本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種普朗尼克共聚物和重組組織纖溶酶原激活劑作為載藥系統(tǒng)的藥物制劑及其應(yīng)用，該系統(tǒng)可以為超聲控釋，定時定量地釋放藥物，促進(jìn)血腫溶解。

背景技術(shù)：

藥物制劑是由藥物和輔料組成的集合體，其中藥物是藥物制劑中癥狀起治療作用的成分，而輔料則是為了使藥物穩(wěn)定、增溶、助溶、緩解、控釋，或者便于制劑的服用和加工等而添加的除藥物以外其它各種成分的總稱。正是由于藥物和輔料的結(jié)合，才使藥物制劑能夠得以應(yīng)用并達(dá)到一定的療效。

高血壓性腦出血(Hypertensive Intracerebral Hemorrhage,HICH)以其高死亡率、高致殘率嚴(yán)重危害人類的健康。起發(fā)病年齡在50-60歲左右的約占半數(shù)，且近年來有年輕化的趨勢。外科治療的目的在于早期清除血腫、降低顱內(nèi)壓，早期解除腦受壓的因素，防治和減輕出血后的一系列繼發(fā)性病理變化，打破危及生命的惡性循環(huán)。傳統(tǒng)的開顱血腫清除術(shù)需全身麻醉，手術(shù)創(chuàng)傷大，增加患者的負(fù)擔(dān)和手術(shù)風(fēng)險。微侵襲治療日益滲透到神經(jīng)外科的各個領(lǐng)域，尤其是神經(jīng)導(dǎo)航技術(shù)和神經(jīng)內(nèi)窺鏡的應(yīng)用，對于減少HICH手術(shù)本身造成的危害和降低致殘率等方面有著更為廣闊的作用。在微侵襲手術(shù)治療HICH術(shù)后常規(guī)清除殘余血腫的治療方法是血腫腔內(nèi)逆行注入纖溶酶原激活物—重組組織型纖溶酶原激活劑(Recombinant Human Tissue Type Plasiminogen，rt-PA)。

在HICH的外科治療中rt-PA的應(yīng)用時間和應(yīng)用劑量臨床上并未達(dá)到統(tǒng)一規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)，但均為術(shù)后用，臨床上報道多為一日二次或三次的應(yīng)用，多次應(yīng)用有增加顱內(nèi)感染的可能。如能在手術(shù)中一次給藥，達(dá)到清除血腫的目的，則可以減少顱內(nèi)感染的機(jī)會，利于患者的早期恢復(fù)。臨床上，由于rt-PA起效快，半衰期短，術(shù)中應(yīng)用有再出血的可能，所以還不能在術(shù)中應(yīng)用rt-PA。

綜上所述，目前對于高血壓性腦出血(HICH)尚缺乏有效的治療手段，因此 本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)能夠適用于HICH的有效治療藥物和技術(shù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就是提供一種能夠有效治療或輔助治療HICH的新型藥物及其制法和用途。

本發(fā)明的第一方面，提供一種緩釋藥物制劑，所述的藥物制劑含有：

(a)組織型纖溶酶原激活劑t-PA；

(b)普朗尼克F127；

(c)水；

其中，所述的藥物制劑為溶膠/凝膠狀，并且所述藥物制劑中，t-PA的含量為2-15mg/ml或2-15mg/g普朗尼克F127，按普朗尼克F127的干重計(jì)。

在另一優(yōu)選例中，t-PA的含量為190-290mg/1ml，優(yōu)選為230mg/1ml。

在另一優(yōu)選例中，所述的組織型纖溶酶原激活劑為重組型組織型纖溶酶原激活劑rt-PA。

在另一優(yōu)選例中，所述的藥物制劑含有包裹于所述普朗尼克F127的rt-PA。

在另一優(yōu)選例中，所述的藥物制劑具有選自下組的一個或多個特性：

(a)釋放特性：在超聲引導(dǎo)誘發(fā)下，所述制劑釋放出rt-PA，總釋放率≥85％，較佳地≥90％；

(b)穩(wěn)定性：在5-15攝氏度的條件下，放置12個月，rt-PA的活性保留率≥90％,較佳地≥95％；

(c)溫度敏感性：所述藥物制劑在4-25℃為溶膠，在35-45℃為凝膠。前者為溶膠，流動性好；后者為凝膠，可以包裹固定在血腫表面再發(fā)揮作用。

在另一優(yōu)選例中，所述的超聲波頻率為100,000-2,000,000Hz，較佳地為500,000-1,500,000Hz。

在另一優(yōu)選例中，所述的超聲波的功率選擇為0.1-2W,較佳地為0.2-1W，較佳地為0.4±0.2W。

在另一優(yōu)選例中，所述的藥物制劑中，rt-PA和普朗尼克F127的重量比為2-15：100-500；較佳地為5-12：150-400；更佳地為8-12：200-300。

