本發(fā)明涉及醫(yī)療器械技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種PI3K/mTOR雙重抑制劑在制備抑制血管內(nèi)膜增生的藥物中的用途、載藥支架及其制備方法。

背景技術(shù)：

20世紀(jì)末期到21世紀(jì)初期分子靶向藥物的出現(xiàn)是抗癌藥物研究進(jìn)展的里程碑式的事件，這其中PI3K抑制劑作為抗腫瘤藥物的開發(fā)一直是制藥屆的熱點(diǎn)。其中，LY294002和渥曼青霉素(Wortmannin)是最早出現(xiàn)的兩種PI3K抑制劑，它們雖顯示了一定的體內(nèi)和體外抗腫瘤作用，但由于分別引起皮膚和肝臟毒性以及溶解度與穩(wěn)定性等原因，未能進(jìn)入臨床試驗(yàn)。

經(jīng)過(guò)10多年的發(fā)展，PI3K抑制劑朝著專一性更強(qiáng)的方向發(fā)展，出現(xiàn)了一批新型的PI3K抑制劑，這些抑制劑大體可分為：PI3K亞型特異性抑制劑、泛PI3K抑制劑和PI3K/mTOR雙重抑制劑。

以血管粥樣硬化為代表的心血管疾病在全球范圍內(nèi)已經(jīng)成為威脅生命的重要因素。對(duì)于中度以及重度的冠心病病人，采用經(jīng)皮腔內(nèi)冠脈成形術(shù)(PTCA)配以冠脈支架植入術(shù)(coronary stenting)的微創(chuàng)傷介入治療創(chuàng)傷小，病人恢復(fù)快，適用范圍廣，是當(dāng)前冠心病治療的熱點(diǎn)和較為為行之有效的治療方法之一。

1977年，全球第一例PTCA在德國(guó)施行，此后，該技術(shù)被迅速推廣，技術(shù)規(guī)范及與之相關(guān)的各種操作設(shè)備不斷改進(jìn)。PTCA術(shù)雖然有創(chuàng)傷小、適應(yīng)范圍廣的優(yōu)點(diǎn)，但術(shù)后的再狹窄率居高不下。1986年，Puel和Sigwart將第一枚冠脈金屬裸支架置入人體；之后金屬裸支架經(jīng)歷了一個(gè)快速發(fā)展期。與單純的球囊擴(kuò)張相比，裸金屬支架明顯降低了病變血管再狹窄率，但幾率仍高達(dá)20％以上。

2003年和2004年美國(guó)FDA分別批準(zhǔn)Cordis公司的雷帕霉素洗脫支架(Cypher)和Boston Scientific公司的紫杉醇洗脫支架(Taxus)上市，人類進(jìn)入藥物洗脫支架時(shí)代。以此為代表的藥物洗脫支架(DES)將抑制血管內(nèi)膜增生或抗炎癥 抗血栓的藥物載于支架，使藥物在支架植入血管后從支架表面直接釋放到病變部位，從而預(yù)防支架內(nèi)再狹窄發(fā)生，多數(shù)的臨床報(bào)道均顯示，藥物洗脫支架術(shù)后再狹窄的發(fā)生率低于10％，與裸金屬支架相比，藥物洗脫支架再狹窄率明顯降低。

雷帕霉素洗脫支架，是利用雷帕霉素對(duì)mTOR的阻斷作用，進(jìn)而阻斷細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子活化，從而抑制細(xì)胞的增殖和克隆擴(kuò)散，阻滯細(xì)胞周期G1期的活化，抑制細(xì)胞增生，減少再狹窄。

紫杉醇洗脫支架，是利用紫杉醇與微管蛋白結(jié)合，使大量微管非正常聚合，從而改變細(xì)胞骨架的平衡狀態(tài)，產(chǎn)生結(jié)構(gòu)的畸變，導(dǎo)致其失去正常的功能，造成細(xì)胞發(fā)育停止于G0/G1期和G1/M期，細(xì)胞的有絲分裂阻滯于絲狀分裂期，從而抑制細(xì)胞的分裂、增殖，減少再狹窄的發(fā)生。但相比于雷帕霉素及其衍生物，紫杉醇有更高的毒性。

藥物洗脫支架歷經(jīng)10余年的發(fā)展，雖然在支架結(jié)構(gòu)、藥物選擇、載藥方式等方面進(jìn)行了多種改進(jìn)的嘗試，但是病人的再狹窄現(xiàn)象始終存在，大量的臨床數(shù)據(jù)顯示，術(shù)后再狹窄率始終難以降低到5％以下。此外，隨著藥物支架在臨床上長(zhǎng)期應(yīng)用，其他方面的一些問(wèn)題也日益顯現(xiàn)：如藥物支架晚期血栓的問(wèn)題、血管內(nèi)皮障礙的問(wèn)題、特殊人群效果的問(wèn)題等。

