本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
。具體而言，本發(fā)明涉及抗ErbB2抗體-藥物偶聯(lián)物、包含其的組合物、其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：作為新型的靶向治療藥物，抗體-藥物偶聯(lián)物(antibody-drugconjugate,ADC)開創(chuàng)了腫瘤治療方法的新紀(jì)元。在美國(guó)西雅圖基因公司(SeattleGenetics,Inc.)和免疫原公司(ImmunoGen,Inc.)的引領(lǐng)下，很多跨國(guó)制藥企業(yè)和初創(chuàng)公司都開展了這一領(lǐng)域的研發(fā)。根據(jù)MarketResearch的報(bào)道，全球共有45個(gè)此類候選藥處于臨床研究中。ADC一般包括采用一定方式連接的三個(gè)部分：抗體、連接基和藥物?？贵w是良好的藥物靶向性載體。利用藥物分子中的特定官能團(tuán)如羥基、巰基或氨基，可將藥物與抗體連接，組成化學(xué)免疫偶聯(lián)物?？贵w的靶向性能將與之相連的藥物“精確”地運(yùn)送到靶細(xì)胞，從而有效提高病灶局部的藥物濃度，同時(shí)極大地降低體內(nèi)其他組織、器官的藥物濃度，從而實(shí)現(xiàn)增效減毒。用于這些策略的多克隆抗體和單克隆抗體均已有報(bào)導(dǎo)(Rowland等人，1986，CancerImmunol.Immunother.，21:183-87)。目前臨床上所用的ADC中的抗體大多是人源化抗體，例如，PSMAADC(抗PSMA抗體-MMAE偶聯(lián)物)、SGN-75(抗CD70抗體-MMAF偶聯(lián)物)、T-DM1(曲妥珠單抗-DM1偶聯(lián)物)中所用均為人源化抗體。目前FDA批準(zhǔn)的ADC藥物包括(T-DM1)和(brentuximabvedotin)。ADC中作為“彈頭”的藥物通常為細(xì)胞毒性藥物，它們主要通過(guò)抑制細(xì)胞DNA或蛋白質(zhì)合成、抑制細(xì)胞有絲分裂等方式來(lái)殺傷腫瘤細(xì)胞。由于細(xì)胞毒性藥物對(duì)正常細(xì)胞同樣具有較大殺傷力，因而其應(yīng)用和發(fā)展受到極大限制。早期的ADC利用常規(guī)抗腫瘤藥物，但這些ADC臨床活性大多低于化學(xué)藥單體的體外活性。目前的ADC所用的細(xì)胞毒性藥物主要包括：美登素類(Maytansinoids，參見例如EP0425235、US5208020、US5416064、US7276497、US7473796、US7851432、US2007/0269447、US2011/0158991、WO2004/103272、WO2012/061590)、耳抑素肽類(Auristatins，參見例如US6884869、US7498298)、卡奇霉素類(Calicheamicins，參見例如US5606040、US5770710)、阿霉素類(Doxorubicins，參見例如Dubowchik等人，2002，BioconjugateChem.，13:855-869)、苯并二吡咯類抗生素(duocarmycins和CC-1065，參見例如US7129261)、伊立替康代謝產(chǎn)物(Irinotecanmetabolites，參見例如WO2015/012904)、吡咯并苯二氮卓類(Pyrrolobenzodiazepines，參見例如Biotechnol.Healthc.2012Winter，9(4):28-31)以及吡咯并苯二氮卓二聚體類(PBDdimmers，參見例如WO2005/040170)等。這些細(xì)胞毒性藥物具有很強(qiáng)的非選擇性毒性，會(huì)對(duì)正常細(xì)胞造成傷害，因而本身不能成藥。ADC中的連接基需滿足以下要求：在細(xì)胞外具有足夠的穩(wěn)定性，保證小分子藥物不與抗體脫離；進(jìn)入細(xì)胞后，可斷裂的連接基在適當(dāng)條件下斷裂，釋放出活性小分子藥物，而不可斷裂的連接基則與小分子藥物和來(lái)自抗體酶解的氨基酸殘基一起形成活性部分。在目前進(jìn)入臨床試驗(yàn)的ADC中，細(xì)胞毒性藥物通常籍由連接基連接在抗體表面的賴氨酸殘基上，或者連接在抗體鉸鏈區(qū)的半胱氨酸殘基(由鏈間二硫鍵部分還原得到)上。通常的藥物/抗體比值(drugantibodyratio，DAR)為2-4。當(dāng)藥物連接在抗體表面的賴氨酸殘基上時(shí)，由于抗體表面存在大量(超過(guò)80個(gè))賴氨酸殘基并且偶聯(lián)反應(yīng)是非選擇性的，因而偶聯(lián)數(shù)目和位點(diǎn)具有不確定性，導(dǎo)致生成的ADC的不均一性。例如，T-DM1的DAR值分布為0-8，平均DAR值為3.5(Lazar等人，2005，RapidCommun.MassSpectrom.，19:1806-1814)。當(dāng)藥物連接在抗體鉸鏈區(qū)的半胱氨酸殘基上時(shí)，由于抗體鉸鏈區(qū)的鏈間二硫鍵只有四對(duì)，為了達(dá)到平均DAR值為2-4的要求，需要部分還原鏈間二硫鍵(Sun等人，2005，BioconjugateChem.，16:1282-1290)，然而現(xiàn)有的還原劑如二硫蘇糖醇(DTT)和磷酸三氯乙酯(TCEP)等無(wú)法選擇性地還原鏈間二硫鍵，因此所得抗體-藥物偶聯(lián)物也不是均一產(chǎn)物，而是由多種組分組成的混合物，其中主要組分的DAR值為0、2、4、6、8，而且對(duì)應(yīng)每一DAR值的組分又存在由于連接位點(diǎn)不同而形成的異構(gòu)體。ADC產(chǎn)品的不均一性對(duì)于其臨床應(yīng)用是不利的，因?yàn)楫a(chǎn)品中各組分間藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)、效價(jià)和/或毒性不均一(例如，具有較高DAR值的組分在體內(nèi)被清除得更快，并導(dǎo)致更高的毒性，參見例如Boswell等人，2011，BioconjugateChem.，22:1994-2004)，使得其穩(wěn)定性難以令人滿意。ErbB族受體酪氨酸激酶是細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和存活的重要介質(zhì)。該家族包括四個(gè)成員：上皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR或ErbB1)、Her2(ErbB2)、Her3(ErbB3)和Her4(ErbB4)。臨床上用抗ErbB2抗體曲妥珠單抗治療ErbB2高表達(dá)的乳腺癌。在臨床試驗(yàn)中，15％的具有免疫組織化學(xué)(IHC)2+以上水平的乳腺癌患者對(duì)曲妥珠單抗產(chǎn)生臨床反應(yīng)，反應(yīng)持續(xù)中值為9.1個(gè)月(參見例如Cobleigh等人，1996，臨床腫瘤學(xué)雜志，14:737-744)。曲妥珠單抗(商品名Herceptin)在1998年9月25日被美國(guó)食品與藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)用于治療過(guò)量表達(dá)ErbB2蛋白的乳腺癌患者。曲妥珠單抗雖然挽救了一些乳腺癌患者或延長(zhǎng)了患者的生存期，但其僅對(duì)ErbB2高表達(dá)的患者有效，且臨床反應(yīng)率僅有15％。因此，還需要對(duì)更多患者具有更佳療效的藥物。為了提高治療指數(shù)，已將曲妥珠單抗與美登木素(DM1)偶聯(lián)，制成trastuzumabemtansine(T-DM1，Kadcyla)，用于使用曲妥珠單抗、其它抗Her2治療藥物及常用乳腺癌治療一線化療藥物紫杉烷類治療無(wú)效的患者。T-DM1將藥物輸送至腫瘤部位，從而縮小腫瘤，減慢疾病進(jìn)展并延長(zhǎng)生存期。在臨床試驗(yàn)中，T-DM1的安全性和有效性得到了評(píng)價(jià)。根據(jù)FDA批準(zhǔn)Kadcyla的說(shuō)明書第19頁(yè)，991名患者參與的臨床試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，Kadcyla治療組的中位無(wú)進(jìn)展生存期為9.6個(gè)月，而拉帕替尼+卡培他濱治療組的中位無(wú)進(jìn)展生存期為6.4個(gè)月；Kadcyla治療組的中位總生存期為30.9個(gè)月，而拉帕替尼+卡培他濱治療組的中位總生存期為25.1個(gè)月。T-DM1現(xiàn)已成為FDA批準(zhǔn)的第四個(gè)以Her2蛋白為靶點(diǎn)的藥物。但是，T-DM1在批準(zhǔn)時(shí)有一項(xiàng)黑框警告，提醒患者與衛(wèi)生保健專業(yè)人員該藥物可導(dǎo)致肝毒性、心臟毒性和死亡。這主要是脫落的DM1以及T-DM1進(jìn)入體內(nèi)降解釋放出的含DM1小分子引起的。