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珍珠提取物在制備抑制早衰素生成的藥物、保健品和化妝品中的應(yīng)用的制作方法

文檔序號:12687352閱讀:1055來源:國知局

本發(fā)明涉及一種珍珠提取物的應(yīng)用。



背景技術(shù):

抗衰老是美容護(hù)膚最重要的課題,在國內(nèi)外研究衰老過程中發(fā)現(xiàn),與衰老肌膚相關(guān)的明顯病理包括哈坎森‐吉爾福特早衰綜合癥(HGPS)。這種罕見疾病以加速衰老和過早死亡為主要特征。出現(xiàn)這種疾病的細(xì)胞內(nèi)核纖層蛋白A通常都是以碎片狀蛋白形式存在。這種碎片狀的核纖蛋白A,被稱為早衰素。2006年,有研究學(xué)者發(fā)現(xiàn)在正常的衰老過程中,即使沒有任何病理或基因突變,早衰素也會(huì)在肌膚細(xì)胞中蓄積。并且研究證明,老年人群的細(xì)胞核中存在與早衰綜合癥病人相似的后天缺陷。更重要的是,抑制引起哈坎森‐吉爾福特早衰綜合癥(HGPS)的核纖層蛋白A的斷裂位點(diǎn)這一行為將能夠逆轉(zhuǎn)衰老引起的核缺陷。繼而證明,核纖層蛋白A和早衰素的正常衰老過程中的關(guān)鍵作用。抑制早衰素形成勢必為抗衰老研究領(lǐng)域打開一個(gè)新領(lǐng)域。

目前,珍珠粉的應(yīng)用過程中,曾相繼遇到顆粒大小安全隱患、流動(dòng)性差、不溶水以及功效成分難以釋放等諸多問題,這些直接影響珍珠粉的應(yīng)用領(lǐng)域。為能解決以上問題,業(yè)內(nèi)已經(jīng)向水溶性珍珠粉以及珍珠水解液發(fā)展,然而,在此過程中,我們只是簡單的進(jìn)行原有成分的復(fù)配或者粗放型的水解,未能研究其中各個(gè)成分的功效,很少進(jìn)行精細(xì)分離純化。

中國發(fā)明專利(申請?zhí)枺?1139157.X申請日:2001‐12‐19)公開了一種珍珠粉的生物酶解制備方法,其關(guān)鍵是以乳酸水溶液為溶劑,將珍珠溶解,并調(diào)整溶液的pH值至近中性再用酸回調(diào)至偏酸性,再放入適量生物活性酶催化分解其蛋白質(zhì),得到酶解珍珠膠液,再采用噴霧干燥將酶解珍珠膠液快速干燥,固化造粒,制得超細(xì)酶解珍珠粉。所制備的珍珠粉保留了珍珠中的多種氨基酸、微量元素等有效成份,并使珍珠中的碳酸鈣轉(zhuǎn)化為人體易吸收的活性鈣,胃酸不溶解的角質(zhì)蛋白酶解成易吸收的游離氨基酸。

中國發(fā)明專利(申請?zhí)枺?00710141569.X申請日:2007‐08‐07)公開了一種制備珍珠活性肽的方法,它從新活的珍珠貝里取出珍珠粒,水洗干凈,將珍珠粒與去離子水混合后,用磷酸鹽緩沖溶液將混合液的PH值調(diào)至中性偏酸,然后用沙雷肽酶與珍珠粒進(jìn)行酶水解反應(yīng);用濾網(wǎng)過濾分離得珍珠粒和澄清液,然后將反應(yīng)液水煮滅酶;再將所得的溶液經(jīng)噴霧干燥即得珍珠活性肽。

