本發(fā)明涉及一種包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的凍干配制品。背景肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)是一種生物活性肽，具有肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞增殖活性并且已經(jīng)在多種動(dòng)物物種中發(fā)現(xiàn)。在人類(lèi)中，已經(jīng)在來(lái)自患有暴發(fā)性肝炎患者的血漿中發(fā)現(xiàn)人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hHGF)(專(zhuān)利文獻(xiàn)1)，并且近年來(lái)，重組人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(rhHGF)已經(jīng)可以通過(guò)生物技術(shù)大規(guī)模生產(chǎn)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)1)。預(yù)期這些肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子可以用作通過(guò)增加正常肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞而針對(duì)肝炎和肝硬化有效的治療和預(yù)防劑，并且由于其多種生物活性，可以用作腎衰竭及胃、十二指腸、皮膚等由抗癌劑的副作用引起的病損的治療劑。包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的凍干配制品已經(jīng)披露于專(zhuān)利文獻(xiàn)2中，該專(zhuān)利公開(kāi)包括一種肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子以及一種穩(wěn)定劑例如甘氨酸、丙氨酸、山梨醇、甘露醇或葡聚糖硫酸鹽。專(zhuān)利文獻(xiàn)3披露了一種凍干配制品，包括一種濃度低至小于5mg/mL的、適合于藥物的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，該配制品包括穩(wěn)定劑例如精氨酸、賴(lài)氨酸、組氨酸、谷氨酸或天冬氨酸。專(zhuān)利文獻(xiàn)4披露了一種凍干配制品，包括一種肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子以及一種穩(wěn)定劑例如純蔗糖。引文列表專(zhuān)利文獻(xiàn)[專(zhuān)利文獻(xiàn)1]專(zhuān)利公開(kāi)JP-A-S63-22526[專(zhuān)利文獻(xiàn)2]專(zhuān)利公開(kāi)JP-A-H9-25241[專(zhuān)利文獻(xiàn)3]WO2000/072873[專(zhuān)利文獻(xiàn)4]WO2008/102849非專(zhuān)利文獻(xiàn)[非專(zhuān)利文獻(xiàn)1]《自然》(Nature)，342卷，440-443頁(yè)，1989發(fā)明概述本發(fā)明將解決的問(wèn)題然而，目的在于增加肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子穩(wěn)定性的、包括披露于專(zhuān)利公開(kāi)JP-A-H9-25241、WO2000/072873以及WO2008/102849中的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的凍干配制品仍未提供足夠的儲(chǔ)存穩(wěn)定性。此外，尚未知如何抑制與肝細(xì)咆生長(zhǎng)因子關(guān)聯(lián)的雜質(zhì)的生成或如何保持包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的凍干配制品中的儲(chǔ)存前同種型比率。因此本發(fā)明目標(biāo)在于提供一種凍干配制品，該凍干配制品相較于傳統(tǒng)凍干配制品具有改進(jìn)的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子儲(chǔ)存穩(wěn)定性。用于解決該問(wèn)題的手段本發(fā)明的諸位發(fā)明人已經(jīng)進(jìn)行了大量的研究以實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)并且結(jié)果發(fā)現(xiàn)可能使用一種凍干配制品實(shí)現(xiàn)該目標(biāo)，該凍干配制品包括(1)一種肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，(2)海藻糖以及(3)一種或多種選自下組的化合物，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽。由此諸位發(fā)明人完成了本發(fā)明。本發(fā)明提供了以下內(nèi)容：[1]一種凍干配制品，該凍干配制品包括(1)一種肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，(2)海藻糖以及(3)一種或多種選自下組的化合物，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽；[2]一種用于生產(chǎn)凍干配制品的方法，該方法包括以下步驟：(I)在添加(1)一種肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子之前，調(diào)節(jié)一種水性溶液的pH為pH4.5至6.5，該水性溶液至少包括(3)一種或多種選自下組的化合物，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽；并且制備一種水性溶液，該水性溶液包括(1)該肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，(2)海藻糖以及(3)一種或多種選自下組的化合物，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽；并且(II)將步驟(I)中獲得的、包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液凍干；[3]一種方法，該方法通過(guò)將(2)海藻糖以及(3)一種或多種選自下組的化合物，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽包含于含有(1)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的凍干配制品中來(lái)穩(wěn)定肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子；[4]一種方法，該方法通過(guò)將(2)海藻糖以及(3)一種或多種選自下組的化合物，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽包含于含有(1)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的凍干配制品中來(lái)穩(wěn)定肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，以抑制肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