本發(fā)明涉及一種治療禽大腸桿菌病的中藥組合物，及其制備方法和應(yīng)用，屬于獸藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
禽大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌引起的一種急性、慢性傳染病，其臨診表現(xiàn)形式復(fù)雜多樣，包括肝周炎、心包炎、氣囊炎、腹膜炎、輸卵管炎、卵黃性腹膜炎、腸炎、臍炎、全眼球炎等，甚至還導(dǎo)致胚胎和幼雛的死亡。據(jù)報(bào)道，本病發(fā)病率為11-69％，死亡率為3.8-72.9％，致死率為40.2-90.3％，是危害養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的的一大類傳染病。
目前禽大腸桿菌病的防控有預(yù)防和治療2種途徑，預(yù)防是指接種大腸桿菌細(xì)菌疫苗，如注射大腸桿菌氫氧化鋁滅活菌苗或亞單位苗，通過刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體進(jìn)行保護(hù)。但因大腸桿菌血清型較多，并且不斷有變異株出現(xiàn)，加上大腸桿菌病發(fā)病情況復(fù)雜，疫苗的推廣在很大程度上受到限制，故疫苗預(yù)防不能有效的控制本病的發(fā)生?？股睾突瘜W(xué)合成抗菌藥在禽大腸桿菌病的控制中發(fā)揮著重要的作用，但由于細(xì)菌本身的特點(diǎn)以及藥物的不合理使用，藥物在動(dòng)物體內(nèi)的殘留對食品安全構(gòu)成威脅的同時(shí)，還導(dǎo)致了耐藥菌株不斷產(chǎn)生，治療失敗現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。而中藥作用靶點(diǎn)多，且中藥作用機(jī)理復(fù)雜，可以避免細(xì)菌通過外排泵作用對其產(chǎn)生耐藥性，故而開發(fā)中藥制劑來治療大腸桿菌病具有廣闊的發(fā)展前景。
但是在現(xiàn)有技術(shù)中，用中藥來治療雞的大腸桿菌病，仍存在一定的問題，首先，中藥劑型較為單一，大多數(shù)仍為傳統(tǒng)的散劑?！吨腥A人民共和國獸藥典》中的禽用制劑，90％以上均為散劑。與其他動(dòng)物相比，禽類消化道較短，代謝快，藥物在腸道內(nèi)停留時(shí)間短，未經(jīng)提取的中藥 含有細(xì)胞壁成分，在家禽體內(nèi)很難完全吸收利用。其次，實(shí)際應(yīng)用中，很多是沿襲古書典籍中的傳統(tǒng)方劑，通常藥味眾多，沒有從畜禽的發(fā)病特點(diǎn)來證明其有效性，缺乏現(xiàn)代藥理學(xué)研究內(nèi)容。故而研制開發(fā)一種能防治耐藥大腸桿菌病的藥物是養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的迫切需求。
專利申請201410751840.1公開了一種治療雞白痢的中藥口服液及其制備方法，由穿心蓮、苦參、功勞木、木香、地錦草、甘草組成。然而該組方藥味眾多，質(zhì)量不易控制，成品檢驗(yàn)難度大、成本高。
專利申請?zhí)?01210415516.3的專利公開了一種畜禽用清熱止痢的中獸藥顆粒，包括以下組分及其質(zhì)量份數(shù)：苦參10-20份；十大功勞5-15份；小茴香5-15份；馬尾連5-15份；木香5-15份；木槿花5-15份；毛訶子5-15份；鳳尾草5-10份；當(dāng)歸5-10份；甘草5-10份。該組方除了藥味眾多，質(zhì)量不易控制的缺點(diǎn)之外，還因其分2步提取，提取成本增加，且水提物與醇提物混合后會(huì)有大量析出，有效成分含量會(huì)降低。
專利申請201210344631.6公開了一種止痢寧的制備方法，以穿心蓮1000g、苦參250g、木香250g作為原料藥，采用超臨界萃取和微波萃取制備而成，劑型為片劑。雖然超臨界萃取和微波萃取法提取率高，但該方法生產(chǎn)成本較高，不適合大生產(chǎn)。且該組方制備的藥劑為片劑，不適合家禽的用藥需求。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種療效確切、無毒副作用、無藥物殘留、無耐藥性的治療禽大腸桿菌病的中藥組合物。