臨床資料顯示，目前以雷帕霉素及其衍生物為代表的藥物支架相比于裸支架并不能真正降低心肌梗死的發(fā)生率，這與其遠(yuǎn)期血栓事件有關(guān)。與裸支架比較，隨機(jī)接受雷帕霉素藥物支架治療的患者晚期支架血栓事件發(fā)生率增加，特別是在停用氯吡格雷等藥物以后。

另外，雷帕霉素藥物支架和紫杉醇藥物支架的應(yīng)用雖然大大減少了支架內(nèi)再狹窄的發(fā)生，然而在其強(qiáng)烈抑制血管平滑肌細(xì)胞(SMC)過(guò)度增殖的同時(shí)，也不可避免抑制了支架處功能內(nèi)皮層的生長(zhǎng)，從而干擾了血管損傷處自然愈合的進(jìn)程。血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)的損傷、修復(fù)及功能改變?cè)谠侏M窄的形成過(guò)程中同樣也起到重要的作用，同時(shí)對(duì)血栓的形成有一定影響。

雷帕霉素藥物支架在臨床應(yīng)用中還存在對(duì)特殊患者效果不佳的問(wèn)題。特別是對(duì)于糖尿病合并心血管疾病患者，其療效相比于非糖尿病患者存在顯著差異。多項(xiàng)大樣本量臨床研究數(shù)據(jù)進(jìn)行的多元線性回歸分析表明糖尿病是植入支架后 再狹窄的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素。植入支架后，無(wú)論是裸金屬支架還是藥物洗脫支架，糖尿病人的再狹窄率顯著高于無(wú)糖尿病癥狀者。目前糖尿病人支架內(nèi)再狹窄的機(jī)理還未完全厘清，但有一些基礎(chǔ)研究資料認(rèn)為可能與病人胰島素抵抗有關(guān)，也有一些研究認(rèn)為可能與體內(nèi)瘦素(leptin)水平有關(guān)。有研究顯示，關(guān)閉瘦素接收通道可以顯著減少血管壁創(chuàng)傷后的內(nèi)膜增生。Jian Shan等(Leptin-enhanced neointimal hyperplasia is reduced by mTOR and PI3K inhibitors.2008.PNAS,105:19006–19011)以高瘦素誘導(dǎo)糖尿病鼠模型作為研究對(duì)象觀察損傷血管的再狹窄，使用PI3K抑制劑LY294002以注射的方式干預(yù)高瘦素水平對(duì)動(dòng)物的影響，結(jié)果顯示將雷帕霉素與PI3K抑制劑LY294002聯(lián)合使用相比于雷帕霉素單獨(dú)使用，動(dòng)物血管損傷處再狹窄的程度低。研究者同時(shí)指出，以支架載藥的方式使用LY294002或其他PI3K抑制劑的有效性不得而知，但目前LY294002在臨床前研究表現(xiàn)出嚴(yán)重的毒性反應(yīng)，未能進(jìn)入臨床，采用選擇性不高的泛PI3K抑制劑與雷帕霉素合用用于支架針對(duì)糖尿病合并冠心病患者的干預(yù)存在巨大的毒性風(fēng)險(xiǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種PI3K/mTOR雙重抑制劑在制備抑制血管內(nèi)膜增生的藥物中的用途、載藥支架及其制備方法，以解決患者置入藥物洗脫支架后再狹窄率仍然較高的問(wèn)題。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種PI3K/mTOR雙重抑制劑的用途，所述PI3K/mTOR雙重抑制劑為對(duì)PI3K和mTOR都有抑制作用的藥物，所述PI3K/mTOR雙重抑制劑用于制備抑制血管內(nèi)膜增生的藥物。

可選的，在所述的用途中，所述PI3K/mTOR雙重抑制劑為BKM120、ZSTK474、GDC0941、GDC0980、XL765、XL147、SF1126、BEZ235、PF04691502、GSK2126458、PKI587、BGT226、GEN477、PWT33597或DS7423中的一種或多種。

可選的，在所述的用途中，所述PI3K/mTOR雙重抑制劑為平衡型PI3K/mTOR雙重抑制劑，所述平衡型PI3K/mTOR雙重抑制劑為PI3K的IC50值與mTOR的IC50值的比值在預(yù)定范圍之中。

可選的，在所述的用途中，所述預(yù)定范圍為1/5～5。

可選的，在所述的用途中，所述的平衡型PI3K/mTOR雙重抑制劑為PWT33597或DGC0980。

可選的，在所述的用途中，所述PI3K/mTOR雙重抑制劑為PI3Kα/mTOR雙重抑制劑、或PI3Kγ/mTOR雙重抑制劑。

本發(fā)明提供一種載藥支架，所述載藥支架的支架本體上裝載有采用PI3K/mTOR雙重抑制劑制備的抑制血管內(nèi)膜增生的藥物。

可選的，在所述的載藥支架中，所述PI3K/mTOR雙重抑制劑為BKM120、ZSTK474、GDC0941、GDC0980、XL765、XL147、SF1126、BEZ235、PF04691502、GSK2126458、PKI587、BGT226、GEN477、PWT33597或DS7423中的一種或多種。

