本發(fā)明涉及一種用于治療青光眼的中藥組合物，是由膠原蛋白和通經(jīng)、去翳、降壓類中 藥組成的，屬于中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
青光眼是眼科一種常見病，危害視力功能極大，也是最常見的致盲眼病之一，由于種種 原因會給患者帶來失明的痛苦。青光眼常見眼內(nèi)壓增高且伴有角膜周圍充血，瞳孔散大、視 力急劇減退、頭痛、惡心嘔吐等癥狀。青光眼的眼壓超過了眼球內(nèi)組織，尤其是視網(wǎng)膜所能 承受的限度時，則會帶來眼睛功能性的病變，給廣大患者帶來極大的痛苦。中藥在治療這些 疾病時，在同等條件下，有其獨到之處。中藥性味理論高度概括了藥物功效的一般規(guī)律，成 功地指導(dǎo)了各科臨床實踐組方用藥，起到了一定的治療效果。
膠原蛋白是由動物的皮、骨或跟腱經(jīng)水解或酶解方式制得的含肽類物質(zhì)，是組成動物結(jié) 締組織重要的蛋白質(zhì)，結(jié)締組織除了含60?70%的水分外，膠原蛋白占了約20?30%，是人 體重要的細胞外基質(zhì)成分，具有優(yōu)良的成纖性能、止血性能、細胞間相互作用性能、促進傷 口愈合與組織修復(fù)等良好的生物學(xué)特性；對細胞、組織乃至器官行使正常功能并對外傷修復(fù) 有重大影響，可引導(dǎo)上皮細胞遷入缺損區(qū)，在細胞遷移時起潤滑作用；是新生細胞合成利用 的基質(zhì)，同時有粘連細胞作用，增強新生細胞粘附作用；充填新生細胞之間的膠原能減少生 長細胞接觸抑制。作為理想的組織工程生物材料，膠原蛋白一直應(yīng)用于化妝品和止血類醫(yī)療 器械中，具有廣闊的發(fā)展前景。
在膠原蛋白滴眼液的專利申請中（公幵號CN1927391A)中，其所應(yīng)用的膠原蛋白未明確 有效成分群，在制備膠原蛋白時工藝參數(shù)不明確，導(dǎo)致了所制得的的有效部位不明確；該專 利申請中釆用了胃蛋白酶或木瓜蛋白酶進行酶解，由于胃蛋白酶的酶解專屬性限制，其不能 酶解膠原中的脯氨酸肽鍵，即是說胃蛋白酶無法將膠原酶解成膠原蛋白，故該專利申請中所 述的膠原蛋白并非實際意義上的膠原蛋白（相對分子量不高于100kD)，故該專利申請不具有 可行性；在復(fù)合膠原蛋白滴眼液的專利申請中（公開號CN1927392A)中加入了化藥抗生素來 和膠原蛋白聯(lián)合應(yīng)用，但其僅限于化學(xué)藥方面的應(yīng)用，對于成分復(fù)雜的中藥不具有可復(fù)制性， 且該專利同樣未明確膠原蛋白的有效成分群，混淆了膠原和膠原蛋白的概念?？梢姮F(xiàn)有技術(shù) 并沒有真正解決膠原蛋白或膠原在眼科用藥中的技術(shù)問題，尤其是將膠原蛋白或膠原與中藥 相結(jié)合的情況。
鑒于中藥在眼用制劑的中廣泛應(yīng)用，現(xiàn)在迫切需要將膠原蛋白與中藥有效成分進行結(jié)合 應(yīng)用，同時，需要通過控制其分子量范圍等方法來明確膠原蛋白的有效部位群，以保證應(yīng)用 時的安全性和有效性。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的第一目的在于提供一種治療青光眼的中藥組合物，該中藥組合物是由膠原蛋白 和通經(jīng)、去翳、降壓類中藥組成的。
第二目的是提供該中藥組合物在治療各種先天性青光眼、原發(fā)性青光眼、繼發(fā)性青光眼 和混合型青光眼方面的應(yīng)用。