本發(fā)明的一個(gè)方面在于提供一種預(yù)防和治療禽大腸桿菌病的中藥組合物，其中，所述中藥組合物原料包括十大功勞3-6份、苦參2-5份、木香1-3份。
本發(fā)明根據(jù)中獸醫(yī)的辯證理論，禽大腸桿菌病為濕熱雍積腸道的里熱證，治療以清熱燥濕、解毒止痢為主。通過試驗(yàn)篩選出針對大腸桿菌病最佳組方：十大功勞、苦參、木香。其中十大功勞清熱燥濕、解毒止 痢，用于治療腸黃瀉痢，濕熱黃疸、咽喉腫痛、瘡毒，濕疹等疾病，在方中發(fā)揮主要作用，為君藥?？鄥⒕哂星鍩嵩餄?，殺蟲去積，利水消腫，用于治療濕熱瀉痢，黃疸，水腫等病癥，協(xié)助十大功勞發(fā)揮藥效，為臣藥。木香行氣止痛，健脾消食、和胃止瀉，可治中焦氣滯引起的脘腹脹痛、食欲不振和痢疾等里急后重等癥，對大腸桿菌病引起的精神不振、食欲下降等癥狀具有緩解作用，為佐使藥。三者組方，在治療大腸桿菌病的同時(shí)，對氣滯引起的食欲不振、羽毛松亂，生產(chǎn)性能下降具有調(diào)節(jié)作用。
作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，所述中藥組合物原料包括十大功勞3-5份、苦參2-3份、木香1-3份。
作為本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式，所述中藥組合物原料包括十大功勞5份、苦參3份、木香2份。
作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，所述中藥組合物為顆粒劑、粉劑、片劑、口服液。
作為本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式，所述中藥組合物為顆粒劑。
禽類因禽患大腸桿菌病后，往往采食量下降，故本發(fā)明將藥物制成顆粒劑，顆粒劑溶水性好，易于保存，符合現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)的用藥需求。
本發(fā)明提供的中藥組合物療效確切、無毒副作用、無藥物殘留、無耐藥性，在治療禽大腸桿菌病的同時(shí)，對大腸桿菌引起家禽的采食量下降，生長發(fā)育受阻具有緩解作用，可達(dá)到標(biāo)本兼治的目的。
本發(fā)明的一個(gè)方面在于提供一種制備所述的中藥組合物的方法，其中，所述方法包括：(1)使用85％的乙醇溶液浸泡，回流提取所述原料，提取后的原料使用85％的乙醇溶液再次回流提取，過濾兩次的提取液，合并濾液；(2)濃縮所述步驟(1)中的合并的液體至相對密度1.05-1.10，離心，上清液減壓濃縮至相對密度為1.20的浸膏，加入輔料，制備顆粒劑。
作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，所述步驟(1)中的首次提取的乙醇用量為原料的10倍，浸泡時(shí)間為1小時(shí)，提取時(shí)間為2小時(shí)，第二次提取的乙醇用量為原料的8-10倍，提取時(shí)間為2小時(shí)，所述步驟(2) 中濃縮至相對密度1.05-1.10為在50～60℃溫度下測定，減壓濃縮至相對密度為1.20為在60～70℃溫度下測定。
本發(fā)明的中藥組合物的制備方法工藝簡單，適合工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。
本發(fā)明的一個(gè)方面在于提供所述的中藥組合物在制備預(yù)防和治療禽大腸桿菌病的藥物中的應(yīng)用。
作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，當(dāng)所述的中藥組合物用于預(yù)防時(shí)，所述中藥組合物用量為0.5g/L，連用3天；當(dāng)所述的中藥組合物用于治療時(shí)，所述中藥組合物用量為1.0g/L，連用5天。
本發(fā)明的中藥組合物由純中藥組成，方中藥材均為《中華人民共和國獸藥典》二部收錄的藥材，純天然、無殘留，可以避免藥物在動(dòng)物體內(nèi)的殘留。
中藥作為靶點(diǎn)多，作用機(jī)制復(fù)雜，十大功勞小檗堿中5’-MHC可抑制細(xì)菌的外排泵機(jī)制，避免了耐藥性的產(chǎn)生，同時(shí)對大腸桿菌具有耐藥逆轉(zhuǎn)作用。
本發(fā)明的中藥組合物抗菌譜廣，使用不受血清型和區(qū)域的限制，對各種血清型的大腸桿菌均具有抗菌作用，避免了使用時(shí)選擇藥物的麻煩。
