本發(fā)明涉及臺灣冬蟲夏草的醫(yī)藥用途，特別是臺灣冬蟲夏草在治療第一型糖尿病和憂郁癥上的醫(yī)藥用途。本發(fā)明又涉及臺灣冬蟲夏草在用于提升體內(nèi)脂聯(lián)素含量上的醫(yī)藥用途。

背景技術(shù)：

昆蟲病原性(entomopathogenic)真菌中的廣義蟲草屬(Cordyceps s.l.(sensu lato))中有部分物種具有藥學(xué)活性，包括有西藏冬蟲夏草(Ophiocordyceps sinensis)和蛹冬蟲夏草(Cordyceps militaris)等物種，是一種極負(fù)盛名的傳統(tǒng)漢藥，長年以來被使用做為補品和民間藥方，與人參、鹿茸并稱“中藥三大寶”。臺灣冬蟲夏草(Ophiocordyceps formosana)是在公元1981年由日人小林氏和清水氏在中國臺灣南投縣溪頭地區(qū)發(fā)現(xiàn)并率先提出報告(Kobayasi,Y.,Bull.Natn.Sci.Mus.,Tokyo.Ser.B 7,p.113-122(1981))，其原本被認(rèn)定為中國臺灣的原生菌種。公元2001年，安徽大學(xué)李春如教授在安徽省黃山地區(qū)也采集到臺灣冬蟲夏草，意味著臺灣冬蟲夏草的分布范圍并不限于中國臺灣(Li,et al.,Mycosystema 24,p.349-355(2005))。臺灣冬蟲夏草非常不容易采集到，因此少有文獻報告，也沒有足夠的材料針對其可能的醫(yī)藥用途做進一步的鑒定和探討。

在中國專利申請CN201520126690.X中，申請人公開了一種新穎的臺灣冬蟲夏草分離株，通過形態(tài)學(xué)、生化學(xué)和系統(tǒng)發(fā)生學(xué)上的分析顯示出，其適合做為臺灣冬蟲夏草這個物種的一個典型菌株。該件專利申請進一步公開，臺灣冬蟲夏草在抗氧化活性和癌細(xì)胞抑制活性上較廣義蟲草屬中的其他物種更為優(yōu)越，而且對于正常細(xì)胞具有更低的毒性。

糖尿病是一個以血糖長時間高于標(biāo)準(zhǔn)值為主要特色的代謝性疾病。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計，公元2013年全球共有三億八千二百萬名糖尿病患者，預(yù)計公元2035年全球患者將增長到五億九千二百萬名。美國國內(nèi)在公元2014年即有高達兩千九百萬人罹患糖尿病，而在中國臺灣地區(qū)則估計超過百萬人。糖尿病于公元2012年仍高居中國臺灣地區(qū)居民十大死因第四位。糖尿病不但嚴(yán)重影響民眾健康，對于各國醫(yī)療和財政體系更是造成巨大負(fù)擔(dān)。

在臨床上，糖尿病大致可區(qū)分為四種類型：第一型糖尿病、第二型糖尿病、妊娠期糖尿病(gestational diabetes)和續(xù)發(fā)性糖尿病，其中第一型糖尿病早年又被稱為胰島素依賴型糖尿病(IDDM)，其成因可能是由于患者慢性自體免疫失調(diào)、受到病毒感染或是受到環(huán)境因子和遺傳因子所影響，致使產(chǎn)生胰島素的胰島β細(xì)胞遭到破壞，造成患者體內(nèi)停止制造胰島素。患者通常必須注射外源性胰島素來代謝體內(nèi)的葡萄糖，而胰臟移植、β細(xì)胞移植等其他療法在臨床上都有所限制，故治療效果有限。相較于其他類型的糖尿病，第一型糖尿病常見于兒童和青少年，所以又曾經(jīng)被稱為“幼年型糖尿病(juvenile-onset diabetes)”。在中國臺灣地區(qū)，根據(jù)公元2002及2004年的調(diào)查，第一型糖尿病患者約占所有糖尿病患者的2-4％。

羅格列酮(rosiglitazone)等噻唑烷二酮類(thiazolidinediones；TZDs)藥物在臨床上常用于控制糖尿病患者的血糖，但給予這類藥物也經(jīng)常引起胃痛、腹瀉、心臟衰竭和水腫等不良副作用。

此外，糖尿病患者不僅面對著體重下降、體液消耗增加、尿頻等典型臨床問題，根據(jù)統(tǒng)計顯示，糖尿病患者中更約有15％有罹患憂郁癥和焦慮癥的風(fēng)險，而第一型糖尿病患者相較于第二型糖尿病患者在貝克氏憂郁量表(Beck depression inventory score)上的評分更高，因而具有更高的憂郁癥風(fēng)險。治療憂郁癥的藥物可大致區(qū)分為第一代抗憂郁劑與第二代抗憂郁劑。第一代的三環(huán)/雜環(huán)抗憂郁劑(tricyclic and tetra/heterocyclic antidepressants；TCAs)會導(dǎo)致人體高血糖。雖然第二代的選擇性血清回收抑制劑(selective serotonin re-uptake inhibitors(SSRIs))已被廣泛地使用作為治療憂郁癥的第一線用藥，但是這類藥物容易產(chǎn)生惡心、厭食、性無能等副作用，對糖尿病患者而言更容易造成血糖失調(diào)。因此，相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域中極需一種新的醫(yī)藥組成物，其對于第一型糖尿病及/或憂郁癥具有治療或預(yù)防上的有效性，而且對于人體和動物體具有高安全性。

郭等人曾報導(dǎo)，西藏冬蟲夏草(Ophiocordyceps sinensis)和釩可以協(xié)同作用于改善大鼠的糖尿病和憂郁癥癥狀(Guo J.Y.et al.,Evid Based Complement Alternat Med,2011；Article ID 450316)，但單獨給予西藏冬蟲夏草則沒有功效。中國臺灣專利公開案第201136599號公開了蟬花(Cordyceps sobolifera)的發(fā)酵培養(yǎng)物有用于治療或預(yù)防糖尿病及其并發(fā)癥。廣義蟲草屬中只有部分物種被證實具有藥學(xué)活性，而且這些藥用蟲草物種的適應(yīng)癥也彼此不盡相同?；谏鲜鑫墨I并無從推知臺灣冬蟲夏草的藥學(xué)活性。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本申請發(fā)明人已針對臺灣冬蟲夏草的藥學(xué)活性進行廣泛的研究?，F(xiàn)在，本申請發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，臺灣冬蟲夏草，特別是本申請所公開的臺灣冬蟲夏草分離株，能夠改善第一型糖尿病及其所引起的并發(fā)癥，也可以促進脂聯(lián)素和各種神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)在脂肪組織和腦邊緣區(qū)域內(nèi)的含量。本申請發(fā)明人更通過在小鼠體內(nèi)引發(fā)第一型糖尿病所建立起來的憂郁癥動物模式，發(fā)現(xiàn)臺灣冬蟲夏草，特別是本申請所公開的臺灣冬蟲夏草分離株，在改善焦慮癥和憂郁癥上具有優(yōu)越效果。本申請的公開內(nèi)容顯示出，臺灣冬蟲夏草對于治療第一型糖尿病及其并發(fā)癥和憂郁癥有效，因而可供用作治療這些疾病的補充性或替代性藥物。

