依據(jù)37CFR§1.53(b)提交的此非臨時(shí)申請(qǐng)要求2014年5月21日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)流水號(hào)62/001,205依據(jù)35USC§119(e)的權(quán)益，通過援引將其完整收錄。

發(fā)明領(lǐng)域

一般而言，本發(fā)明涉及用抑制PI3激酶活性的化合物治療過度增殖性病癥，諸如癌癥。本發(fā)明還涉及使用所述化合物以在體外，原位和體內(nèi)診斷或治療哺乳動(dòng)物細(xì)胞或相關(guān)病理學(xué)狀況的方法。

發(fā)明背景

磷脂酰肌醇是在細(xì)胞膜中找到，并且參與胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的許多磷脂之一。經(jīng)由3’-磷酸化磷酸肌醇的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)已經(jīng)牽涉多種細(xì)胞過程，例如惡性轉(zhuǎn)化，生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)，炎癥和免疫(Rameh et al(1999)J.Biol Chem.274:8347-8350)。最初將負(fù)責(zé)生成這些磷酸化信號(hào)傳導(dǎo)產(chǎn)物的酶，磷脂酰肌醇3-激酶(也稱為PI 3-激酶或PI3K)鑒定為與病毒癌蛋白和在肌醇環(huán)的3’-羥基處磷酸化磷脂酰肌醇(PI)及其磷酸化衍生物的生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶相關(guān)的活性(Panayotou et al(1992)Trends Cell Biol 2:358-60)。磷酸肌醇3-激酶(PI3K)是在肌醇環(huán)的3-羥基殘基處磷酸化脂質(zhì)的脂質(zhì)激酶(Whitman et al(1988)Nature,332:664)。由PI3激酶生成的3-磷酸化磷脂(PIP3)起第二信使作用，募集具有脂質(zhì)結(jié)合域(包括plekstrin同源性(PH)區(qū))的激酶，例如Akt和PDK1，磷酸肌醇依賴性激酶-1(Vivanco et al(2002)Nature Rev.Cancer 2:489；Phillips et al(1998)Cancer 83:41)。

PI3激酶家族包含通過結(jié)構(gòu)同源性細(xì)分的至少15種不同的酶，并基于序列同源性和通過酶催化形成的產(chǎn)物分為3類。I類PI3激酶由2個(gè)亞基構(gòu)成：110kd催化亞基和85kd調(diào)節(jié)亞基。調(diào)節(jié)亞基含有SH2域并結(jié)合由具有酪氨酸激酶活性的生長(zhǎng)因子受體或癌基因產(chǎn)物磷酸化的酪氨酸殘基，從而誘導(dǎo)磷酸化其脂質(zhì)底物的p110催化亞基的PI3K活性。I類PI3激酶牽涉細(xì)胞因子，整聯(lián)蛋白，生長(zhǎng)因子和免疫受體下游的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)事件，這提示對(duì)此途徑的控制可以導(dǎo)致重要的治療效果，諸如調(diào)控細(xì)胞增殖和致癌作用。I類PI3K能磷酸化磷脂酰肌醇(PI)，磷脂酰肌醇-4-磷酸和磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP2)以分別生成磷脂酰肌醇-3-磷酸(PIP)，磷脂酰肌醇-3,4-二磷酸和磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸。II類PI3K磷酸化PI和磷脂酰肌醇-4-磷酸。III類PI3K只能磷酸化PI。癌癥中的關(guān)鍵PI3-激酶同等型(isoform)是I類PI3-激酶p110α，如p110α中的復(fù)發(fā)性致癌突變指示的(Samuels et al(2004)Science 304:554；US 5824492；US 5846824；US 6274327)。其它同等型在癌癥中可以是重要的，并且還牽涉心血管和免疫炎性疾病(Workman P(2004)Biochem Soc Trans 32：393-396；Patel et al(2004)Proc.Am.Assoc.of Cancer Res.(Abstract LB-247)95th Annual Meeting,March 27-31,Orlando,Florida,USA；Ahmadi K and Waterfield MD(2004)“Phosphoinositide 3-Kinase:Function and Mechanisms”Encyclopedia of Biological Chemistry(Lennarz W J,Lane M D編)Elsevier/Academic Press)，在結(jié)腸，乳腺，腦，肝，卵巢，胃，肺和頭和頸實(shí)體瘤中以相當(dāng)大的頻率找到p110α的致癌突變。約35-40％的激素受體陽性(HR+)乳腺癌腫瘤含有PIK3CA突變。在成膠質(zhì)細(xì)胞瘤，黑素瘤，前列腺，子宮內(nèi)膜，卵巢，乳腺，肺，頭和頸，肝細(xì)胞和甲狀腺癌中找到PTEN異常。

磷酸肌醇-3激酶(PI3K)/Akt信號(hào)傳導(dǎo)途徑的上調(diào)是大多數(shù)癌癥中的常見特征(Yuan and Cantley(2008)Oncogene 27:5497-510)。在許多人類癌癥中已經(jīng)檢測(cè)到該途徑中的遺傳偏差(Osaka et al(2004)Apoptosis 9:667-76)，并且主要作用為刺激細(xì)胞增殖，遷移和存活。該途徑的激活在激活性點(diǎn)突變或編碼p110a PI3K同等型的PIK3CA基因的擴(kuò)增后發(fā)生(Hennessy et al(2005)Nat.Rev.Drug Discov.4:988-1004)。在腫瘤抑制基因PTEN(與PI3K具有相反功能的磷酸酶)內(nèi)的遺傳刪除或功能喪失性突變也提高PI3K途徑信號(hào)傳導(dǎo)(Zhang and Yu(2010)Clin.Cancer Res.16:4325-30)。這些異常導(dǎo)致經(jīng)由激酶，諸如Akt和mTOR的下游信號(hào)傳導(dǎo)升高，并且已經(jīng)提出了升高的PI3K途徑的活性是針對(duì)癌癥治療的抗性的標(biāo)志(Opel et al(2007)Cancer Res.67:735-45；Razis et al(2011)Breast Cancer Res.Treat.128:447-56)。

PI3激酶是由p85和p110亞基組成的異二聚體(Otsu et al(1991)Cell 65:91-104；Hiles et al(1992)Cell 70:419-29)。已經(jīng)鑒定出四種獨(dú)特的I類PI3K，稱作PI3Kα(阿爾法)，β(貝塔)，δ(德耳塔)，和ω(伽馬)，每個(gè)由獨(dú)特的110kDa催化亞基和調(diào)節(jié)亞基組成。催化亞基中的三種，即p110α，p110β和p110δ各自與相同的調(diào)節(jié)亞基p85相互作用；而p110伽馬與獨(dú)特的調(diào)節(jié)亞基p101相互作用。人細(xì)胞和組織中的這些PI3K之每種的表達(dá)樣式是獨(dú)特的。在PI3Kα，β和δ亞型的每一個(gè)中，p85亞基作用為通過其SH2域與靶蛋白中的磷酸化的酪氨酸殘基(存在于合適的序列背景中)的相互作用將PI3激酶定位于質(zhì)膜(Rameh et al(1995)Cell,83:821-30；Volinia et al(1992)Oncogene,7:789-93)。

測(cè)量生物標(biāo)志物(例如，血漿中的分泌性蛋白質(zhì))的表達(dá)水平可以是鑒定會(huì)響應(yīng)特定療法(包括例如用治療劑治療)的患者和患者群體的有效手段。需要更有效的手段來測(cè)定哪些具有過度增殖性病癥諸如癌癥的患者會(huì)響應(yīng)哪種用治療劑的治療，并且將此類測(cè)定摻入對(duì)于患者更有效的治療方案中，無論治療劑是作為單一藥劑使用，還是與其它藥劑聯(lián)合使用。

PI3激酶/Akt/PTEN途徑是用于癌癥藥物開發(fā)的有吸引力的靶物，因?yàn)轭A(yù)期此類藥劑會(huì)抑制細(xì)胞增殖，抑制提供癌細(xì)胞的存活和化學(xué)抗性的來自基質(zhì)細(xì)胞的信號(hào)，逆轉(zhuǎn)凋亡的抑制，及戰(zhàn)勝癌細(xì)胞對(duì)細(xì)胞毒劑的內(nèi)在抗性。已經(jīng)報(bào)告了PI3激酶抑制劑(Yaguchi et al(2006)Jour.of the Nat.Cancer Inst.98(8):545-556；US 7173029；US 7037915；US 6608056；US 6608053；US 6838457；US 6770641；US 6653320；US 6403588；US 7750002；WO 2006/046035；US 7872003；WO 2007/042806；WO 2007/042810；WO 2004/017950；US 2004/092561；WO 2004/007491；WO 2004/006916；WO 2003/037886；US 2003/149074；WO 2003/035618；WO 2003/034997；US 2003/158212；EP 1417976；US 2004/053946；JP 2001247477；JP 08175990；JP 08176070)。

某些噻吩并嘧啶化合物具有p110α結(jié)合，PI3激酶抑制活性，并抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)(Wallin et al(2011)Mol.Can.Ther.10(12):2426-2436；Sutherlin et al(2011)Jour.Med.Chem.54:7579-7587；US 2008/0207611；US 7846929；US 7781433；US 2008/0076758；US 7888352；US 2008/0269210。GDC-0941(CAS登記號(hào)957054-30-7,Genentech Inc.)是具有有希望的藥動(dòng)學(xué)和藥學(xué)性質(zhì)的選擇性口服生物利用性PI3K抑制劑(Folkes et al(2008)Jour.of Med.Chem.51(18):5522-5532；US 7781433；Belvin et al,American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008,99th:April 15,Abstract 4004；Folkes et al,American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008,99th:April 14,Abstract LB-146；Friedman et al(2008),American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008,99th:April 14,Abstract LB-110)，并且與某些化療劑組合顯示針對(duì)實(shí)體瘤細(xì)胞系的體外和體內(nèi)協(xié)同活性(US 2009/0098135)。

提高治療響應(yīng)性，延遲疾病進(jìn)展，改善耐受性，并且潛在地根治化學(xué)療法抗性惡性細(xì)胞的新的靶向治療將代表在對(duì)具有乳腺癌的女性的護(hù)理中的重大進(jìn)展。用于治療具有激素受體陽性(HR+)轉(zhuǎn)移性乳腺癌(MBC)的患者的主要策略已經(jīng)是在受體水平上阻斷雌激素的作用或減少雌激素生成。已知乳腺癌是一種異質(zhì)性疾病。存在不同亞型，可以基于以下定義：(i)乳腺癌腫瘤的分子概況；(ii)遺傳陣列測(cè)試；或(iii)使用免疫組織化學(xué)分析的方法。大多數(shù)乳腺癌是腔性腫瘤(luminal tumor)。腔性腫瘤細(xì)胞看起來最像乳腺癌中在作為乳腺導(dǎo)管襯里的內(nèi)部(腔)細(xì)胞中開始的細(xì)胞。乳腺癌的分子亞型在計(jì)劃治療和開發(fā)新療法中可以是有用的，包括：腔性A，腔性B，三重陰性/基底樣，和HER2型。腔性A亞型占乳腺癌的約40％，并且趨于呈ER+(雌激素受體陽性)和/或PR+(孕酮受體陽性)，HER2-(HER2/neu受體陰性)，低Ki67。ER/PR/HER2是臨床驗(yàn)證的預(yù)測(cè)和預(yù)后生物標(biāo)志物。增殖標(biāo)志物Ki-67是乳腺癌患者中的例示性預(yù)后參數(shù)。

芳香酶抑制劑(AI)，諸如阿那曲唑(anastrozole)，來曲唑(letrozole)和依西美坦(exemestane)通過抑制芳香酶(負(fù)責(zé)雄激素向雌激素的外周轉(zhuǎn)化的酶)阻斷外周雌激素合成(Simpson and Dowsett(2002)Recent Prog Horm Res 57:317-38)。臨床試驗(yàn)已經(jīng)證明他莫昔芬(tamoxifen)和AI療法兩者在治療具有HR陽性MBC的絕經(jīng)后女性中的功效(Nabholtz et al.(2000)J Clin Oncol 18：3758-67；Mouridsen et al.(2001)J Clin Oncol 19：2596-606；Osborne et al.(2002)J Clin Oncol 20：3386-95；Howell et al.(2004)J Clin Oncol 22:1605-13；Paridaens et al.(2004)Proceedings Am Soc Clin Oncol 22:14S)。另外，氟維司群(fulvestrant)(一種下調(diào)ER蛋白質(zhì)水平的雌激素受體(ER)拮抗劑)已經(jīng)得到美國(guó)食品和藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)用于HR陽性MBC，并且得到歐洲藥物局(EMA)批準(zhǔn)用于治療在在先抗雌激素療法后具有疾病進(jìn)展的絕經(jīng)后女性中的ER陽性MBC(Howell et al.(2002)J Clin Oncol 20:3396-403；Osborne et al.(2002)J Clin Oncol 20:3386-95；Di Leo et al.(2010)J Clin Oncol 28:4594-600)。盡管現(xiàn)有的治療能提供疾病進(jìn)展中的一些延遲，但是內(nèi)分泌療法的主要限制仍然是治療劑抗性的幾乎全面的形成，這導(dǎo)致絕大多數(shù)患者的最終死亡。MBC仍然是女性中的癌癥死亡的第二高的原因，強(qiáng)調(diào)此種疾病中持續(xù)的未滿足的需要。

癌癥中磷酸肌醇3-激酶(PI3K)途徑的異?；罨?經(jīng)由PI3K途徑組分中的遺傳變化(PI3K激活性突變或遺傳擴(kuò)增，拮抗性腫瘤抑制因子PTEN的喪失)或經(jīng)由異常受體酪氨酸激酶(RTK)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo))是在多種腫瘤類型中的共同發(fā)現(xiàn)。這與對(duì)內(nèi)分泌療法的抗性組合提示抑制PI3K信號(hào)傳導(dǎo)可以在乳腺癌的治療中具有廣泛的應(yīng)用。