T-DM1的制備是利用曲妥珠單抗上的賴氨酸側(cè)鏈氨基與磺基琥珀酰亞氨基-4-[N-順丁烯二酰亞氨基甲基]環(huán)己烷-1-羧酸酯(磺基-SMCC)偶聯(lián)，然后再與DM1偶聯(lián)。T-DM1中，每分子曲妥珠單抗上偶聯(lián)的DM1分子平均為3.5個(gè)。由于曲妥珠單抗上具有88個(gè)賴氨酸位點(diǎn)，因而T-DM1實(shí)際為曲妥珠單抗偶聯(lián)了不同數(shù)目DM1和具有多種偶聯(lián)位點(diǎn)的多種抗體-藥物偶聯(lián)物的組合。然而，每種抗體-藥物偶聯(lián)物的藥效、藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)和/或毒性不同。一般而言，載藥量高的抗體-藥物偶聯(lián)物具有更強(qiáng)的體外活性，但高載藥量也會(huì)帶來(lái)諸多問(wèn)題，如因抗體-藥物偶聯(lián)物之間聚合而生成的多聚體成分增加、穩(wěn)定性下降、毒性增加、免疫原性提高、體內(nèi)清除速度過(guò)快、半衰期過(guò)短而實(shí)際治療指數(shù)不高。本發(fā)明旨在解決現(xiàn)有技術(shù)中的上述問(wèn)題。本發(fā)明提供抗Her2抗體-藥物偶聯(lián)物，其抑制哺乳動(dòng)物腫瘤生長(zhǎng)，可用于治療多種癌癥。所述偶聯(lián)物具有更好的生物學(xué)活性、穩(wěn)定性和均一性，并具有降低的毒副作用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：在第一方面，本發(fā)明提供通式(I)的抗體-藥物偶聯(lián)物，其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體，或者所述抗體-藥物偶聯(lián)物、鹽或立體異構(gòu)體的溶劑合物，其中：A為抗ErbB2抗體或者其活性片段或變體；X和Y各自獨(dú)立地為N或CR1，且每個(gè)R1獨(dú)立地為H或C1-C10烷基；L為二價(jià)連接基；D為細(xì)胞毒性藥物基團(tuán)；并且a為選自2-10的整數(shù)。在第二方面，本發(fā)明提供本發(fā)明第一方面的抗體-藥物偶聯(lián)物的制備方法，所述方法包括以下步驟：(1).制備通式(I-A)的化合物：其中D、L、X和Y如上文關(guān)于通式(I)所定義；(2).活化步驟(1)中得到的通式(I-A)的化合物，得到通式(I-A-G)的化合物其中G選自-F、-Cl、-Br、-I、-N3、-OR、-SR、-ONRR’、RC(O)O-、-OP(O)RR’、RSO2-O-和其中R和R’每次出現(xiàn)時(shí)各自獨(dú)立地是C1-C10烷基、C6-C14芳基、含5-10個(gè)環(huán)原子的雜環(huán)基或苯氧基，所述烷基、芳基、雜環(huán)基和苯氧基是未取代的或者各自獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、羥基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C3-C8環(huán)烷基、含5-8個(gè)環(huán)原子的雜環(huán)基、C6-C10芳基或含5-10個(gè)環(huán)原子的雜芳基的取代基取代；(3).將步驟(2)中得到的通式(I-A-G)的化合物偶聯(lián)于所述抗ErbB2抗體或者其活性片段或變體，得到具有不同a值的多種抗體-藥物偶聯(lián)物的混合物；和(4).純化步驟(3)中得到的混合物，得到抗體-藥物偶聯(lián)物。在第三方面，本發(fā)明提供藥物組合物，其包含本發(fā)明第一方面的抗體-藥物偶聯(lián)物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體或者所述抗體-藥物偶聯(lián)物、鹽或立體異構(gòu)體的溶劑合物，以及藥學(xué)上可接受的載體。在第四方面，本發(fā)明提供本發(fā)明第一方面的抗體-藥物偶聯(lián)物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體或者所述抗體-藥物偶聯(lián)物、鹽或立體異構(gòu)體的溶劑合物在制備用于預(yù)防或治療癌癥的藥物中的用途。在第五方面，本發(fā)明提供藥物制劑，其包含本發(fā)明第一方面的抗體-藥物偶聯(lián)物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體或者所述抗體-藥物偶聯(lián)物、鹽或立體異構(gòu)體的溶劑合物。在第六方面，本發(fā)明提供預(yù)防或治療癌癥的方法，所述方法包括向有此需要的患者給藥本發(fā)明第一方面的抗體-藥物偶聯(lián)物，其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體，或者所述抗體-藥物偶聯(lián)物、鹽或立體異構(gòu)體的溶劑合物，或者向有此需要的患者給藥本發(fā)明第三方面的藥物組合物或本發(fā)明第五方面的藥物制劑。附圖說(shuō)明圖1是抗體-藥物偶聯(lián)物I-1粗產(chǎn)物的HIC-HPLC譜圖。圖2是抗體-藥物偶聯(lián)物I-1的HIC-HPLC譜圖。圖3是抗體-藥物偶聯(lián)物I-1與曲妥珠單抗裸抗還原的重疊反相色譜圖。圖4是將抗體-藥物偶聯(lián)物I-1和曲妥珠裸抗在相同條件下進(jìn)行酶切所得的肽圖譜。圖5是抗體-藥物偶聯(lián)物I-2粗產(chǎn)物的HIC-HPLC譜圖。圖6是抗體-藥物偶聯(lián)物I-2的HIC-HPLC譜圖。圖7是抗體-藥物偶聯(lián)物I-2與曲妥珠單抗裸抗還原的重疊反相色譜圖。圖8是抗體-藥物偶聯(lián)物I-3粗產(chǎn)物的HIC-HPLC譜圖。圖9是抗體-藥物偶聯(lián)物I-3的HIC-HPLC譜圖。圖10是抗體-藥物偶聯(lián)物I-3與曲妥珠單抗裸抗還原的重疊反相色譜圖。具體實(shí)施方式除非另有定義，本文使用的所有術(shù)語(yǔ)具有與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解相同的含義。相關(guān)的定義及術(shù)語(yǔ)可參見例如CurrentProtocolsinMolecularBiology(Ausubel)。本文中所述的數(shù)值范圍應(yīng)理解為涵蓋其中包含的任何和所有子范圍。例如，范圍“1至10”應(yīng)理解為不僅包括明確記載的1至10的值，而且還包括1至10范圍內(nèi)的任何單個(gè)值(例如2、3、4、5、6、7、8和9)和子范圍(例如1至2、1.5至2.5、1至3、1.5至3.5、2.5至4、3至4.5等等)。該原則亦適用于僅用一個(gè)數(shù)值作為最小值或最大值的范圍。本文中提及的文獻(xiàn)均以其整體援引加入本文中。在第一方面，本發(fā)明提供通式(I)的抗體-藥物偶聯(lián)物，其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體，或者所述抗體-藥物偶聯(lián)物、鹽或立體異構(gòu)體的溶劑合物，其中：A為抗ErbB2抗體或者其活性片段或變體；X和Y各自獨(dú)立地為N或CR1(優(yōu)選Y為CR1，X為N)，且每個(gè)R1獨(dú)立地為H或C1-C10烷基，優(yōu)選為H或C1-C6烷基(例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基或己基)；L為二價(jià)連接基；D為細(xì)胞毒性藥物基團(tuán)；并且a為選自2-10的整數(shù)，例如2、3或4，特別優(yōu)選2?？贵w本發(fā)明中所用的抗體為抗ErbB2抗體或者其活性片段或變體，包括雙特異性抗體和抗體功能性衍生物。在本文中，ErbB2和Her2可互換使用，二者均表示天然序列的人Her2蛋白(Genebank登錄號(hào)：X03363，參見例如Semba等人，1985，PNAS，82:6497-6501；和Yamamoto等人，1986，Nature，319:230-234)及其功能性衍生物，例如氨基酸序列變體。erbB2表示編碼人Her2的基因，neu表示編碼大鼠p185neu的基因。本發(fā)明中優(yōu)選的Her2是天然序列的人Her2?？捎糜诒景l(fā)明的抗Her2的抗體的實(shí)例包括但不限于：MAbs4D5(ATCCCRL10463)、2C4(ATCCHB-12697)、7F3(ATCCHB-12216)和7C2(ATCCHB12215)，這些抗體記載于例如US5,772,997、WO98/77797和US5,840,525中。人源化抗Her2抗體包括US5,821,337表3中所列的huMAb4D5、huMAb4D5-1、huMAb4D5-2、huMAb4D5-3、huMAb4D5-4、huMAb4D5-5、huMAb4D5-6、huMAb4D5-7和huMAb4D5-8；CN1370082A圖1B中所示的7C2、7F3、2C4、7D3、3E8和2C4?？