因此，在本申請所公開的第一方面是提供一種臺灣冬蟲夏草的用途，其供用于制造一用來在一個體中治療第一型糖尿病及其并發(fā)癥的醫(yī)藥品。優(yōu)選為所述第一型糖尿病的并發(fā)癥選自由高血糖癥、糖尿病酮酸中毒、高血糖高滲透壓狀態(tài)、低血糖癥、憂郁癥、體重下降、神經(jīng)病變、腎臟病變、發(fā)炎、心血管和高膽固醇并發(fā)癥、眼部病變和肝臟病變所組成的群組。更優(yōu)選為所述第一型糖尿病的并發(fā)癥選自由高血糖癥、憂郁癥和體重下降所組成的群組。

在本申請所公開的第二方面是提供一種臺灣冬蟲夏草的用途，其供用于制造一用來在一個體中治療憂郁癥的醫(yī)藥品。

在本申請所公開的第三方面是提供一種臺灣冬蟲夏草的用途，其供用于制造一用來在一個體中增加脂聯(lián)素含量的醫(yī)藥品。

附圖說明

圖1為本申請各實施例的實驗流程概圖；

圖2A為一柱狀圖，顯示各組糖尿病小鼠模型在實驗期間的體重變化；

圖2B為一柱狀圖，顯示各組糖尿病小鼠模型在灌食處理后接受葡萄糖耐量試驗(POST GTT)所得到的斷食血糖值的曲線下方面積(AUC)；

圖2C為一示意圖，顯示各組糖尿病小鼠模型的皮下脂肪組織累積情形；

圖3A為一柱狀圖，顯示各組糖尿病小鼠模型的血漿中脂聯(lián)素含量；

圖3B為白色皮下脂肪組織(SAT)的脂聯(lián)素染色切片影像；

圖3C為一柱狀圖，顯示圖3B切片影像中的脂聯(lián)素信號強度數(shù)值；以及

圖4A-4C為柱狀圖，分別顯示各組糖尿病小鼠模型在曠場任務(wù)試驗(OFT)、高架十字迷宮試驗(EPM)和懸尾試驗(TST)中的表現(xiàn)。

具體實施方式

除非另行說明，否則本申請專利說明書和各權(quán)利要求中所使用的下列用語具有下文給予的定義。請注意，本申請說明書和各權(quán)利要求中所使用的單數(shù)形用語“一”是指涵蓋在一個以及一個以上的所載事項，例如至少一個、至少二個或至少三個，而非意味著僅僅具有單一個所載事項。此外，本申請各權(quán)利要求中使用的“包含”、“包括”等開放式連接詞是表示權(quán)利要求中所記載的元件或成分的組合中，不排除權(quán)利要求未載明的其他元件或成分。

本說明書中所使用的術(shù)語“臺灣冬蟲夏草”是指涵蓋被分類于Cordyceps formonsana的物種以及被分類于Ophiocordyceps formosana的物種中的所有分離株，特別是依據(jù)RPB1、RPB2和EF1-α基因的核苷酸序列相同性，而被分類于Ophiocordyceps formosana的物種中的所有分離株。這些臺灣冬蟲夏草菌株包括本領(lǐng)域技術(shù)人員可易于獲得的臺灣冬蟲夏草菌株，例如可由國內(nèi)或國外寄存機構(gòu)購買或是通過申請分享而獲得的分離株，或者是利用本技術(shù)領(lǐng)域中所慣用的微生物分離方法而從天然來源中分離出來的臺灣冬蟲夏草菌株。在一優(yōu)選實施方案中，所述臺灣冬蟲夏草為本申請所公開的臺灣冬蟲夏草分離株，其是以BCRC 930172的寄存編號被寄存在中國臺灣食品工業(yè)發(fā)展研究所(Food Industry Research and Development Institute,FIRDI)的生物資源保存及研究中心(Biosource Collection and Research Center,BCRC)，以及以DSM 32000的寄存編號被寄存在德國微生物菌種保藏中心(DSMZ)。

本申請所公開的臺灣冬蟲夏草分離株可以參照常用的蟲草菌絲體培養(yǎng)方法進行菌絲體的培養(yǎng)和增殖。一般來說，適合于蟲草菌絲體的培養(yǎng)條件為使用葡萄糖、蔗糖、半乳糖、果糖、玉米淀粉、麥芽萃出物或是其組合作為碳源，且使用硫酸銨、硝酸銨、硝酸鈉、酪蛋白氨基酸(casamino acid)、酵母菌萃出物、蛋白胨(peptone)及胰化胨(tryptone)或是其組合做為氮源，另將培養(yǎng)基的酸堿值調(diào)整到中性至微酸性，優(yōu)選為pH 5.0-7.0，例如pH 5.5-6.0。在一優(yōu)選的實施方案中，所述培養(yǎng)基是適合搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)以獲取蟲草菌絲體的液態(tài)培養(yǎng)基，例如馬鈴薯右旋糖液態(tài)培養(yǎng)基(potato dextrose broth)。在另一優(yōu)選實施方案中，所述培養(yǎng)基是固態(tài)培養(yǎng)基，例如馬鈴薯右旋糖瓊脂(PDA)或沙氏右旋糖瓊脂酵母菌萃出物(S-DAY)。培養(yǎng)溫度優(yōu)選為被控制在室溫或略低于室溫，例如15℃-25℃。

大體來說，冬蟲夏草不容易以人工培養(yǎng)方式生產(chǎn)子實體，通常只能利用發(fā)酵技術(shù)大量生產(chǎn)菌絲體。雖然目前已經(jīng)成功地使用人工培養(yǎng)方式培養(yǎng)出蛹冬蟲夏草的子實體，但子實體長成所需要的時間長，且子實體的出菇率低且變異率高，因此仍以菌絲體的生產(chǎn)較具經(jīng)濟效益。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，蟲草子實體中的腺苷和蟲草素(cordycepin)等活性成份的含量遠比菌絲體高，因此一般認(rèn)為蟲草子實體相比于菌絲體具有更高的藥用價值。然而，依據(jù)本申請說明書的公開內(nèi)容，臺灣冬蟲夏草，特別是本申請所公開的臺灣冬蟲夏草分離株，其菌絲體萃出物也能夠顯示出優(yōu)越的醫(yī)藥活性。

