本發(fā)明涉及糖尿病預防或改善劑、代謝綜合征預防或改善劑、HOMA-IR的升高抑制或改善劑、脂肪蓄積抑制或改善劑、餐后血糖值的升高抑制劑、糖分解抑制劑、α-葡糖苷酶活性抑制劑、淀粉酶活性抑制劑、脂質(zhì)排出(排泄)促進劑、脂肪酶活性抑制和脂質(zhì)代謝提高劑。

背景技術：

近年來，熱量攝取過多成為生活習慣病的病因。特別是認為抑制以淀粉為代表的碳水化合物的消化吸收對肥胖的預防和治療有效。

作為中美洲原產(chǎn)灌木的番石榴，其果實、根和葉在民間作為生藥被用于治療糖尿病或止瀉，但最近發(fā)現(xiàn)了：將其葉用水或親水性溶劑進行提取而獲得的提取物具有α-淀粉酶活性抑制作用，被用作健康飲料(專利文獻1)或膳食飲食品(diet foods and drinks) (專利文獻2)。

另外，還確認到將玉米的淀粉焙燒并用淀粉酶水解后提取出難消化性成分調(diào)制而成的水溶性食物纖維即難消化性糊精具有抑制餐后血糖值升高的作用(非專利文獻1)，被用作特定保健用食品的材料。

另一方面，關于作為茶樹(Tea tree)的山茶(Camellia sinensis)的植物體成分，報道了茶兒茶精類具有抑制膽固醇升高的效果(專利文獻3)、非聚合體兒茶精類具有促進蓄積體脂肪的燃燒、促進飲食性脂肪的燃燒、促進肝臟β氧化基因的表達等各種效果(專利文獻4)。

現(xiàn)有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特公昭60-36746號公報；

專利文獻2：日本特開平7-59539號公報；

專利文獻3：日本特開昭60-156614號公報；

專利文獻4：日本特開2002-326932號公報；

非專利文獻

非專利文獻1：健康、營養(yǎng)食品研究(健康·栄養(yǎng)食品研究), 第2卷, No. 4, 1999。

技術實現(xiàn)要素：

發(fā)明所要解決的課題

但是，關于山茶的植物體成分具有有效地抑制餐后血糖值升高的作用等與糖尿病預防或改善有關的作用的報道尚屬未知。本發(fā)明的目的在于找到可有效發(fā)揮下述的各種作用、并且安全的成分：改善胰島素抵抗性、抑制或改善HOMA-IR的升高、抑制或改善高血糖的惡化、抑制餐后血糖值的升高、抑制α-葡糖苷酶活性、抑制淀粉酶活性、抑制脂肪酶活性、提高脂質(zhì)代謝、促進脂質(zhì)排出、抑制或改善脂質(zhì)蓄積、預防或改善糖尿病等。

用于解決課題的手段

本發(fā)明人在對山茶的近緣屬種的植物體成分進行各種研究時發(fā)現(xiàn)：山茶與其近緣屬種即大理茶(Camellia taliensis)的雜交種的植物體成分具有改善胰島素抵抗性的效果，另外還具有抑制餐后血糖值等的血糖值升高的作用、以及抑制α-葡糖苷酶活性的作用。而且，還發(fā)現(xiàn)該植物體成分具有淀粉酶活性抑制效果、脂質(zhì)排出促進效果，并具有脂肪酶活性抑制作用、脂質(zhì)代謝的提高作用，完成了本發(fā)明。

本發(fā)明提供以下方案。

[1] 糖尿病預防或改善劑，其以山茶與大理茶的雜交種植物體的成分作為有效成分。

[2] 代謝綜合征預防或改善劑，其以山茶與大理茶的雜交種植物體的成分作為有效成分。

[3] HOMA-IR的升高抑制或改善劑，其以山茶與大理茶的雜交種植物體的成分作為有效成分。

[4] 脂肪蓄積抑制或改善劑，其以山茶與大理茶的雜交種植物體的成分作為有效成分。

[5] 餐后血糖值的升高抑制劑，其以山茶與大理茶的雜交種植物體的成分作為有效成分。

[6] 糖分解抑制劑，其以山茶與大理茶的雜交種植物體的成分作為有效成分。

[7] α-葡糖苷酶活性抑制劑，其以山茶與大理茶的雜交種植物體的成分作為有效成分。

[8] 淀粉酶活性抑制劑，其以山茶與大理茶的雜交種植物體的成分作為有效成分。

[9] 脂質(zhì)排出促進劑，其以山茶與大理茶的雜交種植物體的成分作為有效成分。

[10] 脂肪酶活性抑制和脂質(zhì)代謝提高劑，其以山茶與大理茶的雜交種植物體的成分作為有效成分。

[11] [1]～[10]中任一項所述的藥劑，其中，山茶與大理茶的雜交種為Sunrouge (サンルージュ，Camellia sinensis (L.) Kuntze sp Sunrouge)。

[12] [1]～[11]中任一項所述的藥劑，其包含山茶與大理茶的雜交種植物體的茶葉提取物。

[13] [12]所述的藥劑，其中，茶葉提取物是相對于茶葉提取物的干燥重量含有0.13重量%以上的飛燕草素(Delphinidin)或其糖苷的茶葉提取物。

[14] 改善或預防糖尿病的方法，該方法包括：給對象使用包含山茶與大理茶的雜交種植物體的成分作為有效成分的藥劑或組合物來改善或預防對象的糖尿病。

發(fā)明效果

根據(jù)本發(fā)明，提供糖尿病預防或改善劑、代謝綜合征預防或改善劑、HOMA-IR的升高抑制或改善劑、脂肪蓄積抑制或改善劑、餐后血糖值的升高抑制劑、糖分解抑制劑、α-葡糖苷酶活性抑制劑、淀粉酶活性抑制劑、脂質(zhì)排出促進劑、以及脂肪酶活性抑制和脂質(zhì)代謝提高劑。由于本發(fā)明的各藥劑是以一直以來作為茶飲用的山茶與大理茶的雜交種植物體的成分作為有效成分，因此即使長期攝取，其安全性也高，可以日常攝取。

附圖說明

圖1是顯示試驗例1中的小鼠睪丸周邊脂肪重量的測定結(jié)果的圖。

圖2是顯示試驗例1中的HOMA-IR的圖。

圖3是顯示試驗例2中的餐后血糖值的AUC (0分鐘～150分鐘)的圖。

圖4是顯示試驗例2中的餐后血糖值的AUC (0分鐘～30分鐘)的圖。

圖5是顯示試驗例3中的α-葡糖苷酶活性抑制率的圖。

圖6是顯示試驗例6中的餐后血糖值的AUC (0分鐘～30分鐘)的圖。

圖7是顯示試驗例10中的飛燕草素的殘留率的圖。

具體實施方式

本發(fā)明的藥劑以山茶(Camellia sinensis)與大理茶(Camellia taliensis)的雜交種植物體的成分作為有效成分。

山茶與大理茶的雜交種是將屬于山茶的植物體與屬于大理茶的植物體組合進行繁殖而獲得的品種。繁殖可以是人工繁殖也可以是自花受粉等自然繁殖?？梢允堑?代(雜種第1代)及其子孫(例如雜種第1代的自然雜交種)的任一種。山茶也稱作茶樹。山茶優(yōu)選為綠茶用品種(Yabukita (やぶきた，藪北)、Okumusashi (おくむさし)等)，更優(yōu)選為Okumusashi。大理茶是山茶科植物，是山茶的近緣屬種，也稱作紅芽(Akame)。