中國發(fā)明專利(申請?zhí)枺?00910114409.5申請日:2009‐09‐18)公開了珍珠水解液的制備方法,其步驟如下:1)取珍珠粉置于鹽酸水溶液中,攪拌,直至反應(yīng)完全,用氨水調(diào)節(jié)該混合液的pH值至中性,離心,得沉淀A;2)沉淀A用純凈水溶解,再以氨水調(diào)節(jié)其pH值為 7.5~8.5,離心,得沉淀B;3)沉淀B用純凈水溶解,加入酶進(jìn)行酶解,酶解液離心,得上清液和沉淀C;所述的酶為蝸牛蛋白酶和木瓜蛋白酶的混合物,加入量為沉淀B重量的0.3~1.05%;4)將沉淀C用純凈水溶解加酶進(jìn)行二次酶解,離心,收集上清液;酶為胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的混合物,加入量為沉淀B重量的0.2~0.45%;5)合并兩次上清液,煮沸,用孔徑為1~3nm的納濾膜過濾,即得。

申請人申請的中國發(fā)明專利(申請?zhí)枺?015100203725申請日:2015‐01‐15)公開了一種珍珠蛋白的制備方法及該方法制備得到的水溶性珍珠蛋白和酸溶性珍珠蛋白,該方法包括以下的步驟:

1)將珍珠研磨成納米級珍珠粉;

2)用去離子水浴納米珍珠粉超高壓均質(zhì),40~80℃下均質(zhì)0.2~1h,低溫0~8℃離心獲取水溶性珍珠提取物a和沉淀,并將沉淀用乙醇溶液清洗上邊,隨后進(jìn)行下一步操作;

3)以上獲得的沉淀用弱酸在30~50℃溫度下溶解,低速攪拌80‐120rpm下反應(yīng)0.5~3h;低溫0~8℃離心取上清液,為酸溶性珍珠提取物b;

4)將水溶性珍珠提取物a和酸溶性珍珠提取物b分別進(jìn)行脫鹽;

5)脫鹽之后將水溶性珍珠提取物a和酸溶性珍珠提取物b凍干,分別獲得水溶性珍珠蛋白和酸溶性珍珠蛋白。

該方法利用納米級珍珠粉,進(jìn)行水解和酸解然后進(jìn)行脫鹽,分別獲得水溶性珍珠蛋白和酸溶性珍珠蛋白,為珍珠護(hù)膚品和保健品提供原料。其中,酸溶性珍珠蛋白抗氧化能力強(qiáng),并能促進(jìn)成纖維細(xì)胞的生長,同時(shí)有利于膠原蛋白的分泌,有利于傷口的愈合,在化妝品修護(hù)領(lǐng)域具有強(qiáng)勁的潛力。而珍珠水溶性珍珠蛋白可以在美白、補(bǔ)水等方面獲得良好的效果。

申請人申請的中國發(fā)明專利(申請?zhí)枺?015100203725申請日:2015‐01‐15)公開了一種從珍珠中分離制備珍珠可溶食用鈣和珍珠復(fù)合美白因子溶液的方法,該方法包括以下的步驟:

1)將珍珠粉碎至納米級,然后加入5~10份的去離子水,通過壓力0.5~20MPa和溫度30~60℃的協(xié)同,將珍珠粉進(jìn)行微乳化;

2)然后將珍珠粉乳液進(jìn)行電滲析,電滲析選擇壓力為30~40V,流速60~80L/h,濃水池裝去離子水,淡水池裝珍珠粉乳液,去離子水與珍珠粉乳液的體積比為1:15~1:2,進(jìn)行循環(huán)脫鈣1~3h,分離獲得含鈣鹽溶液和珍珠蛋白溶液;

3)鈣獲得含鈣鹽溶液作為可溶食用鈣或可溶食用鈣原料;

4)將獲得的珍珠蛋白溶液中加入5~20倍pH值6.5~7.5的磷酸鹽緩沖液,勻質(zhì);

5)首先進(jìn)入100~120℃、0.15~0.2MPa環(huán)境下預(yù)處理20~60分鐘處理,然后將混合 液置于反應(yīng)鍋中,加入體系質(zhì)量0.5%~2%的中性蛋白酶,在40~70℃溫度中進(jìn)行酶催化反應(yīng)4~8小時(shí),反應(yīng)結(jié)束后在沸水浴滅酶5~15min,離心,去上清液,即為珍珠復(fù)合美白因子溶液。