捎糜诒景l(fā)明的抗Her2抗體的實(shí)例還可以包括：WO2009/123894中記載的F243L，R292P和Y300L；F243L，R292P和V305I；F243L，R292P和P396L；以及R292P，V305I和P396；WO2012/079093中記載的MM-111；CN104418952A權(quán)利要求2至10中記載的TPs、TPL、PTs或PTL抗體。WO2010/108127圖33A和圖33B中記載的Dl、Dl.5、Dl.5-100、DLIl、DLlIb或DLlIf抗體；以及WO93/21319中記載的人源化520C9。本發(fā)明中的天然序列的Her2可以從自然界分離得到，也可以通過(guò)重組DNA技術(shù)、化學(xué)合成法或它們的組合制備得到。術(shù)語(yǔ)“功能性衍生物”包括氨基酸序列變體以及天然多肽的共價(jià)衍生物(例如通過(guò)翻譯后修飾、焦谷氨酸化等獲得的衍生物)，條件是它們保留與天然多肽相當(dāng)或更高的親和力和生物活性。氨基酸序列變體與天然多肽氨基酸序列的差異一般在于后者中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸的取代、缺失和/或插入。缺失變體包括天然多肽的片段和N端和/或C端截短變體。通常，氨基酸序列變體與天然多肽應(yīng)具有至少70％或至少80％或至少90％的同源性。天然多肽的共價(jià)衍生物可以是通過(guò)改變抗體的翻譯后加工，例如改變糖基化位點(diǎn)的數(shù)目或位置獲得的衍生物。術(shù)語(yǔ)“同源性”可與“一致性”、“同一性”或“相似性”互換使用，是指在最佳比對(duì)(最優(yōu)比對(duì))后所獲得的待比較的兩種核酸序列或者氨基酸序列之間相同核苷酸或相同氨基酸殘基的百分?jǐn)?shù)，該百分?jǐn)?shù)是純粹統(tǒng)計(jì)學(xué)的并且兩種序列間的差異隨機(jī)分布并覆蓋其全長(zhǎng)。兩種核酸序列或者氨基酸序列之間的比對(duì)通常是在以最優(yōu)方式使它們匹配后比較序列而進(jìn)行，所述比較可通過(guò)區(qū)段或者通過(guò)“比較窗”來(lái)實(shí)施。除了手工實(shí)施外，最優(yōu)比對(duì)還可以通過(guò)記載于文獻(xiàn)中的其他方法進(jìn)行，例如Smith和Waterman，1981，Ad.App.Math.，2:482中記載的局部同源性算法，Neddleman和Wunsch，1970，J.MoI.Biol.，48:443中記載的局部同源性算法，Pearson和Lipman，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，85:2444中記載的相似性搜索方法，并且可以通過(guò)使用這些算法的計(jì)算機(jī)軟件(GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTAintheWisconsinGeneticsSoftwarePackage，GeneticsComputerGroup，575ScienceDr.，Madison，WI)實(shí)施，或者通過(guò)BLASTN或BLASTP比較軟件實(shí)施。在本文中，術(shù)語(yǔ)“抗體”取其最廣義的解釋，包括完整的單克隆抗體、多克隆抗體以及由至少兩個(gè)完整抗體形成的多特異性抗體(例如雙特異性抗體)，只要它們具有所需的生物學(xué)活性。在本文中，術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”指抗體來(lái)自一群基本均一的抗體，即構(gòu)成該集群的各抗體完全相同，除了可能存在的少量天然突變。單克隆抗體具有針對(duì)抗原的一個(gè)決定簇(表位)的高特異性，而與其相對(duì)的多克隆抗體則包含針對(duì)不同決定簇(表位)的不同抗體。除了特異性之外，單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)還在于合成時(shí)可以不受其他抗體的污染。此處修飾語(yǔ)“單克隆”表示該抗體的特征在于來(lái)自一個(gè)基本均一的抗體群，而不應(yīng)理解成需由特殊方法制得。在本發(fā)明中，單克隆抗體還特別包括嵌合抗體，即重鏈和/或輕鏈的一部分與某種、某類或某亞類抗體相同或同源，其余部分則與另一種、另一類或另一亞類抗體相同或同源，只要它們具有所需的生物學(xué)活性(參見例如US4,816,567；和Morrison等人，1984，PNAS，81:6851-6855)?？捎糜诒景l(fā)明的嵌合抗體包括靈長(zhǎng)類化(primatized)抗體，其包含來(lái)自非人靈長(zhǎng)類(例如古猴、猩猩等)的可變區(qū)抗原結(jié)合序列和人恒定區(qū)序列。術(shù)語(yǔ)“抗體片段”是指抗體的一部分，優(yōu)選是抗原結(jié)合區(qū)或可變區(qū)?？贵w片段的實(shí)例包括Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段；二抗體(diabody)；線性抗體；和單鏈抗體分子。術(shù)語(yǔ)“雙特異性抗體”與“雙功能抗體偶聯(lián)物”可互換使用，指由第一抗體(片段)和第二抗體(片段)通過(guò)偶聯(lián)臂所形成的偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物保留了各自抗體的活性，故具有雙功能和雙特異性。術(shù)語(yǔ)“多特異性抗體”包括例如三特異性抗體和四特異性抗體，前者是具有三種不同抗原結(jié)合特異性的抗體，而后者是具有四種不同抗原結(jié)合特異性的抗體。術(shù)語(yǔ)“完整抗體”指包含抗原結(jié)合可變區(qū)和輕鏈恒定區(qū)(CL)、重鏈恒定區(qū)(CH1、CH2和CH3)的抗體。恒定區(qū)可以是天然序列(例如人天然恒定區(qū)序列)或其氨基酸序列變體。完整抗體優(yōu)選是具有一種或多種效應(yīng)功能的完整抗體。非人(例如鼠)抗體的“人源化”形式指包含最少量非人免疫球蛋白序列的嵌合抗體。大多數(shù)人源化抗體是人接受者免疫球蛋白的超變區(qū)殘基被置換成具有所需特異性、親和力和功能的非人(例如小鼠、大鼠、兔或非人靈長(zhǎng)類)超變區(qū)殘基(供者抗體)。在一些實(shí)施方案中，人免疫球蛋白的框架區(qū)(FR)殘基也被置換成非人殘基。而且，人源化抗體還可以包含受者抗體或供者抗體中沒(méi)有的殘基。這些修飾是為了進(jìn)一步優(yōu)化抗體的性能。人源化抗體一般包含至少一個(gè)，通常是兩個(gè)可變區(qū)，其中所有或幾乎所有超變環(huán)(hypervanableloops)與非人免疫球蛋白的相對(duì)應(yīng)，而FR則完全或幾乎完全是人免疫球蛋白的序列。人源化抗體還可以包含免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc，通常是人免疫球蛋白Fc)的至少一部分。有關(guān)細(xì)節(jié)參見例如Jones等人，1986，Nature，321:522-525；Riechmann等人，1988，Nature，332:323-329；和Presta，1992，CurrOpStructBwl2:593-596。完整抗體可根據(jù)重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列分為不同的“類”。主要的五類是IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中幾類還可以分為不同的“亞類”(同種型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。抗體不同類的重鏈恒定區(qū)分別稱為α、β、ε、γ和μ。免疫球蛋白不同類的亞基結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)型是本領(lǐng)域中公知的。在本發(fā)明中，盡管大多數(shù)情況下抗體中的氨基酸取代是被L-氨基酸取代，但也不限于此。在一些實(shí)施方案中，抗體肽鏈中可以包括一個(gè)或多個(gè)D-氨基酸。認(rèn)為包含D-氨基酸的肽在口腔、腸道或血漿中比僅包含L-氨基酸的肽更加穩(wěn)定而不易降解。本發(fā)明所用的單克隆抗體可以由許多方法生產(chǎn)。例如，用于本發(fā)明的單克隆抗體可以通過(guò)雜交瘤方法，使用許多物種(包括小鼠、倉(cāng)鼠、大鼠和人的細(xì)胞)獲得(參見例如Kohler等人，1975，Nature，256:495)，或者通過(guò)重組DNA技術(shù)制得(參見例如US4,816,567)，或者從噬菌體抗體庫(kù)中分離得到(參見例如Clackson等人，1991，Nature，352:624-628；和Marks等人，1991，JournalofMolecularBiology，222:581-597)。本發(fā)明中所用的抗體優(yōu)選為抗人ErbB2抗體，并且優(yōu)選地，所述抗人ErbB2抗體中的CDR1、CDR2和/或CDR3分別為曲妥珠單抗的CDR1、CDR2和/或CDR3。