子聚集體的生成、抑制與肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子關(guān)聯(lián)的雜質(zhì)的生成和/或保持儲(chǔ)存前同種型比率；[5]一種方法，該方法通過(guò)將(2)海藻糖以及(3)一種或多種選自下組的化合物，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽包含于含有(1)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的凍干配制品中來(lái)穩(wěn)定肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，以抑制肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子聚集體的生成；[6]一種方法，該方法通過(guò)將(2)海藻糖以及(3)一種或多種選自下組的化合物，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽包含于含有(1)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的凍干配制品中來(lái)穩(wěn)定肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，以抑制與肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子關(guān)聯(lián)的雜質(zhì)的生成；[7]一種方法，該方法通過(guò)將(2)海藻糖以及(3)一種或多種選自下組的化合物，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽包含于含有(1)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的凍干配制品中來(lái)穩(wěn)定肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，以保持肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的儲(chǔ)存前同種型比率；以及[8]如以上描述的項(xiàng)目[1]至[7]，其中該肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子具有由SEQIDNO：1表示的氨基酸序列。有利作用本發(fā)明可以提供一種凍干配制品，該凍干配制品相較于傳統(tǒng)凍干配制品具有改進(jìn)的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子儲(chǔ)存穩(wěn)定性。附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明圖1是與肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子關(guān)聯(lián)的雜質(zhì)的代表性色譜圖；圖2是肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子同種型的代表性色譜圖；圖3顯示在測(cè)試實(shí)例2中初始以及在60℃儲(chǔ)存1個(gè)月后測(cè)試的凍干配制品中可溶性聚集體的量；圖4顯示在測(cè)試實(shí)例3中初始以及在60℃儲(chǔ)存1個(gè)月后測(cè)試的凍干配制品中雜質(zhì)的總量；圖5顯示相對(duì)于在測(cè)試實(shí)例4中初始以及在60℃儲(chǔ)存1個(gè)月后測(cè)試的凍干配制品中的同種型，峰B的比率；圖6顯示相對(duì)于在測(cè)試實(shí)例4中測(cè)試的凍干配制品中的同種型，海藻糖含量與峰B的比率之間的相關(guān)性；并且圖7顯示相對(duì)于在測(cè)試實(shí)例4中測(cè)試的凍干配制品中的同種型，精氨酸含量與峰B的比率之間的相關(guān)性。實(shí)施方式的說(shuō)明在下文中詳細(xì)描述了本發(fā)明的實(shí)施例。本發(fā)明不限于下文描述的實(shí)施例并且在發(fā)明范圍內(nèi)可以進(jìn)行不同的修改。本發(fā)明的凍干配制品包括(1)一種肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，(2)海藻糖以及(3)一種或多種選自下組的化合物(下文也稱(chēng)作“化合物(3)”)，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽。用于在本發(fā)明中使用的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子是一種具有促進(jìn)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)的活性的蛋白質(zhì)，并且不具體受限，只要其被純化一定程度可以用作一種藥物。例如，可以參見(jiàn)專(zhuān)利公開(kāi)JP-A-H11-56382。該肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子可以是組織器官(例如哺乳動(dòng)物的肝臟、脾臟、和腎臟)或流體組織(例如血漿和血清)中天然存在的那些中的任一種，或是被改性為具有變體氨基酸序列和/或變體碳水化合物鏈的那些中的任一種。哺乳動(dòng)物的實(shí)例包括人、大鼠、兔、乳牛、馬、綿羊等，其中人是優(yōu)選的。人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的氨基酸序列的實(shí)例包括SEQIDNO：1。該肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子可以提取并純化自組織器官(例如哺乳動(dòng)物的肝臟、脾臟、和腎臟)以及流體組織(例如血漿和血清)，或分離自產(chǎn)該肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的細(xì)胞。該肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子可以通過(guò)向一種適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞引入一種適當(dāng)?shù)妮d體(其中已經(jīng)通過(guò)基因工程技術(shù)整合了編碼該肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的多核苷酸)來(lái)獲得。該載體不具體受限，只要其允許表達(dá)編碼肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的多核苷酸。該載體的實(shí)例包括具有選擇標(biāo)記(是針對(duì)抗生素例如新霉素具有抗性的基因)的載體、具有編碼二氫葉酸還原酶(DHFR)或谷氨酰胺合成酶(GS)的基因的載體等，其可以在動(dòng)物細(xì)胞中擴(kuò)增，其中優(yōu)選pCI載體(可獲得自普洛麥格公司(Promega))以及pcDNA載體(可獲得自英杰公司(Invitrogen))。該宿主細(xì)胞不具體受限，只要其允許使用載體進(jìn)行轉(zhuǎn)化并且允許重組肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子進(jìn)行表達(dá)。