具體的說：
本發(fā)明提供了一種治療青光眼的中藥組合物，該中藥組合物有效成分的原料藥為膠原蛋 白和以下眼科常用通經(jīng)、去翳、降壓類中藥中的至少一種：丁公藤、檳榔、銀杏葉、丹參、 燈盞細辛、防己、葛根、粉葛、羚羊角、人工牛黃、石決明、草決明、山茱萸、夏枯草、訶 子、知母、柴胡、枸杞子、菊花。
上述所選通經(jīng)、去翳、降壓類中藥為臨床治療各類青光眼的常用藥材，具有堅實的臨床 應(yīng)用基礎(chǔ)。另外，上述各味藥材在制備本發(fā)明的藥物過程中，可以原粉入藥，也可以根據(jù)有 效成分獨有的理化性質(zhì)選擇適宜的方法進行提取，精制，得到相應(yīng)的提取物進行投料。
本發(fā)明中藥組合物有效成分中膠原蛋白與中藥成分的重量配比為1: 0.1?1: 20,更優(yōu) 選的重量配比為1: 0.3?1: 10。其中中藥有效成分系指上述清熱消炎類中藥材經(jīng)提取后所 得到的中藥提取物和（或）藥材原粉，與膠原蛋白的重量比例是指最終產(chǎn)品中二者固形物重 量之比。
而且，本發(fā)明所得中藥組合物中所述膠原蛋白可以是膠原蛋白或膠原單獨投料，還可以 是膠原蛋白與膠原的混合投料，主要在于二者性質(zhì)相似，只是分子量存在一定差異。膠原是 指是由三條肽鏈擰成的螺旋形纖維狀蛋白質(zhì)，是組成動物結(jié)締組織重要的蛋白質(zhì)，其主要從 豬皮、牛皮、牛跟腱、豬跟腱、豬骨、牛骨等原料中簡單水解得到，酶解時一般釆用胃蛋白 酶、木瓜蛋白酶或無花果酶等單酶酶解，多在低溫下（10°C以下）進行，防止蛋白變性，不 破壞獨特的右手螺旋結(jié)構(gòu)主體，僅切除非膠原性尾肽部位，其相對分子量為250?300kD，具 有完整三螺旋結(jié)構(gòu)；膠原進一步水解得明膠，其相對分子量為100?200kD，三螺旋結(jié)構(gòu)己被 破壞；膠原蛋白為明膠的更進一步酶解產(chǎn)物，其相對分子量在100kD以下，其中絕大部分以 膠原蛋白寡肽的形式存在，相對分子量在40kD以下。膠原蛋白還可以直接從明膠、阿膠、新 阿膠等原料中酶解得到。膠原和明膠的相對分子量大，水溶性差，粘稠度高，機械強度大， 輔助藥物成型性好，還可以作為眼用制劑藥物的載體，使藥物在結(jié)膜囊內(nèi)逐漸釋放，從而在 短時間內(nèi)使眼內(nèi)藥物達到較高濃度，并保持較長時間，減少藥物的全身毒性，而且在膠原酶 的作用下，可酶解成寡肽或氨基酸參與組織生長；而膠原蛋白的相對分子量較小，其在眼部 應(yīng)用時具有較好的修復(fù)角膜損傷、促進傷口愈合、增加眼部營養(yǎng)、緩解視疲勞等多種功效。
本發(fā)明所用膠原蛋白是由明膠、阿膠、新阿膠、豬皮、牛皮、豬骨、牛骨、豬跟腱或牛跟腱經(jīng)酶解法制得，其相對分子量不高于100kD。
本發(fā)明所用膠原蛋白主要制備方法為：取膠原原料，清水或鹽溶液洗凈，并除去脂肪、殘肉等雜質(zhì)，加酸或堿調(diào)節(jié)適當pH值，低溫（0?10°C)酶解24?72小時，離心，取上清液，調(diào)節(jié)適當PH值，加入所需蛋白酶進行充分酶解，取上清液，加中性鹽鹽析，透析除雜，進一步純化，即得。