腔性A乳腺癌比腔性B乳腺癌具有更高的雌激素受體(ER+)和/或孕酮受體(PR+)表達(dá)。具有這些表達(dá)樣式的腔性A乳腺癌患者較好響應(yīng)內(nèi)分泌激素治療，并且具有一般有利的預(yù)后(Rouzier et al(2005)Clin.Cancer Res.11：5678-5685)。

內(nèi)分泌療法(包括他莫昔芬和AI)的活性是早期HR陽性乳腺癌患者的存活的持續(xù)改善的主要原因。然而，近半數(shù)呈現(xiàn)出轉(zhuǎn)移性HR陽性疾病的患者不響應(yīng)前線內(nèi)分泌治療，并且?guī)缀跛写_實(shí)響應(yīng)的患者最終都產(chǎn)生針對(duì)內(nèi)分泌療法的抗性。

HR陽性MBC患者中針對(duì)激素療法的抗性的機(jī)制很可能是多因素的。非臨床和臨床數(shù)據(jù)提示ER和/或PgR表達(dá)的降低或喪失和生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)的上調(diào)是導(dǎo)致雌激素非依賴性腫瘤生長(zhǎng)的突出機(jī)制中的兩種(Johnston 2009；Osborne和Schiff 2011)。已經(jīng)在用內(nèi)分泌療法治療的患者的高達(dá)20％中觀察到ER表達(dá)隨時(shí)間的喪失(Gutierrez et al.2005)，這可以解釋獲得性抗雌激素抗性和隨后的疾病進(jìn)展。已經(jīng)顯示了經(jīng)由多種生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)途徑調(diào)節(jié)ER表達(dá)。特別地，EGFR/HER2和促分裂原活化的蛋白質(zhì)激酶(MAPK)途徑的激活導(dǎo)致對(duì)ER表達(dá)的抑制，這導(dǎo)致對(duì)他莫昔芬的抗性(McClelland et al.2001；Knowlden et al.2003；Hutcheson et al.2003)。在調(diào)控ER水平外，生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)途徑能經(jīng)由在絲氨酸118和絲氨酸167處的受體的直接磷酸化直接增強(qiáng)ER的轉(zhuǎn)錄活性(Chen et al.2002；Campbell et al.2001)。已經(jīng)假定ER的“非基因組”活性刺激許多胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑，包括胞質(zhì)溶膠中的MAPK和PI3K途徑( and 2005；Acconcia et al.2005)。已經(jīng)提出了這些非基因組活性為乳腺癌中的內(nèi)分泌響應(yīng)和抗性的重要特征(Schiff et al.2003)。

多組非臨床和臨床數(shù)據(jù)支持PI3K途徑在產(chǎn)生對(duì)激素療法的抗性中的關(guān)鍵作用。已經(jīng)證明PI3K途徑的激活(經(jīng)由PIK3CA突變，PTEN表達(dá)的喪失或HER2過表達(dá))在ER陽性乳腺癌模型中促進(jìn)對(duì)抗雌激素療法的抗性和激素不依賴性(Shou et al.(2004)J Natl Cancer Inst 96:926-3；Miller et al.(2009)Cancer Res 2009；69:4192-201；Miller et al.(2010)J Clin Invest 120:2406-13)。人HR陽性腫瘤的蛋白質(zhì)組學(xué)和轉(zhuǎn)錄概況分析提示了，升高的PI3K信號(hào)傳導(dǎo)與較低的ER水平相關(guān)，其已經(jīng)與對(duì)內(nèi)分泌療法的抗性關(guān)聯(lián)起來(Creighton et al.2010；Miller et al.(2010)J Clin Invest 120:2406-13)。來自用他莫昔芬治療的HR陽性患者的腫瘤樣品的回顧性分析支持將PI3K途徑與對(duì)抗雌激素療法的抗性聯(lián)系起來的非臨床觀察結(jié)果；已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了具有活化的PI3K途徑的患者具有降低的總體存活(OS)(Kirkegaard et al.(2005)J Pathol 207：139-46)和較短的無復(fù)發(fā)存活(Shoman et al.(2005)Mod Pathol 18:250-9)。已經(jīng)顯示了非臨床模型中對(duì)PI3K/mTOR途徑的抑制上調(diào)ER/PgR表達(dá)(Creighton et al.2010)，并且增強(qiáng)來曲唑的抗腫瘤效果(Boulay et al.2005)。

在臨床設(shè)置中，來自兩項(xiàng)II期研究的數(shù)據(jù)提示了，與單一藥劑內(nèi)分泌療法相比，PI3K/mTOR和雌激素信號(hào)傳導(dǎo)途徑的組合抑制可以提供卓越的益處。施用雷帕霉素類似物(rapalog)(依維莫司)提高了具有ER陽性乳腺癌的患者中的新輔助設(shè)置中的來曲唑功效，如通過Ki67表達(dá)降低測(cè)量的(Baselga et al.2009)。與單一藥劑他莫昔芬相比，在接受AI在先治療的ER陽性患者的II期研究中對(duì)他莫昔芬添加依維莫司顯著改善臨床受益率(CBR)，進(jìn)展前時(shí)間和總體存活(Bachelot et al.2012)。最后，來自III期BOLERO-2研究的數(shù)據(jù)表明，對(duì)依西美坦添加依維美司與單一藥劑依西美坦相比在ER陽性，HER2陰性MBC患者中使PFS增加超過兩倍，所述患者的疾病是來曲唑或阿那曲唑的在先治療不應(yīng)的(Baselga et al.2012)。因此，可以證明ER和PI3K途徑的組合抑制是在接受AI治療的情況中經(jīng)歷復(fù)發(fā)性或進(jìn)行性疾病(PD)的MBC患者中的有效療法。

GDC-0941(pictrelisib,pictilisib,Genentech Inc.,Roche,RG-7321,CAS登記號(hào)957054-30-7)，命名為4-(2-(1H-吲唑-4-基)-6-((4-(甲基磺?；?哌嗪-1-基)甲基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)嗎啉，具有有力的PI3K活性(WO 2011/036280；US 8242104；US 8343955)，并且正在具有局部晚期或轉(zhuǎn)移性實(shí)體瘤的患者中研究。GDC-0941是II，III，和IV類PI3K家族成員(包括DNA依賴性蛋白質(zhì)激酶和哺乳動(dòng)物雷帕霉素(rapamycin)靶物[mTOR]，其對(duì)p110α具有＞250倍的選擇性)的弱抑制劑。GDC-0941通過誘導(dǎo)G1阻滯和凋亡有力抑制一大批乳腺癌細(xì)胞系的體外生長(zhǎng)(Friedman et al.(2009)AACR-NCI-EORTC Molecular Targets and Cancer Therapeutics,15-19November 2009,Boston,MA.Abstract C201；O’Brien et al.(2010)Clin Cancer Res 16:3670-83)。GDC-0941在I期測(cè)試中已經(jīng)超過其最小有效靶劑量(與臨床前模型中的90％腫瘤生長(zhǎng)抑制有關(guān)的暴露)，并且已經(jīng)在可耐受劑量時(shí)表明藥效學(xué)和抗腫瘤活性(Baird et al.(2010)J Clin Oncol 2010ASCO Annual Meeting Proceedings(Post-Meeting Edition)2010；28(15Suppl):2613；Dolly et al.(2010)J Clin Oncol 2010ASCO Annual Meeting Proceedings(Post-Meeting Edition)28(15Suppl):3079；Von Hoff et al.(2010)J Clin Oncol 2010ASCO Annual Meeting Proceedings 2010；28(15Suppl):2541)。

發(fā)明概述

GDC-0941(pictrelisib,pictilisib,Genentech Inc.,Roche,RG-7321)是PI3K同等型的有力的多靶性I類(泛)抑制劑。GDC-0941目前在用于治療晚期實(shí)體瘤的II期臨床試驗(yàn)中。GDC-0941命名為4-(2-(1H-吲唑-4-基)-6-((4-(甲基磺?；?哌嗪-1-基)甲基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)嗎啉(US 7781433；US 7750002；Folkes et al(2008)Jour.of Med.Chem.51(18):5522-5532)，并且具有結(jié)構(gòu)：

包括其立體異構(gòu)體，幾何異構(gòu)體，互變異構(gòu)體和藥學(xué)可接受鹽。

本發(fā)明提供了治療具有PR+或腔性A型乳腺癌的患者的方法，其通過施用治療有效量的GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑進(jìn)行。

本發(fā)明還提供了用于治療PR+，腔性A型乳腺癌的制品，其包含：GDC-0941；和使用說明書。

本發(fā)明還提供了用于確定要聯(lián)合使用以治療PR+，腔性A型乳腺癌的化合物的方法，其包括：

a)用GDC-0941和選自下組的內(nèi)分泌治療劑的治療組合處理具有PIK3CA突變的體外腫瘤細(xì)胞系：氟維司群，來曲唑，他莫昔芬和依西美坦，并且

b)測(cè)量協(xié)同或非協(xié)同效應(yīng)；

從而確定用于治療癌癥的協(xié)同性治療組合。

本發(fā)明還提供了選擇PR+，腔性A型乳腺癌患者以用GDC-0941治療的方法，其包括：

(a)檢測(cè)自所述患者獲得的生物學(xué)樣品中的PIK3CA或PTEN突變；并且

(b)比較在對(duì)所述患者施用GDC-0941或GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑的組合前自所述患者獲得的生物學(xué)樣品中的PIK3CA或PTEN突變狀態(tài)，

其中在施用GDC-0941或GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑的組合后獲得的樣品中的PIK3CA或PTEN突變狀態(tài)的變化或調(diào)控鑒定會(huì)響應(yīng)用GDC-0941治療的患者。

本發(fā)明還提供了監(jiān)測(cè)PR+，腔性A型乳腺癌患者中的治療功效的方法，其包括：

(a)用GDC-0941治療所述患者；

(b)測(cè)量在施用GDC-0941后自所述患者獲得的生物學(xué)樣品中的功能性PI3K蛋白質(zhì)水平；并且

(c)改變對(duì)所述患者施用的GDC-0941的劑量，GDC-0941的給藥頻率，或療法的過程。

本發(fā)明還提供了優(yōu)化GDC-0941或GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑的組合在治療PR+，腔性A型乳腺癌中的治療功效的方法，所述方法包括：

(a)檢測(cè)在施用至少一劑GDC-0941或GDC-0941和選自氟維司群和來曲唑的內(nèi)分泌治療劑的組合后自患者獲得的生物學(xué)樣品中的PIK3CA或PTEN突變；并且

(b)比較在對(duì)所述患者施用GDC-0941或GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑的組合前自所述患者獲得的生物學(xué)樣品中的PIK3CA或PTEN突變狀態(tài)，

其中在施用GDC-0941或GDC-0941和治療劑的組合后獲得的樣品中的PIK3CA或PTEN的變化或調(diào)控鑒定具有升高的受益于用GDC-0941或GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑的組合治療的可能性的患者。

本發(fā)明還提供了鑒定用于監(jiān)測(cè)PR+，腔性A型乳腺癌治療中對(duì)GDC-0941或GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑的組合的響應(yīng)性的生物標(biāo)志物的方法，所述方法包括：

(a)檢測(cè)自患者獲得的生物學(xué)樣品中的選自PIK3CA或PTEN突變的生物標(biāo)志物的表達(dá)，調(diào)控或活性，所述患者已經(jīng)接受至少一劑GDC-0941或GDC-0941和選自下組的內(nèi)分泌治療劑的組合：氟維司群，來曲唑，他莫昔芬，和依西美坦；并且

(b)與參照樣品中的所述生物標(biāo)志物的狀態(tài)比較所述生物標(biāo)志物的表達(dá)，調(diào)控或活性，其中所述參照樣品是在對(duì)所述患者施用GDC-0941或GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑的組合前自所述患者獲得的生物學(xué)樣品；

其中將與所述參照樣品相比低或高至少2倍的所述生物標(biāo)志物變化的調(diào)控鑒定為可用于監(jiān)測(cè)對(duì)GDC-0941或GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑的組合的響應(yīng)性的生物標(biāo)志物。

本發(fā)明還提供了GDC-0941或GDC-0941和治療劑的組合在治療患者中的PR+，腔性A型乳腺癌中的用途，其包括對(duì)所述患者施用治療有效量的GDC-0941或GDC-0941和選自下組的內(nèi)分泌治療劑的組合：氟維司群，來曲唑，他莫昔芬，和依西美坦，

其中已經(jīng)對(duì)在對(duì)所述患者施用GDC-0941或GDC-0941和治療劑的組合前自所述患者獲得的生物學(xué)樣品測(cè)試了PIK3CA或PTEN突變狀態(tài)，并且其中PIK3CA或PTEN突變狀態(tài)指示所述患者對(duì)GDC-0941或GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑的組合的治療響應(yīng)性。

本發(fā)明還提供了GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑，其在治療PR+或腔性A型乳腺癌中使用，其中GDC-0941具有結(jié)構(gòu)：

包括其立體異構(gòu)體，幾何異構(gòu)體，互變異構(gòu)體，和藥學(xué)可接受鹽。

本發(fā)明還提供了如上所述使用的前述化合物，其中GDC-0941是鹽雙甲磺酸鹽。

本發(fā)明還提供了如上所述使用的前述化合物，其中先前已經(jīng)用化學(xué)療法，放射療法和/或手術(shù)切除治療所述患者。

本發(fā)明還提供了如上所述使用的前述化合物，其中先前已經(jīng)用內(nèi)分泌治療劑治療所述患者。

本發(fā)明還提供了如上所述使用的前述化合物，其中先前已經(jīng)用芳香酶抑制劑治療所述患者。

本發(fā)明還提供了如上所述使用的前述化合物，其中所述芳香酶抑制劑選自來曲唑，阿那曲唑和依西美坦。

本發(fā)明還提供了如上所述使用的前述化合物，其中所述內(nèi)分泌治療劑選自：氟維司群，來曲唑，他莫昔芬，和依西美坦。其中所述內(nèi)分泌治療劑選自：氟維司群，來曲唑，他莫昔芬，和依西美坦。