宿主細(xì)胞的實(shí)例包括大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母菌、絲狀真菌、植物細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞等，其中優(yōu)選動(dòng)物細(xì)胞并且特別優(yōu)選中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞。通過(guò)基因工程技術(shù)獲得的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子可以是，例如，無(wú)具體限制的重組肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子。例如，可以參見(jiàn)專(zhuān)利公開(kāi)JP-A-H3-285693。所用的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子可以是，例如，獲得自為CHO細(xì)胞的宿主細(xì)胞的重組人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(rhHGF)。肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子可以是，在改性的氨基酸序列保留該肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的活性的范圍內(nèi)，通過(guò)天然存在的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的氨基酸序列中的一個(gè)或多個(gè)，優(yōu)選1個(gè)至10個(gè)氨基酸殘基的取代、缺失、添加或插入或其組合改性的改性肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子、改性的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子可以是與天然存在的肝細(xì)咆生長(zhǎng)因子的氨基酸序列具有，例如，80％，優(yōu)選85％，更優(yōu)選90％并且仍更優(yōu)選95％同源性的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子。例如，可以參見(jiàn)WO90/010651、專(zhuān)利公開(kāi)JP-A-H4-030000以及專(zhuān)利公開(kāi)JP-A-H5-111383。凍干之前肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的濃度不具體受限并且可以是例如，5mg/mL或更低，優(yōu)選3mg/mL或更低并且更優(yōu)選1mg/mL或更低。向患者胃腸外給予本發(fā)明的凍干配制品。當(dāng)凍干配制品用于肺部給予時(shí)，本發(fā)明的凍干配制品在使用之前進(jìn)行溶解并且通過(guò)噴霧器向患者進(jìn)行給予。當(dāng)凍干配制品用于注射時(shí)，本發(fā)明的凍干配制品在使用之前進(jìn)行溶解并且向患者靜脈內(nèi)、皮下、或肌內(nèi)給予。通過(guò)溶解凍干配制品獲得的水性溶液中肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的濃素不具體受限并且可以是例如，5mg/mL或更低。用于溶解本發(fā)明的凍干配制品的水不具體受限，只要它是醫(yī)療實(shí)踐中使用的水即可，并且其實(shí)例包括注射用水、已滅菌的純化水、鹽水等。用于在本發(fā)明中使用的海藻糖不具體受限，只要它被純化為藥學(xué)上可接受的程度并且其實(shí)例包括海藻糖酐、海藻糖水合物等。海藻糖水合物的實(shí)例包括但不具體受限于列于《日本藥典》(JapanesePharmacopoeia)第16版等中的海藻糖水合物(海藻糖二水合物)。添加至該凍干配制品中的海藻糖的量是這樣的以使得肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子與海藻糖(在該段落的下文中，表述為相當(dāng)于海藻糖酐的量)之間的質(zhì)量比是，例如，1∶4至1∶460，優(yōu)選1∶4至1∶370并且更優(yōu)選1∶8至1∶280?？商娲?，基于就固體物質(zhì)而言該凍干配制品的總質(zhì)量是按質(zhì)量計(jì)100.0份，海藻糖是，例如，按質(zhì)量計(jì)20.0至95.0份并且優(yōu)選是按質(zhì)量計(jì)30.0至94.0份。此外，在通過(guò)溶解凍干配制品獲得的、包含1.0mg/mL的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液中，海藻糖的濃度是，例如，4.0mg/mL至460.0mg/mL并且優(yōu)選是8.0mg/mL至280.0mg/mL。用于在本發(fā)明中使用的化合物(3)選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽。該化合物(3)不具體受限，只要它被純化為藥學(xué)上可接受的程度?？梢允褂靡环N或兩種或更多種化合物(3)。鑒于聚集體或雜質(zhì)生成的抑制，化合物(3)優(yōu)選地是一種或多種選自下組的化合物，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽。化合物(3)包括作為一種堿性物質(zhì)的精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸和葡甲胺并且優(yōu)選地是一種或多種選自精氨酸、組氨酸和賴(lài)氨酸的化合物。添加至凍干配制品中的化合物(3)的量可以在如下濃度范圍內(nèi)，該范圍允許肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子在用于生產(chǎn)該凍干配制品的、包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液中、或在通過(guò)溶解該凍干配制品獲得的、包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液中溶解而不聚集。添加至凍干配制品中的化合物(3)的量是這樣的以使得肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子與化合物(3)(在該段落的下文中，表述為相當(dāng)于游離態(tài)的量)之間的質(zhì)量比是，例如，1∶1至1∶50，優(yōu)選1∶1至1∶40并且更優(yōu)選1∶2至1∶35?？商娲?，基于就固體物質(zhì)而言該凍干配制品的總質(zhì)量是按質(zhì)量計(jì)100.0份，化合物(3)的量是，例如，按質(zhì)量計(jì)1.5至60.0份并且優(yōu)選是按質(zhì)量計(jì)3.0至59.0份。此外，在通過(guò)溶解凍干配制品獲得的、包含1.0mg/mL的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液中，化合物(3)的量是，例如，1.0mg/mL至50.0mg/mL，優(yōu)選是1.0mg/mL至40.0mg/mL并且更優(yōu)選是2.0mg/mL至35.0mg/mL。在本發(fā)明中化合物(3)可以是其藥學(xué)上可接受的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽的實(shí)例包括鹽酸鹽、乙酸鹽、鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽等。