關于大理茶和大理茶的雜交種，作為雜交種，優(yōu)選“Sunrouge” (Camellia sinensis (L.) Kuntze、農(nóng)林水產(chǎn)省 品種登記號：21262)、F95181 (茶中間母本農(nóng)6號)，更優(yōu)選“Sunrouge”。

作為本發(fā)明的藥劑，例示胰島素抵抗性改善劑、糖分解抑制劑、α-葡糖苷酶活性抑制劑、脂肪酶活性抑制和脂質(zhì)代謝提高劑、淀粉酶活性抑制劑、餐后血糖值的升高抑制劑、脂質(zhì)排出促進劑、脂質(zhì)蓄積抑制或改善劑、代謝綜合征預防或改善劑、HOMA-IR的升高抑制或改善劑、高血糖的惡化抑制或改善劑、以及糖尿病預防或改善劑。

本發(fā)明的糖尿病預防或改善劑可以預防或改善糖尿病(通常是指II型糖尿病)和代謝綜合征。代謝綜合征是指以內(nèi)臟脂肪型肥胖作為共同因素引起了高血糖、脂質(zhì)異常、高血壓的狀態(tài)。

預防是指抑制患病。作為糖尿病的預防，例如包括：防止對象的血糖值指標(空腹時血糖值、餐后血糖值(餐后30分鐘血糖值、餐后2小時血糖值等)、口服葡萄糖負荷試驗中的血糖值、血紅蛋白(Hb) A1c值等)向糖尿病型轉(zhuǎn)變(例：防止由正常型向臨界型轉(zhuǎn)變、維持正常型不變、維持臨界型不變、由臨界型向正常型轉(zhuǎn)變)。

改善是指雖然已經(jīng)患病但會改善、緩和其癥狀或者抑制其癥狀惡化。具體而言，例如包括：雖然對象的血糖值指標為糖尿病型，但使其接近正常值(例：向臨界型或正常型的值轉(zhuǎn)變、雖然沒有超出正常型的范圍但提高至臨界型附近)。

作為代謝綜合征的預防或改善，例如除了上述糖尿病的預防和改善的例子以外，還包括脂質(zhì)異常的正常化和血壓的正?；?。

糖尿病的預防或改善效果只要依據(jù)選自以下的一種以上的確認即可：確認發(fā)揮胰島素抵抗性改善效果、確認抑制或改善HOMA-IR的升高、確認發(fā)揮餐后血糖值升高抑制效果、確認發(fā)揮α-葡糖苷酶活性抑制效果、確認發(fā)揮淀粉酶活性的抑制效果、確認發(fā)揮脂肪酶活性的抑制效果、確認發(fā)揮提高脂質(zhì)代謝的效果、確認發(fā)揮促進脂質(zhì)排出的效果、和確認發(fā)揮抑制或改善脂質(zhì)蓄積的效果。

糖尿病預防或改善劑的對象可以是糖尿病患者、糖尿病預備軍、具有罹患糖尿病的風險的人，但也可以是健康的人(例：高齡者、肥胖者、高血壓者、其他考慮想要預防糖尿病的人)。對象包括人和人以外的動物(寵物(例：狗、貓、鸚鵡)、家畜(例：牛、豬、山羊、綿羊、馬)、家禽(例：雞、鵪鶉、火雞)、實驗動物(例：小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠、兔))。

本發(fā)明的藥劑可以改善胰島素抵抗性。胰島素抵抗性是指胰島素不易起效。改善胰島素抵抗性是指使胰島素抵抗性接近正常值、以及保持在正常值的范圍。胰島素抵抗性的確認可以通過HOMA-IR (HOMA-R指數(shù)、homeostasis model assessment RATIO (穩(wěn)態(tài)模型評價比)、homeostasis model assessment as an index of insulin resistance (穩(wěn)態(tài)模型評價作為胰島素抵抗性的指數(shù)))、葡萄糖鉗夾技術、穩(wěn)態(tài)血糖(stedy state plasma glucose，SSPG)法、由空腹時的血清胰島素值和血糖值進行的推測等方法來進行，其中優(yōu)選根據(jù)HOMA-IR進行的測定。胰島素抵抗性得到改善可以通過HOMA-IR的升高得到抑制、或者HOMA-IR維持在低水平來確認。因此，本發(fā)明的藥劑可以抑制或改善HOMA-IR的升高。另外，當胰島素抵抗性有所改善時，血糖值的升高也會得到抑制，因此胰島素抵抗性得到改善可以通過血糖值的升高得到抑制來確認。

本發(fā)明的藥劑可以抑制餐后血糖值的升高。抑制血糖值的升高是指抑制血糖值的升高、或者維持血糖值在正常值的狀態(tài)。血糖值可以通過測定血中的葡萄糖來確認，確認血糖值的升高得到抑制可以通過確認血中葡萄糖的測定值是否在正常值的范圍內(nèi)來實現(xiàn)。

抑制餐后血糖值的升高是指抑制餐后血糖值的升高、或者維持餐后血糖值在正常值的狀態(tài)。餐后只要是進餐結(jié)束后即可，但優(yōu)選進餐結(jié)束后0～30分鐘。餐后血糖值可以通過血糖下面積(AUC、Area Under The Curve，曲線下面積)來確認。餐后血糖值升高的改善可以通過AUC的減少來確認。

本發(fā)明的藥劑可以促進脂質(zhì)排出。促進脂質(zhì)排出是指使脂質(zhì)排出量較通常有所增加。脂質(zhì)排出量例如可以通過測定糞便中的脂質(zhì)排出量來確認。另外，脂質(zhì)排出得到促進可以根據(jù)糞便中的脂質(zhì)排出量較通常有所增加來確認。另外，通過促進脂質(zhì)排出，體重減少、或者體脂肪減少，因此根據(jù)體重減少或者體脂肪減少，也可以確認脂質(zhì)排出得到促進。

脂質(zhì)排出得到促進的結(jié)果，本發(fā)明的藥劑抑制體重增加、發(fā)揮抗肥胖作用，其結(jié)果，期待著抑制或改善高血糖狀態(tài)的惡化、并預防或改善糖尿病。

本發(fā)明的藥劑可以抑制或改善脂質(zhì)蓄積。抑制或改善脂質(zhì)蓄積是指減少新蓄積的脂質(zhì)量、以及減少已經(jīng)蓄積的脂質(zhì)。關于脂質(zhì)蓄積得到抑制或改善，可通過體脂肪量得以維持、體脂肪量減少來確認。作為體脂肪量的替代，根據(jù)體重得到維持、體重減少，也可以確認脂質(zhì)蓄積得到抑制或改善。另外，通過確認脂肪排出得到促進，也可以確認脂肪蓄積得到抑制或改善。

抑制或改善脂質(zhì)蓄積的結(jié)果，本發(fā)明的藥劑抑制體重增加，發(fā)揮抗肥胖作用，其結(jié)果，期待著抑制或改善高血糖狀態(tài)的惡化，預防或改善糖尿病。

