本發(fā)明涉及一種含牛磺酸螯合鈣并治療皮膚病癥或全身系統(tǒng)補(bǔ)鈣的外用制劑，其能夠用于向人體皮膚系統(tǒng)直接補(bǔ)充鈣，解決皮膚缺鈣和鈣紊亂的問(wèn)題，具有修復(fù)皮膚屏障、保濕、抗炎等作用，并研究了適用于?；撬狎镶}制劑的促透體系，增強(qiáng)了其透皮吸收效果。可用于化妝品、藥品、保健品、醫(yī)療衛(wèi)生等領(lǐng)域。同時(shí)還提供了?；撬狎镶}外用制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
：鈣對(duì)人體皮膚是非常重要的，美國(guó)皮膚醫(yī)學(xué)界首先發(fā)現(xiàn)了鈣離子對(duì)皮膚的重要性并形成了理論基礎(chǔ)，認(rèn)為鈣離子在皮膚屏障功能的穩(wěn)態(tài)和修復(fù)過(guò)程中起著非常重要的作用，目前國(guó)內(nèi)醫(yī)學(xué)界也開(kāi)發(fā)了一些醫(yī)院制劑用于對(duì)破損皮膚的修復(fù)治療。在正常人體皮膚表皮中存在著鈣離子濃度梯度，鈣離子濃度呈現(xiàn)基底層濃度低、越接近角質(zhì)層濃度越高的‘t’形分布，且細(xì)胞內(nèi)、外的鈣離子濃度也由低到高。鈣離子在表皮中的這種特殊濃度梯度分布，調(diào)控表皮細(xì)胞的增生、正常分裂、分化、細(xì)胞間皮脂的合成、細(xì)胞間連接，進(jìn)而影響皮膚屏障的形成、自律以及受損后的再生。美國(guó)皮膚醫(yī)學(xué)界有研究證明，表皮損傷后，如立刻恢復(fù)和維持表皮層鈣離子濃度梯度，皮膚屏障功能的恢復(fù)將明顯加速(24小時(shí)達(dá)80%)，而沒(méi)有及時(shí)恢復(fù)鈣離子濃度的創(chuàng)面，皮膚屏障功能，僅恢復(fù)50%。沐浴于富含鈣的死海水中，可改善皮膚屏障受損相關(guān)的皮膚疾病，如過(guò)敏性皮炎、牛皮癬、濕疹等，增加皮膚含水量，都是利用高濃度鈣離子，加速正常皮膚屏障再生的證明。愈來(lái)愈多的研究發(fā)現(xiàn)，調(diào)節(jié)皮膚表皮層的鈣離子正常濃度梯度，對(duì)于美容肌膚的修復(fù)、皮膚屏障的再生自律；皮膚屏障受損相關(guān)的皮膚疾病的治療，都具有相當(dāng)大的重要性。人體皮膚系統(tǒng)缺鈣現(xiàn)象是普遍存在的，也是比較嚴(yán)重的，人體皮膚缺鈣會(huì)引發(fā)多種皮膚病、皮膚屏障作用差、易感染起炎癥、易損且破損后愈合周期長(zhǎng)、皮膚干燥、敏感、水油平衡失調(diào)、加速皮膚老化、環(huán)境耐受性弱等各種皮膚問(wèn)題，特別是面部肌膚處于裸露狀態(tài)，受強(qiáng)紫外線、污染、輻射等不良環(huán)境的影響，更容易引起各種不良的皮膚狀態(tài)。人體皮膚系統(tǒng)長(zhǎng)期處于缺鈣狀態(tài)主要有以下兩個(gè)方面的原因：1、人體中離子型鈣缺乏人體中的鈣長(zhǎng)期處于動(dòng)態(tài)流失狀態(tài)，目前人體補(bǔ)鈣的途徑有兩種，一種是通過(guò)口服的方式補(bǔ)鈣，主要有各種補(bǔ)鈣制劑為口服鈣片類和口服液類；一種是通過(guò)靜脈注射的方式補(bǔ)鈣，但通過(guò)靜脈注射的方式危險(xiǎn)性大，必須是專業(yè)醫(yī)師方可進(jìn)行，所以目前通用的攝入鈣方式只有口服補(bǔ)鈣一種。人體處于缺鈣的狀態(tài)時(shí)，經(jīng)口服補(bǔ)充的鈣劑優(yōu)先用于骨骼、牙齒等所需的結(jié)合鈣的補(bǔ)充，這時(shí)所補(bǔ)充的鈣已經(jīng)失去了生理活性，并不能補(bǔ)充或者只能極少量補(bǔ)充離子鈣，但這對(duì)于調(diào)節(jié)機(jī)體的生理活性是不足的，所以在人體缺鈣的情況下通過(guò)血液循環(huán)向表皮層輸送鈣離子來(lái)保持表皮層鈣離子的平衡穩(wěn)態(tài)是非常困難的?？诜}劑難吸收、吸收率低、受影響因素多而復(fù)雜，這主要是胃腸道的復(fù)雜環(huán)境所引起的。口服補(bǔ)充的鈣劑是通過(guò)胃腸道來(lái)消化吸收的，胃部環(huán)境屬于強(qiáng)酸性環(huán)境，ph值在0.8～3.6之間變化，小腸環(huán)境屬于弱堿性，ph值在7.2～8.0之間變化，這種酸堿環(huán)境的變化對(duì)于鈣離子的吸收是不利的，如鈣離子易在堿性的腸道環(huán)境中形成膠稠狀氫氧化鈣沉淀，使鈣離子難以被人體吸收，同時(shí)，這種膠稠狀物可粘附在腸壁上，進(jìn)一步影響其他營(yíng)養(yǎng)元素的吸收。特別是口服鈣易受胃腸道中的陰離子污染而生成不溶性的鈣，導(dǎo)致鈣離子的吸收率大幅降低，例如攝取的食物中含有的植酸、草酸、堿性磷酸鹽、脂肪、膳食纖維中的糖醛酸殘基、核苷酸、尿酸等都可與鈣離子反應(yīng)生成不溶或難溶的草酸鈣、植酸鈣、堿性磷酸鈣、尿酸鈣鹽等，不但干擾鈣離子的吸收，還會(huì)引起鈣在組織中沉淀成為鈣化灶，在器官內(nèi)不斷沉積形成結(jié)石，影響身體健康。