本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域。特別地，本發(fā)明涉及包含glp-1受體激動(dòng)劑和胰高血糖素受體激動(dòng)劑的組合物及其用于減肥和/或降脂的用途。
背景技術(shù)：
：隨著近年來(lái)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展帶來(lái)的飲食和生活方式的改變，肥胖人群的比例逐年上升。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新統(tǒng)計(jì)結(jié)果：全球肥胖和超重人口人數(shù)已由1980年的8.57億人激增至2013年的21億，占全球總?cè)丝诮种弧?014年，18歲及以上的成年人中有超過(guò)19億人超重，其中6億人肥胖。2014年，18歲及以上的成年人中有39％的人超重，13％的人肥胖。一度被視為高收入國(guó)家問(wèn)題的超重和肥胖，如今在中低收入國(guó)家呈上升的趨勢(shì)。超重和肥胖會(huì)升高血壓和增加血液中膽固醇含量，是包括糖尿病、心血管疾病和癌癥在內(nèi)的若干慢性病的主要風(fēng)險(xiǎn)因素。生活方式的干預(yù)(適當(dāng)?shù)倪\(yùn)動(dòng)以及健康的飲食)往往不能完全控制肥胖的發(fā)展。在這種情況下，藥物干預(yù)被認(rèn)為是適當(dāng)和必要的。奧利司他是目前全球唯一的otc減肥藥，全球超過(guò)40,000,000人服用并成功減重，是目前最暢銷(xiāo)的減肥產(chǎn)品。奧利司他是一種強(qiáng)效和長(zhǎng)效的特異性胃腸道脂肪酶抑制劑，通過(guò)直接阻斷人體對(duì)食物中脂肪的吸收，攝入的熱能和脂肪一旦小于消耗，體內(nèi)脂肪自然減少，從而達(dá)到減重的目的。但是，奧利司他具有多種缺點(diǎn)，例如，其減肥效果對(duì)某些人群不顯著，而且其需要每天隨餐或者餐后服用，患者依從性較差。而且，其也存在安全性風(fēng)險(xiǎn)。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局于2010年5月警告其存在可能引起嚴(yán)重肝損害的風(fēng)險(xiǎn)。因此，需要開(kāi)發(fā)其他機(jī)制的新的減肥藥物。胰高血糖素樣肽-1(glp-1)是一種進(jìn)食后由腸道l-細(xì)胞分泌的多肽激素，它能刺激胰島β細(xì)胞分泌胰島素，從而穩(wěn)定餐后血糖的波動(dòng)。外源給予glp-1能使ii型糖尿病患者的血糖水平正?；?。glp-1降低血糖的作用具有葡萄糖濃度依賴(lài)性，從而在調(diào)節(jié)血糖的同時(shí)，大大降低了低血糖的風(fēng)險(xiǎn)?；趃lp-1的藥物，例如byetta、victoza、albiglutide和dulaglutide，在近幾年成功上市，在糖尿病藥物中逐漸占據(jù)了重要的地位。臨床的應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，glp-1類(lèi)藥物在降低血糖的同時(shí)具有減肥的效果， 其機(jī)理可能是由于glp-1作用于胃腸道，延緩胃排空和腸道蠕動(dòng)的作用，以及glp-1作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，發(fā)揮抑制食欲，增加飽腹感等作用而達(dá)到減少攝食的目的。諾和諾德的victoza更是在2014年獲批增加了減肥這一適應(yīng)證。但是由于半衰期短，采用victoza治療的患者需要每天打一針，增加了長(zhǎng)期應(yīng)用患者的痛苦。胰高血糖素是29個(gè)氨基酸的肽，其對(duì)應(yīng)于前胰高血糖素原的53至81位氨基酸，并具有如下序列：his-ser-gln-gly-thr-phe-thr-ser-asp-tyr-ser-lys-tyr-leu-asp-ser-arg-arg-ala-gln-asp-phe-val-gln-trp-leu-met-asn-thr(seqidno:2)。胃泌酸調(diào)節(jié)素(oxyntomodulin，簡(jiǎn)稱(chēng)oxm)是37個(gè)氨基酸的肽，其包含胰高血糖素完整的29個(gè)氨基酸序列以及八肽羧基端延伸(前胰高血糖素原的82至89位氨基酸)。默克和zealand公司均在開(kāi)發(fā)胃泌酸調(diào)節(jié)素的衍生物用于減肥和降糖。默克開(kāi)發(fā)的一項(xiàng)用于減肥的雙激動(dòng)劑多肽項(xiàng)目已經(jīng)進(jìn)入臨床i期，zealand公司的zp2929尚在臨床前階段。胃泌酸調(diào)節(jié)素用于減肥雖然有著誘人的前景，但還是有它的不足之處。比如人體血漿內(nèi)胃泌酸調(diào)節(jié)素的半衰期非常短(8-12分鐘)；作為雙受體激動(dòng)劑，它的活性較差，激活兩個(gè)受體的能力均大大低于原肽，使得在人體的給藥劑量需要達(dá)到mg/kg的級(jí)別。而且，胃泌酸調(diào)節(jié)素針對(duì)兩個(gè)受體的激動(dòng)活性呈現(xiàn)一種固定的比例，不能調(diào)節(jié)，而這一比例未必是施展其減肥效應(yīng)的最佳比例。因此，如何針對(duì)這些問(wèn)題來(lái)優(yōu)化藥物設(shè)計(jì)，成為了眾多醫(yī)藥研發(fā)工作者的首要問(wèn)題。exendin-4是從墨西哥巨蜥蜴唾液中分離出來(lái)的一種含有39個(gè)氨基酸的多肽序列，與glp-1具有53％的同源性。研究表明，exendin-4同樣可以與glp-1受體結(jié)合，并在藥理上表現(xiàn)出與glp-1相類(lèi)似的激動(dòng)作用。非酒精性脂肪性肝病(nafld)是指除外酒精和其他明確的損肝因素所致的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪過(guò)度沉積為主要特征的臨床病理綜合征，與胰島素抵抗和遺傳易感性密切相關(guān)的獲得性代謝應(yīng)激性肝損傷。包括單純性脂肪肝(sfl)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)及其相關(guān)肝硬化。隨著肥胖及其相關(guān)代謝綜合征全球化的流行趨勢(shì)，非酒精性脂肪性肝病現(xiàn)已成為歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家和我國(guó)富裕地區(qū)慢性肝病的重要病因，普通成人nafld患病率10％～30％，其中10％～20％為nash，后者10年內(nèi)肝硬化發(fā)生率高達(dá)25％。非酒精性脂肪性肝病除可直接導(dǎo)致失代償期肝硬化、肝細(xì)胞癌和移 植肝復(fù)發(fā)外，還可影響其他慢性肝病的進(jìn)展，并參與2型糖尿病和動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病。代謝綜合征相關(guān)惡性腫瘤、動(dòng)脈硬化性心腦血管疾病以及肝硬化為影響非酒精性脂肪性肝病患者生活質(zhì)量和預(yù)期壽命的重要因素。為此，非酒精性脂肪性肝病是當(dāng)代醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的新挑戰(zhàn)，近期內(nèi)非酒精性脂肪性肝病對(duì)人類(lèi)健康的危害仍將不斷增加。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明人在研究中出人意料地發(fā)現(xiàn)，將親水性聚合物修飾的glp-1受體激動(dòng)劑和親水性聚合物修飾的胰高血糖素受體激動(dòng)劑同時(shí)使用，無(wú)論二者是連接在一起還是獨(dú)立存在，都表現(xiàn)出遠(yuǎn)好于單獨(dú)glp-1受體激動(dòng)劑的結(jié)果(例如減肥)。而且，在實(shí)現(xiàn)更高活性的同時(shí)，還大大延長(zhǎng)了其在體內(nèi)的半衰期，減少了給藥頻率。特別地，本發(fā)明的技術(shù)方案除了降低體重之外，還能改善肥胖動(dòng)物體內(nèi)的脂肪代謝紊亂的癥狀，長(zhǎng)期給藥后在動(dòng)物體內(nèi)明顯降低血清及肝臟甘油三酯和血清總膽固醇含量。為非酒精性脂肪肝的治療提供了一個(gè)新的可能性。在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了一種包含藥物有效量的glp-1受體激動(dòng)劑和胰高血糖素受體激動(dòng)劑的藥物組合物，其中所述glp-1受體激動(dòng)劑和所述胰高血糖素受體激動(dòng)劑分別獨(dú)立地與親水性聚合物形成綴合物或者所述glp-1受體激動(dòng)劑和所述胰高血糖素受體激動(dòng)劑一起與親水性聚合物形成綴合物。任選地，本發(fā)明的藥物組合物還包含藥學(xué)上可接受的載體。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物可用于預(yù)防或治療非酒精性脂肪性肝病、減肥和/或降脂。在另一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物可用于抑制對(duì)象食欲、降低血清總膽固醇含量和/或降低肝臟中甘油三酯含量。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物中所述glp-1受體激動(dòng)劑與所述胰高血糖素受體激動(dòng)劑通過(guò)一個(gè)親水性聚合物共價(jià)連接形成綴合物。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物中所述親水性聚合物的分子量為2kda至60kda，5kda至50kda，優(yōu)選10kda至40kda，更優(yōu)選20kda至40kda，特別地15kda至30kda，更特別地21kda至29kda。