本發(fā)明涉及一種藥物組合物，特別是涉及一種由對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸或其可藥用鹽或其可藥用衍生物組成的藥物組合物。

背景技術(shù)：

眾所周知，肝臟是藥物聚集、轉(zhuǎn)化、代謝的主要器官，尤其是口服藥物經(jīng)胃腸吸收后即進(jìn)入肝臟，通常肝內(nèi)的藥物濃度較血液及其他器官中更高。因此，當(dāng)藥物的用量過(guò)大或用藥時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，就會(huì)對(duì)肝臟造成損害，特別是不恰當(dāng)?shù)睾嫌脙煞N或多種藥物時(shí)，損害更甚，會(huì)造成部分肝細(xì)胞壞死，表現(xiàn)為黃疸、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高等肝功能指標(biāo)異常。一般而言，由于藥物及其代謝產(chǎn)物的毒性作用或機(jī)體對(duì)藥物產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)，對(duì)肝臟造成損害，引起肝組織炎癥，造成肝細(xì)胞壞死，即為藥物性肝損傷。目前已知可引起藥物性肝損傷的藥物主要有解熱鎮(zhèn)痛類非甾體抗炎藥(如對(duì)乙酰氨基酚)、鎮(zhèn)靜催眠藥、抗結(jié)核藥、抗寄生蟲(chóng)藥以及某些抗生素和激素類藥物等。

根據(jù)目前的研究證實(shí)，藥物導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷的機(jī)制主要包括：

1、藥物代謝產(chǎn)物形成氧自由基使脂質(zhì)過(guò)氧化引起肝細(xì)胞損傷；

2、由于遺傳背景不同使P450表型不同，部分藥物經(jīng)代謝產(chǎn)生親電子產(chǎn)物，通過(guò)共價(jià)結(jié)合損傷肝細(xì)胞膜和肝線粒體、微粒體膜引起肝細(xì)胞損傷；

3、藥物代謝產(chǎn)生超氧化離子促使脂質(zhì)過(guò)氧化，導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷等。

無(wú)論出于何種機(jī)制，藥物性肝損傷的廣泛發(fā)生都大大限制了藥物的使用、增加了治療風(fēng)險(xiǎn)、提高了治療成本，已成為現(xiàn)代醫(yī)療實(shí)踐中的一個(gè)巨大障礙。

對(duì)乙酰氨基酚(Acetaminophen，又稱撲熱息痛)是一種最常見(jiàn)的非甾體類解熱鎮(zhèn)痛藥，常用于普通感冒或流行性感冒引起的發(fā)熱，也用于緩解輕至中度疼痛如頭痛、關(guān)節(jié)痛、偏頭痛、牙痛、肌肉痛、神經(jīng)痛、痛經(jīng)等，應(yīng)用極為廣泛。然而，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的臨床觀察和實(shí)驗(yàn)室研究發(fā)現(xiàn)，大劑量或長(zhǎng)期應(yīng)用對(duì)乙酰氨基酚， 可引起動(dòng)物和人類嚴(yán)重的肝腎損傷(James LP，Mayeux PR，Hinson JA.Acetaminophen—induced Hepato-toxicity[J].Drug metabolism and dispositkm，2003，31(12)：1499.)，甚至死亡。對(duì)乙酰氨基酚在體內(nèi)經(jīng)肝細(xì)胞色素P450代謝，在治療劑量范圍內(nèi)使用時(shí)，絕大部分產(chǎn)物與硫酸、葡葡糖醛酸結(jié)合，僅很少一部分生成毒性中間產(chǎn)物N-乙酰-對(duì)-苯醌亞胺(NAPQI)，NAPQI通過(guò)還原型谷胱甘肽(GSH)結(jié)合反應(yīng)而解毒。但服用大劑量對(duì)乙酰氨基酚可耗竭肝細(xì)胞內(nèi)的谷胱甘肽，同時(shí)生成大量的NAPQI，此時(shí)過(guò)多的NAPQI便與肝細(xì)胞內(nèi)大分子共價(jià)結(jié)合，導(dǎo)致肝細(xì)胞溶解，引起急性肝損傷。此外，NAPQI還可誘發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)造成過(guò)氧化損傷，并與線粒體結(jié)合干擾細(xì)胞內(nèi)的能量代謝(Knight R，F(xiàn)ariss MW，F(xiàn)arhood A，et a1.Role of lipid peroxidation as a mechanism of liver injury after acetaminophen overdose in mice[J].Toxicol Sci，2003，76(1)：229.)。鑒于此，如何更加安全、有效的使用對(duì)乙酰氨基酚，在確保其使用便利性的同時(shí)，降低使用過(guò)程中的肝損傷風(fēng)險(xiǎn)已成為一個(gè)急需解決的醫(yī)學(xué)問(wèn)題。

甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch，別名：國(guó)老)是一種常用的傳統(tǒng)中藥，在中醫(yī)古方中多作為用于調(diào)和諸藥的“使藥”來(lái)使用。藥用甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草Glycyrrhiza inflate Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根莖。甘草中含有多種化學(xué)成分，如甘草酸、甘草次酸、甘草苷、異甘草苷、甘草素、異甘草素等，其中甘草酸和甘草次酸為其主要有效成分。目前，臨床研究已證實(shí)，甘草酸及其鹽和衍生物具有許多藥理作用，如抗炎、抗?jié)?、腎上腺皮質(zhì)激素樣作用等，同時(shí)具有一定的保護(hù)肝細(xì)胞膜及改善肝功能的作用。然而，現(xiàn)有的甘草提取物制劑大多以單藥品制劑形式用于臨床，復(fù)方制劑較少，使用中的復(fù)方制劑也都采用作用相似的同類藥品組成復(fù)方，獲取藥物協(xié)同作用以增強(qiáng)療效。

截至目前，尚未見(jiàn)到有關(guān)對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸或甘草酸鹽或甘草酸衍生物組成藥物組合物的相關(guān)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

(一)解決的技術(shù)問(wèn)題

本發(fā)明旨在針對(duì)大劑量或長(zhǎng)期應(yīng)用對(duì)乙酰氨基酚的過(guò)程中，易引起動(dòng)物和人 類嚴(yán)重的肝損傷從而限制了對(duì)乙酰氨基酚的廣泛使用、增加了治療風(fēng)險(xiǎn)、提高了治療成本的醫(yī)療問(wèn)題，提供了一種由對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸或其可藥用鹽或其可藥用衍生物組成藥物組合物，從而在很大程度上減少了對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷的發(fā)生。

(二)技術(shù)方案

本發(fā)明公開(kāi)了一種藥物組合物，由對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸或其可藥用鹽或其可藥用衍生物組成，所述對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸或其可藥用鹽或其可藥用衍生物的重量比為40:1～1:1。

在另一優(yōu)選例中，所述甘草酸或其可藥用鹽或其可藥用衍生物在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物為甘草次酸。

在另一優(yōu)選例中，所述甘草酸可藥用鹽或甘草酸可藥用衍生物選自甘草酸單銨鹽、甘草酸二銨、甘草酸單鉀、甘草酸二鉀、甘草酸二鈉、甘草酸三鈉、異甘草酸鎂、甘草次酸或甘草酸苷。