本發(fā)明的藥劑可以抑制糖分解。抑制糖分解通常通過抑制與糖分解有關的酶的活性來進行。作為所述的酶，例示α-葡糖苷酶、淀粉酶。

本發(fā)明的藥劑可以抑制α-葡糖苷酶活性。α-葡糖苷酶是切斷α-1,4糖苷鍵的酶，與糖的分解有關。通過抑制α-葡糖苷酶活性，可以防止糖在體內(nèi)分解、抑制糖的吸收，因此可以抑制血糖值的升高。抑制血糖值升高的結(jié)果，抑制體重增加，發(fā)揮抗肥胖作用，其結(jié)果，期待著抑制或改善高血糖狀態(tài)的惡化，預防或改善糖尿病。活性抑制是指降低酶的活性或使其消失。活性抑制的方式可以是底物抑制、競爭(拮抗)抑制、非競爭(非拮抗)抑制、不競爭(不拮抗)抑制、或這些抑制中的兩種以上的組合(混合型抑制)的任一種方式。α-葡糖苷酶活性可以通過測定與底物作用后的分解物的量來確認，當分解物的量減少時，可以確認發(fā)生了活性抑制。在α-葡糖苷酶活性的測定中，可以使用QuantiChrom (注冊商標) α-葡糖苷酶測定試劑盒(BioAssay Systems公司制造)等比色測定試劑盒。另外，當α-葡糖苷酶活性被抑制時，血糖值的升高也被抑制，因此α-葡糖苷酶活性受到抑制可以通過血糖值的升高受到抑制來確認。

本發(fā)明的藥劑可以抑制淀粉酶活性。淀粉酶是水解淀粉的酶。通過抑制淀粉酶，可以抑制淀粉在體內(nèi)分解成糖，其結(jié)果，可以抑制糖在體內(nèi)的吸收，因此可以抑制血糖值的升高。抑制血糖值升高的結(jié)果，可抑制體重增加，發(fā)揮抗肥胖作用，其結(jié)果，期待著抑制或改善高血糖狀態(tài)的惡化，預防或改善糖尿病。

淀粉酶活性可以通過以往公知的方法來測定，例如，可以使用MaxDiscovery (注冊商標)淀粉酶測定試劑盒(Bioo Scientific Corporation制造)等。

本發(fā)明的藥劑可以抑制脂肪酶活性。脂肪酶是將甘油酯水解而使脂肪酸游離的酶。脂肪酶可以是來自生物體的任一個組織的脂肪酶，例如可以列舉來自胰腺的胰脂肪酶。本發(fā)明的藥劑特別是可以抑制胰脂肪酶活性。通過抑制脂肪酶，脂質(zhì)的分解得到抑制，脂質(zhì)在體內(nèi)的吸收得到抑制，其結(jié)果，促進脂質(zhì)排出到體外。利用所述的作用，抑制體重增加，發(fā)揮抗肥胖作用，其結(jié)果，期待著抑制或改善高血糖狀態(tài)的惡化，預防或改善糖尿病。

本發(fā)明的藥劑可以提高脂質(zhì)代謝。通過提高脂質(zhì)代謝，抑制脂質(zhì)在生物體內(nèi)蓄積，促進脂質(zhì)排出到體外。利用所述的作用，抑制體重增加，發(fā)揮抗肥胖作用，其結(jié)果，期待著抑制或改善高血糖狀態(tài)的惡化，預防或改善糖尿病。脂質(zhì)代謝提高例如可以根據(jù)在肝臟內(nèi)與脂質(zhì)代謝途徑有關的至少一部分基因的表達量升高來確認?；虻谋磉_量例如可以通過微陣列分析(Agilent公司制造、全小鼠基因組寡DNA微陣列試劑盒 2.0版)來進行分析。

本發(fā)明的α-葡糖苷酶活性抑制劑的對象可以是糖尿病患者、餐后高血糖患者、耐糖能力異常者、高脂血癥患者、高血壓患者、這些疾病的預備軍或有風險的人，但也可以是健康的人(例：高齡者、肥胖者、其他不想讓餐后血糖值升高的人、考慮想要抑制上述疾病的發(fā)生的人)。對象包括人和人以外的動物。

本發(fā)明的淀粉酶活性抑制劑的對象可以是糖尿病患者、餐后高血糖患者、耐糖能力異常者、高脂血癥患者、高血壓患者、這些疾病的預備軍或有風險的人，但也可以是健康的人(例：高齡者、肥胖者、其他不想讓餐后血糖值升高的人、考慮想要抑制上述疾病的發(fā)生的人)。對象包括人和人以外的動物。

本發(fā)明的餐后血糖值升高抑制劑的對象可以是餐后高血糖患者(往往還是耐糖能力異常者、糖尿病患者、動脈硬化患者)、餐后高血糖預備軍、具有餐后高血糖風險的人，但也可以是健康的人(例：高齡者、肥胖者、其他考慮想要抑制餐后高血糖的發(fā)生的人)。對象包括人和人以外的動物。

本發(fā)明的脂質(zhì)蓄積抑制或改善劑的對象可以是代謝綜合征的患者、糖尿病患者、高脂血癥患者、高血壓患者，但也可以是健康的人。對象包括人和人以外的動物。

本發(fā)明的代謝綜合征預防或改善劑的對象除了糖尿病患者、代謝綜合征患者以外，還可以是健康的人(例：高齡者、肥胖者、其他考慮想要抑制代謝綜合征的發(fā)生的人)。對象包括人和人以外的動物。

本發(fā)明的胰島素抵抗性改善劑、HOMA-IR的升高抑制或改善劑的對象可以是胰島素抵抗性患者(往往還是糖尿病、高血壓、高脂血癥、代謝綜合征的患者)、具有該風險的人，但也可以是健康的人(例：高齡者、肥胖者、其他考慮想要抑制胰島素抵抗性的發(fā)生的人)。對象包括人和人以外的動物。

本發(fā)明的高血糖的惡化抑制或改善劑的對象可以是糖尿病患者、耐糖能力異常者、這些疾病的預備軍或有風險的人，但也可以是健康的人(例：高齡者、肥胖者、其他不想讓血糖值升高的人、考慮想要抑制上述疾病的發(fā)生的人)。對象包括人和人以外的動物。

本發(fā)明的脂肪酶活性抑制和脂質(zhì)代謝提高劑的對象可以是代謝綜合征患者、糖尿病患者、高脂血癥患者、高血壓患者，但也可以是健康的人。對象包括人和人以外的動物。

本發(fā)明的脂質(zhì)排出促進劑的對象可以是代謝綜合征患者、糖尿病患者、高脂血癥患者、高血壓患者，但也可以是健康的人。對象包括人和人以外的動物。

植物體的成分只要是植物體的至少一部分所包含的成分即可。作為植物體的一部分，例如可以列舉：根、莖、葉、花、果實、枝、種子、芽等。其中優(yōu)選為包含莖和/或葉的部分，更優(yōu)選為莖和/或葉。對山茶與大理茶的雜交種植物體的成分的調(diào)制方法沒有特別限定，例示由植物體進行的提取、純化等。本發(fā)明的藥劑優(yōu)選以該植物體的葉(茶葉)提取物的形式包含山茶與大理茶的雜交種植物體的成分。

本發(fā)明的藥劑以山茶與大理茶的雜交種植物體的成分作為有效成分。作為該成分，例示花青苷(Anthocyanin)、飛燕草素、飛燕草素的糖苷、兒茶精類(例如表沒食子兒茶精沒食子酸酯)、咖啡因、氨基酸、氨基酸的鹽、水解型單寧(例如strictinin)、theogallin、theogallin衍生物等。這些成分可以是單獨的一種，也可以是兩種以上的組合。

在本發(fā)明中，山茶與大理茶的雜交種植物體的成分優(yōu)選至少包含飛燕草素或其糖苷，更優(yōu)選至少包含飛燕草素和/或其糖苷和兒茶精類，優(yōu)選至少包含飛燕草素和/或其糖苷和兒茶精類、以及選自咖啡因、氨基酸、氨基酸的鹽、水解型單寧、theogallin和theogallin衍生物的1種以上。當本發(fā)明的藥劑包含兩種以上的成分時，本發(fā)明的藥劑可以說成是組合物。