本發(fā)明的中藥組合物中含有的木香，具有行氣止痛，健胃消食的功效，對中焦氣滯引起的脘腹脹痛、食欲不振和痢疾具有治療作用，可改善禽大腸桿菌病引起的食欲不振、羽毛松亂、腹瀉、生產(chǎn)性能下降等癥狀。
本發(fā)明的中藥組合物三味藥物組方，從中醫(yī)的理論講，既消除“濕”、“熱”等病因，又可緩解氣滯引起的表癥，標(biāo)本兼治。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā) 明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
實(shí)施例1本發(fā)明所述的中藥組合物的制備例
制備例1稱取十大功勞3kg、苦參2kg、木香1kg，加入85％的乙醇溶液60L，浸泡1h，回流提取2h，過濾，收集濾液。濾渣再加85％的乙醇溶液50L，回流提取2h，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.05。離心，取上清液減壓濃縮至相對密度為1.20的浸膏，加入1.5kg的輔料(蔗糖：糊精＝1:1)，混勻，制粒，即得。
制備例2稱取十大功勞5kg、苦參3kg、木香2kg，加入85％的乙醇溶液100L，浸泡1h，回流提取2h，過濾，收集濾液。濾渣再加85％的乙醇溶液100L，回流提取2h，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.10。離心，取上清液減壓濃縮至相對密度為1.20的浸膏，加入2.5kg的輔料(蔗糖)，混勻，制粒，即得。
制備例3稱取十大功勞5kg、苦參3kg、木香3kg，加入85％的乙醇溶液110L，浸泡1h，回流提取2h，過濾，收集濾液。濾渣再加85％的乙醇溶液100L，回流提取2h，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.10。離心，取上清液減壓濃縮至相對密度為1.20的浸膏，加入2.8kg的輔料(蔗糖)，混勻，制粒，即得。
制備例4稱取十大功勞5kg、苦參5kg、木香2kg，加入85％的乙醇溶液120L，浸泡1h，回流提取2h，過濾，收集濾液。濾渣再加85％的乙醇溶液140L，回流提取2h，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.10。離心，取上清液減壓濃縮至相對密度為1.20的浸膏，加入3.0kg的輔料(蔗糖)，混勻，制粒，即得。
制備例5稱取十大功勞6kg、苦參5kg、木香3kg，加入85％的乙醇溶液140L，浸泡1h，回流提取2h，過濾，收集濾液。濾渣再加85％的乙醇溶液140L，回流提取2h，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.10。離心，取上清液減壓濃縮至相對密度為1.20的浸膏，加入3.2kg的輔料(蔗糖)，混勻，制粒，即得。
實(shí)施例2本發(fā)明所述的中藥組合物對人工感染雞大腸桿菌病的治療效果
1日齡海藍(lán)褐蛋公雛300只，各組按蛋雞正常飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)至15日齡。16日齡時(shí)，稱取雞只體重，同時(shí)挑取體重相近的健康雛雞240只，隨機(jī)分為12個(gè)組，每組20只，其中第1-5組為預(yù)防組，6-10組為治療組，第11組為攻毒對照組，第12組為空白對照組。第1-5組于分組當(dāng)天開始按0.5g/L的劑量用本發(fā)明制備例制備的藥物給藥進(jìn)行預(yù)防，連續(xù)3天。19日齡時(shí)，除空白對照組外，第1-11組用濃度為1.0×109CUF/ml的大腸桿菌C83851進(jìn)行攻毒，攻毒方式為胸肌注射，劑量為0.2ml/只。第12組不攻毒，胸肌注射0.2ml營養(yǎng)肉湯作為對照。攻毒后4h，逐只觀察雞群，統(tǒng)計(jì)各組發(fā)病雞只數(shù)。第6-10組按1.0g/L的劑量用本發(fā)明制備例制備的藥物進(jìn)行給藥治療，連續(xù)給藥5天。給藥及處理詳見表1。
表1 試驗(yàn)具體分組及處理