本發(fā)明還提供了GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑在制備用于治療PR+或腔性A型乳腺癌的藥物中的用途，其中GDC-0941具有結(jié)構(gòu)：

包括其立體異構(gòu)體，幾何異構(gòu)體，互變異構(gòu)體，和藥學(xué)可接受鹽。

本發(fā)明還提供了GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑用于治療PR+或腔性A型乳腺癌的用途，其中GDC-0941具有結(jié)構(gòu)：

包括其立體異構(gòu)體，幾何異構(gòu)體，互變異構(gòu)體，和藥學(xué)可接受鹽。

如前文描述的發(fā)明。

附圖簡(jiǎn)述

圖1顯示了與氟維司群組合用GDC-0941治療ER陽性乳腺癌患者的臨床研究方案。

圖2顯示了用GDC-0941，來曲唑，和GDC-0941和來曲唑的組合處理的PR+芳香酶抑制劑敏感性(頂部)和PR-，芳香酶抑制劑抗性(底部)細(xì)胞系MCF7-ARO(Wallin et al(2012)Clin Cancer Res；18:3901-3911)的細(xì)胞存活力的圖。

圖3A顯示了意圖治療(ITT)研究中的無進(jìn)展存活的Kaplan-Meier圖(實(shí)施例1)?；谖捶謱拥腃ox模型評(píng)估危害比；基于未分層的時(shí)序檢驗(yàn)評(píng)估p值。

圖3B顯示了無進(jìn)展存活的Kaplan-Meier圖。

圖3C顯示了無進(jìn)展存活的Kaplan-Meier圖。

圖4顯示了來自登記到研究上的患者的腔性A和腔性B PAM50內(nèi)在亞型的流行度，和與相關(guān)生物標(biāo)志物的關(guān)聯(lián)。

圖5A顯示了PR陽性亞組中的無進(jìn)展存活的Kaplan-Meier圖。

圖5B顯示了PR陽性亞組中的無進(jìn)展存活的Kaplan-Meier圖。

圖5C顯示了PR陽性亞組中的無進(jìn)展存活的Kaplan-Meier圖。

圖6顯示了基于內(nèi)在亞型分析的無進(jìn)展存活的Kaplan-Meier圖。將用GDC-0941+氟維司群或安慰劑治療的腔性B患者與用GDC-0941+氟維司群或安慰劑治療的腔性A患者比較。

圖7顯示了用于PR+亞組中的PAM50分析的無進(jìn)展存活的Kaplan-Meier圖的圖。

圖8顯示了無進(jìn)展存活的Kaplan-Meier圖的圖。

發(fā)明詳述

現(xiàn)在將詳細(xì)描述本發(fā)明的某些實(shí)施方案，其例子在所附結(jié)構(gòu)和式中例示。盡管會(huì)結(jié)合列舉的實(shí)施方案描述本發(fā)明，但是應(yīng)當(dāng)理解，它們并不意圖將本發(fā)明限制于那些實(shí)施方案。相反，本發(fā)明意圖覆蓋可以包括在如由權(quán)利要求書限定的本發(fā)明的范圍內(nèi)的所有備選，修改和等同方案。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到與本文所述的那些方法和材料類似或等同的許多方法和材料，其可以在本發(fā)明的實(shí)踐中使用。本發(fā)明決不限于描述的方法和材料。在引入的文獻(xiàn)，專利和類似材料中的一個(gè)或多個(gè)與本申請(qǐng)(包括但不限于定義的術(shù)語，術(shù)語用法，描述的技術(shù)等)不同或矛盾的情況中，以本申請(qǐng)為準(zhǔn)。

定義

當(dāng)在本說明書和權(quán)利要求書中使用時(shí)，詞語“包含”和“包括”意圖規(guī)定敘述的特征，整體，組件或步驟的存在，但是它們不排除一種或多種其它特征，整體，組件，步驟或其組的存在或添加。

術(shù)語“治療”和“處理”是指治療性處理和防范性或預(yù)防性措施兩者，其中目的是預(yù)防或減緩(減輕)不期望的生理變化或病癥，諸如癌癥的生長(zhǎng)，發(fā)生或傳播。為了本發(fā)明的目的，有益或期望的臨床結(jié)果包括但不限于癥狀的緩解，疾病程度的減小，疾病的穩(wěn)定化(即不惡化)狀態(tài)，疾病進(jìn)展的延遲或減緩，疾病狀態(tài)的改善或緩解，和消退(無論部分或全部)，無論是可檢測(cè)的還是檢測(cè)不到的?！爸委?處理”還可以指與不接受治療時(shí)預(yù)期的存活相比延長(zhǎng)存活。需要治療的那些對(duì)象包括已經(jīng)患有狀況或病癥的那些對(duì)象以及傾向于具有狀況或病癥的那些對(duì)象或其中要預(yù)防狀況或病癥的那些對(duì)象。

短語“治療有效量”指本發(fā)明化合物的量，其(i)治療本文中描述的特定疾病，狀況，或病癥，(ii)減輕，改善，或消除特定疾病，狀況，或病癥的一種或多種癥狀，或(iii)預(yù)防或延遲特定疾病，狀況，或病癥的一種或多種癥狀的發(fā)作。在癌癥的情況中，治療有效量的藥物可減少癌細(xì)胞數(shù)；縮小腫瘤體積；抑制(即一定程度的減緩，優(yōu)選停止)癌細(xì)胞浸潤(rùn)到周圍器官中；抑制(即一定程度的減緩，優(yōu)選停止)腫瘤轉(zhuǎn)移；一定程度的抑制腫瘤生長(zhǎng)；和/或一定程度的減輕與癌癥有關(guān)的一種或多種癥狀。就藥物可預(yù)防癌細(xì)胞生長(zhǎng)和/或殺死現(xiàn)有癌細(xì)胞的程度而言，它可以是抑制細(xì)胞的和/或毒害細(xì)胞的。對(duì)于癌癥療法，可以例如通過評(píng)價(jià)疾病進(jìn)展前時(shí)間(TTP)和/或測(cè)定響應(yīng)率(RR)來測(cè)量功效。

術(shù)語“檢測(cè)”包括任何檢測(cè)手段，包括直接和間接檢測(cè)。

術(shù)語“診斷”在本文中用于指分子或病理狀態(tài)，疾病或狀況的鑒定或分類。例如，“診斷”可以指鑒定特定類型的癌癥，例如肺癌。“診斷”還可以指特定類型的癌癥的分類，例如通過組織學(xué)(例如，非小細(xì)胞肺癌)，通過分子特征(例如以特定基因或蛋白質(zhì)中的核苷酸和/或氨基酸變異為特征的肺癌)，或兩者。

術(shù)語“預(yù)后”在本文中用于指預(yù)測(cè)可歸于癌癥的死亡或進(jìn)展的可能性，包括例如新生性疾病，諸如癌癥的復(fù)發(fā)，轉(zhuǎn)移性擴(kuò)散和藥物抗性。

術(shù)語“預(yù)測(cè)”在用于本文時(shí)指患者將對(duì)一種藥物或一組藥物有好的或不好的響應(yīng)的可能性。在一個(gè)實(shí)施方案中，預(yù)測(cè)涉及那些響應(yīng)的程度。在另一個(gè)實(shí)施方案中，預(yù)測(cè)涉及患者在治療(例如用特定治療劑的治療和/或外科手術(shù)去除原發(fā)性腫瘤，和/或經(jīng)某段時(shí)間的化療)后是否存活和/或存活的可能性，而不復(fù)發(fā)癌癥。本發(fā)明的預(yù)測(cè)方法在臨床上可用于做出治療決定，為任何特定患者選擇最適宜的治療形式。本發(fā)明的預(yù)測(cè)方法是有價(jià)值的工具，用于預(yù)測(cè)患者是否可能對(duì)治療方案(諸如給定的治療方案，包括例如施用給定的治療劑或組合，外科手術(shù)干預(yù)，化療等)有好的響應(yīng)，或用于預(yù)測(cè)患者在治療方案后是否可能長(zhǎng)期存活。

在依照本發(fā)明使用時(shí)，術(shù)語對(duì)特定治療劑或治療選項(xiàng)“抗性升高”意味著對(duì)標(biāo)準(zhǔn)劑量的藥物或?qū)?biāo)準(zhǔn)治療方案的響應(yīng)降低。

在依照本發(fā)明使用時(shí)，術(shù)語對(duì)特定治療劑或治療選項(xiàng)“敏感性降低”意味著對(duì)標(biāo)準(zhǔn)劑量的藥劑或?qū)?biāo)準(zhǔn)治療方案的響應(yīng)降低，其中降低的響應(yīng)可通過增加藥劑劑量或治療強(qiáng)度來彌補(bǔ)(至少部分彌補(bǔ))。

可以使用指示對(duì)患者有益處的任何終點(diǎn)評(píng)估“患者響應(yīng)”，包括但不限于：(1)在某種程度上抑制腫瘤生長(zhǎng)，包括減緩和完全的生長(zhǎng)阻滯；(2)減少腫瘤細(xì)胞數(shù)目；(3)減小腫瘤尺寸；(4)抑制(即降低，減緩或完全阻止)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)臨近的外周器官和/或組織；(5)抑制(即降低，減緩或完全阻止)轉(zhuǎn)移；(6)增強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答，其可以但不必造成腫瘤消退或排斥；(7)在某種程度上減輕一種或多種與腫瘤有關(guān)的癥狀；(8)延長(zhǎng)治療后存活的長(zhǎng)度；和/或(9)降低治療后給定時(shí)間點(diǎn)的死亡率。

“生物標(biāo)志物”是作為正常生物過程，致病性過程或?qū)χ委熜愿深A(yù)的藥理學(xué)響應(yīng)的指標(biāo)客觀測(cè)量和評(píng)價(jià)的特征。生物標(biāo)志物可以是幾種類型的：預(yù)測(cè)的，預(yù)后的或藥效學(xué)(PD)。預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物預(yù)測(cè)哪些患者可能響應(yīng)或受益于特定療法。預(yù)后生物標(biāo)志物預(yù)測(cè)患者疾病的可能過程并且可以指導(dǎo)治療。藥效學(xué)生物標(biāo)志物確認(rèn)藥物活性，并且能夠?qū)崿F(xiàn)劑量和施用日程表的優(yōu)化。

當(dāng)其在體外或體內(nèi)發(fā)生時(shí)，通過使用在建立藥效學(xué)(PD)中通常使用的一種或多種方法分析生物學(xué)樣品來檢測(cè)生物標(biāo)志物(包括一種或一組PIK3CA突變)的狀態(tài)的“變化”或“調(diào)控”，所述方法包括：(1)對(duì)生物學(xué)樣品的基因組DNA或反轉(zhuǎn)錄的PCR產(chǎn)物測(cè)序，由此檢測(cè)一種或多種突變；(2)通過定量信使水平或評(píng)估拷貝數(shù)評(píng)估基因表達(dá)水平；和(3)通過免疫組織化學(xué)，免疫細(xì)胞化學(xué)，ELISA或質(zhì)譜術(shù)分析蛋白質(zhì)，由此檢測(cè)蛋白質(zhì)的降解，穩(wěn)定化或翻譯后修飾，諸如磷酸化或泛素化。

術(shù)語“癌癥”和“癌性”是指或描述哺乳動(dòng)物中通常以不受調(diào)節(jié)的細(xì)胞生長(zhǎng)為特征的生理狀況?！澳[瘤”包括一種或多種癌性細(xì)胞。癌癥的例子包括但不限于癌瘤，淋巴瘤，母細(xì)胞瘤，肉瘤和白血病或淋巴樣惡性腫瘤。此類癌癥的更具體的例子包括鱗狀細(xì)胞癌(例如上皮鱗狀細(xì)胞癌)，肺癌，包括小細(xì)胞肺癌，非小細(xì)胞肺癌(“NSCLC”)，肺的腺癌和肺的鱗癌，腹膜癌，肝細(xì)胞癌，胃癌或胃的癌，包括胃腸癌，胰腺癌，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤，宮頸癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝瘤，乳腺癌，結(jié)腸癌，直腸癌，結(jié)腸直腸癌，子宮內(nèi)膜或子宮癌，唾液腺癌，腎癌或腎的癌，前列腺癌，外陰癌，甲狀腺癌，肝的癌，肛門癌，陰莖癌，以及頭和頸癌。如本文中使用的，胃的癌包括胃癌，其可以在胃的任何部分中發(fā)生并可以擴(kuò)散遍及整個(gè)胃以及其它器官；特別是食管，肺，淋巴結(jié)和肝。

術(shù)語“造血惡性”是指在牽涉諸如白細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，天然殺傷細(xì)胞，漿細(xì)胞和髓樣細(xì)胞，諸如嗜中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞等細(xì)胞的造血過程中產(chǎn)生的癌癥或過度增殖性病癥。造血惡性包括非何杰金(Hodgkin)氏淋巴瘤，彌漫性大造血淋巴瘤，濾泡性淋巴瘤，套細(xì)胞淋巴瘤，慢性淋巴細(xì)胞性白血病，多發(fā)性骨髓瘤，急性髓性白血病和髓樣細(xì)胞白血病。淋巴細(xì)胞性白血病(或“成淋巴細(xì)胞性”)包括急性成淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)和慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)。髓性白血病(又為“髓樣”或“非淋巴細(xì)胞性”)包括急性髓性(或成髓細(xì)胞性)白血病(AML)和慢性髓性白血病(CML)。

“內(nèi)分泌治療劑”是可用于治療癌癥(不管作用機(jī)制如何)的生物學(xué)(大分子)或化學(xué)(小分子)化合物。內(nèi)分泌治療劑的例子包括但不限于氟維司群，來曲唑，他莫昔芬和依西美坦。