進(jìn)一步地，所述甘草酸可藥用鹽為甘草酸二銨。

進(jìn)一步地，所述甘草酸可藥用衍生物為甘草次酸。

在另一優(yōu)選例中，所述對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸或其可藥用鹽或其可藥用衍生物的重量比為15:1～1:1。

進(jìn)一步地，所述對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸或其可藥用鹽或其可藥用衍生物的重量比為10:1～2.5:1。

進(jìn)一步地，所述對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸或其可藥用鹽或其可藥用衍生物的重量比為10:1。

進(jìn)一步地，所述對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸或其可藥用鹽或其可藥用衍生物的重量比為5:1。

進(jìn)一步地，所述對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸或其可藥用鹽或其可藥用衍生物的重量比為2.5:1。

本發(fā)明同時(shí)還公開(kāi)了一種由上述藥物組合物制成的口服藥物，包括治療有效量的所述藥物組合物、藥用載體和藥用輔料。

進(jìn)一步地，所述口服藥物為片劑、膠囊劑或顆粒劑。

(三)有益技術(shù)效果

本發(fā)明提供的由對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸或其可藥用鹽或其可藥用衍生物組成的藥物組合物，可以在很大程度上減少對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷的發(fā)生，同時(shí)又確保了其使用的便利性，從而為更加安全、有效的使用對(duì)乙酰氨基酚提供了解決方案，本發(fā)明的推廣使用，將會(huì)為醫(yī)生提供更加安全可靠的醫(yī)療選擇，同時(shí)增加患者的依從性和耐受性，在實(shí)現(xiàn)社會(huì)效益的同時(shí)也將產(chǎn)生可觀的經(jīng)濟(jì)效益，具有良好的發(fā)展前景。

具體實(shí)施方式

對(duì)乙酰氨基酚作為一種常見(jiàn)的非甾體類解熱鎮(zhèn)痛藥，廣泛用于治療普通感冒或流行性感冒引起的發(fā)熱以及緩解輕至中度疼痛。然而，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的臨床觀察和實(shí)驗(yàn)室研究發(fā)現(xiàn)，大劑量或長(zhǎng)期應(yīng)用對(duì)乙酰氨基酚，可引起動(dòng)物和人類嚴(yán)重的肝損傷，甚至死亡。

甘草作為一種常用的傳統(tǒng)中藥，含有多種化學(xué)成分，如甘草酸、甘草次酸、甘草苷、異甘草苷、甘草素、異甘草素等，其中甘草酸和甘草次酸為其主要有效成分。目前，臨床研究已證實(shí)，甘草酸及其鹽和衍生物具有許多藥理作用，如抗炎、抗?jié)?、腎上腺皮質(zhì)激素樣作用等，同時(shí)具有一定的保護(hù)肝細(xì)胞膜及改善肝功能的作用。

本發(fā)明在配伍設(shè)計(jì)和藥理實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，制備出由對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸或其可藥用鹽或其可藥用衍生物組成的藥物組合物，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)：利用甘草酸或其鹽或其衍生物對(duì)肝細(xì)胞膜及肝功能的保護(hù)作用，本發(fā)明藥物組合物能夠在實(shí)現(xiàn)對(duì)乙酰氨基酚治療目的的情況下，最大限度的減少其所致肝損傷的發(fā)生，同時(shí)，藥物組合物的形式又確保了對(duì)乙酰氨基酚使用的便利性，從而為更加安全、有效的使用對(duì)乙酰氨基酚提供了解決方案，本發(fā)明在為醫(yī)生提供更加可靠的醫(yī)療選擇的同時(shí)，也將增加患者的依從性和耐受性。

本發(fā)明藥物組合物中的對(duì)乙酰氨基酚、甘草酸、甘草酸鹽及甘草酸衍生物可通過(guò)商業(yè)途徑獲得或者使用本領(lǐng)域常規(guī)的提取純化法、化學(xué)合成法或生物轉(zhuǎn)化法制備獲得。

本發(fā)明的甘草酸可藥用鹽包括各種無(wú)機(jī)或有機(jī)酸鹽如銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鎂鹽等。

本發(fā)明的甘草酸可藥用衍生物包括甘草酸苷、甘草次酸等。

本發(fā)明的甘草酸或其可藥用鹽或其可藥用衍生物在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物或活性成分為甘草次酸。

本發(fā)明的藥物組合物可與其他原料藥物、藥用載體、藥用輔料結(jié)合使用，通過(guò)本領(lǐng)域常規(guī)的制劑技術(shù)，制備成包含本發(fā)明藥物組合物的其他各種復(fù)方藥物，在新的復(fù)方藥物中，本發(fā)明藥物組合物仍然能夠在實(shí)現(xiàn)對(duì)乙酰氨基酚治療目的的情況下，最大限度的降低其所致肝損傷的發(fā)生。

治療有效量的本發(fā)明藥物組合物可按本領(lǐng)域常規(guī)方法制備成口服制劑或與其他原料藥物、藥用載體、藥用輔料共同制成復(fù)方制劑，也可以通過(guò)腸道或非腸道或局部途徑給藥?？诜苿┌ㄆ瑒㈩w粒劑、混懸劑、膠囊劑、溶液劑等；非腸道給藥制劑包括注射液；局部給藥制劑包括霜?jiǎng)?、貼劑、軟膏劑、噴霧劑等?！爸委熡行Я俊笔侵改軌蜻_(dá)到治療效果的藥物組合物的量。本領(lǐng)域的專業(yè)人員能夠理解，“治療有效量”可以隨著疾病種類、治療對(duì)象、藥物劑型、給藥途徑、載體種類以及和其他藥物聯(lián)用等而有所不同。

本發(fā)明藥物組合物制成的制劑或與其他原料藥物、藥用載體、藥用輔料共同制成的復(fù)方制劑，其給藥途徑可以為口服、舌下、經(jīng)皮、經(jīng)肌肉、皮下、皮膚粘膜、靜脈、尿道、陰道等。

所述藥用載體包括但不限于：軟磷脂、硬脂酸鋁、氧化鋁、離子交換材料、自乳化藥物傳遞系統(tǒng)、吐溫或其他表面活化劑、血清蛋白、緩沖物質(zhì)如磷酸鹽、氨基乙酸、山梨酸、水、鹽、電解質(zhì)如硫酸鹽精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、硅酸鎂、飽和脂肪酸部分甘油酯混合物等。

所述藥用輔料包括但不限于：粘合劑(如微晶纖維素)、填充劑(如淀粉、葡萄糖、無(wú)水乳糖、乳糖珠粒)、崩解劑(如交聯(lián)PVP、交聯(lián)羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、低取代羥丙基纖維素)、潤(rùn)滑劑(如硬脂酸鎂)以及吸收促進(jìn)劑、吸附載體、香味劑、甜味劑、賦形劑、稀釋劑、潤(rùn)濕劑等。

本發(fā)明藥物組合物制成的制劑或與其他原料藥物、藥用載體、藥用輔料共同制成的復(fù)方制劑的用量可根據(jù)疾病種類和嚴(yán)重程度、給藥途徑、患者的年齡和體重、患者的肝腎功能等具體情況并參照相關(guān)的醫(yī)療實(shí)踐指南來(lái)確定，可以一次或多次給藥。

以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但并不意味著本發(fā)明僅限于此。

實(shí)施例1 不同劑量對(duì)乙酰氨基酚重復(fù)灌胃給予SD大鼠的致肝臟毒性試驗(yàn)

