本發(fā)明涉及含有通過配糖鍵與非糖化合物連接的糖基的化合物，具有涉及重樓皂苷VI，該化合物可用于制備抗肺癌的藥物。

背景技術：
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肺癌是全球最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率居于各類惡性腫瘤之首，已成為嚴重危害人類健康和生命的疾病之一。近年來，受各種因素的影響，全球各國肺癌的發(fā)病率和死亡率都明顯上升，而中國是世界上肺癌患者數(shù)量最多的國家。因此，尋求新的有效的肺癌治療藥物，進一步提高臨床療效，己成為當前迫切需要研究的問題。我國作為中草藥的聚集地，有著得天獨厚的優(yōu)勢，因此，從中草藥中尋找具有高效、低毒特點的抗腫瘤藥物是非常適宜的手段之一。

重樓(Rhizoma Paridis)是來源于百合科植物云南重樓或七葉一枝花的干燥根莖，在中醫(yī)中藥抗癌配方中的治療具有上千年的歷史,是抗癌中藥配方中的常用草藥。現(xiàn)代研究證明重樓的主要活性物質是甾體皂苷，主要包括薯蕷皂苷和偏諾皂苷兩大類化合物，化合物重樓皂苷VI即是上述甾體皂苷中的一種，其化學結構式如下式(Ⅰ)所示。

目前已發(fā)現(xiàn)重樓皂苷VI具有抗腫瘤、消炎、抑菌、止血等多種生物活性，但尚未見該化合物治療肺癌的報道。

技術實現(xiàn)要素：
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本發(fā)明要解決的技術問題是提供重樓皂苷VI的新用途，即在制藥中的新應用。

上述新用途實際上是，重樓皂苷VI在制備抗肺癌藥物中的應用。

上述應用中，所述藥物由重樓皂苷VI和醫(yī)學上可接受的輔料組成，其中，重樓皂苷VI在藥物中的質量百分含量為10％～50％。所述藥物可以是常見的口服制劑，如顆粒劑、片劑或膠囊劑。

本發(fā)明所述的重樓皂苷VI對肺癌細胞和動物移植瘤的生長具有良好的抑制作用，具體表現(xiàn)在：(1)在體外對A549和NCI-H1299肺癌細胞有很強的生長抑制作用；(2)能夠誘導細胞凋亡和細胞周期阻滯，并且對細胞凋亡和細胞周期相關的蛋白有明顯影響；(3)對體內移植瘤有明顯的抑制作用。

附圖說明

圖1為重樓皂苷VI對肺癌細胞周期的阻滯情況的統(tǒng)計分析圖，圖的PVVII表示重樓皂苷VI。

圖2為重樓皂苷VI誘導肺癌細胞發(fā)生凋亡的統(tǒng)計分析圖，圖的PVVII表示重樓皂苷VI。

圖3為重樓皂苷VI對細胞凋亡和G2/M檢查點相關蛋白的影響的統(tǒng)計分析圖，圖的PVVII表示重樓皂苷VI。

具體實施方式

下述實施例1～5所用重樓皂苷VI購于成都曼斯特生物科技有限公司。

實施例1：重樓皂苷VI對體外肺癌細胞的抑制作用

取對數(shù)生長期的腫瘤細胞，以3000/孔接種于96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)過夜，細胞生長狀態(tài)良好后，棄去原有的培養(yǎng)基，然后按照設計的藥物濃度：重樓皂苷VI以0，0.78，1.56，3.12，6.25，12.5μM作用于A549和NCI-H1299細胞24，48，72h后停止培養(yǎng)；然后加入0.5mg/ml的MTT溶液，處理4h后，棄上清，最后加入150μl DMSO振蕩混勻，置于酶標儀中測定其吸光度值(測定波長為570nm)。結果如表1所示，重樓皂苷VI可明顯抑制肺癌細胞A549和NCI-H1299的增殖，具有細胞毒作用，是一種腫瘤治療藥物(IC₅₀見表1)。

