本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，具體地說，涉及一種含有阿尼芬凈的凍干粉及制備方法。

背景技術(shù)：

阿尼芬凈化學(xué)名為：1-[(4R,5R)-4,5-二羥基-N-N-[[4-(戊氧基)[1,1′:4′,1″-三聯(lián)苯]-4-基]羧基]-L-鳥氨酸]棘白菌素B

阿尼芬凈是一種環(huán)狀脂肽類抗真菌藥，是屬于棘白菌素天然產(chǎn)物(屬于抗真菌藥)的一種半合成衍生物。與其它棘白菌素(如卡泊芬凈、米卡芬凈)一樣，它是(1,3)-β-D-葡聚糖合成酶的非競爭性抑制劑。此酶在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中并不存在，但是許多致病性真菌細(xì)胞壁代謝過程中必需的酶。阿尼芬凈通過抑制葡聚糖的合成干擾細(xì)胞壁的代謝，使真菌細(xì)胞內(nèi)外滲透壓不平衡從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。與天然棘白菌素相比，阿尼芬凈的合成中采用了一種含有三聯(lián)苯的合成側(cè)鏈而替代亞油酸天然側(cè)鏈，因此提高了其活性。體外研究試驗(yàn)中，阿尼芬凈對(duì)重要的致病性真菌顯示了廣譜抗真菌作用(包括念珠菌屬，曲霉屬，和卡氏肺孢子菌)，對(duì)一系列試驗(yàn)性感染的動(dòng)物模型也有效。對(duì)于念珠菌及曲霉，阿尼芬凈在體外的活性與兩性霉素B和氟康唑相似或更高。藥物相互作用研究顯示，阿尼芬凈與其他種類抗念珠菌的抗真菌藥沒有拮抗作用，多數(shù)情況下，對(duì)抗曲霉的抗真菌藥也沒有拮抗作用。在體內(nèi)對(duì)多個(gè)動(dòng)物模型均顯示活性，且對(duì)唑類和兩性霉素B耐藥的菌株仍具有活性。

阿尼芬凈原料藥為白色至類白色固體，在水中的溶解度≤0.1mg/mL，在乙醇中的溶解 度≥1～<5。離子常數(shù)為9.5，分配系數(shù)為5.09。阿尼芬凈成品是阿尼芬凈和D-果糖的分子混合物，含果糖7％～17％。加入果糖可用來提高原料的穩(wěn)定性，此外，果糖也是成品制劑的輔料。注射用阿尼芬凈為阿尼芬凈原料藥及輔料按照標(biāo)準(zhǔn)無菌工藝制備的凍干粉針。

中國專利申請(qǐng)CN100335122C公開了含有成膠束表面活性劑的棘白菌素藥物制劑，該專利中阿尼芬凈溶解溫度為5～15℃，溫度過低，不利于阿尼芬凈的溶解，此工藝耗時(shí)耗能，超出正常工藝能耗50％以上，且未對(duì)凍干進(jìn)行描述。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明擬提供一種含有阿尼芬凈的凍干粉，所得制劑有關(guān)物質(zhì)、水分指標(biāo)優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)。具體而言，本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種含有阿尼芬凈的凍干粉，包含活性成分和其它載體，其中，活性成分為治療有效量的阿尼芬凈，其它載體為增溶劑、穩(wěn)定劑、凍干賦形劑、緩沖鹽，凍干前用堿度調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)藥液pH值至3.5～5.5。

優(yōu)選地，所述增溶劑為聚山梨酯80、泊洛沙姆和15-羥基硬脂酸聚乙二醇酯中的一種或多種；所述穩(wěn)定劑為果糖和葡萄糖中的一種或多種；所述凍干賦形劑為甘露醇、右旋糖酐和乳糖中的一種或多種；所述緩沖鹽為酒石酸緩沖液和枸櫞酸緩沖液中的一種或多種。

優(yōu)選地，所述增溶劑為聚山梨酯80；所述穩(wěn)定劑為果糖；所述凍干賦形劑為甘露醇；所述緩沖鹽為酒石酸緩沖液；其中，阿尼芬凈：果糖：甘露醇：酒石酸：聚山梨酯80的質(zhì)量比為50～100:50～100：250～500:5.6～11.2：125～250。

