本發(fā)明涉及一種生脈復(fù)方提取物的制備方法及其用途，具體涉及該生脈復(fù)方提取物在制備改善記憶藥品或保健品中的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。

技術(shù)背景

所謂記憶，就是人們對(duì)經(jīng)驗(yàn)的識(shí)記、保持和應(yīng)用過程，是對(duì)信息的選擇、編碼、儲(chǔ)存和提取過程，記憶聯(lián)結(jié)著人的心理活動(dòng)的過去和現(xiàn)在，是人們學(xué)習(xí)、工作和生活的基本機(jī)能?？茖W(xué)研究發(fā)現(xiàn)，一方面人類的記憶隨著年齡的增長(zhǎng)而逐漸下降，另一方面，一些青少年在進(jìn)行記憶時(shí)頭腦中有數(shù)以萬計(jì)的神經(jīng)細(xì)胞在不停的進(jìn)行著繁重的運(yùn)算活動(dòng)，需要大量的營養(yǎng)與能量的供應(yīng)。如果不能保證其需求也會(huì)造成記憶力迅速下降，這些都屬于生理性記憶減退現(xiàn)象而非病理性記憶減退。生理性記憶障礙可嚴(yán)重影響人的生活質(zhì)量，急需有效的改善記憶的藥品或保健品，但無奈的是這方面的產(chǎn)品還很少。因此，開發(fā)有效的適應(yīng)于改善生理性記憶障礙的藥品或保健品非常必要。

中藥的多靶點(diǎn)效應(yīng)在改善記憶方面具有顯著的優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明使用的生脈復(fù)方為重量比為3:2:1的人參、麥冬、五味子，本發(fā)明在對(duì)生脈復(fù)方進(jìn)行醇提后，其醇提物不僅能改善東莨菪堿所致的記憶障礙，而且能顯著改善正常昆明小鼠的記憶功能，本發(fā)明的生脈復(fù)方提取物可在制備改善記憶藥物及保健品中應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種生脈復(fù)方提取物，該生脈復(fù)方提取物不僅能改善東莨菪堿所致的記憶障礙，還能顯著改善正常昆明小鼠的記憶功能。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述生脈復(fù)方提取物的制備方法。

本發(fā)明的主要目的是提供所述生脈復(fù)方提取物的新用途，即在制備改善記憶的藥品或保健品中的應(yīng)用。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明提供了一種生脈復(fù)方提取物，所述生脈復(fù)方提取物原料藥為人參、麥冬、五味子，人參、麥冬、五味子的重量比為3:2:1。

其中，所述的生脈復(fù)方提取物是無水乙醇提取物。

本發(fā)明還提供了一種制備上述生脈復(fù)方提取物的制備方法，所述生脈復(fù)方提取物的制備方法如下：用無水乙醇浸泡人參，麥冬，五味子，加熱回流，過濾，減壓濃縮后得浸膏，充分揮干乙醇，干燥之后即得生脈復(fù)方提取物。

其中，無水乙醇浸泡的時(shí)間是0.5h。

其中，加熱回流兩次，每次的時(shí)間為2.5h。

另外，本發(fā)明還提供了上述的生脈復(fù)方提取物在制備改善記憶的藥品或保健品中的應(yīng)用。

其中，所述的藥品或保健品不僅能改善東莨菪堿所致的記憶，還能顯著改善正常昆明小鼠的記憶功能，適用于制備改善正常人記憶的藥品或保健品。

其中，在應(yīng)用中所述生脈復(fù)方提取物的制備方法如下：用無水乙醇浸泡人參，麥冬，五味子，加熱回流，過濾，減壓濃縮后得浸膏，充分揮干乙醇，干燥之后即得生脈復(fù)方提取物。

其中，無水乙醇浸泡的時(shí)間是0.5h。

其中，加熱回流兩次，每次的時(shí)間為2.5h。

本發(fā)明的有益效果為：

1.本發(fā)明使用人參、麥冬、五味子的重量比為3:2:1，在對(duì)生脈復(fù)方進(jìn)行醇提后，該生脈復(fù)方提取物能有效改善記憶。

2.以往改善記憶的藥物大多僅能改善小鼠東莨菪堿所致的記憶障礙，而不能改善正常小鼠的記憶，比如腦爾康，而本發(fā)明公開的生脈復(fù)方提取物不僅能改善東莨菪堿所致的記憶障礙，而且能顯著改善正常昆明小鼠的記憶功能，可在制備改善記憶的藥品或保健品中應(yīng)用。

附圖說明

圖1、2：生脈復(fù)方提取物灌胃小鼠的跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)。圖1中橫坐標(biāo)是各組別，縱坐標(biāo)是小鼠跳下平臺(tái)的潛伏期。圖2中橫坐標(biāo)是各組別，縱坐標(biāo)是小鼠跳下平臺(tái)的錯(cuò)誤次數(shù)。