本試驗(yàn)?zāi)康氖翘剿鞑煌瑒┝康膶?duì)乙酰氨基酚重復(fù)灌胃給予SD大鼠的肝臟毒性，為該藥和甘草酸或其鹽或其衍生物組成的藥物組合物的肝毒性減輕試驗(yàn)提供適宜的對(duì)乙酰氨基酚劑量設(shè)計(jì)依據(jù)。

本試驗(yàn)所用試劑如下：

1.對(duì)乙酰氨基酚，提供單位：北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：1311379，性狀及理化性質(zhì)：白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。

2.羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，生產(chǎn)單位：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：F20110523，性狀及理化性狀：白色或微黃色纖維狀粉末，粘度：800～1200mPa.s。

3.滅菌注射用水，生產(chǎn)單位：山東齊都藥業(yè)有限公司，批號(hào)：2A14110503。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：

動(dòng)物種屬：Sprague-Dawley大鼠(SD大鼠)

動(dòng)物等級(jí)：SPF級(jí)

動(dòng)物周齡：方案要求給藥開(kāi)始時(shí)6～8周齡，實(shí)際給藥開(kāi)始時(shí)動(dòng)物6～8周齡。

動(dòng)物體重：給藥開(kāi)始時(shí)動(dòng)物體重為183～206g(♂)，161～190g(♀)；動(dòng)物體重在該性別動(dòng)物平均體重的80％～120％之間。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來(lái)源：北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(京)2012-0001；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證編號(hào)：11400700103783；生產(chǎn)許可證簽發(fā)單位：北京市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇的理由：本試驗(yàn)選用SD大鼠是藥物非臨床研究中使用的標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物，具有大量的背景數(shù)據(jù)。遺傳背景清楚，對(duì)藥物的反應(yīng)比較穩(wěn)定，個(gè)體差異較小，飼養(yǎng)方便，體形較小，便于試驗(yàn)操作，節(jié)省供試品。并且在研究相同或類似供試品時(shí)發(fā)現(xiàn)是合適的動(dòng)物模型，沒(méi)有其他已知可替代活體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法。

供試品配制：

配制時(shí)間和頻率：給藥當(dāng)天進(jìn)行供試品的配制，溶媒和陰性對(duì)照品1周配制1次。

配制方法：陰性對(duì)照品和溶媒，稱量一定量的羧甲基纖維素鈉，加入滅菌注射用水定容至相應(yīng)體積，配制濃度成為0.5％羧甲基纖維素鈉溶液，于磁力攪拌器上攪拌至溶液澄清為止。

供試品混懸液配制方法：稱取一定量對(duì)乙酰氨基酚，加入一定體積0.5％CMC-Na，乳化機(jī)乳化3-5min，至無(wú)可見(jiàn)顆粒物，以0.5％CMC-Na定容至50mg/ml、100mg/ml、150mg/ml和200mg/ml。

供試品分析：首次配制的供試品混懸液(50～200mg/ml)，在配制后分別從上、中、下三層留樣，每層留2份，每份約0.5mL，用于供試品濃度、均一性及穩(wěn)定性分析。留樣的供試品溶液，一份于陰涼避光保存，在配制后2天分析；另一份留樣于2～8℃避光保存8天后分析。供試品實(shí)測(cè)濃度應(yīng)在理論濃度的85％～115％范圍內(nèi)，上中下三層的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在10％內(nèi)可接受。

配制溶液保存與處置：供試品及對(duì)照品給藥前2～8℃或冰盒保存運(yùn)輸，給藥結(jié)束后剩余供試品按照醫(yī)療垃圾處理，陰性對(duì)照品按照普通垃圾處理。

試驗(yàn)設(shè)計(jì)：

臨床擬用有關(guān)資料：主要適應(yīng)癥：解熱鎮(zhèn)痛；臨床擬用劑量：12歲以上兒童及成人1-4g/天；給藥途徑：口服。

試驗(yàn)分組與給藥劑量：

根據(jù)分組前測(cè)定的動(dòng)物體重，選擇檢疫合格、體重相近的動(dòng)物50只，使用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)將動(dòng)物按性別區(qū)段隨機(jī)分為5組(1～5組)，即陰性對(duì)照組、供試品劑量組1、供試品劑量組2、供試品劑量組3、供試品劑量組4。

試驗(yàn)分組情況詳見(jiàn)下表：

注：陰性對(duì)照組每天給予0.5％CMC-Na。

給藥：

給藥途徑：灌胃。

給藥頻次和周期：每天給藥1次，連續(xù)給藥7天。

給藥方法：根據(jù)給藥前最近稱量的體重，使用合適規(guī)格的注射器抽取相應(yīng)體積的供試品或陰性對(duì)照品，使用合適規(guī)格的灌胃管進(jìn)行灌胃給藥。

給藥途徑的選擇理由：選擇灌胃給藥，與臨床擬用途徑相似。

給藥劑量、頻次和周期的選擇理由：根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室的前期研究資料和文獻(xiàn)報(bào)道，選擇本試驗(yàn)中的給藥劑量。

動(dòng)物活體檢測(cè)指標(biāo)：

一般臨床觀察：包括但不限于死亡情況、精神狀態(tài)、行為活動(dòng)、發(fā)病、呼吸、分泌物、糞便以及飲食和飲水情況等。

詳細(xì)臨床觀察：包括但不限于精神狀態(tài)、行為活動(dòng)、皮膚、被毛、眼睛、耳朵、鼻、腹部、外生殖器、肛門(mén)、四肢、足和呼吸。

體重：所有動(dòng)物在接收后和分組前測(cè)定體重，并在動(dòng)物瀕死安樂(lè)死前或發(fā)現(xiàn)死亡時(shí)測(cè)定體重。

血生化指標(biāo)：

檢測(cè)時(shí)間：首次給藥后6h、首次給藥后24h、D4(給藥前)、D7。

取血方法：給藥期間采血，將動(dòng)物用異氟烷麻醉，于眼眶靜脈叢取血約1mL；動(dòng)物安樂(lè)死時(shí)，麻醉后腹主動(dòng)脈取血，每只動(dòng)物取血量約1.5mL。

血樣處理和測(cè)定：血樣不抗凝，取血后2小時(shí)之內(nèi)分離血清，進(jìn)行生化指標(biāo)的測(cè)定，剩余血清-20℃以下保存。

使用儀器：TBA-120FR型全自動(dòng)生化分析儀。

檢測(cè)參數(shù)指標(biāo)：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)。

檢測(cè)方法：IFCC改良速率法。

試驗(yàn)結(jié)果：試驗(yàn)期間，各組動(dòng)物血生化的改變主要表現(xiàn)為首次給藥后24h，1000、1500、2000mg/kg劑量組動(dòng)物ALT明顯升高，并隨著給藥次數(shù)的增加，升高幅度降低，提示主要為急性期肝損傷。

各試驗(yàn)組動(dòng)物給藥后血生化指標(biāo)