2、人體表皮系統(tǒng)不存在血液循環(huán)系統(tǒng)，具有生理活性的鈣離子輸送難人體主要通過(guò)血液循環(huán)系統(tǒng)向人體各系統(tǒng)各部位輸送所吸收的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，但是在表皮系統(tǒng)中不存在血液系統(tǒng)，其營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的輸送主要通過(guò)組織液傳輸，但其傳輸量和傳輸效率非常低，同時(shí)由于前述的口服鈣離子優(yōu)先用于結(jié)合鈣的需求，所以通過(guò)口服給表皮系統(tǒng)補(bǔ)充其所需的離子鈣是很困難的，具有生理活性的離子鈣對(duì)維持人體表皮系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)健康是非常重要的，人體表皮系統(tǒng)是機(jī)體抵御脫水、損傷、感染、抗病菌的第一道防線，正常的離子鈣濃度是維持人體表皮屏障系統(tǒng)穩(wěn)定、破損后修復(fù)的最主要因素，當(dāng)鈣離子缺乏或紊亂時(shí)會(huì)導(dǎo)致表皮屏障遭受破壞，進(jìn)而引發(fā)各種皮膚問(wèn)題甚至病變，所以維持表皮系統(tǒng)正常的鈣離子濃度對(duì)于表皮屏障保持穩(wěn)定或破損后的修復(fù)是非常重要的。所以直接補(bǔ)充易于經(jīng)皮吸收的具有生理活性的離子鈣特別是維持表皮系統(tǒng)鈣平衡是具有非常重要的意義的。3、目前市場(chǎng)上缺乏可外用的靶向補(bǔ)鈣劑目前市場(chǎng)上的各種補(bǔ)鈣劑均為口服制劑，包括各種鈣片和口服液，這主要是針對(duì)胃腸道特殊的消化系統(tǒng)開(kāi)發(fā)的，胃腸道的ph值在1.5～3.2之間，屬于強(qiáng)酸環(huán)境，同時(shí)還存在各種菌類、有機(jī)酸、陰離子對(duì)鈣離子存在污染變成難溶物不被人體吸收，而人體表皮正常的ph值范圍在5.2～6.5之間，屬于弱酸性環(huán)境，所以一般用于經(jīng)胃腸道消化吸收的口服鈣劑難于經(jīng)皮吸收。同時(shí)，一般口服鈣劑多選用無(wú)機(jī)鈣、離子型有機(jī)酸鈣如氯化鈣、碳酸鈣、乳酸鈣、丙酸鈣、檸檬酸鈣、葡萄糖酸鈣等，這些鈣劑均為離子態(tài)，同時(shí)有的鈣鹽還存在溶解性差的問(wèn)題，在經(jīng)皮吸收領(lǐng)域，難溶性的化合物和離子型的化合物是非常難吸收的。同時(shí)目前尚無(wú)學(xué)者研究鈣的經(jīng)皮吸收問(wèn)題，所以研究有利于經(jīng)皮吸收的補(bǔ)鈣劑是非常有必要的，也是非常具有創(chuàng)新性的研究課題，經(jīng)皮吸收補(bǔ)鈣的方式可以實(shí)現(xiàn)直接向機(jī)體補(bǔ)充具有生理活性的離子型鈣，特別是可以實(shí)現(xiàn)優(yōu)先向不存在血液循環(huán)系統(tǒng)表皮系統(tǒng)靶向補(bǔ)鈣，且吸收效率高，而且不受胃腸道特殊而復(fù)雜的環(huán)境的影響，能夠解決鈣離子易受陰離子污染而導(dǎo)致吸收利用率低的問(wèn)題。并且在化妝品領(lǐng)域，所有的膏霜、水劑均無(wú)法保證其在面部的作用時(shí)間，特別是水劑，很容易從皮膚表層蒸發(fā)散失，因而如果化妝品中的鈣離子不能在盡可能短的時(shí)間內(nèi)被皮膚吸收利用，那么很可能因流失而不能起到相應(yīng)的作用。所以，提高鈣離子前2h～３h的吸收量是非常重要的。所以開(kāi)發(fā)能夠直接經(jīng)皮吸收的補(bǔ)鈣制劑和研究其促透體系增強(qiáng)鈣的透皮吸收效果對(duì)于重新建立表皮鈣離子穩(wěn)態(tài)梯度進(jìn)而加速表皮屏障功能的修復(fù)是有必要的，表皮屏障的修復(fù)能夠全方位的改善。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：鑒于鈣對(duì)皮膚的重要性以及鈣的經(jīng)皮吸收存在的上述問(wèn)題，本發(fā)明在于提供一種含牛磺酸螯合鈣的外用制劑，其主要以?；撬狎镶}為主，配合促透體系一起組成含?；撬狎镶}的外用制劑，其解決了現(xiàn)有鈣劑不易經(jīng)皮吸收的問(wèn)題，且大大提高了前2h～3h的吸收量。本發(fā)明的水劑用于化妝品中具有很好的保濕、抗炎、恢復(fù)皮膚屏障等作用。以上所述的牛磺酸螯合鈣外用制劑中還可以添加具有其他功效的藥物成分，如祛斑美白、殺菌抑菌、消炎止疼、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充等。本發(fā)明比較了牛磺酸螯合鈣與市售各種鈣劑的經(jīng)皮吸收性能，通過(guò)比較?