在本發(fā)明中，在一種包括(1)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的凍干配制品中，通過(guò)進(jìn)一步包括(2)海藻糖以及(3)一種或多種選自下組的化合物，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽，可以相較于傳統(tǒng)凍干配制品改進(jìn)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的儲(chǔ)存穩(wěn)定性。如在此使用的，儲(chǔ)存穩(wěn)定性是指抑制肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子聚集體的生成、抑制與肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子關(guān)聯(lián)的雜質(zhì)的生成和/或保持儲(chǔ)存前同種型比率。本發(fā)明提供了一種方法，該方法通過(guò)將(2)海藻糖以及(3)一種或多種選自下組的化合物，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽包含于含有(1)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的凍干配制品中來(lái)穩(wěn)定肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子。即本發(fā)明提供了一種方法，該方法通過(guò)將(2)海藻糖以及(3)一種或多種選自下組的化合物，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽包含于含有(1)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的凍干配制品中來(lái)穩(wěn)定肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，以抑制肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子聚集體的生成。本發(fā)明還提供了一種方法，該方法通過(guò)包含(2)海藻糖以及(3)一種或多種選自下組的化合物，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽來(lái)穩(wěn)定肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，以抑制含有(1)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的凍干配制品中與肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子關(guān)聯(lián)的雜質(zhì)的生成。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種方法，該方法通過(guò)將(2)海藻糖以及(3)一種或多種選自下組的化合物，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽包含于含有(1)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的凍干配制品中來(lái)穩(wěn)定肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，以保持肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的儲(chǔ)存前同種型比率。如在此使用的，術(shù)語(yǔ)“聚集體”是指肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的聚集體并且其實(shí)例包括可溶性聚集體(例如二聚體和三聚體)以及通過(guò)相互作用生成的不可溶性聚集體。在本發(fā)明中，聚集體的量可以通過(guò)，例如，經(jīng)尺寸排阻色譜法測(cè)量可溶性聚集體的量來(lái)評(píng)估。在本發(fā)明中，可溶性聚集體的量，例如，當(dāng)針對(duì)儲(chǔ)存在60℃1個(gè)月后的凍干配制品經(jīng)由尺寸排阻色譜法評(píng)估聚集體的量時(shí)，是例如，小于1.4％并且優(yōu)選是1.0％或更低。可替代地，針對(duì)儲(chǔ)存在60℃1個(gè)月后的凍干配制品經(jīng)由尺寸排阻色譜法測(cè)量的聚集體的量是儲(chǔ)存之前聚集體的量的例如，4.6倍或更低，優(yōu)選4倍或更低，更優(yōu)選3.5倍或更低并且仍更優(yōu)選3倍或更低。不可溶性聚集體的量可以通過(guò)以下方法進(jìn)行評(píng)估，針對(duì)相對(duì)較大(具有1μm或更大尺寸)的不可溶性聚集體，通過(guò)《日本藥典》第16版中描述的在不可溶性顆粒物質(zhì)測(cè)試中的不透光度法或微流成像法，并且針對(duì)具有小于1μm或更低尺寸的不可溶性聚集體，通過(guò)光散射法或超速離心法。如在此使用的，術(shù)語(yǔ)“雜質(zhì)”(“impurity”或“impurities”)是指對(duì)應(yīng)于反相色譜法中觀察到的除肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子峰之外的一個(gè)或多個(gè)峰的一種或多種物質(zhì)。通過(guò)反相色譜法評(píng)估雜質(zhì)的量。例如，針對(duì)在本說(shuō)明書(shū)實(shí)例中使用的凍干配制品，如圖1中所示的，觀察到了在保留時(shí)間為10分鐘左右的兩個(gè)峰(下文分別稱(chēng)為“ImpA”和“ImpB”)以及除ImpA和ImpB之外的、在保留時(shí)間為6至7分鐘左右的其他雜質(zhì)的峰(下文成為“其他imp”)。在本發(fā)明中，其他雜質(zhì)的量，例如，當(dāng)針對(duì)儲(chǔ)存在60℃1個(gè)月后的凍干配制品經(jīng)由反相色譜法評(píng)估雜質(zhì)的量時(shí)，是例如，1.7％或更低，優(yōu)選1.5％或更低，更優(yōu)選1.3％或更低并且仍更優(yōu)選1.0％或更低?？商娲?，針對(duì)儲(chǔ)存在60℃1個(gè)月后的凍干配制品經(jīng)由反相色譜法測(cè)量的雜質(zhì)的量是儲(chǔ)存之前雜質(zhì)的量的例如，小于9倍，更優(yōu)選7倍或更低，更優(yōu)選5倍或更低并且仍更優(yōu)選3倍或更低。如在此使用的，術(shù)語(yǔ)“同種型”是指肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的電荷變體(chargevariant)并且是指具有不同電荷狀態(tài)的多種蛋白質(zhì)。同種型比率可以，例如，通過(guò)離子交換色譜法進(jìn)行評(píng)估。例如，針對(duì)在本說(shuō)明書(shū)實(shí)例中使用的凍干配制品，如圖2中所示的，觀察到了在保留時(shí)間為35至45分鐘處的兩個(gè)峰(下文分別稱(chēng)為“峰A”和“峰B”)。如在此使用的，術(shù)語(yǔ)“同種型比率”是指每種同種型相對(duì)于同種型總量的比例。