本發(fā)明涉及到制備骨泥的方法。

背景技術(shù)：

文件EP1341545描述了這種方法的一個(gè)實(shí)例，其中，加熱脫礦骨與水的混合物，得到膏狀介質(zhì)(粘性相)，然后將其與脫礦骨或非脫礦骨(固相)混合，形成骨凍或骨漿。該方法比較復(fù)雜，因?yàn)槠涫紫壬婕暗街苽湔承韵嗟牟襟E，然后加入固相?；旌媳仨氃谕饪剖中g(shù)可用的無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，這增加了復(fù)雜性。此外，該方法有缺點(diǎn)，比如，通過(guò)這種方式得到的骨泥通常是不均質(zhì)的，因?yàn)閮上嘀g存在不連續(xù)性。

通過(guò)文件US2007/0202190還已知一種把密質(zhì)骨用作原材料的類似方法。一小部分原材料經(jīng)受至少為100℃(未達(dá)到，更不超過(guò)，沸點(diǎn))的熱處理以及酸處理，以提取膠質(zhì)，并且在中和作用和干燥之后，形成礦化膠質(zhì)。用適當(dāng)?shù)姆绞秸麴s該原材料的另一部分(通常通過(guò)酸處理，接著是中和作用和干燥)，以形成脫礦骨粉(DBM-脫礦骨基質(zhì))。通過(guò)該方法得到的骨泥是混合礦化膠質(zhì)、DBM和液相的結(jié)果，由此實(shí)現(xiàn)骨誘導(dǎo)的作用。對(duì)于這種類型的混合物出現(xiàn)關(guān)于注射能力的顧慮，典型地是通過(guò)注射器進(jìn)行注射，更是如此，因?yàn)榇嬖诓煌煞值牧Ｗ?。此外，因?yàn)樽罱K滅菌過(guò)程不可用于最終的混合物，所以(治療用途所需的)產(chǎn)品無(wú)菌需要在無(wú)菌條件下起作用，這使得該方法成為成本高的復(fù)雜方法。

此外，DBM部分的骨誘導(dǎo)蛋白質(zhì)的保存在健康方面是一個(gè)危險(xiǎn)因素，因?yàn)樵谥苽溥^(guò)程中未消除作為蛋白質(zhì)的朊蛋白，并且把朊蛋白傳遞到接受者患者。這便是US2007/0202190公開(kāi)的具有敏感步驟的復(fù)雜方法在實(shí)際應(yīng)用中受限的原因所在。

文件US2002/0076429公開(kāi)了一種方法，該方法包括從已經(jīng)(例如，通過(guò)高壓滅菌法)經(jīng)受了熱處理的脫水膠質(zhì)得到膏狀介質(zhì)(粘性相)，從而殺菌并增加其黏度。然后，膠質(zhì)在無(wú)菌條件下進(jìn)行研磨，并與骨引導(dǎo)產(chǎn)品和/或骨誘導(dǎo)產(chǎn)品混合。完整的過(guò)程涉及到在無(wú)菌環(huán)境中研磨和混合骨引導(dǎo)產(chǎn)品和/或骨誘導(dǎo)產(chǎn)品，這使得該方法既復(fù)雜，成本又高。此外，得到的產(chǎn)品在37℃下為固體，需要外科醫(yī)生加熱產(chǎn)品，使其在植入之前軟化，這使得產(chǎn)品用起來(lái)很復(fù)雜。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是克服上述某些或全部缺點(diǎn)。

為此目的，本發(fā)明提供一種制備骨引導(dǎo)骨泥的方法，至少包括下列步驟：

(a)預(yù)備步驟，在該預(yù)備步驟過(guò)程中在容器中提供初始混合物，包括水溶液以及至少包含膠原和礦物質(zhì)的顆粒產(chǎn)品，膠原的干重占顆粒產(chǎn)品的30％至90％，礦物質(zhì)的干重占顆粒產(chǎn)品的10％至70％，至少一部分膠原包含在至少部分礦化的骨基質(zhì)的粒子中，

(b)加熱步驟，在該加熱步驟過(guò)程中，在容器中至少以100℃加熱初始混合物，最好121℃，把一部分膠原轉(zhuǎn)變?yōu)槟z質(zhì)，所以膠質(zhì)與至少部分礦化的骨基質(zhì)之間具有連續(xù)性，而且得到粘性骨泥，加熱步驟能夠使容器內(nèi)的骨泥殺菌，