；撬狎镶}、氯化鈣、葡萄糖酸鈣水溶液的經(jīng)皮吸收效果，說(shuō)明了?；撬狎镶}較其他的鈣制劑具有良好的經(jīng)皮吸收性能，特別是在初始階段?；撬狎镶}的經(jīng)皮吸收量遠(yuǎn)大于氯化鈣和葡萄糖酸鈣，而在6h內(nèi)的吸收總量也遠(yuǎn)高于氯化鈣和葡萄糖酸鈣。本發(fā)明還研究了不同量的牛磺酸螯合鈣對(duì)經(jīng)皮吸收性能的影響，當(dāng)?；撬狎镶}的濃度增大時(shí)，其經(jīng)皮吸收性能增大，特別是能夠增加其在起始階段的經(jīng)皮吸收效果，在起始1h內(nèi)，濃度為2%的牛磺酸螯合鈣的經(jīng)皮吸收量約為濃度為0.5%時(shí)的9倍，約為濃度為1%時(shí)的4倍，這對(duì)于其在化妝品中的應(yīng)用是非常重要的。同時(shí)，濃度為2%時(shí)在6h內(nèi)的吸收率達(dá)到75%，遠(yuǎn)高于濃度為0.5%時(shí)的37%，濃度為2%時(shí)6h內(nèi)的總吸收量為0.5%時(shí)的10倍以上。本發(fā)明的?；撬狎镶}外用制劑，其中?；撬狎镶}的質(zhì)量百分含量在小于60.00%，優(yōu)選為小于40%，更優(yōu)選為小于20%，更進(jìn)一步優(yōu)選為小于8%。在藥物經(jīng)皮吸收過(guò)程中，促透體系有著非常重要的作用，其可以有效提升藥物的經(jīng)皮吸收速率，而由于液體噴劑劑型的特殊性，對(duì)于其中的功效成分能夠快速吸收是非常重要的。一般的藥物成分的促透劑包括以下幾類：萜烯類、精油及內(nèi)酯（如簿荷腦、龍腦、桉油及川穹、小豆蔻提取物等）、吡咯烷酮類、磷脂及磷酸鹽類、有機(jī)酸及酯類和酰胺類、表面活性劑類、油酸、月桂氮卓酮、薄荷類、多元醇類，還有新近發(fā)現(xiàn)一些氨基酸類物質(zhì)和多糖類物質(zhì)也具有促透效果。但是在這些類型的促透劑中只有多元醇類、氨基酸類、多糖類的促透機(jī)理對(duì)表皮屏障即角質(zhì)層沒(méi)有破壞，其他類型的促透劑均為以削薄角質(zhì)層的厚度和降低角質(zhì)細(xì)胞之間的粘連性等破壞角質(zhì)層的方式增加藥物的經(jīng)皮吸收效果，而在化妝品中特別是?；撬狎镶}噴劑的重點(diǎn)功效在于調(diào)節(jié)并修復(fù)表皮屏障功能，故本發(fā)明對(duì)于促透體系的選擇重點(diǎn)在于多元醇體系、氨基酸、多糖類物質(zhì)的研究上，選擇其中的一種或多種，其中的多元醇類、多糖類、氨基酸類的促透劑還具有保濕劑、營(yíng)養(yǎng)劑的作用；本發(fā)明的?；撬狎镶}外用制劑，其中促透劑的質(zhì)量百分含量小于80.00%，優(yōu)選為小于50%，更優(yōu)選為小于30%。本發(fā)明的促透體系對(duì)于多元醇體系的選擇：通過(guò)對(duì)多元醇的種類及其配比關(guān)系對(duì)?；撬狎镶}經(jīng)皮吸收性能影響的研究，發(fā)現(xiàn)多種多元醇配合使用時(shí)其對(duì)牛磺酸螯合鈣的促透效果要優(yōu)于其單獨(dú)使用，并且各類多元醇之間的配比關(guān)系對(duì)?；撬狎镶}的經(jīng)皮吸收性能的影響不同，多元醇類促透劑包括丙三醇、戊二醇、丁二醇、丙二醇中的一種或多種。其中丙三醇的質(zhì)量百分含量小于30%，優(yōu)選小于15%，更優(yōu)選小于6%；丙二醇的質(zhì)量百分含量小于50%，優(yōu)選小于30%，更優(yōu)選小于10%；丁二醇的質(zhì)量百分含量小于50%，優(yōu)選小于30%，更優(yōu)選小于10%；戊二醇的質(zhì)量百分含量小于50%，優(yōu)選小于30%，更優(yōu)選小于10%。本發(fā)明考察了多元醇促透體系添加量對(duì)?；撬狎镶}經(jīng)皮吸收性能的影響，發(fā)現(xiàn)多元醇促透體系對(duì)牛磺酸螯合鈣具有很大的影響，且促透效果隨著添加量的增大而增大，特別是在初始1h內(nèi)，具有明顯的影響，當(dāng)添加量達(dá)到6%與8%時(shí)牛磺酸螯合鈣的經(jīng)皮吸收量相差不大，說(shuō)明在多元醇體系的添加量達(dá)到6%時(shí)，促透效果逐漸達(dá)到峰值，說(shuō)明多元醇促透體系在1h內(nèi)對(duì)牛磺酸螯合鈣的經(jīng)皮吸收效果時(shí)非常有利的。本發(fā)明還考察了氨基酸類物質(zhì)對(duì)?；撬狎镶}經(jīng)皮吸收性能的影響，發(fā)現(xiàn)氨基酸類物質(zhì)對(duì)于?；撬狎镶}的經(jīng)皮吸收具有促透效果，這可能是由于氨基酸類物質(zhì)中同時(shí)具有的類脂性結(jié)構(gòu)氨基和親水性結(jié)構(gòu)羧基所致，這種具有雙親性的結(jié)構(gòu)可能能夠促進(jìn)藥物的透皮吸收效果。在?；撬狎镶}制劑中氨基酸類物質(zhì)的質(zhì)量百分含量小于50%，優(yōu)選小于20.00%，進(jìn)一步優(yōu)選小于6%。