本發(fā)明是在美國國立衛(wèi)生研究院和陸軍醫(yī)學(xué)研究和裝備指揮部授予的R01 CA 107098和W81XWH-10-1-0989項目的政府支持下進(jìn)行的。政府對本發(fā)明享有一定權(quán)利。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及新型異羥肟酸，其是特異性組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制劑和/或TTK/Mps1激酶抑制劑，包括其藥學(xué)上可接受的鹽，可用于調(diào)整HDAC和/或TTK/Mps1激酶活性，因此改變細(xì)胞活性，如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖、細(xì)胞生存和細(xì)胞因子分泌。更具體地，本發(fā)明涉及異羥肟酸鹽化合物，其抑制、調(diào)節(jié)和/或調(diào)整HDAC和或TTK/Mps1激酶活性，如HDAC6和/或TTK/Mps1激酶活性，以及與上面提到的細(xì)胞活性有關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。

發(fā)明背景

組蛋白脫乙酰酶(HDAC)催化從組蛋白氨基末端的賴氨酸殘基除去乙酰基，導(dǎo)致染色質(zhì)凝聚和基因表達(dá)改變?？赡嫘再嚢彼嵋阴；窃S多細(xì)胞過程穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)的重要現(xiàn)象。進(jìn)行這種調(diào)節(jié)模式的特征最明顯的蛋白質(zhì)是組蛋白(Strahl,B.D et al.,Nature 2000,403,(6765),41-5)。N-末端尾部的賴氨酸殘基受到由已知為組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(HAT)或組蛋白脫乙酰酶(HDAC)的酶催化的乙酰化和脫乙?；瘉韲?yán)格調(diào)節(jié)(Minucci,S.et al.,Nat Rev Cancer 2006,6,(1),38-51；Yang,X.J.et al.,Oncogene 2007,26,(37),5310-8)。組蛋白H3和組蛋白H4尾部的賴氨酸的乙?；c引起轉(zhuǎn)錄或為主動轉(zhuǎn)錄的基因組區(qū)域的一部分的染色質(zhì)狀態(tài)密切相關(guān)(Strahl,B.D.et al.,Nature 2000,403,(6765),41-5；Minucci,S.et al.,Nat Rev Cancer2006,6,(1),38-51)。組蛋白的乙?；才c其他重要的細(xì)胞功能(包括染色質(zhì)組裝、DNA修復(fù)和重組)相關(guān)。

在人類基因組中有18種HDAC酶，其被分為四種不同的類別(Lane,A.A.et al.,J Clin Oncol 2009,27,(32),5459-68；Marks,P.et al.,Nat Rev Cancer 2001,1,(3),194-202)。I、II 和IV類(11種酶)在其活性部位含有鋅(Zn²⁺)分子。III類含有7種機(jī)械上不同的NAD+-依賴性酶，被稱為sirtuins。II類被分成IIa類(HDAC4、5、7和9)和IIb類(HDAC6和HDAC10)。

組蛋白修飾的變化已經(jīng)成為負(fù)責(zé)腫瘤轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵機(jī)理之一(Conley,B.A.et al.,Cancer 2006,107,(4),832-40；Glozak,M.A.et al.,Oncogene 2007,26,(37),5420-32)。編碼HDAC的基因的表達(dá)和突變的改變與腫瘤發(fā)展有關(guān)，因為它們都誘導(dǎo)調(diào)節(jié)重要細(xì)胞功能(如細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)和細(xì)胞凋亡)的關(guān)鍵基因的異常轉(zhuǎn)錄(Lane,A.A.et al.,J Clin Oncol 2009,27,(32),5459-68；Marks,P.et al.,Nat Rev Cancer 2001,1,(3),194-202)。因此，最近組蛋白脫乙酰酶抑制劑(HDACi)作為潛在的抗癌藥物吸引了大量關(guān)注。這種關(guān)注的臨床相關(guān)性是有依據(jù)的，最近尤其受到伏立諾他(vorinostat，Zolinza^TM，Merck，廣泛又稱為SAHA＝辛二酰苯異羥肟酸)、羅米地辛(Romidepsin，Istodax)和貝利司他(Belinostat)用于治療皮膚T-細(xì)胞淋巴瘤的介紹而被強(qiáng)化(Marks,P.A.,et al.,Expert Opin Investig Drugs 2010,19,(9),1049-66)。

II類HDAC酶顯示出組織特異性表達(dá)并能在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)之間穿梭往來。對這類HDAC酶的關(guān)注不斷增加，因為它們的底物比較廣泛并且不限于組蛋白。例如，IIb類酶HDAC6主要存在于細(xì)胞質(zhì)中并因此其底物是非組蛋白蛋白質(zhì)，包括α-微管蛋白、皮層肌動蛋白(cortactin)、過氧化物還原蛋白(peroxiredoxins)、伴侶蛋白、HSP90、β-聯(lián)蛋白、缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)和其他蛋白質(zhì)(Li,Y.et al.,FEBS J 2013,280,(3),775-93；Shankar,S.et al.,Adv Exp Med Biol 2008,615,261-98)。

HDAC6在C-末端區(qū)含有兩個功能性同源催化結(jié)構(gòu)域和泛素結(jié)合鋅指結(jié)構(gòu)域。HDAC6是真正的蛋白質(zhì)賴氨酸脫乙酰酶并對于多種生物過程似乎是重要的，并且在從癌癥到神經(jīng)退行性疾病的多種病理情況中牽涉到HDAC6的異常調(diào)節(jié)(Valenzuela-Fernandez,A.et al.,Trends Cell Biol 2008,18,(6),291-7；Simoes-Pires,C.et al.,Mol Neurodegener 2013,8,(1),7)。

HDAC6穩(wěn)定地與微管蛋白相關(guān)，并調(diào)節(jié)其乙酰化狀態(tài)。因為微管在細(xì)胞自組織的中心，HDAC6對微管蛋白的脫乙酰化活性影響許多細(xì)胞過程并不令人驚訝。已知HDAC6在細(xì)胞遷移和細(xì)胞-細(xì)胞相互作用中起重要作用。HDAC6的異常調(diào)節(jié)與癌癥發(fā)展相關(guān)(Valenzuela-Fernandez,A.et al.,Trends Cell Biol 2008,18,(6),291-7；Simoes-Pires,C.et al.,Mol Neurodegener 2013,8,(1),7)。例如，HDAC6的過表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的侵入性轉(zhuǎn)移行為相關(guān)聯(lián)(Aldana-Masangkay,G.I.et al.,J Biomed Biotechnol 2011,875824)。而且，HDAC6通過去乙?；瘞追N控制血管生成的關(guān)鍵因子直接或間接調(diào)節(jié)血管生成(Li,Y.et al.,FEBS J 2013,280,(3),775-93；Aldana-Masangkay,G.I.et al.,J Biomed Biotechnol 2011,875824)。最近的研究還表明HDAC6調(diào)節(jié)CD133信號傳導(dǎo)途徑中的β-聯(lián)蛋白的乙?；?，已知這對于腫瘤干細(xì)胞維持是重要的(Mak,A.B.et al.,Cell Rep 2012,2,(4),951-63)。

HDAC6通過多種不同的機(jī)理還與細(xì)胞生存途徑有聯(lián)系。HDAC6調(diào)節(jié)Hsp90蛋白伴侶(chaperon)的可逆性乙?；?，Hsp90伴侶的客戶蛋白包括類固醇激素受體和對于細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡關(guān)鍵的一些蛋白質(zhì)激酶。HDAC6的失活擾亂Hsp90的伴侶活性并減弱促生長客戶蛋白質(zhì)的活性(Aldana-Masangkay,G.I.et al.,J Biomed Biotechnol 2011,875824)。通過其泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域，HDAC6能結(jié)合多泛素化錯誤折疊蛋白質(zhì)，并將它們遞送至動力蛋白馬達(dá)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到聚集體(aggresomes)中被溶酶體降解(Kawaguchi,Y.et al.,Cell 2003,115,(6),727-38)。HDAC6還通過促進(jìn)自噬體與溶酶體的融合而在聚集體的最終清除中起作用(Lee,J.Y.et al.,EMBO J 2010,29,(5),969-80；Iwata,A.et al.,J Biol Chem 2005,280,(48),40282-92；Pandey,U.B.et al.,Nature 2007,447,(7146),859-63)。

選擇性抑制HDAC6能增強(qiáng)對諸如依托泊苷(etoposide)和多柔比星(doxorubicin)的DNA損傷劑的細(xì)胞凋亡反應(yīng)(Namdar,M.et al.,Proc Natl Acad Sci U S A 2010,107,(46),20003-8)。相反，也有證據(jù)支持抑制HDAC6在保護(hù)正常細(xì)胞免于DNA-損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡和促進(jìn)神經(jīng)元再生中的作用(Rivieccio,M.A.et al.,Proc Natl Acad Sci U S A 2009,106,(46),19599-604)。因此，抑制HDAC6可以顯著提高細(xì)胞毒性藥物的治療指數(shù)。

HDAC6是神經(jīng)系統(tǒng)受傷后保護(hù)和再生的靶點。神經(jīng)元的受傷導(dǎo)致HDAC6表達(dá)的增加，并且抑制HDAC6能促進(jìn)神經(jīng)元的存活和再生。重要地，選擇性抑制HDAC6避免與非選擇性HDAC抑制劑(泛-HDAC抑制劑)相關(guān)的細(xì)胞死亡。因此，HDAC6可能是用于治療例如中風(fēng)、缺血和脊髓損傷的有希望的靶點(Rivieccio,M.A.et al.,Proc Natl Acad Sci U S A 2009,106,(46),19599-604)。

具有以比其他HDAC更大的效力來抑制HDAC6并且無不期望的副作用的選擇性HDAC6抑制劑是有利的(Bradner et al.,Nat.Chem.Biol.,2010,6(3):238-243；WO-A2011/019393)。

鑒于僅抑制這些與疾病狀態(tài)有關(guān)的HDAC同種型，使與疾病無關(guān)的蛋白質(zhì)的乙酰化最小化，以及減少副作用和毒性的重要性，需要對具體HDAC具有選擇性的新HDAC抑制劑。

TTK/Mps1(一種雙重特異性蛋白質(zhì)激酶)已成為有絲分裂的主調(diào)節(jié)器。與提出的其在高度增殖細(xì)胞中的功能一致，在多種人類癌細(xì)胞系和原發(fā)性腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)TTK/Mps1 的水平升高。與許多細(xì)胞周期調(diào)節(jié)器一樣，Mps1轉(zhuǎn)錄在多種人類腫瘤中失調(diào)。在包括甲狀腺乳頭狀癌、乳腺癌、胃癌組織、支氣管癌和肺癌在內(nèi)的許多人類癌癥中發(fā)現(xiàn)了Mps1mRNA水平升高(Mills,1992#187；Salvatore,2007#209；Yuan,2006#216；Kilpinen,2010#197；Daniel,2010#49；Landi,2008#217)。而且，Mps1的高水平與乳腺癌的高組織學(xué)分級相關(guān)聯(lián)(Daniel,2010#49)。相反，Mps1mRNA在靜息細(xì)胞和具有低增殖指數(shù)的組織中明顯減少或不存在(Hogg,1994#190)。因此，在升高的Mps1水平和細(xì)胞增殖以及腫瘤侵襲性之間具有相關(guān)性。與致癌信號傳導(dǎo)促進(jìn)Mps1表達(dá)的觀點一致，Mps1的水平和活性在含有B-Raf(V600E)突變體的人黑色素細(xì)胞系中分別增加了3倍和10倍(Cui,2008#153)。抑制B-Raf或MEK1減少了Mps1表達(dá)(Borysova,2008#147；Cui,2008#153)。

腫瘤細(xì)胞頻繁過表達(dá)紡錘體檢查點蛋白質(zhì)的觀察結(jié)果是令人費(fèi)解的，因為傳統(tǒng)觀念認(rèn)為腫瘤細(xì)胞具有變?nèi)醯臋z查點，致使染色體錯誤分離和非整倍性。確實，從酵母菌到小鼠的重大證據(jù)支持變?nèi)醯臋z查點導(dǎo)致染色體不穩(wěn)定性的觀點(Weaver,2005#218)。然而，關(guān)鍵檢查點蛋白質(zhì)的突變在人類腫瘤中是罕見的，并且表明妥協(xié)的檢查點信號傳導(dǎo)直接導(dǎo)致人類腫瘤的發(fā)展的相關(guān)性證據(jù)是難以找到的。已在膀胱癌(Olesen,2001#380)和肺癌(Nakagawa,2008#406)的非催化N-末端中以及在胰腺癌(Carter,2010#384)和肺癌(Nakagawa,2008#406)的激酶結(jié)構(gòu)域中發(fā)現(xiàn)了MPS1錯義突變。有趣的是，截短蛋白質(zhì)的移碼突變是由胃癌(Ahn,2009#383)和結(jié)直腸癌(Niittymaki,2011#382)中的hMps1基因的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性引起的。因此，在腫瘤來源的細(xì)胞中已檢測到hMPS1的突變；然而，尚不清楚它們對腫瘤發(fā)生的影響。

在人類腫瘤中高水平的檢查點蛋白質(zhì)表達(dá)如Mps1的普遍性提示關(guān)于檢查點蛋白質(zhì)在癌細(xì)胞中的潛在作用的一種可替代的假說，即這些蛋白質(zhì)的過表達(dá)可以促進(jìn)癌起始作用或非整倍體癌細(xì)胞的生存(Sotillo,2007#219；Daniel,2010#49)。因此，關(guān)鍵的檢查點蛋白質(zhì)的減少應(yīng)嚴(yán)重降低人類癌細(xì)胞活力。對于一些檢查點蛋白質(zhì)，包括Mps1(Fisk,2003#118；Daniel,2010#49)、BubRI(Janssen,2009#173)和Mad2(Kops,2004#220；Michel,2004#221)，已證實了這一預(yù)測。在Hs578T乳腺癌細(xì)胞中Mps1表達(dá)的抑制還減少了這些細(xì)胞在異種移植物中的致腫瘤性。癌細(xì)胞死亡可能是由于檢查點失能時嚴(yán)重的染色體分離錯誤。有趣的是，存活的Mps1水平減少的細(xì)胞經(jīng)常顯示較低的非整倍體水平，表明潛在地使檢查點失活的較低水平的Mps1與非整倍性不相容(Daniel,2010#49)。這一觀念與檢查點蛋白質(zhì)減少使得腫瘤細(xì)胞比未轉(zhuǎn)化的人類成纖維細(xì)胞對于低劑量的紡錘體毒劑更敏感的觀察結(jié)果具有極好的一致性(Janssen,2009#173)。對正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞之間的檢查點 抑制的細(xì)胞反應(yīng)差別可能是開發(fā)靶向hMps1的潛在的新抗癌藥物的關(guān)鍵。

因為不同的腫瘤具有不同的TTK表達(dá)水平，最有可能受益于抗-TTK療法的癌癥是那些表達(dá)非常高水平的TTK/Mps1的腫瘤。需要通過在腫瘤活組織檢查中檢測TTK/Mps1的表達(dá)水平來識別癌細(xì)胞的有效方法。來自Chrion Corporation的Reinhard等人在2005年提交的US專利(US 20050058627)請求保護(hù)TTK可被用作腫瘤診斷標(biāo)記物并作為治療靶點用于癌癥治療。

在文獻(xiàn)和專利中已描述了幾種TTK/Mps1抑制劑。該列表包括SP600125(IC₅₀＝250nM)、2-苯氨基嘌呤-8-酮(AZ3146,IC₅₀＝35nM)、Mps1-IN-1(IC₅₀＝370nM)、逆轉(zhuǎn)素(IC₅₀＝3nM)、NMS-P715(IC₅₀＝8nM)和MPI-0479605(IC₅₀＝3.5nM)。NMS-P715已在卵巢異種移植物中進(jìn)行過測試并報告有希望的效力。總的來說，TTK/Mps1抑制劑開發(fā)仍處于非常早期的臨床前階段。盡管Mps1抑制劑的不同小分子化學(xué)型的可用性(綜述見Liu和Winey,Annual Review of Biochemistry 2012)，已被解決的基本問題是Mps1抑制劑作為單劑在癌癥治療中是否有效。首先，Mps1抑制劑的治療指數(shù)是相當(dāng)窄的，這與Mps1在正常細(xì)胞增殖和癌細(xì)胞增殖兩者中的本質(zhì)功能一致。與這種觀念一致，動物異種移植物研究明確表明Mps1抑制表現(xiàn)出明顯的嗜中性白細(xì)胞減少癥和動物毒性(體重減輕和死亡)(Brandi Williams,Molecular Cancer Therapeutics Paper 2011,Mol Cancer Ther.2011Dec；10(12):2267-75.doi:10.1158/1535-7163.MCT-11-0453.Epub 2011Oct 6)。目前的研究明確揭示使用Mps1抑制劑作為單一劑在癌癥治療中明顯有其局限性。迫切需要新概念、方法和靶向劑來克服這些障礙以達(dá)到成功的癌治療。

