本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，涉及IGF-1R抑制劑的藥物新用途，具體涉及一種IGF-1R抑制劑OIS-906新的制藥用途，尤其是所述OIS-906在用于制備治療肺動(dòng)脈高壓藥物中的用途。

背景技術(shù)：

現(xiàn)有技術(shù)公開了OSI-906(Linsitinib)是一種選擇性的IGF-1R抑制劑。有研究顯示，OSI-906抑制IGF-IR自磷酸化和下游信號(hào)蛋白AKT,ERK1/2和S6激酶的激活，通過與C-螺旋相互作用而使靶點(diǎn)蛋白形成中間結(jié)構(gòu)形態(tài)，OSI-906作用于肝臟微粒體，具有良好的代謝穩(wěn)定性；其抑制包括非小細(xì)胞肺癌和結(jié)腸直腸癌(CRC的腫瘤細(xì)胞系增殖，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)其作用于IGF-IR或NCI-H292制備的移植瘤鼠模型，抑制腫瘤生長(zhǎng)。

肺動(dòng)脈高壓是一類以肺小動(dòng)脈重構(gòu)為特征，通常指肺動(dòng)脈壓力升高超過一定界值的一種血流動(dòng)力學(xué)和病理生理狀態(tài)，可導(dǎo)致右心衰竭，甚至死亡的類腫瘤性疾病，其是一種獨(dú)立的疾病，也可以是并發(fā)癥，還可以是綜合征；其血流動(dòng)力學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)為：海平面靜息狀態(tài)下，右心導(dǎo)管檢測(cè)肺動(dòng)脈平均壓≥25mmHg。肺動(dòng)脈高壓是一種常見病、多發(fā)病，且致殘率和病死率均很高。通常臨床采用的干預(yù)措施有：支持治療，包括抗凝藥物、利尿劑、洋地黃、吸氧等，靶向藥物治療，目前已被批準(zhǔn)用于靶向治療肺動(dòng)脈高壓的藥物包括：波生坦，安立生坦，伊洛前列素，曲前列尼爾等，以及介入治療，手術(shù)治療等。

迄今為止，尚未見有關(guān)IGF-1R抑制劑OIS-906在用于治療肺動(dòng)脈高壓中的報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)中治療肺動(dòng)脈高壓藥物效果不佳的技術(shù)問題，提供一種IGF-1R抑制劑OIS-906新的制藥用途，尤其是所述OIS-906在用于制備治療肺動(dòng)脈高壓藥物中的用途。

本發(fā)明的藥物OSI-906一種常規(guī)的實(shí)驗(yàn)工具藥(selleck生產(chǎn)，貨號(hào)：S1091)，是一種選擇性的IGF-1R抑制劑，其IC50為35nM；對(duì)InsR抑制作用適中，IC50為75nM，對(duì)Abl，ALK，BTK，EGFR，F(xiàn)GFR1/2，PKA等沒有抑制活性，其分子量是421.49，化學(xué)式是C26H23N5O，粉末狀在-20℃可保存3年，溶于溶劑在-80℃可保存6個(gè)月。

本發(fā)明中進(jìn)行了治療動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，采用IGF-1R抑制劑OIS-906通過大鼠肺動(dòng)脈高壓模型實(shí)驗(yàn)，給予OSI-906干預(yù)治療，結(jié)果明確顯示OSI-906對(duì)肺血管的作用為OSI-906能降低肺動(dòng)脈高壓大鼠的平均肺動(dòng)脈壓，改善心輸出量，降低肺血管阻力，改善右心室，抑制肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖和肺血管重構(gòu)。

本發(fā)明的藥物OSI-906可用于制備治療肺動(dòng)脈高壓的藥物。

本發(fā)明的藥物OSI-906長(zhǎng)期使用可有效治療肺動(dòng)脈高壓，改善右心功能，且與現(xiàn)有技術(shù)相比，其效果是積極和明顯的。