內(nèi)分泌治療劑可以是(i)抗雌激素和選擇性雌激素受體調(diào)控劑(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括檸檬酸他莫昔芬)，雷洛昔芬(raloxifene)，屈洛昔芬(droloxifene)，4-羥基他莫昔芬，曲沃昔芬(trioxifene)，keoxifene，LY117018，奧那司酮(onapristone)，和(檸檬酸托瑞米芬(toremifine citrate))；或(ii)抑制調(diào)節(jié)腎上腺中的雌激素生成的酶芳香酶的芳香酶抑制劑，諸如例如4(5)-咪唑，氨魯米特(aminoglutethimide)，(醋酸甲地孕酮(megestrol acetate))，(依西美坦；Pfizer)，福美坦(formestanie)，法倔唑(fadrozole)，(伏氯唑(vorozole))，(來曲唑；Novartis)，和(阿那曲唑；AstraZeneca)。

“治療劑”是可用于治療癌癥(無論作用機(jī)制如何)的生物學(xué)(大分子)或化學(xué)(小分子)化合物。

術(shù)語“哺乳動(dòng)物”包括但不限于人，小鼠，大鼠，豚鼠，猴，犬，貓，馬，牛，豬和綿羊。

“包裝插頁”用于指通常包括在治療用產(chǎn)品的商業(yè)包裝中的說明，它們含有關(guān)于關(guān)注此類治療用產(chǎn)品使用的適應(yīng)征，用法，劑量，施用，禁忌癥和/或警告的信息。

如本文中所使用的，短語“藥學(xué)可接受鹽”指本發(fā)明化合物的藥學(xué)可接受的有機(jī)或無機(jī)鹽。例示性的鹽包括但不限于硫酸鹽，檸檬酸鹽，乙酸鹽，草酸鹽，氯化物，溴化物，碘化物，硝酸鹽，硫酸氫鹽，磷酸鹽，酸式磷酸鹽，異煙酸鹽，乳酸鹽，水楊酸鹽，酸式檸檬酸鹽，酒石酸鹽，油酸鹽，丹寧酸鹽，泛酸鹽，酒石酸氫鹽，抗壞血酸鹽，琥珀酸鹽，馬來酸鹽，龍膽酸鹽，富馬酸鹽，葡糖酸鹽，葡糖醛酸鹽，糖酸鹽，甲酸鹽，苯甲酸鹽，谷氨酸鹽，甲磺酸鹽，“mesylate”，乙磺酸鹽，苯磺酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽和撲酸鹽(即1,1’-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽))。藥學(xué)可接受鹽可能牽涉包含另一種分子，諸如乙酸根離子，琥珀酸根離子或其它反荷離子?？购怆x子可以是穩(wěn)定母體化合物電荷的任何有機(jī)或無機(jī)模塊。另外，藥學(xué)可接受鹽可以在其結(jié)構(gòu)中具有超過一種帶電荷原子。在多個(gè)帶電荷原子作為藥學(xué)可接受鹽的組成部分的情況中可以具有多種抗衡離子。因此，藥學(xué)可接受鹽可具有一種或多種帶電荷原子和/或一種或多種抗衡離子。

可以通過本領(lǐng)域中可用的任何合適方法制備期望的藥學(xué)可接受的鹽。例如用無機(jī)酸(諸如氫氯酸，氫溴酸，硫酸，硝酸，甲磺酸，磷酸等等)或用有機(jī)酸(諸如乙酸，馬來酸，琥珀酸，扁桃酸，富馬酸/延胡索酸，丙二酸，丙酮酸，草酸，乙醇酸，水楊酸，吡喃糖苷酸(pyranosidyl acid)(諸如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸)，α羥酸(諸如檸檬酸或酒石酸)，氨基酸(諸如天冬氨酸或谷氨酸)，芳香酸(諸如苯甲酸或肉桂酸)，磺酸(諸如對(duì)甲苯磺酸或乙磺酸)，等等)處理游離堿。例如，一般認(rèn)為適合于自堿性藥用化合物形成藥學(xué)有用的或可接受的鹽的酸的討論見P.Stahl et al,Camille G.(編)Handbook of Pharmaceutical Salts.Properties,Selection and Use.(2002)Zurich:Wiley-VCH；S.Berge et al,Journal of Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1 19；P.Gould,International J.of Pharmaceutics(1986)33 201 217；Anderson et al,The Practice of Medicinal Chemistry(1996),Academic Press,New York；Remington’s Pharmaceutical Sciences,18^th ed.,(1995)Mack Publishing Co.,Easton PA；以及The Orange Book(Food&Drug Administration,Washington,D.C.，在其網(wǎng)站上)。這些公開內(nèi)容通過對(duì)它們的援引收入本文。

短語“藥學(xué)可接受”指示物質(zhì)或組合物必須與構(gòu)成配制劑的其它成分，和/或用其治療的哺乳動(dòng)物是化學(xué)和/或毒理學(xué)相容的。

如本文中所使用的，術(shù)語“協(xié)同的”指比兩種或更多種單一藥劑的疊加效果更有效的治療組合。GDC-0941的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，和一種或多種治療劑之間的協(xié)同相互作用的確定可以基于自本文中描述的測(cè)定法獲得的結(jié)果?？梢杂肅alcuSyn軟件使用Chou和Talalay組合法和劑量-效果分析來分析這些測(cè)定法的結(jié)果以獲得組合指數(shù)(Chou和Talalay,1984,Adv.Enzyme Regul.22:27-55)。已經(jīng)在數(shù)種測(cè)定系統(tǒng)中評(píng)估了本發(fā)明提供的組合，而且可以利用由Chou和Talalay，“New Avenues in Developmental Cancer Chemotherapy”，Academic Press，1987，第2章中描述的用于量化抗癌劑之間的協(xié)同，疊加，和拮抗的標(biāo)準(zhǔn)程序來分析數(shù)據(jù)。組合指數(shù)小于0.8的值指示協(xié)同，大于1.2的值指示拮抗，而介于0.8和1.2之間的值指示疊加效應(yīng)。組合療法可提供“協(xié)同性”和證明“協(xié)同的”，即一起使用活性成分時(shí)所實(shí)現(xiàn)的效果大于分開使用化合物所致效果的和。當(dāng)活性成分如下所述時(shí)可獲得協(xié)同效應(yīng)：(1)以組合的單位劑量配制劑共配制和同時(shí)施用或投遞；(2)作為分開的配制劑交替或平行投遞；或(3)通過一些其它方案。當(dāng)在交替療法中投遞時(shí)，當(dāng)化合物序貫施用或投遞時(shí)(例如通過分開的注射器中的不同注射或者在分開的丸劑或片劑中)可以獲得協(xié)同效應(yīng)。一般而言，在交替療法期間，序貫(即連續(xù))施用有效劑量的每種活性成分，而在組合療法中，一起施用有效劑量的兩種或更多種活性成分。使用BLISS不依賴性模型和最高單一藥劑(HSA)模型兩者評(píng)估組合效應(yīng)(Lehár et al.2007,Molecular Systems Biology 3:80)。BLISS評(píng)分量化來自單一藥劑的加強(qiáng)程度，并且BLISS評(píng)分＞0提示大于簡(jiǎn)單疊加。HAS評(píng)分＞0提示比相應(yīng)濃度的單一藥劑響應(yīng)的最大值大的組合效應(yīng)。

“ELISA”(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)是“濕式實(shí)驗(yàn)室”類型分析性生物化學(xué)測(cè)定法的常用形式，其使用一種亞型的異質(zhì)固相酶免疫測(cè)定法(EIA)來檢測(cè)液體樣品或濕樣品中的物質(zhì)的存在(Engvall E,Perlman P(1971).″Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).Quantitative assay of immunoglobulin G″.Immunochemistry 8(9):871–4；Van Weemen BK,Schuurs AH(1971)″Immunoassay using antigen-enzyme conjugates″.FEBS Letters 15(3):232-236)。ELISA可以實(shí)施其它形式的配體結(jié)合測(cè)定法，而不是嚴(yán)格“免疫”測(cè)定法，盡管由于此方法的共同用途和發(fā)展歷史，該名稱帶有原始的“免疫”。所述技術(shù)本質(zhì)上需要能在固相上固定化的任何連接試劑以及會(huì)特異性結(jié)合并且使用酶以產(chǎn)生能適當(dāng)定量的信號(hào)的檢測(cè)試劑。在清洗之間，僅配體和其特異性結(jié)合對(duì)應(yīng)物通過抗原-抗體相互作用與固相保持特異性結(jié)合或“免疫吸附”，而洗去非特異性或未結(jié)合的組分。不像其它分光光度濕式實(shí)驗(yàn)室測(cè)定形式(其中可以在清洗后重復(fù)使用相同的反應(yīng)孔(例如比色杯))，ELISA板在作為板的一部分的固相上免疫吸附反應(yīng)產(chǎn)物，并且如此不容易重復(fù)使用。實(shí)施ELISA牽涉至少一種對(duì)特定抗原具有特異性的抗體。在固體支持物(通常是聚苯乙烯微量滴定板)上非特異性(經(jīng)由吸附至表面)或特異性(經(jīng)由對(duì)相同抗原特異性的另一種抗體捕獲，在“三明治式”ELISA中)固定化具有未知量的抗原的樣品。在固定化抗原后，添加檢測(cè)抗體，與抗原形成復(fù)合物。檢測(cè)抗體可以與酶共價(jià)連接，或者自身可以通過經(jīng)由生物綴合與酶連接的二抗檢測(cè)。在每個(gè)步驟之間，通常用溫和去污劑溶液清洗板以除去沒有特異性結(jié)合的任何蛋白質(zhì)或抗體。在最后的清洗步驟后，通過添加酶底物使板顯色以產(chǎn)生可見信號(hào)，其指示樣品中抗原的量。

“免疫組織化學(xué)”(IHC)是指通過利用抗體與生物組織中的抗原特異性結(jié)合的原理來檢測(cè)組織切片的細(xì)胞中的抗原(例如蛋白質(zhì))的過程。免疫組織化學(xué)染色廣泛用于診斷異常細(xì)胞，諸如在癌性腫瘤中發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞。特異性分子標(biāo)志物是特定細(xì)胞事件，諸如增殖或細(xì)胞死亡(凋亡)特征性的。IHC也廣泛用于了解生物標(biāo)志物和差異表達(dá)的蛋白質(zhì)在生物組織的不同部分中的分布和定位?？梢砸远喾N方式實(shí)現(xiàn)顯現(xiàn)抗體-抗原相互作用。在最常見的情況中，可以將抗體與能催化顏色產(chǎn)生反應(yīng)的酶(諸如過氧化物酶)綴合(見免疫過氧化物酶染色)。或者，也可以將抗體用熒光團(tuán)，諸如熒光素或羅丹明標(biāo)記(見免疫熒光)。

“免疫細(xì)胞化學(xué)”(ICC)是使用經(jīng)由特定表位靶向細(xì)胞中的特定肽或蛋白質(zhì)抗原的抗體的常見實(shí)驗(yàn)室技術(shù)。然后，可以使用幾種不同的方法檢測(cè)這些結(jié)合的抗體。ICC能評(píng)估特定樣品中的細(xì)胞是否表達(dá)所討論的抗原。在發(fā)現(xiàn)免疫陽性信號(hào)的情況中，ICC也確定哪個(gè)亞細(xì)胞區(qū)室在表達(dá)抗原。

“Kaplan-Meier圖”是用于從壽命數(shù)據(jù)評(píng)估存活函數(shù)的評(píng)估器(Kaplan,E.L.；Meier,P.(1958).“Nonparametric estimation from incomplete observations”.J.Amer.Statist.Assn.53(282)：457–481)。在醫(yī)學(xué)研究中，它常常用于測(cè)量治療后存活某個(gè)時(shí)間量的患者的分?jǐn)?shù)。存活函數(shù)的Kaplan-Meier評(píng)估的圖是一系列幅度下降的水平步長(zhǎng)，其在采集足夠大的樣品時(shí)接近該群體的真實(shí)存活函數(shù)。假設(shè)在連續(xù)的不同采樣觀察(“點(diǎn)擊”)之間的存活函數(shù)的值是恒定的。

臨床試驗(yàn)藥物

GDC-0941(pictrelisib,pictilisib,Genentech Inc.,Roche,RG-7321,CAS登記號(hào)957054-30-7)是PI3K同等型的有力的多靶性I類(泛)抑制劑。GDC-0941目前在用于治療晚期實(shí)體瘤的II期臨床試驗(yàn)中。GDC-0941命名為4-(2-(1H-吲唑-4-基)-6-((4-(甲基磺?；?哌嗪-1-基)甲基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)嗎啉(US 7781433；US 7750002；Folkes et al(2008)Jour.of Med.Chem.51(18):5522-5532)，并且具有結(jié)構(gòu)：