由此，冷卻和膠凝作用之后，骨泥可供使用并且在容器內(nèi)保持無(wú)菌，容器處于封閉的液密狀態(tài)。

通過(guò)這些設(shè)置，得到可供使用的均質(zhì)骨泥，其混合成份(至少膠質(zhì)/脫礦骨基質(zhì)/礦化骨基質(zhì))有利于骨傳導(dǎo)，而且具有很好的延展性(骨泥可彈性變形)和內(nèi)聚性(該骨泥在38℃下不融化)。因?yàn)?通過(guò)一個(gè)步驟)對(duì)整個(gè)混合物進(jìn)行加熱，所以得到這些特別有利的特性，因此實(shí)現(xiàn)固相與粘性相(膠質(zhì))之間優(yōu)異的連續(xù)性。

在大約121℃或通常大于100℃的溫度下加熱改變顆粒產(chǎn)品的成份(尤其是從粒子中滲出膠質(zhì)，尤其是已經(jīng)部分脫礦或完全脫礦的那部分)，同時(shí)具有滅菌效果。至少部分礦化的骨基質(zhì)粒子也因?yàn)榧訜岫冃?，有益于骨泥的流變能力。?shí)現(xiàn)膠質(zhì)、脫礦部分和礦化部分之間的相連續(xù)性?？梢岳斫?，得到漿狀質(zhì)地，在混合步驟中不必加入會(huì)對(duì)無(wú)菌狀態(tài)不利的粘合劑。

用這種方式可靠、簡(jiǎn)單地得到的骨泥是骨引導(dǎo)性的，無(wú)菌的，即可使用的骨泥。因?yàn)檎麄€(gè)混合物典型地通過(guò)高溫滅菌法經(jīng)受了高于100℃的熱量，可以理解的是，保存骨誘導(dǎo)蛋白質(zhì)不是目的，成品的病毒安全性和無(wú)菌性的益處才是主要目的?？梢栽谝好苋萜髦兄苽涑善?，所以其組份完全受控，而且，如果液密容器是注射器，便可以直接注射。

需要注意的是，在當(dāng)前應(yīng)用中，“礦化骨基質(zhì)”一詞用于指代未經(jīng)過(guò)任何去礦化處理并包含礦物質(zhì)成份(干重約占70％)和膠原成份(干重約占30％)的骨基質(zhì)(骨組織)。骨基質(zhì)可來(lái)源于人的或者動(dòng)物，并且可以是皮質(zhì)骨、松質(zhì)骨、皮質(zhì)松質(zhì)骨。

需要注意的是，在當(dāng)前應(yīng)用中，比如“顆?！被颉傲Ｗ印边@樣的字眼用于指代由大小在0至幾毫米之間固體粒子、碎片或細(xì)絲構(gòu)成的任何材料。

根據(jù)本發(fā)明的方法的各個(gè)實(shí)施例還可以利用下列設(shè)置中的一項(xiàng)或多項(xiàng)設(shè)置：

-在加熱步驟(b)中，初始混合物加熱時(shí)間介于10分鐘至2小時(shí)之間，更好地，介于18分鐘至1小時(shí)之間；

-在加熱步驟(b)中，初始混合物加熱溫度介于50℃至200℃之間，例如100℃至200℃，更好地為100℃至150℃；

-在加熱步驟(b)中，初始混合物加熱時(shí)間介于18分鐘至1小時(shí)之間，加熱溫度介于100℃至150℃之間；

-在預(yù)備步驟(a)中，在處于密封的液密狀態(tài)的容器中提供初始混合物，并通過(guò)加熱步驟(b)在所述處于密封的液密狀態(tài)的容器中對(duì)其進(jìn)行加熱；“液密”一詞在這里的含義是使水蒸氣和微生物密封到至少為1巴的壓差(在下文中，將采用更簡(jiǎn)潔的表達(dá)“液密容器”)；