表1重樓皂苷VI對A549和NCI-H1299細胞的半數(shù)抑制率

實施例2：流式細胞儀分析重樓皂苷VI/VI對肺癌細胞周期的影響情況

取對數(shù)生長期A549和NCI-H1299細胞，以2×10⁵/孔接種于六孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)過夜，棄去培養(yǎng)基，加入重樓皂苷VI(0，1，2，4μM)，處理細胞24h后；用胰酶消化、收集細胞、離心、PBS清洗2次，再用預冷的體積分數(shù)為75％乙醇溶液混懸細胞，密封保存后置于4℃冰箱過夜。次日，離心，PBS洗1次，接著每管細胞中加入500μl PBS溶液(含有25μl PI(1mg/ml)和0.5μl RNA酶(10mg/ml)，渦旋混勻，然后將細胞置于37℃避光孵育30min，充分混勻后，采用流式細胞儀檢測細胞周期的分布情況，樣品于l h內檢測完畢。結果如圖1所示，肺癌細胞經(jīng)重樓皂苷VI作用后，細胞的DNA的分布表現(xiàn)為G2/M期細胞比率增加。

實施例3：流式細胞儀檢測重樓皂苷VI的細胞凋亡情況

取對數(shù)生長期A549和NCI-H1299細胞，以2×10⁵/孔接種于六孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)過夜，棄去培養(yǎng)基，加入重樓皂苷VI(0，1，2，4μM)處理細胞48h后，消化、收集細胞、離心、PBS清洗2次，倒掉上清液，用濾紙倒扣濾干；再用凋亡試劑盒中的l×Binding Buffer 100μl/Tube懸浮細胞，然后加入Annexin-FITC和PI各5μl/Tube，避光，室溫放置15min；最后再分別加入400μl/Tube的1×Binding Buffer，充分混勻后，采用流式細胞儀檢測細胞的凋亡情況，樣品于1h內檢測完畢。結果如圖2所示，肺癌細胞經(jīng)重樓皂苷VI作用后，細胞的凋亡率呈現(xiàn)劑量依賴性增加。

實施例4：Western blotting法檢測細胞凋亡和G2/M檢查點相關蛋白

重樓皂苷VI(0，1，2，4μM)I(0，0.5，1，2μM)分別與A549和NCI-H1299細胞共同孵育48h后，胰酶消化、收集細胞，用RIPA裂解液提取總蛋白，然后進行蛋白定量。采用western blotting檢測細胞凋亡相關蛋白Fas，DR3，DR5，DcR3，PARP，Cleaved PARP，Cleaved Caspase-3，p53和phosphor-p53及G2/M檢查點相關蛋白Cyclin B1，p21Waf1/Cip1的表達情況。結果如圖3所示，重樓皂苷VI能夠顯著性上調A549細胞中p53和p-p53的蛋白表達，下調了Cyclin B1和p21Waf1/Cip1的蛋白表達水平；而重樓皂苷VI能顯著性上調NCI-H1299細胞中p21Waf1/Cip1，下調Cyclin B1。另外，重樓皂苷VI上調A549和NCI-H1299 細胞中的Fas、DR3、DR5，PARP，Cleaved PARP和Cleaved Caspase-3的蛋白表達水平，降低DcR3的蛋白表達水平。

實施例5：建立裸鼠移植瘤模型研究重樓皂苷VI對移植瘤生長的影響

建立人非小細胞肺癌A549細胞裸鼠移植瘤模型：選用4到6周的雌性BALB/c nu/nu小鼠，將腫瘤細胞制成懸液，然后按照細胞數(shù)為2×10⁶/只接種于裸鼠的右側腋窩下。每周稱量2～3次體重和用游標卡尺測量2～3次腫瘤的大小。然后按照以下公式計算腫瘤體積：Tumor Volume(TV)＝1/2×(L×W²)，其中L是腫瘤縱軸的長度，W是腫瘤橫軸的長度，并繪制裸鼠腫瘤的生長曲線。當腫瘤的平均體積達到約100mm³時，將裸鼠隨機分為8個組，每組8只。按照如下方案給藥：空白對照組(0.9％生理鹽水)；重樓皂苷VI的高、中、低劑量組(4、3、2mg/kg)。裸鼠每周腹腔注射給藥5次，持續(xù)給藥4周。給藥結束后，處死裸鼠，然后取出腫瘤組織凍存于-80℃。部分腫瘤組織用RIPA裂解液裂解提取總蛋白，然后進行蛋白定量。采用western blotting方法檢測細胞凋亡相關蛋白DR3，DR5，p53和G2/M檢查點相關蛋白Cyclin B1，p21Waf1/Cip1的表達情況。結果如下表2和圖3所示，重樓皂苷VI能夠顯著性抑制A549裸鼠移植瘤的生長，具有體內抗腫瘤活性。

表2重樓皂苷VI處理4周后各組裸鼠體重變化、腫瘤體積生長曲線、腫瘤重量和抑瘤率(Mean±SD)