特別地，所述聚合物(例如，peg)的分子量為約2kda至約50kda，優(yōu)選約3kda至約40kda，更優(yōu)選約4kda至約35kda，還優(yōu)選約5kda 至約30kda，例如約5kda、約10kda、約15kda、約20kda、21kda、22kda、23kda、24kda、約25kda、26kda、27kda、28kda、29kda、約30kda、約35kda、約40kda和約45kda以及上述各分子量值之間的任意值。在一些實(shí)施方案中，所述glp-1受體激動(dòng)劑選自exendin-4、exendin-3和glp-1。特別地，所述glp-1受體激動(dòng)劑選自pb-105(例如其具有如seqidno:1所示序列)。在一些實(shí)施方案中，所述胰高血糖素受體激動(dòng)劑是胰高血糖素。特別地，所述胰高血糖素是pb-702(例如其具有如seqidno:3所示序列，并且其在第12位賴(lài)氨酸側(cè)鏈氨基通過(guò)酰胺鍵連接有半胱氨酸基團(tuán))、pb-703(例如其具有如seqidno:4所示序列，即其中第24位谷氨酰胺替換為半胱氨酸)、pb-740(例如其具有如seqidno:5所示序列，即其中第29位氨基酸后添加了一個(gè)半胱氨酸殘基)或pb-741(例如其具有如seqidno:6所示序列，并且其中第24位谷氨酰胺的側(cè)鏈“-co-nh2”被修飾成“-co-nh-ch2ch2-sh”)。在一些實(shí)施方案中，所述胰高血糖素的序列相比于野生型胰高血糖素序列在一個(gè)或更多個(gè)位點(diǎn)上被修飾。特別地，所述修飾是在賴(lài)氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸或天冬酰胺的側(cè)鏈上引入可用于偶聯(lián)的官能團(tuán)(如巰基、疊氮基、馬來(lái)酰亞胺基、氨基、炔基、乙烯基砜、鹵素或醛基)，例如在seqidno:2的12位賴(lài)氨酸的側(cè)鏈上添加半胱氨酸、在seqidno:2的12位賴(lài)氨酸的側(cè)鏈上添加巰基乙酸、在seqidno:2的12位賴(lài)氨酸的側(cè)鏈上添加巰基丙酸、在seqidno:2的24位谷氨酰胺的側(cè)鏈上添加巰基乙基、在seqidno:2的24位谷氨酰胺的側(cè)鏈上添加巰基丙基以及在seqidno:2的24位谷氨酰胺的側(cè)鏈上添加巰基丙酸。另外的或者作為替代的，所述修飾為半胱氨酸添加或替換，例如seqidno:2的24位谷氨酰胺替換為半胱氨酸、seqidno:2的12位賴(lài)氨酸替換為半胱氨酸和/或seqidno:2的29位之后添加半胱氨酸。在一些實(shí)施方案中，所述親水性聚合物選自以下聚合物：多糖、多肽、聚亞烷基二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚唑啉、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、馬來(lái)酸丙烯酸共聚物、聚酯、聚縮醛、聚原酸酯、聚碳酸酯、聚亞氨碳酸酯、聚酰胺、乙烯基醚馬來(lái)酸酐共聚物、苯乙烯馬來(lái)酸酐共聚物以及以上聚合物的共聚物。特別地， 所述親水性聚合物選自聚亞烷基二醇，例如聚乙二醇(peg)。在一些實(shí)施方案中，所述glp-1受體激動(dòng)劑和所述胰高血糖素受體激動(dòng)劑的摩爾比為1:0.001至1:1000，優(yōu)選1:0.01至1:100，更優(yōu)選1:0.03至1:50，最優(yōu)選1:0.1至1:30，特別地1:0.5至1:20，更特別地1:1至1:10，例如1:0.1、1:0.2、1:0.3、1:0.4、1:0.5、1:0.6、1:0.7、1:0.8、1:0.9、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30以及上述各比例之間的任意值。在又一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含peg化的glp-1受體激動(dòng)劑和peg化的胰高血糖素受體激動(dòng)劑。特別地，所述peg化的glp-1受體激動(dòng)劑選自：pb-119、pb-120和pb-107，以及所述peg化的胰高血糖素受體激動(dòng)劑選自：pb-707、pb-708、pb-709、pb-713、pb-721和pb-722。在另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了包含glp-1受體激動(dòng)劑和胰高血糖素受體激動(dòng)劑的綴合物，其中所述glp-1受體激動(dòng)劑和所述胰高血糖素受體激動(dòng)劑通過(guò)親水性聚合物形成綴合物。在本發(fā)明的綴合物中，glp-1受體激動(dòng)劑和/或胰高血糖素受體激動(dòng)劑與親水性聚合物直接或者通過(guò)接頭相綴合。在又一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了具有通式x1-z1-y-z2-x2的綴合物，其中x1表示glp-1受體激動(dòng)劑，x2表示胰高血糖素受體激動(dòng)劑，y表示親水性聚合物，z1表示第一接頭，和z2表示第二接頭。特別地，本發(fā)明提供了具有式exendin-4–z1–peg–z2–胰高血糖素的綴合物，例如具有式pb105-peg-pb703的綴合物(如pb-716、pb-717、pb-718、pb-719、pb-720)。在本發(fā)明中，所述接頭、所述第一接頭和/或所述第二接頭分別獨(dú)立地包含反應(yīng)性基團(tuán)(例如馬來(lái)酰亞胺、鹵素、乙烯基砜、二硫鍵、巰基、醛基、羰基、o-取代羥氨、活性酯、烯基、炔基、疊氮基或其他具有高化學(xué)反應(yīng)活性的基團(tuán))的活化形成的基團(tuán)。更優(yōu)選地，所述反應(yīng)性基團(tuán)選自：馬來(lái)酰亞胺、鹵素、乙烯基砜和二硫鍵。在本發(fā)明中，所述接頭、所述第一接頭和/或所述第二接頭分別獨(dú)立地包含被活化的反應(yīng)性基團(tuán)(例如馬來(lái)酰亞胺、鹵素、乙烯基砜、二硫鍵、 巰基、醛基、羰基、o-取代羥氨、活性酯、烯基、炔基、疊氮基或其他具有高化學(xué)反應(yīng)活性的基團(tuán))。更優(yōu)選地，所述反應(yīng)性基團(tuán)選自：馬來(lái)酰亞胺、鹵素、乙烯基砜和二硫鍵。在一些實(shí)施方案中，所述親水性聚合物是被活化的從而與所述glp-1受體激動(dòng)劑和所述胰高血糖素受體激動(dòng)劑相綴合，優(yōu)選地所述聚合物為經(jīng)修飾的帶有反應(yīng)性基團(tuán)的聚合物，使得所述聚合物通過(guò)所述反應(yīng)性基團(tuán)的活化與所述glp-1受體激動(dòng)劑和所述胰高血糖素受體激動(dòng)劑相綴合，更優(yōu)選地所述反應(yīng)性基團(tuán)選自：馬來(lái)酰亞胺、鹵素、乙烯基砜、二硫鍵、巰基、醛基、羰基、o-取代羥氨、活性酯、烯基、炔基、疊氮基以及其他具有高化學(xué)反應(yīng)活性的基團(tuán)。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含選自下列的項(xiàng)：pb-721和pb-119之組合、pb-722和pb-119之組合、以及pb-708和pb-120之組合；或者其包含選自下列的項(xiàng)：pb-716、pb-717、pb-718、pb-719和pb-720。具體地，pb-119、pb-120、pb-707、pb-708、pb-709、pb-713、pb-716、pb-717、pb-718、pb-719、pb-720、pb-721、pb-722的結(jié)構(gòu)如表1中所示。在又一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了藥盒，其包含根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物或的綴合物，以及任選地包含使用說(shuō)明書(shū)。在又一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了本發(fā)明的組合物或本發(fā)明的綴合物在制備用于預(yù)防或治療非酒精性脂肪性肝病、減肥和/或降脂的藥物中的用途。在又一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了本發(fā)明的組合物或本發(fā)明的綴合物在制備用于抑制對(duì)象食欲、降低血清總膽固醇含量和/或降低肝臟中甘油三酯含量的藥物中的用途。在又一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了如上所述的組合物或綴合物，其用于預(yù)防或治療非酒精性脂肪性肝病、減肥和/或降脂。在又一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了如上所述的組合物或綴合物，其用于抑制對(duì)象食欲、降低血清總膽固醇含量和/或降低肝臟中甘油三酯含量。在又一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了用于預(yù)防或治療非酒精性脂肪性肝病、 減肥和/或降脂的方法，其包括向有此需要的對(duì)象施用根據(jù)本發(fā)明的組合物或綴合物。在又一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了用于抑制對(duì)象食欲、降低血清總膽固醇含量和/或降低肝臟中甘油三酯含量的方法，其包括向有此需要的對(duì)象施用根據(jù)本發(fā)明的組合物或綴合物。本發(fā)明人還出人意料地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的組合物和綴合物大大降低了維持所需效果需要的給藥頻率。