本申請說明書中所使用的術(shù)語“第一型糖尿病”是指因胰臟β細(xì)胞遭受破壞而使得胰臟無法分泌胰島素或分泌量過低所造成的糖尿病。第一型糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生多半是由于血糖濃度失調(diào)，而相比于第二型糖尿病患者，第一型糖尿病的患者罹患并發(fā)癥的機率也比較高。

尤其是，在第一型糖尿病患者未規(guī)律注射胰島素時，會發(fā)生血糖濃度過高，即其典型癥狀高血糖癥(hyperglycemia)。如果第一型糖尿病患者持續(xù)處于胰島素含量過低的狀態(tài)，身體不能利用葡萄糖作為能量來源，而使用體內(nèi)的脂肪來替代，則脂肪代謝所產(chǎn)生的過量酮體在體內(nèi)累積后便導(dǎo)致糖尿病酮酸中毒(diabetic ketoacidosis；DKA)，長期下來更會造成體重下降。糖尿病酮酸中毒的一般癥狀包括：容易饑餓、極度干渴、頻尿、呼吸困難、腹痛、心律不齊、低血壓、休克、呼氣帶有酸味或果味、厭食甚至惡心、嘔吐等。此外，體內(nèi)高血糖也會導(dǎo)致滲透性利尿作用，導(dǎo)致水份通過尿液大量喪失而呈現(xiàn)明顯的脫水現(xiàn)象。若未適當(dāng)補充水分，就會造成高血糖高滲透壓狀態(tài)(hyperglycemic hyperosmolar state；HHS)，患者意識狀態(tài)逐漸變差，四肢肌肉抽動、嚴(yán)重時會導(dǎo)致昏迷和休克。

此外，由于第一型糖尿病的患者需要長期注射胰島素來控制血糖，一旦胰島素注射過量就容易導(dǎo)致血糖濃度過低，在臨床上造成急性的低血糖癥(hypoglycemia)。低血糖癥發(fā)生時常伴隨著心動過速、盜汗、皮膚蒼白、焦躁不安、四肢麻木、嗜睡、慌亂困惑、頭痛等癥狀。

糖尿病病人通常合并多種引發(fā)心血管病變的危險因子，血糖濃度的長期失調(diào)對于大、小血管造成傷害，高血糖會造成動脈硬化，也會使微血管壁增厚、血液濃稠，降低通往皮膚、手臂、腿和腳的血液循環(huán)，也會改變眼睛與及腎臟的血液循環(huán)，進而引起慢性且不可逆轉(zhuǎn)的并發(fā)癥。大血管病變是指心臟冠狀動脈或腦血管，而小血管病變是指微細(xì)小動脈病變，如視網(wǎng)膜、腎臟及周圍神經(jīng)病變。糖尿病引起的神經(jīng)病變會導(dǎo)致麻痹，有時也會引起手、手臂、腳和腿的疼痛與無力。神經(jīng)病變亦可造成消化系統(tǒng)、心臟和性器官的問題。若傷害出現(xiàn)在下肢末梢小動脈就會造成糖尿病足，這是是糖尿病人截肢的主要原因。

第一型糖尿病幾乎無法根治，一旦沒有及早發(fā)現(xiàn)并接受妥善治療更容易引起不可逆轉(zhuǎn)的慢性并發(fā)癥，進而導(dǎo)致患者因長期處于病情逐漸惡化、生活作息飲食改變和醫(yī)療支出增加的多重壓力下而并發(fā)焦慮癥和憂郁癥?；颊呙鎸毫λ鸬木趩?、憂郁、焦慮、緊張、憤怒等癥狀，更容易促進體內(nèi)腎上腺皮質(zhì)素、腎上腺素和升糖激素的分泌，使高血糖癥狀更加明顯而造成糖尿病的惡化。

鏈佐霉素(streptozotocin；簡寫為STZ)的IUPAC命名是2-脫氧-2-({[甲基(亞硝基)胺基]羰基}胺基)-β-D-葡萄哌喃糖，它是一種對于胰臟β細(xì)胞具有選擇性細(xì)胞毒性的天然物質(zhì)。因此，在相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域中經(jīng)常用于建立第一型糖尿病的動物模型。本發(fā)明通過這個常用的動物模型來檢驗臺灣冬蟲夏草在第一型糖尿病及其并發(fā)癥上的醫(yī)藥用途。依據(jù)本發(fā)明，給予臺灣冬蟲夏草可以改善第一型糖尿病的典型癥狀，即高血糖癥。如前所述，高血糖癥所導(dǎo)致的血糖濃度失調(diào)是造成第一型糖尿病后續(xù)發(fā)生急性和慢性并發(fā)癥的根本因素，所以給予臺灣冬蟲夏草也將有利于改善這些并發(fā)癥，而本申請的實施例也示例性地顯示了給予臺灣冬蟲夏草確實可以改善第一型糖尿病所引起的體重下降、焦慮癥和憂郁癥等并發(fā)癥。

因此，本發(fā)明的一個方面是提供一種臺灣冬蟲夏草的用途，其供用于制造一用來在一個體中治療第一型糖尿病及其并發(fā)癥的醫(yī)藥品。此處所稱“并發(fā)癥”是指伴隨著第一型糖尿病的發(fā)展及其治療過程所顯現(xiàn)的急性和慢性癥狀。優(yōu)選為所述第一型糖尿病的并發(fā)癥選自由高血糖癥、糖尿病酮酸中毒、高血糖高滲透壓狀態(tài)和低血糖癥等急性并發(fā)癥，以及憂郁癥、體重下降、神經(jīng)病變(包括但不限于肢端麻痹、膀胱耗弱、便秘、腹瀉、性無能和知覺喪失)、腎臟病變(包括但不限于腎小球性腎炎、腎絲球硬化癥、腎病癥候群、高血壓腎硬化癥、尿酸血癥、末期腎病和尿毒癥)、發(fā)炎、心血管和高膽固醇并發(fā)癥(包括但不限于中風(fēng)、心肌梗塞、冠狀動脈血栓癥、心絞痛、心臟衰竭、周邊循環(huán)不良、壞疽和足部感染)、眼部病變(包括但不限于視網(wǎng)膜病變、白內(nèi)障、青光眼和視野縮減)和肝臟病變(包括但不限于肝纖維化、脂肪肝和肝硬化)等慢性并發(fā)癥所組成的群組。更優(yōu)選為所述第一型糖尿病的并發(fā)癥選自由高血糖癥、憂郁癥和體重下降所組成的群組。