飛燕草素是構(gòu)成花青苷的花青素(Anthocyanidin)的一種?；ㄇ嗨胤譃轱w燕草素(Delphinidin)、矢車菊素(Cyanidin)、花葵素(Pelargonidin)、橙苷色素(Aurantinidin)、木樨黃定(Luteolinidin)、芍藥色素(Peonidin)、錦葵花素(Malvidin)、矮牽牛素(Petunidin)、歐天芥菜色素(Europinidin)、松香色素(Rosinidin)等。飛燕草素是3,5,7-三羥基-2-(3,4,5-三羥基苯基)-1-苯并吡喃鎓(C₁₅H₁₁O₇)。飛燕草素的糖苷是指飛燕草素中所含的1個以上的羥基的氫原子被取代成其他取代基而獲得的化合物。取代部位優(yōu)選3位或6位。作為其他取代基的例子，可以列舉：從半乳糖、葡萄糖等糖中除去了1個氫原子而獲得的基團。作為飛燕草素的糖苷的例子，可以列舉：飛燕草素-3-O-(6-反式-對香豆酰)-β-半乳糖苷(DCGa)、飛燕草素-O-β-半乳糖苷(D3Ga)和飛燕草素-3-β-葡萄糖苷(D3G)。本發(fā)明的藥劑可以包含一種飛燕草素或其糖苷，也可以包含飛燕草素及其糖苷的組合、或飛燕草素與兩種以上的糖苷的組合。

本發(fā)明的藥劑中的飛燕草素或其糖苷的含量相對于有效成分(當本發(fā)明的藥劑含有茶葉提取物時是指茶葉提取物)的干燥重量優(yōu)選為0.13重量%以上，更優(yōu)選為0.16重量%以上，進一步優(yōu)選為0.19重量%以上。對上限沒有特定，但通常是0.5重量%以下。

當本發(fā)明的藥劑包含飛燕草素以外的花青苷時，飛燕草素或其糖苷的含量在花青苷的含量中所占的比例優(yōu)選為50重量%以上，更優(yōu)選為60重量%以上。對上限沒有特別特定，但通常為90重量%以下。

花青苷的含量是指花青苷相對于有效成分(當本發(fā)明的藥劑包含茶葉提取物時是指茶葉提取物)的干燥重量的含量。飛燕草素或其糖苷的含量是指飛燕草素或其糖苷相對于本發(fā)明藥劑的干燥重量的含量。

飛燕草素或其糖苷相對于本發(fā)明藥劑的干燥重量的含量可以通過高效液相色譜法(HPLC)來測定?；ㄇ嘬障鄬τ诒景l(fā)明藥劑的干燥重量的含量可以通過HPLC來測定。

作為兒茶精類，可以列舉：兒茶精(C)、沒食子兒茶精(GC)、兒茶精沒食子酸酯(CG)、沒食子兒茶精沒食子酸酯(GCG)、表兒茶精(EC)、表沒食子兒茶精(EGC)、表兒茶精沒食子酸酯(ECG)和表沒食子兒茶精沒食子酸酯(EGCG)、表沒食子兒茶精-3-(3”-O-甲基)沒食子酸酯(EGCG3”Me)、表兒茶精-3-(3”-O-甲基)沒食子酸酯(ECG3”Me)。

兒茶精的含量可以通過HPLC或比色法來測定。

咖啡因是一種具有嘌呤環(huán)的嘌呤生物堿?？Х纫虬诳Х?、可樂、綠茶、紅茶、烏龍茶、可可脂、巧克力、營養(yǎng)飲料等飲食品中，茶中所含的咖啡因因與單寧結(jié)合而使其效果被抑制，因此像咖啡這樣的興奮作用是輕微而緩慢地起作用。

本發(fā)明的藥劑中的咖啡因含量相對于有效成分(當本發(fā)明的藥劑包含茶葉提取物時是指茶葉提取物)的干燥重量優(yōu)選為5.4重量%以下，更優(yōu)選為5.2重量%以下，進一步優(yōu)選為5.1重量%以下。對下限沒有特別特定，但在不進行低咖啡因處理時，通常為2.5重量%以上。

咖啡因的含量可以通過HPLC來測定。

氨基酸是具有氨基和羧基這兩種基團的化合物。作為氨基酸的例子，可以列舉：茶氨酸、甘氨酸、精氨酸、賴氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、蘇氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、纈氨酸、色氨酸、脯氨酸、半胱氨酸、絲氨酸、酪氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸。作為氨基酸的鹽的例子，可以列舉：堿金屬鹽、堿土金屬鹽、銨鹽、無機酸鹽、有機酸鹽等。

本發(fā)明的藥劑中的氨基酸或其鹽的含量相對于有效成分(當本發(fā)明的藥劑含有茶葉提取物時是指茶葉提取物)的干燥重量優(yōu)選為1.0重量%以上，優(yōu)選為1.3重量%以上，更優(yōu)選為1.5重量%以上。對上限沒有特別特定，但通常為4.5重量%以下。

氨基酸或其鹽相對于本發(fā)明藥劑的干燥重量的含量可以通過HPLC來測定。

本發(fā)明的藥劑通過包含水解型單寧而可以發(fā)揮抗過敏的效果。作為水解型單寧的例子，可以列舉strictinin等，優(yōu)選為strictinin。Strictinin是1,2-二-O-沒食子?；?4,6-O-(S)-六羥基二苯羰基-β-D-吡喃葡萄糖。

本發(fā)明的藥劑中的水解型單寧的含量相對于有效成分(當本發(fā)明的藥劑含有茶葉提取物時是指茶葉提取物)的干燥重量優(yōu)選為1.7重量%以下，更優(yōu)選為1.5重量%以下，進一步優(yōu)選為1.4重量%以下。對下限沒有特別特定，但通常為0.6重量%以上。

Strictinin等水解型單寧的含量可以通過HPLC來測定。

通過包含theogallin或其衍生物，可獲得抗過敏的效果。Theogallin是三羥基苯甲酸的糖苷，也被稱作(1S)-1β,3β,4β-三羥基-5α-(沒食子酰氧基)環(huán)己烷羧酸。

Theogallin或其衍生物的含量相對于有效成分(當本發(fā)明的藥劑含有茶葉提取物時是指茶葉提取物)的干燥重量優(yōu)選為5.0重量%以下，更優(yōu)選為3.0重量%以下，進一步優(yōu)選為1.6重量%以下。對下限沒有特別特定，但通常為0.7重量%以上。

Theogallin的含量可以通過HPLC來測定。

本發(fā)明的藥劑優(yōu)選包含山茶與大理茶的雜交種植物體的茶葉提取物，更優(yōu)選包含該茶葉提取物作為有效成分。由此，可以均衡地包含上述的有效成分，可以顯著發(fā)揮各種效能。

與以往已知的花青苷相比，茶葉提取物中所含的飛燕草素或其糖苷的穩(wěn)定性高。穩(wěn)定性可以用在溫度100℃、時間120分鐘的條件下加熱茶葉提取物時茶葉提取物中的飛燕草素或其糖苷的殘留率來表示。該殘留率優(yōu)選為90重量%以上。飛燕草素或其糖苷的殘留率通過式(1)來計算。

式(1)：

飛燕草素或其糖苷的殘留率(%)=

{(在溫度100℃、時間120分鐘的條件下加熱茶葉提取物后的飛燕草素或其糖苷的含量)/(上述加熱前的茶葉提取物的飛燕草素或其糖苷的含量)}×100

對茶葉提取物的提取條件沒有特別限定。例如，可以提取山茶與大理茶的雜交種植物體的茶葉而獲得。

茶葉在提取前通常會制茶。作為制茶的茶葉的例子，可以列舉：綠茶、紅茶、烏龍茶等，優(yōu)選綠茶。作為綠茶的茶葉的例子，可以列舉：煎茶(Sencha)、玉露(Gyokuro)、日本粗茶(Bancha)、莖茶(Kukicha)、芽茶(Mecha)、粉茶(Konacha)、烤茶(Houjicha)、糙米茶(Genmaicha)、碾茶(Tencha)、釜炒茶(Kamairicha)、包種茶(Hoshucha)等。