本發(fā)明還考察了多糖類物質(zhì)對(duì)?；撬狎镶}經(jīng)皮吸收效果的影響，發(fā)現(xiàn)多糖類物質(zhì)對(duì)于?；撬狎镶}的經(jīng)皮吸收具有促透效果，這可能是由于多糖類物質(zhì)具有吸收水分并保持皮膚中的水分含量，皮膚中水分含量的增加能夠軟化角質(zhì)層，降低角質(zhì)層的屏障作用，增加藥物成分的透皮吸收效果。這些多糖類物質(zhì)包括海藻糖、銀耳多糖、水解殼多糖、透明質(zhì)酸鈉、酵母多糖、可溶性蛋白多糖多種多糖類物質(zhì)，本發(fā)明中特別選取了多糖類的海藻糖和透明質(zhì)酸進(jìn)行了牛磺酸螯合鈣的透皮效果影響實(shí)驗(yàn)，并對(duì)二者的添加量對(duì)?；撬狎镶}的影響進(jìn)行了研究，結(jié)果表明海藻糖和透明質(zhì)酸鈉對(duì)?；撬狎镶}的經(jīng)皮吸收具有促透效果，但透明質(zhì)酸鈉對(duì)?；撬狎镶}的促透作用具有一定的量效性，即在一定濃度范圍內(nèi)對(duì)?；撬狎镶}具有促透效果，而高于一定濃度時(shí)，反而對(duì)牛磺酸螯合鈣的經(jīng)皮吸收起抑制作用，這可能是由于透明質(zhì)酸屬于大分子量的物質(zhì)會(huì)對(duì)藥物成分形成吸附或包裹從而降低藥物的釋放速率，進(jìn)一步導(dǎo)致了藥物成分的透皮效果降低。同時(shí)這些多糖類物質(zhì)還具有補(bǔ)水保濕效果，增加皮膚含水量，進(jìn)一步幫助改善皮膚。本發(fā)明含?；撬狎镶}的外用制劑中，多糖類物質(zhì)的質(zhì)量百分含量小于50%，優(yōu)選小于20.00%，進(jìn)一步優(yōu)選小于6%。本發(fā)明的?；撬狎镶}外用制劑，其中水的質(zhì)量百分含量在0.01%～99.99%之間，優(yōu)選5%～99%之間，更優(yōu)選為10%～99%之間，進(jìn)一步優(yōu)選為20%～99%之間。本發(fā)明的牛磺酸螯合鈣外用制劑，還含有防腐劑，其含量小于5%，優(yōu)選為小于1%。本發(fā)明中的?；撬狎镶}外用制劑，還可以含有其他具有祛斑美白、殺菌抑菌、消炎、控油、祛除疤痕、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充等功效的藥物營(yíng)養(yǎng)成分。本發(fā)明中的牛磺酸螯合鈣外用制劑，其可作為化妝品、藥物外用劑、保健品外用劑、醫(yī)療衛(wèi)生外用制劑使用。當(dāng)以一體法制備本發(fā)明的牛磺酸螯合鈣外用制劑時(shí)，合成牛磺酸螯合鈣所需的中心離子來(lái)源可以為無(wú)機(jī)鈣鹽如氯化鈣、碳酸鈣、磷酸鈣、磷酸氫鈣、硅酸鈣等，也可以是非螯合型有機(jī)鈣鹽如乳酸鈣、丙酸鈣、檸檬酸鈣、葡萄糖酸鈣等，還可以為氧化鈣、氫氧化鈣，可以來(lái)源于礦物質(zhì)中的鈣，也可以為生物來(lái)源如動(dòng)物體的骨骼等；優(yōu)選為氯化鈣、碳酸鈣、乳酸鈣、丙酸鈣、檸檬酸鈣、氧化鈣、氫氧化鈣。本發(fā)明的目的是制備一種含?；撬狎镶}的外用制劑，并且其可以快速被皮膚吸收，以達(dá)到皮膚對(duì)鈣的充分吸收利用，其包括兩種制備方法：分步法和一體法，這主要是通過(guò)?；撬狎镶}的制備過(guò)程來(lái)說(shuō)。其中分步法指先制備出?；撬狎镶}晶體，在與其它的成分如促透劑、營(yíng)養(yǎng)劑、藥物功效成分和水在一定的溫度、ph值、攪拌速率的條件下制備成含有?；撬狎镶}的外用制劑；一體法是指在制備?；撬狎镶}的時(shí)候選擇安全且對(duì)皮膚無(wú)刺激的鈣源制備成含?；撬狎镶}的原溶液，不用進(jìn)行?；撬狎镶}結(jié)晶純化，直接以?；撬狎镶}的原溶液與其它的成分如促透劑、營(yíng)養(yǎng)劑、藥物功效成分和水在一定的溫度、ph值、攪拌速率的條件下制備成含有?；撬狎镶}的外用制劑。具體實(shí)施方式實(shí)施例11、?；撬狎镶}的制備：實(shí)驗(yàn)中以?；撬釣榕湮惑w，任意選擇氯化鈣、碳酸鈣、磷酸鈣、磷酸氫鈣、硅酸鈣、乳酸鈣、丙酸鈣、檸檬酸鈣、葡萄糖酸鈣中的一種作為提供中心離子鈣的鈣源制備氨基酸螯合鈣，以做進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究，具體如下：1）稱取45g的?；撬?，用150ml去離子水溶解在三口燒瓶中，水浴加熱至80℃恒溫，至谷氨酸完全溶解；2）稱取20g乳酸鈣，完全溶解于足量的水中，調(diào)節(jié)ph至7.8；3）將2）中配制好的乳酸鈣溶液逐滴慢慢加入到1）中的牛磺酸溶液中，邊加入乳酸鈣溶液邊輕輕攪拌，攪拌過(guò)程中保持恒溫狀態(tài)；4）加完乳酸鈣溶液后，反應(yīng)約60min，反應(yīng)完畢；5）過(guò)濾去雜質(zhì)，濾液可直接備用或?qū)V液蒸發(fā)至?；撬狎镶}析出，并干燥后粉碎備用；2、?