所述凍干粉通過下述方法制備得到：

(a)將凍干賦形劑、緩沖鹽加入水中，調(diào)節(jié)pH值至4.0～4.5，為緩沖溶液體系；

(b)將阿尼芬凈加入緩沖溶液中，攪拌溶解至澄清；

(c)步驟(b)所得含藥溶液中加入增溶劑、穩(wěn)定劑，并定容至全量；

(d)步驟(c)所得藥液經(jīng)微孔濾膜過濾后，濾液分裝于藥用容器，冷凍干燥得所述注射用組合物。

優(yōu)選地，所述組合物通過下述方法制備得到：

(a)將酒石酸、聚山梨酯80加入水中，調(diào)節(jié)pH值至4.0～4.5，為緩沖溶液體系；

(b)將阿尼芬凈加入緩沖溶液中，攪拌溶解至澄清；

(c)步驟(b)所得含藥溶液中加入果糖、甘露醇，并定容至全量；

(d)步驟(c)所得藥液經(jīng)微孔濾膜過濾后，濾液分裝于藥用容器，冷凍干燥得所述注射用組合物。

優(yōu)選地，所述制備方法中，

步驟(a)中所述水的體積為配液總體積的80～90％；

步驟(b)溶解時(shí)所述水的溫度控制在40～60℃；溶解后將溶液溫度降低至20～30℃；

步驟(c)定容所用的注射用水溫度降至20～30℃；

步驟(d)中所述微孔濾膜為0.22μm濾芯，每一藥用容器中含阿尼芬凈50～200mg，每100g阿尼芬凈的配液總體積為5.0～20.0L。

進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟(d)中所述冷凍干燥方法為：

(1)將制品溫度降至-40～-50℃，保溫緩慢2～3小時(shí)；

(2)抽真空至壓力值不高于0.2mbar，升溫至-10～--5℃，保持15～18小時(shí)；

(3)緩慢升溫至30～35℃，保溫6～8小時(shí)；

所述藥用容器為西林瓶。

本發(fā)明所得制劑含量、無菌、內(nèi)毒素、可見異物等指標(biāo)和現(xiàn)有技術(shù)相當(dāng)，但是有關(guān)物質(zhì)、水分指標(biāo)優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)，本技術(shù)縮短了配制的時(shí)限；同時(shí)提供了一條新型的注射用阿尼芬凈的制備工藝，其制備工藝簡單可行、易于操作、適合工業(yè)化大生產(chǎn)的需要，提高了制劑產(chǎn)品質(zhì)量及安全性。

具體實(shí)施方式

下面將通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述，但這些描述并不是對(duì)本發(fā)明的限定。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)理解，對(duì)本發(fā)明內(nèi)容所作的等同替換，或相應(yīng)的改進(jìn)，仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

實(shí)施例1

處方：

每1000瓶凍干粉含有

制備方法：

將酒石酸、聚山梨酯80加入占配液總體積80％的注射用水(保持40℃以上)中，溶解，調(diào)節(jié)pH值至4.0～5.0，得緩沖鹽溶液，阿尼芬凈加入緩沖鹽溶液中溶解，藥液降至20～30℃后，加入甘露醇、果糖后，攪拌溶解。加入活性炭后，攪拌脫炭過濾，用20～30℃的注射用水定容至全量，經(jīng)0.22μm濾芯無菌過濾，濾液灌裝于西林瓶中半壓膠塞送入凍干箱，關(guān)緊箱門。開啟凍干機(jī)，待制品溫度達(dá)到-40℃以下，保溫2～3小時(shí)，打開冷凝器電磁閥，待冷凝器溫度達(dá)-45℃以下時(shí)，開啟真空泵，待前箱真空在0.2mbar后，進(jìn)行凍干升華：

第一階段調(diào)節(jié)導(dǎo)熱油溫度緩慢升溫至-10℃后保持該溫度15小時(shí)；第二階段調(diào)節(jié)導(dǎo)熱油溫度緩慢升溫至30℃后，當(dāng)制品溫度達(dá)30℃以上時(shí)，保溫6小時(shí)，關(guān)閉中隔閥，前箱真空度無明顯下降后，停真空泵，壓塞，出箱。壓蓋，得成品。

實(shí)施例2

處方：

每1000瓶凍干粉含有

制備方法：

將酒石酸、聚山梨酯80加入占配液總體積80％的注射用水(保持40℃以上)中，攪拌溶解，調(diào)節(jié)pH值至4.0～5.0，得緩沖鹽溶液，阿尼芬凈加入緩沖鹽溶液中溶解，藥液降至20～30℃后，加入甘露醇、果糖后，攪拌溶解。加入活性炭后，攪拌脫炭過濾，用20～30 ℃的注射用水定容至全量，經(jīng)0.22μm濾芯無菌過濾，濾液灌裝于西林瓶中半壓膠塞送入凍干箱，關(guān)緊箱門。開啟凍干機(jī)，待制品溫度達(dá)到-40℃以下，保溫2～3小時(shí)，打開冷凝器電磁閥，待冷凝器溫度達(dá)-45℃以下時(shí)，開啟真空泵，待前箱真空在0.2mbar后，進(jìn)行凍干升華：