注：表中所示值為Mean±SD，n＝10；

“*”表示與同期陰性對(duì)照組比較P≤0.05。

從各試驗(yàn)組的ALT結(jié)果看，與陰性對(duì)照組相比，首次給藥后24h，1000、1500、2000mg/kg劑量組動(dòng)物ALT急劇升高，表明上述三個(gè)劑量組的藥物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成了顯著地急性肝損傷，可用作藥物組合物減輕損傷試驗(yàn)的模型組，進(jìn)一步對(duì)比可以看出，1500mg/kg劑量組所造成的肝損傷最為顯著，因此我們選定該劑量組為后續(xù)藥物組合物減輕損傷試驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照組，在該劑量的基礎(chǔ)上測(cè)定不同配比的藥物組合物對(duì)急性肝損傷的預(yù)防治療效果。

實(shí)施例2 不同配比對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸二銨的藥物組合物對(duì)藥物性肝損傷的預(yù)防效果

本試驗(yàn)?zāi)康氖翘剿鞑煌浔鹊膶?duì)乙酰氨基酚(制劑A)和甘草酸二銨(制劑B)組成的藥物組合物重復(fù)灌胃給予SD大鼠的肝臟毒性減輕情況，判定該藥物組合物對(duì)藥物性肝損傷的預(yù)防效果，為該藥物組合物的后續(xù)研究和開(kāi)發(fā)提供劑量配比設(shè)計(jì)依據(jù)。

本試驗(yàn)所用試劑如下：

1.對(duì)乙酰氨基酚，提供單位：北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：1311379，性狀及理化性質(zhì)：白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。

2.甘草酸二銨，提供單位：北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：20150501，性狀及理化性質(zhì)：白色結(jié)晶性粉末、無(wú)臭、味甜。

3.羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，生產(chǎn)單位：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：F20110523，性狀及理化性狀：白色或微黃色纖維狀粉末，粘度：800～1200mPa.s。

4.滅菌注射用水，生產(chǎn)單位：山東齊都藥業(yè)有限公司，批號(hào)：2A14110503。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：

動(dòng)物種屬：Sprague-Dawley大鼠(SD大鼠)

動(dòng)物等級(jí)：SPF級(jí)

動(dòng)物周齡：方案要求給藥開(kāi)始時(shí)6～8周齡，實(shí)際給藥開(kāi)始時(shí)動(dòng)物6～8周齡。

動(dòng)物體重：給藥開(kāi)始時(shí)動(dòng)物體重為183～206g(♂)，161～190g(♀)；動(dòng)物體重在該性別動(dòng)物平均體重的80％～120％之間。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來(lái)源：北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(京)2012-0001；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證編號(hào)：11400700103783；生產(chǎn)許可證簽發(fā)單位：北京市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇的理由：本試驗(yàn)選用SD大鼠是藥物非臨床研究中使用的標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物，具有大量的背景數(shù)據(jù)。遺傳背景清楚，對(duì)藥物的反應(yīng)比較穩(wěn)定，個(gè)體差異較小，飼養(yǎng)方便，體形較小，便于試驗(yàn)操作，節(jié)省供試品。并且在研究相同或類似供試品時(shí)發(fā)現(xiàn)是合適的動(dòng)物模型，沒(méi)有其他已知可替代活體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法。

供試品配制：

配制時(shí)間和頻率：供試品和陰性對(duì)照品給藥前1天配制，分裝后放于2～8℃保存?zhèn)溆谩?/p>

配制方法：陰性對(duì)照品和溶媒，稱量一定量的羧甲基纖維素鈉，加入滅菌注射用水定容至相應(yīng)體積，配制濃度成為0.5％羧甲基纖維素鈉溶液，于磁力攪拌器上攪拌至溶液澄清為止。

供試品混懸液配制方法：稱取一定量對(duì)乙酰氨基酚，加入一定體積0.5％CMC-Na，乳化機(jī)乳化3-5min，至無(wú)可見(jiàn)顆粒物，之后加入一定量的甘草酸二銨(對(duì)乙酰氨基酚單藥混懸液不加入甘草酸二銨)，攪拌3～5min，以0.5％CMC-Na定容，配成供試品配比1溶液：對(duì)乙酰氨基酚濃度為150mg/ml，甘草酸二銨濃度為3.75mg/ml(制劑A:B＝40:1)；供試品配比2溶液：對(duì)乙酰氨基酚濃度為150mg/ml，甘草酸二銨濃度為10.0mg/ml(制劑A:B＝15:1)；供試品配比3溶液：對(duì)乙酰氨基酚濃度為150mg/ml，甘草酸二銨濃度為15.0mg/ml(制劑A:B＝10:1)；供試品配比4溶液：對(duì)乙酰氨基酚濃度為150mg/ml，甘草酸二銨濃度為30mg/ml(制劑A:B＝5:1)；供試品配比5溶液：對(duì)乙酰氨基酚濃度為150mg/ml，甘草酸二銨濃度為60mg/ml(制劑A:B＝2.5:1)；供試品配比6溶液：對(duì)乙酰氨基酚濃度為150mg/ml，甘草酸二銨濃度為150mg/ml(制劑A:B＝1:1)；對(duì)乙酰氨基酚單藥混懸液濃度為150mg/ml。以上各溶液定容后，使用磁力攪拌儀攪拌約10min。

供試品分析：配制的6個(gè)配比的供試品混懸液和對(duì)乙酰氨基酚單藥混懸液， 在配制后分別從上、中、下三層留樣，每層留2份，每份約0.5ml，用于供試品濃度、均一性及穩(wěn)定性分析。留樣的供試品溶液，一份于陰涼避光保存，在配制當(dāng)天或次日分析；另一份留樣2～8℃避光保存8天后分析。供試品實(shí)測(cè)濃度應(yīng)在理論濃度的85％～115％范圍內(nèi)，上中下三層的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在10％內(nèi)可接受。

配制溶液保存與處置：供試品及對(duì)照品給藥前2～8℃或冰盒保存運(yùn)輸，給藥結(jié)束后剩余供試品按照醫(yī)療垃圾處理，陰性對(duì)照品按照普通垃圾處理。

試驗(yàn)設(shè)計(jì)：

臨床擬用有關(guān)資料：

對(duì)乙酰氨基酚：主要適應(yīng)癥：解熱鎮(zhèn)痛；臨床擬用劑量：12歲以上兒童及成人1-4g/天；給藥途徑：口服。

甘草酸二銨：主要適應(yīng)癥：本品適用于伴有谷丙氨基轉(zhuǎn)移酶升高的急、慢性肝炎的治療；臨床擬用劑量：450mg/人/天；給藥途徑：口服。

試驗(yàn)分組與給藥劑量：

根據(jù)分組前測(cè)定的動(dòng)物體重，選擇檢疫合格、體重相近的動(dòng)物80只，使用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)將動(dòng)物隨機(jī)分為8組(1～8組)，即陰性對(duì)照組、對(duì)乙酰氨基酚單用組、供試品配比1組(40:1組)、供試品配比2組(15:1組)、供試品配比3組(10:1組)、供試品配比4組(5:1組)、供試品配比5組(2.5:1組)、供試品配比6組(1:1組)。

試驗(yàn)分組情況詳見(jiàn)下表：

注：第2組組別名稱在下文中用“模型對(duì)照組”代替，第3～8組組別名稱在下文中用“配 比40:1組”、“配比15:1組”、“配比10:1組”、“配比5:1組”、“配比2.5:1組”、“配比1:1組”代替。