可選的，在所述的載藥支架中，所述PI3K/mTOR雙重抑制劑為平衡型PI3K/mTOR雙重抑制劑，所述平衡型PI3K/mTOR雙重抑制劑為PI3K的IC50值與mTOR的IC50值的比值在預(yù)定范圍1/5～5之中。

可選的，在所述的載藥支架中，所述的平衡型PI3K/mTOR雙重抑制劑為PWT33597或DGC0980。

可選的，在所述的載藥支架中，所述PI3K/mTOR雙重抑制劑為PI3Kα/mTOR雙重抑制劑或PI3Kγ/mTOR雙重抑制劑。

可選的，在所述的載藥支架中，所述支架本體上還裝載有單純PI3K抑制劑、單純mTOR抑制劑、胰島素增敏劑中的一種或多種，所述單純PI3K抑制劑僅對(duì)PI3K有抑制作用，所述單純mTOR抑制劑僅對(duì)mTOR有抑制作用。

可選的，在所述的載藥支架中，所述單純PI3K抑制劑為L(zhǎng)Y294002、渥曼青霉素、哌立福辛、艾代拉里斯、PX-866、IPI-145、BAY 80-6946、RP6503或TGR1202中的一種或多種。

可選的，在所述的載藥支架中，所述單純mTOR抑制劑為雷帕霉素、依維莫司、他克莫司、地磷莫司、替西羅莫司或佐他莫司中的一種或多種。

可選的，在所述的載藥支架中，所述胰島素增敏劑為曲格列酮、吡格列酮或羅格列酮中的一種或多種。

可選的，在所述的載藥支架中，所述支架本體上還裝載有抗菌劑、抗腫瘤 藥、抗氧化劑、內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)和/或遷移抑制劑、凝血酶抑制劑、抗血小板凝集劑、膠原蛋白合成抑制劑、氧化氮供體、治療抗體、非甾體抗炎藥、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑或自由基清除劑中的一種或多種。

可選的，在所述的載藥支架中，所述抗腫瘤藥為甲氨蝶呤，氟尿嘧啶，巰嘌呤，羥基脲，阿糖胞苷，卡鉑，順鉑，奧沙利鉑，雙環(huán)鉑，紫杉醇，柔紅霉素，多柔比星，三氧化二砷中的一種或多種。

可選的，在所述的載藥支架中，所述抗氧化劑為維生素E、維生素C、人參皂苷、銀杏葉提取物中的一種或多種。

可選的，在所述的載藥支架中，所述PI3K/mTOR雙重抑制劑裝載于所述支架本體的表面、或者所述支架本體表面的凹槽或微孔中。

可選的，在所述的載藥支架中，所述PI3K/mTOR雙重抑制劑通過(guò)載體裝載于所述支架本體上，所述載體為至少一種高分子涂層材料。

可選的，在所述的載藥支架中，所述高分子涂層材料為明膠或透明質(zhì)酸。

本發(fā)明還提供一種載藥支架的制備方法，所述載藥支架的支架本體上裝載有采用PI3K/mTOR雙重抑制劑制備的抑制血管內(nèi)膜增生的藥物，所述制備方法包括：

S1：提供支架本體；

S2：將PI3K/mTOR雙重抑制劑和溶劑混合成藥物溶液；

S3：將所述藥物溶液裝載于所述支架本體上；

S4：待所述溶劑揮發(fā)后，獲得所述載藥支架。

可選的，在所述的載藥支架的制備方法中，步驟S2中，所述溶劑為鏈烷烴、烯烴、醇、醛、胺、酯、醚、酮、芳香烴、氫化烴、萜烯烴、鹵代烴、雜環(huán)化物、含氮化合物或含硫化合物。

在本發(fā)明所提供的PI3K/mTOR雙重抑制劑在制備抑制血管內(nèi)膜增生的藥物中的用途、載藥支架及其制備方法，將PI3K/mTOR雙重抑制劑用于制備抑制血管內(nèi)膜增生的藥物，以及在支架本體上裝載PI3K/mTOR雙重抑制劑，制備成用于抑制血管內(nèi)膜增生的載藥支架，由于PI3K/mTOR雙重抑制劑對(duì)PI3K和mTOR都有抑制作用，因此可以發(fā)揮單一藥物的雙靶點(diǎn)作用，相比采用單純的mTOR 抑制劑，對(duì)于抑制血管的平滑肌的作用更強(qiáng)，有效地抑制血管內(nèi)膜增生，使得血管再狹窄率進(jìn)一步降低。