為了便于理解，以下將通過具體的附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的進(jìn)行詳細(xì)地描述。需要特別指出的是，具體實(shí)例和附圖僅是為了說明，顯然本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以根據(jù)本文說明，在本發(fā)明的范圍內(nèi)對(duì)本發(fā)明做出各種各樣的修正和改變，這些修正和改變也納入本發(fā)明的范圍內(nèi)。

附圖說明

圖1是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)各組大鼠肺動(dòng)脈重構(gòu)情況，其中，

A是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)照組中肺組織HE染色照片；

B是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)MCT組中肺組織HE染色照片；

C是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中采用12.5mg/kg OSI-906治療MCT所致肺動(dòng)脈高壓模型后的大鼠肺組織HE染色照片；

D是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中采用25mg/kg OSI-906治療MCT所致肺動(dòng)脈高壓模型后的大鼠肺組織HE染色照片；

E是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中采用50mg/kg OSI-906治療MCT所致肺動(dòng)脈高壓模型后的大鼠肺組織HE染色照片。

圖2是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中各組大鼠的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖情況。

具體實(shí)施方式：

實(shí)施例1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

一、材料與方法

1.1建立大鼠肺動(dòng)脈高壓模型

雄性SPF級(jí)SD大鼠，體重200-220g。一次性皮下注射野百合堿(Monocrotaline,MCT,50mg/kg)，3周后，隨機(jī)采用右心導(dǎo)管方法測(cè)定肺動(dòng)脈壓力及血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)，鑒定是否造模成功；

1.2實(shí)驗(yàn)分組及藥物干預(yù)

(1)模型組(MCT組)：10只大鼠，肺動(dòng)脈高壓模型建立成功后，灌胃給予生理鹽水，連續(xù)3周；

(2)OSI-906小劑量組(OSI-906,12.5mg/kg/d組)：10只大鼠，肺動(dòng)脈高壓模型建立成功后，灌胃給予OSI-906，連續(xù)3周；

(3)OSI-906中劑量組(OSI-906,25mg/kg/d組)：10只大鼠，肺動(dòng)脈高壓模型建立成功后，灌胃給予OSI-906，連續(xù)3周；

(4)OSI-906大劑量組(OSI-906,50mg/kg/d組)：10只大鼠，肺動(dòng)脈高壓模型建立成功后，灌胃給予OSI-906，連續(xù)3周；

(5)正常對(duì)照組(Ctronl組)：10只大鼠，正常大鼠，灌胃給予生理鹽水(0.5ml/kg/d)，連續(xù)3周；

1.3血流動(dòng)力學(xué)測(cè)定

1.3.1右心導(dǎo)管法測(cè)定給藥3周后各組動(dòng)物的平均肺動(dòng)脈壓(mean pulomonary arterial pressure,mPAP)、右心室收縮末期壓力(right ventricle systolic pressure,RVSP)、心輸出量以及心率等參數(shù)；具體方法：大鼠經(jīng)6％水合氯醛(0.6ml/100g)腹腔麻醉，仰臥固定后分離右側(cè)頸外靜脈約1cm左右，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，并作“V”形切口，將與換能器連接并充滿肝素鹽水的右心導(dǎo)管(自制末端彎曲PE 50導(dǎo)管，內(nèi)徑0.6mm，外徑0.9mm)插入，動(dòng)物生理多導(dǎo)儀記錄右心室收縮末期壓力RVSP、肺動(dòng)脈收縮壓(pulmonary arterial systolic pressure,PASP)、肺動(dòng)脈舒張壓(pulmonary arterial diastolic pressure,PADP)，計(jì)算mPAP，

mPAP(mmHg)＝1/3PASP(mmHg)+2/3PADP(mmHg)