給藥：

給藥途徑：灌胃。

給藥頻次和周期：每天給藥1次，連續(xù)給藥7天。

給藥方法：根據(jù)給藥前最近稱量的體重，使用合適規(guī)格的注射器抽取相應(yīng)體積的供試品或陰性對(duì)照品，使用合適規(guī)格的灌胃管進(jìn)行灌胃給藥。給藥前至少15分鐘及給藥過(guò)程，2～8組溶液處于磁力攪拌狀態(tài)。

給藥途徑的選擇理由：選擇灌胃給藥，與臨床擬用途徑相似。

給藥劑量、頻次和周期的選擇理由：在前期肝毒性劑量探索試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，為探索適宜的藥物組合物配比，本試驗(yàn)設(shè)定6個(gè)制劑配比(40:1，15:1，10:1，5:1，2.5:1，1:1)，觀察肝毒性的減弱情況。

動(dòng)物活體檢測(cè)指標(biāo)：

一般臨床觀察：包括但不限于死亡情況、精神狀態(tài)、行為活動(dòng)、發(fā)病、呼吸、分泌物、糞便以及飲食和飲水情況等。

詳細(xì)臨床觀察：包括但不限于精神狀態(tài)、行為活動(dòng)、皮膚、被毛、眼睛、耳朵、鼻、腹部、外生殖器、肛門(mén)、四肢、足和呼吸。

體重：所有動(dòng)物在接收后和分組前測(cè)定體重，并在動(dòng)物瀕死安樂(lè)死前或發(fā)現(xiàn)死亡時(shí)測(cè)定體重。

血生化指標(biāo)：

檢測(cè)時(shí)間：首次給藥后6h、首次給藥后24h、D4(給藥前)、D7。

取血方法：給藥期間采血，將動(dòng)物用異氟烷麻醉，于眼眶靜脈叢取血約1mL；動(dòng)物安樂(lè)死時(shí)，麻醉后腹主動(dòng)脈取血，每只動(dòng)物取血量約1.5mL。

血樣處理和測(cè)定：血樣不抗凝，取血后2小時(shí)之內(nèi)分離血清，進(jìn)行生化指標(biāo)的測(cè)定，剩余血清-20℃以下保存。

使用儀器：TBA-120FR型全自動(dòng)生化分析儀。

檢測(cè)參數(shù)指標(biāo)：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)。

檢測(cè)方法：IFCC改良速率法。

試驗(yàn)結(jié)果：試驗(yàn)期間，各組動(dòng)物血生化的改變主要表現(xiàn)為首次給藥后24h，模型對(duì)照組和試驗(yàn)藥物組動(dòng)物ALT明顯升高，在給藥4天后，各組的ALT值明 顯回落至接近陰性對(duì)照組水平，提示損傷類型主要為急性肝損傷，此結(jié)果與實(shí)施例1中的試驗(yàn)結(jié)果相吻合。

各試驗(yàn)組動(dòng)物給藥后血生化指標(biāo)

注：表中所示值為Mean±SD，n＝10；

“*”表示與同期陰性對(duì)照組比較P≤0.05；

“**”表示與同期模型對(duì)照組比較P≤0.05。

從各試驗(yàn)組的ALT結(jié)果看，與模型對(duì)照組相比，首次給藥后24h，配比15:1組、配比10:1組、配比5:1組、配比2.5:1組、配比1:1組動(dòng)物ALT升高水平明顯較低，表明上述5個(gè)劑量組的藥物組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成急性肝損傷的程度顯著低于模型組，換言之，上述各個(gè)劑量組的藥物組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物急性肝損傷具有良好的預(yù)防效果，可明顯減輕或避免單用對(duì)乙酰氨基酚所造成的肝臟損害，從而提高對(duì)乙酰氨基酚的用藥安全性。進(jìn)一步對(duì)比可以看出，配比10:1組、配比5:1組、配比2.5:1組的肝臟保護(hù)作用最為顯著，可作為后續(xù)研究和開(kāi)發(fā)的參考劑量組。

實(shí)施例3 不同配比對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸單銨鹽的藥物組合物對(duì)藥物性肝損傷的預(yù)防效果

本試驗(yàn)?zāi)康氖翘剿鞑煌浔鹊膶?duì)乙酰氨基酚(制劑A)和甘草酸單銨鹽(制劑B)組成的藥物組合物重復(fù)灌胃給予SD大鼠的肝臟毒性減輕情況，判定該藥物組合物對(duì)藥物性肝損傷的預(yù)防效果，為該藥物組合物的后續(xù)研究和開(kāi)發(fā)提供劑量配比設(shè)計(jì)依據(jù)。

本試驗(yàn)所用試劑如下：

1.對(duì)乙酰氨基酚，提供單位：北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：1311379，性狀及理化性質(zhì)：白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。

2.甘草酸單銨鹽，生產(chǎn)單位：江蘇天晟藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20150302，性狀及理化性質(zhì)：白色或淡黃色結(jié)晶型粉末。

3.羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，生產(chǎn)單位：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：F20110523，性狀及理化性狀：白色或微黃色纖維狀粉末，粘度：800～1200mPa.s。

4.滅菌注射用水，生產(chǎn)單位：山東齊都藥業(yè)有限公司，批號(hào)：2A14110503。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、供試品配制、試驗(yàn)設(shè)計(jì)、試驗(yàn)分組與給藥劑量、給藥方法、動(dòng)物活體檢測(cè)指標(biāo)、血生化檢測(cè)指標(biāo)等條件和方法同實(shí)施例2。

試驗(yàn)結(jié)果：與實(shí)施例2類似，試驗(yàn)期間，各組動(dòng)物血生化的改變主要表現(xiàn)為首次給藥后24h，模型對(duì)照組和試驗(yàn)藥物組動(dòng)物ALT明顯升高，在給藥4天后，各組的ALT值明顯回落，除個(gè)別組外其余組均接近陰性對(duì)照組水平，提示損傷類型主要為急性肝損傷，此結(jié)果與實(shí)施例1中的試驗(yàn)結(jié)果相吻合。

各試驗(yàn)組動(dòng)物給藥后血生化指標(biāo)

注：表中所示值為Mean±SD，n＝10；

“*”表示與同期陰性對(duì)照組比較P≤0.05；

“**”表示與同期模型對(duì)照組比較P≤0.05。

從各試驗(yàn)組的ALT結(jié)果看，與模型對(duì)照組相比，首次給藥后24h，配比40:1組、配比15:1組、配比10:1組、配比5:1組、配比2.5:1組、配比1:1組動(dòng)物ALT升高水平明顯較低，表明上述6個(gè)劑量組的藥物組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成急性 肝損傷的程度顯著低于模型組，換言之，上述各個(gè)劑量組的藥物組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物急性肝損傷具有良好的預(yù)防效果，可明顯減輕或避免單用對(duì)乙酰氨基酚所造成的肝臟損害，從而提高對(duì)乙酰氨基酚的用藥安全性。進(jìn)一步對(duì)比可以看出，配比10:1組、配比5:1組的肝臟保護(hù)作用最為顯著，可作為后續(xù)研究和開(kāi)發(fā)的參考劑量組。

實(shí)施例4 不同配比對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸的藥物組合物對(duì)藥物性肝損傷的預(yù)防效果

本試驗(yàn)?zāi)康氖翘剿鞑煌浔鹊膶?duì)乙酰氨基酚(制劑A)和甘草酸(制劑B)組成的藥物組合物重復(fù)灌胃給予SD大鼠的肝臟毒性減輕情況，判定該藥物組合物對(duì)藥物性肝損傷的預(yù)防效果，為該藥物組合物的后續(xù)研究和開(kāi)發(fā)提供劑量配比設(shè)計(jì)依據(jù)。