所述抗人ErbB2抗體可以為人源化抗體或全人源抗體。本發(fā)明中所用的抗體更優(yōu)選為US5,821,337圖1中所示的鼠源抗人Her2抗體4D5的人源化抗體。本發(fā)明中所用的抗體特別優(yōu)選為曲妥珠單抗。曲妥珠單抗重鏈序列為：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK曲妥珠單抗輕鏈序列為：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC抗體片段可由多種方法方法生產(chǎn)，例如通過(guò)完整抗體的蛋白水解來(lái)生產(chǎn)(參見，例如Morimoto等人，1992，JournalofBiochemicalandBiophysicalMethods，24:107-117；和Brennan等人，1985，Science，229:81)，或者由重組宿主細(xì)胞和以上討論的抗體噬菌體文庫(kù)直接生產(chǎn)，或者直接從大腸桿菌回收Fab'-SH片段并進(jìn)行化學(xué)偶聯(lián)以形成F(ab')片段(Carter等人，Biotechnology(NY)，1992Feb，10(2):163-167。此外，可以直接從重組宿主細(xì)胞培養(yǎng)物中分離F(ab')片段。其它生產(chǎn)抗體片段的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明所用的抗體片段是單鏈Fv片段(scFv)(參見例如WO93/16185、US5,571,894以及US5,587,458)。在一些實(shí)施方案中，抗體片段是線性抗體片段(參見例如US5,641,870)，其可以是單特異性的或雙特異性的。具有針對(duì)至少兩個(gè)不同表位的結(jié)合特異性的雙特異性抗體(參見例如Millstein等人，1983，Nature，305:537-539)可以結(jié)合ErbB2蛋白的兩個(gè)不同表位。其它雙特異性抗體可以將ErbB2結(jié)合部位與EGFR、ErbB3和/或ErbB4結(jié)合部位組合?；蛘?，抗ErbB2臂可以與結(jié)合白細(xì)胞上的激發(fā)分子如T細(xì)胞受體分子(例如CD2或CD3)的臂組合，或著與IgG的Fc受體(FcγR)如FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)和FcγRIII(CD16)的臂組合，以將細(xì)胞的防御機(jī)制集中于表達(dá)ErbB2的細(xì)胞。雙特異性抗體也可用于將細(xì)胞毒性試劑定位于表達(dá)ErbB2的細(xì)胞(參見例如WO96/16673、US5,837,234、WO98/02463和US5,821,337)。已有文獻(xiàn)披露了雙特異性抗體的純化方法(參見例如WO93/08829；Traunecker等人，1991，EMBOJ.，10:3655-3659；WO94/04690；Suresh等人，1986，MethodsinEnzymology，121:210；US5,731,168)?？梢岳昧涟彼崂?參見例如Kostelny等人，1992，J.Immunol.，148(5):1547-1553)和單鏈Fv(sFv)二聚體(參見例如Gruber等人，1994，J.Immunol.152:5368)生產(chǎn)雙特異性抗體。已有文獻(xiàn)描述了從抗體片段生產(chǎn)雙特異性抗體的技術(shù)，例如利用完整抗體在其位置經(jīng)蛋白水解裂解產(chǎn)生F(ab')片段的化學(xué)鍵(Brennan等人，1985，Science，229:81)?？梢詮拇竽c桿菌回收Fab'-SH片段并化學(xué)偶聯(lián)以形成雙特異性抗體(參見Shalaby等人，1992，J.Exp.Med.，175:217-225)?！半p抗體(diabodies)”技術(shù)提供了制備雙特異性抗體片段的替代方法(參見Hollinger等人，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90:6444-6448)?？梢灾苽涑^(guò)二價(jià)的抗體?？梢酝ㄟ^(guò)編碼抗體多肽鏈的核酸的重組表達(dá)容易地生產(chǎn)具有三個(gè)或更多個(gè)抗原結(jié)合部位和兩個(gè)或更多個(gè)可變區(qū)的多價(jià)“章魚”樣抗體(參見例如US2002/0004586和WO01/77342)。例如，可以制備三特異性抗體(參見例如Tutt等人，1991，J.Immunol.，147:60)。通過(guò)“結(jié)-入-穴”技術(shù)，可改變?nèi)蛩奶禺愋钥贵w(重鏈中或經(jīng)修飾的重鏈中)的CH3域，“結(jié)-入-穴”技術(shù)及數(shù)個(gè)實(shí)例詳細(xì)記載于例如WO96/027011，Ridgway,J.B.等人，1996，ProteinEng.，9:617-621；及Merchant,A.M.等人，1998，Nat.Biotechnol.，16:677-681中。在這種方法中，改變兩種CH3域的相互作用界面以提高含有這兩種CH3域的兩種重鏈的異二聚化。(兩種重鏈的)兩種CH3域的每一個(gè)均可以是“結(jié)”，而另一是“穴”。引入二硫橋進(jìn)一步穩(wěn)定異二聚體(參見例如Merchant,A.M.等人，1998，NatureBiotech.，16:677-681；和Atwell,S.等人，1997，J.Mol.Biol.，270:26-35)及提高產(chǎn)量。通常通過(guò)改變基本的核酸序列來(lái)改變氨基酸序列。編碼抗體氨基酸序列變體的核酸分子可通過(guò)本領(lǐng)域已知的多種方法制備。這些方法包括但不限于從天然來(lái)源分離(在天然發(fā)生的氨基酸序列變體的情況下)或者通過(guò)寡核苷酸介導(dǎo)的(或定點(diǎn))誘變、PCR誘變以及對(duì)抗體的早先制備的變體或非變異型式所進(jìn)行的盒式誘變。最感興趣的取代誘變部位包括高變區(qū)，但也可預(yù)期FR改變。如CN103319599A實(shí)施例2利用常規(guī)分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)全基因合成編碼曲妥珠單抗重鏈的DNA片段進(jìn)行定點(diǎn)突變，將曲妥珠單抗突變體重鏈K30R克隆至抗體重鏈表達(dá)載體上，酶切和連接的操作按商業(yè)提供的試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。藥物本發(fā)明中所用的藥物為細(xì)胞毒性藥物。本文中術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞毒性藥物”是指抑制或阻止細(xì)胞功能和/或引起細(xì)胞破壞的物質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞毒性藥物是耳抑素肽類，如耳抑素E(auristatinE，亦稱為海兔毒素(dolastatin)-10衍生物)或其衍生物(例如由耳抑素E和酮酸形成的酯)。舉例來(lái)說(shuō)，耳抑素E可與對(duì)乙?；郊姿峄虮郊柞；焖岱磻?yīng)，分別產(chǎn)生AEB(耳抑素EB)及AEVB(5-苯甲?；焖岫炙谽酯)。其它典型耳抑素肽類包括AFP(耳抑素F苯二胺)、MMAF(一甲基耳抑素F)及MMAE(一甲基耳抑素E)。示例性耳抑素肽類的合成和結(jié)構(gòu)描述于US6,884,869、US7,098,308、US7,256,257、US7,423,116、US7,498,298和US7,745,394中。其他新的耳抑素肽類的合成和結(jié)構(gòu)描述于WO2013/173393中。這些文獻(xiàn)整體援引加入本文。在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞毒性藥物是美登素類。美登素(maytansine)首先由Kupchan等人從東非灌木齒葉美登木(Maytenusserrata)中分離得到，它比傳統(tǒng)化療劑如甲氨碟呤、柔紅霉素和長(zhǎng)春新堿的細(xì)胞毒性強(qiáng)100至1000倍(參見US3,896,111)。隨后，發(fā)現(xiàn)一些微生物也產(chǎn)生美登素類，如美登醇(maytansinol)和美登醇的C-3酯(參見US4,151,042)。也已報(bào)道了合成的美登醇C-3酯及美登醇類似物(參見Kupchan等人，1978，J.Med.Chem.，21:31-37；Higashide等人，1977，Nature，270:721-722；Kawai等人，1984，Chem.Pharm.Bull.，32:3441-3451)。美登醇C-3酯由美登醇制備得來(lái)。美登醇類似物的實(shí)例包括：在芳環(huán)上有修飾(例如，脫氯)的美登醇，在C-9、C-14處有修飾(例如，羥化的甲基)的美登醇，在C-15、C-18、C-20和/或C-4、C-5處有修飾的美登醇。