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的綴合物每至少30天、每至少25天、每至少20天、每至少15天、每至少10天、每至少9天、每至少8天、每至少7天、每至少6天、每至少5天、每至少4天、每至少3天、每至少2天、每至少1天一次向所述對(duì)象施用。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的綴合物每至多30天、每至多25天、每至多20天、每至多15天、每至多10天、每至多9天、每至多8天、每至多7天、每至多6天、每至多5天、每至多4天、每至多3天、每至多2天、每至多1天一次向所述對(duì)象施用。本發(fā)明的組合物和綴合物大大降低了給藥頻率，增加了對(duì)象的順從性。本發(fā)明的組合物和綴合物可用于防止體重增加或促進(jìn)體重減輕?！胺乐埂笔侵概c不進(jìn)行治療相比抑制或減少體重增加，而不必然指體重增加的完全停止。本發(fā)明的組合物和綴合物可引起食物攝取的減少和/或能量消耗的增加，從而導(dǎo)致對(duì)體重的可見(jiàn)作用。不依賴(lài)于其對(duì)體重的作用，本發(fā)明的組合物和綴合物可對(duì)葡萄糖耐受和循環(huán)膽固醇水平具有有益作用(例如，可降低循環(huán)ldl水平并提高h(yuǎn)dl/ldl比值)。因此，本發(fā)明化合物可用于直接或間接治療由體重超重引起或以其為特征的任何病癥，例如治療和/或預(yù)防肥胖癥、病態(tài)肥胖、肥胖相關(guān)炎癥、肥胖相關(guān)膽囊疾病、肥胖引起的睡眠呼吸暫停。本發(fā)明的組合物和綴合物還可用于治療代謝綜合征、胰島素抗性、葡萄糖不耐受、2型糖尿病、高血壓、致動(dòng)脈粥樣化血脂異常(atherogenicdyslipidimia)、動(dòng)脈粥樣硬化、動(dòng)脈硬化、冠心病或中風(fēng)。它們?cè)谶@些病癥中的作用可由它們對(duì)體重的作用引起或與其有關(guān)，或者可不依賴(lài)于其對(duì)體重的作用。附圖說(shuō)明圖1顯示了pb-716純化圖譜。圖2顯示了pb-717純化圖譜。圖3顯示了pb-718純化圖譜。圖4顯示了pb-719純化圖譜。圖5顯示了pb-720純化圖譜。圖6顯示了pb-716系列化合物單次給藥對(duì)dio小鼠體重的影響。圖7顯示了pb-716系列化合物連續(xù)給藥對(duì)dio小鼠累積攝食的影響。圖8顯示了14天連續(xù)給藥后給藥各組累積攝食相對(duì)模型對(duì)照組下降率。圖9顯示了pb-716系列化合物連續(xù)給藥對(duì)dio小鼠體重的影響。圖10顯示了pb-716系列化合物連續(xù)給藥后dio小鼠體重下降率。圖11顯示了pb-716系列化合物長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠隨機(jī)血糖的影響。圖12顯示了化合物pb-718、pb-119及復(fù)方(pb-708+pb-120)連續(xù)給藥對(duì)dio小鼠體重的影響。圖13顯示了pb-718、pb-119及復(fù)方(pb-708+pb-120)連續(xù)給藥后dio小鼠體重下降率。圖14顯示了化合物pb-718、pb-119及復(fù)方(pb-708+pb-120)長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠累積攝食的影響。圖15顯示了14天連續(xù)給藥后累積攝食相對(duì)模型對(duì)照組下降率。圖16顯示了pb-718、pb-119及復(fù)方(pb-708+pb-120)連續(xù)給藥后對(duì)dio小鼠隨機(jī)血糖的影響。圖17顯示了長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠隨機(jī)體重的影響。圖18顯示了長(zhǎng)期給藥后dio小鼠隨機(jī)體重下降率。圖19顯示了長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠攝食的影響。圖20顯示了長(zhǎng)期給藥后dio小鼠累積攝食量下降率。圖21顯示了長(zhǎng)期用藥對(duì)dio小鼠血清甘油三脂水平的影響。圖22顯示了長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠肝臟甘油三酯含量的影響。圖23顯示了長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠血清總膽固醇含量的影響。具體實(shí)施方式定義本文中使用的術(shù)語(yǔ)“接頭”、“第一接頭”、“第二接頭”等表示在本發(fā)明中將聚合物和生物活性分子相連接的基團(tuán)、片段、化學(xué)鍵或者任何起到連接作用的實(shí)體(entity)。在本發(fā)明中，所述接頭可以包含活化基團(tuán)(例如馬來(lái)酰亞胺、鹵素、乙烯基砜、二硫鍵、巰基、醛基、羰基、o-取代羥氨、活性酯、烯基、炔基、疊氮基或其他具有高化學(xué)反應(yīng)活性的基團(tuán))，例如mal、ppmal等。本文中所述的“聚乙二醇”具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義，既包括聚乙二醇(含不同結(jié)構(gòu)的如線性、支鏈、星型等分叉結(jié)構(gòu))本身，也包括其末端修飾的衍生物，除非另有明確說(shuō)明。例如，所述peg是甲氧基聚乙二醇(mpeg)。在本文中，如果沒(méi)有特別指明，所述聚乙二醇(peg)既包括末端基團(tuán)為羥基也包括末端為其它基團(tuán)的類(lèi)型。所述其它基團(tuán)包括但不限于烷氧基、環(huán)烷氧基、環(huán)烷基氧基、烯基、芳氧基或芳烷基氧基。這些peg分子類(lèi)型都是現(xiàn)有技術(shù)中已知的，并且在多肽修飾中常規(guī)使用。peg側(cè)鏈可以是線性的、分枝的、分叉的或者由多個(gè)臂組成，不同的聚乙二醇可以具有不同的聚合鏈長(zhǎng)度和聚合結(jié)構(gòu)。本文中所述“綴合物”，是指具有生物活性的分子(例如glp-1受體激動(dòng)劑和胰高血糖素受體激動(dòng)劑)與聚乙二醇分子直接或者通過(guò)接頭共價(jià)連接后形成的產(chǎn)物。此外，對(duì)于聚合物如聚乙二醇來(lái)說(shuō)，有多種方法測(cè)定其分子量。由于聚合物是由一定分布范圍內(nèi)的不同聚合度的分子構(gòu)成，一般用平均分子量表示聚合物的分子量。具體來(lái)說(shuō)可以是數(shù)均分子量，或重均分子量。盡管在聚合物的聚合度差異較大時(shí)，數(shù)均分子量和重均分子量可能有一些偏差，但是對(duì)于分布范圍較窄的聚合物來(lái)說(shuō)，二者趨于相等。對(duì)于本文提及的聚合物如聚乙二醇，在提及其分子量時(shí)，既可以是重均分子量，也可以是數(shù)均分子量，優(yōu)選數(shù)均分子量。本文所述的“glp-1受體激動(dòng)劑”是指具有g(shù)lp-1受體激動(dòng)作用的物質(zhì)，例如野生型glp-1及其變體(例如glp-1-(7-37)和glp-1-(7-36)酰 胺)、野生型exendin-4及其變體、野生型exendin-3及其變體。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的glp-1受體激動(dòng)劑與親水性聚合物形成的綴合物是長(zhǎng)效的。在另一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的glp-1受體激動(dòng)劑和胰高血糖素受體激動(dòng)劑一起與親水性聚合物形成的綴合物是長(zhǎng)效的。本文所述的“胰高血糖素受體激動(dòng)劑”是指具有胰高血糖素受體激動(dòng)作用的物質(zhì)，例如野生型胰高血糖素及其變體。例如，所述胰高血糖素是pb-702(例如其具有如seqidno:3所示序列，并且其在第12位賴(lài)氨酸側(cè)鏈氨基通過(guò)酰胺鍵連接有半胱氨酸基團(tuán))、pb-703(例如其具有如seqidno:4所示序列，即其中第24位谷氨酰胺替換為半胱氨酸)、pb-740(例如其具有如seqidno:5所示序列，即其中第29位氨基酸后添加了一個(gè)半胱氨酸殘基)或pb-741(例如其具有如seqidno:6所示序列，并且其中第24位谷氨酰胺的側(cè)鏈“-co-nh2”被修飾成“-co-nh-ch2ch2-sh”)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的胰高血糖素受體激動(dòng)劑與親水性聚合物形成的綴合物是長(zhǎng)效的。本文所述的“exendin-4”是指在毒蜥的唾液分泌物中發(fā)現(xiàn)的多肽(j.biol.chem,265,20259-20262,1990；j.biol.chem,267,7402-7405,1992)以及基本上保持了glp-1受體激動(dòng)作用的其變體。野生型exendin-4與glp-1(7-36)具有高度同源性(53％)，其序列為his-gly-glu-gly-thr-phe-thr-ser-asp-leu-ser-lys-gln-met-glu-glu-glu-ala-val-arg-leu-phe-ile-glu-trp-leu-lys-asn-gly-gly-pro-ser-ser-gly-ala-pro-pro-pro-ser，seqidno:7)。本文所述的“胰高血糖素”是指對(duì)應(yīng)于前胰高血糖素原的53至81位氨基酸的多肽(具有如seqidno:2所示的序列：his-ser-gln-gly-thr-phe-thr-ser-asp-tyr-ser-lys-tyr-leu-asp-ser-arg-arg-ala-gln-asp-phe-val-gln-trp-leu-met-asn-thr)以及基本上保持了胰高血糖素受體激動(dòng)作用的其變體。