-在預(yù)備步驟(a)中，液密容器放在密封袋中，并且通過(guò)加熱步驟(b)在所述密封袋中加熱：因此得到包裝好的無(wú)菌骨泥，可供使用；

-在足夠的溫度下進(jìn)行加熱步驟(b)，并持續(xù)足夠的時(shí)間，以便對(duì)骨泥進(jìn)行滅菌；

-在水蒸氣中通過(guò)水浴或干熱執(zhí)行加熱步驟(b)；

-在預(yù)備步驟(a)中，礦物質(zhì)占顆粒產(chǎn)品干重的20％至60％，膠原占顆粒產(chǎn)品干重的40至80％；

-在預(yù)備步驟(a)中，初始混合物的水溶液選自水、生理鹽水或生理緩沖溶液；

-在預(yù)備步驟(a)中，水溶液的總重量占初始混合物的40％至75％；

-在預(yù)備步驟(a)中，顆粒材料/產(chǎn)品的粒徑小于4毫米，更好地小于1.5毫米；

-在預(yù)備步驟(a)中，初始混合物進(jìn)一步包括礦化骨引導(dǎo)生物材料；該礦化骨引導(dǎo)生物材料可來(lái)自于人或動(dòng)物(脫蛋白骨基質(zhì))或者是合成的(羥磷灰石、磷酸三鈣、生物玻璃或其它可植入材料)；

-在預(yù)備步驟(a)中，初始混合物包含主要包括膠原的完全脫礦的骨基質(zhì)粒子以及包括膠原和礦物質(zhì)的礦化骨基質(zhì)粒子；

-在預(yù)備步驟(a)中，初始混合物包含部分脫礦的骨基質(zhì)粒子，所述部分脫礦的骨基質(zhì)粒子包括干重占20％至70％的礦物質(zhì)，更好地，礦物質(zhì)的干重占40％至60％；

-在預(yù)備步驟(a)中，初始混合物包括純化膠原和礦化骨基質(zhì)粒子；

-預(yù)備步驟(a)至少包括下列子步驟：

(a1)通過(guò)去礦化作用和磨骨制備完全脫礦的骨基質(zhì)粒子的子步驟(去礦化作用在磨骨之前或之后進(jìn)行)，

(a2)通過(guò)磨骨制備礦化骨基質(zhì)粒子的子步驟，

(a3)混合子步驟，在該混合子步驟過(guò)程中，混合至少完全脫礦的骨基質(zhì)粒子、礦化骨基質(zhì)粒子和水溶液，得到所述初始混合物；

-預(yù)備步驟(a)至少包括下列子步驟：

(a'1)通過(guò)去礦化作用和磨骨制備部分脫礦的骨基質(zhì)粒子的子步驟(去礦化作用在磨骨之前或之后進(jìn)行)，

(a'3)混合子步驟，在該混合子步驟過(guò)程中，混合至少部分脫礦的骨基質(zhì)粒子和水溶液，得到所述初始混合物；

-預(yù)備步驟(a)至少包括下列子步驟s：

(a”2)通過(guò)磨骨制備礦化骨基質(zhì)粒子的子步驟，

(a”3)混合子步驟，在該混合子步驟過(guò)程中，混合至少礦化骨基質(zhì)粒子、純化膠原和水溶液，得到所述初始混合物。

-在混合子步驟(a3、a’3或a”3)過(guò)程中，礦化骨引導(dǎo)生物材料與初始混合物的其它成份混合；

-在混合子步驟(a3、a’3或a”3)過(guò)程中，至少透明質(zhì)酸和/或其衍生物，尤其是交聯(lián)透明質(zhì)酸，與初始混合物的其它成份混合。

附圖說(shuō)明

通過(guò)下文以非限制性實(shí)例的方式列出的對(duì)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的描述，參考附圖，本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)顯而易見(jiàn)。

在各圖中，圖1示出了容納通過(guò)根據(jù)本發(fā)明的方法得到的骨泥的小瓶。

圖2是一張照片，示出了通過(guò)根據(jù)優(yōu)選制備方法的方法產(chǎn)生骨泥的外觀。

圖3是一張照片，示出了在應(yīng)用方法之前，骨粉的未處理粒子的外觀。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明的方法能夠制備有延展性的骨泥，所述骨泥可在醫(yī)學(xué)用途中用作骨填料。