附圖說(shuō)明

圖1是本發(fā)明一實(shí)施例中載藥支架沿軸向展開的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2是本發(fā)明一實(shí)施例中載藥支架的制備方法的流程圖；

圖3是本發(fā)明一實(shí)施例中藥物涂層在凹槽內(nèi)的結(jié)構(gòu)示意圖。

圖1-3中，支撐環(huán)-1；連接桿-2；波桿-10；凹槽-11；藥物涂層-3。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提出的載藥支架及其制備方法作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。根據(jù)下面說(shuō)明和權(quán)利要求書，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特征將更清楚。需說(shuō)明的是，附圖均采用非常簡(jiǎn)化的形式且均使用非精準(zhǔn)的比例，僅用以方便、明晰地輔助說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例的目的。

請(qǐng)參考圖1，其為本發(fā)明一實(shí)施例中載藥支架沿軸向展開的結(jié)構(gòu)示意圖。如圖1所示，所述載藥支架包括支架本體，一個(gè)支架本體包括至少一個(gè)支撐環(huán)1及連接支撐環(huán)1的連接桿2，每個(gè)支撐環(huán)1包括波桿10以及設(shè)置于波桿10上的凹槽11。這里的凹槽11用于承載藥物，也可將其替換為微孔(微米級(jí)別的孔)。其中，所述支架本體可以選自鈦、鈷、鉭、鎳鈦合金、鎳鈦锘合金、醫(yī)用不銹鋼、醫(yī)用可降解合金材料如鋁鎂合金，也可以選用聚合物材料，這里的聚合物材料包括可降解或不可降解材料，可降解材料如PCL、PGA、PLLA、PCLA、PLGA等。

本實(shí)施例中，載藥支架可以通過(guò)高分子材料涂層載藥，或者在凹槽或微孔中裝載載體和藥物，或者直接在支架本體表面涂覆藥物制成。這里的藥物可以與支架本體以化學(xué)或物理的方式結(jié)合；藥物可以分布在支架表面，也可以置于支架內(nèi)部。

其中，本實(shí)施例中選用高分子涂層材料作為藥物的載體，以實(shí)現(xiàn)對(duì)藥物的緩慢釋放的效果，可以通過(guò)高分子材料和藥物的比例不同使藥物釋放的曲線和周期不同，從而控制藥物的釋放時(shí)間。例如，支架上藥物和高分子材料的比例 (重量比)在5：1～1：10之間可以實(shí)現(xiàn)藥物在患者體內(nèi)3～6個(gè)月的持續(xù)釋放。其中，高分子涂層材料可以是生物可降解聚合物，選自于聚酯、聚酸酐、聚氨基酸、聚膦腈、聚多糖等及其共聚物以及混合物，包括聚乳酸、聚乙醇酸、聚(乳酸-乙醇酸)、聚己內(nèi)酯、殼聚糖、葡聚糖、甲殼素、聚癸酸酐、聚乙烯醇等或其混合物的一種或幾種；也可以是生物穩(wěn)定聚合物，選自于聚氨基甲酸酯、聚烯烴、聚酯、聚酰胺、聚己內(nèi)酰胺、聚酰亞胺、聚乙烯基甲基醚、聚乙烯醇或乙烯醇、烯烴共聚物、聚丙烯腈、聚二甲基硅氧烷、聚(乙烯-醋酸乙烯酯)、基于丙烯酸酯的聚合物或共聚物、聚乙烯吡咯烷酮、氟化聚合物、纖維素酯、多孔陶瓷涂層、氟聚炭，或其混合物的一種或多種。較佳的，高分子涂層材料可以是明膠或透明質(zhì)酸，以促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的功能。

本申請(qǐng)?zhí)峁┑妮d藥支架用于抑制血管內(nèi)膜增生，主要原因在于支架本體上裝載有采用PI3K/mTOR雙重抑制劑制備的抑制血管內(nèi)膜增生的藥物，所述PI3K/mTOR雙重抑制劑為對(duì)PI3K和mTOR都有抑制作用的藥物，通常PI3K/mTOR雙重抑制劑應(yīng)用于對(duì)腫瘤的治療，而本申請(qǐng)將其應(yīng)用于抑制血管內(nèi)膜增生中，獲得了較佳的治療效果。在支架本體上裝載PI3K/mTOR雙重抑制劑的優(yōu)點(diǎn)體現(xiàn)于：由于PI3K/mTOR雙重抑制劑單一藥物對(duì)PI3K和mTOR都有抑制作用，因此可以發(fā)揮藥物的雙靶點(diǎn)作用性能，相比采用單純的mTOR抑制劑，對(duì)于抑制血管的平滑肌的作用更強(qiáng)，有效的抑制血管內(nèi)膜增生，使得血管再狹窄率進(jìn)一步降低。需要說(shuō)明的是，所述PI3K/mTOR雙重抑制劑對(duì)mTORC1和mTORC2都有抑制作用。