該方法將珍珠粉中功效成分進(jìn)行分離,并將機(jī)械化學(xué)原理應(yīng)用于制備方法中。機(jī)械方法能在不破壞珍珠粉成分活性的基礎(chǔ)下,進(jìn)行珍珠粉重要成分的分離提取,珍珠粉中蛋白的獲得,并純化后酶解,能夠更為有效發(fā)揮珍珠粉美白的作用。

上述的各個(gè)專利中珍珠提取物主要在美白、補(bǔ)水等方面得到了應(yīng)用,珍珠素來就有美容養(yǎng)顏,永葆青春的好口碑,千百年來得以頌揚(yáng)。然而珍珠抗衰的原理研究并未得到有效的數(shù)據(jù)支撐,珍珠抗衰老研究亟待發(fā)展。



技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:

本發(fā)明的第一個(gè)目的提供了珍珠提取物在制備抑制早衰素生成的藥物中的應(yīng)用。

作為優(yōu)選,所述的珍珠提取物為水溶性珍珠蛋白、酸溶性珍珠蛋白、超高壓珍珠蛋白和超臨界珍珠蛋白中的一種或多種混合。

作為再優(yōu)選,所述的水溶性珍珠蛋白的主要分子量分布為小于15kd;酸溶性珍珠蛋白的主要分子量分布為14kd~50kd。

本發(fā)明的第二個(gè)目的提供珍珠提取物在制備抑制早衰素生成的保健品中的應(yīng)用。

作為優(yōu)選,所述的珍珠提取物為水溶性珍珠蛋白、酸溶性珍珠蛋白、超高壓珍珠蛋白和超臨界珍珠蛋白中的一種或多種混合。

作為再優(yōu)選,所述的水溶性珍珠蛋白的主要分子量分布為小于15kd;酸溶性珍珠蛋白的主要分子量分布為14kd~50kd。

本發(fā)明的第三個(gè)目的提供珍珠提取物在制備抑制早衰素生成的化妝品中的應(yīng)用。

作為優(yōu)選,所述的珍珠提取物為水溶性珍珠蛋白、酸溶性珍珠蛋白、超高壓珍珠蛋白和超臨界珍珠蛋白中的一種或多種混合。

作為再優(yōu)選,所述的水溶性珍珠蛋白的主要分子量分布為小于15kd;酸溶性珍珠蛋白的主要分子量分布為14kd~50kd。

本發(fā)明通過利用多種提取方式獲取珍珠有效成分,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,珍珠提取物具備明顯的抑制成纖維細(xì)胞合成早衰素的能力,相比對照降低近40%。珍珠提取物的提取與抑制早衰素合成的發(fā)現(xiàn),為藥品、化妝品和保健食品提供了一類有效并有據(jù)的活性添加成分。

附圖說明

圖1為活性成分“珍珠提取物”在人類正常真皮成纖維母細(xì)胞模型中合成早衰素的功效;**:表示與“空白”有顯著不同。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

珍珠提取物提取工藝步驟:選取歐詩漫納米珍珠粉為原料,以弱酸溶液為提取液,在30~50條件下進(jìn)行真空溶解,低速攪拌80‐120rpm下反應(yīng)0.5~3h小時(shí),8000‐12000rpm高速0~8℃低溫離心過濾,取上清液,并將上清液灌裝于透析袋除鹽:2~10℃環(huán)境下用3000~5000Da分子量的透析袋除鹽3~5天,1體積的樣品對應(yīng)10~20體積的蒸餾水,每天換水1~2次。后凍干成粉,即為珍珠提取物。

實(shí)施例2

珍珠提取物提取工藝步驟:

1)將珍珠研磨成納米級珍珠粉(10~100nm);

2)用10倍質(zhì)量的去離子水浴納米珍珠粉超高壓均質(zhì),300MPa、60℃下均質(zhì)0.5h。低溫4℃離心獲取超高壓珍珠提取物和沉淀。并將沉淀用乙醇溶液清洗3遍,隨后進(jìn)行下一步操作;