在發(fā)明人研究Mps1生物學(xué)期間，他們發(fā)現(xiàn)組蛋白脫乙酰酶抑制劑(HDACi)對Mps1功能具有意想不到的調(diào)節(jié)作用。具體地，他們發(fā)現(xiàn)HDAC抑制劑增加Mps1抑制劑的治療指數(shù)并假設(shè)HDAC抑制劑防止正常細(xì)胞但不防止癌細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂。這樣做時，Mps1抑制的作用僅在腫瘤細(xì)胞中顯示，因為正常細(xì)胞在HDACi的存在下進(jìn)入有絲分裂之前停止。另一機(jī)理是HDAC6抑制擾亂了對于Mps1激酶激活是必要的途徑。已充分建立了HDAC6-HSP90信號傳導(dǎo)軸是活躍Mps1的成熟所需要的。HDAC6的抑制加劇了Mps1抑制劑的作用。此處，我們證明了HDAC抑制劑與Mps1抑制劑的組合產(chǎn)生穩(wěn)健的腫瘤抑制和最小的細(xì)胞毒性。此外，合并HDAC抑制活性與Mps1抑制活性的雙重抑制劑在體內(nèi)的腫瘤生長抑制是高度有效的。

本發(fā)明描述了HDAC6和/或TTK/Mps1激酶的新選擇性抑制劑。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了新型異羥肟酸，其是特異性組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制劑，包括藥學(xué)上可接受的鹽，其可用于調(diào)整HDAC活性以調(diào)整諸如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖、細(xì)胞生存和細(xì)胞因子分泌等細(xì)胞活性。更具體地，本發(fā)明涉及異羥肟酸化合物，其抑制、調(diào)節(jié)和/或調(diào)整HDAC活性(特別是HDAC6活性)以及與上文所述的細(xì)胞活性有關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。本發(fā)明還提供為TTK/Mps1激酶抑制劑的新型化合物，包括藥學(xué)上可接受的鹽，其可用于調(diào)整TTK/Mps1激酶活性以調(diào)整諸如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖、細(xì)胞生存和細(xì)胞因子分泌等細(xì)胞活性。

本發(fā)明還提供能夠同時或以互相排斥的方式抑制HDAC6活性和TTK/Mps1激酶活性并可用作治療劑的化合物。

本發(fā)明的一個方面是式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

其中：

Z是NH或CH₂；

X是O、S、SO、SO₂、CO、CR₂R₃、NR₄、SO₂NR₄、NR₄SO₂、CONR₄、NR₄CO、NR₄CO₂、NR₄(CO)NR₅或鍵；

M是CR₆或N；

Q₁和Q₂獨(dú)立地是N或CH；

Q₃是CR₇，或者當(dāng)R₁不存在時，Q₃是NR₈；

n是0-6；

Y是H、CN、Cl、Br、I、F、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、(CH₂)_n-芳基、(CH₂)_n-雜芳基、OR₉、SR₉、COR₉、COOR₉、SOR₉、SO₂R₉、SO₂NR₁₀R₁₁、NR₁₀R₁₁、NR₁₀SO₂R₉、NR₁₀COR₉、NR₁₀CO₂R₉、CONR₁₀R₁₁、CO₂NR₁₀R₁₁、NR₁₀(CO)NR₁₁，其每一個可以是任選取代的，并且其中R₁₀和R₁₁一起可以形成雜環(huán)，該雜環(huán)可以是任選 取代的；

R₁是H、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、芳基、芳基-烷基、雜芳基、雜芳基-烷基、雜環(huán)基、碳環(huán)基或不存在，其每一個可以是任選取代的；

R₂是H、C₁-C₆烷基、羥基、烷氧基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₃是H、C₁-C₆烷基、烷氧基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₄是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₅是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₆是H、CN、Cl、Br、I、F、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、(CH₂)_n-芳基、(CH₂)_n-雜芳基、OR₉、SR₉、COR₉、COOR₉、SOR₉、SO₂R₉、SO₂NR₁₀R₁₁、NR₁₀R₁₁、NR₁₀SO₂R₉、NR₁₀COR₉、NR₁₀CO₂R₉、CONR₁₀R₁₁、CO₂NR₁₀R₁₁或不存在，其中R₁₀和R₁₁一起可以形成4-7元環(huán)，該環(huán)可以被任選取代；

R₇是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₈是H、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、芳基、芳基-烷基、雜芳基、雜芳基-烷基、雜環(huán)基、碳環(huán)基或不存在，其每一個可以是任選取代的；

R₉是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₁₀是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；和

R₁₁是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(I)的化合物，其中Y是NR₁₀R₁₁；R₁₀是烷基、芳基、雜芳基、芳基-烷基或雜芳基-烷基；且R₁₁是烷基或H,并且其中R₃和R₄一起可以形成4-7元環(huán)，該環(huán)被任選取代。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(I)的化合物，其中X是O、S、SO₂、SO₂NR₄或CONR₄。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(I)的化合物，其中n是2、3、4或5。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(I)的化合物，其中R₁是H或C₁-C₆烷基；Q₃是NR₈，其中R₈不存在；M是CR₆，其中R₆是H。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(I)的化合物，其中R₁是H或C₁-C₆烷基；Q₃是CR₇，其中R₇是H；M是N。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(I)的化合物，其中Y是芳基、雜芳基或NR₁₀R₁₁。

本發(fā)明的另一方面是式(II)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前藥：

其中：

環(huán)A是任選取代的芳基或任選取代的雜芳基；

環(huán)B是任選取代的芳基或任選取代的雜芳基；

環(huán)C是任選取代的雜芳基、任選取代的環(huán)烷基或任選取代的雜環(huán)烷基；

Z是N、CR₂、O、S、C＝O、SO或SO₂；

R₁是H、不存在、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、羥基烷基、羧基烷基、芳基、芳基-烷基、雜芳基、雜環(huán)基或碳環(huán)基，其每一個可以是任選取代的，并且其中當(dāng)Z為CR₂時，R₁和R₂一起可以形成3-7元環(huán)，該環(huán)可以被任選取代；

X是O、S、SO、SO₂、CO、CR₂R₃、NR₄、SO₂NR₄、NR₄SO₂、CONR₄、NR₄CO、NR₄CO₂、NR₄(CO)NR₅或鍵；

Y是H、CN、Cl、Br、I、F、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、(CH₂)_n-芳基、(CH₂)_n-雜芳基、OR₃、SR₃、COR₃、COOR₃、SOR₃、SO₂R₃、SO₂NR₄R₅、NR₄R₅、NR₄SO₂R₃、NR₄COR₃、NR₄CO₂R₃、CONR₄R₅、CO₂NR₄R₅、NR₄(CO)NR₅或不存在，其每一個可以是任選取代的，并且其中R₄和R₅一起可以形成4-7元環(huán)，該環(huán)可以被任選取代；

L是C₁-C₉亞烷基、C₂-C₉亞烯基或C₂-C₉亞炔基，其任何一個是取代的或未取代的， 其中亞烷基、亞烯基或亞炔基的一個或多個碳原子任選地被O、S、SO、SO₂、SO₂NR₄、NR₄SO₂、NR₄、CO、CONR₄、NR₄CO、CO₂NR₄、NR₄CO₂、NR₄(CO)NR₅、環(huán)烷基或雜環(huán)替換，前提條件是雜原子不與烯基或炔基碳直接鍵合，以及鄰近X的碳原子不應(yīng)被任選替換以致產(chǎn)生雜原子-雜原子鍵；

R₂是H、C₁-C₆烷基、羥基、烷氧基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₃是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₄是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)，其任何一個是取代的或未取代的；

R₅是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；和

n是1-4。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(II)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中環(huán)A是苯基、吡啶基、嘧啶基或吡嗪基。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(II)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中環(huán)B是苯基、吡啶基、嘧啶基或吡嗪基。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(II)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中環(huán)C獨(dú)立地選自5元雜芳基或5元雜環(huán)烷基。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是根據(jù)式(II)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中Y是芳基、雜芳基、(CH₂)_n-芳基、(CH₂)_n-雜芳基、NH₂、NH(烷基)、N(烷基)(烷基)、N(芳基)(烷基)、NH(環(huán)烷基)、N(烷基)(環(huán)烷基)、NH(雜芳基)、NH(雜環(huán))、N(烷基)(雜芳基)、N(烷基)(雜環(huán))、NH(烷基雜芳基)、NH(烷基雜環(huán))、N(烷基)(烷基雜芳基)或N(烷基)(烷基雜環(huán))。

本發(fā)明的另一方面是式(III)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

其中：

Z是N或CR₂；

R₁是H、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、羥基烷基、羧基烷基、芳基、芳基-烷基、雜芳基、雜環(huán)基或碳環(huán)基，其每一個可以是任選取代的，其中當(dāng)Z為CR₂時，R₁和R₂一起可以形成3-7元環(huán)，該環(huán)可以被任選取代；

環(huán)A是任選取代的苯基、吡啶基、嘧啶基或吡嗪基；

M₁和M₂獨(dú)立地是N或CR₃；

Q₁是CR₄、NR₅、O或S；

Q₂是CR₄、NR₅、O或S；

J是N或CR₆；

X是O、S、SO、SO₂、CO、CR₇R₈、NR₉、SO₂NR₉、NR₉SO₂、CONR₉、NR₉CO、NR₉CO₂、NR₉(CO)NR₁₀或鍵；

Y是H、CN、Cl、Br、I、F、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、(CH₂)_n-芳基、(CH₂)_n-雜芳基、OR₈、SR₈COR₈、COOR₈、SOR₈、SO₂R₈、SO₂NR₉R₁₀、NR₉R₁₀、NR₉SO₂R₈、NR₉COR₈、NR₉CO₂R₈、CONR₉R₁₀、CO₂NR₉R₁₀或NR₉(CO)NR₁₀，其每一個可以是任選取代的，并且其中R₉和R₁₀一起可以形成雜環(huán)，該雜環(huán)可以被任選取代；

L是C₁-C₉亞烷基、C₂-C₉亞烯基或C₂-C₉亞炔基，其任何一個是取代的或未取代的，其中亞烷基、亞烯基或亞炔基的一個或多個碳原子任選地被O、S、SO、SO₂、SR₈、SO₂NR₉、NR₉SO₂、NR₉、CO、CONR₉、NR₉CO、CO₂NR₉、NR₉CO₂、環(huán)烷基或雜環(huán)替換，前提條件是雜原子不與烯基或炔基碳直接鍵合，以及鄰近X的碳不應(yīng)被任選替換以致產(chǎn)生雜原子-雜原子鍵；

R₂是H、C₁-C₆烷基、羥基、烷氧基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₃是H、CN、Cl、Br、I、F、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基OR₈、SR₈、COR₈、COOR₈、SOR₈、SO₂R₈、SO₂NR₉R₁₀、NR₉R₁₀、NR₉SO₂R₈、NR₉COR₈、NR₉CO₂R₈、CONR₉R₁₀、CO₂NR₉R₁₀或NR₉(CO)NR₁₀，其每一個可以是任選取代的，并且其中R₉和R₁₀一起可以形成雜環(huán)，該雜環(huán)可以被任選取代；

R₄是H、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、羥基烷基、羧基烷基、芳基、芳基-烷基、雜芳基、雜環(huán)基或碳環(huán)基，其每一個可以是任選取代的；

R₅是H、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、羥基烷基、羧基烷基、芳基、芳基-烷基、雜芳基、雜環(huán)基或碳環(huán)基，其每一個可以是任選取代的；

R₆是H、CN、Cl、Br、I、F、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基OR₈、SR₈、COR₈、COOR₈、SOR₈、SO₂R₈、SO₂NR₉R₁₀、NR₉R₁₀、NR₉SO₂R₈、NR₉COR₈、NR₉CO₂R₈、CONR₉R₁₀、CO₂NR₉R₁₀或NR₉(CO)NR₁₀，其每一個可以是任選取代的，并且其中R₉和R₁₀一起可以形成雜環(huán)，該雜環(huán)可以被任選取代；

R₇是H、C₁-C₆烷基、烷氧基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₈是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₉是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₁₀是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；和

n是1-4。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是根據(jù)式(III)的化合物，其中Z是氮，并且R₁是H。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是根據(jù)式(III)的化合物，其中X和Z彼此呈對位。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是根據(jù)式(III)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中Y是芳基、雜芳基、烷基-芳基、烷基-雜芳基、NH₂、NH(烷基)、N(烷基)(烷基)、N(芳基)(烷基)、NH(環(huán)烷基)、N(烷基)(環(huán)烷基)、NH(雜芳基)、NH(雜環(huán))、N(烷基)(雜芳基)、N(烷基)(雜環(huán))、NH(烷基雜芳基)、NH(烷基雜環(huán))、N(烷基)(烷基雜芳基)或N(烷基)(烷基雜環(huán))。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是根據(jù)式(III)的化合物，其中M₁和M₂獨(dú)立地是N或CR₃，其中R₃是H。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是根據(jù)式(III)的化合物，其中Q₁是NR₅；Q₂是NR₇；并且J是CR₆，其中R₅不存在，且R₇是H或烷基。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是根據(jù)式(III)的化合物，其中Q₁是NR₅；Q₂是NR₇；并且J是CR₆，其中R₅是烷基，R₇不存在。

本發(fā)明的另一方面是式(IV)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

其中：

Z是N或CR₃；

R₁是H、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、羥基烷基、羧基烷基、芳基、芳基-烷基、雜芳基、雜環(huán)基或碳環(huán)基，其每一個可以是任選取代的，其中當(dāng)Z為CR₃時，R₁和R₃一起可以形成3-7元環(huán)，該環(huán)可以被任選取代；

R₂是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_q-芳基、雜芳基、(CH₂)_q-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₃是H、C₁-C₆烷基、羥基、烷氧基、芳基、(CH₂)_q-芳基、雜芳基、(CH₂)_q-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的，其中R₁和R₃一起可以形成3-7元環(huán)，該環(huán)可以被任選取代；

Q₁、Q₂、Q₃和Q₄中的每一個獨(dú)立地是N或CR₄；

環(huán)B是任選取代的苯基、吡啶基、嘧啶基或吡嗪基；

環(huán)C是任選取代的雜芳基、任選取代的環(huán)烷基或任選取代的雜環(huán)烷基；

X是O、S、SO、SO₂、CO、CR₅R₆、NR₇、SO₂NR₇、NR₇SO₂、CONR₇、NR₇CO、NR₇CO₂、NR₇(CO)NR₈或鍵，其中R₅和R₆一起可以形成3-7元環(huán)，該環(huán)可以被任選取代；

Y是H、CN、Cl、Br、I、F、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、(CH₂)_q-芳基、(CH₂)_q-雜芳基、OR₆、SR₆、COR₆、COOR₆、SOR₆、SO₂R₆、SO₂NR₇R₈、NR₇R₈、NR₇SO₂R₆、NR₇COR₆、NR₇CO₂R₇、CONR₇R₈、CO₂NR₇R₈、NR₇(CO)NR₈，或不存在，其每一個可以是任選取代的，并且其中R₇和R₈一起可以形成雜環(huán)，其可以被任選取代；

當(dāng)X是CR₅R₆時，n是1-5，并且m是1-5；

當(dāng)X不是CR₅R₆時，n是2-4，并且m是1-4；

q是2-4；

R₄是H、CN、Cl、Br、I、F、烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基OR₆、SR₆、COR₆、COOR₆、SOR₆、SO₂R₆、SO₂NR₇R₈、NR₇R₈、NR₇SO₂R₆、NR₇COR₆、NR₇CO₂R₆、CONR₇R₈、CO₂NR₇R₈或NR₇(CO)NR₈，其每一個可以是任選取代的，并且其中R₇和R₈一起可以形成雜環(huán)，該雜環(huán)可以被任選取代；

R₅是H、C₁-C₆烷基、烷氧基、芳基、(CH₂)_q-芳基、雜芳基、(CH₂)_q-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₆是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_q-芳基、雜芳基、(CH₂)_q-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₇是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_q-芳基、雜芳基、(CH₂)_q-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₈是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_q-芳基、雜芳基、(CH₂)_q-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(IV)的化合物，其中環(huán)B和環(huán)C一起形成嘌呤、吡唑并嘧啶、吡唑并吡啶、吡咯并嘧啶、噻唑并嘧啶、嘌呤酮、吲哚、吡咯并嘧啶酮或二氫吡咯并嘧啶。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(IV)的化合物，其中Q₁和Q₃是N；Q₂和Q₄是CR₄，其中R₄是H。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(IV)的化合物，其中Q₁和Q₃是CR₄，其中R₄是H；Q₂和Q₄是N。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(IV)的化合物，其中Q₁、Q₂、Q₃和Q₄是CR₄，其中R₄是H。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(IV)的化合物，其中Z是N；R₁是H。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(IV)的化合物，其中X是O、(CO)NR₈或S(O)₂NR₈；并且R₈是H、烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(IV)的化合物，其中n是3；m是1；R₂是H或烷基。

本發(fā)明的另一方面是式(V)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

其中：

Z是N或CR₂；

R₁是H、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、羥基烷基、羧基烷基、芳基、芳基-烷基、雜芳基、雜環(huán)基或碳環(huán)基，其每一個可以是任選取代的；

Q₁、Q₂、Q₃和Q₄中的每一個獨(dú)立地是N或CR₃；

環(huán)B是任選取代的苯基、吡啶基、嘧啶基或吡嗪基；

環(huán)C是任選取代的雜芳基、任選取代的環(huán)烷基或任選取代的雜環(huán)烷基；

R₂是H、C₁-C₆烷基、羥基、烷氧基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的，其中R₁和R₃一起可以形成3-7元環(huán)，該環(huán)可以被任選取代；