在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞毒性藥物例如是但不限于以下化合物：其中R是H、C1-C8烷基或C3-C8環(huán)烷基，所述烷基和環(huán)烷基任選地被一個(gè)或多個(gè)(如1、2、3、4或5個(gè))選自鹵素(如F、Cl、Br或I)的取代基取代；X是-S-、-CH2-、-CH(OH)-、-CH(OR)-、-CH(ONH2)-或-C(O)-；且Ar是C6-C14芳基(如苯基或萘基)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述細(xì)胞毒性藥物基團(tuán)來(lái)自通式(D1)或(D2)的化合物或它們的立體異構(gòu)體：其中：R2選自-CH2N3、-CONHSO2(環(huán)丙基)、噻唑-2-基、-CH3和-COOH；R3選自H和-OH；并且R4選自H、-NH2、Cl、Br、I、-OS(O)2R6，其中R6是H、C1-C8烷基、C3-C8環(huán)烷基或C6-C14芳基，所述烷基、環(huán)烷基和芳基各自任選地被一個(gè)或多個(gè)(如1、2、3、4或5個(gè))選自鹵素的取代基如F取代；其中R5選自-CH(CH3)N(CH3)C(O)CH2CH2SH和-CH(CH3)N(CH3)C(O)CH2C(CH3)2SH。在通式(I)中，所述細(xì)胞毒性藥物基團(tuán)可以是通式(D1)或(D2)的藥物脫除R4或R5或者脫除R4或R5中的氫或R6而得到的基團(tuán)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述細(xì)胞毒性藥物選自：連接基在本發(fā)明的抗體-藥物偶聯(lián)物中，細(xì)胞毒性藥物基團(tuán)經(jīng)二價(jià)連接基與抗體分子連接。所述連接基與抗體的連接可經(jīng)由多種方式完成，例如經(jīng)由抗體表面的賴氨酸殘基連接，或者還原偶合至抗體的經(jīng)氧化的烴基。所述連接可以是基于腙、二硫鍵或肽結(jié)構(gòu)的連接。這些連接方式是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。本發(fā)明可用的連接基包括可斷裂及不可斷裂的連接基?？蓴嗔训倪B接基在細(xì)胞內(nèi)的條件下通常易斷裂。適當(dāng)?shù)目蓴嗔训倪B接基包括例如可被細(xì)胞內(nèi)蛋白酶(如溶酶體蛋白酶(lysosomalprotease)或核內(nèi)體蛋白酶(endosomalprotease))切割的肽連接基。在示例性實(shí)施方案中，所述可斷裂的連接基可為二肽連接基，如纈氨酸-瓜氨酸(val-cit)連接基、苯丙氨酸-賴氨酸(phe-lys)連接基或順丁烯二酰亞氨基己酰基-纈氨酸-瓜氨酸-對(duì)氨基苯甲氧基羰基(mc-Val-Cit-PAB)連接基。其它適當(dāng)?shù)目蓴嗔训倪B接基包括可在特定pH或pH范圍內(nèi)被水解的連接基(如腙連接基)，以及二硫化物連接基。不可斷裂的連接基可以是磺基-SMCC?；腔?SMCC與蛋白質(zhì)偶聯(lián)經(jīng)由順丁烯二酰亞氨基發(fā)生，其磺基-NHS酯可與伯胺(如蛋白質(zhì)或肽中的賴氨酸ε-氨基及N端的α-氨基)反應(yīng)。另一不可斷裂的連接基是順丁烯二酰亞氨基己?；?MC)。連接基可與抗體共價(jià)連接，并且所述共價(jià)連接的程度應(yīng)使所述抗體必須在細(xì)胞內(nèi)被降解才能釋放藥物。連接基包括用于與抗體連接的基團(tuán)，例如氨基、羥基或羧基。連接基可來(lái)自例如順丁烯二酰亞胺、鹵代乙酰胺(例如碘乙酰胺、溴乙酰胺或氯乙酰胺)、鹵代酯(例如碘代酯、溴代酯或氯代酯)、鹵代甲基酮(例如碘甲基酮、溴甲基酮或氯甲基酮)、鹵化芐(例如碘化芐、溴化芐或氯化芐)、乙烯砜(vinylsulfone)及吡啶基硫(pyridylthio)(參見例如Wong，1991，ChemistryofProteinConjugationandCross-linking,CRCPress,Inc.,BocaRaton)。在一些實(shí)施方案中，所述連接基至少包括Val-Cit、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB、Ala-PAB或PAB。在一些實(shí)施方案中，所述連接基至少包括肽、寡糖、-(CH2)n-、-(CH2CH2O)n-。在一些實(shí)施方案中，所述連接基至少包括-C(O)-、-NH-C(O)-、-C(O)-O-、-NH-C(O)-NH-或-NH-C(O)-O-。在一些實(shí)施方案中，通式(I)中的連接基L可以選自：其中m、n每次出現(xiàn)時(shí)各自為選自1-10的整數(shù)，優(yōu)選1、2、3、4、5或6?？贵w-藥物偶聯(lián)物本發(fā)明的抗體-藥物偶聯(lián)物由上文中定義的通式(I)表示。最優(yōu)選的通式(I)的抗體-藥物偶聯(lián)物選自I-1、I-2和I-3：其中A為曲妥珠單抗。本發(fā)明的抗體-藥物偶聯(lián)物可以為藥學(xué)可接受的鹽的形式，或者為立體異構(gòu)體的形式，或者為溶劑合物的形式，并且所述鹽或立體異構(gòu)體也可為溶劑合物的形式。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”是指保留化合物的生物有效性和性質(zhì)的鹽，它們對(duì)于用做藥物在生物學(xué)上或在其它方面是符合需要的。在許多情況下，本發(fā)明的抗體-藥物偶聯(lián)物憑借其中存在的氨基和/或羧基或類似基團(tuán)來(lái)形成酸加成鹽和/或堿加成鹽。藥學(xué)上可接受的酸加成鹽可以是與無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸形成的鹽。所述無(wú)機(jī)酸包括，例如，鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸和磷酸等。所述有機(jī)酸包括，例如，乙酸、丙酸、羥基乙酸、丙酮酸、草酸、馬來(lái)酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸和水楊酸等。藥學(xué)上可接受的堿加成鹽可以是與無(wú)機(jī)堿或有機(jī)堿形成的鹽。所述與無(wú)機(jī)堿形成的鹽包括，例如，鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、錳鹽和鋁鹽等，特別優(yōu)選銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽和鎂鹽。所述有機(jī)堿包括，例如，伯胺、仲胺和叔胺，取代的胺(包括天然存在的取代的胺)，環(huán)胺，堿性離子交換樹脂等。有機(jī)堿的具體實(shí)例為異丙胺、三甲胺、二乙胺、N-乙基乙胺、三丙胺和乙醇胺。術(shù)語(yǔ)“立體異構(gòu)體”表示由于至少一個(gè)不對(duì)稱中心形成的異構(gòu)體。在具有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱中心的化合物中，其可產(chǎn)生外消旋體、外消旋混合物、單一對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體混合物和單獨(dú)的非對(duì)映異構(gòu)體。特定個(gè)別分子也可以幾何異構(gòu)體(順式/反式)存在。除非另外說(shuō)明，當(dāng)所公開的化合物的命名或結(jié)構(gòu)中沒(méi)有明確說(shuō)明其立體化學(xué)并且具有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱中心時(shí)，應(yīng)該理解代表所述化合物的所有可能的立體異構(gòu)體。術(shù)語(yǔ)“溶劑合物”表示由一個(gè)或多個(gè)溶劑分子與任一通式I的抗體-藥物偶聯(lián)物或其藥學(xué)可接受的鹽或異構(gòu)體締合形成的溶劑合物。術(shù)語(yǔ)溶劑合物包括水合物(例如半水合物、一水合物、二水合物、三水合物、四水合物以及類似的水合物)。本發(fā)明的抗體-藥物偶聯(lián)物可以選擇性地將有效量的細(xì)胞毒性藥物遞送到腫瘤組織，由此獲得更佳的治療選擇性，并以更低的劑量實(shí)現(xiàn)期望的治療功效。在第二方面，本發(fā)明提供本發(fā)明第一方面的抗體-藥物偶聯(lián)物的制備方法，所述方法包括以下步驟：(1).制備通式(I-A)的化合物：其中D、L、X和Y如上文關(guān)于通式(I)所定義；(2).