在提取前可以對茶葉中的至少一部分進行粉碎處理，優(yōu)選進行粉碎處理。粉末的粒徑優(yōu)選10mm以下，更優(yōu)選5mm以下，進一步優(yōu)選1mm以下。在粉碎處理中可以使用破碎機(例如，Multi-beads Shocker(注冊商標、安井器械株式會社)、石磨、陶瓷磨、球磨機、錘磨機等。

作為提取溶劑，可以列舉：水或乙醇水溶液，優(yōu)選水。另外，乙醇水溶液中的乙醇濃度可以設定在不損害本發(fā)明效果的范圍內(nèi)，通常相對于乙醇水溶液整體為70重量%以下。用水進行提取時，提取溫度優(yōu)選70～100℃，更優(yōu)選70～80℃。提取時間優(yōu)選為5～60分鐘，更優(yōu)選5～10分鐘。關于水與茶葉的重量比，相對于茶葉1，優(yōu)選使用茶葉干燥重量的10倍以上的水，更優(yōu)選使用茶葉干燥重量的10倍～100倍量的水。當提取溫度高于100℃、且提取時間大于60分鐘時，兒茶精的含量增加，因此苦味和澀味變強，適口性有可能變差。另外，用乙酸這樣的有機溶劑進行提取時，雖然提取效率高，但因兒茶精類的含量增加，因此苦味和澀味強，適口性有可能變差。提取時可以進行攪拌。

茶葉提取物優(yōu)選為在茶葉干燥重量的10倍量以上的水中、在溫度70～100℃、時間5～60分鐘的條件下進行提取而獲得的茶葉提取物。

在提取處理后，可以通過過濾、離心分離、過篩等處理除去固體成分(固液分離)。過濾可以進行1次，也可以進行2次以上。過濾時可以使用濾紙、線性過濾器(Line Filter)等裝置。離心分離可以以100g～15,000g的離心力來進行，時間可以設為1～60分鐘。還可以進行濃縮(減壓濃縮、反滲透膜處理等)、干燥(噴霧干燥、冷凍干燥等)等處理，優(yōu)選進行濃縮和干燥兩者。優(yōu)選進行濃縮使?jié)饪s物達到處理前的提取物重量的0.05倍，優(yōu)選進行干燥使干燥物達到茶葉物重量的0.2倍。在濃縮和/或干燥后可以進行過濾、過篩。

對本發(fā)明的藥劑的形態(tài)沒有特別限定。作為形態(tài)的例子，可以列舉：液體(膠囊、軟膠囊等)、漿液(糖漿等)、半固體(膏、糊等)、固體(片劑、粉末(顆粒、細粒等))，優(yōu)選為固體，優(yōu)選為粉末。對本發(fā)明的藥劑的劑型沒有限定。作為劑型的例子，可以列舉：丸劑、片劑、顆粒劑、懸浮劑、乳劑、散劑、糖漿劑、糖錠劑。

對本發(fā)明的藥劑的給藥方式?jīng)]有特別限定，有口服給藥、胃腸外給藥(經(jīng)肺給藥、皮下給藥、靜脈內(nèi)給藥、髓腔內(nèi)給藥、經(jīng)皮給藥等)、舌下給藥、吸入給藥等，但通常為口服給藥。

本發(fā)明的藥劑可以包含有效成分以外的成分。當本發(fā)明的藥劑包含有效成分以外的成分時，本發(fā)明的藥劑還可以說成是組合物。作為有效成分以外的成分，例示各種添加劑。作為添加劑的具體例子，可以列舉以下物質(zhì)：調(diào)味品；酸味劑(枸櫞酸、琥珀酸等)；保存劑(抗壞血酸、乙酸鹽、ε-聚賴氨酸等)；pH調(diào)節(jié)劑；乳化劑(蔗糖脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、有機酸單甘油酯、卵磷脂等)；香料；色素；增稠劑(卡拉膠、黃原膠等)；膨脹劑；蛋白(大豆蛋白、乳蛋白等)；糖類(淀粉、蔗糖、果糖、還原淀粉糖化物、赤蘚糖醇、木糖醇等)；甜味劑(三氯半乳蔗糖、奇甜蛋白等)；維生素類(維生素A、維生素C、維生素E、維生素K等)；礦物質(zhì)類(鐵、鈣等)。

本發(fā)明的藥劑可以用作飲食品、或飲食品添加劑。作為飲食品的例子，可以列舉：飲料(清涼飲料、碳酸飲料、營養(yǎng)飲料、粉末飲料、果汁飲料、乳飲料、果凍飲料、啤酒、日本酒、洋酒、中國酒、藥酒等)；米飯類(飯、粥等)；面包類；調(diào)味料(沙司、味噌、醬油、蛋黃醬、起酥油、調(diào)味汁、佐料汁、香辛料等)；大豆食品(納豆、豆腐、油炸豆腐等)；水產(chǎn)加工食品(魚糕(Kamaboko)、魚肉山芋方形蒸餅(Hanpen)、魚卷(Chikuwa)、魚肉剁碎制成的熟食品(Fish Cakes)等)；食肉加工品(火腿、香腸、維也納香腸等)；農(nóng)產(chǎn)加工食品(蔬菜、水果等)；泡菜類；面條類(面條、蕎麥面條、意大利式細面條等)；湯類(粉末湯、液體湯等)；乳制品(奶酪、酸乳、奶油等)；點心類(果子凍、小吃、口香糖、糖果、巧克力、蛋糕等)；健康食品(功能性食品、營養(yǎng)輔助食品(補品)、特定保健用食品)；特定對象的飲食品(醫(yī)療用食品、患者用食品、嬰兒用食品、介護用食品、高齡者用食品)等。飲食品添加劑所針對的飲食品的例子也和上述具體例子相同。而且，本發(fā)明的藥劑可以用作飼料或飼料用添加劑。飼料的對象只要是人以外的動物即可。

對本發(fā)明的藥劑的給藥時期沒有特別限定，當為餐后血糖值升高抑制劑、糖分解抑制劑、α-葡糖苷酶活性抑制劑、淀粉酶活性抑制劑時，優(yōu)選在餐前(例如進餐開始30分鐘前～進餐開始)、進餐中或餐后(例如進餐結(jié)束～30分鐘后)進行給藥，進一步優(yōu)選在進餐中進行給藥。

對本發(fā)明的藥劑的給藥量沒有特別限定，可以根據(jù)給藥對象的年齡、體重、健康狀態(tài)等適當調(diào)整。本發(fā)明的藥劑的每一天的給藥量以茶葉計優(yōu)選0.5g以上，更優(yōu)選1.0g以上，進一步優(yōu)選1.5g以上。本發(fā)明的藥劑的每一天的給藥量沒有上限，通常以茶葉計為50g以下。

本發(fā)明的藥劑(當本發(fā)明的藥劑包含兩種以上的成分時是指組合物)可以給對象使用以改善或預防對象的糖尿病。因此，由本說明書掌握給對象使用本發(fā)明的藥劑或組合物以改善或預防對象的糖尿病的方法。在該方法中，對象的范圍、所能使用的藥劑或組合物、所能使用的藥劑或組合物的優(yōu)選的給藥量、優(yōu)選的給藥時期、給藥方式的例子和優(yōu)選的例子與在本發(fā)明的藥劑中已說明的例子相同。