X是(CR₄R₅)_n、SO₂、CO、NR₆CO或不存在；

Y是H、CN、Cl、Br、I、F、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、(CH₂)_n-芳基、(CH₂)_n-雜芳基、芳基OR₆、SR₆、COR₆、COOR₆、SOR₆、SO₂R₆、SO₂NR₇R₈、NR₇R₈、NR₇SO₂R₆、NR₇COR₆、NR₇CO₂R₆、CONR₇R₈、CO₂NR₇R₈或不存在，并且其中R₇和R₈一起可以形成4-7元環(huán)，該環(huán)可以被任選取代；

n＝1-4；

R₃是H、CN、Cl、Br、I、F、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、OR₆、SR₆、COR₆、COOR₆、SOR₆、SO₂R₆、SO₂NR₇R₈、NR₇R₈、NR₇SO₂R₆、NR₇COR₆、NR₇CO₂R₆、CONR₇R₈、CO₂NR₇R₈或NR₇(CO)NR₈，其每一個可以是任選取代的，并且其中R₇和R₈一起可以形成雜環(huán)，該雜環(huán)可以被任選取代；

R₄是H、C₁-C₆烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₅是H、C₁-C₆烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取 代的；

R₆是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₇是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；和

R₈是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(V)的化合物，其中環(huán)B和環(huán)C一起形成嘌呤、吡唑并嘧啶、吡唑并吡啶、吡咯并嘧啶、噻唑并嘧啶、嘌呤酮、吲哚、吡咯并嘧啶酮或二氫吡咯并嘧啶。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(V)的化合物，其中Z是N，且R₁是H。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(V)的化合物，其中Q₁、Q₂、Q₃和Q₄是CR₃，其中R₃是H。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(V)的化合物，其中X是CR₄R₅、SO₂、CO、NR₄CO或不存在。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(V)的化合物，其中Y是芳基、雜芳基、(CH₂)_n-芳基、(CH₂)_n-雜芳基或NR₇R₈。

本發(fā)明的另一方面是式(VI)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前藥：

其中：

環(huán)A是任選取代的芳基或任選取代的雜芳基；

Z是N或CR₃；

R₁是H、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、羥基烷基、羧基烷基、芳基、芳基-烷基、雜芳基、雜環(huán)基或碳環(huán)基，其每一個可以是任選取代的；

R₂是任選取代的C₁-C₆烷基、?；?、芳基或雜芳基；

Q₁和Q₂獨(dú)立地是N或CR₄；

M是NR₅、CR₆R₇、O或S；

J是O、S或不存在；

X是O、S、SO、SO₂、CO、CR₈R₉、NR₁₀、SO₂NR₁₀、NR₁₀SO₂、CONR₁₀、NR₉CO、NR₁₀CO₂、NR₁₀(CO)NR₁₁或不存在；

Y是H、CN、Cl、Br、I、F、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、(CH₂)_n-芳基、(CH₂)_n-雜芳基、OR₉、SR₉、COR₉、COOR₉、SOR₉、SO₂R₉、SO₂NR₁₀R₁₁、NR₁₀R₁₁、NR₁₀SO₂R₉、NR₁₀COR₉、NR₁₀CO₂R₉、CONR₁₀R₁₁、CO₂NR₁₀R₁₁或不存在，其中R₁₀和R₁₁一起可以形成4-7元環(huán)，該環(huán)可以被任選取代；

L是C₁-C₉亞烷基、C₂-C₉亞烯基或C₂-C₉亞炔基，其任何一個是取代的或未取代的，其中亞烷基、亞烯基或亞炔基的一個或多個碳原子任選地被O、S、SO、SO₂、SO₂NR₁₀、NR₁₀SO₂、NR₁₀、CO、CONR₁₀、NR₁₀CO、CO₂NR₁₀、NR₁₀CO₂、環(huán)烷基或雜環(huán)基替換，前提條件是雜原子不與烯基或炔基碳直接鍵合，以及鄰近X的碳不應(yīng)被任選地替換以致產(chǎn)生雜原子-雜原子鍵；

R₃是H、C₁-C₆烷基、羥基、烷氧基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的，其中R₁和R₃一起可以形成3-7元環(huán)，該環(huán)可以被任選取代；

R₄是H、CN、Cl、Br、I、F、C₁-C₆烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基OR₉、SR₉、COR₉、COOR₉、SOR₉、SO₂R₉、SO₂NR₁₀R₁₁、NR₁₀R₁₁、NR₁₀SO₂R₁₁、NR₁₀COR₉、NR₁₀CO₂R₉、CONR₁₀R₁₁或CO₂NR₁₀R₁₁，其中R₁₀和R₁₁一起可以形成4-7元環(huán)，該環(huán)可以被任選取代；

R₅是任選取代的C₁-C₆烷基、酰基、芳基或雜芳基；

R₆是H、C₁-C₆烷基、羥基、烷氧基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)；

R₇是H、C₁-C₆烷基、羥基、烷氧基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的，其中R₆和R₇一起可以形成3-7元環(huán)，該環(huán)可以被任選取代；

R₈是H、C₁-C₆烷基、烷氧基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)，其任何一個是取代的或未取代的；

R₉是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；

R₁₀是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的。

R₁₁是H、C₁-C₆烷基、芳基、(CH₂)_n-芳基、雜芳基、(CH₂)_n-雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，其任何一個是取代的或未取代的；和

n是1-4。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(VI)的化合物，其中Z是N；且R₁是H。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(VI)的化合物，其中Q₁和Q₂獨(dú)立地是N或CR₄，其中R₄是H。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(VI)的化合物，其中M是CR₆R₇，其中R₆和R₇是烷基，或一起形成3、4或5元環(huán)。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(VI)的化合物，其中環(huán)A是苯基。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(VI)的化合物，其中X和Z彼此呈對位。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(VI)的化合物，其中X是O、CR₈R₉或CONR₁₀。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(VI)的化合物，其中J是O或不存在。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(VI)的化合物，其中Y是芳基、雜芳基、(CH₂)_n-芳基、(CH₂)_n-雜芳基或NR₇R₈。

本發(fā)明的一個示例性實施方案是式(VI)的化合物，其中L是C₃-C₈亞烷基。

在一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了為HDAC抑制劑的化合物，如選自式(I)至式(VI)的那些化合物，所述化合物抑制選自HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9及其組合中的至少一種HDAC同種型。

在另一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了對HDAC6同種型具有選擇性的HDAC抑制劑，如選自選自式(I)至式(VI)的那些。

在另一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了TTK/Mps1激酶抑制劑，如選自式(I)至式(VI)的那些。

在另一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了為HDAC6和TTK/Mps1激酶二者的抑制劑的化合物，如選自式(I)至式(VI)的那些。

在另一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了HDAC6抑制劑和/或TTK/Mps1激酶抑制劑(如選自式(I)至式(VI)的那些)在治療或預(yù)防哺乳動物(如人)的免疫性、增殖性、炎性、 自身免疫或過敏性病癥或疾病，或移植排斥，或移植物抗宿主病，或神經(jīng)退行性疾病或神經(jīng)元損傷的方法中的用途，其通過單獨(dú)地或與已知治療劑共同施用來施用治療有效量的該化合物。

在另一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了諸如選自式(I)至式(VI)的那些的化合物和/或本文中描述的此類化合物的藥學(xué)上可接受的鹽并包括藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑的藥物組合物。

在另一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了本文描述的一種或多種化合物或一種或多種化合物的藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物，其用于治療或預(yù)防病癥或疾病(如本文描述的具體病癥或疾病)的治療中。

在另一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了本文描述的一種或多種化合物或一種或多種化合物的藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物用于治療、預(yù)防或延遲癌癥進(jìn)展。

在另一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了本文描述的化合物或一種或多種化合物的藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物用于治療、預(yù)防或延遲神經(jīng)退行性病癥的進(jìn)展。

在另一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了本文描述的化合物或一種或多種化合物的藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物用于治療、預(yù)防或延遲炎癥的進(jìn)展。

在另一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了治療HDAC酶介導(dǎo)的疾病的方法，包括向有需要的受試者施用治療有效量的本文描述的一種或多種化合物，如式(I)至式(VI)的化合物。其他方法涉及通過施用本發(fā)明的一種或多種化合物與已知治療或預(yù)防癌癥、神經(jīng)退行性病癥和炎癥的其他藥劑的共同療法。

在另一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供治療、預(yù)防或延遲受試者的癌癥、神經(jīng)退行性病癥或炎癥的進(jìn)展的方法，其包括施用治療有效量的本發(fā)明的化合物(如式(I)至式(VI)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽)或藥物組合物，進(jìn)一步包括與已知治療或預(yù)防癌癥、神經(jīng)退行性病癥和炎癥的其他藥劑的聯(lián)合療法。

附圖簡要說明

圖1示出了當(dāng)用實施例2-4的化合物處理時微管蛋白?；慕Y(jié)果。

圖2示出了當(dāng)用實施例8的化合物處理時微管蛋白?；慕Y(jié)果。

圖3示出了當(dāng)用實施例2的化合物處理時，小鼠異種移植物模型上腫瘤生長抑制的結(jié)果。

發(fā)明詳述

下面的描述在本質(zhì)上僅是示例性的，并且不旨在限制本文描述的化合物的公開內(nèi)容、應(yīng)用或用途。

本發(fā)明的各個實施方案還可包括在權(quán)利要求中所述的各種要素的排列，如同每個從屬權(quán)利要求是并入每個前述從屬權(quán)利要求以及獨(dú)立權(quán)利要求的限定的多項從屬權(quán)利要求一樣。此類排列明確在本發(fā)明的范圍在。

除非另有定義，本文使用的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解的相同的含義。雖然與本文描述的那些類似或等同的任何方法、裝置和材料能用于實踐或測試本發(fā)明，但現(xiàn)描述優(yōu)選的方法、裝置和材料。

定義

如本文所用，除非內(nèi)容另有明確規(guī)定，單數(shù)形式"一個(種)(a)"、"一個(種)(an)"和"該(the)"包括復(fù)數(shù)形式，并且可以與"至少一個(種)"和"一個(種)或多個(種)"互換使用。

除非另有說明，表示在說明書和權(quán)利要求書中使用的成分的數(shù)量、尺寸、反應(yīng)條件等的所有數(shù)字應(yīng)被理解為在所有情況中均被術(shù)語"約"修飾。

如本文所用，術(shù)語"活性"是指在細(xì)胞內(nèi)和/或外，所提及的分子的激活、產(chǎn)生、表達(dá)、合成、細(xì)胞間作用，和/或病理或異常作用。

如本文所用，術(shù)語"包含"、"包括"、"含有"及其各種變化形式旨在覆蓋非排除性包括，使得包含、包括或含有要素或要素列表的過程、方法、方法限定的產(chǎn)品或物質(zhì)組成不僅包括那些要素，還可以包括未明確列出的或者此類過程、方法、方法限定的產(chǎn)品或物質(zhì)組成所固有的其他要素。

如本文所用，術(shù)語"組蛋白脫乙酰酶"或"HDAC"是指能夠從蛋白質(zhì)(包括但不限于組蛋白和微管)裂解乙?；?-C(＝O)CH₃)的酶種類的任何成員。組蛋白脫乙酰酶可以是鋅依賴性的。HDAC的實例包括但不限于HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9、HDAC10和HDAC11。

如本文所用，除非另有聲明，使用的"或"意指"和/或"。而且，除非另有明確聲明，諸如"要素"或"組分"的術(shù)語涵蓋包含一個單元的要素和組分和包含多于一個單元的要素和組分。

如本文所用的術(shù)語"藥學(xué)上可接受的"或"藥理學(xué)上可接受的"是指當(dāng)施用于動物或人時，不產(chǎn)生不良反應(yīng)、過敏反應(yīng)或其他不良反應(yīng)的分子實體和組合物。

如本文所用的術(shù)語"藥學(xué)上可接受的載體"包括任何和所有溶劑或分散介質(zhì)，包括但不限于水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)、其合適的混合物，以及植物油、包衣、等滲劑和吸收延遲劑、脂質(zhì)體、商業(yè)上可獲得的清潔劑等。補(bǔ)充性生物活性成分也可并入到此類載體中。

如本文所用的術(shù)語"取代的"意指分子排列的至少一個氫原子被非氫取代基替換。例如，在氧代取代基("＝O")的情況中，兩個氫原子被替換。當(dāng)取代時，替換基團(tuán)被稱為"取代基"。取代基可以包括但不限于鹵素、羥基、氧代、氰基、硝基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基、烷氧基、烷硫基、鹵代烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)和雜環(huán)烷基，以及-NRaRb、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)NRaNRb、-NRaC(＝O)ORb、-NRaSO₂Rb、-C(＝O)Ra、-C(＝O)ORa、-C(＝O)NRaRb、-OC(＝O)NRaRb、-OR、-SR、-SORa、-S(＝O)aR、-OS(＝O)₂Ra和-S(＝O)Ora。此外，上述取代基可以進(jìn)一步被一個或多個上述取代基取代，使得該取代基含有取代的烷基、取代的芳基、取代的芳基烷基、取代的雜環(huán)基或取代的雜環(huán)烷基。在這種情況中的Ra和Rb可以是相同的或不同的，并且通常包括但不限于氫、烷基、鹵代烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、芳基烷基、取代的芳基烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、雜環(huán)烷基或取代的雜環(huán)烷基。

如本文所用的術(shù)語"未取代的"是指不含有額外的與該化合物連接的取代基的任何化合物。未取代的化合物是指由沒有額外的取代基的化合物組成的化學(xué)物質(zhì)，例如，該化合物不含有保護(hù)基團(tuán)。

如本文所用的術(shù)語"烷基"意指含有1至10個碳原子的任何直鏈或支鏈、非環(huán)狀或環(huán)狀、不飽和或飽和的脂肪族烴，而術(shù)語"低級烷基"具有與烷基相同的含義，但具有1至6個碳原子。術(shù)語"高級烷基"具有與烷基相同的含義但含有2至10個碳原子，如6-10個碳原子。代表性飽和直鏈烷基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基等；而飽和的支鏈烷基包括但不限于異丙基、仲丁基、異丁基、叔丁基、異戊基等。環(huán)狀烷基可以通過連接與同一原子鍵合的兩個烷基或連接各自與鄰接原子鍵合的兩個烷基基團(tuán)而獲得。代表性飽和環(huán)狀烷基包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等；而不飽和的環(huán)狀烷基包括但不限于環(huán)戊烯基和環(huán)己烯基等。環(huán)狀烷基在本文中也被稱為"環(huán)烷基"、"碳環(huán)"或"同素環(huán)"。不飽和的烷基含有至少一個在兩個相鄰的碳原子之間的雙鍵或三鍵(分別被稱為"烯基"或"炔基")。代表性支鏈和支鏈烯基包括但不限于乙烯基、丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、異丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-l-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基等；而代表性直鏈和支鏈炔基包括但不限 于乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-甲基-l-丁炔基等。

如本文所用的術(shù)語"芳基"是指任何芳香族碳環(huán)部分，如但不限于苯基或萘基。

如本文所用的術(shù)語"芳基烷基"或“芳烷基”是指至少一個烷基氫原子被芳基部分替換的任何烷基，如但不限于芐基、-(CH₂)₂苯基、-(CH₂)₃苯基、-CH(苯基)₂等。

如本文所用的術(shù)語"鹵素"是指任何氟代、氯代、溴代或碘代部分。

如本文所用的術(shù)語"鹵代烷基"是指至少一個氫原子被鹵素替換的任何烷基，如三氟甲基等。

如本文所用的術(shù)語"雜芳基"是指5至10元并具有至少一個選自氮、氧和硫的雜原子并且含有至少1個碳原子的任何芳香族雜環(huán)，包括但不限于單環(huán)和雙環(huán)體系。代表性的雜芳基包括但不限于呋喃基、苯并呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、吡咯基、吲哚基、異吲哚基、氮雜吲哚基、吡啶基、喹啉基、異喹啉基、唑基、異唑基、苯并唑基、吡唑基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、異噻唑基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、噌啉基、酞嗪基或喹唑啉基。

如本文所用的術(shù)語"雜芳基烷基"是指至少一個烷基氫原子被雜芳基部分替換的任何烷基，如-CH吡啶基、-CH₂嘧啶基等。

如本文所用的術(shù)語"雜環(huán)(heterocycle)"或"雜環(huán)的"或"雜環(huán)(heterocyclic ring)"是指任何4元至7元單環(huán)或任何7元至10元雙環(huán)雜環(huán)，其是飽和的、不飽和的或芳香族的，并且其含有1至4個獨(dú)立地選自氮、氧和硫的雜原子，并且其中氮和硫雜原子可以被任選地氧化，并且氮雜原子可以被任選地季銨化，包括其中任何上述雜環(huán)與苯環(huán)稠合的雙環(huán)。雜環(huán)可以經(jīng)由任何雜原子或碳原子連接。雜環(huán)可以包括通過上文所定義的那些舉例說明的雜芳基。因此，除了上文列出的雜芳基外，雜環(huán)還可以包括但不限于嗎啉基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、哌啶基、乙內(nèi)酰脲基、戊內(nèi)酰胺基、環(huán)氧乙基、氧雜環(huán)丁烷基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、四氫吡啶基、四氫嘧啶基、四氫噻吩基、四氫噻喃基、四氫嘧啶基、四氫噻吩基、四氫噻喃基等。