在一實施方案中，所述第一型糖尿病的并發(fā)癥為高血糖癥，其是指相較于正常個體的基準(zhǔn)斷食血糖數(shù)值更高的血糖數(shù)值。就人類個體而言，通常為高于100mg/dl的血糖值，例如高于110mg/dl的斷食血糖值，或是進食2小時后高于140mg/dl的血糖值。如下文實施例3所示，第一型糖尿病所引發(fā)的高血糖癥可以通過給予臺灣冬蟲夏草而獲得改善。

在一實施方案中，所述第一型糖尿病的并發(fā)癥為體重下降，其是指第一型糖尿病患者在體重、身體質(zhì)量指數(shù)(BMI)或其他類型的身體質(zhì)量度量上的任何減少。如下文實施例2、3所示，第一型糖尿病所引發(fā)的體重下降和皮下脂肪組織減少都可通過給予臺灣冬蟲夏草而獲得改善。

在一實施方案中，所述第一型糖尿病的并發(fā)癥為憂郁癥，其泛指未接受藥物治療下發(fā)生持續(xù)至少兩周的情緒低落或興趣喪失，其范圍是指涵蓋從一般性的心情不佳、輕度憂郁乃至于重郁癥(major depressive disorder)的所有臨床癥候群，優(yōu)選為通過美國精神醫(yī)學(xué)會所出版的精神疾病診斷與統(tǒng)計手冊(The Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders)第四版或第五版(簡稱DSM-IV和DSM-5)所記載方法進行診斷而確定為憂郁癥。由于焦慮和憂郁在臨床癥狀上多有重疊，而且在用藥上許多抗憂郁藥物也有抗焦慮效果，本申請中所述“憂郁癥”也涵蓋焦慮性疾患(anxiety disorder)。在一優(yōu)選實施方案中，所述“憂郁癥”包括但不限于重郁癥、輕性抑郁癥(minor depression)、躁郁癥(bipolar disorder)、持續(xù)型輕郁癥(dysthymia)、持續(xù)性輕躁癥(cyclothymia)、經(jīng)期前癥候群(pre-menstrual syndrome)、經(jīng)期前情緒障礙癥(premenstrual dysphoric disorder)、廣泛性焦慮癥(generalized anxiety disorder)、恐慌癥(phobia，包括社交恐懼癥(social phobia)、幽閉恐懼癥(claustrophobia)和廣場恐懼癥(agoraphobia)等特定對象恐慌癥、恐慌性障礙(panic disorder)、強迫癥(obsessive compulsive disorder)和創(chuàng)傷后壓力障礙癥(post-traumatic stress disorder))、暴食癥(bulimia)、厭食癥(anorexia)、青少年憂郁癥(adolescent depression)和拔毛癖(trichotillomania)。

本申請采用三種廣泛使用的憂郁癥和焦慮癥動物行為試驗來評估臺灣冬蟲夏草對于憂郁癥的治療效果。

高架十字迷宮試驗(EPM)由亨德利等人于1984年首次提出，其原理在于：小鼠等嚙齒類動物對未知新環(huán)境具有喜好探索的天性，但處于高架十字迷宮中高懸的開放臂時又會因其厭惡高度和空曠的天性而形成恐懼心理，藉此造成矛盾心理以模擬焦慮癥狀。由于小鼠對于開放臂的偏好程度與其焦慮程度呈負(fù)相關(guān)，意味著小鼠進入開放臂的時間越長、次數(shù)越多，代表焦慮程度越低。

懸尾試驗(TST)是將小鼠尾巴吊起而呈倒掛狀態(tài)懸于半空中，計算其掙扎扭動的時間和不再扭動的時間。小鼠變得無助而不再掙脫扭動的時間越長，代表其憂郁失望、自我放棄的程度越高。

曠場任務(wù)試驗(OFT)的原理在于，試驗裝置的邊緣設(shè)有墻壁，小鼠等嚙齒類動物傾向于在周邊活動相對有安全感，而中央空曠區(qū)域就是沒有屏障的曠野。如果小鼠停留在空曠區(qū)域的次數(shù)和時間增加，即表示焦慮程度減輕。

如下文實施例5所示，上述三種動物行為試驗一致性地顯示出，由第一型糖尿病所引發(fā)的憂郁癥癥狀可以通過給予臺灣冬蟲夏草而改善。然而，根據(jù)本發(fā)明的另一方面，第一型糖尿病是被選用作為代表性的憂郁癥引發(fā)模型，因為通過其所引發(fā)的典型憂郁癥癥狀也普遍出現(xiàn)于許多承受其他類型的生理、心理和環(huán)境壓力的患者中。因此，本申請也包含一種臺灣冬蟲夏草的用途，其供用于制造一用來在一個體中治療憂郁癥的醫(yī)藥品，其中所述“憂郁癥”不局限于由第一型糖尿病所引發(fā)，也涵蓋因罹患其他慢性疾病、濫用藥物、酗酒、喪親或經(jīng)歷其他環(huán)境壓力所引起的憂郁癥。

本申請另包含一種臺灣冬蟲夏草的用途，其供用于制造一用于在一個體中增進脂聯(lián)素(adiponectin)含量的醫(yī)藥品。脂聯(lián)素亦被稱為GBP-28、apM1、AdipoQ和Acrp30，是一種由脂肪組織分泌至血液中的蛋白質(zhì)激素，其作用涉及葡萄糖的代謝和脂肪酸的氧化。目前已經(jīng)知道，血液中脂聯(lián)素的濃度過低與胰島素抗性、高血壓、高三酸甘油酯、動脈硬化癥的發(fā)生相關(guān)。相較于未患有糖尿病的人，糖尿病患者體內(nèi)的脂聯(lián)素含量通常較低，而且脂聯(lián)素有助于改善身體對于胰島素的敏感性(Yamauchi T.et al.,Nat Med.2001Aug；7(8):941-6)。提升脂聯(lián)素在血液或腦內(nèi)的濃度可以改善實驗動物的憂郁表現(xiàn)(Liu,J.,et al.,Proc Nat Acad Sci,2012,109:12248-12253；以及Yau S.Y.et al.,Proc Nat Acad Sci,111:15810-15815)。這些事實都指出，增加體內(nèi)的脂聯(lián)素含量不僅可以改善糖尿病及其并發(fā)癥，也有助于改善憂郁癥的癥狀。