更確切地說，本發(fā)明所用膠原蛋白的主要原料來源于明膠、阿膠、新阿膠、豬皮、牛皮、 豬骨、牛骨、豬跟腱或牛跟中的任意一種或幾種，經(jīng)過徹底酶解制得，其相對分子量優(yōu)選為 10kD以下，進一步優(yōu)選為5kD，所述酶解方法可以是胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、中性蛋白 酶、堿性蛋白酶、菠蘿蛋白酶、無花果蛋白酶或木瓜蛋白酶中任意一種的單酶酶解，也可以 是胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、菠蘿蛋白酶、無花果蛋白酶或木 瓜蛋白酶中任意幾種酶的組合酶解，還可以是完全仿照人體消化吸收過程的仿生酶解法（即 首先釆用模擬人體胃部消化過程及理化參數(shù)的胃蛋白酶酶解法，然后進行模擬人體腸道消化 吸收過程及理化參數(shù)的胰（蛋白）酶酶解法，從而得到可供人體直接吸收的低分子寡肽物質(zhì)）。 本發(fā)明所用膠原是由豬皮、牛皮、豬骨、牛骨、豬跟腱或牛跟腱經(jīng)酶解制得，其相對分 子量為250?300kD。
本發(fā)明所用膠原主要采用如下制備方法制得：
取膠原原料，清水或鹽溶液洗凈，并除去脂肪、殘肉等雜質(zhì)，加酸或堿調(diào)節(jié)適當pH值， 低溫（0?1(TC)酶解24?72小時，離心，取上清液，加中性鹽鹽析，透析除雜，進一步純 化，即得。
更確切地講，本發(fā)明所用膠原的主要原料來源于豬皮、牛皮、豬骨、牛骨、豬跟腱或牛 跟腱中的任意一種或幾種，經(jīng)過適當酶解法制得，其相對分子量為250?300kD，所述酶解方 法可以是胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、菠蘿蛋白酶、無花果蛋白 酶或木瓜蛋白酶中任意一種的單酶酶解，也可以是胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶、 堿性蛋白酶、菠蘿蛋白酶、無花果蛋白酶或木瓜蛋白酶中任意幾種酶的組合酶解。
上述膠原蛋白或膠原的制備工藝中，所用的酸為酒石酸、蘋果酸、乙酸、檸檬酸、甘氨 酸、或鹽酸中的任意一種或幾種，所用的堿為氨水、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉或碳酸氫 鈉中的任意一種或幾種。
上述膠原蛋白或膠原的制備工藝中，鹽析所用的鹽可以是硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉或磷酸鈉中的任意一種或幾種。
本發(fā)明中藥組合物主要釆用如下制備方法制得：
a、取所選用的中藥材，粉碎，釆用水提/醇提/先醇提再水提/先水提再醇提/留粉等方法 制得藥物提取物；
b、取制得的膠原蛋白溶液或細粉，加入上述藥物提取物，加入適當眼科藥用輔料，按照 藥劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制得所需劑型，如滴眼液、眼用凝膠、眼用即型凝膠、眼膏、眼貼膜、眼用 散劑及膜劑等眼用制劑。
人角膜主要是由膠原蛋白組成的，將膠原蛋白與通經(jīng)、去翳、降壓類中藥配合使用，一 方面可使膠原蛋白直接發(fā)揮組織修復(fù)作用，改善角膜充血等癥狀；另一方面，通經(jīng)、去翳、 降壓類中藥的活血、降壓作用從根本上對眼內(nèi)壓高、眼充血等癥狀進行治療。兩者配合使用， 能起到更好的治療效果。