可以通過(guò)膠原部分和礦化部分制備該骨泥。膠原部分是通過(guò)至少部分脫礦的骨基質(zhì)得到的，或者通過(guò)純化膠原得到的。礦化部分是通過(guò)來(lái)源于人或動(dòng)物的骨組織得到的，所述骨組織是皮質(zhì)骨、松質(zhì)骨或者皮質(zhì)-松質(zhì)骨，在此稱為礦化骨基質(zhì)。

根據(jù)本發(fā)明制備骨泥的方法包括兩個(gè)主要步驟：

(a)提供初始混合物，所述初始混合物包含水溶液、膠原部分和礦化部分，

(b)加熱。

(a)提供初始混合物的步驟：

在該步驟(a)過(guò)程中，提供初始混合物，所述初始混合物至少包含：

-水溶液，以及

-顆粒產(chǎn)品，該顆粒產(chǎn)品至少包括膠原和礦物質(zhì)，至少一部分膠原包含在至少部分礦化的骨基質(zhì)粒子中，

膠原可源自完全脫礦的骨基質(zhì)或部分脫礦的骨基質(zhì)，或者源自任何其它純化膠原來(lái)源。

例如，初始混合物的組成如下：

-可包含完全脫礦的骨基質(zhì)粒子或純化膠原和礦化骨基質(zhì)粒子；

-可包含部分脫礦的骨基質(zhì)粒子。

在初始混合物的顆粒產(chǎn)品中，膠原可占顆粒產(chǎn)品干重的30％至90％(有利地介于40％至80％之間)，并且，礦物質(zhì)占顆粒產(chǎn)品干重的10％至70％(有利地介于20％至60％之間)。

所討論的顆粒產(chǎn)品更好地是均質(zhì)混合物。

初始混合物的成份粒子的粒徑可小于4毫米，最好小于1.5毫米。

水溶液可占混合物總重量的40％至75％?？梢哉{(diào)整水的比例，以便得到的最終骨泥黏度適用于要求。降低水含量40％會(huì)使黏度較高，達(dá)到膩?zhàn)映矶?。水含量增加?5％會(huì)使黏度較低，達(dá)到膠稠度。這對(duì)于本發(fā)明的所有實(shí)施例都有效。

初始混合物的水溶液可以選自水、生理鹽水(氯化鈉溶液，例如0.9％)或者磷酸鹽的生理緩沖溶液等。

初始混合物的顆粒產(chǎn)品可進(jìn)一步包括礦化骨引導(dǎo)生物材料；該骨引導(dǎo)生物材料可來(lái)自于人或動(dòng)物(脫蛋白骨基質(zhì))或者是合成的(羥磷灰石、磷酸三鈣、生物玻璃或其它可植入材料)。礦化生物材料的粒徑可小于4毫米，更好地小于1.5毫米?？杉尤氤跏蓟旌衔锏牡V化生物材料的比例按干重計(jì)算可占初始混合物的10％至40％。更普遍而言，可以調(diào)整加入的骨引導(dǎo)生物材料的比率，以保持最終骨泥的延展性和內(nèi)聚性的特性。

下面對(duì)制備初始混合物的幾個(gè)實(shí)例進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