如下文實施例4所示，臺灣冬蟲夏草萃出物可以向上調(diào)控內(nèi)源性(endogenous)脂聯(lián)素在SAT中的表現(xiàn)量和血液循環(huán)中的濃度。就人類個體而言，“脂聯(lián)素”這個術(shù)語是指脂聯(lián)素前驅(qū)物(序列識別號：第1號)、刪除位于該前驅(qū)物的N-端14個或17個胺基酸引導(dǎo)序列的成熟全長脂聯(lián)素、彼等的轉(zhuǎn)譯后修飾形式(包括糖基化形式和球狀脂聯(lián)素(globular adiponectin))，以及彼等的天然寡聚體，例如三聚體、六聚體和十二聚體?！霸鲞M脂聯(lián)素含量”這個術(shù)語是指使內(nèi)源性脂聯(lián)素于給藥后的體內(nèi)含量提升至比給藥前更高的水平，這可通過取得個體的血液樣品并測量其中的脂聯(lián)素含量來進行判斷。就人類來說，脂聯(lián)素在血液中的含量依個人體質(zhì)和性別不同而有所差異，一般位于5至10微克/毫升之間。在給予臺灣冬蟲夏草的個體是人類的情形下，優(yōu)選為脂聯(lián)素在血液中含量提升至5至10微克/毫升甚至更高的濃度，例如1微克/毫升至100微克/毫升的濃度，優(yōu)選為5微克/毫升至75微克/毫升的濃度，例如10微克/毫升至50微克/毫升。

如本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，憂郁癥的發(fā)生與腦中多巴胺(dopamine)、血清素(serotonin)與去甲腎上腺素(norepinephrine)等單胺類神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)的缺乏和失衡密切相關(guān)。因此，目前許多的抗憂郁和抗焦慮藥物都以提升腦邊緣區(qū)域內(nèi)的單胺類神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)為主要目標(biāo)。值得注意的是，下視丘內(nèi)的血清素含量會隨著糖尿病所引起的高血糖癥而上升，意味著控制血糖濃度也有助于改善憂郁癥。下文實施例6的數(shù)據(jù)顯示，臺灣冬蟲夏草萃出物可以明顯提升上述神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)及其代謝物在腦邊緣區(qū)域內(nèi)的含量。

雖然不希望被任何理論所拘束，但本申請的公開內(nèi)容顯示，臺灣冬蟲夏草可能通過至少三種不同途徑來改善憂郁癥的癥狀：(1)降低血糖濃度；(2)提升體內(nèi)脂聯(lián)素的表現(xiàn)量；以及(3)提升腦邊緣區(qū)域內(nèi)的單胺類神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)含量。

本說明書所稱“治療”等用語是指將本申請說明書所述疾病或是它們的一或多種癥狀的進展予以逆轉(zhuǎn)、緩和、延遲發(fā)作或抑制。在一些實施方案中，治療可在發(fā)展出一或多種癥狀后再進行。在其他實施方案中，治療可在無癥狀下進行。例如，治療可在癥狀發(fā)作前進行至易染病個體(例如根據(jù)癥狀歷史及/或根據(jù)遺傳或其他感病性因素)。治療亦可于癥狀解除后持續(xù)進行，以進行預(yù)防或延遲其復(fù)發(fā)。

依據(jù)本申請公開內(nèi)容，可以將能夠有效治療本申請說明書所述疾病或是將能夠有效減緩這些疾病的嚴(yán)重性的任何用量的臺灣冬蟲夏草，通過任何投藥途徑給予需要的個體。所需要的精確用量隨個體不同而有別，依據(jù)個體的物種、年齡和健康情況、性別和飲食、患病的嚴(yán)重性、特定藥劑形式、投藥模式、治療持續(xù)時間以及合并使用或同時使用的藥劑等因素而定。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道，臺灣冬蟲夏草的每日總和用量將在合理醫(yī)學(xué)判斷的范疇內(nèi)由醫(yī)師來決定。當(dāng)給予人類個體時，臺灣冬蟲夏草萃出物通常是以每日一至三次、每周一至三次或是每雙周一次的頻率，以每次約0.01-1000毫克/公斤體重的用量進行給予，優(yōu)選為以每次約0.1-100毫克/公斤體重的用量給予，更優(yōu)選為以每次約1-50毫克/公斤體重的用量給予。在一實施方案中，臺灣冬蟲夏草的給予量可以使人類個體的血糖值低于約100mg/dl的血糖值，例如斷食血糖值低于約110mg/dl，或是進食2小時后的血糖值低于約140mg/dl。在另一實施方案中，臺灣冬蟲夏草的給予量可以使人類個體血液中的脂聯(lián)素含量達到1微克/毫升至100微克/毫升的濃度，優(yōu)選為5微克/毫升至75微克/毫升的濃度，例如10微克/毫升至50微克/毫升的濃度。

本申請說明書中所使用的術(shù)語“個體”是指涵蓋人類或非人類脊椎動物，例如非人類哺乳動物。非人類哺乳動物包括畜產(chǎn)動物、伴侶動物、實驗動物和非人類靈長類動物。非人類哺乳動物非限制性地包括有馬、牛、豬、山羊、狗、貓、小鼠、大鼠、天竺鼠、倉鼠、兔、貂等。優(yōu)選為人類，且更優(yōu)選為罹患第一型糖尿病及其并發(fā)癥的人類個體，或是罹患憂郁癥的人類個體。

為了供研究之用，本申請說明書中所使用的術(shù)語“個體”也是指涵蓋細(xì)胞、組織和器官。本申請所公開的發(fā)明也因而不僅適用于活體內(nèi)，也適用于活體外。

臺灣冬蟲夏草可以子實體和菌絲體的形式給予個體。由于子實體不易培養(yǎng)，所以優(yōu)選為呈菌絲體的形式給予個體，更優(yōu)選為呈菌絲體的干燥粉碎顆粒、水性萃出物或是水性萃出物的制劑的形式給予個體。

可以使用研磨機將干燥后的冬蟲夏草子實體或菌絲體直接予以研磨，而制成前述干燥粉碎顆粒。干燥粉碎顆粒的粒徑并無特別限制，只要適合于直接給予個體且有利于個體的攝取和吸收，或是有利于進一步加工制成其他適合給予個體的形式即可。

可以選用任何常規(guī)方法來制備出蟲草的水性萃出物，只要所述萃取方法可以有效地將蟲草的水溶性以及水可混溶性組份由蟲草的固體部分轉(zhuǎn)移至水性溶劑中即可。一般來說，所述萃取方法包括將臺灣冬蟲夏草的子實體或菌絲體加以粉碎，再以水、具有1至6個碳原子且優(yōu)選為1至4個碳原子的低級醇類(例如甲醇、乙醇)或其組合等水性溶劑進行萃取操作，且優(yōu)選為在萃取操作進行同時施加熱能、超聲波振蕩或機械性攪拌等手段來促進萃取的效率，最后再以過濾、離心等手段去除固體部分，從而獲得蟲草的水性萃出物。優(yōu)選為所述萃取方法是選自于由浸提法、熱水回流法、熱醇回流法、超聲波水提法，超聲波醇提法所組成的群組。在一較佳實施方案中，是以熱水回流法來制備臺灣冬蟲夏草的水性萃出物，也就是使定量熱水持續(xù)地流過蟲草材料以提取水性萃出物，優(yōu)選為熱水溫度為30-100℃，更優(yōu)選為40-60℃，最優(yōu)選為45-55℃，例如50℃，而且萃取操作歷時30分鐘至12小時，優(yōu)選為1-6小時，例如2小時。在一優(yōu)選實施方案中，萃取操作的效率可以通過D-甘露醇、腺苷及/或蟲草素等蟲草活性成份的萃出量來進行評估。