具體的，這里所述的PI3K/mTOR雙重抑制劑為BKM120、ZSTK474、GDC0941、GDC0980、XL765、XL147、SF1126、BEZ235、PF04691502、GSK2126458、PKI587、BGT226、GEN477、PWT33597(VDC-597)或DS7423中的一種或多種。

進(jìn)一步地，PI3K/mTOR雙重抑制劑也可以是對(duì)細(xì)胞毒性更小的PI3Kα/mTOR雙重抑制劑或者PI3Kγ/mTOR雙重抑制劑。這里的PI3Kα/mTOR雙重抑制劑為GEN477、PWT33597或DGC0941中的一種或多種，以及PI3Kγ/mTOR雙重抑制劑，如XL765。PI3Kα/mTOR雙重抑制劑、PI3Kβ/mTOR雙重抑制劑和PI3Kγ/mTOR雙重抑制劑也可以被稱為特異性PI3K/mTOR雙重抑 制劑。

為了較好的體現(xiàn)本申請(qǐng)PI3K/mTOR雙重抑制劑應(yīng)用在抑制血管內(nèi)膜增生的藥物中能夠獲得較佳的治療效果，請(qǐng)參考表1，其具體記載了幾種PI3K/mTOR雙重抑制劑對(duì)于靶蛋白活性抑制測(cè)試結(jié)果。

表1

根據(jù)PI3K/mTOR雙重抑制劑的抑制選擇性將其劃分為兩類，即平衡型PI3K/mTOR雙重抑制劑和非平衡型PI3K/mTOR雙重抑制劑，所述PI3K/mTOR雙重抑制劑分為平衡型PI3K/mTOR雙重抑制劑和非平衡型PI3K/mTOR雙重抑制劑；所述平衡型PI3K/mTOR雙重抑制劑為PI3K的IC₅₀值與mTOR的IC₅₀值的比值在預(yù)定范圍之中，表1中的PWT33597(VDC-597)或DGC0980為平衡型PI3K/mTOR雙重抑制劑。所述非平衡型PI3K/mTOR雙重抑制劑為PI3K的IC₅₀值與mTOR的IC₅₀值的比值在預(yù)定范圍之外。以使用PI3K/mTOR雙重抑制劑進(jìn)行對(duì)靶蛋白活性的抑制實(shí)驗(yàn)為例，設(shè)定藥物對(duì)PI3K和mTOR的IC₅₀值分別為A和B，若A與B的比值在1/5～5(本例中的預(yù)定范圍)之間，即可認(rèn)為是平衡型PI3K/mTOR雙重抑制劑；若A/B不在此范圍內(nèi)，則認(rèn)為是非平衡型PI3K/mTOR雙重抑制劑。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，如實(shí)驗(yàn)例1中表2中的數(shù)據(jù)所示，平衡型PI3K/mTOR雙重抑制劑對(duì)于平滑肌細(xì)胞的抑制作用顯著，對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞的抑制作用輕微；而在非平衡型PI3K/mTOR雙重抑制劑中，對(duì)PI3K選擇性更強(qiáng)的PI3K/mTOR雙重抑制劑對(duì)于血糖水平較高的病人作用更為明顯，因而針對(duì)糖尿病合并冠心病患者的效果更好。

為了本申請(qǐng)的載藥支架具有更佳的治療效果，在裝載PI3K/mTOR雙重抑制 劑的同時(shí)還可以裝載單純PI3K抑制劑、單純mTOR抑制劑、胰島素增敏劑中的一種或多種。其中，所述單純PI3K抑制劑僅對(duì)PI3K有抑制作用，所述單純PI3K抑制劑選自LY294002、渥曼青霉素、哌立福辛、艾代拉里斯、PX-866、IPI-145、BAY 80-6946、RP6503或TGR1202中的一種或多種；所述單純mTOR抑制劑僅對(duì)mTOR有抑制作用，具體選自雷帕霉素、依維莫司、他克莫司、地磷莫司、替西羅莫司或佐他莫司中的一種或多種；所述胰島素增敏劑選自曲格列酮、吡格列酮或羅格列酮中的一種或多種。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，如實(shí)驗(yàn)例1中表2中的數(shù)據(jù)所示，單純PI3K抑制劑或單純mTOR抑制劑可以作為改變PI3K/mTOR抑制劑的靶蛋白選擇性的調(diào)節(jié)劑聯(lián)合使用。