第一階段調(diào)節(jié)導(dǎo)熱油溫度緩慢升溫至-8℃后保持該溫度16小時(shí)；第二階段調(diào)節(jié)導(dǎo)熱油溫度緩慢升溫至33℃后，當(dāng)制品溫度達(dá)33℃以上時(shí)，保溫7小時(shí)，關(guān)閉中隔閥，前箱真空度無明顯下降后，停真空泵，壓塞，出箱。壓蓋，得成品。

實(shí)施例3

處方：

每1000瓶凍干粉含有

制備方法：

將酒石酸、聚山梨酯80加入占配液總體積80％的注射用水(保持40℃以上)中，攪拌溶解，調(diào)節(jié)pH值至4.0～5.0，得緩沖鹽溶液，阿尼芬凈加入緩沖鹽溶液中溶解，藥液降至20～30℃后，加入甘露醇、果糖后，攪拌溶解。加入活性炭后，攪拌脫炭過濾，用20～30℃的注射用水定容至全量，經(jīng)0.22μm濾芯無菌過濾，濾液灌裝于西林瓶中半壓膠塞送入凍干箱，關(guān)緊箱門。開啟凍干機(jī)，待制品溫度達(dá)到-40℃以下，保溫2～3小時(shí)，打開冷凝器電磁閥，待冷凝器溫度達(dá)-45℃以下時(shí)，開啟真空泵，待前箱真空在0.2mbar后，進(jìn)行凍干升華：

第一階段調(diào)節(jié)導(dǎo)熱油溫度緩慢升溫至-5℃后保持該溫度18小時(shí)；第二階段調(diào)節(jié)導(dǎo)熱油溫度緩慢升溫至35℃后，當(dāng)制品溫度達(dá)35℃以上時(shí)，保溫8小時(shí)，關(guān)閉中隔閥，前箱真空度無明顯下降后，停真空泵，壓塞，出箱。壓蓋，得成品。

對(duì)比實(shí)施例1

處方：

每1000瓶凍干粉含有

制備方法：

將酒石酸、聚山梨酯80加入占配液總體積80％的注射用水中，攪拌溶解，調(diào)節(jié)pH值至4.0～5.0，得緩沖鹽溶液，并降至5～15℃。阿尼芬凈加入緩沖鹽溶液中溶解，待主藥完全溶解后，加入甘露醇、果糖后，攪拌溶解。加入活性炭后，攪拌脫炭過濾，用5～15℃的注射用水定容至全量，經(jīng)0.22μm濾芯無菌過濾，濾液灌裝于西林瓶中半壓膠塞送入凍干箱，關(guān)緊箱門。開啟凍干機(jī)，待制品溫度達(dá)到-40℃以下，保溫2～3小時(shí)，打開冷凝器電磁閥，待冷凝器溫度達(dá)-45℃以下時(shí)，開啟真空泵，待前箱真空在0.2mbar后，進(jìn)行凍干升華：

第一階段調(diào)節(jié)導(dǎo)熱油溫度緩慢升溫至-5℃后保持該溫度18小時(shí)；第二階段調(diào)節(jié)導(dǎo)熱油溫度緩慢升溫至35℃后，當(dāng)制品溫度達(dá)35℃以上時(shí)，保溫8小時(shí)，關(guān)閉中隔閥，前箱真空度無明顯下降后，停真空泵，壓塞，出箱。壓蓋，得成品。

對(duì)比實(shí)施例2

處方：

每1000瓶凍干粉含有

制備方法：

將阿尼芬凈加入占配液總體積80％的注射用水中，再加入聚山梨酯80攪拌溶解，再加入酒石酸調(diào)節(jié)pH值至4.0～5.0，得緩沖鹽溶液，并降至5～15℃。待主藥完全溶解后，加入果糖、甘露醇，攪拌溶解。加入活性炭后，攪拌脫炭過濾，用5～15℃的注射用水定容至全量，經(jīng)0.22μm濾芯無菌過濾，濾液灌裝于西林瓶中半壓膠塞送入凍干箱，關(guān)緊箱門。

第一階段調(diào)節(jié)導(dǎo)熱油溫度緩慢升溫至-5℃后保持該溫度18小時(shí)；第二階段調(diào)節(jié)導(dǎo)熱油溫度緩慢升溫至35℃后，當(dāng)制品溫度達(dá)35℃以上時(shí)，保溫8小時(shí)，關(guān)閉中隔閥，前箱真空度無明顯下降后，停真空泵，壓塞，出箱。壓蓋，得成品。