3)以上獲得的沉淀用超臨界設(shè)備提取珍珠活性成分,萃取壓力為25MPa,CO2流量25KG/h,萃取時(shí)間60min,為超臨界珍珠提取物;

4)超高壓珍珠提取物和超臨界珍珠提取物

分別真空冷凍凍干收集,獲得超高壓珍珠蛋白和超臨界珍珠蛋白。

試驗(yàn)例

一、對實(shí)施例1制備的珍珠提取物具體實(shí)驗(yàn)如下:

I.研究目標(biāo)

研究目標(biāo)是評估活性成分“珍珠提取物”在人類正常真皮成纖維母細(xì)胞模型中合成早衰素的功效。

II.使用材料和方法

II.1‐受測樣品

活性成分“珍珠提取物”凍干粉用無菌純水稀釋20倍為初始樣品溶液,放在+4℃溫度條件下直到研究正式開始。

II.2–研究模型

通過培養(yǎng)68歲人類細(xì)胞,獲得人類正常真皮成纖維母細(xì)胞的融合單細(xì)胞。

II.3‐參考樣品

由于胰島素能夠調(diào)控影響早衰素合成的酶的活性,因此,我們推斷在我們的評估模型中,胰島素同樣能夠調(diào)控早衰素的合成。

在這次的研究中,10納摩爾的胰島素被用作為實(shí)驗(yàn)參考樣品。

II.4‐培養(yǎng)方法

在37℃的溫度條件下培養(yǎng)融合單細(xì)胞96小時(shí),培養(yǎng)基中分別不含受測樣品(空白)或加入?yún)⒖紭悠?,或按照以下添加比例不斷地增加受測樣品的添加濃度:

珍珠提取物:0.1;0.5和1%(體積/體積)

準(zhǔn)備樣品:珍珠提取物被直接加入到培養(yǎng)基中。

II.5‐評估方法

II.5.1早衰素檢測

培養(yǎng)結(jié)束后,在細(xì)胞濾液中利用EPHYSCIENCE團(tuán)隊(duì)開發(fā)的特殊的酶聯(lián)免疫吸附測定法量化早衰素。

II.5.2蛋白檢測

培養(yǎng)結(jié)束后,在細(xì)胞濾液中利用分光比色法(Bradford法)量化蛋白。

II.6–統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果將以每納克(μg)蛋白中所含多少皮克(pg)早衰素的方式表達(dá)(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)。

利用Student t分析法評估“空白”與“參考樣品”間的顯著性水平(*:p<0.05)。

利用Student t分析法評估“空白”與“受測樣品”間的顯著性水平(**:p<0.01)。

III.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

III.1‐珍珠提取物

III.2‐參考樣品

在特定的實(shí)驗(yàn)條件下,胰島素被用作為參考樣品。它不降低成纖維母細(xì)胞合成早衰素的能力。

IV.結(jié)論

在特定的實(shí)驗(yàn)條件下:

活性成分“珍珠提取物”能夠顯著地降低成纖維母細(xì)胞合成早衰素的能力。

珍珠提取物0.1%,體積/體積→‐24.6%(p<0.01)

珍珠提取物0.5%,體積/體積→‐22.9%(p>0.05)

珍珠提取物1%,體積/體積→‐38.6%(p<0.01)

成纖維母細(xì)胞合成早衰素

珍珠提取物

**:表示與“空白”有顯著不同(p<0.01)

媒介物和參考樣品

二、對實(shí)施2制備的超高壓珍珠蛋白和超臨界珍珠蛋白以及中國發(fā)明專利(申請?zhí)枺?015100203725申請日:2015‐01‐15)公開的一種珍珠蛋白的制備方法及該方法制備得到的水溶性珍珠蛋白和酸溶性珍珠蛋白進(jìn)行相同的試驗(yàn)測試,也能夠顯著地降低成纖維母細(xì)胞合成早衰素的能力。

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