實施例

試驗例1 代謝綜合征預防的評價

[實施例1]

作為茶葉，使用了在采集2012年產(chǎn)“Sunrouge”茶葉后將蒸的葉干燥而獲得的Sunrouge干燥茶葉(荒茶(未加工的茶葉))。

使用碾磨機(Tiger公司制造)將Sunrouge荒茶粉碎至5mm左右，加入原料粉碎物的20倍量(w/w)的70℃的熱水，在70℃±2℃下攪拌10分鐘，之后用100篩目進行固液分離，得到了提取液。將提取液以700g的離心力離心分離10分鐘，回收上清，之后使用真空冷凍干燥機(LABCONCO公司制造、FZ-12CS型、BTD棚式干燥室)進行處理，之后進行冷凍干燥，得到了粉末狀Sunrouge茶葉提取物樣品。

在飼料中添加1重量%的所得的Sunrouge茶葉提取物樣品進行混合。飼料組成見表1。

[表1]

表1 試驗例1中的飼料組成

確認了實施例1中所得的Sunrouge茶葉提取物樣品的組成，結(jié)果如下。需要說明的是，以下的量顯示相對于茶葉提取物的干燥重量的含量。

[Sunrouge茶葉提取物樣品的組成]

作為Sunrouge茶葉提取物樣品給藥組(n=6)，使用了12周齡的雄性小鼠C57BL/6J。預飼養(yǎng)給藥組的小鼠7天后，讓它們自由攝取添加有Sunrouge茶葉提取物樣品的飼料使每只小鼠1天進食4克，飼養(yǎng)了8周。飼養(yǎng)期間結(jié)束后，讓小鼠絕食16小時，之后采集血液。采血后解剖小鼠，測定了睪丸周邊脂肪重量。小鼠的睪丸周邊脂肪重量的測定結(jié)果見圖1。

由采集的血液調(diào)制血清，將所得血清加載到葡萄糖CII-Test wako (和光純藥公司制造)中測定了血糖值。再將所得血清加載到超高靈敏度小鼠胰島素測定試劑盒(森永生科學研究所制造)中測定了胰島素量。由所得數(shù)據(jù)算出了HOMA-IR (計算式：{空腹時的血中胰島素濃度(μU/mL)×空腹時血糖值(mg/dl)}/405)。結(jié)果見圖2。

[比較例1]

除了使用在采集2013年產(chǎn)“Yabukita”茶葉后將蒸的葉干燥而獲得的Yabukita干燥茶葉來代替Sunrouge干燥茶葉以外，進行了與實施例1相同的操作。飼料組成見表1，結(jié)果見圖1和圖2。

[比較例2]

除了在飼料中沒有添加茶葉提取物以外，進行了與實施例1相同的操作。飼料組成見表1，結(jié)果見圖1和圖2。

如圖1所示，與添加了Yabukita茶葉提取物樣品的比較例1、未添加茶葉提取物樣品的比較例2相比，添加了Sunrouge茶葉提取樣品的實施例1的飼料的脂肪重量較少。

如圖2所示，與添加了Yabukita茶葉提取物樣品的比較例1、未添加茶葉提取物樣品的比較例2相比，添加了Sunrouge茶葉提取物樣品的實施例1的飼料的HOMA-IR的升高得到顯著抑制。這顯示本發(fā)明的藥劑能夠發(fā)揮胰島素抵抗性改善效果。

肥胖和胰島素抵抗性均為代謝綜合征的癥狀，試驗例1的結(jié)果顯示：本發(fā)明的藥劑能夠發(fā)揮預防或改善代謝綜合征的效果。

試驗例2 餐后血糖值的升高抑制評價

[實施例2]

作為Sunrouge茶葉提取物樣品給藥組(n=6)，使用了6周齡的雄性ICR小鼠。預飼養(yǎng)各小鼠3周后，讓其絕食16小時，之后采集了血液。然后，混合與實施例1相同的Sunrouge茶葉提取物樣品和可溶性淀粉(和光純藥公司制造)，使分別達到500mg/kg小鼠體重和2000mg/kg小鼠體重，對小鼠胃內(nèi)進行探頭(Sonde)給藥。

給予茶葉提取物樣品和可溶性淀粉后，每經(jīng)過30分鐘、60分鐘、120分鐘、150分鐘由各小鼠采集血液，利用Medisafe Mini (TERUMO公司制造)和Medisafe Chip (TERUMO公司制造)測定了血糖值。算出了0分鐘～150分鐘的餐后血糖值的AUC。結(jié)果見圖3。另外，還算出了0分鐘～30分鐘的餐后血糖值的AUC。結(jié)果見圖4。

[比較例3]

除了使用與比較例1相同的Yabukita茶葉提取物樣品來代替Sunrouge茶葉提取物樣品以外，進行了與實施例2相同的操作。結(jié)果見圖3和圖4。

[比較例4]

除了使用生理鹽水來代替Sunrouge茶葉提取物樣品以外，進行了與實施例2相同的操作。結(jié)果見圖3和圖4。

關于從進餐開始到150分鐘后的AUC，如圖3所示，與給予了生理鹽水的比較例4的AUC相比，給予了Sunrouge茶葉提取物樣品的實施例2的AUC明顯小。另一方面，與比較例4的AUC相比，給予了Yabukita茶葉提取物樣品的比較例3的AUC只不過是稍小而已，也沒有確認到顯著差異。

另外，關于從進餐開始到30分鐘后的AUC，如圖4所示，與比較例3和比較例4的各AUC相比，實施例2的AUC明顯低。比較例3的AUC倒是較比較例4的AUC大。

上述結(jié)果顯示：本發(fā)明的藥劑可以發(fā)揮抑制餐后血糖值等的血糖值升高的效果。

試驗例3 α-葡糖苷酶活性抑制率的評價(其1)

[實施例3]

稀釋與實施例1相同的Sunrouge茶葉提取物樣品，使其終濃度達到100mg/L。稀釋α-葡糖苷酶(和光純藥公司制造)使其終濃度達到100U/L。使用所得的各稀釋液和QuantiChrom (注冊商標) α-葡糖苷酶測定試劑盒(BioAssay Systems公司制造)，測定了Sunrouge茶葉提取物樣品的α-葡糖苷酶活性抑制率。結(jié)果見圖5。

[比較例5]

除了使用與比較例1相同的Yabukita茶葉提取物樣品來代替Sunrouge茶葉提取物樣品以外，進行了與實施例3相同的操作。結(jié)果見圖5。

如圖5所示，與使用了Yabukita茶葉提取物樣品的比較例5相比，使用了Sunrouge茶葉提取物樣品的實施例3顯示出顯著高的α-葡糖苷酶活性抑制效果。該結(jié)果顯示：本發(fā)明的藥劑可以發(fā)揮α-葡糖苷酶活性抑制效果。

試驗例4 α-葡糖苷酶活性抑制率的評價(其2)

[實施例4]

在Sunrouge的20mg干燥茶葉粉末中添加1.0mL的蒸餾水，在100℃、10分鐘的條件下進行提取。以1700g的離心力離心分離10分鐘，使用0.2μm的濾器(Whatman公司制造)進行處理，得到了Sunrouge干燥茶葉的提取液。通過使用Multi-beads Shocker (安井器械公司制造)將荒茶粉碎，制成了干燥茶葉粉末。