較佳的，本申請(qǐng)裝載有PI3K/mTOR雙重抑制劑的載藥支架的支架本體上還裝載有抗菌劑、抗腫瘤藥、抗氧化劑、內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)和/或遷移抑制劑、凝血酶抑制劑、抗血小板凝集劑、膠原蛋白合成抑制劑、氧化氮供體、治療抗體、非甾體抗炎藥、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑或自由基清除劑中的一種或多種。其中，所述抗菌劑可以是β內(nèi)酰胺類抗生素、氨基糖苷類抗生素、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素、四環(huán)素類抗生素、喹諾酮類抗生素或磺胺類抗生素中的一種或多種；所述抗腫瘤藥物可以為甲氨蝶呤，氟尿嘧啶，巰嘌呤，羥基脲，阿糖胞苷，卡鉑，順鉑，奧沙利鉑，雙環(huán)鉑，紫杉醇，柔紅霉素，多柔比星或三氧化二砷中的一種或多種；所述抗氧化劑可以是維生素E、維生素C、人參皂苷或銀杏葉提取物中的一種或多種；所述非甾體抗炎藥可以是阿司匹林、對(duì)乙酰氨基酚、吲哚美辛、萘普生、萘普酮、雙氯芬酸、布洛芬、尼美舒利、羅非昔布或塞來(lái)昔布中的一種或多種；所述血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)可以是卡托普利、阿拉普利、依那普利、賴諾普利、培哚普利、雷米普利、喹那普利、地拉普利、西拉普利、貝那普利、螺普利、群多普利、莫昔普利、咪達(dá)普利或福辛普利中的一種或多種。

經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明所提供的載藥支架可以在裝載PI3K/mTOR雙重抑制劑的基礎(chǔ)上，可以根據(jù)需要選擇裝載其它功能的藥物，具有較好的穩(wěn)定性。釋放的PI3K/mTOR雙重抑制劑發(fā)揮藥物的雙靶點(diǎn)作用性能，相比單純的mTOR抑制劑，對(duì)于抑制血管的平滑肌的作用更強(qiáng)，當(dāng)其作用于病患處，有效的抑制血管內(nèi)膜增生，從而使得血管再狹窄率進(jìn)一步降低。相比單純的mTOR抑制劑和單純 的PI3K抑制劑聯(lián)合使用來(lái)說(shuō)，避免了兩種藥物相互反應(yīng)作用帶來(lái)的穩(wěn)定性下降、不良反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)增大的問(wèn)題。裝載PI3K/mTOR雙重抑制劑的載藥支架的藥物釋放周期可控，可以為：1天至2年。優(yōu)選的釋放周期為15天-9個(gè)月，特別優(yōu)選：1個(gè)月-6個(gè)月。

此外，相比于采用單純的mTOR抑制劑(如雷帕霉素)的藥物支架，在支架上采用PI3K/mTOR雙重抑制劑，并未顯示增加了對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的抑制作用，甚至部分PI3K/mTOR雙重抑制劑對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的抑制作用比單純的mTOR抑制劑更弱一點(diǎn)，這對(duì)于減少載藥支架晚期血栓的發(fā)生率和降低血管內(nèi)皮障礙有著意想不到的效果。

此外，本發(fā)明裝載PI3K/mTOR雙重抑制劑的載藥支架還適合糖尿病合并心血管疾病患者，相比于雷帕霉素等單純mTOR抑制劑，其受體內(nèi)病理環(huán)境變化因素的干擾更少；相比單純的mTOR抑制劑和單純的PI3K抑制劑聯(lián)合使用來(lái)說(shuō)，本發(fā)明避免了兩種藥物相互反應(yīng)作用帶來(lái)的穩(wěn)定性下降、不良反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)增大乃至存在巨大毒性風(fēng)險(xiǎn)的問(wèn)題。

含PI3K/mTOR雙重抑制劑的載藥支架對(duì)于抑制血管內(nèi)膜增生的效能評(píng)價(jià)：

實(shí)驗(yàn)例1：細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

A藥物的配制：

a)實(shí)驗(yàn)前，將載有不同PI3K/mTOR雙重抑制劑的藥物支架從置于DMSO溶液中，完全溶解后并進(jìn)一步稀釋形成藥物濃度為10^-2mmol/ml的溶液。

b)再將10^-2mmol/ml的藥物溶液用DMSO稀釋成濃度為10^-3,10^-4,10^-5…10^-9mmol/ml的藥物溶液。

c)將上述配制的系列濃度藥物溶液分裝后，置于-20攝氏度暫存?zhèn)溆谩?/p>

d)使用時(shí)，將保存的DMSO稀釋后的10^-2～10^-9的雷帕霉素取出恢復(fù)常溫后，用相應(yīng)完全細(xì)胞培養(yǎng)基將每個(gè)濃度的藥物溶液稀釋1000倍進(jìn)行細(xì)胞試驗(yàn)，即最終的使用濃度分別為10^-5,10^-6,10^-7,10^-8,10^-9,10^-10,10^-11,10_-¹²mmol/mL。