前述臺灣冬蟲夏草的水性萃出物可經(jīng)調(diào)制成適當(dāng)濃度后，再配制成口服形式或非經(jīng)腸形式而給予個體。調(diào)制這些給予形式時，可加入例如填充劑、膨化劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、界面活性劑等稀釋劑，或是加入其他類型的賦形劑。

口服用液態(tài)制劑的形式包括懸浮液、溶液(糖漿、飲料等)、乳劑等。除了可以添加水或液態(tài)石蠟等最常用的稀釋劑以外，也可額外添加濕潤劑、增甜劑、調(diào)味劑以及防腐劑?？诜霉虘B(tài)制劑的形式包括錠劑、藥丸、粉末、顆粒、膠囊、糖錠等。

非經(jīng)腸給予用制劑的形式包括無菌溶液、非水性溶液、懸浮液、乳劑、冷凍干燥劑等。非水性溶液用溶劑、懸浮液或乳劑所使用的溶劑包括但不限于蔬菜油、丙二醇、聚乙二醇、橄欖油及油酸乙酯。

一般而言，這些制劑是通過將至少一種賦形劑加入前述粉碎顆?；蛩暂统鑫镏校匾獣r加以干燥，然后再進行造粒、打錠或囊封而制備出來。所述賦形劑包括但不限于水、具有1至4個碳原子的低級醇類、天然油或合成油、膠凝劑、助懸劑、乳化劑、增稠劑、惰性粉末、天然和合成的聚合物、濕潤劑、增甜劑、調(diào)味劑、芳香劑、香料、著色劑，防腐劑、潤滑劑、介面活性劑。優(yōu)選的賦形劑包括但不限于水、乙醇、淀粉、碳酸鈣、蔗糖、乳糖、明膠、樹膠類、糊精、環(huán)糊精、微晶性纖維素、羧甲基纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉等。此外，除了單純地添加賦形劑以外，還可加入例如硬脂酸鎂、滑石等潤滑劑。

因此，本申請所公開的冬蟲夏草組合物包含臺灣冬蟲夏草子實體或菌絲體的水性萃出物或是干燥粉碎顆粒，且任選地包含有一可接受的賦形劑。本申請所稱“可接受的賦形劑”是指被使用做為本申請冬蟲夏草組合物的載體的惰性物質(zhì)，其對于給予的個體不具有毒性、刺激性、熱原性、抗原性及溶血性，而且無實質(zhì)的藥理活性，也不會妨礙本申請冬蟲夏草組合物的有益效果的發(fā)揮。本申請所公開的另一方面為一種保健食品，其包含前述的冬蟲夏草組合物，以供直接食用、入菜、摻混于飲料、零食、動物飼料、膳食補充品、其他中草藥材等各種可食性材料中，或是包裝成其他適合服用的形式，例如將前述干燥粉碎顆粒以茶袋包裝成茶包形式以供沖泡飲用。在一優(yōu)選實施方案中，本申請所公開的冬蟲夏草組合物可以搭配來自于其他蟲草物種的組合物，例如搭配來自于西藏冬蟲夏草及/或蛹冬蟲夏草的子實體或菌絲體組合物，從而調(diào)配成適合個體攝取且能兼顧安全性及有效性的健康食品和醫(yī)藥品。

在另一優(yōu)選實施方案中，本申請的冬蟲夏草組成物主要由如前所述的臺灣冬蟲夏草分離株的水性萃出物或是干燥粉碎顆粒及前述可接受的賦形劑所組成。此處所稱“主要由…所組成”意指所記載的成分組合中不排除另外含有實質(zhì)上不會影響水性萃出物或是干燥粉碎顆粒的性質(zhì)的其他沒有述及的結(jié)構(gòu)組成部分。在另一優(yōu)選實施方案中，本申請的冬蟲夏草組成物僅由前述臺灣冬蟲夏草分離株的水性萃出物或是干燥粉碎顆粒及前述可接受的賦形劑所組成。

下列實施例僅供用于例示，而非意在限制本發(fā)明的范圍。實施例中所顯示的所有數(shù)據(jù)都經(jīng)由至少三個獨立實驗來完成，且以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示的。統(tǒng)計學(xué)分析是利用單因子變異數(shù)分析(ANOVA)再進行杜凱氏測驗(Tukey’s test)或司徒登氏測驗(Student’s test)來完成，并通過實施例中所述方式判定其顯著性。

實施例1：臺灣冬蟲夏草萃出物(OFE)的制備

本申請各實施例中所使用的臺灣冬蟲夏草萃出物是由以BCRC930172的寄存編號被寄存在中國臺灣食品工業(yè)發(fā)展研究所(Food Industry Research and Development Institute,FIRDI)的生物資源保存及研究中心(Biosource Collection and Research Center,BCRC)，以及以DSM 32000的寄存編號被寄存在德國微生物菌種保藏中心(DSMZ)的臺灣冬蟲夏草分離株，運用中國專利申請CN201520126690.X中所公開的方法所生產(chǎn)出來。簡單來說，將上述臺灣冬蟲夏草分離株的菌絲體轉(zhuǎn)移至含有0.4％馬鈴薯淀粉、2％右旋糖和1.5％瓊脂的馬鈴薯右旋糖瓊脂培養(yǎng)基中(PDA；購自于位在美國馬里蘭州Sparks市的Difco Becton Dickinson公司)，并在25℃下予以培植28日。在55℃下將所采收到的菌落加以干燥至隔日，再將其儲存在干燥器(desiccator)中，供后續(xù)分析或制作萃出物之用。

運用一臺均質(zhì)機(日本Kurabo公司所出品的SH-100型均質(zhì)機)在1300rpm的運轉(zhuǎn)速度下將經(jīng)干燥的蟲草樣品加以粉碎。在一個50毫升離心管(購自于美國Becton Dickinson and Company)中，以固體相對于溶劑的比例為1：40的條件，使1克冬蟲夏草粉末溶于去離子水中，并施以振蕩30秒。接著，使50℃熱水回流2小時來進行萃取操作(前30分鐘另施加超聲波振蕩)。經(jīng)過在4000rpm(約3200×g)下加以離心20分鐘后，收集上清液，并通過0.22微米孔徑的濾器(美國Millipore公司)進行過濾。

所得到的臺灣冬蟲夏草萃出物接受高效液相層析(日立D-2000型HPLC管理系統(tǒng))，以監(jiān)控萃出物中的內(nèi)容物質(zhì)量和含量。高效液相層析是在RP-18管柱(150252STAR RP-18endcapped(5μm)250-4；美國Merck公司)中進行，流速為每分鐘1毫升。流動相的組成為20％甲醇/H₂O。萃出物儲存在-20℃供下列實施例使用。