；撬狎镶}定性檢測(cè)由于牛磺酸螯合鈣的水溶液中鈣并不是以離子形態(tài)存在，所以可以通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)后所得到的物質(zhì)中是否存在游離的鈣離子和游離的氨基酸根可以確定是否有氨基酸螯合鈣生成，對(duì)氨基酸螯合鈣的生成進(jìn)行定性檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)主要是通過(guò)二硫腙試劑與游離金屬鈣離子的顯色反應(yīng)或者茚三酮試劑與?；撬岣娘@色反應(yīng)來(lái)比較反應(yīng)前后的變化確定是否生成牛磺酸螯合鈣，具體實(shí)驗(yàn)如下：實(shí)驗(yàn)定性檢測(cè)用試劑：二硫腙試劑、茚三酮試劑、硫化鈉。?；撬狎镶}的純化：此實(shí)驗(yàn)主要是排除上述制得的?；撬狎镶}產(chǎn)品中的未反應(yīng)的鈣離子與?；撬岬挠绊?。游離鈣離子去除：稱取少量前述制備的?；撬狎镶}的樣品，加入適量的無(wú)水乙醇，進(jìn)行充分?jǐn)嚢?，后靜置一段時(shí)間進(jìn)行沉淀，過(guò)濾，取少量濾液中加入幾滴二硫腙試劑，觀察濾液是否變色，若變色則按照上述辦法對(duì)?；撬狎镶}繼續(xù)進(jìn)行洗滌純化，直到加入二硫腙試劑后濾液不變色為止，以確定金屬鈣離子被完全除凈；游離牛磺酸去除：取已除去游離鈣離子的?；撬狎镶}少許溶于水中，加入幾滴茚三酮試劑，加熱至溶液沸騰，若顏色溶液顏色變?yōu)樗{(lán)紫色，則樣品中還存在游離的?；撬幔^續(xù)以無(wú)水乙醇為純化劑進(jìn)行純化，直到受加熱的溶液顏色不變?yōu)樗{(lán)紫色為止，以確定游離的牛磺酸被完全除凈。實(shí)施例2?；撬狎镶}的含量對(duì)經(jīng)皮吸收效果的影響：本發(fā)明中不同濃度?；撬狎镶}經(jīng)皮吸收量比較，分別配制濃度為0.5%、1%、1.5%、2%的?；撬狎镶}溶液，以小鼠皮為模型，選取0.9%氯化鈉水溶液為接受液，在franz智能透皮擴(kuò)散池中考察了在沒(méi)有添加促透劑的條件下，比較上述?；撬狎镶}水溶液在6h內(nèi)的透皮性能，得到結(jié)果如下表所示：表1、不同濃度?；撬狎镶}經(jīng)皮吸收量從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，?；撬狎镶}的濃度越高經(jīng)皮吸收效果越好。實(shí)施例3?；撬狎镶}與其它鈣劑的經(jīng)皮吸收效果的影響：本發(fā)明中牛磺酸螯合鈣與其他不同鈣劑之間透皮效果的比較，分別配制濃度同為2%的?；撬狎镶}溶液、氯化鈣溶液和葡萄糖酸鈣溶液，以小鼠皮為模型，選取0.9%氯化鈉水溶液為接受液，在franz智能透皮擴(kuò)散池中考察沒(méi)有添加促透劑的條件下，上述溶液在6h內(nèi)的透皮性能，結(jié)果如下表：表2、?；撬狎镶}-氯化鈣-葡萄糖酸鈣的經(jīng)皮吸收效果比較時(shí)間/h?；撬狎镶}氯化鈣葡萄糖酸鈣0.254.81930.18370.66080.55.98130.34791.19710.757.17410.56631.787418.54380.75172.39131.511.10791.10833.3703213.11571.41724.5388316.06731.74615.6717418.27142.07836.5419621.14692.38937.3272從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，牛磺酸螯合鈣的經(jīng)皮吸收效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于其他離子型的鈣制劑。實(shí)施例4多元醇促透體系對(duì)牛磺酸螯合鈣經(jīng)皮吸收性能的影響：本發(fā)明中不同多元醇體系對(duì)?；撬狎镶}的經(jīng)皮吸收性能的影響的測(cè)定，配制不同配比的丁二醇、丙二醇、1,2-戊二醇混合液作為促透液，另外配制一定濃度的?；撬狎镶}溶液，以小鼠皮為模型，選取0.9%氯化鈉水溶液為接受液，在franz智能透皮擴(kuò)散池中考察添加上述促透液的條件下比較?；撬狎镶}水溶液在6h內(nèi)的透皮性能，結(jié)果如下表所示：表3、不同多元醇體系對(duì)?；撬狎镶}經(jīng)皮吸收量影響從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，不同的多元醇促透體系對(duì)牛磺酸螯合鈣的經(jīng)皮吸收效果影響不同，所以研究不同的多元醇促透體系對(duì)?；撬狎镶}的經(jīng)皮吸收時(shí)非常有用的。實(shí)施例5本發(fā)明中不同多元醇促透體系添加量對(duì)牛磺酸螯合鈣經(jīng)皮吸收性能的影響測(cè)定，按照，丁二醇：丙二醇：1,2-戊二醇=1：2：2配制促透液，并配制濃度為2%的?；撬狎镶}溶液，以小鼠皮為模型，選取0.9%氯化鈉水溶液為接受液，在franz智能透皮擴(kuò)散池中考察上述促透液添加量分別為0，2%，6%，8%時(shí)?