B體外細(xì)胞增殖及測(cè)定

a)細(xì)胞接種濃度的選擇：選擇生長(zhǎng)狀態(tài)良好，生長(zhǎng)穩(wěn)定的A10細(xì)胞。消化后配制成濃度分別為1*104/ml、2*104/ml、4*104/ml、5*104/ml、10*104/ml 的細(xì)胞懸液。將上述濃度的細(xì)胞懸液接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，按MTT比色法進(jìn)行培養(yǎng)。最后酶標(biāo)儀測(cè)得570nm波長(zhǎng)下吸光值為0.6-1.5的為要進(jìn)行試驗(yàn)的細(xì)胞接種液濃度。

b)配制既定的細(xì)胞濃度懸液接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上。

c)吸去細(xì)胞培養(yǎng)液添加最終濃度的含藥細(xì)胞培養(yǎng)液，并以無(wú)藥細(xì)胞培養(yǎng)液作為空白對(duì)照組，含1/1000濃度的DMSO細(xì)胞培養(yǎng)液作為背景對(duì)照組。細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)72小時(shí)。

d)添加MTT培養(yǎng)4小時(shí)，棄去培養(yǎng)板上的細(xì)胞培養(yǎng)液添加DMSO溶解測(cè)試吸光度

C實(shí)驗(yàn)分組

實(shí)驗(yàn)分別選用主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HASMC)和人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(HAEC)；每組細(xì)胞又分為13個(gè)組，每組n＝6，具體如下：

1.對(duì)照組：無(wú)藥物添加；

2.雷帕霉素組：培養(yǎng)基中含1nM、6μM和10mM雷帕霉素；

3.PWT33597組：培養(yǎng)基中含1nM、6μM和10mM PWT33597；

4.DGC0980組：培養(yǎng)基中含1nM、6μM和10mMDGC0980；

5.DGC0941組：培養(yǎng)基中含1nM、6μM和10mM DGC0941；

6.BKM120組：培養(yǎng)基中含1nM、6μM和10mM BKM120；

7.XL765組：培養(yǎng)基中含1nM、6μM和10mM XL765；

8.GEN477組：培養(yǎng)基中含1nM、6μM和10mM GEN477；

9.DGC0980+雷帕霉素組：培養(yǎng)基中含1nM雷帕霉素和1nM、6μM、10mM DGC0980；

10.DGC0980+LY294002組：培養(yǎng)基中含1nM LY294002和1nM、6μM、10mM DGC0980；

11.DGC0980+羅格列酮組：培養(yǎng)基中含1nM羅格列酮和1nM、6μM、10mM DGC0980；

12.DGC0980+賴諾普利組：培養(yǎng)基中含1nM賴諾普利和1nM、6μM、10mM DGC0980；

13.XL765+維生素E+尼美舒利組：培養(yǎng)基中含1nM維生素E、1nM尼美 舒利和1nM、6μM、10mM DGC0980。

D實(shí)驗(yàn)結(jié)果

各組實(shí)驗(yàn)對(duì)于平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的抑制率見表2。

表2

實(shí)驗(yàn)例2：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

A研究對(duì)象：選擇巴馬小型豬，雄性，月齡1-2月，以誘導(dǎo)飼料配方喂養(yǎng)5個(gè)月。誘導(dǎo)飼料配方為：蔗糖30％，牛油15％，膽固醇3％，大豆餅17％，魚粉5％,玉米20％，小麥次粉5％，搗米糠5％。選擇出現(xiàn)高血糖癥、高胰島素血癥，并觀察到微蛋白尿、尿糖和腎炎等早期糖尿腎病表現(xiàn)的豬作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

B實(shí)驗(yàn)分組

1、雷帕霉素支架組：動(dòng)物植入含有雷帕霉素的支架

2、GEN477支架組：動(dòng)物植入含有GEN477的支架

3、BKM120支架組：動(dòng)物植入含有BKM120的支架

4、GEN477+雷帕霉素支架組：動(dòng)物植入含有GEN477+雷帕霉素的支架

C支架植入術(shù)

術(shù)前3日開始每天喂服阿司匹林和氯吡格雷。術(shù)前麻醉動(dòng)物，使其仰臥固定于手術(shù)臺(tái)，建立靜脈通路，氣管插管及呼吸機(jī)輔助呼吸。冠脈造影局部消毒后，穿刺右股動(dòng)脈，經(jīng)穿刺針?biāo)腿雽?dǎo)引導(dǎo)絲，沿導(dǎo)絲送入6F股動(dòng)脈鞘，經(jīng)鞘管給以肝素150Ukg。經(jīng)鞘管送入6F右冠指引導(dǎo)管分別行左右冠脈造影。靶血管選擇盡量避開大的血管分支。在體外用壓力泵充盈球囊釋放支架，待支架完全貼壁并造成損傷后撤出球囊。術(shù)后復(fù)查造影。撤出導(dǎo)管，拔出股動(dòng)脈鞘，術(shù)區(qū)局部加壓止血。豬清醒后送回隆中繼續(xù)喂養(yǎng)。