1.3.2心輸出量(Cardiac Output,CO)測(cè)定：熱稀釋法測(cè)定心輸出量，具體方法：將右心導(dǎo)管回抽至上腔靜脈，分離左側(cè)頸總動(dòng)脈，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，剪口，將穿有溫度探測(cè)器的PE管插入胸主動(dòng)脈或腹主動(dòng)脈。用1ml針筒抽取0-4℃肝素化生理鹽水，迅速向上腔靜脈推進(jìn)0.2-0.3ml，觀察并記錄溫度曲線的變化，計(jì)算心輸出量，同時(shí)計(jì)算肺血管阻力(pulmonary vessel resistance,PVR)，

PVR(Wood)＝mPAP(mmHg)/CO(ml·min)

1.4右心室肥厚指數(shù)(right ventricular hypertrophy index,RVHI)測(cè)定

血流動(dòng)力學(xué)測(cè)定完畢后，開胸取出整個(gè)心臟，用預(yù)冷生理鹽水沖洗，沿著房室溝剪去心房及大血管根部，沿后室壁間溝將右心室游離壁分離，濾紙吸水后稱量右心室游離壁(RV)及左心室+室間隔(LV+S)的重量，并計(jì)算右心室肥厚指數(shù)，

右心室肥厚指數(shù)(RVHI)＝RV/(LV+S)；

1.5肺組織蘇木精-伊紅(HE)染色

常規(guī)處理大鼠后，取右肺中葉以10％中性甲醛溶液固定1天，石蠟包埋，沿肺門水平橫切，厚度約為5μm，進(jìn)行HE染色，切片經(jīng)常規(guī)二甲苯脫蠟，經(jīng)各級(jí)乙醇至水洗，蘇木精染色5min，自來水沖洗。根據(jù)染色的深淺，用0.5％鹽酸乙醇分化，自來水浸泡15min，置伊紅液2min，常規(guī)脫水，透明，封片；

1.6肺小動(dòng)脈血管形態(tài)分析

常規(guī)HE染色，隨機(jī)選取直徑100～200μm范圍的肺小動(dòng)脈，運(yùn)用IPP6.0圖像分析軟件測(cè)定血管壁厚度(wall thickness,WT)、血管外徑(external diameter,ED)、血管總面積(total area,TA)以及血管腔面積(lumen area,LA)，分析WT％和WA％等衡量血管重構(gòu)的指標(biāo)，

WT％＝(2×WT/ED)×100％

WA％＝[(TA-LA)/TA]×100％

1.7大鼠PASMC的原代培養(yǎng)

正常大鼠及MCT-PAH大鼠，麻醉，開胸，將心臟和肺一起取出，置于冰上冷的HBSS(含鈣)中。取左上肺和右下肺葉，體視鏡下在冷的1.5mM HBSS中分離肺動(dòng)脈，用氣道下的主肺內(nèi)動(dòng)脈，去除血管周圍組織和血管外膜，沿動(dòng)脈長(zhǎng)徑剪開血管，暴露血管腔。用棉簽輕輕摩擦血管腔去除內(nèi)皮。將動(dòng)脈置于酶消化液(酶消化液包括1750單 位/毫升的I型膠原酶，9.5單位/毫升的木瓜酶，2mg/ml牛血清白蛋白和1mM二硫蘇糖醇溶于無Ca2+的HBSS緩沖液中)中37℃，約20分鐘，直到血管周圍出現(xiàn)毛躁，加1ml 10％FBS DMEM培液終止消化，1000rpm，2min離心，棄上清，培液重懸，吹打，接種于皿中，培養(yǎng)，24h后換液。實(shí)驗(yàn)采用3-4代細(xì)胞；

1.8PASMC增殖的檢測(cè)

將總計(jì)約103量的PASMC接種于一個(gè)96孔培養(yǎng)板中。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到60-70％后，血清饑餓24小時(shí)，然后采用OSI-906(0.05μM,0.2μM,0.8μM)刺激細(xì)胞，觀察不同濃度的藥物刺激72小時(shí)后，按照BrdU試劑盒的說明書，將BrdU POD抗體孵育細(xì)胞90分鐘，培養(yǎng)結(jié)束后，細(xì)胞用磷酸鹽緩沖液沖洗三次，除去過量的抗體，然后加底物孵育30分鐘，然后采用酶標(biāo)儀492nm檢測(cè)樣品的吸光度；