對(duì)比實(shí)施例3

處方：

每1000瓶凍干粉含有

制備方法：

1)稱取聚山梨酯80，恒溫?cái)嚢瑁贸吻逋该鞯脑鋈軇瑢⒛岱覂艏尤朐鋈軇┲?，恒溫?cái)嚢枞芙?，直至獲得澄清透明溶液I，備用；

2)分別稱取甘露醇和果糖，用注射用水溶解，恒溫，加入活性炭處理，經(jīng)脫炭和過濾除菌，得澄清透明溶液II，備用；

3)混合均勻溶液I和溶液II，獲得澄清透明混合溶液，加入酒石酸，用酸度劑調(diào)節(jié)溶液的pH值，再加入活性炭處理，經(jīng)脫炭和過濾除菌，獲得阿尼芬凈藥物組合物的溶液；

4)阿尼芬凈藥物組合物的溶液經(jīng)0.22μm濾芯無菌過濾，濾液灌裝于西林瓶中半壓膠塞送入凍干箱，關(guān)緊箱門。

第一階段調(diào)節(jié)導(dǎo)熱油溫度緩慢升溫至-5℃后保持該溫度18小時(shí)；第二階段調(diào)節(jié)導(dǎo)熱油溫度緩慢升溫至35℃后，當(dāng)制品溫度達(dá)35℃以上時(shí)，保溫8小時(shí)，關(guān)閉中隔閥，前箱真空度無明顯下降后，停真空泵，壓塞，出箱。壓蓋，得成品。

對(duì)比實(shí)施例4

處方：

每1000瓶凍干粉含有

制備方法：

將酒石酸、聚山梨酯80加入占配液總體積80％的注射用水中，攪拌溶解，調(diào)節(jié)pH值至4.0～5.0，得緩沖鹽溶液，阿尼芬凈加入緩沖鹽溶液中溶解，藥液降至20～30℃后，加入甘露醇、果糖后，攪拌溶解。加入活性炭后，攪拌脫炭過濾，用20～30℃的注射用水定容至全量，經(jīng)0.22μm濾芯無菌過濾，濾液灌裝于西林瓶中半壓膠塞送入凍干箱，關(guān)緊箱門。開啟凍干機(jī)，待制品溫度達(dá)到-40℃以下，保溫2～3小時(shí)，打開冷凝器電磁閥，待冷凝器溫度達(dá)-45℃以下時(shí)，開啟真空泵，待前箱真空在0.2mbar后，進(jìn)行凍干升華：

第一階段調(diào)節(jié)導(dǎo)熱油溫度緩慢升溫至-5℃后保持該溫度18小時(shí)；第二階段調(diào)節(jié)導(dǎo)熱油溫度緩慢升溫至35℃后，當(dāng)制品溫度達(dá)35℃以上時(shí)，保溫8小時(shí)，關(guān)閉中隔閥，前箱真空度無明顯下降后，停真空泵，壓塞，出箱。壓蓋，得成品。

驗(yàn)證實(shí)施例

有關(guān)物質(zhì)測(cè)定

取本品約10mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加甲醇-水(9:1)適量，振搖使阿尼芬凈溶解，并用甲醇-水(9:1)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；精密量取供試品溶液0.5ml，置100ml量瓶中，用甲醇-水(9:1)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為對(duì)照溶液。照高效液相色譜法(中國藥典2015年版通則0512))測(cè)定，以辛烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱；以0.08mol/L的磷酸二鈉溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至4.2)為流動(dòng)相A，以甲醇為流動(dòng)相B，按下表進(jìn)行線性梯度洗脫；檢測(cè)波長為305nm，柱溫30℃。單個(gè)雜質(zhì)不得過0.2％，各雜質(zhì)的和不得過1.5％(低于0.02％的雜質(zhì)可忽略不計(jì))。

含量測(cè)定

照高效液相色譜法(中國藥典2015年版通則0512)測(cè)定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以辛烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱；以0.08mol/L的磷酸二鈉溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至5.2)-甲醇(52:48)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為305nm；柱溫30℃。理論板數(shù)按阿尼芬凈峰計(jì)算不低于2000。

測(cè)定法取本品約20mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇-水(9:1)溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另精密稱取阿尼芬凈適量，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

表1藥液配制時(shí)限的考察

注：*活性成分未完全溶解

表2：注射用阿尼芬凈加速實(shí)驗(yàn)結(jié)果考察(考察條件溫度：25℃、濕度：60％)

注：◇白色凍干塊狀物

表3：注射用阿尼芬凈長期實(shí)驗(yàn)結(jié)果考察(考察條件溫度：2～8℃)

注：◇白色凍干塊狀物

通過上表1、表2、表3可以看出，本發(fā)明制備樣品的含量、水分等指標(biāo)和現(xiàn)有技術(shù)相當(dāng)，但是有關(guān)物質(zhì)優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)，本技術(shù)縮短了配制的時(shí)限，樣品的質(zhì)量更優(yōu)。除實(shí)施例1-3外，發(fā)明內(nèi)容所列其他優(yōu)選處方也優(yōu)于對(duì)比實(shí)施例。