D實(shí)驗(yàn)結(jié)果

支架植入后，持續(xù)飼養(yǎng)45d。45d后考察損傷部位血管內(nèi)膜增生情況，測(cè)定支架植入出血管內(nèi)膜(intima)和中膜厚度(media)計(jì)算其比值(I/M)ratio，結(jié) 果見表3。

表3

相應(yīng)的，本實(shí)施例還提供了一種載藥支架的制備方法。下面參考圖2詳細(xì)說(shuō)明本實(shí)施例所述載藥支架的制備方法。

首先，執(zhí)行步驟S1，提供支架本體；這里所述支架本體表面設(shè)置有凹槽或表面帶有微孔，以為后續(xù)裝載藥物奠定條件。

接著，執(zhí)行步驟S2，將PI3K/mTOR雙重抑制劑和溶劑混合成溶液；其中，所述溶劑為鏈烷烴、烯烴、醇、醛、胺、酯、醚、酮、芳香烴、氫化烴、萜烯烴、鹵代烴、雜環(huán)化物、含氮化合物或含硫化合物。

接著，執(zhí)行步驟S3，將所述溶液裝載于所述支架本體上。具體的，所述溶液裝載在所述支架本體表面的凹槽內(nèi)，或?qū)⒈砻鎺в形⒖椎乃鲋Ъ鼙倔w浸泡在所述溶液后取出，或者將所述溶液涂覆在所述支架本體的表面。所述溶液裝載的方式為：滴注或涂覆，所述涂覆包括超聲霧化噴涂、化學(xué)氣相沉積、物理氣相淀積、離子束噴涂、浸涂、微噴或刷涂中的一種或多種。

接著，執(zhí)行步驟S4，待所述溶劑揮發(fā)后，獲得所述載藥支架。

進(jìn)一步地，請(qǐng)結(jié)合下面幾個(gè)實(shí)施例理解載藥支架的制備方法。

實(shí)施例1：

按1:3的重量比分別稱取BKM120和聚乳酸，混合后溶于乙腈溶液制成0.9％固體含量的溶液。待溶質(zhì)(即BKM120和聚乳酸)完全溶解后，用超聲霧化的方式將溶液均勻噴涂在L605鈷鉻合金金屬支架表面。室溫下待乙腈完全揮發(fā)后即制得含BKM120的載藥支架。

實(shí)施例2：

按1:1:10的重量比分別稱取XL147、雷帕霉素和SBS，混合后加入四氫呋 喃定容至固體含量百分比1％。制備含有槽結(jié)構(gòu)的支架本體，然后將配得的溶液通過(guò)微噴的方法注入槽結(jié)構(gòu)中。真空干燥6h，除去四氫呋喃后制得的載藥支架。

實(shí)施例3：

通過(guò)摩擦處理使不銹鋼裸支架表面形成細(xì)微紋痕，將經(jīng)過(guò)微粉化處理后的GDC0980、羅格列酮、雙環(huán)鉑按照10：1：0.1的比例與裸支架置于高壓密閉設(shè)備內(nèi)，開啟設(shè)備，使藥物微粒鑲嵌于裸支架的細(xì)微紋痕之中，待裸支架增重43μg/cm²，得到載藥支架。

實(shí)施例4：

取0.2g聚乳酸(PLA)，在室溫下加入到10ml乙腈配制成均勻的溶液，再加入0.05g BEZ235和0.01g紫杉醇待完全溶解，得到噴涂溶液。然后將溶液準(zhǔn)確的噴涂至支架本體上的凹槽11內(nèi)，自然干燥至重量穩(wěn)定，再經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌后得到載藥支架。制備后的載藥支架的藥物涂層3在凹槽11內(nèi)的狀態(tài)可以參考如圖3所示內(nèi)容。

綜上，在本發(fā)明所提供的PI3K/mTOR雙重抑制劑在制備抑制血管內(nèi)膜增生的藥物中的用途、載藥支架及其制備方法，將PI3K/mTOR雙重抑制劑用于制備抑制血管內(nèi)膜增生的藥物，以及在支架本體上裝載PI3K/mTOR雙重抑制劑，制備成用于抑制血管內(nèi)膜增生的載藥支架，由于PI3K/mTOR雙重抑制劑對(duì)PI3K和mTOR都有抑制作用，因此可以發(fā)揮單一藥物的雙靶點(diǎn)作用，相比采用單純的mTOR抑制劑，對(duì)于抑制血管的平滑肌的作用更強(qiáng)，有效地抑制血管內(nèi)膜增生，使得血管的再狹窄率進(jìn)一步降低。

上述描述僅是對(duì)本發(fā)明較佳實(shí)施例的描述，并非對(duì)本發(fā)明范圍的任何限定，本發(fā)明領(lǐng)域的普通技術(shù)人員根據(jù)上述揭示內(nèi)容做的任何變更、修飾，均屬于權(quán)利要求書的保護(hù)范圍。