在另一優(yōu)選例中，所述的藥物制劑中，普朗尼克F127與水的重量比為100-500：800-1200；較佳地為150-400：900-1100；更佳地為200-300：950-1050。

在另一優(yōu)選例中，所述的藥物制劑還含有選自下組的成分：

(i)鹽類，如氯化鈉；

(ii)細(xì)胞因子，如神經(jīng)生長因子(NGF)。

在另一優(yōu)選例中，所述的藥物制劑中，鹽類為氯化鈉。

在另一優(yōu)選例中，所述的藥物制劑中，氯化鈉與水的重量比為0.2-3：50-150，較佳地為0.5-2：80-120；更佳地為0.8-1.5：100，最佳地為0.9：100。

在另一優(yōu)選例中，所述的藥物制劑用于治療高血壓性腦出血微侵襲治療殘余血腫。

在另一優(yōu)選例中，所述的藥物制劑是用包括以下步驟的方法制備的：

(i)提供原料組分，所述原料組分包括：

(a)重組組織型纖溶酶原激活劑rt-PA；

(b)普朗尼克F127；和

(c)水；

(ii)將所述原料組分進(jìn)行混合，形成溶膠/凝膠狀的混合物，即為本發(fā)明第一方面所述的緩釋藥物制劑。

本發(fā)明的第二方面，提供一種本發(fā)明第一方面所述的緩釋藥物制劑的制備方法，包括如下步驟：

(i)提供原料組分，所述原料組分包括：

(a)重組組織型纖溶酶原激活劑rt-PA；

(b)普朗尼克F127；和

(c)水；

(ii)將所述原料組分進(jìn)行混合，形成溶膠/凝膠狀的混合物，即為本發(fā)明第一方面所述的緩釋藥物制劑。

在另一優(yōu)選例中，步驟(ii)中，在4℃-15℃溫度下進(jìn)行。

在另一優(yōu)選例中，步驟(ii)中所述的混合包括：將rt-PA與水混合，制備成含rt-PA的第一溶液，然后將所述第一溶液與普朗尼克F127進(jìn)行混合，形成第一混合物。

在另一優(yōu)選例中，所述的第一溶液中，rt-PA的濃度為2-20mg/ml，較佳地為2-15mg/ml，更佳地為5-15mg/ml。

在另一優(yōu)選例中，所述步驟(ii)中還包括：對所述第一混合物進(jìn)行振蕩處理，形成溶膠狀的藥物制劑。

在另一優(yōu)選例中，所述的振蕩處理在漩渦混合器中進(jìn)行。

在另一優(yōu)選例中，在步驟(ii)中，普朗尼克F127以固態(tài)或液態(tài)形式加入所述的第一溶液。

在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括步驟：

(iii)將上一步驟制備的緩釋藥物制劑置于醫(yī)用容器中。

在另一優(yōu)選例中，在所述醫(yī)用容器中，所述的緩釋藥物制劑的劑量為0.1-10mg/ml。

在另一優(yōu)選例中，所述的醫(yī)用容器為袋、安剖瓶。

在另一優(yōu)選例中，Pluronic F127和混合液配比為10％-40％(mg：ml)，較佳地，Pluronic F127和混合液配比(wt％)為190-290mg/1ml，更佳地，Pluronic F127和混合液配比為230mg/1ml(230mgF127溶解于1ml的水中)。

在另一優(yōu)選例中，在漩渦混合器上振蕩時間為0.5小時。

在另一優(yōu)選例中，所述混合物II形成穩(wěn)定溶膠的條件為：5-15℃，時間≥8小時。

本發(fā)明的第三方面，提供一種本發(fā)明第一方面所述的緩釋藥物制劑的用途，用于制備治療顱內(nèi)出血微創(chuàng)治療術(shù)中術(shù)后溶解殘余血腫的藥物。