本發(fā)明中肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的生物活性可以根據(jù)在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β-1(TGFβ-1)存在下評(píng)估貂肺上皮細(xì)胞(Mv.1.Lu細(xì)胞)或4BMr5細(xì)胞的增殖的、基于細(xì)胞的測(cè)定進(jìn)行評(píng)估(參見(jiàn)《免疫方法雜志》(JournalofImmnologicalMethods).258卷，1-11頁(yè)，2001等)并且可以被表示為50％有效濃度(EC50)。儲(chǔ)存期間凍干配制品的生物活性的變化可以表示為通過(guò)用儲(chǔ)存之后的EC50除以?xún)?chǔ)存之前的EC50獲得的相對(duì)滴度(％)。為了保持用于生產(chǎn)凍干配制品的、包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液或通過(guò)溶解凍干配制品獲得的、包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液的恒定pH，該凍干配制品可包含一種緩沖劑。在本發(fā)明中使用的緩沖劑不具體受限，只要它是藥學(xué)上可接受的，并且其實(shí)例包括磷酸、磷酸二氫鈉、磷酸二氫鈉一水合物、檸檬酸水合物、檸檬酸鈉水合物、檸檬酸二鈉、乙酸、冰乙酸、乙酸鈉水合物、碳酸鈉水合物、碳酸氫鈉、甘氨酸、甘氨酰甘氨酸等。緩沖劑通常以緩沖溶液的形式使用，常用的緩沖溶液是例如磷酸鹽緩沖溶液、檸檬酸緩沖溶液以及乙酸緩沖溶液。依據(jù)凍干前包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液的濃度，凍干配制品中的緩沖劑的量是例如1至100mM。通過(guò)調(diào)節(jié)濃度至這個(gè)范圍，可以實(shí)現(xiàn)通過(guò)溶解該凍干配制品獲得的、包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液的恒定pH。取決于pH，肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子具有變化的溶解度，其中最低限度的溶解度在等電點(diǎn)左右。因此當(dāng)考慮到等電點(diǎn)時(shí)，可以選擇pH，以使得肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子可以在用于生產(chǎn)該凍干配制品的、包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液中、或在通過(guò)溶解該凍干配制品獲得的、包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液中溶解而不聚集。在本發(fā)明中，在本說(shuō)明書(shū)中的實(shí)例中使用的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子例如，在做為等電點(diǎn)的中性pH左右具有0.1至0.2mg/mL的最低溶解度并且在pH5左右具有1.6mg/mL或更高的溶解度。因此，凍干前的水性溶液以及通過(guò)溶解凍干配制品獲得的水性溶液具有的pH是例如，4.5至6.5并且優(yōu)選是5.0至6.0。在本發(fā)明的用于生產(chǎn)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的凍干配制品的方法中，除緩沖劑之外可以使用一種pH調(diào)節(jié)劑以調(diào)節(jié)凍干前的水性溶液的pH。在本發(fā)明中使用的pH調(diào)節(jié)劑不具體受限，只要它是藥學(xué)上可接受的，并且其實(shí)例包括鹽酸、無(wú)水檸檬酸、檸檬酸水合物、檸檬酸鈉水合物、甘氨酸、丁二酸、乙酸、冰乙酸、乙酸鈉水合物、酒石酸、氫氧化鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈉水合物、干碳酸鈉、單乙醇胺、三乙醇胺、乳酸、乳酸鈉、磷酸、磷酸氫鈉水合物、無(wú)水磷酸一氫鈉、磷酸二氫鈉、無(wú)水磷酸二氫鈉、磷酸二氫鈉晶體、磷酸三鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀等。為了防止待給予的藥物溶液中肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子含量的下降(歸因于凍干配制品重構(gòu)后肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子吸附于組成容器的玻璃或樹(shù)脂上)，凍干配制品可以包含一種表面活性劑。在本發(fā)明中使用的表面活性劑不具體受限，只要它是藥學(xué)上可接受的，并且其實(shí)例包括非離子型表面活性劑，具體包括聚山梨酯80、聚山梨酯20、泊洛沙姆、聚乙二醇、HCO-40、HCO-60等。在通過(guò)溶解凍干配制品獲得的、包含1.0mg/mL的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液中，表面活性劑在凍干配制品中的量是，例如，0.020至1.0mg/mL，優(yōu)選0.050至1.0mg/mL，更優(yōu)選0.075至0.5mg/mL并且仍更優(yōu)選0.075至0.2mg/mL?；诰凸腆w物質(zhì)而言?xún)龈膳渲破返目傎|(zhì)量是按質(zhì)量計(jì)100.0份，本發(fā)明的凍干配制品包括按質(zhì)量計(jì)0.1至4.5份的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，按質(zhì)量計(jì)20.0至95.0份的海藻糖(在該段落的下文中，表述為相當(dāng)于海藻糖酐的量)以及按質(zhì)量計(jì)1.5至60.0份的化合物(3)(在該段落的下文中，表述為相當(dāng)于游離態(tài)的量)。在一個(gè)實(shí)施例中，基于就固體物質(zhì)而言?xún)龈膳渲破返目傎|(zhì)量是按質(zhì)量計(jì)100.0份，肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子按質(zhì)量計(jì)占0.3至4.4份，海藻糖按質(zhì)量計(jì)占30.0至94.0份并且化合物(3)按質(zhì)量計(jì)占3.0至59.0份。在另一個(gè)實(shí)施例中，肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子按質(zhì)量計(jì)占0.3至4.4份，海藻糖按質(zhì)量計(jì)占30.0至94.0份，化合物(3)按質(zhì)量計(jì)占3.0至59.0份并且聚山梨酯80按質(zhì)量計(jì)占0.026至0.7份。在本發(fā)明中，如果需要的話(huà)，凍干配制品可以進(jìn)一步包括一種添加劑，例如運(yùn)載體、張度劑以及抗氧化劑。一種用于生產(chǎn)本發(fā)明的凍干配制品的方法，該方法包括以下步驟：(I)在添加(1)一種肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子之前，調(diào)節(jié)一種水性溶液的pH為pH4.5至6.5，該水性溶液至少包括(3)一種或多種選自下組的化合物，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽；并且制備一種水性溶液，該水性溶液包括(1)該肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，(2)海藻糖以及(3)一種或多種選自下組的化合物，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽；并且(II)將步驟(I)中獲得的、包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的該水性溶液凍干。