將α-葡糖苷酶(和光純藥公司制造)稀釋，使其終濃度達到100U/L。使用所得的提取樣品、稀釋液和QuantiChrom (注冊商標) α-葡糖苷酶測定試劑盒(BioAssay Systems公司制造)，測定了Sunrouge茶葉提取物樣品的α-葡糖苷酶活性抑制率。結(jié)果見表2。

[實施例5]

除了使用作為Sunrouge的親本株的茶中間母本農(nóng)6號的干燥茶葉來代替Sunrouge的干燥茶葉以外，進行了與實施例4相同的操作。結(jié)果見表2。

[比較例6]

除了使用表2所示的50種各干燥茶葉代替Sunrouge的干燥茶葉以外，進行了與實施例4相同的操作。結(jié)果見表2。

[表2]

表2 茶葉提取物樣品的α-葡糖苷酶活性抑制率

如表2所示，使用了Sunrouge干燥茶葉粉末提取物樣品的實施例4和使用了茶中間母本農(nóng)6號茶葉粉末提取物樣品的實施例5與使用了其他茶葉粉末提取物樣品的比較例6相比顯示出了高的α-葡糖苷酶活性抑制效果。

該結(jié)果顯示：本發(fā)明的藥劑不受提取條件等的影響，可以穩(wěn)定地發(fā)揮α-葡糖苷酶活性抑制效果。

上述實施例的結(jié)果顯示：本發(fā)明的藥劑發(fā)揮α-葡糖苷酶活性抑制效果的結(jié)果是能夠抑制餐后血糖值的升高，其結(jié)果，可預防或改善肥胖，能夠抑制高血糖的惡化或改善高血糖，可以發(fā)揮預防、抑制糖尿病的效果。

試驗例5 淀粉酶活性抑制的評價

[實施例6]

在20mg Sunrouge的干燥茶葉粉末中添加1.0mL的蒸餾水，在100℃、10分鐘的條件下進行了提取。以1700g的離心力離心分離10分鐘，使用0.2μm的濾器(Whatman公司制造)進行處理，得到了Sunrouge干燥茶葉的提取液。通過使用Multi-beads Shocker (安井器械公司制造)將荒茶粉碎，制成了干燥茶葉粉末。

調(diào)制來自豬胰腺的淀粉酶(Sigma公司制造)使其終濃度達到800U/L，得到了淀粉酶溶液。使用MaxDiscovery (注冊商標)淀粉酶測定試劑盒(Bioo Scientific Corporation制造)分別測定了“A：Sunrouge干燥茶葉的提取液與淀粉酶溶液的混合液的淀粉酶活性”和“B：淀粉酶溶液的淀粉酶活性”，用A除以B，求出了Sunrouge干燥茶葉提取液的淀粉酶活性抑制率。結(jié)果見表3。

[實施例7]

除了使用茶中間母本農(nóng)6號的干燥茶葉來代替Sunrouge的干燥茶葉以外，進行了與實施例6相同的操作。

[比較例7]

除了使用表3所示的50種茶葉來代替Sunrouge的干燥茶葉以外，進行了與實施例6相同的操作。結(jié)果見表3。

[表3]

表3 茶葉提取液樣品的淀粉酶活性抑制率

如表3所示，使用了Sunrouge茶葉干燥粉末提取液樣品的實施例6和使用了茶中間母本農(nóng)6號茶葉干燥粉末提取液樣品的實施例7與使用了其他茶葉干燥粉末提取液樣品的比較例7相比顯示出了高的淀粉酶活性抑制效果。特別是使用了Sunrouge茶葉干燥粉末提取液樣品的實施例6顯示出了顯著高的淀粉酶活性抑制效果。

試驗例6 人的餐后血糖值的升高抑制效果的評價

[實施例8]

如下所示，依照日本Glycemic Index研究會的規(guī)程，測定了人的餐后血糖值。

以6名無耐糖能力異常者作為受試者。在血糖值測定日的前一天禁止受試者進行劇烈運動以及午后8點以后進食。另外，在血糖值測定日的前一天還禁止受試者暴飲暴食和大量飲酒以及熬夜。

在血糖值測定日禁止受試者攝入早餐，從上午9點開始測定了血糖值。從受試者的指尖采血，使用Medisafe血糖測定試劑盒(TERUMO公司制造)測定了血糖值，作為空腹時的血糖值。

接著，讓受試者同時攝取了0.5g作為評價樣品的Sunrouge的干燥茶葉粉末(2014年德之島產(chǎn)、由日本制紙株式會社供應)和50mL蒸餾水。通過使用碾磨機(Tiger公司制造)將荒茶粉碎，得到了Sunrouge的干燥茶葉粉末。攝取后立即攝取了130g米飯(包裝米(Packed Rice)、佐藤的米飯 簡單一頓 新瀉縣產(chǎn)越光牌、佐藤食品制造(サトウのごはん かるーく一膳 新潟県産コシヒカリ、サトウ食品製))。受試者攝取米飯的時間為8分鐘～10分鐘，受試者一口米飯咀嚼30次。在攝取米飯期間，讓受試者將100mL蒸餾水分成小份飲用。餐后禁煙、杜絕飲食，禁止了受試者過度運動。

從開始攝取米飯時(作為0分鐘。)起經(jīng)過30分鐘后，從受試者的指尖采血，利用Medisafe血糖測定試劑盒(TERUMO公司制造)測定了血糖值，作為餐后30分鐘的血糖值。算出開始攝取后0分鐘～30分鐘的血糖值的AUC，算出了餐后血糖值的升高量。采用空腹時的血糖值作為開始攝取后0分鐘的血糖值。結(jié)果見圖6。

[實施例9]

除了受試者人數(shù)為15名、且以1.0g的Sunrouge干燥茶葉粉末作為評價樣品以外，進行了與實施例8相同的操作來進行試驗。結(jié)果見圖6。

[實施例10]

除了以1.5g的Sunrouge干燥茶葉粉末作為評價樣品以外，進行了與實施例8相同的操作來進行試驗。結(jié)果見圖6。

[比較例8]

除了受試者人數(shù)為15名、且沒有攝取評價樣品以外，進行了與實施例8相同的操作來進行試驗。結(jié)果見圖6。

[比較例9]

除了受試者人數(shù)為15名、且以含有難消化性糊精的補品(商品名：賢者的食卓(注冊商標), 1包6g, 1包中混合5g難消化性糊精, 大塚制藥制造、特定保健用食品)作為評價樣品以外，進行了與實施例8相同的操作來進行試驗。結(jié)果見圖6。

如圖6所示，與比較例8和比較例9相比，在攝取了0.5g Sunrouge干燥茶葉粉末的實施例8中餐后血糖值的升高量減少。與比較例8相比，在攝取了1.0g以上的Sunrouge干燥茶葉粉末的實施例9和實施例10中餐后血糖值的升高得到顯著抑制，升高抑制的效果與實施例8同等或其以上。試驗例6的結(jié)果顯示：本發(fā)明的藥劑即使在人體內(nèi)也顯示出抑制餐后血糖值的升高，抑制餐后血糖值升高的結(jié)果，可預防或改善肥胖以能夠抑制高血糖的惡化或改善高血糖，能夠發(fā)揮優(yōu)異的糖尿病預防或抑制效果。

試驗例7 在小鼠中的脂質(zhì)排出促進效果和體重增加抑制效果的評價

將在試驗例1之胰島素抵抗性的評價中調(diào)制的與實施例1、比較例1、比較例2中的配比相同的配比的飼料分別作為飼料1、飼料2、飼料3用于以下的試驗。

需要說明的是，與給予小鼠的普通飼料相比，飼料1～3的糖含量和脂肪含量高。

[實施例11]