1.初始混合物包含礦化骨基質(zhì)粒子和脫礦骨基質(zhì)粒子的情況：

在初始混合物包含礦化骨基質(zhì)粒子和完全脫礦的骨基質(zhì)粒子的情況下，提供初始混合物的步驟(a)可至少包括下列子步驟：

(a1)通過(guò)去礦化作用和研磨骨片制備完全脫礦的骨基質(zhì)粒子的子步驟(去礦化作用在研磨之前或之后進(jìn)行)；

(a2)通過(guò)研磨骨片制備礦化骨基質(zhì)粒子的子步驟；

(a3)混合子步驟，在所述混合子步驟過(guò)程中，混合完全脫礦的骨基質(zhì)粒子、礦化骨基質(zhì)粒子和水溶液，得到所述初始混合物。

2.初始混合物包含部分脫礦的骨基質(zhì)粒子的情況：

在初始混合物包含部分脫礦的骨基質(zhì)粒子的情況下，提供初始混合物的步驟(a)可至少包括下列子步驟：

(a'1)通過(guò)去礦化作用和研磨骨片制備部分脫礦的骨基質(zhì)粒子的子步驟(去礦化作用在研磨之前或之后進(jìn)行)；

(a'3)混合子步驟，在所述混合子步驟過(guò)程中，混合部分脫礦的骨基質(zhì)粒子和水溶液，得到所述混合物。

3.初始混合物包含膠原粒子和礦化骨基質(zhì)粒子的：

在初始混合物包含純化膠原粒子和礦化骨基質(zhì)粒子的情況下，提供初始混合物的步驟(a)可至少包括下列子步驟：

(a”1)通過(guò)得到脫水純化膠原的任何技術(shù)制備純化膠原粒子的子步驟，

(a”2)通過(guò)研磨骨片制備礦化骨基質(zhì)粒子的子步驟，

(a”3)混合子步驟，在所述混合子步驟過(guò)程中，混合至少骨基質(zhì)粒子、純化膠原粒子和水溶液，得到所述初始混合物。

在混合子步驟(a3、a’3或a”3)過(guò)程中，有可能把礦化骨引導(dǎo)生物材料與初始混合物的其它成份混合。

(b)加熱步驟：

在加熱步驟過(guò)程中，把初始混合物充分加熱，使一部分膠原變?yōu)槟z質(zhì)，并因此得到想要的骨泥，所述骨泥是均質(zhì)的，而且在冷卻和膠凝作用之后即可使用。

在這個(gè)加熱步驟過(guò)程中，初始混合物加熱時(shí)間可為10分鐘至2小時(shí)，更好地為18分鐘至1小時(shí)。

初始混合物加熱的溫度可為50℃至200℃，更好地為100℃至150°C。

更具體而言，可有利地將初始混合物在100℃至150℃的溫度下加熱18分鐘至1小時(shí)。尤其是，可有利地將初始混合物在約為120℃(例如121°C)的溫度下加熱大約30分鐘至1小時(shí)(在上述第1種情況下，加熱30分鐘，或者在上述第2種情況下，加熱1小時(shí))。

更普遍而言，在足夠高的溫度下，和足夠的時(shí)間內(nèi)，方便地執(zhí)行加熱步驟(b)，以便使骨泥滅菌。

可以在水中，通過(guò)水浴或干熱進(jìn)行加熱。

有利的是，預(yù)備步驟(a)結(jié)束時(shí)，把初始混合物放在抗熱、抗壓差的液密容器中，所述壓差是由于所采用的加熱系統(tǒng)產(chǎn)生的(當(dāng)然，處于封閉狀態(tài)的容器對(duì)于水蒸氣是液密的，所以在容器內(nèi)部和外部之間會(huì)存在壓差；例如，在121℃采用高壓滅菌器時(shí)，容器可以抵擋至少為1巴的壓差)，并且在所述液密容器中通過(guò)加熱步驟(b)加熱，所以得到的無(wú)菌骨泥在冷卻之后即可使用，無(wú)需額外的滅菌步驟，或者包裝在另一個(gè)容器中。例如，所討論的容器1可以是比如圖1中所示的小瓶2，由玻璃或者可以抵抗所要求的溫度的材料制成，通過(guò)旋擰式或壓入式蓋子3封閉，并容納骨泥4。在圖1中清晰可見(jiàn)，在此蓋子3覆蓋小瓶2的單個(gè)開(kāi)口。當(dāng)然，視情況而定，在加熱步驟(b)過(guò)程中，或者在加熱步驟(b)之后立即實(shí)現(xiàn)容器的液密和封閉狀態(tài)。盡管圖1顯示了分為兩部分的容器，由小瓶2和蓋子3構(gòu)成，但這絕非限制性的。容器還可以相當(dāng)于使用一個(gè)或多個(gè)非硬性封包的組件、至少兩部分或三部分的組件，和/或具有多個(gè)封閉元件的一部分。

有利的是，步驟(a)結(jié)束時(shí)，可將容器放入密封雙層袋中，所述密封雙層袋僅能透過(guò)氣體，所以在加熱步驟(b)之前，包裝是完整的。這樣，直到手術(shù)室使用之前，都能夠保持包裝小瓶1和骨泥4處于無(wú)菌狀態(tài)(因?yàn)榇丝讨拔创蜷_(kāi)容器)。