如本文所用的術(shù)語"雜環(huán)烷基"是指至少一個烷基氫原子被雜環(huán)替換的任何烷基，如-CH₂嗎啉基等。

如本文所用的術(shù)語"同素環(huán)"或"環(huán)烷基"是指含有3-7個碳原子的任何飽和的或不飽和的(但不是芳香族的)碳環(huán)，如但不限于環(huán)丙烷、環(huán)丁烷、環(huán)戊烷、環(huán)己烷、環(huán)庚烷、環(huán)己烯等。

如本文所用的術(shù)語"烷基氨基"是指通過氮橋連接的至少一個烷基部分(即-N-(烷基)N， 如二烷基氨基)，包括但不限于甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基等。

如本文所用的術(shù)語"烷基氧基"或“烷氧基”是指通過氧橋連接的任何烷基部分(即-O-烷基)，如但不限于甲氧基、乙氧基等。

如本文所用的術(shù)語"烷硫基"是指通過硫橋連接的任何烷基部分(即-S-烷基)，如但不限于甲硫基、乙硫基等。

術(shù)語"烯基"是指其中具有一個或多個雙鍵的無支鏈或有支鏈的烴鏈。烯基的雙鍵可以是非共軛的或與另一不飽和基團(tuán)共軛。合適的烯基包括但不限于乙烯基、烯丙基、丁烯基、戊烯基、己烯基、丁二烯基、戊二烯基、己二烯基、2-乙基己烯基、2-丙基-2-丁烯基、4-(2-甲基-3-丁烯)-戊烯基。烯基可以是未取代的或被一個或兩個合適的取代基取代。

術(shù)語"炔基"是指其中具有一個或多個三鍵的無支鏈或有支鏈的烴鏈。炔基的三鍵可以是非共軛的，或者另一不飽和基團(tuán)共軛。合適的炔基包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、甲基丙炔基、4-甲基-l-丁炔基、4-丙基-2-戊炔基-和4-丁基-2-己炔基。炔基可以是未取代的或被一個或兩個合適的取代基取代。

如本文所用的術(shù)語"亞烷基"、"亞烯基"和"亞炔基"分別是指二價烷基、烯基和炔基?？梢岳斫鈦喭榛?、亞烯基和亞炔基可以是直鏈或支鏈的。亞烷基、亞烯基和亞炔基也可以是取代的和未取代的。

如本文所用的術(shù)語"鹽"是指與本文描述的識別的化合物復(fù)合的任何鹽。此類鹽的實例包括但不限于與無機(jī)酸(例如，鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等等)形成的酸加成鹽，和與有機(jī)酸形成的鹽，有機(jī)酸如但不限于乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、蘋果酸、富馬酸、馬來酸、抗壞血酸、苯甲酸、單寧酸、撲酸、藻酸、聚谷氨酸、萘磺酸、萘二磺酸和聚半乳糖醛酸。鹽化合物也可作為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的藥學(xué)上可接受的季銨鹽施用，其具體包括式-NRR'R"+Z-的季銨鹽，其中R、R'、R"獨(dú)立地是氫、烷基或芐基，并且Z是反離子，包括但不限于氯離子、溴離子、碘離子、烷氧離子、甲苯磺酸根、甲基磺酸根、磺酸根、磷酸根或碳酸根(如苯甲酸根、琥珀酸根、乙酸根、乙醇酸根、馬來酸根、蘋果酸根、富馬酸根、檸檬酸根、酒石酸根、抗壞血酸根、肉桂酸根、扁桃酸根和二苯基乙酸根)。鹽化合物也可以作為具有取代的或未取代的部分式的藥學(xué)上可接受的吡啶陽離子鹽施用：其中Z是反離子，包括但不限于氯離子、溴離子、碘離子、烷氧離子、甲苯磺酸根、甲基磺酸根、磺酸根、磷酸根或碳酸根(如苯甲酸根、琥珀酸根、乙酸根、乙醇酸根、馬來酸根、蘋果酸根、富馬酸根、檸檬酸根、酒石酸根、抗壞血酸根、肉桂酸根、扁桃酸根和二苯基乙酸根)。

如本文所用，術(shù)語"前藥"是指可在生物學(xué)條件(體外或體內(nèi))下水解、氧化或以其他方式反應(yīng)以提供本發(fā)明的化合物的化合物的衍生物。前藥可以僅在生物學(xué)條件下的一些反應(yīng)后變得有活性，但它們可以以其未反應(yīng)的形式具有活性。本文包括的前藥的實例包括但不限于本發(fā)明的化合物的類似物或衍生物，和/或它們的鹽(當(dāng)可能形成鹽時)，但特別是鋅結(jié)合硫醇部分的衍生物。前藥部分的實例包括取代的和未取代的、有支鏈的或無支鏈的低級烷基酯部分(例如丙酸酯)、低級烯基酯、二-低級烷基-氨基低級-烷基酯(例如二甲基氨基乙基酯)、?；被图壨榛?例如乙酰氧基甲基酯)、酰氧基低級烷基酯(例如新戊酰氧基甲基酯)、芳基酯(例如苯基酯)、芳基-低級烷基酯(例如芐基酯)、雜芳基酯(例如煙酸酯)、(例如被甲基、鹵代或甲氧基取代基)取代的芳基和芳基-低級烷基酯、酰胺、低級-烷基酰胺、二-低級烷基酰胺和羥基酰胺。天然存在的氨基酸酯或它們的對映異構(gòu)體、二肽酯、磷酸酯、甲氧基磷酸酯、二硫化物和二硫化物二聚體也可以作為前藥。前藥和它們的使用是本領(lǐng)域中公知的(參見例如Berge et al.1977)。前藥通常可使用公知的方法制備，如在Burger’s Medicinal Chemistry and Drug Discovery(Manfred E.Wolff ed.1995)和(Rautio,2008)中描述的那些方法。

"癌癥"是用于其中異常細(xì)胞不受控制地分裂并且能夠侵入其他組織的疾病的術(shù)語。有超過100種不同類型的癌癥。大多數(shù)癌癥是根據(jù)它們開始的器官或細(xì)胞類型來命名的-例如，在結(jié)腸開始的癌癥被稱為結(jié)腸癌；在皮膚的基底細(xì)胞開始的癌癥被稱為基底細(xì)胞癌。癌癥的主要類別包括癌、肉瘤、白血病、淋巴瘤和骨髓瘤以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌癥。一些常見的癌癥類型包括但不限于膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸和直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、腎(腎細(xì)胞)癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、皮膚癌(非黑色素瘤)和甲狀腺癌。在一個實施方案中，本文預(yù)期治療的癌癥包括結(jié)腸癌和乳腺癌。

"神經(jīng)退行性"疾病或病況是用于主要影響人大腦的神經(jīng)元的一系列病況的術(shù)語。一些常見的神經(jīng)退行性疾病是帕金森氏病、阿爾茨海默氏病和其他癡呆、運(yùn)動神經(jīng)元病、朊病毒病(prion disease)、亨廷頓病、脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)和脊髓性肌萎縮。

當(dāng)提及相對于治療的受試者在未治療的受試者中表達(dá)任何癥狀時，術(shù)語"減輕"、"抑制"、"減少"、"遏制"、"降低"、"預(yù)防"和語法上等同詞語(包括"低于"、"小于"等)，意指治療的受試者的癥狀的量和/或等級低于未治療的受試者被任何醫(yī)學(xué)專門人員認(rèn)為是臨床相關(guān)的任何量。在多個示例性實施方案中，治療的受試者的癥狀的量和/或等級比未治療的受試者的癥狀的量和/或等級降低了至少10％、至少25％、至少50％、至少75％和/或至少90％。

如本文所用的術(shù)語"抑制性化合物"是指在使得結(jié)合配偶體對其天然配體變得無反應(yīng)的條件下能夠與結(jié)合配偶體相互作用(即例如連接、結(jié)合等)的任何化合物。抑制性化合物可以包括但不限于小有機(jī)分子、抗體和蛋白質(zhì)/肽。

如本文所用的術(shù)語"連接"是指在介質(zhì)(或載體)和藥物之間的任何相互作用。連接可以是可逆的或不可逆的。此類連接包括但不限于共價結(jié)合、離子結(jié)合、范德華力或摩擦力等。如果藥物被浸漬、摻入、涂覆、與之混懸、與其成為溶液、與其混合等，則該藥物連接于介質(zhì)(或載體)。

如本文所用的術(shù)語"藥物"或"化合物"是指能夠被施用的達(dá)到期望效果的任何藥理學(xué)上活性物質(zhì)。藥物或化合物可以是合成的或天然存在的、非肽、蛋白質(zhì)或肽、寡核苷酸或核苷酸、多糖或糖。

如本文所用的術(shù)語"施用(administered)"或"施用(administering)"是指向患者提供組合物使得該組合物對該患者具有其預(yù)期的效果的任何方法。施用的示例性方法是通過直接機(jī)制，如局部組織施用(即例如，血管外放置)、口服攝取、透皮貼劑、外用、吸入、栓劑等。

如本文所用的術(shù)語"患者"是動物，舉例來說，如哺乳動物，舉例來說，如不需要住院的人。例如，門診患者和護(hù)養(yǎng)院里的人是"患者"?；颊呖梢园魏文挲g的人或非人動物，并因此包括成年和青少年(即兒童)。不旨在術(shù)語"患者"意味著需要醫(yī)學(xué)治療，因此，患者可以自愿地或不自愿地成為臨床或支持基礎(chǔ)科學(xué)研究的實驗的一部分。

本文所用的術(shù)語“受試者”是指脊椎動物，優(yōu)選哺乳動物，更優(yōu)選靈長類動物，還更優(yōu)選人。哺乳動物包括但不限于人、靈長類、野生動物、未馴化動物、農(nóng)場動物、運(yùn)動動物和寵物。

本發(fā)明的示例性實施方案

本發(fā)明提供了新型異羥肟酸，其是特異性組蛋白脫乙酰酶(HDAC)和/或TTK/Mps1激酶抑制劑，包括藥學(xué)上可接受的鹽，其可用于調(diào)整HDAC活性和/或TTK/Mps1激酶活性，并因此改變諸如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖、細(xì)胞生存和細(xì)胞因子分泌等細(xì)胞活性。

在一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了對HDAC6抑制具有選擇性的化合物，其用于治療和/或預(yù)防疾病，諸如免疫性、炎性、自身免疫、過敏性病癥、諸如癌癥的增殖性疾病、神經(jīng)退行性病癥或神經(jīng)性疾病。

在一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了對TTK/Mps1激酶抑制具有選擇性的化合 物，其用于治療和/或預(yù)防疾病，諸如免疫性、炎性、自身免疫、過敏性病癥、諸如癌癥的增殖性疾病、神經(jīng)退行性病癥或神經(jīng)性疾病。

在一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了能夠同時或以相互排斥的方式抑制HDAC6和TTK/Mps1激酶的化合物，其用于治療和/或預(yù)防疾病，諸如免疫性、炎性、自身免疫、過敏性病癥、諸如癌癥的增殖性疾病、神經(jīng)退行性病癥或神經(jīng)性疾病。

在一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了一種藥物，其除了本文描述的一種或多種化合物之外還包括至少一種藥學(xué)上可接受的載體。該組合物可以任何適合期望的給藥途徑的形式存在。當(dāng)該組合物被口服施用時，可以使用任何適合的可口服遞送的劑型，包括但不限于片劑、膠囊(固體或液體填充的)、粉劑、顆粒劑、糖漿劑和其他液體、酏劑、吸入劑、錠劑、糖錠和溶液。還以溶液、混懸液和乳劑的形式提供可注射的組合物或靜脈注射輸液。

在又一個示例性實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以含有一種或多種另外的治療劑，例如以增加效力或減少副作用。在一些實施方案中，藥物組合物進(jìn)一步含有一種或多種另外的治療劑，所述另外的治療劑選自可用于治療或抑制由HDAC6和/或TTK/Mps1激酶直接或間接介導(dǎo)的疾病的活性成分。此類活性成分的實例是但不限于治療或抑制疾病如免疫性、炎性、自身免疫、過敏性病癥、諸如癌癥的增殖性疾病、神經(jīng)退行性病癥或神經(jīng)性疾病的藥劑。

在另一個示例性實施方案中，治療還包括另一治療劑，如抗癌劑。抗癌劑的實例包括但不限于烷基化劑，如環(huán)磷酰胺、達(dá)卡巴嗪和順鉑；抗代謝劑，如甲氨蝶呤、巰嘌呤、硫鳥嘌呤、氟尿嘧啶和阿糖胞苷；植物生物堿，如長春堿和紫杉醇；抗腫瘤抗生素，如多柔比星、博來霉素和絲裂霉素；激素/抗激素，如強(qiáng)的松、他莫昔芬和氟他米特；其他類型的抗癌劑，如天冬酰胺酶、利妥昔單抗、曲妥珠單抗、伊馬替尼、視黃酸及衍生物、集落刺激因子、氨磷汀、喜樹堿、拓?fù)涮婵怠⑸忱劝奉愃莆锶鐏砟嵌劝?、CDK抑制劑、蛋白酶體抑制劑如萬珂、以及其他HDAC抑制劑。

在具體示例性實施方案中，目標(biāo)疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎；類風(fēng)濕性脊柱炎；銀屑病；缺血后灌注損傷；炎性腸??；慢性炎性肺病、濕疹、哮喘、銀屑病、缺血/再灌注損傷、潰瘍性結(jié)腸炎、急性呼吸窘迫綜合征、銀屑病關(guān)節(jié)炎、感染性關(guān)節(jié)炎、進(jìn)展性慢性關(guān)節(jié)炎、變形性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、創(chuàng)傷性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、萊特爾綜合征(Reiter’s syndrome)、多軟骨炎、急性滑膜炎和脊柱炎、腎小球腎炎、溶血性貧血、再生不良性貧血、特發(fā)性血小板減少、嗜中性粒細(xì)胞減少癥、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病、宿主抗移植物病、同種異體移植排斥、慢性甲狀腺炎、格雷夫斯病(Graves’disease)、硬皮病、糖尿病、 活動性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、重癥肌無力、多發(fā)性硬化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎、慢性腎功能不全、特發(fā)性脂肪瀉(idiopathic sprue)、結(jié)節(jié)病、格-巴二氏綜合征(Guillain-Barre syndrome)、葡萄膜炎、結(jié)膜炎、角膜結(jié)膜炎、中耳炎、牙周病、肺間質(zhì)纖維化、哮喘、支氣管炎、鼻炎、鼻竇炎、塵肺病、肺功能不全綜合征、肺氣腫、肺纖維化、硅肺病或慢性炎性肺病。

在具體示例性實施方案中，目標(biāo)疾病是蛋白質(zhì)沉積病癥、威爾森氏病(Wilson's disease)、脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)、朊病毒病、帕金森氏病、亨廷頓病、肌萎縮側(cè)索硬化癥、脊髓性肌萎縮、脊髓延髓肌肉萎縮癥、淀粉樣變性、阿爾茨海默氏病、亞歷山大病(Alexander's deases)、酒精性肝病、囊性纖維化、皮克氏病(Pick's disease)和Lewy體癡呆。在具體實施方案中，本發(fā)明的化合物可用于與微管蛋白脫乙?；钚韵嚓P(guān)的病癥。

在另一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了抑制或治療有需要的受試者的由異常細(xì)胞增殖和/或分化引起的疾病的方法，包括向該受試者施用治療有效量的根據(jù)本發(fā)明的一種或多種化合物。在一個實施方案中，抑制或治療疾病的方法包括向有需要的受試者施用包含有效量的本發(fā)明的一種或多種化合物和藥學(xué)上可接受的載體的組合物。待施用的組合物可以進(jìn)一步含有諸如抗癌劑或用于治療神經(jīng)退行性疾病的藥劑的治療劑。

雖然已參照一些實施方案具體顯示和描述了本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解在不偏離本發(fā)明的精神和范圍的情況下可以對本文公開的各個實施方案進(jìn)行形式和細(xì)節(jié)方面的改變，以及本文公開的各個實施方案不旨在用作對權(quán)利要求的范圍的限制。本文所引用的所有參考文獻(xiàn)通過引用以其整體并入。

本發(fā)明的示例性化合物

本發(fā)明的化合物在本文中按照其化學(xué)結(jié)構(gòu)和/或化學(xué)名稱進(jìn)行定義。一般根據(jù)IUPAC或CAS命名系統(tǒng)對本發(fā)明的化合物進(jìn)行命名?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員公知的縮寫詞。當(dāng)通過化學(xué)結(jié)構(gòu)和化學(xué)名稱二者表示化合物時，并且化學(xué)結(jié)構(gòu)和化學(xué)名稱相沖突，則化合物身份由化學(xué)結(jié)構(gòu)決定。

本發(fā)明的式(I)至式(VI)的化合物一般根據(jù)下文的以下通用方案1-11來合成。

如方案1中所述，如結(jié)構(gòu)1所述的二鹵代雙環(huán)化合物在期望形成碳-雜原子鍵的情況中經(jīng)受標(biāo)準(zhǔn)親核芳香族取代條件，或在期望形成碳-碳鍵的情況中經(jīng)受鈀催化交叉偶聯(lián)條件。根據(jù)1關(guān)于雜環(huán)種類和取代型式的構(gòu)型，其中鹵素基團(tuán)被Y(中間體2)替換的初始偶聯(lián)反應(yīng)通常是選擇性過程。在其中取代反應(yīng)是非選擇性的情況中，得到的區(qū)域異構(gòu)體通過 色譜法分離，并取期望的異構(gòu)體繼續(xù)進(jìn)行反應(yīng)。