本文使用的術(shù)語(yǔ)“長(zhǎng)效”在用于受體激動(dòng)劑時(shí)，意指其給藥頻率至多1天1次，優(yōu)選至數(shù)天，例如1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、15天、20天、25天、30天、40天、50天或更長(zhǎng)。術(shù)語(yǔ)例如“包含”、“含”、“含有”和“包括”不意在限制。此外，除非另有說(shuō)明，沒(méi)有數(shù)詞修飾時(shí)包括復(fù)數(shù)形式，以及“或”、“或者”意指“和/或”。 除非本文另有定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)的意思與本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的相同。本文中所述的“變體”和“功能性變體”可互換使用，其是指經(jīng)過(guò)修飾或改變的生物學(xué)分子，優(yōu)選地所述變體仍保持其生物學(xué)活性。例如，多肽的“變體”是指通過(guò)一個(gè)或多個(gè)取代、缺失、插入、融合、截短或其任意組合在氨基酸序列上有所不同的多肽。變體多肽可以是完全功能性的或者可缺乏一種或多種活性的功能。完全功能性變體可含有例如僅僅保守性改變或非關(guān)鍵殘基或非關(guān)鍵區(qū)域的改變。功能性變體還可包含相似氨基酸的替換，其導(dǎo)致功能未改變或不顯著的改變。除非另有定義，本文使用的所有科技術(shù)語(yǔ)具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解的相同含義。關(guān)于本領(lǐng)域的定義及術(shù)語(yǔ)，專(zhuān)業(yè)人員具體可參考currentprotocolsinmolecularbiology(ausubel)。氨基酸殘基的縮寫(xiě)是本領(lǐng)域中所用的指代20個(gè)常用l-氨基酸之一的標(biāo)準(zhǔn)3字母和/或1字母代碼。本文使用的術(shù)語(yǔ)“藥物組合物”表示組合在一起以實(shí)現(xiàn)某種特定目的的至少一種藥物以及任選地可藥用載體或輔料的組合。在某些實(shí)施方案中，所述藥物組合物包括在時(shí)間和/或空間上分開(kāi)的組合，只要其能夠共同作用以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。例如，所述藥物組合物中所含的成分(例如根據(jù)本發(fā)明的綴合物)可以以整體施用于對(duì)象，或者分開(kāi)施用于對(duì)象。當(dāng)所述藥物組合物中所含的成分分開(kāi)地施用于對(duì)象時(shí)，所述成分可以同時(shí)或依次施用于對(duì)象。優(yōu)選地，所述可藥用載體是水、緩沖水溶液、、等滲鹽溶液如pbs(磷酸鹽緩沖液)、葡萄糖、甘露醇、右旋葡萄糖、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、纖維素、碳酸鎂、0.3％甘油、透明質(zhì)酸、乙醇或聚亞烷基二醇如聚丙二醇、甘油三酯等。所用可藥用載體的類(lèi)型尤其依賴(lài)于根據(jù)本發(fā)明的組合物是否配制為用于口服、鼻、皮內(nèi)、皮下、肌內(nèi)或靜脈施用。根據(jù)本發(fā)明的組合物可包含潤(rùn)濕劑、乳化劑或緩沖液物質(zhì)作為添加劑。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可通過(guò)任何適宜的途徑施用，例如可口服、鼻、皮內(nèi)、皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)施用。本文使用的“藥物有效量”、“有效量”是指足以顯示其對(duì)于所施用對(duì)象益處的劑量。施用的實(shí)際量，以及施用的速率和時(shí)間過(guò)程會(huì)取決于所治療者的自身情況和嚴(yán)重程度。治療的處方(例如對(duì)劑量的決定等)最終是全科醫(yī)生及其它醫(yī)生的責(zé)任并依賴(lài)其做決定，通?？紤]所治療的疾病、患者個(gè)體的情況、遞送部位、施用方法以及對(duì)于醫(yī)生來(lái)說(shuō)已知的其它因素。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“對(duì)象”是指哺乳動(dòng)物，如人類(lèi)，但也可以是其它動(dòng)物，如野生動(dòng)物(如蒼鷺、鸛、鶴等)，家畜(如鴨、鵝等)或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物(如猩猩、猴子、大鼠、小鼠、兔子、豚鼠、土撥鼠、地松鼠等)。盡管本發(fā)明的廣義范圍所示的數(shù)字范圍和參數(shù)涵蓋近似值，但是具體實(shí)施例中所示的數(shù)值盡可能準(zhǔn)確的進(jìn)行記載。然而，任何數(shù)值本來(lái)就必然含有一定的誤差，其是由它們各自的測(cè)量中存在的標(biāo)準(zhǔn)偏差所致。另外，本文公開(kāi)的所有范圍應(yīng)理解為涵蓋其中包含的任何和所有子范圍。例如記載的“1至10”的范圍應(yīng)認(rèn)為包含最小值1和最大值10之間(包含端點(diǎn))的任何和所有子范圍；也就是說(shuō)，所有以最小值1或更大起始的子范圍，例如1至6.1，以及以最大值10或更小終止的子范圍，例如5.5至10。另外，任何稱(chēng)為“并入本文”的參考文獻(xiàn)應(yīng)理解為以其整體并入。另外應(yīng)注意，如本說(shuō)明書(shū)中所使用的，單數(shù)形式包括其所指對(duì)象的復(fù)數(shù)形式，除非清楚且明確的限于一個(gè)所指對(duì)象。術(shù)語(yǔ)“或”可與術(shù)語(yǔ)“和/或”互換使用，除非上下文另有清楚指明。提供了以下實(shí)施例以證明并進(jìn)一步解釋本發(fā)明的一些優(yōu)選的實(shí)施方式和方面，不應(yīng)被解釋為限制其范圍。表1.本發(fā)明所涉及的生物活性分子注：下劃線顯示修飾實(shí)施例1：pb-119(pb-105與mpeg-ppmal-23kd的綴合物)的制備稱(chēng)取10mgpb-105(購(gòu)買(mǎi)于成都凱捷生物醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)和65mg的mpeg23kd–ppmal(派格生物醫(yī)藥公司生產(chǎn))于50ml玻璃容器瓶中(pb-105與peg摩爾比為1:1.2)，用5ml0.2mph6.5的pbs緩沖液溶解，并在室溫(25℃)下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，并用鹽酸調(diào)ph至4.0終止反應(yīng)，4℃下放置純化備用。將上述反應(yīng)液用超純水稀釋5倍后，并用醋酸調(diào)ph至4.0，上樣于用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡過(guò)3-4個(gè)柱體積的10mlmacrocapsp的陽(yáng)離子交換柱，上樣完后用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)洗脫過(guò)量的peg，然后用洗脫液b(20mmph4.0hac-naac+1mnacl)洗脫10個(gè)柱體積梯度洗脫到30％，等體積收集洗脫峰，并用hplc分析各收集組份，將純度大于95％組份混合后定量，為后續(xù)藥效試驗(yàn)提供樣品。實(shí)施例2：pb-120(pb-105與mpeg-ppmal-25kd的綴合物)的制備稱(chēng)取10mgpb-105(購(gòu)買(mǎi)于成都凱捷生物醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)和72mg的mpeg25kd–ppmal(派格生物醫(yī)藥公司生產(chǎn))于50ml玻璃容器瓶中(pb-105與peg摩爾比為1:1.2)，用5ml0.2mph6.5的pbs緩沖液溶解，并在室溫(25℃)下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，并用鹽酸調(diào)ph至4.0終止反應(yīng)，4℃下放置純化備用。將上述反應(yīng)液用超純水稀釋5倍后，并用醋酸調(diào)ph至4.0，上樣于用 緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡過(guò)3-4個(gè)柱體積的10mlmacrocapsp的陽(yáng)離子交換柱，上樣完后用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)洗脫過(guò)量的peg，然后用洗脫液b(20mmph4.0hac-naac+1mnacl)洗脫10個(gè)柱體積梯度洗脫到30％，等體積收集洗脫峰，并用hplc分析各收集組份，將純度大于95％組份混合后定量，為后續(xù)藥效試驗(yàn)提供樣品。實(shí)施例3：pb-107(pb-105與mpeg-ppmal-30kd的綴合物)的制備稱(chēng)取10mgpb-105(購(gòu)買(mǎi)于成都凱捷生物醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)和86mg的mpeg30kd–ppmal(派格生物醫(yī)藥公司生產(chǎn))于50ml玻璃容器瓶中(pb-105與peg摩爾比為1:1.2)，用5ml0.2mph6.5的pbs緩沖液溶解，并在室溫(25℃)下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，并用鹽酸調(diào)至ph4.0終止反應(yīng)，4℃下放置純化備用。