包括其立體異構(gòu)體，幾何異構(gòu)體，互變異構(gòu)體，和藥學(xué)可接受鹽。

磷酸肌醇3-激酶(PI3K)信號(hào)級(jí)聯(lián)(細(xì)胞存活，生長(zhǎng)和代謝的關(guān)鍵介導(dǎo)物)在人癌癥中頻繁改變。PIK3CA(編碼PI3K的α催化亞基的基因)中的激活性突變?cè)诩s30％的乳腺癌中發(fā)生。這些突變導(dǎo)致酶的組成性活性并且是致癌的。突變體PIK3CA H1047R在腔性乳腺上皮中的表達(dá)誘發(fā)表達(dá)腔和基底標(biāo)志物的異質(zhì)腫瘤，并且在雌激素受體方面呈陽性。PIK3CA H1047R癌基因靶向多能祖細(xì)胞，并且重演具有PIK3CA H1047R的人乳腺腫瘤的特征(Meyer et al(2011).Cancer Res；71(13):4344–51)。PI3K的高活化可以由于PIK3CA(編碼PI3K的p110α亞基的基因)中的體細(xì)胞突變而發(fā)生。HER2癌基因在所有乳腺癌的25％中擴(kuò)增，并且這些腫瘤中的一些還含有PIK3CA突變。PI3K能增強(qiáng)轉(zhuǎn)化并賦予對(duì)HER2定向療法的抗性。在也過表達(dá)HER2的MCF10A人乳腺上皮細(xì)胞中引入的PI3K突變E545K和H1047R對(duì)MCF10A/HER2細(xì)胞賦予功能獲得。表達(dá)芳香酶的MCF7細(xì)胞在培養(yǎng)物中將雄烯二酮轉(zhuǎn)化為雌激素。圖2顯示了用GDC-0941，來曲唑和GDC-0941和來曲唑的組合處理的PR+芳香酶抑制劑敏感性(頂部)和PR-，芳香酶抑制劑抗性(底部)細(xì)胞系MCF7-ARO(Wallin et al(2012)Clin Cancer Res；18:3901-3911)的細(xì)胞存活力的圖。H1047R PI3K而不是E545K PI3K的表達(dá)顯著上調(diào)HER3/HER4配體調(diào)蛋白(HRG)(Chakrabarty et al(2010)Oncogene 29(37):5193-5203)。

氟維司群(AstraZeneca，CAS登記號(hào)129453-61-8)是在美國(guó)批準(zhǔn)用于治療激素受體陽性(HR+)乳腺癌患者和在歐盟批準(zhǔn)用于ER+患者，包括在抗雌激素療法后具有疾病進(jìn)展的絕經(jīng)后女性的藥物(Kansra(2005)Mol Cell Endocrinol 239(1-2):27–36；Flemming et al(2009)Breast Cancer Res Treat.May；115(2):255-68；Valachis et al(2010)Crit Rev Oncol Hematol.Mar；73(3):220-7)。氟維司群是沒有激動(dòng)劑效果的雌激素受體拮抗劑，其既通過下調(diào)又通過降解雌激素受體起作用(Croxtall(2011)Drugs 71(3):363–380)。氟維司群命名為(7α,17β)-7-{9-[(4,4,5,5,5-五氟戊基)亞硫?；鵠壬基}雌-1,3,5(10)-三烯-3,17-二醇，并且具有結(jié)構(gòu)：

氟維司群屬于一類可逆性類固醇ER拮抗劑，其直接與雌激素競(jìng)爭(zhēng)ER結(jié)合，并且沒有他莫昔芬的部分激動(dòng)劑性質(zhì)。在結(jié)合ER后，它阻斷雌激素信號(hào)傳導(dǎo)并提高ER蛋白質(zhì)的降解。氟維司群對(duì)ER的親和力比他莫昔芬的親和力大大約100倍(Howell et al.(2000)Cancer 89:817-25)。與SERM一樣，氟維司群附著于雌激素受體并作為雌激素拮抗劑發(fā)揮功能。然而，與SERM不同，氟維司群沒有雌激素激動(dòng)劑效果。它是一種純抗雌激素。另外，在氟維司群結(jié)合雌激素受體時(shí)，受體被靶向破壞。

氟維司群(250mg每月一次)在2002年得到FDA批準(zhǔn)，并且在2004年得到EMA批準(zhǔn)，用于治療在抗雌激素療法后疾病進(jìn)展的絕經(jīng)后女性中的HR陽性MBC。在多中心III期研究中，發(fā)現(xiàn)氟維司群在二線設(shè)置中至少等同于阿那曲唑(一種非類固醇AI)(Howell et al.(2002)J Clin Oncol 20:3396-403；Osborne et al.(2002)J Clin Oncol 20:3386-95)。氟維司群用于晚期乳腺癌的一線治療時(shí)也與他莫昔芬一樣有活性(Howell et al.(2004)J Clin Oncol 22:1605-13)，并且在AI后轉(zhuǎn)移性疾病設(shè)置中在患者中顯示與非類固醇AI依西美坦相似的活性水平(Chia et al.(2008)J Clin Oncol 26:1664-70)。已經(jīng)證明了高劑量氟維司群(500mg每月一次)在臨床受益率和總體響應(yīng)率上至少與阿那曲唑一樣有效，并且與具有晚期HR陽性乳腺癌的女性的一線治療的顯著更長(zhǎng)的進(jìn)展前時(shí)間相關(guān)(Robertson et al.(2009)J Clin Oncol 27:4530-5)。高劑量的氟維司群最近表明在用500mg治療的具有ER陽性晚期乳腺癌的女性較之用250mg治療的患者中卓越的無進(jìn)展存活(PFS)(Di Leo et al.(2010)J Clin Oncol 28:4594-600)。氟維司群(250mg和500mg)在這些研究中耐受較好，并且比他莫昔芬產(chǎn)生更少的雌激素效應(yīng)，并且比AI阿那曲唑?qū)е赂俚年P(guān)節(jié)痛(Osborne et al.(2002)J Clin Oncol 20:3386-95)。這些結(jié)果導(dǎo)致批準(zhǔn)每月一次給予500mg氟維司群作為在美國(guó)和歐盟(2010年)用于在用AI治療后疾病已經(jīng)擴(kuò)散的絕經(jīng)后女性的當(dāng)前批準(zhǔn)的推薦劑量。這些研究表明，氟維司群是晚期乳腺癌患者的重要治療選擇，并且因而認(rèn)為是本研究的適當(dāng)?shù)膶?duì)照療法。

來曲唑(Novartis Pharm.)是一種口服非類固醇芳香酶抑制劑，用于治療手術(shù)后的激素響應(yīng)性乳腺癌(Bhatnagar et al(1990)J.Steroid Biochem.and Mol.Biol.37:1021；Lipton et al(1995)Cancer 75:2132；Goss,P.E.and Smith,R.E.(2002)Expert Rev.Anticancer Ther.2:249-260；Lang et al(1993)The Journal of Steroid Biochem.and Mol.Biol.44(4–6):421–8；EP 236940；US 4978672)。由FDA批準(zhǔn)用于治療絕經(jīng)后女性中激素受體陽性(HR+)或具有未知受體狀態(tài)的局部或轉(zhuǎn)移性乳腺癌。來曲唑命名為4,4’-((1H-1,2,4-三唑-1-基)亞甲基)二芐腈(CAS登記號(hào)112809-51-5)，并且具有結(jié)構(gòu)：

他莫昔芬是一種口服活性選擇性雌激素受體調(diào)控劑(SERM)，其用于治療乳腺癌。在1977年，他莫昔芬第一次由FDA(ICI Pharmaceuticals，現(xiàn)在為AstraZeneca)批準(zhǔn)用于治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌(Jordan VC(2006)Br J Pharmacol 147(Suppl 1):S269-76)。他莫昔芬是一種經(jīng)由其活性代謝物羥基他莫昔芬的乳腺組織中的雌激素受體拮抗劑。在其它組織，諸如子宮內(nèi)膜中，其表現(xiàn)為激動(dòng)劑，并且如此可以表征為混合的激動(dòng)劑/拮抗劑(New Engl.J.Med.(2009)361：766Aug.20,2009)。他莫昔芬是絕經(jīng)前女性中激素受體陽性乳腺癌的通常的內(nèi)分泌(抗雌激素)療法，并且也是絕經(jīng)后女性中的標(biāo)準(zhǔn)，盡管芳香酶抑制劑也頻繁在此設(shè)置中使用。他莫昔芬目前用于治療絕經(jīng)前和絕經(jīng)后女性中的早期和晚期雌激素受體(ER)陽性乳腺癌兩者(Jordan VC(1993)Br J Pharmacol 110(2):507-17)。它也得到FDA批準(zhǔn)用于在有發(fā)生疾病的高風(fēng)險(xiǎn)的女性中預(yù)防乳腺癌和用于降低對(duì)側(cè)(在相反乳房中)乳腺癌。他莫昔芬命名為(Z)-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N,N-二甲基乙胺(CAS登記號(hào)10540-29-1)，并且具有結(jié)構(gòu)：

臨床試驗(yàn)

對(duì)具有晚期或轉(zhuǎn)移性ER+乳腺癌(MBC)的患者進(jìn)行多中心，國(guó)際，隨機(jī)化，雙盲，安慰劑對(duì)照的II期試驗(yàn)，所述患者先前接受用芳香酶抑制劑治療，并且在接受AI(芳香酶抑制劑)療法時(shí)經(jīng)歷復(fù)發(fā)或進(jìn)展。

設(shè)計(jì)試驗(yàn)以評(píng)估在依靠AI療法已經(jīng)進(jìn)展的具有HR陽性MBC的絕經(jīng)后女性中對(duì)氟維司群添加時(shí)添加GDC-0941的PI3K途徑抑制是否能延長(zhǎng)PFS。見實(shí)施例1。含有PIK3CA中突變的體外和體內(nèi)乳腺癌模型通常對(duì)GDC-0941敏感(O’Brien et al.(2010)Clin Cancer Res 16:3670-83)。

研究目標(biāo)

·評(píng)估所有治療患者中的氟維司群+GDC-0941較之氟維司群+安慰劑的功效，如通過PFS測(cè)量的

·評(píng)估具有和沒有PIK3CA突變的患者中的氟維司群+GDC-0941對(duì)氟維司群+安慰劑的功效，如通過PFS測(cè)量的

·評(píng)估氟維司群+GDC-0941較之氟維司群+安慰劑的安全性，聚焦于國(guó)家癌癥研究所不利事件常見術(shù)語標(biāo)準(zhǔn)(National Cancer Institute Common Terminology Criteria for Adverse Events)第4.0版(NCI CTCAE v4.0)3和4級(jí)不利事件(AE)，嚴(yán)重AE(SAE)，和實(shí)驗(yàn)室異常

·評(píng)估所有治療患者中和具有和沒有PIK3CA突變和/或PTEN喪失的患者中氟維司群+GDC-0941的臨床活性，如通過響應(yīng)率，響應(yīng)的持續(xù)時(shí)間，臨床受益率(CBR)，和OS測(cè)量

·評(píng)估PIK3CA突變和PTEN喪失對(duì)用氟維司群+GDC-0941，和氟維司群+安慰劑治療的患者中的PFS，響應(yīng)率，和OS的預(yù)測(cè)和預(yù)后影響

·評(píng)估在與氟維司群一起施用時(shí)GDC-0941的藥動(dòng)學(xué)(PK)參數(shù)(AUC0-last，Cmax，Cmin)

·評(píng)估GDC-0941的PK參數(shù)和腫瘤響應(yīng)之間的潛在關(guān)系

·在具有和沒有GDC-0941施用的情況中探索氟維司群?jiǎn)吸c(diǎn)濃度

·探索藥物代謝酶和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和其它患者特異性共變量的藥物遺傳學(xué)差異與在與氟維司群一起施用時(shí)GDC-0941的PK之間的關(guān)系

·經(jīng)由患者樣品的別的分子表征鑒定治療響應(yīng)的潛在的新穎的預(yù)測(cè)生物標(biāo)志物

·依照治療分配比較患者的健康相關(guān)生活質(zhì)量(HRQL)和疼痛癥狀的差異

研究結(jié)果

表1：基線時(shí)的患者和腫瘤特征

表2：患者布置

表3：不利事件，不管與GDC-0941-氟維司群組的≥10％中的研究治療的關(guān)系如何

圖3A-C顯示了無進(jìn)展存活的Kaplan-Meier圖。群體：GDC-0941和安慰劑GDC-0941ITT(意向治療)患者?；谖捶謱拥腃ox模型評(píng)估危害比；基于未分層的時(shí)序檢驗(yàn)評(píng)估p值。益處在幾乎所有檢查的患者亞組中評(píng)估的所有PR+(孕酮受體陽性)患者群體中得到維持，指示PR+患者群體可以自用GDC-0941和氟維司群治療的方案得到實(shí)質(zhì)性益處。

表4：各個(gè)亞組間的無進(jìn)展存活分析

表5：各個(gè)亞組間的無進(jìn)展存活的分析

表6：

治療

在截止日期時(shí)，在PIK3CA突變體腫瘤患者中發(fā)生了總共37例進(jìn)行性疾病事件，并且總共84名患者在研究的第I部分中進(jìn)展。此時(shí)，隨訪的中值持續(xù)時(shí)間是5.7個(gè)月，組合組中及僅氟維司群組中的患者繼續(xù)接受研究治療。與接收安慰劑的患者的暴露的14.3周相比，對(duì)GDC-0941的暴露的中值持續(xù)時(shí)間是11.7周。在組合和僅氟維司群組中，對(duì)氟維司群的暴露的中值持續(xù)時(shí)間為16.0和16.1周。疾病進(jìn)展是組合療法(44％)和僅氟維司群組(52％)中最頻繁的中斷原因?？偣?8(31％)和10(13％)名患者分別在組合療法和僅氟維司群組中出于與疾病進(jìn)展無關(guān)的事件而中斷口服藥劑(GDC-0941或安慰劑)。藥動(dòng)學(xué)分析證明氟維司群暴露在所有原發(fā)性患者亞組間是相似的，并且可以通過使用I期數(shù)據(jù)開發(fā)的GDC-0941popPK模型較好地預(yù)測(cè)觀察到的GDC-0941暴露(數(shù)據(jù)未顯示)。

功效

在意向治療群體(N＝168；84例PFS事件)中，基于當(dāng)?shù)卣{(diào)查人員評(píng)估的放射攝影研究，中值無進(jìn)展存活(PFS)是6.3個(gè)月(對(duì)于GDC-0941加氟維司群)比3.8個(gè)月(對(duì)于安慰劑加氟維司群)(危害比，0.77；95％置信區(qū)間[CI]，0.50至1.19；P＝0.24)。見圖3A。對(duì)于具有可檢測(cè)的PIK3CA突變體腫瘤的患者(n＝70；34例PFS事件)，中值PFS是6.2個(gè)月(對(duì)于GDC-0941加氟維司群)比5.1個(gè)月(對(duì)于安慰劑加氟維司群)(對(duì)于進(jìn)展或死亡的危害比，0.92；95％CI，0.48至1.76；P＝0.81)，并且具有螺旋和激酶域突變的患者的PFS HR的95％CI在很大程度上是重疊的。見圖3B。對(duì)于沒有可檢測(cè)的PIK3CA突變體腫瘤的患者(n＝70；34例PFS事件)，中值PFS是5.8個(gè)月(對(duì)于GDC-0941加氟維司群)比3.6個(gè)月(對(duì)于安慰劑加氟維司群)(對(duì)于進(jìn)展或死亡的危害比，0.64；95％CI，0.35至1.17；P＝0.14)。見圖3C。