無(wú)需通過(guò)伽馬射線或貝塔射線(對(duì)膠質(zhì)完整性有害)進(jìn)行最終滅菌。

通過(guò)預(yù)備步驟(a)對(duì)液體部分和固體部分執(zhí)行混合操作，所述固體部分是由包含膠原的至少部分礦化的骨基質(zhì)粒子構(gòu)成的?？赏ㄟ^(guò)(之前的)部分去礦化作用的子步驟得到這種粒子。在圖2中，在加熱步驟(b)之后，通過(guò)連接到(由圖像采集軟件控制的)數(shù)碼相機(jī)的 DM2000顯微鏡拍攝的照片闡釋了方法的結(jié)果?？梢?jiàn)，部分脫礦的粒子(在此，在圖2的情況下，是全部粒子)具有中心礦化部分和外圍脫礦部分。在粒子之間，由于高于100°C的特殊熱處理，所以通過(guò)從粒子膠原滲出膠質(zhì)，形成凝膠態(tài)。這有助于使骨泥4各相更好地結(jié)合。為了比較，在圖3中顯示了未處理的骨粉(在通過(guò)該方法處理之前，未經(jīng)過(guò)去礦化作用處理)。每個(gè)粒子都有均質(zhì)組份，而且粒子之間明顯沒(méi)有膠體意味著相應(yīng)的粉末不具有泥的流變特性(不可延展，無(wú)粘性，而且不可注射)。

下面詳細(xì)說(shuō)明幾個(gè)實(shí)例。

實(shí)例1：采用脫礦骨基質(zhì)與礦化骨基質(zhì)的初始混合物的情況

(a1)制備完全脫礦的骨基質(zhì)粒子：

把皮質(zhì)-松質(zhì)骨片研磨成粉末形式，粒徑更好地小于1.5毫米，所討論的粒子包括細(xì)骨料(在這種具體情況下，粒徑<0.2毫米)。

然后，在攪拌的同時(shí)，通過(guò)兩個(gè)連續(xù)槽，在0.5N鹽酸中，在室溫下使骨基質(zhì)粒子完全脫礦4小時(shí)，每克骨基質(zhì)采用50毫升鹽酸(因此從礦物質(zhì)部分去除100％的礦物質(zhì))。這與1N氫氧化鈉溶液中和，使pH達(dá)到7，然后用水沖洗，并在熱空氣的氣流中干燥15小時(shí)。

(a2)制備礦化骨基質(zhì)粒子：

把礦化皮質(zhì)-松質(zhì)骨片研磨成粉末形式，粒徑更好地小于1毫米從而形成礦化骨基質(zhì)。

(a3)混合：

混合完全脫礦的骨基質(zhì)粒子、礦化骨基質(zhì)粒子和水。例如，按全部混合物的重量計(jì)算的比例為：脫礦骨基質(zhì)：10％；礦化骨基質(zhì)：25％；水：65％。

(b)加熱：

通過(guò)高壓滅菌法在121℃的溫度下把容納混合物的容器加熱30分鐘。

在這種組態(tài)下，加熱把脫礦骨基質(zhì)粒子的主要部分以及礦化骨基質(zhì)粒子的一部分膠原轉(zhuǎn)化為膠質(zhì)，由此實(shí)現(xiàn)凝膠相(膠質(zhì))與固相(礦化骨基質(zhì)粒子)之間的材料連續(xù)性。冷卻和膠凝作用之后，骨泥是無(wú)菌的，即可使用的，而且具有膩?zhàn)拥酿ざ取?/p>

實(shí)例2：采用部分脫礦的骨基質(zhì)的初始混合物的情況，未加入礦化骨基質(zhì)

(a'1)制備部分脫礦的骨基質(zhì)粒子：

把皮質(zhì)-松質(zhì)骨片研磨成粉末形式，粒徑更好地小于1.5毫米，所討論的粒子包含細(xì)骨料(在這種具體情況下，粒徑<0.2毫米)。

然后，在攪拌的同時(shí)，在0.4N鹽酸中，在室溫下使骨基質(zhì)粒子部分脫礦1小時(shí)或1：30小時(shí)，每克骨基質(zhì)采用10毫升鹽酸(因此從礦物質(zhì)部分去除50％的礦物質(zhì))。這與1N氫氧化鈉溶液中和，使pH達(dá)到7，然后用水沖洗，并在熱空氣的氣流中干燥15小時(shí)。

(a'3)混合：

在液密容器中混合部分脫礦的骨基質(zhì)粒子和水。例如，按全部混合物的重量計(jì)算的比例為：部分脫礦的骨基質(zhì)粒子35％；水：65％.