；撬狎镶}水溶液在6h內(nèi)的透皮性能，結(jié)果如下表所示：表4、不同多元醇促透體系添加量對(duì)?；撬狎镶}經(jīng)皮吸收量影響從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，多元醇的添加量對(duì)?；撬狎镶}的經(jīng)皮吸收效果具有一定的影響。實(shí)施例6本發(fā)明中多糖類物質(zhì)對(duì)?；撬狎镶}經(jīng)皮吸收性能的影響的測(cè)定，本發(fā)明中主要考察了海藻糖和透明質(zhì)酸鈉對(duì)?；撬狎镶}的經(jīng)皮吸收性能影響，并對(duì)二者的添加量對(duì)?；撬狎镶}的影響進(jìn)行了研究，具體方法如下：配制濃度為2%的?；撬狎镶}溶液，以小鼠皮為模型，選取0.9%氯化鈉水溶液為接受液，在franz智能透皮擴(kuò)散池中考察促透劑分別為海藻糖添加量為0%、1%、2%時(shí)和透明質(zhì)酸添加量為0%、0.05%、0.15%、0.2%時(shí)的?；撬岫嘣镶}的經(jīng)皮吸收效果，結(jié)果如下表所示：表5、不同海藻糖的添加量對(duì)?；撬狎镶}的經(jīng)皮吸收量的影響表6、不同透明質(zhì)酸鈉添加量對(duì)?；撬狎镶}的經(jīng)皮吸收量的影響從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，多糖類物質(zhì)對(duì)牛磺酸螯合鈣的經(jīng)皮吸收效果具有不同的影響，且對(duì)于一些多糖類物質(zhì)對(duì)?；撬狎镶}的促透效果具有一定的量效性。實(shí)施例7本發(fā)明中?；撬狎镶}水劑的制備方法一：分步法1）制備牛磺酸螯合鈣晶體，將濃度為30%的牛磺酸溶液與乳酸鈣放入反應(yīng)容器中，用乳酸調(diào)節(jié)ph值至7.5，加熱至80℃，反應(yīng)140min后，將溶液烘干得到?；撬狎镶}樣品。取?；撬狎镶}樣品，加入無(wú)水乙醇，充分?jǐn)嚢柽^(guò)后，靜置一段時(shí)間，過(guò)濾，在濾液中加入幾滴二硫蹤試劑。若濾液變?yōu)榧t色，說(shuō)明樣品中可能還存在游離的金屬鈣離子，那么繼續(xù)用乙醇進(jìn)行洗滌直到二硫蹤試劑進(jìn)行檢測(cè)不變色為止。從已去除游離金屬鈣離子的樣品中取出少量樣品，溶于水中，加入幾滴茚三酮試劑，在電爐上加熱至沸騰。若顏色變成藍(lán)紫色，說(shuō)明樣品中可能還存在游離的?；撬幔^續(xù)用無(wú)水乙醇洗滌直至茚三酮顏色反應(yīng)呈現(xiàn)無(wú)色。將已經(jīng)過(guò)分離純化的樣品放在冷凍干燥機(jī)內(nèi)干燥，可以得到純度很好的?；撬狎镶}樣品；2）按下列重量百分比稱取各成分：?；撬狎镶}2%，海藻糖2%，透明質(zhì)酸鈉0.15%，丙二醇1%，甘油1%，丁二醇2%，1,2-戊二醇2%，牛磺酸0.2%，北美金縷梅水2%，防腐抗菌劑0.05%，去離子水87.6%；3）配制促透體系溶液，用部分去離子水溶解海藻糖和牛磺酸，再向其中加入透明質(zhì)酸鈉，充分溶脹溶解后再繼續(xù)加入丙二醇、甘油、丁二醇和1,2-戊二醇，充分?jǐn)嚢枞芙?，即得到促透體系溶液；4）用剩余去離子水溶解?；撬狎镶}，完全溶解后加入促透體系溶液、北美金縷梅水和防腐抗菌劑，攪拌混勻；5）出料，裝瓶包裝即可。實(shí)施例8本發(fā)明中牛磺酸螯合鈣水劑的制備方法二：一體法1）根據(jù)?；撬狎镶}的合成條件，確定反應(yīng)條件為，反應(yīng)時(shí)間140min，反應(yīng)ph值7.5，反應(yīng)溫度80℃，?；撬釢舛?0%；2）按照下列重量百分比稱取各成分：牛磺酸4%，乳酸鈣2%，海藻糖2%，透明質(zhì)酸鈉0.15%，丙二醇1%，甘油1%，丁二醇2%，1,2-戊二醇2%，北美金縷梅水2%，防腐抗菌劑0.05%，去離子水83.9%；3）配制促透體系溶液，用部分去離子水溶解海藻糖，再向其中加入透明質(zhì)酸鈉，充分溶脹溶解后再繼續(xù)加入丙二醇、甘油、丁二醇和1,2-戊二醇，充分?jǐn)嚢枞芙猓吹玫酱偻阁w系溶液；4）配制濃度為30%的?；撬崛芤?，向溶液中加入乳酸鈣，攪拌加熱至80℃，用乳酸調(diào)節(jié)ph至7.5，再向溶液中加入促透體系溶液、北美金縷梅水，反應(yīng)140min后再向溶液中加入防腐抗菌劑和剩余的去離子水，攪勻得到含?；撬狎镶}的水劑。5）出料，包裝即可。實(shí)施例9?；撬狎镶}水溶液穩(wěn)定性考察：本實(shí)驗(yàn)以實(shí)施例7中制備的?；撬狎镶}制劑，考察其穩(wěn)定性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下所示：表、牛磺酸螯合鈣在不同條件下的水溶液的穩(wěn)定性從以上試驗(yàn)結(jié)果可以看出：?