本發(fā)明的凍干配制品可以通過(guò)該生產(chǎn)方法生產(chǎn)。在步驟(I)中，將包括至少(3)一種或多種選自下組的化合物，該組由以下各項(xiàng)組成：精氨酸、組氨酸、賴(lài)氨酸、葡甲胺、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、肌酸、肌酸酐、三(羥甲基)氨基甲烷、及其藥學(xué)上可接受的鹽的水性溶液的pH調(diào)節(jié)至pH4.5至6.5并且優(yōu)選調(diào)節(jié)至pH5.0至6.0。在調(diào)節(jié)pH之前，該水性溶液可以包含(2)海藻糖但不包含(1)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子。即，在將包括至少化合物(3)的水性溶液的pH調(diào)節(jié)至pH4.5至6.5之后，向其中添加(1)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子或向其中同時(shí)或順序地添加(1)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子以及(2)海藻糖。為了調(diào)節(jié)pH，可以使用緩沖劑和/或pH調(diào)節(jié)劑。在pH調(diào)節(jié)過(guò)程中，反應(yīng)溫度不具體受限?？梢酝ㄟ^(guò)溶解化合物(3)于一種溶劑中來(lái)制備包括至少化合物(3)的水性溶液。用于制備包括至少化合物(3)的水性溶液的溶劑不具體受限，只要其是例如，藥學(xué)上可接受的水。其實(shí)例包括注射用水、已滅菌的純化水等。(1)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子和(2)海藻糖能以原樣或以水性溶液的形式添加。用于制備水性溶液的溶劑可以與用于制備包括至少化合物(3)的水性溶液的溶劑相同或不同。在(1)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子和(2)海藻糖的添加過(guò)程中，溫度不具體受限。在步驟(I)中，如果需要的話(huà)，可以添加表面活性劑、其他添加劑(運(yùn)載體、張度劑、抗氧化劑等)等。在步驟(II)中，將步驟(I)中獲得的、包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液凍干。在將包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液傾倒入小瓶或安瓿中之后，該包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液可以根據(jù)常用方法凍干。優(yōu)選地是包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液通過(guò)經(jīng)由過(guò)濾器等的過(guò)濾進(jìn)行滅菌并凍干。凍干方法的實(shí)例包括包含如下三單元操作的一種方法：一個(gè)冰凍步驟，用于在常壓下冷卻并冷凍；一個(gè)初級(jí)干燥步驟，用于在減壓下升華并干燥未與溶質(zhì)結(jié)合的自由水；以及一個(gè)次級(jí)干燥步驟，用于去除溶質(zhì)中固有的吸附水和結(jié)晶水(可以提及《日本藥學(xué)技術(shù)》(Pharm.Tech.Japan)，8卷，1期，75-87頁(yè)，1992等以供參考)。冷凍步驟過(guò)程中的溫度是，例如，-40℃或更低。初級(jí)干燥步驟過(guò)程中的溫度是，例如，-20℃至10℃。次級(jí)干燥步驟過(guò)程中的溫度是，例如，20℃至30℃。減壓是例如，10Pa或更低。如在此使用的，術(shù)語(yǔ)“塊狀物(cake)”是指凍干配制品中的多孔固體物質(zhì)?？梢酝ㄟ^(guò)多孔結(jié)構(gòu)或塊狀物的顏色或凍干配制品在水中的溶解度的目視觀察或由此獲得的水性溶液的目視觀察來(lái)評(píng)估該凍干配制品的特征。本發(fā)明的凍干配制品總體上是可接受的白色塊狀物并且在水中快速溶解以給出一種澄澈且無(wú)色的水性溶液。另一方面，潛在地歸因于可能衍生自肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子等的不可溶性聚集體的生成，通過(guò)溶解傳統(tǒng)凍干配制品獲得的水性溶液可能是渾濁的。由此通過(guò)溶解凍干配制品獲得的水性溶液的特征可以指示不可溶性聚集體的生成。凍干配制品儲(chǔ)存后水性溶液澄澈的事實(shí)意味著不可溶性聚集體的生成受到抑制。實(shí)例通過(guò)不限制本發(fā)明的實(shí)例，在下文中更加詳細(xì)地描述本發(fā)明?；趯?zhuān)利公開(kāi)JP-A-H11-056382中披露的氨基酸序列信息，通過(guò)完全合成一種基因、將該基因并入到一種載體中、在CHO細(xì)胞中表達(dá)蛋白質(zhì)并且分離和純化該蛋白質(zhì)來(lái)制備在本發(fā)明實(shí)例中使用的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子。(實(shí)例1至25和對(duì)比實(shí)例1至7)通過(guò)下文描述的方法制備實(shí)例和對(duì)比實(shí)例中的凍干配制品。表1至4指出包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的每mL各水性溶液中多種組分的量(mg)。表中的值四舍五入至小數(shù)點(diǎn)后一位。以范圍從100mL至250mL的體積制備包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液。<混合緩沖液的制備>根據(jù)包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的每種水性溶液的體積以及表1至4中指出的濃度，混合除肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子或聚山梨酯80之外的組分并用適當(dāng)量的注射用水(包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液體積的約80％)攪拌。目視確認(rèn)溶解之后，用鹽酸和/或氫氧化鈉將pH調(diào)節(jié)至5.5并且用注射用水調(diào)節(jié)體積以給出一種混合緩沖液。<包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液的制備>通過(guò)以下程序制備包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液。(a)通過(guò)使用上述混合緩沖液超濾，調(diào)節(jié)包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液以獲得如表1中指出的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的濃度。在紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)(使用具有1cm的光程的池)上測(cè)量在280nm處的吸光度之后，根據(jù)以下公式(A)計(jì)算肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的濃度：蛋白質(zhì)濃度(mg/mL)＝(A280/1.73)×D(A)其中：A280：在280nm處的吸光度；1.73∶0.1％濃度的樣品溶液在1cm的光程以及在280nm處的理論吸光度；并且D：測(cè)量時(shí)的稀釋因子。