(b)加熱：

通過(guò)高壓滅菌法在121℃的溫度下把容納混合物的容器加熱1小時(shí)。

在這種組態(tài)下，加熱把部分脫礦的骨基質(zhì)粒子的一部分膠原轉(zhuǎn)化為膠質(zhì)，由此實(shí)現(xiàn)凝膠相(膠質(zhì))與固相(部分脫礦的骨基質(zhì)粒子的其余部分)之間的材料連續(xù)性。冷卻和膠凝作用之后，骨泥是無(wú)菌的，并且即可使用。

通過(guò)上述的65％的水含量，骨泥具有液體凝膠的稠度。通過(guò)改變初始混合物中水的比例，可以調(diào)整最終骨泥的黏度，適應(yīng)需求。例如，55％的水含量使黏度更高，同時(shí)保持可以通過(guò)直徑開(kāi)口約為3毫米的注射器進(jìn)行注射。這項(xiàng)觀察對(duì)于本發(fā)明的所有實(shí)施例有效。

實(shí)例3：采用膠原與礦化骨基質(zhì)的初始混合物的情況

(a”1)制備膠原粒子：

選擇通過(guò)凍干法或任何其它干燥方法脫水的，粉末或細(xì)絲形式的膠原。

(a”2)制備礦化骨基質(zhì)粒子：

把礦化皮質(zhì)-松質(zhì)骨片研磨成粉末形式，粒徑更好地小于1毫米，從而形成礦化骨基質(zhì)。

(a”3)混合：

混合膠原粒子、礦化骨基質(zhì)粒子和水。例如，按全部混合物的重量計(jì)算的比例為：膠原：10％；礦化骨基質(zhì)：25％；水：65％.

(b)加熱：

通過(guò)高壓滅菌法在121℃的溫度下把容納混合物的容器加熱30分鐘。

加熱把純膠原的主要部分以及礦化骨基質(zhì)粒子的一部分膠原轉(zhuǎn)化為膠質(zhì)，由此實(shí)現(xiàn)凝膠相(膠質(zhì))與固相(礦化骨基質(zhì)粒子)之間的材料連續(xù)性。冷卻和膠凝作用之后，骨泥是無(wú)菌的，即可使用的，而且具有泥的黏度。

實(shí)例4：采用部分脫礦的骨基質(zhì)與礦化骨引導(dǎo)生物材料的初始混合物的情況

(a'1)制備部分脫礦的骨基質(zhì)粒子：

把皮質(zhì)-松質(zhì)骨片研磨成粉末形式，粒徑更好地小于1.5毫米，所討論的粒子包含細(xì)骨料(在這種具體情況下，粒徑<0.2毫米)。

然后在攪拌的同時(shí)，每克骨基質(zhì)用10毫升鹽酸(因此從礦物質(zhì)部分中去除70％的礦物質(zhì))，在0.6N鹽酸中在室溫下使骨基質(zhì)粒子部分脫礦1小時(shí)。這與1N氫氧化鈉溶液中和，使pH達(dá)到7，然后用水沖洗，并在熱空氣的氣流中干燥15小時(shí)。

(a'2)預(yù)備礦化骨引導(dǎo)生物材料：

骨引導(dǎo)生物材料選自粉末形式的合成生物材料，比如β-磷酸三鈣。生物材料粉末的粒徑更好地為0.2毫米至1毫米。

(a'3)混合：

在液密容器中混合部分脫礦的骨基質(zhì)粒子、β-磷酸三鈣粉末和水。例如，按全部混合物的重量計(jì)算的比例為：部分脫礦的骨基質(zhì)粒子：30％；β-磷酸三鈣粒子：10％；水：60％。

(b)加熱：

通過(guò)高壓滅菌法以121℃加熱容納混合物的液密容器45分鐘。冷卻和膠凝作用之后，骨泥是無(wú)菌的、即可使用的，而且具有膩?zhàn)拥酿ざ取?/p>