實施例2：糖尿病動物模式

由位于臺北市的財團法人國家實驗研究院實驗動物中心(NLAC)購得30只8周齡雄性C57BL/6小鼠(平均體重20±3克)。飼養(yǎng)小鼠的環(huán)境溫度保持在21±3℃，相對濕度50±10％，日夜周期為12/12小時。小鼠在標(biāo)準(zhǔn)動物房中適應(yīng)7天后，才進行分組與試驗。使24只小鼠斷食6小時后，經(jīng)由腹腔注射給予每只小鼠40毫克/公斤體重的鏈佐霉素(STZ；美國密蘇里州圣路易市Sigma-Aldrich公司)，每日一次，連續(xù)5日，其后讓小鼠休息2日。確認(rèn)這24只接受鏈佐霉素處理的小鼠顯現(xiàn)糖尿病癥狀后，將它們隨機分成3組，分別灌食以100微升磷酸鹽緩沖化生理食鹽水(STZ-PBS組)、25毫克實施例1中所制得的臺灣冬蟲夏草萃出物(STZ-OFE組)，或是10毫克羅格列酮(美國Sigma-Aldrich公司)(STZ-ROSI組)，歷時28日。其余6只未接受鏈佐霉素處理的小鼠，則給予100微升PBS，以作為對照組。每日記錄小鼠體重和攝食情形。在小鼠處死前，采集其血樣，儲存于在-80℃供血液分析用。處死小鼠后，采取胰島細(xì)胞并予以計數(shù)。采集皮下脂肪組織(SAT)，加以稱重，并計算出組織相對于體重的比例。也將位于小鼠腦部的前額葉皮質(zhì)(prefrontal cortex)、紋狀體(striatum)和海馬體等腦組織快速地取出并稱重。本申請各實施例的實驗流程請參見圖1。

如圖2C所示，相較于STZ-PBS組的小鼠，STZ-OFE組的小鼠明顯累積有比較多的皮下脂肪組織，甚至比STZ-ROSI組的皮下脂肪組織含量還要更多。另外，在STZ所引發(fā)的糖尿病小鼠模式中，可以觀察到胰島β細(xì)胞的數(shù)量減少，而無論給予ROSI或是OFE都無法在實驗期間使β細(xì)胞的數(shù)量恢復(fù)(數(shù)據(jù)未出示)，這意味著臺灣冬蟲夏草對于第一型糖尿病的并發(fā)癥的治療效果不是透過使β細(xì)胞的數(shù)量增加。

實施例3：腹腔內(nèi)葡萄糖耐量試驗(GTT)

如圖1所示，分別在灌食處理前后(分別以PRE GTT和POST GTT表示)，使小鼠斷食6小時，經(jīng)由腹腔注射給予每只小鼠2克/公斤體重的葡萄糖。在葡萄糖輸注后第0、30、60和120分鐘時，分別從小鼠尾部采取血樣，并運用active血糖儀(德國曼罕市羅氏診斷有限公司)來測定血糖濃度。

如圖2A所示，由STZ所引發(fā)的糖尿病小鼠模式中顯現(xiàn)出第一型糖尿病的典型癥狀，即體重下降。圖2B進一步顯示，由STZ所引發(fā)的糖尿病小鼠模式中，若未給予任何藥物，其斷食血糖值超過200mg/dL(STZ-PBS組為392.2±38.7mg/dL)。相對來說，對照組的斷食血糖值僅為119.5±24.2mg/dL(p<0.001)。然而，當(dāng)給予臺灣冬蟲夏草萃出物或是羅格列酮后，糖尿病小鼠的上述癥狀都會獲得明顯的緩解(STZ-OFE組和STZ-ROSI組)。特別是，STZ-OFE組中的小鼠接受葡萄糖耐量試驗(POST GTT)后，其所得斷食血糖值的曲線下方面積(AUC)相較于STZ-PBS組明顯降低，幾乎與對照組相當(dāng)，顯示臺灣蟲草不僅可以改善第一型糖尿病的葡萄糖代謝情形，也能夠促進病人體內(nèi)的能量運用，從而改善第一型糖尿病的并發(fā)癥病況。

實施例4：免疫組織化學(xué)分析

將實施例2中所采集到的皮下脂肪組織(SAT)以4％多聚甲醛加以固定，包埋于石蠟中進行切片。接著脫除組織切片的石蠟，再在95℃下于抗原修復(fù)液中(美國麻薩諸塞州康橋市Abcam公司；編號ab93680)處理15分鐘，使抗原暴露出來，并以配于80％甲醇中的0.3％H₂O₂溶液處理30分鐘，以減少內(nèi)源性過氧化酶的含量。以1％牛血清蛋白(BSA)處理切片，隨后于4℃下與抗小鼠脂聯(lián)素抗體(美國麻薩諸塞州康橋市Abcam公司；編號ab22554)共同培育18小時。隨后，使切片與山羊抗小鼠二級抗體共同培育30分鐘，并運用Link System HRP(DAB+)套組(美國加州Dako Cytomation公司)加以呈色。切片以蘇木精進行套染，以二次去離子水潤洗10分鐘，再以甘油膠(美國Surgipath Medical Ind.公司)加以固著。拍攝切片影像，在各影像中選擇5個位點就脂聯(lián)素的信號強度進行測量，并利用影像分析軟件Image J(由美國馬里蘭州Bethesda市國立衛(wèi)生研究院所開發(fā))計算出各組小鼠的SAT中的脂聯(lián)素表現(xiàn)量。

圖3A顯示各組小鼠的血漿中的脂聯(lián)素含量，其中給予STZ的三組小鼠在血液中所具有的脂聯(lián)素相較于對照組都降低，然而，STZ-OFE組小鼠的血漿脂聯(lián)素相較于只給予PBS的小鼠(STZ-PBS組)則明顯升高，這個數(shù)據(jù)指出給予臺灣冬蟲夏草可以恢復(fù)部分的血液中脂聯(lián)素含量。SAT的代表性脂聯(lián)素染色切片影像放大40倍，顯示于圖3B，而影像中所測得的脂聯(lián)素信號強度數(shù)值則顯示于圖3C。圖3B和3C指出，在STZ-OFE組和STZ-ROSI組小鼠的SAT中所重新合成出來的脂聯(lián)素，相較于STZ-PBS組分別提升了16％和27％。綜合這些數(shù)據(jù)顯示，臺灣冬蟲夏草萃出物可以向上調(diào)控脂聯(lián)素在SAT和血液中的含量，進而促進SAT的生物合成。