另外，為提高制劑療效，更好的發(fā)揮中藥和膠原蛋白的結(jié)合作用，本發(fā)明中藥組合物還 可以加入除所述通經(jīng)、去翳、降壓類中藥以外的藥物，如加入具有活血作用的水蛭提取物、 土鱉蟲提取物，加入具有殺菌作用的鹽酸小檗堿，加入具有增加黏性、延長釋藥時間作用的 加透明質(zhì)酸鈉，加入具有高滲作用的蜂蜜等。
本發(fā)明中的中藥組合物主要用于在制備治療各種青光眼藥物中的應(yīng)用，更確切地講，是 在制備治療各種先天性青光眼、原發(fā)性青光眼、繼發(fā)性青光眼和混合型青光眼等藥物中的應(yīng) 用。
有益效果
為進一步驗證本發(fā)明產(chǎn)物的治療作用，發(fā)明人進行了如下實驗。
試驗一、本發(fā)明滴眼液對家兔實驗性高眼壓的影響
試驗材料
Schiotz眼壓汁，蘇州醫(yī)療器械廠生產(chǎn)。
1%甲基纖維素：取lg甲基纖維素（山東聊城阿華制藥有限公司生產(chǎn)）加入煮沸的注射 用林格氏液30ml中，冷卻后再加入注射用林格氏液70ml，高壓消毒滅菌備用。
丁公藤滴眼液：取丁公藤2kg，粗粉碎，加8倍量水煎煮兩次，每次2h，濾過，合并濾 液，減壓濃縮至適量，加乙醇使含醇量達75%，靜置過夜，取上清液減壓回收乙醇至無醇味， 余水液再加乙醇使含醇量達85%，靜置過夜，取上清液減壓回收乙醇至無醇味，余水液濾過， 備用；取注射用水800ml，加入硼酸12g、硼砂0.6g、尼泊金乙酯0.6g，加熱至70°C，攪拌 至澄清，濾過，攪拌下加入上述丁公藤提取液，再加入膠原蛋白提取液50ml (含膠原蛋白5g) 和膠原提取液20ml (含膠原2g)，攪拌均勻，加注射用水至1kg，過微孔濾膜，無菌分裝， 即得。（注：所用膠原蛋白為阿膠經(jīng)過胃蛋白酶和胰酶仿生酶解得到，經(jīng)過10kD的的超濾膜 超濾；膠原以豬皮和牛皮為原料，加乙酸調(diào)節(jié)pH為2.0,經(jīng)胃蛋白酶酶解制得，相對分子量 在 250?285kD)
試驗動物
新西蘭兔，雌雄兼用，2.2?2.5kg，共50只，購自北京大學(xué)實驗動物科學(xué)部。
試驗方法
青光眼模型建立：將18只家兔隨機分為三組，每組6只，分別為空白對照組、模型 對照組和丁公藤滴眼液組。取模型對照組和丁公藤滴眼液組用1%甲基纖維素少量多次注入家 兔前房建立高眼壓模型，分別單籠飼養(yǎng)。
給藥方法：空白對照組、模型對照組給予注射用水，丁公藤滴眼液組給予丁公藤滴眼 液。給藥4次/d，1?2滴/次，以造模后12h幵始用藥，為期9d，每天進行觀測。
實驗二：本發(fā)明滴眼液體外釋放度考察 試驗材料
丁公藤滴眼液（加膠原蛋白）：同試驗一；
丁公藤滴眼液（普通)：取丁公藤2kg，粗粉碎，加8倍量水煎煮兩次，每次2h，濾過， 合并濾液，減壓濃縮至適量，加乙醇使含醇量達75%，靜置過夜，取上清液減壓回收乙醇至 無醇味，余水液再加乙醇使含醇量達85%，靜置過夜，取上清液減壓回收乙醇至無醇味，余 水液濾過，備用：取注射用水800ml，加入硼酸12g、硼砂0.6g、尼泊金乙酯0.6g，加熱至 70°C,攪拌至澄清，濾過，攪拌下加入上述丁公藤提取液，攪拌均勻，加注射用水至1kg， 過微孔濾膜，無菌分裝，即得；
島津LC-2010A高效液相色譜儀，島津CLASS-VP工作站；
等滲磷酸鹽緩沖液（1000ml 溶液中含 NaH2P04 1.60g，Na2HP04 7. 58g，NaCl 4. 32g,調(diào) pH 至 7. 40)