(b)其后添加聚山梨酯80從而獲得表1中指出的所希望的濃度，隨后通過(guò)經(jīng)由無(wú)菌過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾(產(chǎn)品名稱(chēng)：MILLEXGV0.22μm過(guò)濾器，可獲得自密理博公司(Millipore))以給出包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液。<凍干步驟>將該包含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的水性溶液以1mL分到5-mL玻璃小瓶中，然后將這些玻璃小瓶用橡皮帽部分閉合。根據(jù)表5中指出的程序凍干之后，將每個(gè)小瓶用橡皮帽完全閉合。然后將鋁帽附接至該玻璃小瓶以給出凍干配制品。對(duì)比實(shí)例5是根據(jù)WO2000/072873中披露的配方生產(chǎn)的凍干配制品。對(duì)比實(shí)例6是根據(jù)WO2008/102849中披露的配方生產(chǎn)的凍干配制品。(測(cè)試實(shí)例1)根據(jù)以下程序，針對(duì)凍干配制品的特征、凍干配制品在注射用水中的溶解度以及溶解后獲得的水性溶液的特征檢查實(shí)例1至11和對(duì)比實(shí)例1至6的所獲得的凍干配制品。<方法>在1000至3000勒克斯的環(huán)境中，在白色和黑色背景下目視觀察每種獲得的凍干配制品(塊狀物的形成以及色調(diào))。然后向每種凍干配制品中添加注射用水(1mL)，接著將其靜置，之后目視觀察凍干配制品的溶解度和所獲得溶液的顏色。表6中指出的術(shù)語(yǔ)“速溶”是指配制品在1分鐘之內(nèi)完全溶解并且術(shù)語(yǔ)“微溶”是指配制品在甚至1分鐘之后未完全溶解。<結(jié)果>實(shí)例1至4和對(duì)比實(shí)例1至6的樣品的結(jié)果示于表6中。實(shí)例1至4形成白色塊狀物并且顯示更好的溶解度。包含木糖醇的對(duì)比實(shí)例1以及包含山梨醇的對(duì)比實(shí)例3不形成塊狀物并且是白色或無(wú)色的熔融固體。不包含糖類(lèi)的對(duì)比實(shí)例5是白色固體，無(wú)針對(duì)凍干配制品通常觀察到的塊狀物形成。實(shí)例5至11也形成了類(lèi)似于實(shí)例1至4的白色塊狀物并且顯示更好的溶解度。表6將所獲得的凍干配制品在25℃、40℃或60℃下儲(chǔ)存在恒溫室中持續(xù)2周或1個(gè)月，隨后進(jìn)行以下測(cè)試。(測(cè)試實(shí)例2)如下評(píng)估實(shí)例1至25和對(duì)比實(shí)例1至7中可溶性聚集體的量。<方法>在冰冷卻下向?qū)嵗蛯?duì)比實(shí)例的每種凍干配制品中添加注射用水(1mL)以用于溶解。將該溶液適度震蕩以獲得勻質(zhì)溶液，隨后靜置5分鐘。將所獲得的溶液分散到250-μL小瓶插入物，將這些插入物放置于HPLC小瓶以獲得樣品。在以下分析條件下針對(duì)儲(chǔ)存之前以及之后可溶性聚集體的量通過(guò)尺寸排阻色譜法對(duì)每種樣品進(jìn)行測(cè)量并且通過(guò)面積百分比法計(jì)算可溶性聚集體的量。檢測(cè)器：UV280nm；柱：保護(hù)柱(商標(biāo)名：TSKgelG3000SWXL，可獲得自東曹公司(TosohCorporation))；柱溫：30℃；流動(dòng)相：通過(guò)溶解39g的磷酸二氫鈉、87.5g的氯化鈉以及5.0g的月桂基硫酸鈉于5000mL的水中并用2mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)該溶液的pH至7.5獲得；進(jìn)樣50L；并且流速：1mL/min。<結(jié)果>初始(儲(chǔ)存之前)以及在25℃、40℃或60℃下儲(chǔ)存2周或1個(gè)月之后的樣品中可溶性聚集體的量的測(cè)量結(jié)果示于表7至9中。初始以及在60℃下儲(chǔ)存1個(gè)月之后的、實(shí)例1至4和對(duì)比實(shí)例1至6的樣品中可溶性聚集體的量的測(cè)量結(jié)果示于圖3中。此外，凍干配制品中海藻糖含量與可溶性聚集體的量之間的相關(guān)性示于表10中。根據(jù)表7，對(duì)比實(shí)例1至6的可溶性聚集體的量隨著儲(chǔ)存期和儲(chǔ)存溫度的增加而增加。在60℃下儲(chǔ)存1個(gè)月之后，可溶性聚集體的量顯著增加。同時(shí)根據(jù)表7和8，如在對(duì)比實(shí)例中的、可溶性聚集體的量的這樣一種顯著變化在所測(cè)試的儲(chǔ)存條件下針對(duì)實(shí)例1至11未觀察到。由此可溶性聚集體的生成在實(shí)例1至11中受到抑制，甚至是在60℃的儲(chǔ)存條件下。根據(jù)表9和10，在不包含海藻糖的對(duì)比實(shí)例7中，可溶性聚集體的量顯著增加。而針對(duì)包含不同量的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的實(shí)例12至15以及包含不同量的精氨酸的實(shí)例23至25，未觀察到可溶性聚集體的量的顯著變化。表7表8表9表10(測(cè)試實(shí)例3)如下評(píng)估實(shí)例1至25和對(duì)比實(shí)例1至7中雜質(zhì)的量。<方法>使用的樣品是在HPLC小瓶中的、制備以用于可溶性聚集體的量的評(píng)估的那些。在以下分析條件下針對(duì)儲(chǔ)存之前以及之后雜質(zhì)的量通過(guò)反相色譜法對(duì)每種樣品進(jìn)行測(cè)量并且通過(guò)面積百分比法計(jì)算雜質(zhì)的量。檢測(cè)器：UV215nm；柱：反相柱(商標(biāo)名：InertsilWP300-C8，可獲得自GL科學(xué)公司(GLSciencesInc.))，附接有GLCart保護(hù)柱；柱溫：40℃；流動(dòng)相A：水/三氟乙酸(1000∶1)；流動(dòng)相B：乙腈/三氟乙酸(1000∶0.85)；進(jìn)樣：25μL；流速：1mL/min；并且梯度：流動(dòng)相B相對(duì)于流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的總量的體積比：15％(初始)-70％(27.5min)-70％(30min)-15％(30.01min)-15％(35min)。<結(jié)果>初始(儲(chǔ)存之前)以及在25℃、40℃或60℃下儲(chǔ)存2周或1個(gè)月之后的實(shí)例1至11和對(duì)比實(shí)例1至6的樣品中雜質(zhì)的量的測(cè)量結(jié)果示于表11和12中。初始以及在60℃下儲(chǔ)存1個(gè)月之后的、實(shí)例1至4和對(duì)比實(shí)例1至6的樣品中雜質(zhì)的總量的測(cè)量結(jié)果示于圖4中。根據(jù)表11，在25℃和40℃的儲(chǔ)存條件下實(shí)例1至4中雜質(zhì)的總量未顯著變化。根據(jù)表11和12，甚至是在60℃的儲(chǔ)存條件下，實(shí)例1至11中雜質(zhì)的總量相對(duì)于初始值增加至多兩倍，而所有對(duì)比實(shí)例的配制品中量的增加都是幾乎10倍或更高。在60℃的儲(chǔ)存條件下，發(fā)現(xiàn)所有對(duì)比實(shí)例的配制品中ImpA、ImpB以及其他imp中任一者都增加。由此雜質(zhì)的生成在實(shí)例1至11中受到抑制，甚至是在60℃的儲(chǔ)存條件下。在實(shí)例12至25中，在任何儲(chǔ)存條件下都未觀察到雜質(zhì)總量的顯著變化。