實施例5：動物行為試驗

本實施例通過測量實施例2所建立的小鼠模型在曠場任務(wù)試驗(OFT)、高架十字迷宮試驗(EPM)和懸尾試驗(TST)中的表現(xiàn)來判斷小鼠的焦慮和憂郁程度。在一個配備有通風(fēng)孔的消音室中設(shè)置監(jiān)視器，以監(jiān)視并記錄完整試驗過程。在OFT中，將小鼠個別地放置在一個曠場裝置的中央(43.3×21.7×20.8厘米，由透明樹脂玻璃制成)，并容許其自由探索60分鐘。通過TOP SCAN v2.0軟件(美國維吉尼亞州Reston市Clever Sys公司)來分析每只小鼠的移動總距離、在中央?yún)^(qū)域的停留時間，以及在中央和周邊區(qū)域的移動速度。在EPM中，將具有兩個開放臂(30厘米長×5厘米寬)和兩個封閉臂的高架十字迷宮抬高至距離地板50厘米的高度。封閉臂具有與開放臂相同的尺寸，但另被50厘米高的透明墻所封閉。各個臂體皆由白色壓克力板所制成，由中央平臺(5厘米見方)輻狀設(shè)置成十字形。實驗開始時，將各只小鼠放置在中央平臺，且面向其中一個封閉臂。記錄各只小鼠在5分鐘內(nèi)的動作路徑以及在裝置中所花費的時間，通過TOP SCAN v2.0軟件(美國維吉尼亞州Reston市Clever Sys公司)進行分析。TST是用以評價動物的憂郁行為。在TST中，通過膠帶將各只小鼠的尾端2-3厘米處黏貼在消音室天花板的塑料管上，使小鼠離最近的物體相距10厘米，距離地板35厘米，且其尾部距離天花板38厘米，并加以隔音和隔光。計算各只小鼠在試驗中靜止不動的時間，并由三位測試者分別就每只小鼠在試驗中的行為表現(xiàn)加以評分。此處所稱“靜止不動”是以小鼠的頭部和所有腳爪都處于完全停止動作的狀態(tài)來定義。

如圖4A至4C所示，STZ-PBS組小鼠相較于對照組顯現(xiàn)出顯著的焦慮癥和憂郁癥行為，這指出本申請使用STZ在小鼠體內(nèi)引發(fā)第一型糖尿病，成功地建立了焦慮癥和憂郁癥的動物模式。圖4A進一步顯示，給予ROSI或是OFE都可以延長小鼠在曠場任務(wù)試驗(OFT)中逗留在中央?yún)^(qū)域的時間，其中對照組小鼠在中央?yún)^(qū)域的停留時間相對于總時間的比值為0.18±0.01％；STZ-PBS組的比值為0.12±0.02％；STZ-ROSI組為0.23±0.07％；而STZ-OFE組為0.24±0.01％。在高架十字迷宮試驗(EPM)中，STZ-OFE組小鼠在開放臂中的停留時間最長，這指出給予臺灣冬蟲夏草萃出物可以促進小鼠的探索行為。如圖4B所示，對照組小鼠在開放臂中的停留時間比例為19.7±9.3％；STZ-PBS組的比例為9.8±4.7％；STZ-RODI組為16.8±7.8％；STZ-OFE組為41.0±12.3％)。又如圖4C所示，在懸尾試驗(TST)中，STZ-PBS組小鼠相較于對照組顯現(xiàn)出明顯更長的靜止不動時間，顯示STZ引起了焦慮和憂郁的癥狀。相對來說，STZ-OFE組小鼠的靜止不動時間則恢復(fù)成僅略高于對照組小鼠。綜合本實施例所得數(shù)據(jù)顯示，臺灣冬蟲夏草可以改善由第一型糖尿病所導(dǎo)致的焦慮癥和憂郁癥的病理并發(fā)癥。

實施例6：腦邊緣區(qū)域(limbic regions)中的單胺類物質(zhì)含量

在1毫升由0.1M HCl,10^-7M抗壞血酸和50pg/μL異丙基腎上腺素(isoproterenol)所構(gòu)成的萃取液中，將實施例2所采得的腦組織分別予以均質(zhì)化。隨后在4℃下，將均質(zhì)液以13200rpm的速率予以離心三次，各歷時20分鐘。使上清液通過0.22微米孔徑的濾器(美國Millipore公司)進行過濾，再將其注入反相C18管柱中(Hypersil^TM GOLD aQ,5μm,150mm×4.60mm)。通過耦合有電化學(xué)傳感器(日本Shiseido Co.,Ltd.出品，型號P/N 70-9143，范圍10nA，具有1Hz濾光片和0.7V AppE電池)且配備有自動采樣儀(美國Dionex公司W(wǎng)PS-3000)的HPLC系統(tǒng)來測量去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)、3,4-二羥基苯乙酸(DOPAC)、5-羥基色胺(5-HT)和5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)的濃度。層析的泳動相含有0.17M NaH₂PO₄、0.63mM乙二胺四乙酸(EDTA)、0.60mM辛烷-1-磺酸鈉鹽和2.0mM KCl，配制于20％甲醇中，并以85％H₃PO₄調(diào)整酸堿值至pH 3.30。流速維持于每分鐘0.6毫升。上述化合物的標(biāo)準(zhǔn)品購自于美國密蘇里州圣路易市Sigma-Aldrich公司。HPLC系統(tǒng)對于樣品的測量下限為0.1pg。

各組小鼠在前額葉皮質(zhì)、紋狀體和海馬體等腦邊緣區(qū)域中的神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)(DA和5-HT)及其代謝物(DOPAC和5-HIAA)的含量顯示于下表1。

如表1所示，相較于對照組，給予小鼠STZ(STZ-PBS組)會導(dǎo)致DA、DOPAC、5-HT和5-HIAA在所載三個腦邊緣區(qū)域中的含量降低。但是，給予STZ的小鼠再接受ROSI或OFE處理即可在其前額葉皮質(zhì)和紋狀體中使上述神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)及其代謝物的含量明顯恢復(fù)。這個數(shù)據(jù)與實施例5和圖4A-4C中顯示ROSI和OFE可以改善焦慮癥和憂郁癥的結(jié)果相吻合。綜合本實施例的數(shù)據(jù)顯示，臺灣冬蟲夏草能夠增進神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)在多巴胺和血清素信息傳遞路徑中的含量，進而改善第一型糖尿病所引起的焦慮和憂郁癥狀。

雖然本發(fā)明已被詳細(xì)描述于說明書中，但在本發(fā)明含義和范圍內(nèi)的各種修改和變化對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言屬于明顯?；谇笆龅墓_內(nèi)容，相關(guān)技術(shù)中的知識以及在發(fā)明背景和發(fā)明的詳細(xì)敘述中所討論到的參考文獻的公開內(nèi)容完全地被納入于此作為參考。