方案1

得到的單取代的產(chǎn)物3然后與中間體4進(jìn)行第二偶聯(lián)反應(yīng)得到中間體5。中間體5然后經(jīng)由酯水解、與O-保護(hù)的羥胺衍生物(如O-四氫吡喃基羥胺)在合適的偶聯(lián)試劑(通常為碳二亞胺)的存在下形成酰胺、之后脫保護(hù)(如四氫吡喃基的酸促進(jìn)的水解)，轉(zhuǎn)化為期望的異羥肟酸。在分子中其他地方需要保護(hù)基團(tuán)的情況中，方便使用酸不穩(wěn)定基團(tuán)，使得這兩個保護(hù)基團(tuán)被同時除去以得到最終產(chǎn)物，通常為相應(yīng)的鹽酸鹽。

制備中間體5的替代合成方法在方案2中示出。在這個實例中，使用更線形的方法來構(gòu)建含有環(huán)A的附加物，當(dāng)X是雜原子時這是特別有用的。因此，中間體3與中間體7在堿性條件并且必要時在鈀催化劑的存在下偶聯(lián)以得到中間體8。然后保護(hù)基團(tuán)的除去使X暴露，X與親電組分9在堿性條件下偶聯(lián)得到5。

方案2

用于制備化合物5的另一替代合成方法在方案3中示出。在這種情況中，使用碘基團(tuán)代替標(biāo)準(zhǔn)氯基團(tuán)，其促進(jìn)鈀催化交叉偶聯(lián)以形成碳-雜原子或碳-碳鍵，特別是在期望選擇性的情況中，如當(dāng)M₁和M₂都是碳時。隨后再次經(jīng)由鈀催化與中間體7偶聯(lián)得到中間體8。

方案3

用于制備中間體5的另一替代合成方法在方案4中示出。這種通用方法特別可用于構(gòu)建其中Z是碳的化合物。因此，中間體12與羧酸13縮合得到嘧啶酮14，其在用POCl₃處理后轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的氯化物15。

方案4

關(guān)于合成含有咪唑并部分的化合物，保護(hù)N1氮可能是必需的，因為N-H基團(tuán)常常與后續(xù)的化學(xué)過程不相容。方案5中的通式結(jié)構(gòu)18的起始材料通常在第一偶聯(lián)反應(yīng)之前或之后進(jìn)行保護(hù)。這種類型底物的典型保護(hù)基團(tuán)是四氫吡喃基或?qū)籽趸S基，這兩者在酸 性條件下均可被除去。

方案5

對于合成N-取代的咪唑并衍生物，以下是方便的：在堿性條件下直接烷基化方案6的通式結(jié)構(gòu)12的中間體或使用例如芳基硼酸在過渡金屬催化劑的存在下進(jìn)行N-芳基化，之后必要時進(jìn)行區(qū)域異構(gòu)體的色譜法分離。

方案6

方案7

如方案7中所示，將烷基或芳基直接引入到中間體27所述的通式結(jié)構(gòu)的咪唑并碳上 的簡便方法不需要事先活化咪唑并C-H，需要用有機(jī)金屬試劑處理，取決于金屬的選擇采用或不采用過渡金屬催化，以得到28。替代地，該位置可以被鹵化以得到中間體29，并隨后與多種親核試劑(包括雜原子和碳親核試劑)反應(yīng)以得到30。

方案8

替代地，可以通過1,2-二氨基衍生物31與羧酸的縮合反應(yīng)來制備中間體32。

方案9

如方案9中所示，用于制備吡唑并中間體35的化學(xué)過程類似于方案4中對制備相應(yīng)的咪唑并衍生物所述的化學(xué)過程。如在方案4中，可以利用并且優(yōu)選四氫吡喃基或?qū)籽趸S基保護(hù)基團(tuán)。

方案10

如方案10中所示，可以經(jīng)由?；?6以得到37，之后與肼衍生物縮合以得到期望的產(chǎn)物來合成相應(yīng)的吡唑并衍生物38。

方案11

如方案11中所示，使用甲苯磺酸酯基團(tuán)方便地保護(hù)在5元雜環(huán)中含有1個氮原子的中間體如39。在經(jīng)由連續(xù)的交叉偶聯(lián)反應(yīng)將甲苯磺酸酯40轉(zhuǎn)化成中間體41之后，通過用氫氧化鈉水溶液處理并加熱除去甲苯磺酸酯基團(tuán)。在典型的情況中，甲苯磺酸酯水解與R₃中含有的酯基團(tuán)的水解同時進(jìn)行，其用作期望的異羥肟酸的前體。

實施例

提供以下實施例僅處于舉例說明的目的并且不旨在限制本發(fā)明的范圍。有機(jī)合成領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解可以使用本申請中含有的通用程序和合成路線的修改方案來得到另外的衍生物和結(jié)構(gòu)上不同的化合物。合適的有機(jī)轉(zhuǎn)化在March’s Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure(Wiley-Interscience；6^th edition,2007)中描述，將該文獻(xiàn)的內(nèi)容通過引用并入本文。

實施例1：4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯酚的制備

步驟1：2-氯-N-環(huán)己基-9H-嘌呤-6-胺的制備

將二氯嘌呤(5.0g，26.5mmol)溶解于4ml正丁醇。加入環(huán)己胺(4.20g，42.3mmol)和三乙胺(2.94g，29.1mmol)。將混合物在110℃下攪拌過夜。第二天形成白色固體。加入醚并濾出固體，用醚洗滌，以得到白色粉末。該白色粉末為2-氯-N-環(huán)己基-9H-嘌呤-6-胺和三乙胺鹽酸鹽的混合物，其未經(jīng)任何進(jìn)一步純化即直接使用。

步驟2：2-氯-N-環(huán)己基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺的制備

將2-氯-N-環(huán)己基-9H-嘌呤-6-胺(7.5g，29.8mmol)溶解于90ml四氫呋喃中。加入3,4-二氫-2H-吡喃(3.8g，44.9mmol)和對甲苯磺酸一水合物(0.57g，3.0mmol)，并將混合物在70℃下攪拌過夜。過濾該混合物并濃縮溶液。殘留物通過快速色譜法進(jìn)行純化，用20～70％EtOAc/hex進(jìn)行梯度洗脫，得到2-氯-N-環(huán)己基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺(7.5g，75％收率)。

步驟3：N6-環(huán)己基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-N2-(4-(三異丙基甲硅烷氧基)苯基)-9H-嘌呤-2,6-二胺的制備

向2-氯-N-環(huán)己基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺(1.35g，4.0mmol)在15ml甲苯中的溶液中加入4-(三異丙基甲硅烷基氧基)苯胺(1.28g，4.8mmol)和2-二-叔丁基膦-2′,4′,6′-三異丙基聯(lián)苯(0.17g，0.40mmol)。使用氬氣將反應(yīng)混合物脫氣10min，之后加入Pd(dppf)Cl₂與CH₂Cl₂的絡(luò)合物(0.16g，0.20mmol)，之后加入叔丁醇鈉(0.77g，8.0mmol)。將反應(yīng)燒瓶放入到在100℃下預(yù)熱的油浴中并攪拌過夜。將混合物冷卻至室溫。向該混合物中加入水和EtOAc。分層并用EtOAc萃取水層。合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并濃縮。將粗產(chǎn)物在硅膠柱上純化，用20％至100％EtOAc/己烷洗脫，得到1.7g(75％收率)的N6-環(huán)己基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-N2-(4-(三異丙基甲硅烷氧基)苯基)-9H-嘌呤-2,6-二胺。

步驟4：4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯酚的制備

將N6-環(huán)己基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-N2-(4-(三異丙基甲硅烷氧基)苯基)-9H-嘌呤-2,6-二胺(1.7g，3.0mmol)溶解于40ml四氫吡喃，并加入3.0ml四丁基氟化銨(1.0M，在THF中，3.0mmol)。將混合物攪拌45min。蒸發(fā)溶劑，并將混合物在硅膠柱上純化，用20％至100％EtOAc/己烷洗脫，得到1.05g(85％收率)的4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯酚。

實施例2：7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺鹽酸鹽的制備

步驟1：7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)庚酸乙酯的制備

將4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯酚(760mg，1.86mmol)溶解于5ml二甲基甲酰胺中。加入7-溴庚酸乙酯(882mg，3.72mmol)和碳酸鉀(771mg，5.58mmol)。將混合物在75℃下加熱過夜。加入另外的7-溴庚酸乙酯(380mg，1.86mmol)和碳酸鉀(257mg，1.86mmol)，并再加熱一天。加入另外的7-溴庚酸乙酯(190mg，0.93mmol)和碳酸鉀(257mg，1.86mmol)，并再加熱兩天。將混合物冷卻至室溫。向該混合物中加入水和乙酸乙酯。分層，并且水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用Na₂SO₄干燥并濃縮。將殘留物置于空氣流中以吹走二甲基甲酰胺。然后在硅膠柱上對其進(jìn)行純化，用20％/80％EtOAc/己烷至100％EtOAc梯度洗脫，得到7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)庚酸乙酯(946mg，90％收率)。

7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)庚酸乙酯的替代制備

向2-氯-N-環(huán)己基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺(150mg，0.49mmol)在2ml甲苯中的溶液加入7-(4-氨基苯氧基)庚酸乙酯(142mg，0.54mmol)和BINAP配體(84mg，0.13mmol)。使用氬氣將反應(yīng)混合物脫氣10min，之后加入乙酸鈀(15mg，0.067mmol)，接著加入碳酸銫(437mg，1.3mmol)。將反應(yīng)燒瓶放入在100℃下預(yù)熱的油浴中并攪拌2小時。將混合物冷卻至室溫。向該混合物中加入水和EtOAc。分層，并且水層用EtOAc萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并濃縮。將粗產(chǎn)物在硅膠柱上純化，用20％/80％EtOAc/己烷至80％/20％EtOAc/己烷梯度洗脫，得到190mg(75％收率)7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)庚酸乙酯。

步驟2：7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)庚酸的制備

向7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)庚酸乙酯(946mg，1.68mmol)加入9ml甲醇和3ml水。向該混懸液中加入氫氧化鋰一水合物(141mg，3.35mmol)。1小時后加入另外9ml的甲醇以助溶解。將反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。第二天加入另外的氫氧化鋰一水合物(14mg，0.34mmol)，并使反應(yīng)再繼續(xù)進(jìn)行1天。加入乙酸乙酯和水。將水層用1N HCl酸化。分層，并且水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用Na₂SO₄干燥，并濃縮。粗產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟3：7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)-N-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)庚酰胺的制備

將7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)庚酸(680mg，1.27mmol)溶解于8ml二甲基甲酰胺中。加入1-羥基苯并三唑一水合物(253mg，1.65mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(365mg，1.90mmol)。30min后， 加入三乙胺(514mg，5.08mmol)和O-(四氫-2H-吡喃-2-基)羥胺(164mg，1.40mmol)，并將混合物攪拌過夜。第二天加入另外的O-(四氫-2H-吡喃-2-基)羥胺(82mg，1.40mmol)，并將混合物攪拌1.5小時。向該混合物中加入水和乙酸乙酯。分層，并且水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用Na₂SO₄干燥，并濃縮。快速色譜法，用20％/80％EtOAc/hex至EtOAC梯度洗脫，得到7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)-N-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)庚酰胺(700mg，87％)。

步驟4：7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺鹽酸鹽的制備

將7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)-N-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)庚酰胺(500mg，0.79mmol)溶解于4ml二氯甲烷。加入4ml 4N HCl的二氧六環(huán)溶液，并將混合物在室溫下攪拌4小時。加入醚，濾出沉淀物，并用醚洗滌，得到7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺，為其鹽酸鹽形式。質(zhì)譜(m/z):468.2(M+1)。

實施例3：6-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)-N-羥基己酰胺鹽酸鹽的制備

根據(jù)上文在實施例1和2中描述的程序合成。質(zhì)譜(m/z):454.2(M+1)。

實施例4：5-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)-N-羥基戊酰胺鹽酸鹽的制備

根據(jù)上文在實施例1和2中描述的程序合成。質(zhì)譜(m/z):440.2(M+1)。

實施例5：4-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)-N-羥基丁酰胺鹽酸鹽的制備

根據(jù)上文在實施例1和2中描述的程序合成。質(zhì)譜(m/z):426.2(M+1)。

實施例6：8-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)-N-羥基辛酰胺鹽酸鹽的制備

根據(jù)上文在實施例1和2中描述的程序合成。質(zhì)譜(m/z):482.3(M+1)。

實施例7：4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-甲基-9H-嘌呤-2-基氨基)苯酚的制備

步驟1：2-氯-N-環(huán)己基-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺的制備

將2-氯-N-環(huán)己基-9H-嘌呤-6-胺和三乙胺鹽酸鹽(300mg，0.715mmol)的混合物溶解于10ml二甲亞砜。加入碳酸鉀(593mg，4.3mmol)，接著加入碘甲烷(507mg，3.6mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜。向該混合物中加入水和EtOAc。分層，并且水層用EtOAc萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥，并濃縮。將粗產(chǎn)物在硅膠柱上純化，用50％至100％EtOAc/己烷洗脫，得到180mg(95％收率)的2-氯-N-環(huán)己基-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺。

步驟2：2N6-環(huán)己基-9-甲基-N2-(4-(三異丙基甲硅烷氧基)苯基)-9H-嘌呤-2,6-二胺的制備

向2-氯-N-環(huán)己基-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(1.06g，3.99mmol)在15ml甲苯中的溶液中加入4-(三異丙基甲硅烷氧基)苯胺(1.27g，4.79mmol)和2-二-叔丁基膦-2′,4′,6′-三異丙基聯(lián)苯(0.17g，0.40mmol)。使用氬氣將反應(yīng)混合物脫氣10min，之后加入Pd(dppf)Cl₂與CH₂Cl₂的絡(luò)合物(0.16g，0.20mmol)，接著加入叔丁醇鈉(0.77g，7.98mmol)。將反應(yīng)燒瓶放入在100℃下預(yù)熱的油浴中，并攪拌過夜。將混合物冷卻至室溫。向該混合物中加入水和EtOAc。分層，并且水層用EtOAc萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥，并濃縮。將粗產(chǎn)物在硅膠柱上純化，用50％至100％EtOAc/己烷洗脫，然后用EtOAc洗脫，然后用5％MeOH/EtOAc洗脫，得到1.3g(66％收率)的N6-環(huán)己基-9-甲基-N2-(4-(三異丙基甲硅烷氧基)苯基)-9H-嘌呤-2,6-二胺。

步驟3：4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-甲基-9H-嘌呤-2-基氨基)苯酚的制備

將N6-環(huán)己基-9-甲基-N2-(4-(三異丙基甲硅烷氧基)苯基)-9H-嘌呤-2,6-二胺(1.3g，2.63mmol)溶解于35ml THF，并加入2.7ml TBAF(1.0M在THF中，2.7mmol)。將混合物攪拌45min。蒸發(fā)溶劑，并將混合物在硅膠柱上純化，用60％至100％EtOAc/己烷洗脫，然后用EtOAc洗脫，然后用10％MeOH的EtOAc溶液洗脫，得到0.85g(96％收率)的4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-甲基-9H-嘌呤-2-基氨基)苯酚。

實施例8：7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-甲基-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺鹽酸鹽的制備

步驟1：7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-甲基-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)庚酸乙酯的制備

將4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-甲基-9H-嘌呤-2-基氨基)苯酚(500mg，1.48mmol)溶解于4ml二甲基甲酰胺。加入7-溴庚酸乙酯(701mg，2.96mmol)和碳酸鉀(613mg，4.43mmol)。將混合物在70℃下加熱過夜。加入另外的7-溴庚酸乙酯(350mg，1.48mmol)，并加熱1天。加入另外的7-溴庚酸乙酯(175mg，0.74mmol)和碳酸鉀(204mg，1.48mmol)，并再加熱兩天。將該混合物冷卻至室溫。向該混合物中加入水和EtOAc。分層，并且水層用EtOAc萃取。合并的有機(jī)層用Na₂SO₄干燥，并濃縮。將殘留物置于空氣流中以吹走DMF。然后將其在硅膠柱上純化，用EtOAc洗脫，然后用5％MeOH/EtOAc洗脫，得到7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-甲基-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)庚酸乙酯(300mg，48％收率)。

步驟2：7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-甲基-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)庚酸的制備

向7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-甲基-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)庚酸乙酯(350mg，0.708mmol)中加入3ml甲醇和0.5ml水。向該混懸液中加入氫氧化鋰一水合物(74mg，1.76mmol)。將反應(yīng)在室溫下攪拌，直到LC/MS顯示反應(yīng)完全。加入乙酸乙酯和水。將水層用1N HCl酸化。分層，并且水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用Na₂SO₄干燥，并濃縮。粗產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟3：7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-甲基-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)-N-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)庚酰胺的制備