將上述反應(yīng)液用超純水稀釋5倍后，并用醋酸調(diào)ph至4.0，上樣于用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡過(guò)3-4個(gè)柱體積的10mlmacrocapsp的陽(yáng)離子交換柱，上樣完后用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)洗脫過(guò)量的peg，然后用洗脫液b(20mmph4.0hac-naac+1mnacl)洗脫10個(gè)柱體積梯度洗脫到30％，等體積收集洗脫峰，并用hplc分析各收集組份，將純度大于95％組份混合后定量，為后續(xù)藥效試驗(yàn)提供樣品。實(shí)施例4：pb-707(pb-703與mpeg-ppmal-23kd的綴合物)的制備稱(chēng)取10mgpb-703(購(gòu)買(mǎi)于成都凱捷生物醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)和100mg的mpeg-ppmal-23kd(派格生物醫(yī)藥公司生產(chǎn))于50ml玻璃容器瓶中(pb-703與peg摩爾比為1:1.5)，用5ml0.2mph6.5的pbs緩沖液溶解，并在室溫(25℃)下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，并用鹽酸調(diào)至ph4.0終止反應(yīng)，4℃下放置純化備用。將上述反應(yīng)液用超純水稀釋5倍后，并用醋酸調(diào)ph至4.0，上樣于用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡過(guò)3-4個(gè)柱體積的10mlmacrocapsp的陽(yáng)離子交換柱，上樣完后用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)洗脫過(guò)量的peg，然后用洗脫液b(20mmph4.0hac-naac+1mnacl)洗脫15個(gè)柱體積梯度洗脫到30％，等體積收集洗脫峰，并用hplc分析各收集組份，將純度大于95％組份混合后定量， 為后續(xù)藥效試驗(yàn)提供樣品。實(shí)施例5：pb-708(pb-703與mpeg-ppmal-25kd的綴合物)的制備稱(chēng)取10mgpb-703(購(gòu)買(mǎi)于成都凱捷生物醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)和110mg的mpeg-ppmal-25kd(派格生物醫(yī)藥公司生產(chǎn))于50ml玻璃容器瓶中(pb-703與peg摩爾比為1:1.5)，用5ml0.2mph6.5的pbs緩沖液溶解，并在室溫(25℃)下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，并用鹽酸調(diào)至ph4.0終止反應(yīng)，4℃下放置純化備用。將上述反應(yīng)液用超純水稀釋5倍后，并用醋酸調(diào)ph至4.0，上樣于用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡過(guò)3-4個(gè)柱體積的10mlmacrocapsp的陽(yáng)離子交換柱，上樣完后用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)洗脫過(guò)量的peg，然后用洗脫液b(20mmph4.0hac-naac+1mnacl)洗脫15個(gè)柱體積梯度洗脫到30％，等體積收集洗脫峰，并用hplc分析各收集組份，將純度大于95％組份混合后定量，為后續(xù)藥效試驗(yàn)提供樣品。實(shí)施例6：pb-709(pb-703與mpeg-ppmal-30kd的綴合物)的制備稱(chēng)取10mgpb-703(購(gòu)買(mǎi)于成都凱捷生物醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)和130mg的mpeg-ppmal-30kd(派格生物醫(yī)藥公司生產(chǎn))于50ml玻璃容器瓶中(pb-703與peg摩爾比為1:1.5)，用5ml0.2mph6.5的pbs緩沖液溶解，并在室溫(25℃)下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，并用鹽酸調(diào)至ph4.0終止反應(yīng)，4℃下放置純化備用。將上述反應(yīng)液用超純水稀釋5倍后，并用醋酸調(diào)ph至4.0，上樣于用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡過(guò)3-4個(gè)柱體積的10mlmacrocapsp的陽(yáng)離子交換柱，上樣完后用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)洗脫過(guò)量的peg，然后用洗脫液b(20mmph4.0hac-naac+1mnacl)洗脫15個(gè)柱體積梯度洗脫到30％，等體積收集洗脫峰，并用hplc分析各收集組份，將純度大于95％組份混合后定量，為后續(xù)藥效試驗(yàn)提供樣品。實(shí)施例7：pb-713(pb-703與mpeg-ppmal-40kd的綴合物)的制備稱(chēng)取10mgpb-703(購(gòu)買(mǎi)于成都凱捷生物醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)和 175mg的mpeg-ppmal-40kd(派格生物醫(yī)藥公司生產(chǎn))于50ml玻璃容器瓶中(pb-703與peg摩爾比為1:1.5)，用5ml0.2mph6.5的pbs緩沖液溶解，并在室溫(25℃)下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，并用鹽酸調(diào)至ph4.0終止反應(yīng)，4℃下放置純化備用。將上述反應(yīng)液用超純水稀釋5倍后，并用醋酸調(diào)ph至4.0，上樣于用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡過(guò)3-4個(gè)柱體積的10mlmacrocapsp的陽(yáng)離子交換柱，上樣完后用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)洗脫過(guò)量的peg，然后用洗脫液b(20mmph4.0hac-naac+1mnacl)洗脫15個(gè)柱體積梯度洗脫到30％，等體積收集洗脫峰，并用hplc分析各收集組份，將純度大于95％組份混合后定量，為后續(xù)藥效試驗(yàn)提供樣品。實(shí)施例8：pb-721(pb-740與mpeg-ppmal-23kd的綴合物)的制備稱(chēng)取10mgpb-740(購(gòu)買(mǎi)于中肽生化有限公司)和96mg的mpeg-ppmal-23kd(派格生物醫(yī)藥公司生產(chǎn))于50ml玻璃容器瓶中(pb-740與peg摩爾比為1:1.5)，用5ml0.2mph6.5的pbs緩沖液溶解，并在室溫(25℃)下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，并用鹽酸調(diào)至ph4.0終止反應(yīng)，4℃下放置純化備用。將上述反應(yīng)液用超純水稀釋5倍后，并用醋酸調(diào)ph至4.0，上樣于用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡過(guò)3-4個(gè)柱體積的10mlmacrocapsp的陽(yáng)離子交換柱，上樣完后用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)洗脫過(guò)量的peg，然后用洗脫液b(20mmph4.0hac-naac+1mnacl)洗脫15個(gè)柱體積梯度洗脫到30％，等體積收集洗脫峰，并用hplc分析各收集組份，將純度大于95％組份混合后定量，為后續(xù)藥效試驗(yàn)提供樣品。實(shí)施例9：pb-722(pb-741與mpeg-ppmal-23kd的綴合物)的制備稱(chēng)取10mgpb-741(購(gòu)買(mǎi)于中肽生化有限公司)和97mg的mpeg-ppmal-23kd(派格生物醫(yī)藥公司生產(chǎn))于100ml玻璃容器瓶中(pb-741與peg摩爾比為1:1.5)，用5ml0.2mph6.5的pbs緩沖液溶解，并在室溫(25℃)下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，并用鹽酸調(diào)至ph4.0終止反應(yīng)，4℃下放置純化備用。將上述反應(yīng)液用超純水稀釋5倍后，并用醋酸調(diào)ph至4.0，上樣于用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡過(guò)3-4個(gè)柱體積的10mlmacrocapsp的陽(yáng)離子交換柱，上樣完后用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)洗脫過(guò)量的peg，然后用洗脫液b(20mmph4.0hac-naac+1mnacl)洗脫15個(gè)柱體積梯度洗脫到300％，等體積收集洗脫峰，并用hplc分析各收集組份，將純度大于95％組份混合后定量，為后續(xù)藥效試驗(yàn)提供樣品。