本發(fā)明的第四方面，提供一種非治療性的釋放藥物的方法，包括步驟：

(a)在超聲引發(fā)下釋放藥物。

將選定頻率和功率的超聲，應(yīng)用在所制備的緩釋給藥系統(tǒng)中，促進(jìn)藥物的釋放溶解和作用。

在另一優(yōu)選例中，超聲頻率為1MHz，功率選擇為0.4W。

應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附圖說明

圖1顯示了體外不同組別在不同時間段內(nèi)(6h，24h和72h)記錄的血腫溶解情況。

圖2顯示了使用超聲后不同時間段大鼠的rt-PA的檢測濃度。

圖3顯示了不同組別的大鼠在7d檢測腦組織含水量測定。

圖4顯示了對于不同組別的大鼠的行為學(xué)測定。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入地研究，首次意外地發(fā)現(xiàn)，將組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)與特定的載體Pluronic F-127進(jìn)行配伍，可以制得具有極高t-PA包裹量、且緩釋效果優(yōu)異的緩釋藥物制劑，其中高活性t-PA的包裹濃度可高達(dá)2-15mg/ml。此外，本發(fā)明的緩釋藥物制劑中活性成分更穩(wěn)定，測試表明，在5-15攝氏度經(jīng)1年存放下，所包裹的t-PA在幾乎無衰減。在超聲引發(fā)下，本發(fā)明的凝膠制劑可實(shí)現(xiàn)t-PA的有效控釋，因此非常適合用于治療顱內(nèi)出血微創(chuàng)治療術(shù)中的術(shù)后溶解殘余血腫。發(fā)明人在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。

體外血腫溶解和動物體內(nèi)血腫溶解實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的緩釋藥物制劑不但比現(xiàn)有的藥物(如尿激酶)擁有更好的溶解血腫效果，而且具有可控、緩釋和生物可降解等特性，為HICH術(shù)后溶解殘余血腫提供了一種可靠的方法。

術(shù)語說明

普朗尼克

聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯(PEO-PPO-PEO)是一類三嵌段共聚物，市售的這類三嵌段共聚物的商品名為普朗尼克(Pluronics)。根據(jù)PEO:PPO組成比和相對分子質(zhì)量的不同，可形成多種形式的嵌段共聚物，例如Pluronic P105、Pluronic F-127等。

如本文所用，術(shù)語“Pluronic F-127”、“普朗尼克F-127”或“F-127”可互換使用，指普朗尼克F-127。

如本文所用，術(shù)語“溶膠/凝膠狀”指所述物質(zhì)在不同溫度下可具有“溶膠”或“凝膠狀”兩種狀態(tài)，例如在4-25℃為溶膠，而在30-45℃為凝膠。

緩釋藥物制劑

本發(fā)明提供了一種緩釋藥物制劑，它含有：

(a)組織型纖溶酶原激活劑t-PA，優(yōu)選rt-PA；

(b)普朗尼克F127；

(c)水；

其中，所述的藥物制劑為溶膠/凝膠狀。

如本文所用，術(shù)語“含有”可以是開放式、半封閉式、或封閉式的，因此該術(shù)語包括了“包含”、“基本由......構(gòu)成”、“由......構(gòu)成”。

在本發(fā)明的制劑中，一種核心成分是普朗尼克Pluronic F-127。該載體無毒、無刺激、無免疫原性,是一種安全的藥物載體,可用于人體。

在本發(fā)明的制劑中，主要活性成分為組織型纖溶酶原激活劑，優(yōu)選重組型組織型纖溶酶原激活劑rt-PA。

在本發(fā)明中，大部分或幾乎全部t-PA被所述的特定載體(Pluronic F-127)包裹，從而形成一種包裹量大且活性成分更穩(wěn)定的t-PA/F-127復(fù)合物。

在本發(fā)明的所述制劑中，rt-PA的含量沒有特別限制，通常為2-50mg/ml或2-50mg/g，較佳地為5-25mg/ml或5-25mg/g。

與此相反，與類似的載體(Pluronic P105)進(jìn)行配伍時，則難以獲得上述優(yōu)異的技術(shù)效果。

本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)表明，與未包裹的t-PA制劑或用Pluronic P105進(jìn)行包裹的制劑相比，本發(fā)明的緩釋藥物制劑不僅對于活性成分的包裹量更大，而且制劑中活性成分更穩(wěn)定，此外在超聲引發(fā)下的活性成分控釋也更有效(在超聲引導(dǎo)誘發(fā)下，rt-PA總釋放率≥85％或更高)。