本試驗(yàn)所用試劑如下：

1.對(duì)乙酰氨基酚，提供單位：北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：1311379，性狀及理化性質(zhì)：白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。

2.甘草酸，生產(chǎn)單位：湖北盛天恒創(chuàng)生物科技有限公司，批號(hào)：20150202，性狀及理化性質(zhì)：白色結(jié)晶性粉末，無(wú)臭，有特殊甜味。

3.羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，生產(chǎn)單位：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：F20110523，性狀及理化性狀：白色或微黃色纖維狀粉末，粘度：800～1200mPa.s。

4.滅菌注射用水，生產(chǎn)單位：山東齊都藥業(yè)有限公司，批號(hào)：2A14110503。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、供試品配制、試驗(yàn)設(shè)計(jì)、試驗(yàn)分組與給藥劑量、給藥方法、動(dòng)物活體檢測(cè)指標(biāo)、血生化檢測(cè)指標(biāo)等條件和方法同實(shí)施例2。

試驗(yàn)結(jié)果：與實(shí)施例2類似，試驗(yàn)期間，各組動(dòng)物血生化的改變主要表現(xiàn)為首次給藥后24h，模型對(duì)照組和試驗(yàn)藥物組動(dòng)物ALT明顯升高，在給藥4天后，各組的ALT值明顯回落，除個(gè)別組外其余組均接近陰性對(duì)照組水平，提示損傷類型主要為急性肝損傷，此結(jié)果與實(shí)施例1中的試驗(yàn)結(jié)果相吻合。

各試驗(yàn)組動(dòng)物給藥后血生化指標(biāo)

注：表中所示值為Mean±SD，n＝10；

“*”表示與同期陰性對(duì)照組比較P≤0.05；

“**”表示與同期模型對(duì)照組比較P≤0.05。

從各試驗(yàn)組的ALT結(jié)果看，與模型對(duì)照組相比，首次給藥后24h，配比40:1組、配比15:1組、配比10:1組、配比5:1組、配比2.5:1組、配比1:1組動(dòng)物ALT升高水平明顯較低，表明上述6個(gè)劑量組的藥物組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成急性肝損傷的程度顯著低于模型組，換言之，上述各個(gè)劑量組的藥物組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物急性肝損傷具有良好的預(yù)防效果，可明顯減輕或避免單用對(duì)乙酰氨基酚所造成的肝臟損害，從而提高對(duì)乙酰氨基酚的用藥安全性。進(jìn)一步對(duì)比可以看出，配比15:1組、配比5:1組的肝臟保護(hù)作用最為顯著，可作為后續(xù)研究和開(kāi)發(fā)的參考劑量組。

實(shí)施例5 不同配比對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸單鉀鹽的藥物組合物對(duì)藥物性肝損傷的預(yù)防效果

本試驗(yàn)?zāi)康氖翘剿鞑煌浔鹊膶?duì)乙酰氨基酚(制劑A)和甘草酸單鉀鹽(制劑B)組成的藥物組合物重復(fù)灌胃給予SD大鼠的肝臟毒性減輕情況，判定該藥物組合物對(duì)藥物性肝損傷的預(yù)防效果，為該藥物組合物的后續(xù)研究和開(kāi)發(fā)提供劑量配比設(shè)計(jì)依據(jù)。

本試驗(yàn)所用試劑如下：

1.對(duì)乙酰氨基酚，提供單位：北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：1311379，性狀及理化性質(zhì)：白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。

2.甘草酸單鉀鹽，生產(chǎn)單位：南通久和藥業(yè)有限公司，批號(hào)：2014801522，性狀及理化性質(zhì)：白色結(jié)晶性粉末，無(wú)臭。

3.羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，生產(chǎn)單位：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：F20110523，性狀及理化性狀：白色或微黃色纖維狀粉末，粘度：800～1200mPa.s。

4.滅菌注射用水，生產(chǎn)單位：山東齊都藥業(yè)有限公司，批號(hào)：2A14110503。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、供試品配制、試驗(yàn)設(shè)計(jì)、試驗(yàn)分組與給藥劑量、給藥方法、動(dòng)物活體檢測(cè)指標(biāo)、血生化檢測(cè)指標(biāo)等條件和方法同實(shí)施例2。

試驗(yàn)結(jié)果：與實(shí)施例2類似，試驗(yàn)期間，各組動(dòng)物血生化的改變主要表現(xiàn)為首次給藥后24h，模型對(duì)照組和試驗(yàn)藥物組動(dòng)物ALT明顯升高，在給藥4天后，各組的ALT值明顯回落，給藥7天后除個(gè)別組外其余組均接近陰性對(duì)照組水平，提示損傷類型主要為急性肝損傷，此結(jié)果與實(shí)施例1中的試驗(yàn)結(jié)果相吻合。

各試驗(yàn)組動(dòng)物給藥后血生化指標(biāo)

注：表中所示值為Mean±SD，n＝10；

“*”表示與同期陰性對(duì)照組比較P≤0.05；

“**”表示與同期模型對(duì)照組比較P≤0.05。

從各試驗(yàn)組的ALT結(jié)果看，與模型對(duì)照組相比，首次給藥后24h，配比40:1組、配比15:1組、配比10:1組、配比5:1組、配比2.5:1組、配比1:1組動(dòng)物ALT升高水平明顯較低，表明上述6個(gè)劑量組的藥物組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成急性肝損傷的程度顯著低于模型組，換言之，上述各個(gè)劑量組的藥物組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物急性肝損傷具有良好的預(yù)防效果，可明顯減輕或避免單用對(duì)乙酰氨基酚所造成的肝臟損害，從而提高對(duì)乙酰氨基酚的用藥安全性。進(jìn)一步對(duì)比可以看出，配比10:1組、配比2.5:1組、配比1:1組的肝臟保護(hù)作用最為顯著，可作為后續(xù)研究 和開(kāi)發(fā)的參考劑量組。

實(shí)施例6 不同配比對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸二鈉的藥物組合物對(duì)藥物性肝損傷的預(yù)防效果

本試驗(yàn)?zāi)康氖翘剿鞑煌浔鹊膶?duì)乙酰氨基酚(制劑A)和甘草酸二鈉(制劑B)組成的藥物組合物重復(fù)灌胃給予SD大鼠的肝臟毒性減輕情況，判定該藥物組合物對(duì)藥物性肝損傷的預(yù)防效果，為該藥物組合物的后續(xù)研究和開(kāi)發(fā)提供劑量配比設(shè)計(jì)依據(jù)。

本試驗(yàn)所用試劑如下：

1.對(duì)乙酰氨基酚，提供單位：北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：1311379，性狀及理化性質(zhì)：白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。

2.甘草酸二鈉，生產(chǎn)單位：甘肅天域生物制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：2015010225，性狀及理化性質(zhì)：白色或淡黃色粉末，無(wú)臭。

3.羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，生產(chǎn)單位：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：F20110523，性狀及理化性狀：白色或微黃色纖維狀粉末，粘度：800～1200mPa.s。