活化步驟(1)中得到的通式(I-A)的化合物，得到通式(I-A-G)的化合物其中G選自-F、-Cl、-Br、-I、-N3、-OR、SR、-ONRR’、RC(O)O-、-OP(O)RR’、RSO2-O-和其中R和R’每次出現(xiàn)時(shí)各自獨(dú)立地是C1-C10烷基、C6-C14芳基、含5-10個(gè)環(huán)原子的雜環(huán)基或苯氧基，所述烷基、芳基、雜環(huán)基和苯氧基是未取代的或者各自獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、羥基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C3-C8環(huán)烷基、含5-8個(gè)環(huán)原子的雜環(huán)基、C6-C10芳基或含5-10個(gè)環(huán)原子的雜芳基的取代基取代；(3).將步驟(2)中得到的通式(I-A-G)的化合物偶聯(lián)于所述抗ErbB2抗體或者其活性片段或變體，得到具有不同a值的多種抗體-藥物偶聯(lián)物的混合物；和(4).純化步驟(3)中得到的混合物，得到抗體-藥物偶聯(lián)物。優(yōu)選地，步驟(2)中的通式(I-A-G)的化合物中的G選自-ONRR’和-OP(O)RR’，其中R和R’每次出現(xiàn)時(shí)各自獨(dú)立地是苯氧基。更優(yōu)選地，步驟(2)中的通式(I-A-G)的化合物為通過(guò)使通式(I-A)的化合物與五氟苯酚反應(yīng)而形成的通式(I-B)的化合物：其中D、L、X和Y如上文關(guān)于通式(I)所定義，并且所述反應(yīng)優(yōu)選使用EDCI、NHS和/或DCM完成。優(yōu)選地，步驟(4)的純化通過(guò)HPLC完成。在第三方面，本發(fā)明提供藥物組合物，其包含本發(fā)明第一方面的抗體-藥物偶聯(lián)物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體或者所述抗體-藥物偶聯(lián)物、鹽或立體異構(gòu)體的溶劑合物，以及藥學(xué)上可接受的載體。本文中所用的術(shù)語(yǔ)“藥物組合物”指組合在一起以實(shí)現(xiàn)特定目的的至少一種活性成分及藥學(xué)上可接受的載體和/或輔料的組合。在一些實(shí)施方案中，藥物組合物是各組分的混合物的形式，而在另一些實(shí)施方案中，藥物組合物的各組分可以是在時(shí)間和/或空間上分開的，只要其能夠共同作用以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。當(dāng)藥物組合物中含有兩種或更多種活性成分時(shí)，所述活性成分可以作為混合物同時(shí)施用于個(gè)體，也可以分開施用于個(gè)體。當(dāng)分開施用時(shí)，各活性成分可以同時(shí)或依次施用。藥學(xué)上可接受的載體的選擇取決于藥物組合物的劑型(例如用于口服、經(jīng)鼻、皮內(nèi)、皮下、肌內(nèi)或靜脈施用的劑型)，例如，可以包括水(如注射用水)、緩沖液、等滲鹽溶液如PBS(磷酸鹽緩沖液)、葡萄糖、甘露醇、右旋葡萄糖、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、纖維素、碳酸鎂、0.3％甘油、透明質(zhì)酸、抗壞血酸、乳酸、乙醇、聚亞烷基二醇如聚乙二醇(例如聚乙二醇4000)或聚丙二醇、甘油三酯等。此外，本發(fā)明的藥物組合物還可根據(jù)需要包含各種添加劑，如潤(rùn)濕劑、乳化劑或緩沖劑等等。在第四方面，本發(fā)明提供本發(fā)明第一方面的抗體-藥物偶聯(lián)物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體或者所述抗體-藥物偶聯(lián)物、鹽或立體異構(gòu)體的溶劑合物在制備用于預(yù)防或治療癌癥的藥物中的用途。所述癌癥包括但不限于乳腺癌、胃癌、卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌和肝癌，特別是乳腺癌，如ErbB2高表達(dá)的乳腺癌。在第五方面，本發(fā)明提供藥物制劑，其包含本發(fā)明第一方面的抗體-藥物偶聯(lián)物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體或者所述抗體-藥物偶聯(lián)物、鹽或立體異構(gòu)體的溶劑合物。優(yōu)選地，所述藥物制劑為固體制劑、半固體制劑、液體制劑或氣體制劑的形式。所述藥物制劑特別優(yōu)選為凍干粉針劑，其具有輔料較少，穩(wěn)定性好，臨床使用安全性較高的優(yōu)點(diǎn)。在第六方面，本發(fā)明提供預(yù)防或治療癌癥的方法，所述方法包括向有此需要的患者給藥本發(fā)明第一方面的抗體-藥物偶聯(lián)物，其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體，或者所述抗體-藥物偶聯(lián)物、鹽或立體異構(gòu)體的溶劑合物，或者向有此需要的患者給藥本發(fā)明第三方面的藥物組合物或本發(fā)明第五方面的藥物制劑。在以下的實(shí)施例中將進(jìn)一步舉例說(shuō)明本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例各實(shí)施例中使用的縮寫的含義如下表所示：DMF二甲基甲酰胺DIC二異丙基碳二亞胺HOAt1-羥基-7-氮雜苯并三唑EtOAc乙酸乙酯HPLC高壓液相色譜DIEA二異丙基乙胺HATU2-(1H-7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽DCM二氯甲烷EDCI1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺NHSN-羥基琥珀酰亞胺DMAN,N-二甲基乙酰胺HIC疏水作用色譜HPLC高效液相色譜THF四氫呋喃EtOAc乙酸乙酯實(shí)施例1.制備抗體-藥物偶聯(lián)物I-1步驟a.中間體D-1的制備在室溫下，將化合物D-0(1mmol，1當(dāng)量)溶于DMF(50mL)中，依次加入DIC(1.1當(dāng)量)、HOAt(1.1當(dāng)量)和4-(3-疊氮-2-氨基丙基)苯胺(1.5當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌8小時(shí)，然后加入水(600mL)和EtOAc(200mL*3)，萃取后收集有機(jī)相，濃縮并經(jīng)HPLC純化，得到中間體D-1。MSm/z(ESI):773[M+H]+。步驟b.中間體I-A-1的制備在室溫下，將化合物S-2(0.1mmol，1當(dāng)量)溶于DMF(50mL)中，依次加入DIEA(2當(dāng)量)、HATU(1.05當(dāng)量)和化合物D-1(2.0當(dāng)量)。在室溫下反應(yīng)12小時(shí)，然后加入水(300mL)和EtOAc(100mL*3)，萃取后收集有機(jī)相，濃縮并經(jīng)HPLC純化，得到中間體D-A-1。在室溫下，將化合物D-A-1(0.1mmol，1當(dāng)量)溶于DMF(5mL)中，依次加入DIC(1.1當(dāng)量)、HOAt(1.1當(dāng)量)和哌啶4-羧酸(1.2當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌6小時(shí)，然后加入水(60mL)和EtOAc(20mL*3)，萃取后收集有機(jī)相，濃縮并經(jīng)HPLC純化，得到中間體I-A-1。MSm/z(ESI):1240[M+H]+。步驟c.中間體I-B-1的制備在室溫下，將化合物I-A-1(0.1mmol，1當(dāng)量)溶于DCM(50mL)中，依次加入EDCI(1.5當(dāng)量)、NHS(1.5當(dāng)量)和五氟苯酚(2.0當(dāng)量)。在室溫下反應(yīng)18小時(shí)。向反應(yīng)混合物中依次加入水(30mL)、10％(w/v)檸檬酸水溶液(20mL)和飽和氯化鈉水溶液(20mL)進(jìn)行洗滌，收集有機(jī)相，濃縮并經(jīng)HPLC純化，得到中間體I-B-1。MSm/z(ESI):1406[M+H]+。步驟d.抗體-藥物偶聯(lián)物I-1粗產(chǎn)物的合成向1ml在pH7.4的PBS緩沖液中配制的濃度為10～20mg/ml的曲妥珠單抗溶液中加入4～6倍物質(zhì)的量的溶解在DMA中的化合物I-B-1。在2～40℃和溫和攪拌下反應(yīng)2～6小時(shí)，通過(guò)HIC-HPLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)，得到抗體-藥物偶聯(lián)物I-1粗產(chǎn)物，HIC-HPLC譜圖如圖1所示。HIC-HPLC條件：色譜柱：TosohTSKgelButyl-NPR,4.6×100mm流動(dòng)相A：1.5M硫酸銨水溶液流動(dòng)相B：25mM磷酸鈉水溶液，pH＝7.0，25％(v/v)異丙醇水溶液流速：0.5ml/min梯度：0～2min：17％流動(dòng)相B+83％流動(dòng)相A2～15min：17％～40％流動(dòng)相B+83％～60％流動(dòng)相A15～15.1min：40％～70％流動(dòng)相B+60％～30％流動(dòng)相A15.1～17min，70％流動(dòng)相B+30％流動(dòng)相A從圖1可以看出，抗體-藥物偶聯(lián)物I-1粗產(chǎn)物為包含I-1-1(圖1中的DAR1，n＝1)、I-1-2(圖1中的DAR2，n＝2)、I-1-3(圖1中的DAR3，n＝3)和I-1-4(圖1中的DAR4，n＝4)的混合物。