試驗方法
取丁公藤滴眼液（加膠皞蛋白）和丁公藤滴眼液（普通）各10ml，分別置于透析袋中， 袋兩頭用尼龍線扎緊（袋內(nèi)除去氣泡)，固定于250ml燒杯中，釋放介質(zhì)為等滲磷酸鹽緩沖液 100ml,袋上沿距離液面lcm,燒杯置于電磁攪拌器上，攪拌子長約2. 5cm，溫度控制（34±1) °C，每隔一定時間取樣5ml，同時補加同體積新鮮的磷酸鹽緩沖液。
分別測定所取各樣品中丁公藤的含量，以峰面積表示。按以下公式計算累加擴散釋藥量: Ci=f(Ai)，Qn= 100Cn+5E CA (Q1=100Ci i，n=l，2, 3…) (G為藥物濃度，A為測得峰面積，Q為藥物累積釋放量，i，ri分別為取樣次數(shù)。） 試驗結(jié)果
根據(jù)采集的數(shù)據(jù)繪制丁公藤滴眼液（加膠原蛋白）和丁公藤滴眼液（普通）的體外釋放 曲線，并將該累積釋放曲線進行釋放方程擬合，結(jié)果其具有一級釋放規(guī)律，回歸方程具有良 好的相關(guān)性。一級釋藥擬合方程為：Log (Y.-Y) = 一KrXt/2.303+M。本發(fā)明中藥組合物 制成的丁公藤滴眼液（加膠原蛋白）的釋放方程為：Log (Y?~Y) =-0.1732x + 2. 1386，相 關(guān)系數(shù)為0.9973。
結(jié)果表明，丁公藤滴眼液（普通）的體外釋藥速度較快，lh時釋藥達到77%，之后進入 平臺期；而丁公藤滴眼液（加膠原蛋白）在3h時釋藥達到83%，釋藥速度平緩，具有較好的 緩釋特性?？梢?，丁公藤滴眼液（加膠原蛋白）具有較好的緩釋特性，通過本發(fā)明的中藥組 合物來提高制劑在眼部的生物利用度具有可行性。
具體實施方式
以下通過具體的實施例進一步說明本發(fā)明，但以下實施例僅用于說明本發(fā)明而對本發(fā)明 沒有限制。
實施例一：
處方：丁公藤10kg 膠原蛋白提取液500ml (含膠原蛋白25g)制法：取丁公藤藥材，粗粉碎，加8倍量水煎煮兩次，每次2h，濾過，合并濾液，減壓濃縮至適量，加乙醇使含醇量達75%，靜置過夜，取上清液減壓回收乙醇至無醇味，余水液再加乙醇使含醇量達85%，靜置過夜，取上清液減壓回收乙醇至無醇味，余水液濾過，備用；取注射用水4000ml，加入硼酸、硼砂、尼泊金乙酯，加熱至70°C，攪拌至澄清，濾過，攪拌下加入上述丁公藤提取液，再加入膠原蛋白提取液，攪拌均勻，加注射用水至5000g,過微孔濾膜，無菌分裝，即得。（注：所用膠原蛋白為阿膠經(jīng)過胃蛋白酶和胰蛋白酶仿生酶解，再經(jīng)過3kD的的超濾膜超濾得到）。
實施例二：
處方：檳榔3000g 透明質(zhì)酸鈉lg 膠原蛋白提取液100ml (含膠原蛋白5g) 制法：取檳榔藥材，粗粉碎，以1%的鹽酸浸漬并滲漉提取，收集8倍量滲濾液，濃縮至適量，以氨水調(diào)pH至10，以三氯甲烷提取五次，合并三氯甲烷液，回收三氯甲烷，加乙醇攪拌溶解，回收乙醇，余水液濾過，備用；取注射用水1600ml,加入結(jié)冷膠，攪拌均勻，置沸水浴中，攪拌至澄清，加入硼酸、硼砂、尼泊金乙酯，加熱至70°C，攪拌至澄清，濾過，攪拌下加入上述檳榔提取液，再加入膠原蛋白提取液，加注射用水至2000g，加入透明質(zhì)酸鈉，充分潤脹使溶解，過微孔濾膜（0.22um)，無菌分裝，即得。（注：所用膠原蛋白為豬骨和牛骨經(jīng)過堿性蛋白酶酶解，再經(jīng)過5kD的的超濾膜超濾得到）。