探索性的亞組分析(表6)提示了具有較好表現(xiàn)狀態(tài)(0對(duì)1)(僅牽涉骨的疾病)的患者和接受組合療法的具有孕酮受體陽性(PR)腫瘤的患者相對(duì)于僅接受氟維司群的患者的PFS改善的趨勢(shì)。在PR陽性亞組(n＝116，代表ITT的70％；57例PFS事件)中，中值PFS是7.2個(gè)月(對(duì)于GDC-0941加氟維司群)比3.7個(gè)月(對(duì)于安慰劑加氟維司群)(用于進(jìn)展或死亡的危害比，0.46；95％CI，0.27至0.78；P＝0.0042；相互作用檢驗(yàn)，P＝0.035；圖3A)。鑒于PR表達(dá)與腔性A亞型相關(guān)聯(lián)(Prat,2013)，通過定量逆轉(zhuǎn)錄酶PCR(qRT-PCR)用50基因預(yù)測(cè)器(PAM50)將患者樣品分類為內(nèi)在亞型。如預(yù)期，在通過此測(cè)定法評(píng)估的151份患者樣品中，大多數(shù)分類為腔性A或腔性B，在PR陽性亞組中的腔性A腫瘤富集(圖4)。在腔性A-陽性亞組(n＝98，代表ITT的65％；42例PFS事件)中，中值PFS是沒有達(dá)到的(對(duì)于GDC-0941加氟維司群)比5.26個(gè)月(對(duì)于安慰劑加氟維司群)(用于進(jìn)展或死亡的危害比，0.60；95％CI，0.32至1.12；P＝0.11；相互作用檢驗(yàn)，P＝0.23)。這兩個(gè)亞組(即具有PR陽性或腔性A腫瘤的患者)中的組合療法中的此種可能的改善不依賴于腫瘤PIK3CA突變狀態(tài)。進(jìn)一步探索性分析其腫瘤為PR陽性和腔性A亞型兩者的患者(n＝73，代表ITT的43％；34例PFS事件)，中值PFS是沒有達(dá)到的(對(duì)于組合療法)比5.7個(gè)月(對(duì)于安慰劑加氟維司群)(用于進(jìn)展或死亡的危害比，0.31；95％CI，0.14，0.67)。表8顯示了ITT，PR和腔性A/B亞組中的PFS分析的匯總。

表8：ITT，PR和腔性A/B亞組中的PFS分析的匯總

PR陽性和腔性A亞組的多變量分析提示了治療效果在調(diào)節(jié)可能的基線不平衡后得到維持(表9)。

表9：PR陽性和腔性A亞組的多變量分析

基于當(dāng)?shù)卦u(píng)估，響應(yīng)率在組合療法和僅氟維司群組中分別為7％和5％。在組合療法分支中治療的具有PIK3CA突變體腫瘤的經(jīng)歷響應(yīng)的患者比接受僅氟維司群的患者有數(shù)值更大的數(shù)目(13％比3％)。沒有可檢測(cè)的PIK3CA突變體腫瘤的患者的響應(yīng)率在組合療法和僅氟維司群群體中分別為2％和5％。

圖6顯示了根據(jù)腔性亞組的無進(jìn)展存活的Kaplan-Meier圖。比較用GDC-0941+氟維司群或安慰劑治療的腔性B患者與用GDC-0941+氟維司群或安慰劑治療的腔性A患者。腔性A亞型患者群體表現(xiàn)出對(duì)于受益于GDC-0941和氟維司群的組合是預(yù)后性的和預(yù)測(cè)性的。表10顯示了圖6的圖的評(píng)分。

表10：

HR＝危害比

CI＝組合指數(shù)

根據(jù)腔性亞組，圖7顯示了PR+患者的無進(jìn)展存活的Kaplan-Meier圖。

根據(jù)PR亞組，圖8顯示了腔性A患者的無進(jìn)展存活的Kaplan-Meier圖。

結(jié)論

●不依賴于PIK3CA突變狀態(tài)，GDC-0941+氟維司群在在前AI療法失敗的ER+MBC患者中是有活性的。GDC-0941+氟維司群將此患者組的中值PFS改善了10.5周(分別在安慰劑和GDC-0941治療組中從3.8至6.2個(gè)月)

●與氟維司群組合的340mg劑量的GDC-0941具有可接受的耐受性概況。非PD事件的中斷率(31％)類似于用其它途徑抑制劑觀察到的中斷率(BOLERO-2和TAMRAD，24％)。340mg劑量的毒性影響患者接受治療直至進(jìn)展的能力(66％的患者經(jīng)歷不利事件的劑量修改)。

●探索性分析提示PR+亞組實(shí)質(zhì)性受益于與內(nèi)分泌療法組合的GDC-0941。亞組分析提示益處在雌激素和孕酮受體兩者方面呈陽性的患者中是特別顯著的，這導(dǎo)致中值PFS的幾乎加倍并且超過15周的總體改善(在安慰劑和Pictilisib治療組中分別從3.7個(gè)月至7.2個(gè)月)。ITT分析被具有較差預(yù)后特征的患者(特別是在PR-亞組中)偏向安慰劑的不平衡性所混淆。PR+可以鑒定以初始內(nèi)分泌敏感性為特征的群體，其自用GDC-0941治療得到較大的益處。

藥物組合物和配制劑

本發(fā)明的藥物組合物或配制劑包含與一種或多種藥學(xué)可接受載劑，助流劑，稀釋劑或賦形劑一起配制的GDC-0941和治療劑的組合。

本發(fā)明的GDC-0941和治療劑可以以未溶劑化形式以及用藥學(xué)可接受溶劑，諸如水，乙醇，等溶劑化的形式存在，并且意圖是本發(fā)明涵蓋溶劑化和未溶劑化形式兩者。

本發(fā)明的化合物也可以以不同的互變異構(gòu)體形式存在，并且本發(fā)明的范圍內(nèi)涵蓋所有此類形式。術(shù)語“互變異構(gòu)體”或“互變異構(gòu)體形式”是指經(jīng)由低能壘可互變的不同能量的結(jié)構(gòu)異構(gòu)體。例如，質(zhì)子互變異構(gòu)體(也稱為質(zhì)子移變異構(gòu)體)包括經(jīng)由質(zhì)子遷移的互變，諸如酮-烯醇和亞胺-烯胺異構(gòu)化?；蟽r(jià)互變構(gòu)體包括通過重組一些成鍵電子的互變。

藥物組合物涵蓋散裝組合物和個(gè)別劑量單位兩者，它們包含超過一種(例如兩種)藥學(xué)活性劑(包括GDC-0941和選自本文中描述的別的藥劑的列表的治療劑)，以及任何藥學(xué)無活性的賦形劑，稀釋劑，載劑或助流劑。散裝組合物和每個(gè)個(gè)別劑量單位可以含有固定量的前述藥學(xué)活性劑。散裝組合物是尚未形成個(gè)別劑量單位的材料。例示性劑量單位是口服劑量單位，諸如片劑，丸劑，膠囊劑等。類似地，通過施用藥物組合物治療患者的方法也意圖涵蓋施用散裝組合物和個(gè)別劑量單位。

藥物組合物也涵蓋同位素標(biāo)記的本發(fā)明的化合物，其與本文中敘述的那些化合物相同，但是事實(shí)上一個(gè)或多個(gè)原子由具有與通常在自然界中找到的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)目不同的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)目的原子替換。規(guī)定的任何特定原子或元素的所有同位素都是本發(fā)明的化合物及其用途的范圍內(nèi)涵蓋的?？梢該饺氡景l(fā)明化合物中的示例性同位素包括氫，碳，氮，氧，磷，硫，氟，氯和碘的同位素，諸如²H，³H，¹¹C，¹³C，¹⁴C，¹³N，¹⁵N，¹⁵O，¹⁷O，¹⁸O，³²P，³³P，³⁵S，¹⁸F，³⁶Cl，¹²³I和¹²⁵I。某些同位素標(biāo)記的本發(fā)明的化合物(例如，用³H和¹⁴C標(biāo)記的那些化合物)可用于化合物和/或底物組織分布測(cè)定法。氚化(³H)和碳-14(¹⁴C)同位素因其易于制備和可檢測(cè)性是有用的。此外，用較重的同位素諸如氘(²H)替代可以提供源自較大的代謝穩(wěn)定性的某些治療優(yōu)點(diǎn)(例如延長(zhǎng)的體內(nèi)半衰期或降低的劑量要求)，并且因此在一些情況中可以是優(yōu)選的。正電子發(fā)射性同位素諸如¹⁵O，¹³N，¹¹C和¹⁸F可用于正電子發(fā)射斷層攝影術(shù)(PET)研究以檢查底物受體占據(jù)。一般地，可以通過遵循與下文的實(shí)施例中公開的那些規(guī)程類似的規(guī)程，通過用同位素標(biāo)記的試劑替代非同位素標(biāo)記的試劑制備經(jīng)同位素標(biāo)記的本發(fā)明的化合物。

依照治療組合中使用的標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)踐配制GDC-0941和治療劑以治療性處理(包括預(yù)防性處理)哺乳動(dòng)物(包括人)的過度增殖性病癥。本發(fā)明提供了包含與一種或多種藥學(xué)可接受的載劑，助流劑，稀釋劑，添加劑或賦形劑聯(lián)合的GDC-0941的藥物組合物。

合適的載劑，稀釋劑，添加劑和賦形劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且包括材料，諸如碳水化合物，蠟，水溶性和/或可膨脹聚合物，親水或疏水材料，明膠，油，溶劑，水等。使用的具體載劑，稀釋劑或賦形劑會(huì)取決于應(yīng)用本發(fā)明化合物的手段和目的。一般地，基于本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為對(duì)哺乳動(dòng)物施用安全(GRAS)的溶劑選擇溶劑。一般地，安全溶劑是無毒的水性溶劑，諸如水和在水中可溶或可混溶的其它無毒溶劑。合適的水性溶劑包括水，乙醇，丙二醇，聚乙二醇(例如PEG 400，PEG 300)，二甲亞砜(DMSO)，克列莫佛(cremophor)(例如CREMOPHORBASF)及其混合物。配制劑還可以包含一種或多種緩沖劑，穩(wěn)定劑，表面活性劑，潤(rùn)濕劑，潤(rùn)滑劑，乳化劑，懸浮劑，防腐劑，抗氧化劑，避光劑，助流劑，加工助劑，著色劑，甜味劑，香化劑(perfuming agent)，芳香劑，和提供藥物(即，本發(fā)明的化合物或其藥物組合物)的優(yōu)美呈現(xiàn)或有助于制造藥物產(chǎn)品(即藥物)的其它已知添加劑。

可以使用常規(guī)的溶解和混合規(guī)程制備配制劑。例如，在存在上文描述的一種或多種賦形劑的情況中在合適的溶劑中溶解散裝藥物物質(zhì)(即，本發(fā)明的化合物或化合物的穩(wěn)定化形式(例如與環(huán)糊精衍生物或其它已知的絡(luò)合劑的復(fù)合物)。通常將本發(fā)明的化合物配制成藥物劑量形式以提供容易可控制劑量的藥物并且使患者能夠遵守規(guī)定的方案。

根據(jù)用于施用藥物的方法，可以以多種方式包裝用于應(yīng)用的藥物組合物(或配制劑)。一般地，用于分配的制品包括其中已經(jīng)以適當(dāng)形式放置藥物配制劑的容器。合適的容器是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且包括諸如瓶(塑料和玻璃)，小囊，安瓿，塑料袋，金屬圓筒等材料。容器還可以包括防破壞的裝置，以防止不經(jīng)意地接近包裝的內(nèi)容物。另外，容器已經(jīng)在其上放置描述容器內(nèi)容物的標(biāo)簽。標(biāo)簽還可以包含適當(dāng)?shù)木妗?/p>

可以針對(duì)各種施用路徑和類型制備本發(fā)明化合物的藥物配制劑。例如，任選地，可以以凍干配制劑，研磨粉末或水性溶液的形式將具有期望純度的GDC-0941與藥學(xué)可接受的稀釋劑，載劑，賦形劑或穩(wěn)定劑混合(Remington's Pharmaceutical Sciences(1995)第18版,Mack Publ.Co.,Easton,PA)?？梢酝ㄟ^于環(huán)境溫度在適當(dāng)?shù)膒H，和在期望純度，與生理學(xué)可接受的載劑，即在采用的劑量和濃度對(duì)接受者無毒的載劑混合進(jìn)行配制。配制劑的pH主要取決于具體用途和化合物的濃度，但是可以在約3至約8的范圍內(nèi)。

藥物配制劑優(yōu)選是無菌的。特別地，要用于體內(nèi)施用的配制劑必須是無菌的。容易通過過濾流過無菌過濾膜完成此類滅菌。

通常可以以固體組合物，凍干配制劑或以水性溶液貯存藥物配制劑。

會(huì)以與較好醫(yī)療實(shí)踐一致的方式，即施用的量，濃度，進(jìn)度表，過程，媒介物和途徑來進(jìn)行本發(fā)明的藥物配制劑的定劑量和施用。在此上下文中考慮的因素包括治療的特定疾病，治療的特定哺乳動(dòng)物，個(gè)體患者的臨床狀況，病癥的原因，藥劑投遞位置，施用方法，施用安排，和醫(yī)學(xué)從業(yè)人員已知的其它因素。要施用的化合物的“治療有效量”會(huì)受此類考慮因素控制，并且是預(yù)防，改善或治療凝血因子介導(dǎo)的病癥必需的最小量。此類量?jī)?yōu)選低于對(duì)宿主有毒或使宿主顯著更易于出血的量。