4.滅菌注射用水，生產(chǎn)單位：山東齊都藥業(yè)有限公司，批號(hào)：2A14110503。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、供試品配制、試驗(yàn)設(shè)計(jì)、試驗(yàn)分組與給藥劑量、給藥方法、動(dòng)物活體檢測(cè)指標(biāo)、血生化檢測(cè)指標(biāo)等條件和方法同實(shí)施例2。

試驗(yàn)結(jié)果：與實(shí)施例2類似，試驗(yàn)期間，各組動(dòng)物血生化的改變主要表現(xiàn)為首次給藥后24h，模型對(duì)照組和試驗(yàn)藥物組動(dòng)物ALT明顯升高，在給藥4天后，各組的ALT值明顯回落，給藥7天后除個(gè)別組外其余組均接近陰性對(duì)照組水平，提示損傷類型主要為急性肝損傷，此結(jié)果與實(shí)施例1中的試驗(yàn)結(jié)果相吻合。

各試驗(yàn)組動(dòng)物給藥后血生化指標(biāo)

注：表中所示值為Mean±SD，n＝10；

“*”表示與同期陰性對(duì)照組比較P≤0.05；

“**”表示與同期模型對(duì)照組比較P≤0.05。

從各試驗(yàn)組的ALT結(jié)果看，與模型對(duì)照組相比，首次給藥后24h，配比15:1組、配比10:1組、配比5:1組、配比2.5:1組、配比1:1組動(dòng)物ALT升高水平明顯較低，表明上述5個(gè)劑量組的藥物組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成急性肝損傷的程度顯著低于模型組，換言之，上述各個(gè)劑量組的藥物組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物急性肝損傷具有良好的預(yù)防效果，可明顯減輕或避免單用對(duì)乙酰氨基酚所造成的肝臟損害，從而提高對(duì)乙酰氨基酚的用藥安全性。進(jìn)一步對(duì)比可以看出，配比10:1組、配比5:1組、配比2.5:1組的肝臟保護(hù)作用最為顯著，可作為后續(xù)研究和開(kāi)發(fā)的參考劑量組。

實(shí)施例7 不同配比對(duì)乙酰氨基酚和異甘草酸鎂的藥物組合物對(duì)藥物性肝損傷的預(yù)防效果

本試驗(yàn)?zāi)康氖翘剿鞑煌浔鹊膶?duì)乙酰氨基酚(制劑A)和異甘草酸鎂(制劑B)組成的藥物組合物重復(fù)灌胃給予SD大鼠的肝臟毒性減輕情況，判定該藥物組合物對(duì)藥物性肝損傷的預(yù)防效果，為該藥物組合物的后續(xù)研究和開(kāi)發(fā)提供劑量配比設(shè)計(jì)依據(jù)。

本試驗(yàn)所用試劑如下：

1.對(duì)乙酰氨基酚，提供單位：北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：1311379，性狀及理化性質(zhì)：白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。

2.異甘草酸鎂，生產(chǎn)單位：連云港潤(rùn)眾制藥有限公司，批號(hào)：2015010516，性狀及理化性質(zhì)：白色結(jié)晶性粉末，無(wú)臭。

3.羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，生產(chǎn)單位：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：F20110523，性狀及理化性狀：白色或微黃色纖維狀粉末，粘度：800～1200mPa.s。

4.滅菌注射用水，生產(chǎn)單位：山東齊都藥業(yè)有限公司，批號(hào)：2A14110503。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、供試品配制、試驗(yàn)設(shè)計(jì)、試驗(yàn)分組與給藥劑量、給藥方法、動(dòng)物活體檢測(cè)指標(biāo)、血生化檢測(cè)指標(biāo)等條件和方法同實(shí)施例2。

試驗(yàn)結(jié)果：與實(shí)施例2類似，試驗(yàn)期間，各組動(dòng)物血生化的改變主要表現(xiàn)為首次給藥后24h，模型對(duì)照組和試驗(yàn)藥物組動(dòng)物ALT明顯升高，在給藥4天后，各組的ALT值明顯回落，給藥7天后除個(gè)別組外其余組均接近陰性對(duì)照組水平，提示損傷類型主要為急性肝損傷，此結(jié)果與實(shí)施例1中的試驗(yàn)結(jié)果相吻合。

各試驗(yàn)組動(dòng)物給藥后血生化指標(biāo)

注：表中所示值為Mean±SD，n＝10；

“*”表示與同期陰性對(duì)照組比較P≤0.05；

“**”表示與同期模型對(duì)照組比較P≤0.05。

從各試驗(yàn)組的ALT結(jié)果看，與模型對(duì)照組相比，首次給藥后24h，配比40:1組、配比15:1組、配比10:1組、配比5:1組、配比2.5:1組、配比1:1組動(dòng)物ALT升高水平明顯較低，表明上述6個(gè)劑量組的藥物組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成急性肝損傷的程度顯著低于模型組，換言之，上述各個(gè)劑量組的藥物組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物急性肝損傷具有良好的預(yù)防效果，可明顯減輕或避免單用對(duì)乙酰氨基酚所造成的肝臟損害，從而提高對(duì)乙酰氨基酚的用藥安全性。進(jìn)一步對(duì)比可以看出，配比15:1組、配比10:1組、配比5:1組、配比2.5:1組、配比1:1組的肝臟保護(hù)作用最為顯著，可作為后續(xù)研究和開(kāi)發(fā)的參考劑量組。

實(shí)施例8 不同配比對(duì)乙酰氨基酚和甘草次酸的藥物組合物對(duì)藥物性肝損傷的預(yù)防效果

本試驗(yàn)?zāi)康氖翘剿鞑煌浔鹊膶?duì)乙酰氨基酚(制劑A)和甘草次酸(制劑B) 組成的藥物組合物重復(fù)灌胃給予SD大鼠的肝臟毒性減輕情況，判定該藥物組合物對(duì)藥物性肝損傷的預(yù)防效果，為該藥物組合物的后續(xù)研究和開(kāi)發(fā)提供劑量配比設(shè)計(jì)依據(jù)。

本試驗(yàn)所用試劑如下：

1.對(duì)乙酰氨基酚，提供單位：北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：1311379，性狀及理化性質(zhì)：白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。

2.甘草次酸，提供單位：北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：2015196402，性狀及理化性質(zhì)：白色結(jié)晶性粉末，無(wú)臭。

3.羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，生產(chǎn)單位：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：F20110523，性狀及理化性狀：白色或微黃色纖維狀粉末，粘度：800～1200mPa.s。

4.滅菌注射用水，生產(chǎn)單位：山東齊都藥業(yè)有限公司，批號(hào)：2A14110503。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、供試品配制、試驗(yàn)設(shè)計(jì)、試驗(yàn)分組與給藥劑量、給藥方法、動(dòng)物活體檢測(cè)指標(biāo)、血生化檢測(cè)指標(biāo)等條件和方法同實(shí)施例2。

試驗(yàn)結(jié)果：與實(shí)施例2類似，試驗(yàn)期間，各組動(dòng)物血生化的改變主要表現(xiàn)為首次給藥后24h，模型對(duì)照組和試驗(yàn)藥物組動(dòng)物ALT明顯升高，在給藥4天后，各組的ALT值明顯回落，給藥7天后除個(gè)別組外其余組均接近陰性對(duì)照組水平，提示損傷類型主要為急性肝損傷，此結(jié)果與實(shí)施例1中的試驗(yàn)結(jié)果相吻合。