實(shí)施例10：pb-716(pb-703和pb-105與peg-(ppmal)2-40kd的綴合物)的制備稱(chēng)取20mgpb-105(購(gòu)買(mǎi)于成都凱捷生物醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)、21mgpb-703(購(gòu)買(mǎi)于成都凱捷生物醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)和158.6mg的peg-(ppmal)2-40kd(派格生物醫(yī)藥公司生產(chǎn))于50ml玻璃容器瓶中(peg:pb-105:pb-703投料摩爾比為1:1.2:1.5)，用:10ml0.2mph6.5的pbs緩沖液溶解，并在室溫(25℃)下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，并用鹽酸調(diào)至ph4.0終止反應(yīng)，4℃下放置純化備用。將上述反應(yīng)液用超純水稀釋5倍后，并用醋酸調(diào)ph至4.0，上樣于用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡過(guò)3-4個(gè)柱體積的20mlmacrocapsp的陽(yáng)離子交換柱，上樣完后用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡3-4個(gè)柱體積，然后用洗脫液b(20mmph4.0hac-naac+1mnacl)洗脫30個(gè)柱體積梯度洗脫到40％，等體積收集洗脫峰，并用hplc分析各收集組份，將純度大于95％目標(biāo)物組份混合后定量，為后續(xù)藥效試驗(yàn)提供樣品。pb-716的純化圖譜在圖1中示出。實(shí)施例11：pb-717(pb-703和pb-105與peg-(ppmal)2-30kd的綴合物)的制備稱(chēng)取20mgpb-105(購(gòu)買(mǎi)于成都凱捷生物醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)、21mgpb-703(購(gòu)買(mǎi)于成都凱捷生物醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)和119mg的peg-(ppmal)2-30kd(派格生物醫(yī)藥公司生產(chǎn))于100ml玻璃容器瓶中(peg:pb-105:pb-703投料摩爾比為1:1.2:1.5)，用:10ml0.2mph6.5的pbs緩沖液溶解，并在室溫(25℃)下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，并用鹽酸調(diào)至ph4.0終止反應(yīng)，4℃下放置純化備用。將上述反應(yīng)液用超純水稀釋5倍后，并用醋酸調(diào)ph至4.0，上樣于用 緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡過(guò)3-4個(gè)柱體積的20mlmacrocapsp的陽(yáng)離子交換柱，上樣完后用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡3-4個(gè)柱體積，然后用洗脫液b(20mmph4.0hac-naac+1mnacl)洗脫30個(gè)柱體積梯度洗脫到40％，等體積收集洗脫峰，并用hplc分析各收集組份，將純度大于95％目標(biāo)物組份混合后定量，為后續(xù)藥效試驗(yàn)提供樣品。pb-717的純化圖譜在圖2中示出。實(shí)施例12：pb-718(pb-703和pb-105與peg-(ppmal)2-25kd的綴合物)的制備稱(chēng)取20mgpb-105(購(gòu)買(mǎi)于成都凱捷生物醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)、21mgpb-703(購(gòu)買(mǎi)于成都凱捷生物醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)和99mg的peg-(ppmal)2-25kd(派格生物醫(yī)藥公司生產(chǎn))于100ml玻璃容器瓶中(peg:pb-105:pb-703投料摩爾比為1:1.2:1.5)，用:10ml0.2mph6.5的pbs緩沖液溶解，并在室溫(25℃)下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，并用鹽酸調(diào)至ph4.0終止反應(yīng)，4℃下放置純化備用。將上述反應(yīng)液用超純水稀釋5倍后，并用醋酸調(diào)ph至4.0，上樣于用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡過(guò)3-4個(gè)柱體積的20mlmacrocapsp的陽(yáng)離子交換柱，上樣完后用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡3-4個(gè)柱體積，然后用洗脫液b(20mmph4.0hac-naac+1mnacl)洗脫30個(gè)柱體積梯度洗脫到40％，等體積收集洗脫峰，并用hplc分析各收集組份，將純度大于95％目標(biāo)物組份混合后定量，為后續(xù)藥效試驗(yàn)提供樣品。pb-718的純化圖譜在圖3中示出。實(shí)施例13：pb-719(pb-703和pb-105與peg-(ppmal)2-20kd的綴合物)的制備稱(chēng)取20mgpb-105(購(gòu)買(mǎi)于成都凱捷生物醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)、21mgpb-703(購(gòu)買(mǎi)于成都凱捷生物醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)和79.3mg的peg-(ppmal)2-20kd(派格生物醫(yī)藥公司生產(chǎn))于100ml玻璃容器瓶中(peg:pb-105:pb-703投料摩爾比為1:1.2:1.5)，用:10ml0.2mph6.5的pbs緩沖液溶解，并室溫(25℃)攪拌反應(yīng)1小時(shí)，并用鹽酸調(diào)ph4.0終止反應(yīng)，放置4℃純化備用。將上述反應(yīng)液用超純水稀釋5倍后，并用醋酸調(diào)ph至4.0，上樣于用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡過(guò)3-4個(gè)柱體積的20ml macrocapsp的陽(yáng)離子交換柱，上樣完后用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡3-4個(gè)柱體積，然后用洗脫液b(20mmph4.0hac-naac+1mnacl)洗脫30個(gè)柱體積梯度洗脫到40％，等體積收集洗脫峰，并用hplc分析各收集組份，將純度大于95％目標(biāo)物組份混合后定量，為后續(xù)藥效試驗(yàn)提供樣品。pb-719的純化圖譜在圖4中示出。實(shí)施例14：pb-720(pb-703和pb-105與peg-(ppmal)2-10kd的綴合物)的制備稱(chēng)取20mgpb-105(購(gòu)買(mǎi)于成都凱捷生物醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)、21mgpb-703(購(gòu)買(mǎi)于成都凱捷生物醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)和39.7mg的peg-(ppmal)2-10kd(派格生物醫(yī)藥公司生產(chǎn))于100ml玻璃容器瓶中(peg:pb-105:pb-703投料摩爾比為1:1.2:1.5)，用:10ml0.2mph6.5的pbs緩沖液溶解，并室溫(25℃)攪拌反應(yīng)1小時(shí)，并用鹽酸調(diào)ph4.0終止反應(yīng)，放置4℃純化備用。將上述反應(yīng)液用超純水稀釋5倍后，并用醋酸調(diào)ph至4.0，上樣于用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡過(guò)3-4個(gè)柱體積的20mlmacrocapsp的陽(yáng)離子交換柱，上樣完后用緩沖液a(20mmph4.0的hac-naac)平衡3-4個(gè)柱體積，然后用洗脫液b(20mmph4.0hac-naac+1mnacl)洗脫30個(gè)柱體積梯度洗脫到40％，等體積收集洗脫峰，并用hplc分析各收集組份，將純度大于95％目標(biāo)物組份混合后定量，為后續(xù)藥效試驗(yàn)提供樣品。pb-720的純化圖譜在圖5中示出。實(shí)施例15：聚乙二醇化胰高血糖素的體外ec50將穩(wěn)定表達(dá)胰高血糖素受體的hek293細(xì)胞(輝源生物科技(上海)有限公司)培養(yǎng)于添加了10％fbs(hyclone)的dmem(hyclone)培養(yǎng)基中，放置于37攝氏度，10％co2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將細(xì)胞用胰酶(hyclone)消化并按5x104細(xì)胞/100ul密度接種于96孔板，培養(yǎng)16-24小時(shí)，棄去原培養(yǎng)基，更換為無(wú)血清dmem培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。加入野生型胰高血糖素、胰高血糖素變體以及聚乙二醇化胰高血糖素(終濃度分別為100nmol/l，30nmol/l，10nmol/l，3nmol/l，1nmol/l，0.3nmol/l，0.1nmol/l，0.01nmol/l)與細(xì)胞共同孵育20min，棄去孵藥培養(yǎng)基，加入細(xì)胞裂解液(camp酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒中附帶，r&dsystems)，置-80℃冰箱凍融兩次以裂解細(xì)胞，低溫離心收集上清液。按 camp酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(r&dsystems)說(shuō)明進(jìn)行操作，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定樣品孔上清液中camp濃度。