；撬狎镶}的制劑在不同溫度下的均穩(wěn)定，對(duì)于外用液體制劑來(lái)說(shuō)，這種穩(wěn)定性是十分必要的，說(shuō)明其更適用于制備外用含水制劑，如噴劑、凝膠劑、涂抹劑、搽劑等。實(shí)施例10本實(shí)驗(yàn)考察了月桂氮卓酮（azone）對(duì)?；撬狎镶}的經(jīng)皮吸收時(shí)的促透效果，試驗(yàn)中以實(shí)施例1中制備的?；撬狎镶}為試驗(yàn)樣品，并設(shè)置azone的對(duì)照組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，透皮測(cè)試方法與前述各實(shí)施例中的方法相同，試驗(yàn)時(shí)間為6h，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所示：表、azone對(duì)牛磺酸螯合鈣的透皮性能的影響從以上試驗(yàn)結(jié)果可以看出，azone對(duì)?；撬狎镶}的透皮效果具有較好的促進(jìn)作用。實(shí)施例11?；撬狎镶}對(duì)離體角質(zhì)細(xì)胞的增殖效果影響：本實(shí)驗(yàn)以實(shí)施例1中制備的牛磺酸螯合鈣為試驗(yàn)樣品，通過(guò)考察牛磺酸螯合鈣對(duì)離體角質(zhì)細(xì)胞增殖效果的影響來(lái)說(shuō)明?；撬狎镶}對(duì)皮膚屏障作用恢復(fù)的影響。試驗(yàn)中以小鼠外移皮膚進(jìn)行表皮屏障修復(fù)實(shí)驗(yàn)，使用一定濃度的牛磺酸螯合鈣溶液處理，另設(shè)一組空白對(duì)照組，進(jìn)行平行比較試驗(yàn)，并通過(guò)免疫熒光的方法追蹤表皮角質(zhì)細(xì)胞，考察24小時(shí)后在重建表皮中處于增殖過(guò)程中的角質(zhì)細(xì)胞的變化情況。實(shí)驗(yàn)中觀察并比較了一定濃度的?；撬狎镶}、氯化鈣、葡萄糖酸鈣對(duì)在重建表皮的過(guò)程中處于增殖過(guò)程中的角質(zhì)細(xì)胞的變化情況，說(shuō)明谷氨酸螯合鈣在表皮屏障修復(fù)過(guò)程中對(duì)角質(zhì)細(xì)胞的增殖作用，具體結(jié)果見(jiàn)下表：表、不同鈣劑在24h內(nèi)對(duì)表皮屏障修復(fù)過(guò)程中對(duì)角質(zhì)細(xì)胞的增殖作用空白組?；撬狎镶}氯化鈣葡萄糖酸鈣角質(zhì)細(xì)胞增長(zhǎng)率/%1.527.69.313.7從以上試驗(yàn)結(jié)果可以看出，牛磺酸螯合鈣對(duì)角質(zhì)細(xì)胞增殖作用的影響最大，這可以說(shuō)明牛磺酸螯合鈣對(duì)皮膚表皮屏障功能的恢復(fù)性能要優(yōu)于不加牛磺酸螯合鈣和其他非氨基酸螯合鈣組。實(shí)施例12本實(shí)驗(yàn)以實(shí)施例1中制備的?；撬狎镶}為試驗(yàn)樣品，通過(guò)設(shè)計(jì)空白組、比較對(duì)照組實(shí)驗(yàn)，考察了牛磺酸螯合鈣對(duì)表皮角質(zhì)層屏障恢復(fù)效果的影響，直觀地了解了?；撬狎镶}對(duì)表皮屏障恢復(fù)的影響，試驗(yàn)中通過(guò)小鼠外移皮膚進(jìn)行表皮屏障修復(fù)實(shí)驗(yàn)，使用牛磺酸螯合鈣噴劑對(duì)表皮進(jìn)行3次/天的處理，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)表皮層進(jìn)行trichrom-masson染色，觀察其表皮厚度的變化情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表：表、不同鈣劑在6d內(nèi)對(duì)表皮角質(zhì)層的修復(fù)作用空白組?；撬狎镶}氯化鈣葡萄糖酸鈣角質(zhì)層厚度變化/%0.924.77.59.3通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，使用?；撬狎镶}6天后，其表皮層的厚度明顯增加，要優(yōu)于不加?；撬狎镶}的空白組和其它鈣劑的對(duì)照組，說(shuō)明?；撬狎镶}在表皮屏障修復(fù)過(guò)程中有著明顯的作用。實(shí)施例13以實(shí)施例1中制備的?；撬狎镶}為原料，添加前述實(shí)施例中的促透劑，制備成噴劑，進(jìn)行了志愿者測(cè)試，試驗(yàn)中設(shè)置空白組、對(duì)照組、試驗(yàn)組，考察?；撬狎镶}對(duì)皮膚的改善調(diào)節(jié)效果，并與其它無(wú)機(jī)鈣、有機(jī)酸鈣進(jìn)行比較。測(cè)試部位為面部，測(cè)試時(shí)間為兩周，受試志愿者共有40名，其中20名為干性敏感肌膚，20名為油性肌膚，受試期間未進(jìn)行其他治療方式，禁用其它護(hù)膚品。