此外，本發(fā)明的緩釋藥物制劑還具有以下特征：

(1).常溫下，本發(fā)明制劑可形成直徑在幾十納米溶膠，有助于施用于腦部的HICH治療。

(2).本發(fā)明的特定載體F-127嵌段共聚物具有合適的溫度敏感性，常溫下是溶膠，體溫下轉(zhuǎn)變成凝膠。因此，在實(shí)際手術(shù)治療過程中，在施用于腦部后，會在體溫附近的溫度下轉(zhuǎn)變呈現(xiàn)凝膠狀態(tài)，有利于在病癥部位形成有效保護(hù)，并通過控釋在HICH病灶部位達(dá)到更高的藥物濃度。

(3).本發(fā)明制劑可通過超聲引發(fā)實(shí)現(xiàn)有效的控釋。在本發(fā)明中，可利用一定頻率和功率的超聲給藥設(shè)備，將超聲波作用于病人的頭部特定部位，從而有效引發(fā)包封普朗尼克中的t-PA釋放，達(dá)到臨床所需的濃度。在本發(fā)明中，對于HICH，通過使用本發(fā)明的緩釋藥物制劑并結(jié)合超聲，可以在無侵害性的情況下，使得超聲波穿過機(jī)體組織，從而通過超聲能量的調(diào)節(jié)，達(dá)到細(xì)微控制的效果。

此外，本發(fā)明的所述制劑中，還可含有其他額外的添加劑。代表性的添加劑包括(但并不限于)：鹽(如NaCl，例如0.9％NaCl)、細(xì)胞因子等。

通常，這些額外添加劑在本發(fā)明制劑中總含量≤10wt％，較佳地≤5wt％，更佳地≤1wt％。

制法

本發(fā)明提供一種所述緩釋藥物制劑的制備方法，包括以下步驟：

(i)提供原料組分，所述原料組分包括：

(a)重組組織型纖溶酶原激活劑rt-PA；

(b)普朗尼克F127；和

(c)水；

(ii)將所述原料組分進(jìn)行混合，形成溶膠/凝膠狀的混合物，即為本發(fā)明第一方面所述的緩釋藥物制劑。

其中，步驟(ii)中所述的混合包括：將rt-PA與水混合，制備成含rt-PA的第一溶液，然后將所述第一溶液與普朗尼克F127進(jìn)行混合，形成第一混合物。

另外，所述方法還可包括步驟：

(iii)將上一步驟制備的緩釋藥物制劑置于醫(yī)用容器中。

施用方法

本發(fā)明用于制備治療顱內(nèi)出血微創(chuàng)治療術(shù)中術(shù)后溶解殘余血腫的藥物，提供了一種釋放藥物的方法，包括步驟：在超聲引發(fā)下釋放藥物，即將選定頻率和功率的超聲，應(yīng)用在所制備的緩釋給藥系統(tǒng)中，促進(jìn)藥物的釋放溶解和作用。

本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于：

(a)Pluronic F-127與組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)進(jìn)行配伍，可以制得具有極高t-PA包裹量的凝膠。

(b)該凝膠制劑中，活性成分t-PA更穩(wěn)定。

(c)該凝膠能更好地為超聲引發(fā)控釋，從而達(dá)到更高局部藥物濃度。

(d)非常適合用于治療顱內(nèi)出血微創(chuàng)治療術(shù)中的術(shù)后溶解殘余血腫。

下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方 法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)是重量百分比和重量份數(shù)。

實(shí)施例

實(shí)施例1：制備載rt-PA納米緩釋藥物制劑和利用該制劑完成體外血腫溶解

1.1 制備載rt-PA納米緩釋制劑

常溫下，用生理鹽水溶解市售的rt-PA，制備成濃度為10mg/ml的混合液。將Pluronic F-127和所述混合液按照190-290mg：1ml的比例進(jìn)行配比(優(yōu)選為230mg F-127與1ml所述混合液混合)。在漩渦混合器上振蕩半小時，然后置于冰箱(5-15度)大于8小時，可以形成穩(wěn)定的溶膠，按照所需劑量置于不同的容器中保存，常溫或低溫儲存。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：Pluronic F127與rt-PA結(jié)合后，包裹濃度范圍為2-15mg/ml。