圖3、4：生脈復(fù)方提取物灌胃小鼠的避暗實(shí)驗(yàn)。圖3中橫坐標(biāo)是各實(shí)驗(yàn)的組別，縱坐標(biāo)是各組小鼠進(jìn)入暗箱的潛伏期。圖4是各組別，縱坐標(biāo)時(shí)候各組小鼠進(jìn)入暗箱的錯(cuò)誤次數(shù)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明的技術(shù)方案，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于所述實(shí)施例。

實(shí)施例一生脈復(fù)方提取物的制備

材料：人參、麥冬、五味子購買于甘肅省蘭州市惠仁堂藥業(yè)連鎖有限責(zé)任公司。

生脈復(fù)方提取物原料藥包括人參、麥冬、五味子，人參、麥冬、五味子的重量比為3:2:1。

稱取人參120g、麥冬80g、五味子40g，用2400ml無水乙醇浸泡0.5h，加熱回流兩次，每次回流2.5h，過濾，減壓濃縮得到生脈復(fù)方浸膏。充分揮干乙醇，干燥之后即得生脈復(fù)方提取物。

實(shí)施例二生脈復(fù)方提取物改善正常小鼠記憶的跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)

1、實(shí)驗(yàn)藥品與試劑

生脈復(fù)方提取物(SM)的配制：按照實(shí)施例一所述的制備方法制備得到生脈復(fù)方提取物，稱量300mg的生脈復(fù)方提取物溶于20ml蒸餾水中，制備成合適的濃度生脈復(fù)方提取物(SM)，濃度為15mg/ml。

陽性藥物(P)的配制：稱取奧拉西坦膠囊內(nèi)容物150mg溶于20ml蒸餾水中，配制成15mg/ml的溶液。

2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雌性清潔級(jí)昆明小鼠，購自蘭州大學(xué)GLP實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，體重20.0±2.0g；其中從70只小鼠中篩選出50只動(dòng)物用于跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)。

3、主要儀器：電子天平(0.0001g)、YLS-3TB跳臺(tái)儀(成都泰盟科技有限公司)。

4、實(shí)施步驟：

(1)昆明小鼠的飼養(yǎng)

將體重基本一致的健康成年雌性小鼠飼養(yǎng)在溫度在18～22℃，濕度50％～60％。同時(shí)給予12h日照和12h夜照。

(2)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的篩選

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境3d后，用跳臺(tái)儀進(jìn)行跳臺(tái)篩選。先將小鼠進(jìn)行隨機(jī)分組，分組后用酚紅進(jìn)行標(biāo)記并稱量其體重。將各組每只小鼠放在跳臺(tái)暗箱中適應(yīng)3分鐘后接通電源開始測(cè)試，跳臺(tái)儀自動(dòng)記錄各小鼠跳下平臺(tái)的次數(shù)和跳下平臺(tái)的時(shí)間。每只小鼠測(cè)試5分鐘。

跳臺(tái)儀自動(dòng)記錄每只小鼠跳下平臺(tái)的錯(cuò)誤次數(shù)和跳下平臺(tái)的時(shí)間，第一次跳下平臺(tái)的時(shí)間記為其潛伏期，并記錄錯(cuò)誤小鼠的只數(shù)和錯(cuò)誤次數(shù)，通過跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)篩選出實(shí)驗(yàn)智力和體力基本一致的小鼠作為生脈復(fù)方提取物功效實(shí)驗(yàn)的模型小鼠。

(3)生脈復(fù)方提取物改善正常小鼠記憶的作用

跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)篩選出智力和體力基本一致的小鼠后，將小鼠進(jìn)行分組，平均分成5組，使得每組的小鼠智力基本一致。分組后的小鼠每天20:00-21:00進(jìn)行灌胃，每只小鼠灌胃0.2ml以上各組藥液與蒸餾水。共灌胃30天。30天后進(jìn)行跳臺(tái)測(cè)試，先將小鼠進(jìn)行隨機(jī)分組，分組后用酚紅進(jìn)行標(biāo)記并稱量其體重。將各組每只小鼠放在跳臺(tái)暗箱中適應(yīng)3分鐘后接通電源開始測(cè)試，跳臺(tái)儀自動(dòng)記錄各小鼠跳下平臺(tái)的次數(shù)和跳下平臺(tái)的時(shí)間。每只小鼠測(cè)試5分鐘。

跳臺(tái)儀自動(dòng)記錄每只小鼠跳下平臺(tái)的錯(cuò)誤次數(shù)和跳下平臺(tái)的時(shí)間，第一次跳下平臺(tái)的時(shí)間記為其潛伏期，并記錄錯(cuò)誤小鼠的只數(shù)和錯(cuò)誤次數(shù)。

圖1中橫坐標(biāo)表示藥物處理組別，縱坐標(biāo)表示小鼠跳下平臺(tái)的潛伏期，縱坐標(biāo)數(shù)值越大，表示小鼠的記憶越好。其中，###表示P<0.001，##表示P<0.01，#表示P<0.05。

從圖1中可知，生脈復(fù)方提取物(SM)及陽性藥組(P)均有改善記憶的功效。

圖2的橫坐標(biāo)表示藥物處理組，縱坐標(biāo)表示小鼠跳下平臺(tái)的錯(cuò)誤次數(shù)，縱坐標(biāo)數(shù)值越小，表示小鼠的記憶越好。其中，###表示P<0.001，##表示P<0.01，#表示P<0.05。