采用visia測(cè)試儀和soft5.5測(cè)試受試者面部肌膚的變化情況，包括皮膚的含水量變化、彈性值、皮脂量、面部ph值變化、面部細(xì)菌生長(zhǎng)變化、皮膚光澤度、緊致效果、毛孔改變、抗敏效果、不同類型肌膚適應(yīng)性等，綜合評(píng)價(jià)?；撬狎镶}對(duì)面部肌膚的修復(fù)調(diào)節(jié)作用。visia皮膚圖像分析測(cè)試儀和soft5.5皮膚性質(zhì)測(cè)試對(duì)治療前后皮膚性質(zhì)進(jìn)行定量評(píng)價(jià)，各項(xiàng)指標(biāo)如下：1）水分：皮膚水分值高低可用于衡量皮膚的干燥程度，同時(shí)也是反映皮膚屏障功能的重要指標(biāo)之一；水分測(cè)試值越高，表明補(bǔ)水效果非常好；2）皮脂：表示皮膚油脂分泌能力，測(cè)試結(jié)果值越高，表明油分含量過(guò)高；3）彈性：測(cè)試結(jié)果值越高，表明皮膚彈性越好；4）酸堿值：一般情況下油性肌膚的ph值較低，這是由于分泌的油脂中含有游離的脂肪酸的緣故；5）皺紋：反應(yīng)臉部的干紋、細(xì)紋、靜態(tài)紋等狀況，皺紋一般與皮膚的彈性降低有密切關(guān)系；6）紋理：反映皮膚的平滑度以及飽滿感，健康的角質(zhì)層的“峰”和“谷”差異越小，皮膚飽滿感越好，角質(zhì)層的鎖水、保濕能力越強(qiáng)；7）紫質(zhì)：油性皮膚所關(guān)注的檢測(cè)項(xiàng)之一，對(duì)于控制皮膚炎癥、控油效果具有重要意義，主要檢測(cè)毛囊口的各種細(xì)菌如痤瘡丙酸桿菌、馬拉色菌等的代謝產(chǎn)物，其檢測(cè)結(jié)果越低，說(shuō)明毛囊口處的以上細(xì)菌越少，產(chǎn)品的抑菌效果明顯；8）毛孔：反映皮脂腺開(kāi)孔的擴(kuò)張情況和平整度，因?yàn)閺堥_(kāi)的毛孔會(huì)有陰影，它的顏色會(huì)比正常的膚色深，visia就是利用這一原理識(shí)別毛孔。干性肌膚應(yīng)用試驗(yàn)效果：將干性肌膚類型的20名志愿者隨機(jī)分為4組，每組5人，分別為空白組、牛磺酸螯合鈣組、氯化鈣組、葡萄糖酸鈣組，實(shí)驗(yàn)中觀察不同組中各項(xiàng)目中的指標(biāo)變化區(qū)間中的有效的志愿者例數(shù)，進(jìn)行效果對(duì)比，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所示：表、不同鈣劑對(duì)干性肌膚的修復(fù)效果油性肌膚應(yīng)用試驗(yàn)效果：將油性肌膚類型的20名志愿者隨機(jī)分為4組，每組5人，分別為空白組、牛磺酸螯合鈣組、氯化鈣組、葡萄糖酸鈣組，進(jìn)行效果對(duì)比試驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所示：表、不同鈣劑對(duì)油性肌膚的修復(fù)效果由以上試驗(yàn)結(jié)果可以看出，與空白組相比較，含鈣組對(duì)皮膚修復(fù)效果要優(yōu)于空白組，在三種不同鈣劑的試驗(yàn)組中，含?；撬狎镶}組要明顯優(yōu)于氯化鈣組和葡萄糖酸鈣組，其對(duì)于油性肌膚和干性肌膚都是適應(yīng)的，這說(shuō)明了?；撬狎镶}對(duì)皮膚表皮屏障修復(fù)具有很好的作用，皮膚屏障的修復(fù)體現(xiàn)在肌膚整體狀況的改善，這和單純的補(bǔ)水保濕是不同的。實(shí)施例14本發(fā)明的一種含牛磺酸螯合鈣的水劑可用于制備化妝品液體噴霧，以及其他具有保濕、抗炎、恢復(fù)皮膚屏障等作用的保健品、藥品的噴霧和涂抹劑。實(shí)施例15一種含牛磺酸螯合鈣的外用噴霧劑，其組成以質(zhì)量百分含量計(jì)包括：?；撬狎镶}0.5%，丙二醇2.5%，丙三醇0.5%，戊二醇4%，海藻糖0.3%，透明質(zhì)酸鈉0.05%，金縷梅3%，谷氨酸0.3%，山梨酸鉀0.2，積雪草0.5%，去離子水88.15%。實(shí)施例16一種含?；撬狎镶}的外用膏霜?jiǎng)?，其組成以質(zhì)量百分含量計(jì)包括：?；撬狎镶}1%，丙二醇3%，丙三醇1.3%，丁二醇3%，角鯊?fù)?.5%，銀耳多糖0.7%，ve1%，vc1.5%，脯氨酸0.3%，纈氨酸0.1%，山梨酸鉀0.1%，乳化劑1.5%，去離子水83%。實(shí)施例17一種含牛磺酸螯合鈣的外用制劑，其組成以質(zhì)量百分含量計(jì)包括：牛磺酸螯合鈣2%，丙二醇2%，戊二醇5%，角鯊?fù)?%，銀耳多糖0.6%，脯氨酸0.2%，亮氨酸0.2%，美白劑如熊果苷、谷胱甘肽、鞣花酸等1%，氮酮1.5%，乳化劑1.5%，防腐劑0.2%，去離子水83.8%。以上所述是體現(xiàn)本發(fā)明研究過(guò)程及結(jié)果的實(shí)施例，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明所述原理的前提下，還可以進(jìn)行若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)12