將7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-甲基-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)庚酸(140mg，0.30mmol)溶解于1ml二甲基甲酰胺。加入1-羥基苯并三唑一水合物(60mg，0.39mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(75mg，0.39mmol)。5min后，加入三乙胺(122mg，1.2mmol)和O-(四氫-2H-吡喃-2-基)羥胺(46mg，0.39mmol)，并將混合物攪拌過夜。加入另外相同量的試劑，并將反應(yīng)再攪拌1天。向該混合物中加入水和乙酸乙酯。分層，并且水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用Na₂SO₄干燥，并濃縮。快速色譜法，用1:1EtOAc/hex至EtOAC梯度洗脫，然后用EtOAc洗脫，然后用10％MeOH的EtOAc溶液洗脫，得到7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-甲基-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)-N-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)庚酰胺(170mg，100％)。

步驟4：7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-甲基-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺鹽酸鹽的制備

將7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-甲基-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)-N-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)庚酰胺(285mg，0.50mmol)溶解于3ml二氯甲烷。加入3ml 4N HCl的二氧六環(huán)溶液，并將混合物在室溫下攪拌4小時。加入醚，濾出白色沉淀物，并用醚洗滌，得到7-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-甲基-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺，為其鹽酸鹽形式。質(zhì)譜(m/z):482.3(M+1)。

實施例9：6-溴己酸甲酯、6-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-甲基-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)-N-羥基己酰胺鹽酸鹽的制備

使用合適的起始原料，根據(jù)上文在實施例7和8中描述的程序合成。質(zhì)譜(m/z):468.2(M+1)。

實施例10：2-氯-N-苯基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺的制備

根據(jù)上文在實施例1的步驟1和步驟2中描述的程序合成。

實施例11：N-羥基-7-(4-(6-(苯基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)庚酰胺鹽酸鹽的制備

使用中間體XX根據(jù)上文在實施例2的替代步驟1、步驟2、步驟3和步驟4中描述的程序合成。質(zhì)譜(m/z):462.2(M+1)。

實施例12：2-氯-6-異丙氧基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤的制備

將二異丙醇(44mg，0.73mmol)溶解于5ml干燥THF。向該溶液加入氫化鈉(60％重量，29.3mg，0.73mmol)，并將混合物在室溫下攪拌30min，此時加入二氯嘌呤(100mg，0.37mmol)。將混合物在密封管中在65℃下加熱過夜。柱純化得到期望產(chǎn)物。

實施例13：N-羥基-7-(4-(6-異丙氧基-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)庚酰胺鹽酸鹽的制備

使用中間體XX根據(jù)上文在實施例2的替代步驟1、步驟2、步驟3和步驟4中描述 的程序合成。質(zhì)譜(m/z):429.2(M+1)。

實施例14：2-(3-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)丙基氨基)-N-羥基乙酰胺鹽酸鹽的制備

步驟1：2-(3-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)丙基)異吲哚啉-1,3-二酮的制備

將4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯酚(240mg，0.59mmol)溶解于3ml二甲基甲酰胺中。加入碳酸鉀(243mg，1.76mmol)和N-(3-溴丙基)鄰苯二甲酰亞胺(316mg，1.2mmol)。將混合物在60℃下加熱。加入另外的試劑，直到LC/MS顯示反應(yīng)完全。加入水和乙酸乙酯。分層，并且水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用Na₂SO₄干燥，并濃縮。進(jìn)行快速色譜法，得到期望產(chǎn)物2-(3-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)丙基)-異吲哚啉-1,3-二酮(87mg，25％)。

步驟2：N2-(4-(3-氨基丙氧基)苯基)-N6-環(huán)己基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2,6-二胺的制備

將2-(3-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)丙基)異吲哚啉-1,3-二酮(260mg，0.44mmol)溶解于5ml乙醇中。加入一水合肼(44mg，0.88mmol)。將混合物在60℃下攪拌幾小時。除去溶劑，并進(jìn)行快速色譜法，得到期望產(chǎn)物N2-(4-(3-氨基丙氧基)苯基)-N6-環(huán)己基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2,6-二胺(130mg，64％)。

步驟3：2-(3-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)丙基氨基)乙酸甲酯的制備

將4N2-(4-(3-氨基丙氧基)苯基)-N6-環(huán)己基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2,6-二胺(20mg，0.043mmol)溶解于1ml二甲基甲酰胺中。加入三乙胺(6.5mg，0.64mmol)和氯乙酸甲酯(7mg，0.64mmol)。將混合物在70℃下加熱兩小時。加入水和乙酸乙酯。分層，并且水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用Na₂SO₄干燥，并濃縮。進(jìn)行快速色譜法，得到期望產(chǎn)物2-(3-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)丙基氨基)乙酸甲酯(9mg，39％)。

步驟4：2-(叔丁氧基羰基(3-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)丙基)氨基)乙酸甲酯的制備

將2-(3-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)丙基氨基)乙酸甲酯(9mg,0.017mmol)溶解于0.5ml二氯甲烷中。然后加入在1ml二氯甲烷中的Boc酸酐(4.5mg，0.021mmol)。將混合物攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑，并通過柱色譜法純化產(chǎn)物，得到期望產(chǎn)物。

步驟5：2-(叔丁氧基羰基(3-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)丙基)氨基)乙酸的制備

向2-(叔丁氧基羰基(3-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)丙基)氨基)乙酸甲酯(80mg，0.126mmol)加入3ml甲醇和0.8ml水。向該混懸液中加入氫氧化鋰一水合物(11mg，0.25mmol)。將反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。加入乙酸乙酯和 水。水層用1N HCl酸化。分層，并且水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用Na₂SO₄干燥，并濃縮。粗產(chǎn)物(41mg)未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟6：制備3-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)丙基(2-氧代-2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯

將2-(叔丁氧羰基(3-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)丙基)氨基)乙酸(41mg，0.066mmol)溶解于1ml二甲基甲酰胺中。加入1-羥基苯并三唑一水合物(13mg，0.086mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(19mg，0.099mmol)。5min后，加入三乙胺(27mg，0.264mmol)和O-(四氫-2H-吡喃-2-基)羥胺(9mg，0.073mmol)，并將混合物攪拌過夜。向該混合物中加入水和乙酸乙酯。分層，并且水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用Na₂SO₄干燥并濃縮。進(jìn)行快速色譜法，得到3-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)丙基(2-氧代-2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯(30mg，63％)。

步驟7：2-(3-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)丙基氨基)-N-羥基乙酰胺鹽酸鹽的制備

將3-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)丙基(2-氧代-2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯(40mg，0.055mmol)溶解于1ml二氯甲烷中。然后加入0.15ml 4N HCl的二氧六環(huán)溶液，并將混合物在室溫下攪拌3小時。加入醚，濾出白色沉淀物，并用醚洗滌，得到2-(3-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯氧基)丙基氨基)-N-羥基乙酰胺鹽酸鹽。質(zhì)譜(m/z):455.3(M+1)。

實施例15：2-(4-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)哌嗪-1-基)-N-羥基乙酰胺 鹽酸鹽的制備

步驟1：N6-環(huán)己基-N2-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2,6-二胺的制備

向2-氯-N-環(huán)己基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺(0.50g，1.5mmol)在7.5ml甲苯中的溶液加入4-(哌嗪-1-基)苯胺(317mg，1.8mmol)和2-二-叔丁基膦-2′,4′,6′-三異丙基聯(lián)苯(63mg，0.15mmol)。使用氬氣將反應(yīng)混合物脫氣10min，之后加入Pd(dppf)Cl₂與CH₂Cl₂的絡(luò)合物(61mg，0.075mmol)，接著加入叔丁醇鈉(286mg，3.0mmol)。將反應(yīng)燒瓶放入在100℃下預(yù)熱的油浴中，并攪拌過夜。將混合物冷卻至室溫。向該混合物中加入水和EtOAc。分層，并且水層用EtOAc萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥，并濃縮。將粗產(chǎn)物在硅膠柱上純化，用EtOAc洗脫，然后用10％MeOH的EtOAc溶液洗脫，然后用20％MeOH的EtOAc溶液洗脫，得到480mg(68％收率)的N6-環(huán)己基-N2-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2,6-二胺。

步驟2：2-(4-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙酸甲酯的制備

向N6-環(huán)己基-N2-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2,6-二胺(87.5mg，0.184mmol)在1.5ml二甲基甲酰胺中的溶液加入三乙胺(74mg，0.74mmol)，并加入氯乙酸甲酯(22mg，0.20mmol)。將混合物在40℃下加熱過夜。加入水和乙酸乙酯。分層，并且水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用Na₂SO₄干燥，并濃縮。進(jìn)行快速色譜法，得到期望產(chǎn)物2-(4-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙酸甲酯(80mg，80％)。

步驟3：2-(4-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙酸的制備

向2-(4-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙酸甲酯(80mg，0.15mmol)加入0.7ml甲醇和0.2ml水。向該混合物中加入氫氧化鋰一水合物(12.3mg，0.29mmol)。將反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。加入乙酸乙酯和水。水層用1N HCl酸化。分層，并且水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用Na₂SO₄干燥，并濃縮。粗產(chǎn)物(70mg)未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟4：2-(4-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)乙酰胺的制備

將2-(4-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙酸(70mg，0.131mmol)溶解于1ml二甲基甲酰胺中。加入1-羥基苯并三唑一水合物(26mg，0.17mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(38mg，0.20mmol)。5min后，加入三乙胺(53mg，0.524mmol)和O-(四氫-2H-吡喃-2-基)羥胺(17mg，0.14mmol)，并將混合物攪拌3小時。向該混合物中加入水和乙酸乙酯。分層，并且水層用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用Na₂SO₄干燥，并濃縮。進(jìn)行快速色譜法，得到2-(4-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)乙酰胺(6mg，7％收率)。

步驟5：2-(4-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)哌嗪-1-基)-N-羥基乙酰胺鹽酸鹽的制備

將2-(4-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)乙酰胺(6mg，0.01mmol)溶解于0.2ml甲醇中。然后加入0.2ml 4N HCl的二氧六環(huán)溶液，并將混合物在室溫下攪拌2小時。蒸發(fā)溶劑，并將混合物用醚洗滌，得到2-(4-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)哌嗪-1-基)-N-羥基乙酰胺鹽酸鹽。質(zhì)譜(m/z):466.2(M+1)。

實施例16：4-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)-N-羥基哌嗪-1-甲酰胺鹽酸鹽的制備

步驟1：4-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)-N-羥基哌嗪-1-甲酰胺的制備

向N6-環(huán)己基-N2-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2,6-二胺(60mg，0.13mmol)在1ml四氫呋喃中的溶液加入羥基氨基甲酸苯酯(39mg，0.25mmol)。將混合物在60℃下加熱過夜。蒸發(fā)溶劑。進(jìn)行快速色譜法，得到期望產(chǎn)物4-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)-N-羥基哌嗪-1-甲酰胺(22mg，32％收率)。

步驟2：4-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)-N-羥基哌嗪-1-甲酰胺鹽酸鹽的制備

將4-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)-N-羥基哌嗪-1-甲酰胺(22mg，0.041mmol)溶解于0.165ml甲醇中。然后加入0.165ml 4N HCl的二氧六環(huán)溶液，并將混合物在室溫下攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑。加入醚，并將沉淀物用醚洗滌，得到4-(4-(6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基氨基)苯基)-N-羥基哌嗪-1-甲酰胺鹽酸鹽。質(zhì)譜(m/z):452.2(M+1)。

實施例17：7-(4-((6-(叔丁基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

步驟1：N-(叔丁基)-2-氯-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺的制備

將2,6-二氯-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤(2.0g，7.3mol)和叔丁胺(0.58g，7.9mmol)在丁醇(10mL)和TEA(1.5g，14.6mmol)中的混合物加熱至60℃，并攪拌3小時。然后將混合物倒入水中并用EtOAc萃取。干燥有機(jī)層并濃縮。殘留物通過柱純化，得到油狀物(1.2g，53％)。

步驟2：7-(4-((6-(叔丁基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯的制備

向N-(叔丁基)-2-氯-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺(1.0g，3.24mmol)在二氧六環(huán)(10mL)中的溶液加入7-(4-氨基苯氧基)庚酸甲酯(類似于實施例2；步驟1替代程序)(0.9g，3.56mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(Xantphos)(188mg，0.324mmol)、Cs₂CO₃(1.58g，4.86mmol)和Pd(OAc)₂(72.7mg，0.324mol)。使用氬氣將混合物脫氣10min。將反應(yīng)燒瓶放入在80℃下預(yù)熱的油浴中并攪拌過夜。將混合物冷卻至室溫，用DCM萃取，并用飽和NH₄Cl水溶液洗滌。用柱色譜法純化得到7-(4-((6-(叔丁基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯，為褐色固體(1.2g，70％)。

步驟3：7-(4-((6-(叔丁基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸的制備

在室溫下向7-(4-((6-(叔丁基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(0.6g，1.17mmol)在THF(10mL)和水(2mL)中的溶液加入氫氧化鋰一水合物(200mg，4.76mmol)。將混合物攪拌4小時。加入EtOAc，并用稀HCl洗滌。干燥有機(jī)層并濃縮，得到粗產(chǎn)物7-(4-((6-(叔丁基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸(0.50g)，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟4：7-(4-((6-(叔丁基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺的制備

在室溫下向7-(4-((6-(叔丁基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸(0.5g)和O-(四氫-吡喃-2-基)-羥胺(137mg，1.17mmol)在DMF中的溶液加入TEA(297mg，2.94mmol)和HATU(0.56g，1.47mol)，并攪拌過夜。向該混合物中加入水和EtOAc。將水層萃取兩次；干燥有機(jī)層，濃縮，并通過柱色譜法純化，得到7-(4-((6-(叔丁基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺(0.41g)，為固體。

步驟5：7-(4-((6-(叔丁基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

向7-(4-((6-(叔丁基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺(0.4g)在DCM(10mL)中的溶液加入HCl/二氧六環(huán)(10mL，4mol/L)。將混合物在室溫下攪拌4小時。加入MTBE，并攪拌30min。過濾混懸液，干燥濾餅，并通過制備型HPLC進(jìn)行純化，得到7-(4-((6-(叔丁基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺(0.13g)。質(zhì)譜(m/z):442.2(M+1)。

實施例18：7-(4-((7-(環(huán)己基氨基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚 酰胺的制備

步驟1：5,7-二氯-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶的制備

根據(jù)上文實施例1的步驟1中描述的程序進(jìn)行合成。通過柱色譜法純化得到5,7-二氯-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶，為灰色固體(0.8g，55％)。

步驟2：5-氯-N-環(huán)己基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-胺的制備

根據(jù)上文實施例1的步驟2中描述的程序進(jìn)行合成。通過柱色譜法純化得到5-氯-N-環(huán)己基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-胺，為油狀物(0.8g，65％)。

步驟3：7-(4-((7-(環(huán)己基氨基)-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯的制備

根據(jù)上文實施例17的步驟2中描述的程序進(jìn)行合成。通過柱色譜法純化得到7-(4-((7-(環(huán)己基氨基)-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(0.6g)。

步驟4：7-(4-((7-(環(huán)己基氨基)-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基)氨基)苯氧基)庚酸的制備

根據(jù)上文實施例17的步驟3中描述的程序進(jìn)行合成。得出7-(4-((7-(環(huán)己基氨基)-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基)氨基)苯氧基)庚酸，為油狀物(0.4g，粗產(chǎn)物)。

步驟5：7-(4-((7-(環(huán)己基氨基)-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺的制備

根據(jù)上文實施例17的步驟4中描述的程序進(jìn)行合成。通過柱色譜法純化得到7-(4-((7-(環(huán)己基氨基)-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺，為油狀物(0.3g，65％)。

步驟6：7-(4-((7-(環(huán)己基氨基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

根據(jù)上文實施例17的步驟5中描述的程序進(jìn)行合成。通過制備型HPLC純化得到7-(4-((7-(環(huán)己基氨基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺，為油狀物(0.3g，64.7％)。質(zhì)譜(m/z):467.2(M+1)。

實施例19：7-((4-氨基苯基)硫代)庚酸甲酯的制備

步驟1：(4-巰基苯基)氨基甲酸叔丁基酯的制備

在0-5℃向4-氨基苯硫酚(5.0g，40mmol)和TEA(8.08g，80mmol)在MeOH(50mL)中的溶液逐份加入Boc₂O(9.6g，1.1eq.)。加入后，將混合物在室溫下攪拌2小時。將混合物倒入水中，用MTBE萃取，干燥，濃縮，并通過柱色譜法純化，得到(4-巰基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(6.0g，67％)。

步驟2：7-((4-((叔丁氧羰基)氨基)苯基)硫代)庚酸甲酯的制備

將(4-巰基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(4.5g，20mol)、7-溴-庚酸甲酯(4.4g，21mmol)和K₂CO₃(5.5g，40mmol)的混合物在80-90℃下加熱并攪拌過夜。將混合物冷卻，濃縮，將殘留物溶解于MTBE中，用鹽水洗滌，干燥，濃縮，并通過柱色譜法純化，得到7-((4-((叔丁氧羰基)氨基)苯基)硫代)庚酸甲酯，為白色固體(3.1g，41％)。

步驟3：7-((4-氨基苯基)硫代)庚酸甲酯的制備

在0-5℃下向7-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯基)硫代)庚酸酯(3.0g，8.17mmol)在DCM(30mL)中的溶液滴加TFA(6mL)。將混合物在室溫下攪拌4小時并倒入到NaHCO₃水溶液中?；旌衔镉肊tOAc萃取，干燥并濃縮，得到7-((4-氨基苯基)硫代)庚酸甲酯，為褐色固體(1.6g，73.4％)，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