各試驗(yàn)組動(dòng)物給藥后血生化指標(biāo)

注：表中所示值為Mean±SD，n＝10；

“*”表示與同期陰性對(duì)照組比較P≤0.05；

“**”表示與同期模型對(duì)照組比較P≤0.05。

從各試驗(yàn)組的ALT結(jié)果看，與模型對(duì)照組相比，首次給藥后24h，配比40:1組、配比15:1組、配比10:1組、配比5:1組、配比2.5:1組、配比1:1組動(dòng)物ALT升高水平明顯較低，表明上述6個(gè)劑量組的藥物組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成急性肝損傷的程度顯著低于模型組，換言之，上述各個(gè)劑量組的藥物組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物急性肝損傷具有良好的預(yù)防效果，可明顯減輕或避免單用對(duì)乙酰氨基酚所造成的肝臟損害，從而提高對(duì)乙酰氨基酚的用藥安全性。進(jìn)一步對(duì)比可以看出，配比10:1組、配比5:1組、配比2.5:1組、配比1:1組的肝臟保護(hù)作用最為顯著，可作為后續(xù)研究和開(kāi)發(fā)的參考劑量組。

實(shí)施例9 不同配比對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸苷的藥物組合物對(duì)藥物性肝損傷的預(yù)防效果

本試驗(yàn)?zāi)康氖翘剿鞑煌浔鹊膶?duì)乙酰氨基酚(制劑A)和甘草酸苷(制劑B)組成的藥物組合物重復(fù)灌胃給予SD大鼠的肝臟毒性減輕情況，判定該藥物組合物對(duì)藥物性肝損傷的預(yù)防效果，為該藥物組合物的后續(xù)研究和開(kāi)發(fā)提供劑量配比設(shè)計(jì)依據(jù)。

本試驗(yàn)所用試劑如下：

1.對(duì)乙酰氨基酚，提供單位：北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：1311379，性狀及理化性質(zhì)：白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。

2.甘草酸苷，提供單位：北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：2015020116，性狀及理化性質(zhì)：白色粉末，無(wú)臭。

3.羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，生產(chǎn)單位：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：F20110523，性狀及理化性狀：白色或微黃色纖維狀粉末，粘度：800～1200mPa.s。

4.滅菌注射用水，生產(chǎn)單位：山東齊都藥業(yè)有限公司，批號(hào)：2A14110503。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、供試品配制、試驗(yàn)設(shè)計(jì)、試驗(yàn)分組與給藥劑量、給藥方法、動(dòng)物活體檢測(cè)指標(biāo)、血生化檢測(cè)指標(biāo)等條件和方法同實(shí)施例2。

試驗(yàn)結(jié)果：與實(shí)施例2類似，試驗(yàn)期間，各組動(dòng)物血生化的改變主要表現(xiàn)為首次給藥后24h，模型對(duì)照組和試驗(yàn)藥物組動(dòng)物ALT明顯升高，在給藥4天后，各組的ALT值明顯回落，給藥7天后各組均接近陰性對(duì)照組水平，提示損傷類 型主要為急性肝損傷，此結(jié)果與實(shí)施例1中的試驗(yàn)結(jié)果相吻合。

各試驗(yàn)組動(dòng)物給藥后血生化指標(biāo)

注：表中所示值為Mean±SD，n＝10；

“*”表示與同期陰性對(duì)照組比較P≤0.05；

“**”表示與同期模型對(duì)照組比較P≤0.05。

從各試驗(yàn)組的ALT結(jié)果看，與模型對(duì)照組相比，首次給藥后24h，配比15:1組、配比10:1組、配比5:1組、配比2.5:1組、配比1:1組動(dòng)物ALT升高水平明顯較低，表明上述5個(gè)劑量組的藥物組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成急性肝損傷的程度顯著低于模型組，換言之，上述各個(gè)劑量組的藥物組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物急性肝損傷具有良好的預(yù)防效果，可明顯減輕或避免單用對(duì)乙酰氨基酚所造成的肝臟損害，從而提高對(duì)乙酰氨基酚的用藥安全性。進(jìn)一步對(duì)比可以看出，配比10:1組、配比5:1組、配比2.5:1組、配比1:1組的肝臟保護(hù)作用最為顯著，可作為后續(xù)研究和開(kāi)發(fā)的參考劑量組。

實(shí)施例10 本發(fā)明藥物組合物片劑的制備

片劑配方組成：

第一步 按照配方給出的比例，準(zhǔn)確稱取各原輔料；

第二步 將對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸二銨藥物原料混合均勻得到藥物組合物；

第三步 將所得藥物組合物與微晶纖維素、淀粉充分混合均勻后，加入適量10％PVP乙醇溶液，制粒，在40～60℃溫度條件下干燥后，得到干燥的藥物組合物備用；

第四步 將干燥后的藥物組合物用整粒機(jī)整粒，并加入羧甲基淀粉鈉和硬脂酸鎂，充分混合均勻，用常規(guī)的壓片機(jī)壓成片劑1000片，硬度控制在80牛頓左右，用浦力膜包衣粉包薄膜衣，分裝，滅菌，即得。

實(shí)施例11 本發(fā)明藥物組合物膠囊劑的制備

膠囊劑配方組成：

第一步 按照配方給出的比例，準(zhǔn)確稱取各原輔料；

第二步 將對(duì)乙酰氨基酚和甘草次酸藥物原料混合均勻得到藥物組合物；

第三步 將所得藥物組合物與微晶纖維素、淀粉充分混合均勻后，加入適量10％PVP乙醇溶液，制粒，在40～60℃溫度條件下干燥后，得到干燥的藥物組合物顆粒備用；

第四步 將干燥后的藥物組合物顆粒用整粒機(jī)整粒，并加入羧甲基淀粉鈉和硬脂酸鎂，充分混合均勻，用常規(guī)的膠囊機(jī)填裝膠囊1000粒，分裝，滅菌，即得。

實(shí)施例12 本發(fā)明藥物組合物顆粒劑的制備

顆粒劑配方組成：

第一步 按照配方給出的比例，準(zhǔn)確稱取各原輔料；

第二步 將對(duì)乙酰氨基酚和異甘草酸鎂藥物原料混合均勻得到藥物組合物；

第三步 將所得藥物組合物與微晶纖維素、淀粉、乳糖充分混合均勻后，加入枸櫞酸、苯甲酸鈉混合制成軟材，再加入適量10％PVP乙醇溶液，制粒，在40～60℃溫度條件下干燥后，得到干燥的藥物組合物顆粒備用；

第四步 將干燥后的藥物組合物顆粒用整粒機(jī)整粒，過(guò)五號(hào)篩除去粉末后，加入羧甲基淀粉鈉和硬脂酸鎂，充分混合均勻，得到顆粒劑1000克，分裝，滅菌，即得。

綜上所述，通過(guò)不同配比各劑量組的藥理實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明由對(duì)乙酰氨基酚和甘草酸或其可藥用鹽或其可藥用衍生物組成的藥物組合物，可以在很大程度上減輕對(duì)乙酰氨基酚所致的肝損傷，同時(shí)又確保了其使用的便利性，從而為更加安全、有效的使用對(duì)乙酰氨基酚提供了解決方案，可以預(yù)期，本發(fā)明藥物組合物在新型復(fù)方藥物的研究方面具有良好的開(kāi)發(fā)前景。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。