每劑口服或腸胃外施用的GDC-0941的初始藥學(xué)有效量會(huì)在每天約0.01-1000mg/kg，即約0.1至20mg/kg患者體重的范圍中，使用的化合物的典型初始范圍為0.3至15mg/kg/天。GDC-0941的劑量和要施用的治療劑的劑量的范圍各自可以為每單位劑量形式約1mg至約1000mg，或每單位劑量形式約10mg至約100mg?？梢砸园粗亓坑?jì)約1:50至約50:1的比率，或以按重量計(jì)約1:10至約10:1的比率施用GDC-0941化合物和治療劑的劑量。

可接受的稀釋劑，載劑，賦形劑和穩(wěn)定劑在所采用的劑量和濃度對(duì)接受者是無毒的，而且包括緩沖劑，諸如磷酸鹽，檸檬酸鹽和其它有機(jī)酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫氨酸；防腐劑(諸如氯化十八烷基二甲基芐基銨；氯化己烷雙胺；苯扎氯銨，芐索氯銨；酚，丁醇或苯甲醇；對(duì)羥基苯甲酸烷基酯，諸如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環(huán)己醇；3-戊醇；和間甲酚)；低分子量(少于約10個(gè)殘基)多肽；蛋白質(zhì)，諸如血清清蛋白，明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，諸如甘氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，組氨酸，精氨酸或賴氨酸；單糖，二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖類，諸如蔗糖，甘露醇，海藻糖或山梨醇；成鹽反荷離子，諸如鈉；金屬?gòu)?fù)合物(例如Zn-蛋白質(zhì)復(fù)合物)；和/或非離子表面活性劑，諸如TWEEN^TM，CREMOPHORPLURONICS^TM或聚乙二醇(PEG)?；钚运帉W(xué)成分還可包載入例如通過凝聚技術(shù)或通過界面聚合制備的微膠囊(例如分別是羥甲基纖維素或明膠微膠囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊)，膠狀藥物投遞系統(tǒng)(例如脂質(zhì)體，清蛋白微球體，微乳劑，納米顆粒和納米膠囊)，或粗滴乳狀液。此類技術(shù)披露于例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版,(1995)Mack Publ.Co.,Easton,PA。

可以制備GDC-0941和治療性化合物的持續(xù)釋放制劑。持續(xù)釋放制劑的合適例子包括含有GDC-0941的固體疏水性聚合物的半透性基質(zhì)，該基質(zhì)以定型制品的形式存在，例如薄膜或微膠囊。持續(xù)釋放基質(zhì)的例子包括聚酯，水凝膠(例如聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))，聚交酯(US 3773919)，L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸酯的共聚物，不可降解的乙烯-乙酸乙烯，可降解的乳酸-乙醇酸共聚物諸如LUPRON DEPOT^TM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林構(gòu)成的可注射微球體)及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。

藥物配制劑包括那些適用于本文中詳述的施用路徑的。配制劑可以方便地以單位劑量形式呈現(xiàn)，并且可以通過藥學(xué)領(lǐng)域中公知的任何方法制備。技術(shù)和配制劑一般參見Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版(1995)Mack Publishing Co.,Easton,PA。此類方法包括使活性成分與構(gòu)成一種或多種輔助成分的載劑聯(lián)合的步驟。一般地，通過使活性成分與液體載劑或細(xì)分的固體載劑或兩者均勻且密切地聯(lián)合，然后若需要的話使產(chǎn)品成型來制備配制劑。

適于口服施用的GDC-0941和/或治療劑的配制劑可以制備為離散單位，諸如丸劑，硬的或軟的，例如明膠膠囊，扁囊劑，含片，錠劑，水性或油性懸浮劑，可分散粉劑或顆粒劑，乳劑，糖漿劑或酏劑，各自含有預(yù)定量的GDC-0941和/或治療劑?？梢砸越M合配制劑將該量的GDC-0941和該量的治療劑配制成丸劑，膠囊，溶液或懸浮液?；蛘?，可以將GDC-0941和治療劑分開配制成丸劑，膠囊，溶液或懸浮液，用于通過交替施用。

配制劑可以依照本領(lǐng)域已知用于制造藥物組合物的任何方法來制備，而且此類組合物可以含有一種或多種藥劑，包括增甜劑，矯味劑，著色劑和防腐劑，以提供美味的制劑。壓制片劑可以通過在合適的機(jī)器中壓迫自由流形式(諸如粉末或顆粒)的活性組分來制備，任選混合有粘合劑，潤(rùn)滑劑，惰性稀釋劑，防腐劑，表面活性劑或分散劑。鑄制片劑可以通過在合適的機(jī)器中澆鑄用惰性液體稀釋劑弄濕的粉狀活性組分的混合物來制備。片劑可以任選包衣或刻痕，而且任選配制成以自其提供活性組分的緩慢或受控釋放。

本發(fā)明的藥物配制劑的片劑賦形劑可以包括：填充劑(或稀釋劑)，以提高構(gòu)成片劑的粉狀藥物的散裝體積；崩解劑，當(dāng)它被攝入時(shí)，以促進(jìn)片劑分解成小碎片，理想的是各藥物顆粒，并促進(jìn)藥物的快速溶解和吸收；粘合劑，以確保能形成具有所需機(jī)械強(qiáng)度的顆粒劑和片劑，并在片劑壓制后保持它成一體，防止它在包裝，運(yùn)輸和例行操作期間分解成其成分粉末；助流劑，以在生產(chǎn)期間改進(jìn)構(gòu)成片劑的粉末的流動(dòng)性；潤(rùn)滑劑，以確保制成片劑的粉末不會(huì)在制造期間粘附至用于壓制片劑的設(shè)備。它們改進(jìn)粉末混合物經(jīng)過壓片機(jī)的流動(dòng)并使制成的片劑自設(shè)備噴出時(shí)的摩擦和破裂最小化；抗粘附劑，功能與助流劑相似，降低制造期間構(gòu)成片劑的粉末和用于沖壓出片劑形狀的機(jī)器之間的粘附；摻入片劑的矯味劑，以給予片劑更令人愉快的味道或掩蓋令人不快的味道，和著色劑，以幫助鑒別和患者順從。

含有與適合于制備片劑的無毒藥學(xué)可接受賦形劑混合的活性組分的片劑是可接受的。這些賦形劑可以是例如惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣或鈉，乳糖，磷酸鈣或鈉；?；捅澜鈩T如玉米淀粉，或海藻酸；粘合劑，諸如淀粉，明膠或阿拉伯膠；和潤(rùn)滑劑，諸如硬脂酸鎂，硬脂酸或滑石。片劑可以是未包衣的，或者可以通過已知技術(shù)來包衣，包括微囊化，以延遲胃腸道中的崩解和吸收，并由此提供較長(zhǎng)一段時(shí)間里的持續(xù)作用。例如，可以單獨(dú)地或與蠟一起地采用延遲時(shí)間的材料，諸如甘油基單硬脂酸酯或甘油基二硬脂酸酯。

為了治療眼或其它外部組織，例如口和皮膚，配制劑優(yōu)選作為以例如0.075至20％w/w的量含有活性組分的表面軟膏劑或乳膏來應(yīng)用。當(dāng)配制成軟膏劑時(shí)，可以與石蠟或水易混的軟膏劑基材一起采用活性組分?；蛘?，可以與水包油乳膏基材一起在乳膏中配制活性組分。

乳膏基材的水相可以包括多羥基醇，即具有兩個(gè)或更多個(gè)羥基的醇，諸如丙二醇，丁烷1,3-二醇，甘露醇，山梨醇，甘油和聚乙二醇(包括PEG 400)及其混合物。表面配制劑可以根據(jù)需要包括增強(qiáng)活性組分經(jīng)由皮膚或其它受影響區(qū)域吸收或穿透的化合物。此類皮膚穿透增強(qiáng)劑的例子包括二甲亞砜及相關(guān)類似物。

本發(fā)明的乳狀液的油相可以以已知方式自已知組分構(gòu)建，包括至少一種乳化劑與脂肪或油，或與脂肪和油二者的混合物。優(yōu)選的是，與起穩(wěn)定劑作用的親脂性乳化劑一起包括親水性乳化劑?？偠灾谟谢驘o穩(wěn)定劑的情況中，乳化劑構(gòu)成乳化蠟，而且蠟與油和脂肪一起構(gòu)成乳化軟膏基材，其形成乳膏配制劑的油性分散相。適合于在本發(fā)明的配制劑中使用的乳化劑和乳狀液穩(wěn)定劑包括60，80，十六醇十八醇混合物，苯甲醇，肉豆蔻醇，甘油基單硬脂酸酯和月桂基硫酸鈉。

本發(fā)明的藥物配制劑的水性懸浮液含有與適合于制備水性懸浮液的賦形劑混合的活性材料。此類賦形劑包括：懸浮劑，諸如羧甲基纖維素鈉，交聯(lián)羧甲纖維素，聚維酮，甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素，藻酸鈉，聚乙烯吡咯烷酮，黃芪膠和阿拉伯膠；和分散劑或濕潤(rùn)劑，諸如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)，烯烴氧化物與脂肪酸的縮合產(chǎn)物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)，環(huán)氧乙烷與長(zhǎng)鏈脂族醇的縮合產(chǎn)物(例如十七碳乙烯氧基鯨蠟醇)，環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的縮合產(chǎn)物(例如聚氧乙烯山梨聚糖單油酸酯)。水性懸浮液還可以含有一種或多種防腐劑，諸如對(duì)羥基苯甲酸乙酯或?qū)αu基苯甲酸正丙酯；一種或多種著色劑；一種或多種矯味劑；和一種或多種增甜劑，諸如蔗糖或糖精。

藥物組合物可以是無菌可注射制劑形式，諸如無菌可注射水性或油性懸浮液?？梢砸勒找阎夹g(shù)，使用上文所述那些合適的分散劑或濕潤(rùn)劑和懸浮劑來配制這種懸浮液。無菌可注射制劑可以是在無毒胃腸外可接受稀釋劑或溶劑中的溶液或懸浮液，諸如在1,3-丁二醇中或自凍干粉制備的溶液。在可以采用的可接受的媒介和溶劑中有水，林格氏溶液和等張氯化鈉溶液。另外，可以方便地采用無菌非揮發(fā)性油作為溶劑或懸浮介質(zhì)。為了這一目的，可以采用任何溫和的非揮發(fā)性油，包括合成的甘油單酯或二酯。另外，脂肪酸諸如油酸同樣可以用于制備可注射制劑。

可以與載劑材料組合以產(chǎn)生單個(gè)劑量形式的活性組分的量會(huì)根據(jù)所治療的宿主和具體的施用模式而變化。例如，預(yù)定對(duì)人口服施用的時(shí)間-釋放配制劑可以含有大約1至1000mg的活性材料，其與適當(dāng)和方便量的載劑材料復(fù)合，載劑材料可以在總組合物的約5至約95％(重量:重量)變化?？梢灾苽渌幬锝M合物來提供容易測(cè)量的量供施用。例如，預(yù)定用于靜脈內(nèi)輸注的水溶液可以含有約3至500μg的活性組分每毫升溶液，以便能以約30mL/小時(shí)的速率輸注合適的體積。

適合于胃腸外施用的配制劑包括水性和非水性無菌注射溶液，其可以含有抗氧化劑，緩沖劑，抑菌劑和使得配制劑與預(yù)定接受者的血液等張的溶質(zhì)；和水性和非水性無菌懸浮液，其可以包括懸浮劑和增稠劑。

適合于表面施用于眼的配制劑還包括滴眼液，其中活性組分在適合于活性組分的載劑(尤其是水性溶劑)中溶解或懸浮?；钚越M分優(yōu)選以約0.5至20％w/w，例如約0.5至10％w/w，例如約1.5％w/w的濃度存在。

適合于在口中表面施用的配制劑包括在調(diào)味基材(通常是蔗糖和阿拉伯膠或黃芪膠)中包含活性組分的錠劑；在惰性基材(諸如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠)中包含活性組分的軟錠劑(pastilles)；和在合適的液體載劑中包含活性組分的漱口水。

用于直腸施用的配制劑可以作為具有合適基材(包括例如可可脂或水楊酸鹽)的栓劑存在。

適合于肺內(nèi)或鼻部施用的配制劑具有例如0.1至500微米范圍內(nèi)的粒度(包括介于0.1和500微米之間的范圍中的粒度，增量幾微米，諸如0.5，1，30微米，35微米，等)，其通過經(jīng)鼻道快速吸入或通過經(jīng)口吸入從而到達(dá)肺泡囊來施用。合適的配制劑包括活性組分的水性或油性溶液。適合于氣霧劑或干粉施用的配制劑可以依照常規(guī)方法來制備，而且可以與其它治療劑諸如以前用于治療或預(yù)防下文所述病癥的化合物一起遞送。

適合于陰道施用的配制劑可以作為在活性組分之外含有諸如本領(lǐng)域已知適宜的載劑的陰道栓(pessaries)，棉塞(tampons)，乳膏劑，凝膠劑，糊劑，泡沫劑或噴霧配制劑呈現(xiàn)。

可以將配制劑包裝在單劑(unit-dose)或多劑(multi-dose)容器中，例如密封的安瓿和管形瓶，而且可以將其在冷凍干燥(凍干)條件下貯存，在臨使用前僅需要添加無菌液體載劑，例如水以便注射。由先前所述種類的無菌粉末，顆粒和片劑制備臨場(chǎng)注射的溶液和懸浮液。優(yōu)選的單位劑量配制劑為那些含有如上所述每日劑量或單位每日亞劑量或其合適分?jǐn)?shù)的活性組分的。