應(yīng)用graphpadprism軟件繪制胰高血糖素與其變構(gòu)體的量效曲線圖，并計(jì)算各樣品曲線的ec50。野生型胰高血糖素、胰高血糖素變體以及聚乙二醇化胰高血糖素在細(xì)胞水平上均顯示出劑量依賴(lài)性地增加hek293/胰高血糖素r細(xì)胞內(nèi)的camp含量，其刺激細(xì)胞釋放camp的ec50值如表2所示。表2：聚乙二醇化胰高血糖素的體外ec50化合物ec50(nm)glucagon0.84pb-7022.23pb-7031.7pb-70714.9pb-7166.2pb-7401.45pb-7412.25pb-7216.94pb-72212.3實(shí)施例16：本發(fā)明綴合物長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠的減肥藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)雄性c57bl/6小鼠(常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司)，經(jīng)高脂飼料(江蘇美迪森生物醫(yī)藥有限公司，md12032，45％kcal)喂養(yǎng)9周，與同齡用普通飼料(蘇州雙獅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料科技有限公司，151113)喂養(yǎng)的小鼠相比體重超出20％以上，判斷為肥胖(dio，diet-inducedobesity)模型建模成功。dio小鼠35只，根據(jù)體重，隨機(jī)血糖進(jìn)行分組，分為7組，每組5只，分別為pb-716組(383μg/kg)，pb-717組(383μg/kg)，pb-718 組(383μg/kg)，pb-719組(383μg/kg)，pb-720組(383μg/kg)，victoza組(200μg/kg)和模型對(duì)照組(生理鹽水)(劑量均以肽含量計(jì))。第一次給藥后各組觀察96小時(shí)，然后進(jìn)行第二次給藥，隨后的試驗(yàn)中，victoza組每天給藥一次，其余各組3天給藥一次。連續(xù)給藥試驗(yàn)共進(jìn)行14天，試驗(yàn)期間每天測(cè)定小鼠體重和攝食，試驗(yàn)開(kāi)始前及結(jié)束后各測(cè)定一次隨機(jī)血糖。第一次給藥后，各組動(dòng)物和模型對(duì)照組相比，體重均有顯著下降，結(jié)果見(jiàn)圖6。給藥后48-96小時(shí)，victoza組體重逐步反彈，到96小時(shí)，該組小鼠體重與對(duì)照組體重相比沒(méi)有明顯差異。pb-720組小鼠在給藥后48-96小時(shí)體重基本維持恒定，略有反彈。pb-716，pb-717，pb-718和pb-719組小鼠在給藥后48小時(shí)體重仍保持下降趨勢(shì)，給藥后72-96小時(shí)體重略有反彈。和對(duì)照組相比，pb-716，pb-717，pb-718和pb-719組單次給藥對(duì)體重的降低作用可以維持到給藥后96小時(shí)，說(shuō)明peg化之后大大延長(zhǎng)了化合物在動(dòng)物體內(nèi)的作用時(shí)間。連續(xù)給藥對(duì)dio小鼠攝食的影響見(jiàn)圖7。單次給藥后觀察96小時(shí)，開(kāi)始連續(xù)給藥實(shí)驗(yàn)，其中victoza組每天給藥一次，其余各組3天給藥一次。連續(xù)給藥開(kāi)始后的14天內(nèi)，模型對(duì)照組累積攝食呈直線上升趨勢(shì)，其余各組與對(duì)照組相比攝食均有不同程度的下降。到連續(xù)給藥14天試驗(yàn)結(jié)束的時(shí)候，pb-716組和victoza組累積攝食降低得最多，分別達(dá)到58.67％和50.82％。pb-720，pb-719，pb-718和pb-717也分別降低了31.83％，34.88％，48.79％和39.63％。圖8顯示了14天連續(xù)給藥后給藥各組累積攝食相對(duì)模型對(duì)照組的下降率。連續(xù)給藥對(duì)dio小鼠體重的影響見(jiàn)圖9和圖10。試驗(yàn)結(jié)束后，模型對(duì)照組體重和給藥前相比增長(zhǎng)了10.24％，而給藥各組體重均有不同程度的下降。其中pb-716組下降最為顯著，和給藥前相比體重下降了38.03％，與模型對(duì)照組比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001)。其余各組體重下降情況是：victoza組較給藥前體重下降了15.83％(p<0.05)；pb-720組下降了10.21％(p<0.05)；pb-719組下降了24.73％(p＜0.001)；pb-718組下降了30.25％(p＜0.001)；pb-717組下降了28.11％(p＜0.001)說(shuō)明pb-716系列化合物長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠體重有明顯的抑制作用。連續(xù)給藥對(duì)dio小鼠隨機(jī)血糖的影響見(jiàn)圖11。經(jīng)過(guò)9周的高脂飼養(yǎng)，c57bl/6小鼠隨機(jī)血糖有一定程度的升高，正常飼料喂養(yǎng)組隨機(jī)血糖的平 均值為8.7mmol/l，而高脂肪飼養(yǎng)組小鼠的隨機(jī)血糖平均值上升了33.3％，達(dá)到11.6mmol/l。各組動(dòng)物給藥后，隨機(jī)血糖均有明顯下降，pb-716組下降幅度最大，平均下降了51.06％(p<0.05)，pb-720，pb-719，pb-718也分別下降了29.31％，33.40％和38.89％，與模型對(duì)照組比差異都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。說(shuō)明pb-716系列化合物長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠具有降糖作用。結(jié)果顯示pb-716系列exendin-4和胰高血糖素雙激動(dòng)劑綴合物由于連接了peg分子從而大大延長(zhǎng)了化合物在動(dòng)物體內(nèi)的作用時(shí)間。pb-716系列化合物長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠的攝食有明顯的抑制作用，并能顯著降低dio小鼠的體重，其中pb-716的減肥效果最佳。實(shí)施例17：pb-708和pb-120之組合長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠的減肥藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)雄性c57bl/6小鼠(常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司)，經(jīng)高脂飼料(江蘇美迪森生物醫(yī)藥有限公司，md12032，45％kcal)喂養(yǎng)12周，與同齡用普通飼料(蘇州雙獅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料科技有限公司，151113)喂養(yǎng)的小鼠相比體重超出20％以上，判斷為肥胖(dio，diet-inducedobesity)模型建模成功。dio小鼠35只，根據(jù)體重，血糖隨機(jī)分為7組，每組5只，分別為victoza組(200μg/kg)，pb-718高劑量組(383μg/kg)，pb-718低劑量組(153.2μg/kg)，pb-119組(210μg/kg)，peg-oxm(天然的glp-1受體和胰高血糖素受體雙激動(dòng)劑oxyntomodulin與23kdpeg綴合物)組(222.5μg/kg)，復(fù)方給藥組(172.9μg/kgpb-708+210μg/kgpb-120)和模型對(duì)照組(生理鹽水)(劑量均以肽含量計(jì))。victoza組每天給藥一次，其余各組2天給藥一次。連續(xù)給藥試驗(yàn)共進(jìn)行14天，試驗(yàn)期間每天測(cè)定小鼠體重和攝食，試驗(yàn)開(kāi)始前及結(jié)束后各測(cè)定一次隨機(jī)血糖。長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠體重的影響見(jiàn)圖12和圖13。試驗(yàn)結(jié)束后，模型對(duì)照組體重和給藥前相比增長(zhǎng)了6.30％，而給藥各組體重均有不同程度的下降。其中victoza組較給藥前體重下降了15.92％(p<0.05)；pb-119組下降13.33％(p＜0.05)，與victoza組減肥效果類(lèi)似。peg-oxm組僅下降了1.34％(p>0.05)，可能是因?yàn)樘烊坏碾p激動(dòng)劑oxyntomodulin針對(duì)胰高血糖素和glp-1受體的激動(dòng)活性均較弱的緣故。復(fù)方給藥組和給藥前相比體重下降了24.72％，與模型對(duì)照組比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜ 0.001)。pb-718在dio小鼠中的減肥效果呈現(xiàn)劑量相關(guān)性，pb-718低劑量組體重下降了18.78％(p＜0.001)，而pb-718高劑量組體重下降了27.38％(p＜0.001)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明胰高血糖素和glp-1受體的雙激動(dòng)劑pb-718和胰高血糖素+glp-1受體激動(dòng)劑的復(fù)方長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠體重都具有明顯的抑制作用，其減肥效果要顯著優(yōu)于單獨(dú)給予glp-1受體激動(dòng)劑pb-119。