從圖2中可知，生脈復(fù)方提取物及陽性藥組(P)均有改善記憶的功效。

綜上所述，生脈復(fù)方提取物(SM)能夠顯著地改善小鼠的記憶。實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈陽性。

因此，本發(fā)明提供生脈復(fù)方提取物具有改善小鼠記憶的潛力，可作為一種改善記憶的藥物或保健品使用。

實(shí)施例三生脈復(fù)方提取物改善正常小鼠記憶的避暗實(shí)驗(yàn)

1、實(shí)驗(yàn)藥品與試劑

同實(shí)施例二所示方法配制各組溶液，圖中，C為空白對(duì)照組；P為陽性藥奧拉西坦組。

2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雌性清潔級(jí)昆明小鼠，購自蘭州大學(xué)GLP實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，體重20.0±2.0g；其中從120只小鼠中篩選出75只動(dòng)物用于水迷宮實(shí)驗(yàn)

3、主要儀器：

電子天平(0.0001g)、YLS-17避暗穿梭儀(成都泰盟科技有限公司)。

4、實(shí)施步驟

(1)昆明小鼠的飼養(yǎng)

將體重基本一致的健康成年雌性小鼠飼養(yǎng)在溫度在18～22℃，濕度50％～60％。同時(shí)給予12h日照和12h夜照。

(2)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的篩選

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境3d后，用避暗穿梭儀進(jìn)行智力篩選。先將小鼠進(jìn)行隨機(jī)分組，分組后用酚紅進(jìn)行標(biāo)記并稱量其體重。將各組小鼠分別適應(yīng)避暗環(huán)境3分鐘后進(jìn)行為期1天的避暗篩選實(shí)驗(yàn)，通過避暗實(shí)驗(yàn)選出智力和體力基本一致的小鼠作為評(píng)估生脈復(fù)方提取物功效的模型小鼠。

避暗儀自動(dòng)記錄各組小鼠進(jìn)入暗箱的潛伏期及錯(cuò)誤次數(shù)。

(3)生脈復(fù)方改善小鼠記憶的作用

通過避暗實(shí)驗(yàn)選出智力和體力基本一致的小鼠后，將小鼠進(jìn)行分組，平均分成5組，使得每組的小鼠智力基本一致。分組后的小鼠每天20:00-21:00進(jìn)行灌胃，每只小鼠灌胃0.2ml的各組藥液與蒸餾水，共灌胃30天。30天后用避暗穿梭儀進(jìn)行智力測(cè)試。先將小鼠用苦味酸進(jìn)行標(biāo)記并稱量其體重。將各組小鼠分別適應(yīng)避暗環(huán)境3分鐘后進(jìn)行為期1天的避暗測(cè)試實(shí)驗(yàn)，第二天將各組小鼠放進(jìn)避暗箱中的明處，實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)入暗箱避暗儀自動(dòng)記錄各組小鼠進(jìn)入暗箱的潛伏期和進(jìn)入暗箱的次數(shù)，此為記錄指標(biāo)。

圖3中橫坐標(biāo)表示藥物處理組別，縱坐標(biāo)表示小鼠進(jìn)入暗箱的潛伏期，縱坐標(biāo)數(shù)值越大，表示小鼠的記憶越好。其中，###表示P<0.001，##表示P<0.01，#表示P<0.05。

從圖3中可知，生脈復(fù)方提取物(SM)及陽性藥組(P)均有改善記憶的功效。

圖4的橫坐標(biāo)表示藥物處理組，縱坐標(biāo)表示小鼠進(jìn)入暗箱的錯(cuò)誤次數(shù)，縱坐標(biāo)數(shù)值越小，表示小鼠的記憶越好。其中，###表示P<0.001，##表示P<0.01，#表示P<0.05。

從圖4中可知，生脈提取物(SM)及陽性藥組(P)均有改善記憶的功效。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，生脈復(fù)方提取物(SM)與陽性藥組(P)同空白對(duì)照組(C)相比能顯著改善小鼠的記憶，實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈陽性。

綜上所述，本發(fā)明提供生脈復(fù)方提取物具有改善小鼠記憶的潛力，可作為一種改善記憶的藥品或保健品使用。

實(shí)施例四改善正常小鼠記憶的生脈復(fù)方提取物標(biāo)志性成分檢測(cè)

本實(shí)施例測(cè)定了生脈復(fù)方提取物中總皂苷和總黃酮的含量?？傇碥蘸康臏y(cè)定方法參照《中國藥典》2010版一部中人參總皂苷的含量測(cè)定方法；總黃酮含量的測(cè)定方法參照《中國藥典》2010版一部中山楂葉提取物中總黃酮的含量測(cè)定方法。

結(jié)果表明，改善正常小鼠記憶的生脈復(fù)方提取物中總皂苷的含量為3.09±0.100(g/100g)，總黃酮的含量為17.7±1.19(g/100g)。