiàn)量相較于X射線對(duì)照組所具者都有顯著的降低，并且會(huì)隨著異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的濃度的增加而更趨于明顯。這個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：對(duì)細(xì)胞進(jìn)行異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的預(yù)處理可以保護(hù)細(xì) 胞避免因?yàn)閄射線照射所造成的經(jīng)裂解的半胱-天冬胺酸蛋白酶-9的過(guò)度表現(xiàn)，進(jìn)而達(dá)到對(duì)抗X射線-誘發(fā)的細(xì)胞凋亡的效用。實(shí)施例4.異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的預(yù)處理對(duì)于紫外線-誘發(fā)的細(xì)胞凋亡的影響實(shí)驗(yàn)方法：A、以異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷來(lái)處理小鼠乳腺上皮細(xì)胞株NMuMG以及人類皮膚角質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞株HaCaT：首先，將依據(jù)上面“一般實(shí)驗(yàn)材料”的第1項(xiàng)“細(xì)胞株的來(lái)源與培養(yǎng)”來(lái)進(jìn)行繼代培養(yǎng)的NMuMG細(xì)胞以及HaCaT細(xì)胞各自分成4組，其中包括1個(gè)正常對(duì)照組、1個(gè)紫外線對(duì)照組以及2個(gè)實(shí)驗(yàn)組(也就是實(shí)驗(yàn)組1與2)。將各組細(xì)胞以一為2.5×105細(xì)胞的數(shù)量培養(yǎng)于含有5mL的細(xì)胞培養(yǎng)基(有關(guān)各個(gè)細(xì)胞所使用的培養(yǎng)基是如上面表1當(dāng)中所述)的6-cm培養(yǎng)皿中，并在培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)歷時(shí)24小時(shí)。接著，將各組的細(xì)胞培養(yǎng)物分別更換以新鮮的培養(yǎng)基，繼而將適量的異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的儲(chǔ)備溶液分別添加至2種細(xì)胞株的實(shí)驗(yàn)組1與2的細(xì)胞培養(yǎng)物中，而使得這2種細(xì)胞株的實(shí)驗(yàn)組1與2的細(xì)胞培養(yǎng)物分別具有一如下面表8所示的最終濃度的異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷。至于這2種細(xì)胞株的正常對(duì)照組以及紫外線對(duì)照組的細(xì)胞培養(yǎng)物則不作任何處理。表8.2種細(xì)胞株的實(shí)驗(yàn)組1與2的細(xì)胞培養(yǎng)物所具有的異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的最終濃度各組細(xì)胞培養(yǎng)物在培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)歷時(shí)2小時(shí)后，所得到的細(xì)胞培養(yǎng)物被拿來(lái)進(jìn)行下面第B項(xiàng)的細(xì)胞凋亡分析。B、細(xì)胞凋亡分析：首先，使用一CL-1000紫外線交聯(lián)儀(CL-1000ultravioletcrosslinker)(UVP)并在一為30mJ/cm2的劑量下對(duì)依據(jù)本實(shí)施例的“實(shí)驗(yàn)方法”的第A項(xiàng)當(dāng)中所得到的NMuMG細(xì)胞的紫外線對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組1與實(shí)驗(yàn)組2的細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行紫外線照射，以及在一為50mJ/cm2的劑量下對(duì)HaCaT細(xì)胞的紫外線對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組1與實(shí)驗(yàn)組2的細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行紫外線照射。至于這2種細(xì)胞株的正常對(duì)照組的細(xì)胞培養(yǎng)物則不作任何處理。之后，將NMuMG細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物置于培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)歷時(shí)24小時(shí)，以及將HaCaT細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物置于培養(yǎng)箱(37℃、5％CO2)中進(jìn)行培養(yǎng)歷時(shí)48小時(shí)。