1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)均采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)處理由SPSS17.0完成，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；

二、結(jié)果顯示

2.1大鼠一般情況與死亡情況

對(duì)照組及OSI-906給藥組大鼠體毛光澤，反應(yīng)敏捷，飲食正常。MCT組大鼠逐漸變得虛弱，反應(yīng)遲鈍，蜷縮少動(dòng)，體毛暗淡無光澤；

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡情況：本實(shí)驗(yàn)公用50只SD大鼠，死亡2只，均為MCT組，分別死于實(shí)驗(yàn)第18天和20天。大鼠死亡前表現(xiàn)為呼吸困難、口唇發(fā)紺。解剖后可見胸腔積液，腹腔積液，肝臟淤血腫脹。取出心肺后，大體可見肺部瘀點(diǎn)瘀斑，短軸橫切心臟，可見右心室游離壁明顯肥厚，提示大鼠在肺動(dòng)脈高壓病程中發(fā)生了右心衰竭；

2.2血流動(dòng)力學(xué)變化

MCT組大鼠mPAP明顯高于對(duì)照組，模型建立成功。與MCT組相比，OSI-906各個(gè)劑量組均可顯著降低肺動(dòng)脈高壓大鼠的mPAP和RVSP(p p＜0.05)。OSI-906各劑量組均可明顯改善肺動(dòng)脈高壓所致心輸出量減少，降低肺血管阻力(PVR)(如表1所示)，

表1各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)比較

p*<0.01,compared with control group；

p^#<0.05,p^##<0.01,compared with MCT group；

2.3右心室肥厚指數(shù)和肺血管重構(gòu)

一次性皮下注射MCT21天后，可見明顯的右心室肥厚，OSI-906大劑量和中劑量組可明顯改善大鼠右心肥厚指數(shù)(p＜0.05)，大鼠肺中小動(dòng)脈圖像分析結(jié)果可見，OSI-906可明顯改善肺動(dòng)脈高壓大鼠的右心和肺血管重構(gòu)，MCT組大鼠肺中小動(dòng)脈WT％和WA％均明顯高于正常對(duì)照組。OSI-906組大鼠肺中小動(dòng)脈WT％和WA％均明顯低于MCT組(p＜0.01)，但OSI-906組大鼠肺中小動(dòng)脈WT％和WA％均明顯高于對(duì)照組(p＜0.05)(如表2所示)；

表2各組大鼠中RV/(LV+S),WT％and WA％比較

p*<0.01,compared with control group；p^#<0.05,p^##<0.01,compared with MCT group；

肺組織HE染色顯示，對(duì)照組大鼠肺小動(dòng)脈內(nèi)皮連續(xù)性好，細(xì)胞分布均勻，薄厚一致；MCT組大鼠內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù)性破壞，呈立方形或柱狀突向管腔，中層管壁厚度明顯增加，管腔面積明顯變小，伴有血管周圍炎。OSI-906劑量組大鼠肺血管小動(dòng)脈內(nèi)皮連續(xù)性良好，管壁厚度較MCT組明顯減少，管腔變寬，血管周圍炎癥減輕(如圖1A-E所示)，由圖1C-D所示，OSI-906能有效抑制MCT所致大鼠肺血管微小動(dòng)脈中層增厚；2.4肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖

BrdU檢測(cè)結(jié)果顯示MCT組大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞較對(duì)照組大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞顯著增殖，且OSI-906刺激細(xì)胞不同劑量組均明顯抑制肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖，且呈劑量依賴關(guān)系。

本發(fā)明實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，所述的OSI-906可降低肺動(dòng)脈高壓大鼠的平均肺動(dòng)脈壓，改善心輸出量，降低肺血管阻力，改善右心室，抑制肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖和肺血管重構(gòu)；長(zhǎng)期使用OSI-906可有效干預(yù)肺動(dòng)脈高壓，改善右心功能。