長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠攝食的影響見(jiàn)圖14和圖15。試驗(yàn)期間，模型對(duì)照組累積攝食呈直線上升趨勢(shì)，其余各組與對(duì)照組相比攝食均有不同程度的下降。到連續(xù)給藥14天試驗(yàn)結(jié)束的時(shí)候，復(fù)方組和pb-718高劑量組累積攝食降低得最多，分別達(dá)到43.69％和45.34％。pb-718低劑量，pb-119組也分別降低了34.37％和39.95％。長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠隨機(jī)血糖的影響見(jiàn)圖16。經(jīng)過(guò)12周的高脂飼養(yǎng)，c57bl/6小鼠隨機(jī)血糖有一定程度的升高，正常飼料喂養(yǎng)組隨機(jī)血糖的平均值為8.7mmol/l，而高脂肪飼養(yǎng)組小鼠的隨機(jī)血糖平均值上升了17.3％，達(dá)到10.2mmol/l。各組動(dòng)物給藥后，隨機(jī)血糖均有明顯下降，pb-718高劑量組，復(fù)方組，pb-119和pb-718低劑量組血糖分別下降了31.61％，31.61％，27.27％，28.30％，與模型對(duì)照組比差異都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。說(shuō)明化合物pb-718、長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠具有一定的降糖作用。實(shí)施例18：pb-119與pb-721或pb-722之組合在dio小鼠中的減肥藥效實(shí)驗(yàn)雄性c57bl/6小鼠(常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司)，經(jīng)高脂飼料(江蘇美迪森生物醫(yī)藥有限公司，md12032，45％kcal)喂養(yǎng)16周，與同齡用普通飼料(蘇州雙獅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料科技有限公司，151113)喂養(yǎng)的小鼠相比體重超出20％以上，判斷為肥胖(dio，diet-inducedobesity)模型建模成功。dio小鼠80只，根據(jù)體重，血糖隨機(jī)分為10組，每組8只，分別為模型對(duì)照組，pb-119(10nmol/kg)組，pb-721(60nmol/kg)組，pb-722(60nmol/kg)組，pb-722(10nmol/kg)+pb-119(10nmol/kg)組，pb-722(30nmol/kg)+pb-119(10nmol/kg)組，pb-722(60nmol/kg)+pb-119(10nmol/kg)組，pb-722(100nmol/kg)+pb-119(10nmol/kg)組，pb-722(150nmol/kg)+pb-119(10nmol/kg)組，pb-721(60nmol/kg)+pb-119(10nmol/kg)組和模型對(duì)照組(生理鹽水)。各組均為皮下給藥， 兩天一次，實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行21天，給藥11次。實(shí)驗(yàn)期間每天測(cè)定動(dòng)物的體重和攝食量，day1和day21測(cè)定動(dòng)物的血糖值，day21測(cè)定動(dòng)物的血清甘油三酯，血清總膽固醇和肝臟甘油三脂等指標(biāo)。長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠體重的影響見(jiàn)圖17和圖18。在試驗(yàn)期間模型對(duì)照組動(dòng)物的體重呈穩(wěn)定態(tài)勢(shì)，給藥各組重均有不同程度的降低。給藥結(jié)束后，模型對(duì)照組動(dòng)物體重和給藥前相比增加0.85％，10nmol/kgpb-119單獨(dú)給藥組的小鼠體重下降了14.37％，60nmol/lpb-721和pb-722單獨(dú)給藥后小鼠體重分別下降了21.65％和21.95％。而同等劑量的復(fù)方給藥組(10nmol/kgpb-119+60nmol/kgpb-721)和(10nmol/kgpb-119+60nmol/kgpb-722)小鼠體重分別下降了47.18％和40.02％，其體重下降率超過(guò)了復(fù)方的兩個(gè)成分單獨(dú)給藥造成的下降率的疊加。說(shuō)明復(fù)方的兩個(gè)成分同時(shí)使用對(duì)dio小鼠體重的下降具有協(xié)同效應(yīng)。此外，本發(fā)明人還出人意料地發(fā)現(xiàn)，glp-1受體激動(dòng)劑(即pb-119)與胰高血糖素受體激動(dòng)劑(即pb-722)的摩爾比在某個(gè)區(qū)間中時(shí)，減肥效果出乎意料的好?？蓞⒁?jiàn)pb-722(60nmol/kg)+pb-119(10nmol/kg)組，pb-722(100nmol/kg)+pb-119(10nmol/kg)組，pb-722(150nmol/kg)+pb-119(10nmol/kg)組的數(shù)據(jù)。長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠攝食量的影響見(jiàn)圖19和圖20。pb-119，pb-721和pb-722單獨(dú)給藥對(duì)dio小鼠的食欲有一定的抑制作用，而pb-119和pb-721聯(lián)合使用或是pb-119和pb-722聯(lián)合使用對(duì)dio小鼠的食欲產(chǎn)生的強(qiáng)烈的抑制作用，其抑制效果比二者單獨(dú)給藥的疊加更為顯著。相對(duì)于模型對(duì)照組的老鼠，10nmol/kgpb-119，60nmol/kgpb-721和60nmol/kgpb-722單獨(dú)給藥組累計(jì)攝食分別下降了25.14％，2.36％和9.11％。10nmol/kgpb-119和60nmol/kgpb-721的復(fù)方給藥組累計(jì)攝食下降了61.44％,而10nmol/kgpb-119和60nmol/kgpb-722的復(fù)方給藥組累計(jì)攝食下降了50.56％。血清甘油三酯，血清總膽固醇和肝臟甘油三脂結(jié)果見(jiàn)圖21，圖22和圖23。模型對(duì)照組dio小鼠的總膽固醇和肝臟甘油三脂水平均明顯高于正常對(duì)照組，表現(xiàn)出較明顯的脂代謝紊亂狀態(tài)。10nmol/kgpb-119和60nmol/kgpb-721,60nmol/kgpb-722單獨(dú)長(zhǎng)期給藥對(duì)dio小鼠的血清甘油三脂水平?jīng)]有明顯改善。而同等劑量pb-119和pb-721或是pb-119和pb-722的復(fù)方給藥組小鼠的血清甘油三脂水平和模型對(duì)照組相比明顯下 降(p<0.05)，其下降率分別為32.58％和22.83％。dio小鼠肝臟甘油三酯含量明顯高于正常對(duì)照小鼠(p<0.01)。10nmol/kgpb-119單獨(dú)給藥組小鼠肝臟甘油三酯含量與模型對(duì)照組相比，下降了12.67％(p>0.05)；60nmol/kgpb-721,60nmol/kgpb-722單獨(dú)給藥組和復(fù)方給藥組小鼠肝臟甘油三酯含量和模型對(duì)照相比明顯下降(p<0.01)，接近正常對(duì)照小鼠的肝臟甘油三酯水平，下降率分別為73.29％，76.84％，64.47％和74.48％。dio小鼠血清總膽固醇含量明顯高于正常對(duì)照小鼠(p<0.001)。10nmol/kgpb-119和60nmol/kgpb-721,60nmol/kgpb-722單獨(dú)長(zhǎng)期給藥組dio小鼠的血清總膽固醇含量有所下降(p<0.05)，下降率分別為39.35％，60.86％和60.56％。而同等劑量pb-119和pb-721或是pb-119和pb-722的復(fù)方給藥組小鼠的血清總膽固醇含量和模型對(duì)照組相比明顯下降(p<0.001)，其下降率達(dá)到了90.85％和91.88％。以上描述地僅是優(yōu)選實(shí)施方案，其只作為示例而不限制實(shí)施本發(fā)明所必需特征的組合。所提供的標(biāo)題并不意指限制本發(fā)明的多種實(shí)施方案。術(shù)語(yǔ)例如“包含”、“含”和“包括”不意在限制。此外，除非另有說(shuō)明，沒(méi)有數(shù)詞修飾時(shí)包括復(fù)數(shù)形式，以及“或”、“或者”意指“和/或”。除非本文另有定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)的意思與本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的相同。本申請(qǐng)中提及的所有公開(kāi)物和專(zhuān)利通過(guò)引用方式并入本文。不脫離本發(fā)明的范圍和精神，本發(fā)明的所描述的方法和組合物的多種修飾和變體對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。雖然通過(guò)具體的優(yōu)選實(shí)施方式描述了本發(fā)明，但是應(yīng)該理解所要求保護(hù)的本發(fā)明不應(yīng)該被不適當(dāng)?shù)鼐窒抻谶@些具體實(shí)施方式。事實(shí)上，那些對(duì)于相關(guān)領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而易見(jiàn)的用于實(shí)施本發(fā)明的所描述的模式的多種變體意在包括在隨附的權(quán)利要求的范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12