實施例20：7-((4-((6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)硫代)-N-羥基庚酰胺的制備

步驟1：7-((4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)硫代)庚酸甲酯的制備

向7-((4-氨基苯基)硫代)庚酸甲酯(1.0g，3.74mmol)在二氧六環(huán)(10mL)中的溶液加入2-氯-N-環(huán)己基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺(1.25g，3.74mmol)、Xantphos(216mg，0.374mmol)、Cs₂CO₃(1.84g，5.6mmol)和Pd(OAc)₂(84g，0.374mol)。使用氬氣將混合物脫氣10min。將反應(yīng)燒瓶放入到在80℃下預(yù)熱的油浴中，并攪拌過夜。將混合物冷卻 至室溫，用DCM萃取，并用飽和NH₄Cl水溶液洗滌，將有機(jī)層干燥，濃縮，并純化，得到褐色固體(0.6g，27％)。

步驟2：7-((4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)硫代)庚酸的制備

根據(jù)上文實施例17的步驟3中描述的程序進(jìn)行合成。粗產(chǎn)物7-((4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)硫代)庚酸未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用(0.4g)。

步驟3：7-((4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)硫代)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺的制備

根據(jù)上文實施例17的步驟4中描述的程序進(jìn)行合成。柱色譜法純化得到7-((4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)硫代)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺(0.32g)。

步驟4：7-((4-((6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)硫代)-N-羥基庚酰胺的制備

根據(jù)上文實施例17的步驟5中描述的程序進(jìn)行合成。通過制備型HPLC純化得打7-((4-((6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)硫代)-N-羥基庚酰胺(0.10g)。質(zhì)譜(m/z):484.1(M+1)。

實施例21：7-((4-((6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)磺?；?-N-羥基庚酰胺的制備

步驟1：7-((4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)磺酰 基)庚酸甲酯的制備

在0-5℃下向7-((4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)硫代)庚酸甲酯(0.59g)在DCM(20mL)中的溶液加入mCPBA(0.42g)，將反應(yīng)緩慢加溫至室溫，并攪拌過夜。將混合物依次用NaHSO₃水溶液和Na₂CO₃水溶液洗滌。干燥有機(jī)層并濃縮，得到7-((4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)磺?；?庚酸甲酯(0.60g)，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟2：7-((4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)磺酰基)庚酸的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟3中描述的程序進(jìn)行合成。粗產(chǎn)物7-((4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)磺?；?庚酸(0.38g)未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟3：7-((4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)磺酰基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟4中描述的程序進(jìn)行合成。柱色譜法純化得到7-((4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)磺?；?-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺(0.41g)。

步驟4：7-((4-((6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)磺?；?-N-羥基庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟5中描述的程序進(jìn)行合成。通過制備型HPLC純化得到7-((4-((6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)磺?；?-N-羥基庚酰胺，為白色固體(0.12g)。質(zhì)譜(m/z):516.2(M+1)。

實施例22：8-(4-氨基苯基)辛酸甲酯的制備

步驟1：(E)-8-(4-硝基苯基)辛-7-烯酸甲酯的制備

向辛-7-烯酸甲酯(1.8g，11.53mmol)在二氧六環(huán)(10mL)中的溶液加入1-溴-4-硝基-苯(1.43g，5.77mmol)、Xantphos(1.32g，2.3mmol)、KOAc(1.692g，17.3mmol)和Pd(OAc)₂(258.3mg，1.15mol)。使用氬氣將混合物脫氣5min，并將反應(yīng)燒瓶放入在80℃下預(yù)熱的油浴中，并攪拌過夜。將混合物冷卻至室溫，用水淬滅，并用DCM萃取。合并的萃取物用飽和NH₄Cl水溶液洗滌，干燥，濃縮，并將殘留物通過柱色譜法純化，得到8-(4-氨基苯基)辛酸甲酯，為油狀物(1.1g，68％)。

步驟2：8-(4-氨基苯基)辛酸甲酯的制備

在室溫下將8-(4-氨基苯基)辛酸甲酯(1.1g，3.97mmol)和Pd/C(200mg)在MeOH(10mL)中的混合物在H₂氣氛下攪拌過夜。然后過濾混懸液，濃縮，并將殘留物通過柱色譜法純化，得到8-(4-氨基苯基)辛酸甲酯(0.4g，40％)，為無色油狀物。

實施例23：8-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)-N-羥基辛酰胺的制備

步驟1：8-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)辛酸甲酯的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟2中描述的程序進(jìn)行合成。柱色譜法純化得到8-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)辛酸甲酯，為褐色固體(0.4g，37％)。

步驟2：8-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)辛酸的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟3中描述的程序進(jìn)行合成。粗產(chǎn)物8-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)辛酸(0.6g)未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟3：8-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)辛酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟4中描述的程序進(jìn)行合成。柱色譜法純化得到8-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)辛酰胺(0.35g)。

步驟4：8-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)-N-羥基辛酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟5中描述的程序進(jìn)行合成。通過制備型HPLC純化得到8-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯基)-N-羥基辛酰胺，為白色固體(0.15g)。質(zhì)譜(m/z):466.3(M+1)。

實施例24：7-(4-((9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

步驟1：2-氯-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤的制備

根據(jù)上文在實施例1的步驟1中描述的程序進(jìn)行合成。柱色譜法純化得到灰色固體(1.0g，42％)。

步驟2：7-(4-((9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟2中描述的程序進(jìn)行合成。柱色譜法純化得到褐色固體(0.8g，70％)。

步驟3：7-(4-((9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟3中描述的程序進(jìn)行合成。粗產(chǎn)物7-(4-((9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用(0.6g)。

步驟4：7-(4-((9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟4中描述的程序進(jìn)行合成。粗產(chǎn)物通過柱色譜法純化，得到7-(4-((9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧 基)庚酰胺(0.3g)。

步驟5：7-(4-((9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟5中描述的程序進(jìn)行合成，并通過制備型HPLC進(jìn)行純化，得到7-(4-((9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺(0.17g)。質(zhì)譜(m/z):371.1(M+1)。

實施例25：7-(4-((6-(環(huán)己基(甲基)氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

步驟1：2-氯-N-環(huán)己基-N-甲基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺的制備

將2-氯-N-環(huán)己基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺(2.0g，6mmol)、K₂CO₃(1.66g，12mmol)和MeI(1.79g，12.6mol)在乙腈(20mL)中的混合物在攪拌下加熱至60℃持續(xù)6小時。過濾得到的混懸液，并濃縮濾液，得到2-氯-N-環(huán)己基-N-甲基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺(1.2g)，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟2：7-(4-((6-(環(huán)己基(甲基)氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟2中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到7-(4-((6-(環(huán)己基(甲基)氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(1.2g，74％)。

步驟3：7-(4-((6-(環(huán)己基(甲基)氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟3中描述的程序進(jìn)行合成，得到7-(4-((6-(環(huán)己基(甲基)氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟4：

根據(jù)上文在實施例17的步驟4中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到7-(4-((6-(環(huán)己基(甲基)氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺(0.35g)。

步驟5：7-(4-((6-(環(huán)己基(甲基)氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟5中描述的程序進(jìn)行合成，并通過制備型HPLC進(jìn)行純化，得到7-(4-((6-(環(huán)己基(甲基)氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺(33mg)。質(zhì)譜(m/z):(M+1)。

實施例26：N-羥基-7-(4-((6-((1-甲基哌啶-4-基)氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酰胺的制備

步驟1：2-氯-N-(1-甲基哌啶-4-基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺的制備

將2,6-二氯-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤(1.0g，3.7mol)、1-甲基-哌啶-4-基胺(0.42g，3.7mmol)在丁醇(10mL)和TEA(0.75g，mmol)中的混合物在攪拌下加熱至40℃持續(xù)3小時。將混合物冷卻并倒入到水中，用EA萃取，并濃縮，得到2-氯-N-(1-甲基哌啶-4-基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺(0.89g)，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟2：7-(4-((6-((1-甲基哌啶-4-基)氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯的制備

根據(jù)上文在實施例21的步驟1中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到7-(4-((6-((1-甲基哌啶-4-基)氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(0.37g)，為褐色固體。

步驟3：7-(4-((6-((1-甲基哌啶-4-基)氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸的制備

根據(jù)上文在實施例18的步驟5中描述的程序進(jìn)行合成，得到7-(4-((6-((1-甲基哌啶-4-基)氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸(0.58g，粗產(chǎn)物)，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟4：7-(4-((6-((1-甲基哌啶-4-基)氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例18的步驟6中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到7-(4-((6-((1-甲基哌啶-4-基)氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺(0.38g)。

步驟5：N-羥基-7-(4-((6-((1-甲基哌啶-4-基)氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例18的步驟7中描述的程序進(jìn)行合成，并通過制備型HPLC進(jìn)行純化，得到N-羥基-7-(4-((6-((1-甲基哌啶-4-基)氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酰胺(27mg)，為固體。質(zhì)譜(m/z):482.2(M+1)。

實施例27：N-羥基-7-(4-((6-苯基-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酰胺的制備

步驟1：2-氯-6-苯基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤的制備

使用氬氣將2,6-二氯-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤(2.73g，10mmol)、苯基硼酸(1.22g，10mmol)、K₂CO₃(4.14g，30mmol)和Pd(PPh)₄(273mg)在甲苯(50mL)中的混合物脫氣10min。將反應(yīng)燒瓶放入在100℃下預(yù)熱的油浴中，并攪拌過夜。將混合物冷卻至室溫，加入水，并且得到的混合物用EtOAc萃取。將合并的萃取物用鹽水洗滌，干燥，濃縮，并通過柱色譜法純化，得到2-氯-6-苯基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤，為褐色固體(2.0g，64％)。

步驟2：7-(4-((6-苯基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟2中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到7-(4-((6-苯基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸酯(1.5g)。

步驟3：7-(4-((6-苯基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟3中描述的程序進(jìn)行合成，得到7-(4-((6-苯基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸(0.57g)，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟4：7-(4-((6-苯基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟4中描述的程序進(jìn)行合成，其經(jīng)柱色譜法純化，得到7-(4-((6-苯基-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺(0.35g)。

步驟5：N-羥基-7-(4-((6-苯基-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟5中描述的程序進(jìn)行合成，并通過制備型HPLC進(jìn)行純化，得到N-羥基-7-(4-((6-苯基-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酰胺(83mg)。質(zhì)譜(m/z):447.1(M+1)。

實施例28：6-(4-氨基苯甲酰氨基)己酸甲酯的制備

步驟1：6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯甲酰氨基)己酸甲酯的制備

在室溫下向4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯甲酸(0.5g，2.1mmol)和6-氨基-己酸甲酯·HCl(0.46g，2.5mmol)在DMF(20ml)中的溶液加入TEA(0.848g，8.4mmol)和HATU(1.2g，3.2mol)。攪拌過夜后，加入水，并且混合物用EtOAc(2x50ml)萃取。將合并的有機(jī)層干 燥并濃縮，并將殘留物通過柱色譜法純化，得到6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯甲酰氨基)己酸甲酯(0.39g，54％)，為白色固體。

步驟2：6-(4-氨基苯甲酰氨基)己酸甲酯的制備

將6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯甲酰氨基)己酸甲酯(0.4g，1.1mmol)加入到HCl/二氧六環(huán)(4M，5mL)的溶液中，并在室溫下攪拌2小時。然后濃縮混合物。向殘留物中加入EtOAc和NaHCO₃水溶液。分層，并且水層用EtOAc萃取。干燥并濃縮有機(jī)萃取物，得到6-(4-氨基苯甲酰氨基)己酸甲酯，為褐色固體(0.30g)，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

實施例29：4-((6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)-N-(6-(羥基氨基)-6-氧代己基)苯甲酰胺的制備

步驟1：6-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯甲酰氨基)己酸甲酯的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟2中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化，得到6-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯甲酰氨基)己酸甲酯(0.49g)，為褐色固體。

步驟2：6-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯甲酰氨基)己酸的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟3中描述的程序進(jìn)行合成，得到6-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯甲酰氨基)己酸(0.38g)，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟3：4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)-N-(6-氧代-6-(((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)氨基)己基)苯甲酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟4中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)-N-(6-氧代-6-(((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)氨基)己基)苯甲酰胺(0.25g)。

步驟4：4-((6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)-N-(6-(羥基氨基)-6-氧代己基)苯甲酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟5中描述的程序進(jìn)行合成，并使用制備型HPLC進(jìn)行純化，得到4-((6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)-N-(6-(羥基氨基)-6-氧代己基)苯甲酰胺(110mg)。質(zhì)譜(m/z):481.2(M+1)。

實施例30：5-(4-氨基苯甲酰氨基)戊酸甲酯的制備

步驟1：5-(4-((叔丁氧羰基)氨基)苯甲酰氨基)戊酸甲酯的制備

根據(jù)上文在實施例28的步驟1中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到5-(4-((叔丁氧羰基)氨基)苯甲酰氨基)戊酸甲酯，為白色固體(0.35g，57％)。

步驟2：5-(4-氨基苯甲酰氨基)戊酸甲酯的制備

根據(jù)上文在實施例28的步驟2中描述的程序進(jìn)行合成，并未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用(0.23g)。

實施例31：4-((6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)-N-(5-(羥基氨基)-5-氧代戊基)苯甲酰胺的制備

步驟1：5-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯甲酰氨基)戊酸甲酯的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟2中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到5-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯甲酰氨基)戊酸甲酯，為褐色固體(0.45g，82％)。

步驟2：5-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯甲酰氨基)戊酸的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟3中描述的程序進(jìn)行合成，得到5-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯甲酰氨基)戊酸(0.34g)，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟3：

根據(jù)上文在實施例17的步驟4中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到4-((6-(環(huán)己基氨基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)-N-(6-氧代-6-(((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)氨基)己基)苯甲酰胺(0.25g)。

步驟4：4-((6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)-N-(5-(羥基氨基)-5-氧代戊基)苯甲酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟5中描述的程序進(jìn)行合成，并使用制備型HPLC進(jìn)行純化，得到4-((6-(環(huán)己基氨基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)-N-(5-(羥基氨基)-5-氧代戊基)苯甲酰胺(24mg)。質(zhì)譜(m/z):467.2(M+1)。

實施例32：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

步驟1：4,6-二氯-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶的制備

將4,6-二氯-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶(1.0g，5.3mmol)、TsOH(91mg，0.53mmol)和DHP(134mg，15.9mol)在THF(20mL)中的混合物加熱至回流，并攪拌過夜。然后將混合物濃縮，并通過柱色譜法純化，得到4,6-二氯-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶，為灰色固體(0.78g，55％)。

步驟2：6-氯-N-環(huán)己基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺的制備

將4,6-二氯-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶1(1.0g，3.69mol)和環(huán)己胺(5mL)在丁醇(10mL)中的混合物加熱至100℃，并攪拌過夜。將混合物冷卻，倒入水中，并用EA萃取。柱色譜法純化得到6-氯-N-環(huán)己基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺，為油狀物(0.8g，64.7％)。

步驟3：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯的制備

向6-氯-N-環(huán)己基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺(0.6g，1.8mmol)在二氧六環(huán)(10mL)中的溶液加入7-(4-氨基苯氧基)庚酸甲酯(0.5g，1.98mmol)、Xantphos(104mg，0.18mmol)、Cs₂CO₃(880mg，2.7mmol)和Pd(OAc)₂(40mg，0.18mol)。使用氬氣將混合物脫氣10min。將反應(yīng)燒瓶浸沒在80℃下預(yù)熱的油浴中，并攪拌過夜。將混合物冷卻至室溫，用水淬滅，并用DCM萃取。合并的有機(jī)層用飽和NH₄Cl水溶液洗滌，干燥，濃縮，并通過柱色譜法純化得到7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯，為褐色固體(0.51g，50％)。

步驟4：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)氨基)苯氧基)庚酸的制備

根據(jù)上文在實施例18的步驟5中描述的程序進(jìn)行合成，得到7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)氨基)苯氧基)庚酸，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟5：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例18的步驟6中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)氨基)苯氧 基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺(0.27g)。

步驟6：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例18的步驟6中描述的程序進(jìn)行合成，并通過制備型HPLC純化，得到7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺(25mg)。質(zhì)譜(m/z):467.2(M+1)。

實施例33：7-(4-((7-(環(huán)己基氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

步驟1：5-氯-N-環(huán)己基噻唑并[4,5-d]嘧啶-7-胺的制備

根據(jù)上文在實施例1的步驟1中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到5-氯-N-環(huán)己基噻唑并[4,5-d]嘧啶-7-胺，為油狀物(0.37g 78％)。

步驟2：7-(4-((7-(環(huán)己基氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟2中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化(0.49g，59％)。

步驟3：7-(4-((7-(環(huán)己基氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)氨基)苯氧基)庚酸的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟3中描述的程序進(jìn)行合成，得到7-(4-((7-(環(huán)己基氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)氨基)苯氧基)庚酸，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟4：7-(4-((7-(環(huán)己基氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟4中描述的程序進(jìn)行合成，得到7-(4-((7-(環(huán)己基氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺(0.31g)。