1.2 血腫的制備

血腫塊來源于高血壓性腦出血患者的開顱血腫清除術(shù)。用天平精準(zhǔn)稱量均分成1g的血腫塊，放入恒溫水浴箱內(nèi)2h，共30組；血腫質(zhì)量記為W₀。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組和各組樣品制備：((1)為對照組；(2)-(5)為實(shí)驗(yàn)組)

對照組：

(1)血腫組：不應(yīng)用藥物和超聲組(control組)

實(shí)驗(yàn)組：

(2)普通rt-PA組：(rt-PA)組；

(3)普通rt-PA+超聲組：(rt-PA+Us)組；

(4)載rt-PA-Pluronic F-127緩釋系統(tǒng)組：(Np-rt-PA)組；

(5)載rt-PA-Pluronic F-127緩釋系統(tǒng)+超聲組：(Np-rt-PA+Us)組；

以上各組rt-PA組濃度為1mg/ml，用量為1ml。常溫下，把準(zhǔn)備好的血腫放入各組中，每組5例，均放在37℃的恒溫水浴中觀察，在不同的時間(6h,12h,24h,48h,72h,4d,7d,14d)測量血腫的重量，記為w₁。則溶解率R％＝w₁/w₀×100％。

1.4 超聲方法

多頻超聲治療儀頻率定1MHz，功率選擇為0.4W，裝有血腫的各組小管置于表面涂滿耦合劑的超聲儀上面，然后進(jìn)行超聲輻照溶解血腫，時間為每次超聲1min，超聲兩次，每次間隔1min。超聲后，在常溫下根據(jù)上述方法計(jì)量血腫重量，在下一個時間段再記錄血腫體積。

實(shí)施例2.載rt-PA的Pluronic F-127緩釋給藥，完成超聲引發(fā)控釋的體內(nèi)動物實(shí)驗(yàn)

2.1 研究對象：重組組織型纖溶酶原激活劑(Recombinant human tissue-type plasiminogen，rt-PA)；Pluronic F-127和雄性SD大鼠50只。

2.2 研究分組：N＝50，每組各10只雄性SD大鼠。

(1)假手術(shù)組：腦內(nèi)穿刺但不注射血腫；

(2)單純血腫組：腦內(nèi)血腫內(nèi)注射自體動脈血50μl；

(3)血腫+rt-PA組：腦內(nèi)血腫內(nèi)注射自體動脈血50μl+rt-PA；

(4)血腫+載rt-PA Pluronic F-127系統(tǒng)非超聲組：腦內(nèi)血腫內(nèi)注射自體動脈血50μl+載rt-PA Pluronic F-127系統(tǒng)；

(5)血腫+載rt-PA Pluronic F-127系統(tǒng)超聲組：腦內(nèi)血腫內(nèi)注射自體動脈血50μl+載rt-PA Pluronic F-127系統(tǒng)+超聲。

2.3 研究方法：

大鼠腦出血模型的建立：實(shí)驗(yàn)動物為健康雄性SD大鼠，質(zhì)量250～300g。

參照Yang、Lee及Hua等方法，應(yīng)用立體定向技術(shù)，用大鼠自體尾動脈不抗凝動脈血液50μL緩慢注入大鼠尾狀核,制成中等量腦出血，建立穩(wěn)定的腦出血動物模型。再用超聲(多頻超聲治療儀頻率定1MHz，功率選擇為0.6W)引發(fā)控釋血腫的溶解。

2.4.觀察指標(biāo)：

rt-PA濃度的體內(nèi)檢測：將不同時間段(0,1,3,7d)記錄的大鼠，斷頭取腦后，加入PBS洗凈，用濾紙吸干后，放入勻漿器中勻漿、充分勻漿15分鐘，放入離心機(jī)中離心，離心速率為50000r/min，離心10分，取出上清液，上清液應(yīng)用HPLC來檢測其濃度。