表11表12(測(cè)試實(shí)例4)如下評(píng)估實(shí)例1至25和對(duì)比實(shí)例1至7中的同種型比率。<方法>使用的樣品是在HPLC小瓶中的、制備以用于聚集體的量的評(píng)估的那些。在以下分析條件下針對(duì)儲(chǔ)存之前以及之后的同種型的量通過(guò)離子交換色譜法對(duì)每種樣品進(jìn)行測(cè)量并且通過(guò)面積百分比法計(jì)算同種型比率。檢測(cè)器：UV215nm；柱：商標(biāo)名：AgilentBioSCXNP5PK，可獲得自安捷倫科技公司(AgilentTechnologies)；柱溫：30℃；流動(dòng)相A：50mmol/LTris-HCl緩沖液(pH9.0)；流動(dòng)相B：50mmol/LTris-HCl緩沖液(pH9.0)，1mol/LNaCl進(jìn)樣：50μL；流速：0.5mL/min；并且梯度：相對(duì)于流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的總量的流動(dòng)相B的體積比：20％(初始)-60％(50min)-80％(51min)-80％(60min)-20％(60.01min)-20％(80min)。<結(jié)果>同種型的量的變化的測(cè)量結(jié)果表示為相對(duì)于初始(儲(chǔ)存之前)以及在25℃、40℃或60℃下儲(chǔ)存2周或1個(gè)月之后的樣品中峰A和峰B的總和而言的峰B的比率，示于表13至15中。同種型比率的變化的測(cè)量結(jié)果表示為初始以及在60℃下儲(chǔ)存1個(gè)月之后的、實(shí)例1至4和對(duì)比實(shí)例1至6的樣品中峰B的比率，示于圖5中。此外，凍干配制品中海藻糖含量與峰B的比率之間的相關(guān)性示于圖6中并且精氨酸含量與峰B的比率之間的相關(guān)性示于圖7中。根據(jù)表13和14，在所測(cè)試的儲(chǔ)存條件下，在實(shí)例1至11和對(duì)比實(shí)例5中幾乎未觀察到峰B的同種型比率的變化，而在60℃的儲(chǔ)存條件下，在其他對(duì)比實(shí)例中峰B的同種型比率顯著變化。由此同種型比率變化在實(shí)例1至11中受到抑制，甚至是在60℃的儲(chǔ)存條件下。在對(duì)比實(shí)例1中，儲(chǔ)存后觀察到顯著變化，即，峰A的同種型被消除，使得所檢測(cè)的同種型僅是峰B并且觀察到不是同種型的一個(gè)峰。根據(jù)圖6，發(fā)現(xiàn)峰B的同種型比率隨著配制品中海藻糖含量的增加而下降。類(lèi)似地，針對(duì)不包含海藻糖的對(duì)比實(shí)例7的配制品，也觀察到了峰B的同種型比率的下降。根據(jù)圖7，發(fā)現(xiàn)在60℃的儲(chǔ)存條件下持續(xù)1個(gè)月后峰B的同種型比率隨著配制品中精氨酸含量的下降而下降。同時(shí)根據(jù)配制品中肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的含量變化，未觀察到同種型比率變化。表13表14表15(測(cè)試實(shí)例5)如下評(píng)估實(shí)例1至25和對(duì)比實(shí)例1至7中不可溶性聚集體的量。<方法>向每種凍干配制品中添加注射用水(1mL)，將該凍干配制品靜置并且然后稀釋于注射用水或每種安慰劑水性溶液中以給出樣品。在流動(dòng)顆粒成像分析儀上針對(duì)儲(chǔ)存前和儲(chǔ)存后不可溶性微粒的數(shù)量對(duì)每種樣品進(jìn)行測(cè)量，并且根據(jù)以下公式計(jì)算不可溶性微粒的數(shù)量：微粒的數(shù)量(數(shù)量/小瓶)＝P×1000×V/(n×v)其中：P：檢測(cè)的顆粒的數(shù)量；V：樣品溶液的體積(mL)；n：測(cè)量數(shù)；并且v：每一測(cè)量的樣品的體積。<結(jié)果>初始(儲(chǔ)存之前)以及在60℃下儲(chǔ)存2周或1個(gè)月之后的實(shí)例1至11和對(duì)比實(shí)例1至6的樣品中不可溶性聚集體的量的測(cè)量結(jié)果示于表16和17中。根據(jù)表16，在60℃下儲(chǔ)存1個(gè)月之后，在對(duì)比實(shí)例1至6中的不可溶性聚集體的量增加。同時(shí)根據(jù)表16和17，如在對(duì)比實(shí)例中的、不可溶性聚集體的量的這樣一種顯著變化針對(duì)實(shí)例1至11未觀察到。由此不可溶性聚集體的生成在實(shí)例1至11中受到抑制，甚至是在60℃的儲(chǔ)存條件下持續(xù)1個(gè)月。針對(duì)實(shí)例12至25未觀察到不可溶性聚集體的量的顯著變化。表16表17(測(cè)試實(shí)例6)如下評(píng)估實(shí)例1、對(duì)比實(shí)例5和對(duì)比實(shí)例6的生物活性。<方法>培養(yǎng)貂肺上皮細(xì)胞(Mv.1.Lu細(xì)胞)，確認(rèn)細(xì)胞活力，并且然后以1×105/mL制備細(xì)胞溶液。向96-孔測(cè)定板的每個(gè)孔中添加轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β-1(TGFβ-1)的溶液并且向每個(gè)孔中添加肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子濃度為0.125、0.25、0.5、1、2、4、8、16、32、64或128ng/mL的樣品溶液。然后添加1×105/mL的細(xì)胞溶液并且將該板在5％二氧化碳孵育箱中在37℃下孵育69小時(shí)。向該板添加可獲得自東仁分子技術(shù)公司(DojindoMolecularTechnologies，Inc.)的細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(CellCountingKit)(10μL)，然后將該板孵育3小時(shí)并且針對(duì)在450nm處的吸光度進(jìn)行測(cè)量。相對(duì)于樣品中的HGF濃度(橫軸)，將所獲得的吸光度繪制在縱軸上，并且使用分析軟件(SoftMaxPro，可獲得自分子設(shè)備公司(MolecularDevices))、采用平行線分析以及4參數(shù)回歸分析計(jì)算這些樣品的EC50。通過(guò)用儲(chǔ)存之后的EC50除以?xún)?chǔ)存之前的EC50計(jì)算相對(duì)滴度(％)。<結(jié)果>在60℃下儲(chǔ)存1個(gè)月之后的、實(shí)例1和對(duì)比實(shí)例5和6的樣品中EC50的相對(duì)滴度示于表18中。根據(jù)表18，在60℃下儲(chǔ)存1個(gè)月之后，針對(duì)對(duì)比實(shí)例5和6觀察到相對(duì)滴度的下降。同時(shí)針對(duì)實(shí)例1未觀察到相對(duì)滴度的下降，表明甚至是在60℃的儲(chǔ)存條件下持續(xù)1個(gè)月之后仍保持生物活性。表18實(shí)例1對(duì)比實(shí)例5對(duì)比實(shí)例6相對(duì)滴度(％)1018045工業(yè)實(shí)用性本發(fā)明的凍干配制品之所以具有工業(yè)實(shí)用性是因?yàn)樗梢蕴峁┚哂懈哔|(zhì)量的醫(yī)療實(shí)用肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子配制品。序列表自由文本SEQIDNO：1表示人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的氨基酸序列。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3