步驟5：7-(4-((7-(環(huán)己基氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟5中描述的程序進(jìn)行合成，并通過制備型HPLC純化，得到7-(4-((7-(環(huán)己基氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺(85mg)。質(zhì)譜(m/z):485.2(M+1)。

實施例34：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

步驟1：2-氯-N-環(huán)己基-7-甲苯磺?；?7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺的制備

根據(jù)上文在實施例1的步驟1中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到2-氯-N-環(huán)己基-7-甲苯磺?；?7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.51g)。

步驟2：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7-甲苯磺?；?7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟2中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸酯，為褐色固體(0.58g，70％)。

步驟3：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7-甲苯磺?；?7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟3中描述的程序進(jìn)行合成，并未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟4：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸的制備

將7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7-甲苯磺?；?7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸(0.70g)和NaOH(80mg)在MeOH(20mL)中的混合物在攪拌下加熱至回流，并攪拌2小時。然后將混合物冷卻，濃縮，溶解于DCM/MeOH(10/1，20mL)中，并用稀HCl溶液 洗滌。干燥并濃縮有機(jī)層，得到7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟5：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟4中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺。

步驟6：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟5中描述的程序進(jìn)行合成，并通過制備型HPLC純化，得到7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺。質(zhì)譜(m/z):467.2(M+1)。

實施例35：7-(4-((6-芐基-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

步驟1：2,6-二氯-9-(4-甲氧基芐基)-9H-嘌呤的制備

將在DMF(50mL)中的2,6-二氯-9H-嘌呤(5.0g，26mmol)，對甲氧基芐基氯(4.42g，28.6mmol)和K₂CO₃(7.2g，52mmol)加熱至80℃，并攪拌4小時。將混合物冷卻，倒入水(100ml)中，并用EtOAc(3x50ml)萃取。將合并的萃取物干燥，過濾，濃縮，并將殘留物通過柱色譜法純化得到2,6-二氯-9-(4-甲氧基芐基)-9H-嘌呤，為白色固體(2g，21％)。

步驟2：6-芐基-2-氯-9-(4-甲氧基芐基)-9H-嘌呤的制備

使用氬氣將2,6-二氯-9-(4-甲氧基芐基)-9H-嘌呤(2.0g，6.5mmol)、芐基溴化鋅(9.8mL，1M于THF中)和Pd(PPh)₄(796mg)在THF(10mL)中的混合物脫氣10min。將反應(yīng)燒瓶放入在60℃下預(yù)熱的油浴中并攪拌3小時。將混合物冷卻至室溫，倒入水中，并用EtOAc(2x50ml)萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥并濃縮，并通過柱色譜法純化得到6-芐基-2-氯-9-(4-甲氧基芐基)-9H-嘌呤，為紅色油狀物(1.4g，58％)。

步驟3：7-(4-((6-芐基-9-(4-甲氧基芐基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯的制備

向6-芐基-2-氯-9-(4-甲氧基芐基)-9H-嘌呤(1.4g，3.85mmol)在二氧六環(huán)(10mL)中的溶液加入7-(4-氨基苯氧基)庚酸甲酯(類似于實施例2；步驟1替代程序)(1.06g，4.24mmol)、Xantphos(222mg，0.385mmol)、Cs₂CO₃(1.88g，5.78mmol)和Pd(OAc)₂(86g，0.385mol)。使用氬氣將混合物脫氣10min。將反應(yīng)燒瓶放入在100℃下預(yù)熱的油浴中，并攪拌過夜。將混合物冷卻至室溫，倒入到50ml水中，并用DCM(2x 50ml)萃取。將合并的萃取物用飽和NH₄Cl水溶液洗滌，干燥并濃縮。用柱色譜法純化得到7-(4-((6-芐基-9-(4-甲氧基芐基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯，為褐色固體(0.8g，36％)。

步驟4：7-(4-((6-芐基-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯的制備

將7-(4-((6-芐基-9-(4-甲氧基芐基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(0.5g)在TFA(10mL)中的溶液加熱至60℃持續(xù)4小時。將溶液冷卻至室溫，并濃縮，得到7-(4-((6-芐基-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(0.5g，粗產(chǎn)物)。

步驟5：7-(4-((6-芐基-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸的制備

在室溫下向7-(4-((6-芐基-9-(4-甲氧基芐基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(0.5g，粗產(chǎn)物)在THF(10mL)和水(2mL)中的溶液加入氫氧化鋰一水合物(200mg，4.76mmol)。攪拌4小時后，加入EtOAc(20ml)，并且該溶液用稀HCl溶液洗滌一次。干燥并濃縮有機(jī)層，得到粗產(chǎn)物7-(4-((6-芐基-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸(0.5g)。該粗產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟6：7-(4-((6-芐基-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺的制備

在室溫下向7-(4-((6-芐基-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸(152mg，1.3mmol)在DMF中的溶液加入TEA(0.33g，3.2mmol)和HATU(0.62g，1.6mol)。攪拌過夜后，加入水，并將得到的混合物用EtOAc(2x 20ml)萃取。干燥并濃縮有機(jī)層，并且粗產(chǎn)物通過柱色譜法純化，得到7-(4-((6-芐基-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺(0.4g)。

步驟7：7-{4-[(6-芐基-9H-嘌呤-2-基)氨基]苯氧基}-N-羥基庚酰胺的制備

在室溫下向溶解于DCM(10mL)中的7-(4-((6-芐基-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺(0.5g)溶液加入HCl/二氧六環(huán)(10mL，4mol/L)，并將混合物攪拌4小時。然后加入MTBE，并攪拌30min。過濾混懸液，干燥濾餅，并通過制備型HPLC純化，得到7-(4-((6-芐基-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺。質(zhì)譜(m/z):461.2(M+1)。

實施例36：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

步驟1：2,4-二氯-7-(4-甲氧基芐基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶的制備

將2,6-二氯-9H-嘌呤(5.0g，26mmol)、對甲氧基芐基氯(4.42g，28.6mmol)和K₂CO₃(7.2g，52mmol)在DMF(50mL)中的混合物加熱至80℃，并攪拌4小時。冷卻后，將混合物倒入水中，用EA萃取，并通過柱色譜法純化得到2,6-二氯-9-(4-甲氧基芐基)-9H-嘌呤，為白色固體(2g，21％)。

步驟2：2-氯-N-環(huán)己基-7-(4-甲氧基芐基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺的制備

根據(jù)上文在實施例XX中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到2-氯-N-環(huán)己基-9-(4-甲氧基芐基)-9H-嘌呤-6-胺(1.2g，49％)。

步驟3：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7-(4-甲氧基芐基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟2中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱純化得到7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7-(4-甲氧基芐基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸酯，為褐色固體(0.98g，53％)。

步驟4：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7-(4-甲氧基芐基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯的制備

將7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7-(4-甲氧基芐基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(0.4g，0.68mmol)和Pd/C(100mg)在MeOH(10mL)中的混合物在40℃、氫氣氣氛下攪拌過夜。過濾該混合物，并濃縮得到7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7-(4-甲氧基芐基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(0.30g)，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟5：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯的制備

將7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7-(4-甲氧基芐基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯(0.50g)在TFA(10mL)中的溶液加熱至60℃持續(xù)4小時，冷卻并濃縮，得到7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸酯，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟6：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟3中描述的程序進(jìn)行合成，并未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟7：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟4中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺(0.28g)。

步驟8：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟5中描述的程序進(jìn)行合成，并通過制備型HPLC純化，得到7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺(21mg)。質(zhì)譜(m/z):469.2(M+1)。

實施例37：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

步驟1：2-氯-N-環(huán)己基-7-甲苯磺?；?7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟1中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到2-氯-N-環(huán)己基-7-甲苯磺?；?7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.51g)。

步驟2：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7-甲苯磺?；?7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟2中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7-甲苯磺?；?7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸酯，為褐色固體(0.58g，70％)。

步驟3：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7-甲苯磺?；?7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟3中描述的程序進(jìn)行合成，未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟4：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸的制備

7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸(0.70g,)和NaOH(80mg)在MeOH(20mL)中的混合物在攪拌下加熱至回流并攪拌2小時。然后將混合物冷卻，濃縮，用DCM/MeOH(10/1，20mL)溶解，并用稀HCl溶液洗滌。干燥并濃縮有機(jī)層，得到7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)庚酸，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟5：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟4中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化得到7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺。

步驟6：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟5中描述的程序進(jìn)行合成，并通過制備型HPLC純化，得到7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺。質(zhì)譜(m/z):467.2(M+1)。

實施例38：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

步驟1：4,6-二氯-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶的制備

將4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(1.0g，5.29mmol)、TsOH(91mg，0.53mmol)和二氫吡喃(1.33g，15.87mol)在THF(20mL)中的混合物加熱至回流，并攪拌過夜。冷卻后，濃縮混合物，得到4,6-二氯-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(1.2g)，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟2：6-氯-N-環(huán)己基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟1中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化，提供了1.1g的6-氯-N-環(huán)己基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺。

步驟3：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟2中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化提供7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯，為褐色固體(0.80g，48％)。

步驟4：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯氧基)庚酸的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟3中描述的程序進(jìn)行合成，提供7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯氧基)庚酸，并未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟5：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟4中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化，提供7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺(0.28g)。

步驟6：7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟5中描述的程序進(jìn)行合成，并通過制備型HPLC進(jìn)行純化，提供7-(4-((4-(環(huán)己基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺(45mg)。質(zhì)譜(m/z):468.2(M+1)。

實施例39：7-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-7-甲基-7H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

步驟1：2,6-二氯-7-甲基-7H-嘌呤的制備

將2,6-二氯-7H-嘌呤(5.0g，26.7mmol)、K₂CO₃(5.52g，40mmol)和MeI(7.58g，53.4mmol)在乙腈(50mL)中的混合物加熱至40℃持續(xù)6小時。將反應(yīng)冷卻至室溫，過濾，并濃縮，提供區(qū)域異構(gòu)體產(chǎn)物的粗混合物，將其通過柱色譜法分離。分離期望的異構(gòu)體2,6-二氯-7-甲基-7H-嘌呤，為白色固體(1.2g，22％)。

步驟2：2-氯-N-環(huán)己基-7-甲基-7H-嘌呤-6-胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟1中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化提供2-氯-N-環(huán)己基-7-甲基-7H-嘌呤-6-胺(0.70g，50％)。

步驟3：7-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-7-甲基-7H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟2中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化，提供7-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-7-甲基-7H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯，為褐色固體(0.58g，66％)。

步驟4：7-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-7-甲基-7H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟3中描述的程序進(jìn)行合成，提供7-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-7-甲基-7H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟5：7-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-7-甲基-7H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟4中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化，提供7-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-7-甲基-7H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺(0.32g，72％)。

步驟6：7-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-7-甲基-7H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟4中描述的程序進(jìn)行合成，并通過制備型HPLC純化，提供7-(4-((6-(環(huán)己基氨基)-7-甲基-7H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-羥基庚酰胺，為白色固體(107mg)。質(zhì)譜(m/z):482.4(M+1)。

實施例40：N-羥基-7-(4-((6-(哌啶-1-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酰胺的制備

步驟1：2-氯-6-(哌啶-1-基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤的制備

將2,6-二氯-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤(2.0g，7.3mol)、哌啶(1.0g，12.2mmol)、丁醇(4mL)和TEA(0.8g，8mmol)合并并在攪拌下加熱至60℃持續(xù)3小時。然后將混合物冷卻，倒入水中，并用EA萃取。干燥并濃縮合并的萃取物，并將殘留物通過柱色譜法純化，得到2-氯-6-(哌啶-1-基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤，為灰色固體(1.6g，65％)。

步驟2：7-(4-((6-(哌啶-1-基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟1中描述的程序進(jìn)行合成，并通過柱色譜法純化，提供7-(4-((6-(哌啶-1-基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸甲酯，為褐色固體(1.1g，55.3％)。

步驟3：7-(4-((6-(哌啶-1-基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟3中描述的程序進(jìn)行合成，提供7-(4-((6-(哌啶-1-基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酸，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。

步驟4：7-(4-((6-(哌啶-1-基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺的制備

根據(jù)上文在實施例17的步驟4中描述的程序進(jìn)行合成，并用柱色譜法純化，提供7-(4-((6-(哌啶-1-基)-9-(四氫-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)-N-((四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酰胺。

步驟5：N-羥基-7-(4-((6-(哌啶-1-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酰胺

根據(jù)上文在實施例17的步驟5中描述的程序進(jìn)行合成，并通過制備型HPLC純化，提供N-羥基-7-(4-((6-(哌啶-1-基)-9H-嘌呤-2-基)氨基)苯氧基)庚酰胺(27mg)。質(zhì)譜(m/z):454.1(M+1)。

實施例41：HDAC酶測定

采用HDAC熒光活性測定法基于獨(dú)特的Fluor de Lys^TM底物和顯影劑組合測試HDAC化合物的抑制活性。Fluor de Lys^TM系統(tǒng)(熒光組蛋白脫乙酰酶賴氨?；孜?顯影劑)是用于組蛋白脫乙酰酶測定的放射性標(biāo)記的乙酰化組蛋白或肽/HPLC方法的高度靈敏且方便的替代方法。使用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)將人HDAC酶(1-11)表達(dá)為重組蛋白。將重組HDAC酶純化為6xHis或GST融合蛋白質(zhì)。對于I類HDAC酶，使用基于p53的殘基379-382(Arg-His-Lys-Lys(Ac))的熒光乙?；牡孜镒鳛榈孜?。將酶稀釋在HDAC反應(yīng)緩沖液(50mM Tris-HCl,pH8.0,137mM NaCl,2.7mM KCl,1mM MgCl2。使用前，加入1mg/ml BSA,1％DMSO)中。對于IIb類HDAC酶，使用熒光乙?；?Lys(三氟乙?；?。將包含乙?；嚢彼醾?cè)鏈的Fluor de Lys^TM底物與測試化合物在30℃一起孵育2小時。通過添加Fluor de Lys^TM顯影劑以產(chǎn)生熒光團(tuán)來終止反應(yīng)，該熒光團(tuán)可用PerkinElmer Envision讀取器(激發(fā)360nm/發(fā)射460nm)在1.5小時的周期內(nèi)在15min時記錄。收集數(shù)據(jù)，并使用GraphPad Prism軟件通過二次回歸分析測定IC₅₀。這類化合物(如實施例8和9所例示的)相比于文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)品曲古抑菌素A(Trichostatin A)的效力和選擇性的實例在表1中示出。

表1

實施例42：蛋白質(zhì)免疫印跡

對于蛋白質(zhì)免疫印跡分析，通過在裂解緩沖液(50mM Tris-C1[pH 8.0],5mM EDTA,150mM NaC1,1％NP-40,0.1％SDS,和1mM苯基甲基磺酰氟)中裂解細(xì)胞來制備總蛋白提取物。通過SDS-PAGE分離50μg總可溶蛋白質(zhì)。將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝基纖維素膜，并將該膜用4％脫脂乳封閉1小時，接著在4℃與抗乙?；⒐艿鞍?1:1000,Abcam ab246109)、甘油醛3-磷酸脫氫酶(GAPDH；1:20000,Santa Cruz,sc-47724)的一抗孵育過夜。然后將膜與過氧化物酶綴合二抗在室溫下孵育1小時。使用Super Signal WestDura進(jìn)行檢測。使用GAPDH的表達(dá)作為上樣對照。

圖1和圖2示出當(dāng)用本發(fā)明的示例性化合物處理時微管蛋白?；慕Y(jié)果。

實施例43：實施例3的NCI 60細(xì)胞系數(shù)據(jù)

使用NCI60腫瘤細(xì)胞系篩選測試化合物的活性，并將得到的數(shù)據(jù)顯示在下面的表2中。通過線形內(nèi)插法從濃度-響應(yīng)曲線提取響應(yīng)參數(shù)GI50(50％生長抑制)。

表2

實施例44：對小鼠異種移植物模型的腫瘤生長抑制

將肺非小細(xì)胞性上皮癌細(xì)胞系A(chǔ)549在37℃、5％CO2下培養(yǎng)并在培養(yǎng)基中生長。從NCI(Bethesda,MD)獲得6周大的NCI(nru)無胸腺裸鼠，并保持在病原體受限的條件下。在施用藥物前，將處于等體積的基質(zhì)膠(Matrigel)(Collaborative Biomedical Products,Bedford,MA)中的2×10⁶A549NSCLC腫瘤細(xì)胞的皮下注射物植入到小鼠后肋。將荷瘤小鼠隨機(jī)分成每組5只。對照組用溶媒(鹽水溶液)處理，而其他組用30mg/kg/3x/wk ip的實施例2處理。每周3次采用卡尺進(jìn)行二維腫瘤測量，直到腫瘤達(dá)到3cm³的體積，此時處死小鼠。根據(jù)公式計算腫瘤體積：V＝π(短直徑)²(長直徑)/6。結(jié)果在圖3中示出。所有的動物研究均采用被科羅拉多大學(xué)衛(wèi)生科學(xué)中心機(jī)構(gòu)動物管理和使用委員會(University of Colorado Health Sciences Center Institutional Animal Care and Use Committee)批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。

出于舉例說明和描述的目的已呈現(xiàn)了本發(fā)明的說明書，但不旨在是窮盡的或限制本發(fā)明為所公開的形式。本文描述的實施方案的修改和變化對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言是顯然的。