腦組織含水量測定：選取7d的大鼠，分為四組。

第一組是正常大鼠(陰性對照組)；

第二組是只注射血腫造成腦內(nèi)血腫的大鼠(陽性對照組)；

第三組是普通rt-PA+超聲組；

第四組是載rt-PA-Pluronic F-127+超聲組。

大鼠在麻醉狀態(tài)下斷頭取腦，取出腦組織,冠狀切片厚3mm,距離額極4mm。腦組織切片沿中線分成兩個半球,每個半球再分成皮質(zhì)和髓質(zhì)，小腦也進(jìn)行分離作為對照。腦組織立即在電子分析天平上稱質(zhì)量，包括濕質(zhì)量。腦組織標(biāo)本在100℃烘干24h再稱干質(zhì)量。

計(jì)算公式如下：(濕質(zhì)量-干質(zhì)量)/濕質(zhì)量。

動物行為學(xué)改變：采用改良大鼠神經(jīng)功能缺損評分(mNSS，0-15分、0為正常、15為嚴(yán)重病損)，評價6小時、1天、3天、7天的行為學(xué)變化。用mNSS評分來表示行為學(xué)變化，同時測定腦組織的水含量，以及腦組織的病理學(xué)變化。

3.研究結(jié)果

圖1：不同組別在不同時間段內(nèi)(6h，24h和72h)記錄的血腫溶解情況。

NP-rt-PA+US組的溶解率與其它各種相比統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有顯著差異(P<0.05)。

NP-rt-PA+US組在6h時已溶解血腫40％，72h溶解血腫大于60％。

普通的rt-PA組在6h時只溶解血腫20％左右，72h溶解血腫約40％；是否加用超聲對于普通的rt-PA組溶解效果影響不大。

沒有加任何藥物的血腫組，在所監(jiān)測的72h內(nèi)只溶解了20％，與各實(shí)驗(yàn)組的差別統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異。

圖2：rt-PA濃度的檢測。

不同時間段記錄的大鼠，斷頭取腦后，加入PBS洗凈，放入勻漿器中勻漿、離心，上清液應(yīng)用HPLC來檢測其濃度。

普通rt-PA組無論是否加超聲，超聲對其影響不大(P>0.05)；超聲對于載rt-PA-Pluronic F-127系統(tǒng)的影響顯著(P<0.05)。

因?yàn)槠胀╮t-PA的半衰期短，普通rt-PA組在3d和7d的檢測中因?yàn)橐淹? 全溶解，所以并未檢測到。而載rt-PA-Pluronic F-127系統(tǒng)只有在超聲的控制下才緩慢釋放，所以兩者在應(yīng)用超聲后的1d、3d和7d相比，統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著(P<0.05)。普通rt-PA組和載rt-PA-Pluronic F-127組在0d和1d時統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著(P>0.05)。

圖3：在7d檢測腦組織含水量測定。

第一組是正常大鼠(陰性對照組)；

第二組是只注射血腫造成腦內(nèi)血腫的大鼠(陽性對照組)；

第三組是普通rt-PA+超聲組，

第四組是載rt-PA-Pluronic F-127+超聲組。

四組兩兩比較，含水量測定統(tǒng)計(jì)學(xué)上均有差異(P<0.05)。

圖4：對于大鼠的行為學(xué)測定采用改良大鼠神經(jīng)功能缺損評分mNSS(0-15分，0為正常，15為嚴(yán)重病損)。

對照組(單純血腫組)、普通rt-PA+超聲組和載rt-PA-Pluronic F-127+超聲組，可見在術(shù)后短期內(nèi)(0-7d)三組行為學(xué)上差異不顯著(P>0.05)；而14d、21d和28d，兩組數(shù)據(jù)差異統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著(P<0.05)。

結(jié)論：載rt-PA-Pluronic F-127聯(lián)合應(yīng)用超聲，不僅可以在體外加快血腫的溶解，在動物體內(nèi)超聲可以達(dá)到控制載rt-PA-Pluronic F-127系統(tǒng)釋放rt-PA，達(dá)到促進(jìn)血塊溶解的目的，而且可以減輕腦水腫的可能，并且其溶解顱內(nèi)血腫的效果比單純rt-PA更好。

對比例1

重復(fù)實(shí)施例1.1，不同點(diǎn)在于，用Pluronic P105和rt-PA結(jié)合。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：Pluronic P105和rt-PA結(jié)合后的包裹濃度范圍為0.01-1mg/ml，遠(yuǎn)低于Pluronic F127和rt-PA結(jié)合后的包裹量。

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