給藥后每天觀察雞群，記錄各組雞群的發(fā)病和死亡情況，觀察至攻毒后第14天。試驗(yàn)結(jié)束，稱取各組雞只體重，并處死全部動(dòng)物，進(jìn)行系統(tǒng)解剖，觀察內(nèi)臟器官病變并取心、肝涂麥康凱瓊脂平板，37℃溫箱培養(yǎng)，觀察菌落的生長情況。試驗(yàn)期間死亡雞只及時(shí)解剖，觀察內(nèi)臟器官病變并涂板觀察細(xì)菌生長情況。試驗(yàn)結(jié)束后，按以下公式統(tǒng)計(jì)各組雞群的發(fā)病率、死亡率、治愈率和試驗(yàn)期間的增重率。
發(fā)病率(％)＝各組發(fā)病動(dòng)物數(shù)(只)/各組試驗(yàn)動(dòng)物數(shù)(只)×100％
死亡率(％)＝各組死亡動(dòng)物數(shù)(只)/各組試驗(yàn)動(dòng)物數(shù)(只)×100％
治愈率(％)＝各組治愈動(dòng)物數(shù)(只)/各組試驗(yàn)動(dòng)物數(shù)(只)×100％
試驗(yàn)結(jié)果：攻毒后4h，攻毒對照組和藥物治療組雞群發(fā)病率達(dá)100％，5個(gè)預(yù)防組由于提前3天給藥，發(fā)病率有不同程度的降低。攻毒后藥物治療組在攻毒后第4天，雞群精神逐漸好轉(zhuǎn)，與攻毒對照組相比，未死亡雞只發(fā)病癥狀明顯減輕。攻毒后第6天，雞只發(fā)病癥狀明顯減輕，僅有個(gè)別雞只有精神沉郁等發(fā)病癥狀。攻毒后第8天觀察，病雞臨床癥狀完全消失。攻毒對照組在攻毒后3天發(fā)病癥狀明顯加重，發(fā)病嚴(yán)重雞只高度沉郁，呆立，不食，臥地不起，甚至死亡。至攻毒第8天觀察時(shí)癥狀開始減輕，至第13天觀察不到明顯的發(fā)病癥狀。
試驗(yàn)期間雞群的發(fā)病率、死亡率和給藥組的保護(hù)率和治愈率統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表2、表3，雞群的各時(shí)期的體重、相對增重率統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表4。
表2 預(yù)防各組的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)
注：上表中，試驗(yàn)各組與攻毒對照組相比，“*”表示差異顯著(0.01<P≤0.05)，“**”表示差異極顯著(P≤0.01)。下表同。
表3治療各組的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)
表4 復(fù)方十大功勞顆粒對病雞增重的影響
從表2、表3和表4統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，本發(fā)明的中藥組合物按0.5g/L的劑量進(jìn)行飲水給藥，可以降低人工感染雞大腸桿菌的發(fā)病率和死亡率，對雞大腸桿菌的保護(hù)率在70-85％。攻毒發(fā)病后，使用本發(fā)明制備例1-5制備的藥物進(jìn)行治療，治療各組雞群的死亡率有不同程度的降低，各組的治愈率為65-80％。同時(shí)，給藥各組試驗(yàn)期間增重高于攻毒對照組。說明本發(fā)明的中藥組合物可以降低雞大腸桿菌病引起的直接損失，同時(shí)對腸桿菌病引起的雞只生長發(fā)育受阻具有改善作用。
實(shí)施例3本發(fā)明所述的中藥組合物對自然感染雞大腸桿菌病的治療效果
試驗(yàn)方法：洛陽市偃師某養(yǎng)殖場，AA肉雞7000羽，于16日齡時(shí)出現(xiàn)發(fā)病癥狀，經(jīng)解剖學(xué)觀察、病原分離確診為大腸桿菌病，將發(fā)病雞群隨機(jī)分為6個(gè)組，第1-5組每組約1200-1300只，第6組100只，不同組之間用網(wǎng)隔開。從20日齡開始，第1-5組按1.0g/L的劑量在飲水加入本發(fā)明制備例1-5制備的藥物，連續(xù)5天。試驗(yàn)動(dòng)物分組與處理詳見表5。
表5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理及分組
給藥后，每天早上9:00觀察雞群的精神狀態(tài)(有無羽毛松亂、翅膀下垂、閉眼縮頸)、行為活動(dòng)(給料后搶食、飲水)、對刺激的反應(yīng)性(雞群驅(qū)趕后的表現(xiàn))、糞便狀態(tài)，記錄試驗(yàn)雞群的臨床癥狀變化和死亡情況，對死亡雞只及時(shí)進(jìn)行病理剖檢，觀察內(nèi)臟器官病理變化，并取肝臟、心臟等組織接種麥康凱瓊脂，觀察細(xì)菌生長情況，連續(xù)觀察至給藥結(jié)束14天。試驗(yàn)結(jié)束，統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)期間各組的發(fā)病率、死亡率和試驗(yàn)期間增重率。