步驟e.抗體-藥物偶聯(lián)物I-1粗產(chǎn)物的純化對(duì)步驟d中得到的抗體-藥物偶聯(lián)物I-1粗產(chǎn)物進(jìn)行HIC，經(jīng)脫鹽換液(即更換緩沖液)和超濾濃縮，獲得抗體-藥物偶聯(lián)物I-1。HIC條件：填料：GE填料(PheynlHP)流動(dòng)相A：1.5M硫酸銨水溶液，25mM磷酸氫二鈉水溶液，pH7.0流動(dòng)相B：25mM磷酸氫二鈉水溶液，pH7.0，10％異丙醇溶液流速：1.0ml/min洗脫條件：0％～40％流動(dòng)相B洗脫20CV；40％～100％流動(dòng)相B洗脫30CV分管收集通過(guò)HIC對(duì)所得抗體-藥物偶聯(lián)物I-1進(jìn)行DAR分析，HIC譜圖如圖2所示。從圖2可以看出，抗體-藥物偶聯(lián)物I-1的DAR為2，表明該抗體-藥物偶聯(lián)物中n＝2，是一分子抗體上偶聯(lián)兩分子藥物的抗體-藥物偶聯(lián)物，并且產(chǎn)物純凈。進(jìn)一步對(duì)抗體-藥物偶聯(lián)物I-1進(jìn)行輕重鏈還原液相色譜分析，得到重疊反相色譜圖，如圖3所示。在圖3中，深色曲線是曲妥珠單抗裸抗的譜圖，淺色曲線是抗體-藥物偶聯(lián)物I-1的譜圖。在兩譜圖中，較高的峰指示抗體重鏈，較低的峰指示抗體輕鏈。從圖3可以看出，與未偶聯(lián)藥物的曲妥珠單抗裸抗相比，抗體-藥物偶聯(lián)物I-1中的抗體輕鏈因偶聯(lián)藥物分子而疏水性增強(qiáng)，因此保留時(shí)間后移。這說(shuō)明，抗體-藥物偶聯(lián)物I-1中藥物分子全部偶聯(lián)在抗體輕鏈上。進(jìn)一步將抗體-藥物偶聯(lián)物I-1和曲妥珠裸抗在相同條件下進(jìn)行酶切，得到肽圖譜，如圖4所示。在圖4的肽圖譜中，上面的圖為裸抗在214nm的肽圖譜，下面的圖為抗體-藥物偶聯(lián)物I-1在214nm的肽圖譜。經(jīng)比較，抗體-藥物偶聯(lián)物I-1中只在保留時(shí)間65.5min處增加了一個(gè)肽段。結(jié)合圖3的輕重鏈還原色譜圖可知，本實(shí)施例制備得到的抗體-藥物偶聯(lián)物I-1中，毒素分子(D)全部偶聯(lián)在輕鏈同一肽段的賴氨酸上，實(shí)現(xiàn)了定點(diǎn)偶聯(lián)，因而獲得優(yōu)異的產(chǎn)品質(zhì)量均一性、質(zhì)量可控性和重現(xiàn)性。實(shí)施例2.制備抗體-藥物偶聯(lián)物I-2步驟a.中間體I-A-2的制備在室溫下，將化合物D-2(購(gòu)于南京聯(lián)寧生物制藥公司，1mmol，1當(dāng)量)溶于DMF(50mL)中，加入碳酸鉀(2.5當(dāng)量)和2-氯乙酸甲酯(1.5當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物升溫至40～45℃，反應(yīng)4小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，過(guò)濾除去碳酸鉀固體，濃縮濾液。將濃縮所得物質(zhì)溶于甲醇(30mL)中，加入1M的氫氧化鋰水溶液將pH調(diào)節(jié)至13～14。將反應(yīng)混合物升溫至55℃，攪拌16小時(shí)，然后加入10％(w/v)的檸檬酸水溶液，濃縮并經(jīng)HPLC純化，得到中間體D-A-2。在室溫下，將化合物D-A-2(0.1mmol，1當(dāng)量)溶于DMF(5mL)中，依次加入DIC(1.1當(dāng)量)、HOAt(1.1當(dāng)量)和哌啶4-羧酸(1.2當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌6小時(shí)，然后加入水(60mL)和EtOAc(20mL*3)，萃取后收集有機(jī)相，濃縮并經(jīng)HPLC純化，得到中間體I-A-2。MSm/z(ESI):907[M+H]+。步驟b.中間體I-B-2的制備在室溫下，將化合物I-A-2(0.1mmol，1當(dāng)量)溶于DCM(50mL)中，依次加入EDCI(1.5當(dāng)量)、NHS(1.5當(dāng)量)和五氟苯酚(2.0當(dāng)量)。在室溫下反應(yīng)18小時(shí)。向反應(yīng)混合物中依次加入水(30mL)、飽和檸檬酸水溶液(20mL)和飽和氯化鈉水溶液(20mL)進(jìn)行洗滌，萃取后收集有機(jī)相，濃縮并經(jīng)HPLC純化，得到中間體I-B-2。MSm/z(ESI):1073[M+H]+。步驟c.抗體-藥物偶聯(lián)物I-2粗產(chǎn)物的合成向1ml在pH7.4的PBS緩沖液中配制的濃度為10mg/ml的曲妥珠單抗溶液中加入8倍物質(zhì)的量的溶解在DMA中的化合物I-B-2。在室溫和溫和攪拌下反應(yīng)16小時(shí)，通過(guò)HIC-HPLC(HIC-HPLC條件與實(shí)施例1步驟d中所列相同)監(jiān)測(cè)反應(yīng)，得到抗體-藥物偶聯(lián)物I-2粗產(chǎn)物，HIC-HPLC譜圖如圖5所示。從圖5可以看出，抗體-藥物偶聯(lián)物I-2粗產(chǎn)物為包含I-2-1(圖5中的DAR1，n＝1)、I-2-2(圖5中的DAR2，n＝2)和I-2-3(圖5中的DAR3，n＝3)的混合物。步驟d.抗體-藥物偶聯(lián)物I-2粗產(chǎn)物的純化對(duì)步驟c中得到的抗體-藥物偶聯(lián)物I-2粗產(chǎn)物進(jìn)行HIC(HIC條件與實(shí)施例1步驟e中所列相同)，經(jīng)脫鹽換液和超濾濃縮，獲得抗體-藥物偶聯(lián)物I-2。通過(guò)HIC對(duì)所得抗體-藥物偶聯(lián)物I-2進(jìn)行DAR分析，HIC譜圖如圖6所示。從圖6可以看出，抗體-藥物偶聯(lián)物I-2的DAR為2，表明該抗體-藥物偶聯(lián)物中n＝2，是一分子抗體上偶聯(lián)兩分子藥物的抗體-藥物偶聯(lián)物，并且產(chǎn)物純凈。進(jìn)一步對(duì)抗體-藥物偶聯(lián)物I-2進(jìn)行輕重鏈還原液相色譜分析，得到重疊色譜圖，如圖7所示。在圖7中，深色曲線是曲妥珠單抗裸抗的譜圖，淺色曲線是抗體-藥物偶聯(lián)物I-2的譜圖。在兩譜圖中，較高的峰指示抗體重鏈，較低的峰指示抗體輕鏈。從圖7可以看出，與未偶聯(lián)藥物的曲妥珠單抗裸抗相比，抗體-藥物偶聯(lián)物I-2中的抗體輕鏈因偶聯(lián)藥物分子而疏水性增強(qiáng)，因此保留時(shí)間后移。這說(shuō)明，抗體-藥物偶聯(lián)物I-2中藥物分子全部偶聯(lián)在抗體輕鏈上。由于實(shí)現(xiàn)了定點(diǎn)偶聯(lián)，可獲得優(yōu)異的產(chǎn)品質(zhì)量均一性、質(zhì)量可控性和重現(xiàn)性。實(shí)施例3.制備抗體-藥物偶聯(lián)物I-3步驟a.中間體I-A-3的制備在室溫下，將化合物D-3(根據(jù)CN104662000A第65頁(yè)實(shí)施例V-3合成，1mmol，1當(dāng)量)溶于THF(60mL)和DMF(30mL)的混合溶液中，依次加入二(對(duì)硝基苯基)碳酸酯(3當(dāng)量)和DIEA(2當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后加入水(600mL)和EtOAc(200mL*3)，萃取后收集有機(jī)相，濃縮得到中間體D-A-3粗品，不經(jīng)純化而直接用于下一步反應(yīng)。在室溫下，將哌啶4-羧酸(5當(dāng)量)溶解在飽和NaHCO3水溶液(5mL)中，加入化合物D-A-3粗品(1當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌8小時(shí)。加入10％(w/v)檸檬酸水溶液以將pH調(diào)節(jié)至4～5，然后用EtOAc(150mL*2)萃取。將有機(jī)相干燥并濃縮，得到中間體I-A-3粗品。MSm/z(ESI):1020[M+H]+。步驟b.中間體I-B-3的制備在室溫下，將化合物I-A-3(0.1mmol，1當(dāng)量)溶于DCM(50mL)中，依次加入EDCI(1.5當(dāng)量)、NHS(1.5當(dāng)量)和五氟苯酚(2.0當(dāng)量)。在室溫下反應(yīng)18小時(shí)。向反應(yīng)混合物中依次加入水(30mL)、10％(w/v)檸檬酸水溶液(20mL)和飽和氯化鈉水溶液(20mL)進(jìn)行洗滌，萃取后收集有機(jī)相，濃縮并經(jīng)HPLC純化，得到中間體I-B-3。