接著，對(duì)這2種細(xì)胞株的各組細(xì)胞培養(yǎng)物分別加入1mL胰蛋白酶-EDTA以使細(xì)胞自培養(yǎng)皿的底部脫離，繼而加入1mL新鮮的培養(yǎng)基(有關(guān)各個(gè)細(xì)胞所使用的培養(yǎng)基是如上面表1當(dāng)中所述)來(lái)中和胰蛋白酶的活性，然后以量吸管將所形成的細(xì)胞懸浮液吸取至離心管中并于1200 rpm下予以離心歷時(shí)3分鐘。在移除上澄液后，以冰冷的PBS(pH7.4)來(lái)清洗細(xì)胞1次，然后于1200rpm下進(jìn)行離心歷時(shí)3分鐘。接著，移除上澄液并加入100μL冰冷的膜聯(lián)蛋白V結(jié)合緩沖液以充分散浮細(xì)胞沉淀物，借此而得到一細(xì)胞濃度為1.0×106細(xì)胞/mL的細(xì)胞懸浮液，然后對(duì)所得到的細(xì)胞懸浮液分別加入5μL的FITC膜聯(lián)蛋白V以及5μL的碘化丙錠(PI)染色溶液并予以充分混合均勻，繼而在4℃下進(jìn)行避光作用歷時(shí)30分鐘。之后，所得到的經(jīng)染色的細(xì)胞是以BDAccuriTMC6流式細(xì)胞分析儀來(lái)進(jìn)行分析，其中有被FITC膜聯(lián)蛋白V染色但無(wú)法被PI染色(也就是FITC膜聯(lián)蛋白V陽(yáng)性以及PI陰性)的細(xì)胞即表示被誘發(fā)早期細(xì)胞凋亡的細(xì)胞，有被FITC膜聯(lián)蛋白V以及PI染色(也就是FITC膜聯(lián)蛋白V陽(yáng)性以及PI陽(yáng)性)的細(xì)胞即表示被誘發(fā)晚期細(xì)胞凋亡的細(xì)胞，而無(wú)法被FITC膜聯(lián)蛋白V以及PI染色(也就是FITC膜聯(lián)蛋白V陰性以及PI陰性)的細(xì)胞則表示活細(xì)胞。有關(guān)被FITC膜聯(lián)蛋白V以及PI染色的細(xì)胞數(shù)目是借由使用BDAccuriTMC6軟體而被計(jì)算出。各組的細(xì)胞凋亡百分比(％)是借由將所測(cè)得的細(xì)胞數(shù)目代入上面公式(2)而被計(jì)算出。之后，依照上面“一般實(shí)驗(yàn)方法”的第1項(xiàng)“統(tǒng)計(jì)學(xué)分析”當(dāng)中所述的方法來(lái)分析所得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。結(jié)果：下面表9顯示NMuMG細(xì)胞以及HaCaT細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物借由細(xì)胞凋亡分析所測(cè)得的細(xì)胞凋亡百分比。從表9可見(jiàn)，無(wú)論是NMuMG細(xì)胞或是HaCaT細(xì)胞，紫外線對(duì)照組的細(xì)胞凋亡百分比相較于正常對(duì)照組所具者都有顯著的升高，這表示紫外線會(huì)誘發(fā) NMuMG細(xì)胞以及HaCaT細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞凋亡。另外，實(shí)驗(yàn)組1與2的細(xì)胞凋亡百分比相較于紫外線對(duì)照組所具者都有顯著的下降，并且會(huì)隨著異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的濃度的增加而更趨于明顯。這個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：對(duì)細(xì)胞進(jìn)行異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷的預(yù)處理能夠有效地保護(hù)細(xì)胞對(duì)抗紫外線-誘發(fā)的細(xì)胞凋亡。表9.NMuMG細(xì)胞以及HaCaT細(xì)胞的各組細(xì)胞培養(yǎng)物借由細(xì)胞凋亡分析所測(cè)得的細(xì)胞凋亡百分比*：當(dāng)與正常對(duì)照組作比較，p＜0.05。#：當(dāng)與紫外線對(duì)照組作比較，p＜0.05。綜合以上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，申請(qǐng)人認(rèn)為：異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷可供用于預(yù)防和/或治療輻射損傷(包括游離輻射損傷以及非游離輻射損傷)。在本說(shuō)明書(shū)中被引述的所有專利和文獻(xiàn)以其整體被并入本案作為參考資料。若有所沖突時(shí)，本案詳細(xì)說(shuō)明(包含界定在內(nèi))將占上風(fēng)。雖然本發(fā)明已參考上述特定的具體例被描述，明顯地在不背離本發(fā)明的范圍和精神下可作出很多的修改和變化。因此意欲的是， 本發(fā)明只受如隨文所附的權(quán)利要求書(shū)所示的限制。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3 當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3