試驗(yàn)結(jié)果：試驗(yàn)期間，給藥各組雞群經(jīng)給藥治療后，從第2天開始，采食量即出現(xiàn)小幅度增加，從第3天起開始雞群采食量明顯增加，雞群精神明顯好轉(zhuǎn)，精神不振、羽毛松亂、閉眼縮頸發(fā)病雞只以及死亡雞只數(shù)逐日減少，給藥5天后除個(gè)別雞只外大群雞只精神恢復(fù)正常，給料后迅速搶食，不再有雞只死亡。各組發(fā)病率、死亡率、治愈率以及增重率結(jié)果詳見表6、7。
表6 各組雞群的發(fā)病、死亡、治愈率統(tǒng)計(jì)結(jié)果
表7 各組雞群的增重情況統(tǒng)計(jì)結(jié)果
從表4、5統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，本發(fā)明的中藥組合物按1.0g/L的劑量進(jìn)行飲水給藥，對自然感染的雞大腸桿菌病具有治療作用，可極顯著降低雞群感染大腸桿菌病的發(fā)病率和死亡率(P≤0.01)，在一定程度上提高雞群對大腸桿菌病的抵抗力，對雞大腸桿菌的治愈率在62.22-81.48％。同時(shí)可提高雞群在試驗(yàn)期間的增重率，說明本發(fā)明制備例制備的中藥組合物可治療雞大腸桿菌病，同時(shí)對大腸桿菌引起的生長發(fā)育受阻具有改善作用。
實(shí)施例5本發(fā)明所述的中藥組合物對自然感染雛鴨大腸桿菌病的治療效果
試驗(yàn)藥物：本發(fā)明實(shí)施例2制備的中藥組合物；
對照藥物：按申請?zhí)?01210415516.3的專利中實(shí)施例3的方法制備中藥顆粒。
試驗(yàn)方法：山東臨沂地區(qū)番鴨3000只，3周齡時(shí)突然發(fā)病，零星死亡。解剖死鴨可見肝周炎、心包炎、氣囊炎、腹膜炎等癥狀，接種麥康凱瓊脂、伊紅美蘭瓊脂等培養(yǎng)基可見典型的大腸桿菌菌落特征。確診后將鴨群2975只雛鴨分為3組，第1、2組為試驗(yàn)組，第1組1415只，用本發(fā)明制備例2制備的藥物按1.0g/L的劑量進(jìn)行飲水給藥，連用5天。第2組1460只按1.0g/L的劑量用申請?zhí)枮?01210415516.3的專利實(shí)施例3制備的藥物進(jìn)行飲水給藥，連用5天。第3組為感染對照組，隨機(jī)挑取100只雛鴨，感染對照組不給藥，正常飼養(yǎng)管理。每天觀察雞群，記錄死亡動(dòng)物數(shù)，死亡動(dòng)物及時(shí)解剖，觀察內(nèi)臟器官病變，連續(xù)觀察14天。
試驗(yàn)結(jié)果：治療組經(jīng)投藥治療，從第3天開始第1、2組鴨群精神逐漸恢復(fù)，釆食、飲水量增加，至用藥結(jié)束，鴨群精神狀態(tài)、行為活動(dòng)全部恢復(fù)正常。整個(gè)試驗(yàn)期間第1組鴨群共死亡16只，死亡率1.13％，第2組鴨群死亡18只，死亡率1.23％。感染對照組100只雛鴨，未經(jīng)藥物治療，3天后死亡數(shù)目增多，至第8天精神逐漸恢復(fù)，死亡減少，至第11天死亡停止。整個(gè)試驗(yàn)期間死亡23只，死亡率23％。與感染對照組相比，第1、2組死亡率顯著降低，第1組與第2組相比，死亡率無顯著差異。說明本發(fā)明實(shí)施例制備的中藥組合物對鴨大腸桿菌具有治療作用。
以上試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明所述的中藥組合物可治療雞、鴨大腸桿菌病，同時(shí)對大腸桿菌病引起的生長發(fā)育受阻具有改善作用。
以上全面描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，但是可對它們進(jìn)行各種替代和修改。因此，不應(yīng)參照以上描述來決定本發(fā)明的范圍，而是應(yīng)參照所附權(quán)利要求書及其全部等同物來決定本發(fā)明的范圍。任何特征，(不論是否為優(yōu)選)均可與任何其他特征(不論是否為優(yōu)選)相結(jié)合。本發(fā)明的權(quán)利要求書不應(yīng)被理解為具有方法+功能的限制，除非在某一權(quán)利要求中通過術(shù)語“…的方法”明確地列舉出此類限制。