以12周齡的雄性小鼠C57BL/6J(n＝6)作為飼料1的給藥組。預飼養(yǎng)給藥組的小鼠7天后，讓其自由攝取飼料1使達到每只每天4g，飼養(yǎng)了8周。攝取6周后，用2周的時間采集了小鼠糞便。將所采集的糞便風干后作為用于測定脂質(zhì)量的樣品。

通過以下所示的索氏提取法提取糞便中所含的脂質(zhì)并進行了測定。

(索氏提取法)

充分清洗脂肪定量瓶，在105℃下干燥12小時，求出了恒重。精密稱取3g在105℃下干燥了12小時的糞便，將其裝入圓筒濾紙中。在圓筒濾紙的上部塞入脫脂棉，再插入索氏提取器的提取管中，將求出了恒重的脂肪定量瓶與提取管連接。從提取管的上部加入了80mL乙醚。在提取器上連接冷凝管，將提取器安裝在電加熱裝置上，讓冷凝水流入冷凝管中。使乙醚在60℃～70℃下循環(huán)，提取了12小時。從提取管中取出圓筒濾紙，之后，繼續(xù)加熱直至脂肪定量瓶中的乙醚全部轉(zhuǎn)移到提取管中。將取掉了上部的脂肪定量瓶在熱水浴上加熱，使乙醚完全蒸發(fā)。將脂肪定量瓶用105℃的干燥器干燥3小時后，在干燥器中放置冷卻30分鐘，精密稱量。反復進行干燥、放置冷卻和精密稱量，直至達到恒重。

糞便中的脂質(zhì)量的測定結(jié)果見表4。

[比較例10]

除了給予飼料2來代替飼料1以外，進行了與實施例11相同的操作來進行試驗。結(jié)果見表4。

[比較例11]

除了給予飼料3來代替飼料1以外，進行了與實施例11相同的操作來進行試驗。結(jié)果見表4。

[表4]

表4 在小鼠中的脂質(zhì)排出促進效果和體重增加抑制效果

由表4的結(jié)果可知：與攝取了包含Yabukita茶葉提取物樣品的飼料2的比較例10的小鼠組或攝取了不含評價樣品的空白的飼料3的比較例11的小鼠組相比，攝取了包含Sunrouge茶葉提取物樣品的飼料1的實施例11的小鼠組的糞便中的脂質(zhì)比例高，飼料1所含的Sunrouge茶葉提取物具有優(yōu)異的脂質(zhì)排出促進效果。另外，與攝取了飼料2的比較例10的小鼠組或攝取了飼料3的比較例11的小鼠組相比，攝取了飼料1的實施例11的小鼠組在宰殺時的體重最少，可知飼料1所含的Sunrouge茶葉提取物具有優(yōu)異的體重增加抑制效果。

以上的結(jié)果顯示：本發(fā)明的藥劑發(fā)揮優(yōu)異的脂質(zhì)排出促進效果和體重增加抑制效果，能夠預防或改善肥胖以抑制高血糖的惡化或改善高血糖，能夠發(fā)揮優(yōu)異的糖尿病預防或抑制效果。

試驗例8 脂質(zhì)分解抑制效果的評價

[實施例12]

在20mg Sunrouge的干燥茶葉粉末中添加1.0mL的蒸餾水，在100℃、10分鐘的條件下進行了提取。以1700g的離心力離心分離10分鐘，用0.2μm的濾器(Whatman公司制造)進行處理，得到了Sunrouge干燥茶葉提取液。通過使用Multi-beads Shocker (安井器械公司制造)將荒茶粉碎，制成了干燥茶葉粉末。

調(diào)制來自豬胰腺的脂肪酶(Sigma公司制造)使其終濃度達到102U/L。使用脂肪酶試劑盒S (DS Pharma Biomedical公司制造)分別測定“A：Sunrouge茶葉提取液和脂肪酶溶液的混合液的脂肪酶活性”和“B：脂肪酶溶液的脂肪酶活性”，通過用A除以B，求出了Sunrouge干燥茶葉提取物的脂肪酶活性抑制率。結(jié)果見表5。

[比較例12]

除了使用Yabukita的干燥茶葉來代替Sunrouge的干燥茶葉以外，進行了與實施例12相同的操作。結(jié)果見表5。

[表5]

表5 胰脂肪酶活性抑制率

如表5所示可知：與使用了Yabukita的茶葉干燥粉末提取液樣品的比較例12相比，使用了Sunrouge茶葉干燥粉末提取液樣品的實施例12顯示出高的脂肪酶活性抑制效果，具有優(yōu)異的脂質(zhì)分解抑制效果。

試驗例9 提高脂質(zhì)代謝的效果的評價

[實施例13]

摘取試驗例1的實施例1中宰殺的小鼠的肝臟，進行了微陣列分析(Agilent公司制造Whole Mouse Genome寡DNA微陣列試劑盒 2.0版)。

作為比較，摘取試驗例1的比較例2中宰殺的小鼠的肝臟，進行了微陣列分析。

關于所得的基因表達量的數(shù)據(jù)，選取了在實施例1/比較例2中表達量達到2.0以上的基因作為表達提高基因。

對于所選取的基因的ENTREZ GENE ID進行DAVID (http：//david.abcc.ncifcrf.gov/home.jsp)的功能注釋分析后，從Kegg-路徑中選取了顯著包含表達升高基因的路徑。結(jié)果見表6。

[比較例13]

除了將實施例13中使用的實施例1的小鼠變換成比較例1的小鼠以外，進行了與實施例13相同的操作。結(jié)果見表6。

[表6]

表6

由表6的結(jié)果可知：攝取了包含Sunrouge茶葉提取物樣品的飼料的小鼠在表6所示的脂質(zhì)代謝途徑中代謝均有所提高。

由試驗例8和試驗例9的評價結(jié)果推測：Sunrouge茶葉提取物樣品通過脂質(zhì)分解抑制作用和代謝提高作用來發(fā)揮優(yōu)異的脂質(zhì)排出促進效果。

試驗例10 茶葉提取物的熱穩(wěn)定性評價

[實施例14]

按照以下的條件得到了茶葉提取物。

?茶葉：采集2012年產(chǎn)“Sunrouge”茶葉后將蒸的葉干燥而獲得的茶葉；

?前處理：使用Multi-beads Shocker (注冊商標、安居器械株式會社)進行粉碎處理(平均粒徑：309μm)；

?溫度：70℃；

?時間：10分鐘；

?提取溶劑與液量：使蒸餾水(DW)相對于茶葉干燥重量達50倍重量。

按照文獻(Mari Maeda-Yamamoto等人., Chemical analysis and acetylcholinesterase inhibitory effect of anthocyanin-rich red leaf tea (cv. Sunrouge). J Sci Food Agric 92：2379-2386(2012).)中記載的條件，通過HPLC分析所得的茶葉提取物的每單位干燥重量的飛燕草素或其糖苷的含量和兒茶精的含量時，分別為0.2重量%、18.5重量%。

將茶葉提取物濃縮后，使用噴霧干燥機(Yamato科學株式會社制造、商品名：Pulvis Mini-Spray GA-32)將其粉末化，制成了茶葉提取物的粉末。將其在溫度100℃下加熱處理120分鐘，測定了處理后的飛燕草素殘留率。

[比較例14]

采用了來自作為富含飛燕草素的現(xiàn)有流通品的馬基莓的提取物粉末(ORYZA油化公司制造、商品名：Maqui Berry Extract)的基準值。

實施例14、比較例14的結(jié)果見圖7。

與含有飛燕草素的馬基莓提取物粉末(比較例14)相比，茶葉提取物粉末的熱穩(wěn)定性(實施例14)優(yōu)異。