MSm/z(ESI):1186[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.02-7.09(m,4H),4.92(m,1H),4.52(m,1H),3.89(d,1H),3.77(m,1H),3.68-3.55(m,3H),3.46(m,2H),3.24(m,6H),3.05(d,2H),2.92-2.90(m,4H),2.68(m,1H),2.33-2.27(m,11H),1.97-1.93(m,4H),1.73-1.72(m,5H),1.29-1.24(m,5H),1.06-1.01(m,15H),0.96(m,3H),0.74(m,4H),3.34(m,4H)。步驟c.抗體-藥物偶聯(lián)物I-3粗產(chǎn)物的合成向1ml在pH7.8的PBS緩沖液中配制的濃度為10mg/ml的曲妥珠單抗溶液中加入8倍物質(zhì)的量的溶解在DMA中的化合物D-0913-3。在室溫和溫和攪拌下反應(yīng)4小時(shí)，通過(guò)HIC-HPLC(HIC-HPLC條件與實(shí)施例1步驟d中所列相同)監(jiān)測(cè)反應(yīng)，得到抗體-藥物偶聯(lián)物I-3粗產(chǎn)物，HIC-HPLC譜圖如圖8所示。從圖8可以看出，抗體-藥物偶聯(lián)物I-3粗產(chǎn)物為包含I-3-1(圖8中的DAR1，n＝1)、I-3-2(圖8中的DAR2，n＝2)和I-3-3(圖8中的DAR3，n＝3)的混合物。步驟d.抗體-藥物偶聯(lián)物I-3粗產(chǎn)物的純化對(duì)步驟c中得到的抗體-藥物偶聯(lián)物I-3粗產(chǎn)物進(jìn)行HIC(HIC條件與實(shí)施例1步驟e中所列相同)，經(jīng)脫鹽換液和超濾濃縮，獲得抗體-藥物偶聯(lián)物I-3。通過(guò)HIC對(duì)所得抗體-藥物偶聯(lián)物I-3進(jìn)行DAR分析，HIC譜圖如圖9所示。從圖9可以看出，抗體-藥物偶聯(lián)物I-3的DAR為2，表明該抗體-藥物偶聯(lián)物中n＝2，是一分子抗體上偶聯(lián)兩分子藥物的抗體-藥物偶聯(lián)物，并且產(chǎn)物純凈。進(jìn)一步對(duì)抗體-藥物偶聯(lián)物I-3進(jìn)行輕重鏈還原液相色譜分析，得到重疊色譜圖，如圖10所示。在圖10中，深色曲線是曲妥珠單抗裸抗的譜圖，淺色曲線是抗體-藥物偶聯(lián)物I-3的譜圖。在兩譜圖中，較高的峰指示抗體重鏈，較低的峰指示抗體輕鏈。從圖10可以看出，與未偶聯(lián)藥物的曲妥珠單抗裸抗相比，抗體-藥物偶聯(lián)物I-3中的抗體輕鏈因偶聯(lián)藥物分子而疏水性增強(qiáng)，因此保留時(shí)間后移。這說(shuō)明，抗體-藥物偶聯(lián)物I-3中藥物分子全部偶聯(lián)在抗體輕鏈上。由于實(shí)現(xiàn)了定點(diǎn)偶聯(lián)，可獲得優(yōu)異的產(chǎn)品質(zhì)量均一性、質(zhì)量可控性和重現(xiàn)性。實(shí)施例4.體內(nèi)活性測(cè)試本實(shí)施例評(píng)價(jià)實(shí)施例1～3的抗體-藥物偶聯(lián)物對(duì)皮下移植了人腫瘤細(xì)胞的小鼠的腫瘤增殖的抑制。具體而言，本實(shí)施例考察將實(shí)施例1～3的抗體-藥物偶聯(lián)物單次尾靜脈注射給皮下移植人胃癌細(xì)胞株NCI-N87、乳腺癌細(xì)胞株HCC-1954、乳腺癌細(xì)胞株BT474、卵巢癌細(xì)胞株SK-OV-3的小鼠后，測(cè)定腫瘤體積和動(dòng)物體重變化，計(jì)算抗體-藥物偶聯(lián)物對(duì)荷瘤小鼠的藥效(抑瘤療效)。1、實(shí)驗(yàn)原料1.1.腫瘤細(xì)胞胃癌細(xì)胞株NCI-N87(ATCC)、乳腺癌細(xì)胞株HCC-1954(Concortis)、乳腺癌細(xì)胞株BT-474(Concortis)、卵巢癌細(xì)胞株SK-OV-3(Concortis)均采用細(xì)胞體外單層培養(yǎng)。1.2.腫瘤模型將1.1中得到的腫瘤細(xì)胞分別接種至BALB/c裸鼠或NOD-SCID小鼠(SPF級(jí)，雌性，16-18g/只，約6～8周齡，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司)。在每只荷瘤鼠右側(cè)腋下皮下接種4×106個(gè)胃癌細(xì)胞株NCI-N87(懸浮于0.1mlPBS中)，接種后待腫瘤生長(zhǎng)至100～200mm3時(shí)，剔除瘤體積過(guò)小(小于100mm3)或過(guò)大(大于200mm3)的荷瘤鼠，將余下荷瘤鼠隨機(jī)分組，作為胃癌NCI-N87模型。得到乳腺癌HCC-1954模型、乳腺癌BT-474模型、卵巢癌SK-OV-3模型的方法與上述方法類似。1.3處理品溶液配制稱取適量曲妥珠單抗裸抗、T-DM1(陽(yáng)性對(duì)照，(ado-trastuzumabemtansine)，羅氏制藥)或本發(fā)明的抗體-藥物偶聯(lián)物(I-3、I-1或I-2，實(shí)施例1～3制備)，分別用無(wú)菌超純水配制成一定濃度的母液，輕柔搖勻后，分裝于-80℃保存。使用時(shí)用生理鹽水根據(jù)劑量稀釋，得到處理品溶液，并采用相同濃度的生理鹽水作為溶劑對(duì)照。2、實(shí)驗(yàn)方法：選擇隨機(jī)分組(根據(jù)樣品數(shù)量決定分組數(shù))的腫瘤體積在100～200mm3的荷瘤鼠(1.2中得到的模型)，7只/組。給藥體積為10ml/kg。給藥途徑為單次尾靜脈注射。給藥后觀察8周，每周2次用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤直徑，并按如下計(jì)算公式計(jì)算腫瘤體積：V＝0.5a2×b，其中a和b分別表示腫瘤的長(zhǎng)徑和短徑。每天觀察記錄動(dòng)物死亡情況。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果腫瘤生長(zhǎng)抑制率TGI(％)用于評(píng)價(jià)抗體-藥物偶聯(lián)物的抑瘤療效。采用以下公式計(jì)算TGI(％)：TGI(％)＝[1-(VT末-VT始)/(VC末-VC始)]*100％其中VT末：處理組實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)腫瘤體積均值VT始：處理組給藥開始時(shí)腫瘤體積均值VC末：溶劑對(duì)照組實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)腫瘤體積均值VC始：溶劑對(duì)照組給藥開始時(shí)腫瘤體積均值計(jì)算結(jié)果見表1～5。表1.乳腺癌BT-474模型組別樣品劑量(mg/kg)TGI(％)1溶劑//2T-DM1354.80％3I-13104.75％表2.乳腺癌HCC-1954模型組別樣品劑量(mg/kg)TGI(％)1溶劑//2T-DM1379.37％3曲妥珠單抗裸抗1578.94％4I-13104.47％5I-33104.04％表3：胃癌NCI-N87模型表4：胃癌NCI-N87模型組別樣品劑量(mg/kg)TGI(％)1溶劑//2T-DM1230.136％3I-12114.99％4I-3287.04％5T-DM1365.28％6I-33102.72％表5：卵巢癌SK-OV-3模型組別樣品劑量(mg/kg)TGI(％)1溶劑//2T-DM16-11.04％3I-2654.72％4I-3672.27％從表1至表5可以看出，本發(fā)明的抗體-藥物偶聯(lián)物I-1、I-3和I-2在60天的評(píng)價(jià)周期內(nèi)，藥效均明顯優(yōu)于T-DM1。實(shí)施例5.制備凍干粉針劑使用如下表所示原料制備抗體-藥物偶聯(lián)物凍干粉針劑：抗體-藥物偶聯(lián)物I-128g抗壞血酸20g乳酸10g聚乙二醇400063g注射用水2000ml其中抗壞血酸和乳酸在起到助溶劑的同時(shí)也起到了抗氧化劑的作用。制備方法：1、取20g抗壞血酸和10g乳酸，加1000ml注射用水，加熱至50～55℃，攪拌使其溶解，取28g抗體-藥物偶聯(lián)物I-1加入溶液中，攪拌溶解后繼續(xù)攪拌15分鐘。2、取63g聚乙二醇4000，加800ml注射用水，攪拌15分鐘。3、將1、2中所得溶液合并，加注射用水至全量，加0.15％的針用活性炭，攪拌25分鐘，過(guò)濾脫炭，中間體檢查，合格后用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌。4、將濾液灌入西林瓶中，進(jìn)行冷凍干燥，得凍干粉針，檢驗(yàn)合格后，包裝。盡管本發(fā)明通過(guò)之前的具體實(shí)施例得到說(shuō)明，但應(yīng)當(dāng)理解，不應(yīng)將其解釋為受此限制。本發(fā)明涵蓋之前公開的一般方面，并且本領(lǐng)域技術(shù)人員可在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下進(jìn)行多種修飾或改變本發(fā)明的各種細(xì)節(jié)。因此，本說(shuō)明書僅為說(shuō)明的目的，而非為限制的目的。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3