本發(fā)明進(jìn)一步提供了獸用組合物，其包含至少一種如上定義的活性組分及其獸用載劑。獸用載劑為可用于施用所述組合物目的的材料，并且可以為固體，液體或氣態(tài)物質(zhì)，它們?cè)谄渌矫娉识栊曰蛟讷F藥領(lǐng)域中可接受的，而且與活性組分相容的?？梢晕改c外，口服或通過任何其它期望途徑來施用這些獸用組合物。

組合療法

可以與內(nèi)分泌治療劑組合采用GDC-0941以治療孕酮受體陽性(PR+)和/或腔性A型乳腺癌。在某些實(shí)施方案中，在單一配制劑中將GDC-0941與內(nèi)分泌治療劑組合為單一片劑，丸劑，膠囊劑或溶液劑以同時(shí)施用組合。在其它實(shí)施方案中，依照劑量方案或療法過程在分開的配制劑中以分開的片劑，丸劑，膠囊劑或溶液劑施用GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑以序貫施用GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑。GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑的組合可以具有協(xié)同特性。藥物組合配制劑或給藥方案的內(nèi)分泌治療劑優(yōu)選對(duì)GDC-0941具有互補(bǔ)活性，并且使得它們彼此沒有不利地彼此影響。可以以對(duì)于預(yù)定目的有效的量施用治療組合的此類化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物配制劑包含GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑，諸如本文中描述的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，通過給藥方案施用治療組合，其中在每日兩次至每三周一次(q3wk)的范圍中施用治療有效量的GDC-0941，并且在每日兩次至每三周一次的范圍中交替分開施用治療有效量的內(nèi)分泌治療劑。

本發(fā)明的治療組合包括GDC-0941和選自氟維司群和來曲唑的內(nèi)分泌治療劑，用于在治療乳腺癌中分開，同時(shí)或序貫使用。

可以以同時(shí)或序貫方案施用組合療法。當(dāng)序貫施用時(shí)，可以以兩次或更多次施用來施用組合。組合施用包括使用分開的配制劑或單一藥物配制劑的共施用，和任一次序的序貫施用，其中優(yōu)選存在有所有活性劑同時(shí)發(fā)揮它們的生物學(xué)活性的一段時(shí)間。

任何上述共施用藥劑的合適劑量就是那些當(dāng)前使用的，而且可以由于新鑒定的藥劑和其它治療劑或處理的組合作用(協(xié)同)而降低，諸如以提高治療指數(shù)或減輕毒性或其它副作用或后果。

在抗癌療法的具體實(shí)施方案中，可以作為輔助療法與手術(shù)療法和放射療法組合治療組合。依照本發(fā)明的組合療法包括施用GDC-0941和一種或多種其它癌癥治療方法或模式。會(huì)選擇GDC-0941和治療劑的量和相對(duì)施用時(shí)機(jī)以實(shí)現(xiàn)期望的組合治療效果。

藥物組合物的施用

可以通過對(duì)于要治療的狀況適宜的任何路徑施用本發(fā)明的治療組合。合適的路徑包括口服，胃腸外(包括皮下，肌肉內(nèi)，靜脈內(nèi)，動(dòng)脈內(nèi)，吸入，皮內(nèi)，鞘內(nèi)，硬膜外，和輸注技術(shù))，透皮，直腸，鼻，表面(包括口腔和舌下)，陰道，腹膜內(nèi)，肺內(nèi)和鼻內(nèi)。表面施用還可涉及使用透皮施用諸如透皮貼或離子透入裝置。藥物配制的討論見Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，(1995)Mack Publishing Co.，Easton，PA。藥物配制劑的其它例子可見于Liberman，H.A.和Lachman，L.，編，Pharmaceutical Dosage Forms，Marcel Decker，第3卷，第2版，New York，NY。對(duì)于局部免疫抑制治療，可以通過損傷內(nèi)施用來施用化合物，包括灌注或以其它方式在移植前使移植物接觸抑制劑。應(yīng)當(dāng)領(lǐng)會(huì)，優(yōu)選的路徑可以隨例如接受者的狀況而變化。若口服施用化合物，則它可以與藥學(xué)可接受載劑，助流劑，或賦形劑一起配制成丸劑，膠囊劑，片劑，等。若胃腸外施用化合物，則它可以與藥學(xué)可接受胃腸外媒介或稀釋劑一起，及以單位劑量可注射形式配制，如下文詳述的。

治療人患者的劑量的范圍可以為約1mg至約1000mg的GDC-0941，諸如約5mg至約20mg的化合物。根據(jù)藥動(dòng)學(xué)(PK)和藥效學(xué)(PD)特性，包括特定化合物的吸收，分布，代謝和排泄，可以一天一次(QD)，每天兩次(BID)，或更頻繁施用劑量。另外，毒性因素可以影響劑量和施用給藥方案。當(dāng)口服施用時(shí)，可以每天兩次，每天或更低頻率(諸如每周或每?jī)苫蛉芤淮?攝入丸劑，膠囊劑或片劑達(dá)規(guī)定的時(shí)間段?？梢詫⒎桨钢貜?fù)多個(gè)治療周期。

治療方法

本發(fā)明的方法包括：

●基于生物標(biāo)志物鑒定的診斷方法；

●測(cè)定患者是否會(huì)響應(yīng)GDC-0941或GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑的組合的方法；

●通過監(jiān)測(cè)GDC-0941或GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑的組合的清除來優(yōu)化治療功效的方法；

●通過監(jiān)測(cè)治療劑抗性突變的發(fā)生來優(yōu)化GDC-0941或GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑的組合的治療方案的方法；和

●用于鑒定哪些患者會(huì)最受益于用GDC-0941，或GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑的組合療法治療并且對(duì)患者監(jiān)測(cè)其對(duì)用GDC-0941，或GDC-0941和內(nèi)分泌治療劑的組合療法治療的敏感性和響應(yīng)性的方法。

本發(fā)明的方法可用于在哺乳動(dòng)物(例如人)中抑制異常細(xì)胞生長(zhǎng)或治療過度增殖性病癥諸如癌癥。例如，所述方法可用于診斷，監(jiān)測(cè)和治療哺乳動(dòng)物(例如人)中的多發(fā)性骨髓瘤，淋巴瘤，白血病，前列腺癌，乳腺癌，肝細(xì)胞癌，胰腺癌和/或結(jié)腸直腸癌。

(1)GDC-0941和(2)內(nèi)分泌治療劑的治療組合可用于治療疾病，狀況和/或病癥，包括但不限于那些以PI3激酶途徑的激活為特征的。因而，本發(fā)明的另一個(gè)方面包括治療能通過抑制脂質(zhì)激酶(包括PI3)來治療的疾病或狀況的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，用于治療實(shí)體瘤或造血惡性的方法包括以組合配制劑或通過交替對(duì)哺乳動(dòng)物施用治療組合，其中所述治療組合包含治療有效量的GDC-0941和治療有效量的一種或多種選自氟維司群和來曲唑的內(nèi)分泌治療劑?？梢圆捎?1)GDC-0941和(2)內(nèi)分泌治療劑的治療組合治療過度增殖性疾病或病癥，包括造血惡性，腫瘤，癌癥和新生性組織，以及惡性前和非新生性或非惡性過度增殖性病癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，用治療組合和藥學(xué)可接受的載劑，佐劑或媒介物治療人患者，其中所述治療組合的GDC-0941或其代謝物以可檢測(cè)地抑制PI3激酶活性的量存在。

造血惡性包括非何杰金氏淋巴瘤，彌漫性大造血淋巴瘤，濾泡性淋巴瘤，套細(xì)胞淋巴瘤，慢性淋巴細(xì)胞性白血病，多發(fā)性骨髓瘤，AML和MCL。

本發(fā)明的另一方面提供了用于在患有本文中描述的疾病或狀況的哺乳動(dòng)物，例如人中治療此類疾病或狀況中使用的藥物組合物或治療劑組合。還提供了藥物組合物在制備用于在患有本文中描述的病癥和狀況的溫血?jiǎng)游?諸如哺乳動(dòng)物，例如人)中治療此類疾病和狀況的藥物中的用途。

制品

在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了可用于治療上文描述的疾病和病癥的含有GDC-0941的制品或“試劑盒”。在一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒包含裝有GDC-0941的容器。試劑盒可以進(jìn)一步包括在容器上或與容器相關(guān)聯(lián)的標(biāo)簽或包裝插頁。術(shù)語“包裝插頁”用于指通常包括在治療用產(chǎn)品的商業(yè)包裝中的用法說明書，其含有關(guān)于關(guān)注此類治療用產(chǎn)品應(yīng)用的適應(yīng)征，用法，劑量，施用，禁忌癥，和/或警告的信息。合適的容器包括例如瓶，管形瓶，注射器，泡罩包等。容器可以由多種材料，諸如玻璃或塑料制成。容器可以容納有效用于治療狀況的GDC-0941或其配制劑，并且可以具有無菌存取口(例如，容器可以是具有皮下注射針可刺穿的塞子的管形瓶或靜脈內(nèi)溶液袋)。組合物中的至少一種活性劑是GDC-0941。標(biāo)簽或包裝插頁指示該組合物用于治療選擇的狀況，諸如癌癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，標(biāo)簽或包裝插頁指示可以使用包含式I化合物的組合物治療源自異常細(xì)胞生長(zhǎng)的病癥。標(biāo)簽或包裝插頁也可指示可以使用組合物治療其它病癥?；蛘?另外，制品可以進(jìn)一步包含第二容器，其包含藥學(xué)可接受的緩沖液，例如抑菌性注射用水(BWFI)，磷酸鹽緩沖鹽水，林格(Ringer)氏溶液和右旋糖溶液。它可以進(jìn)一步包含商業(yè)和使用者立場(chǎng)上所期望的其它物質(zhì)，包括其它緩沖劑，稀釋劑，濾器，針，和注射器。

試劑盒可以進(jìn)一步包括關(guān)于施用GDC-0941和(若存在的話)第二藥物配制劑的指導(dǎo)。例如，如果試劑盒包含包含GDC-0941的第一組合物和第二藥物配制劑，那么試劑盒可以進(jìn)一步包括關(guān)于對(duì)有此需要的患者同時(shí)，序貫或分開施用第一和第二藥物組合物的指導(dǎo)。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒適合于投遞固體口服形式的GDC-0941，諸如片劑或膠囊劑。此類試劑盒優(yōu)選包括多個(gè)單位劑量。此類試劑盒可以包含以其預(yù)期使用的次序?qū)┝咳∠虻目?。此類試劑盒的一個(gè)例子是“泡罩包”。泡罩包是包裝業(yè)中公知的，并且廣泛用于包裝藥物單位劑型。若想要的話，可以提供記憶輔助物，例如以數(shù)字，字母或其它標(biāo)記的形式或用日歷插頁，指派治療日程表中可以施用劑量的日期。

依照一個(gè)實(shí)施方案，試劑盒可以包含(a)其中裝有GDC-0941的第一容器；和任選地(b)其中裝有第二藥物配制劑的第二容器，其中所述第二藥物配制劑包含具有抗過度增殖活性的第二化合物。或者/另外，試劑盒可以進(jìn)一步包含第三容器，其包含藥學(xué)可接受的緩沖液，諸如抑菌性注射用水(BWFI)，磷酸鹽緩沖鹽水，林格氏溶液和右旋糖溶液。它可以進(jìn)一步包含商業(yè)和使用者立場(chǎng)上所期望的其它物質(zhì)，包括其它緩沖劑，稀釋劑，濾器，針，和注射器。

在試劑盒包含GDC-0941和第二治療劑(即治療劑)的情況中，試劑盒可以包含用于容納分開的組合物的容器，諸如分開的瓶或分開的箔包，然而，分開的組合物也可以包含在單一未分開的容器內(nèi)。通常，試劑盒包含用于施用分開的組分的指導(dǎo)。在分開的組分優(yōu)選以不同的劑量形式(例如口服和胃腸外)施用，以不同的劑量間隔施用時(shí)，或在開處方的內(nèi)科醫(yī)生期望滴定組合的個(gè)別組分時(shí)，該試劑盒形式是特別有利的。

實(shí)施例

實(shí)施例1：用GDC-0941治療腔性A型乳腺癌患者的臨床研究

試驗(yàn)設(shè)計(jì)：對(duì)具有晚期或轉(zhuǎn)移性乳腺癌(MBC)的患者進(jìn)行一項(xiàng)多中心，國(guó)際，隨機(jī)化，雙盲的，安慰劑對(duì)照的，II期試驗(yàn)，所述患者先前已經(jīng)接受用芳香酶抑制劑治療，并且在接受AI(芳香酶抑制劑)療法的情況中經(jīng)歷復(fù)發(fā)或進(jìn)展?；颊呓邮苡?1)GDC-0941340mg+氟維司群，(2)安慰劑+氟維司群，或(3)安慰劑治療?；颊咴谥芷?的第1天(隨機(jī)化前)和第15天(隨機(jī)化后)和周期2的第1天和此后每28天接受肌肉內(nèi)(IM)氟維司群500mg，與在周期1的第15天開始每天一次口服施用并且連續(xù)施用的接著的實(shí)驗(yàn)治療組合。

研究設(shè)計(jì)為評(píng)估與單一藥劑氟維司群相比對(duì)氟維司群添加GDC-0941對(duì)PFS的影響。在所有治療的患者(不依賴于來自腫瘤的診斷評(píng)估的結(jié)果)中和在診斷陽性患者的特定子集中實(shí)施這些比較(見測(cè)定方法部分)。在篩選時(shí)；在周期2，4，6，8和11結(jié)束時(shí)；并且此后每12周，在接著的周期的第1天的研究治療啟動(dòng)前實(shí)施功效腫瘤評(píng)估。見圖1。

主要終點(diǎn)是無進(jìn)展存活(PFS)，其基于所有治療患者和具有PIK3CA突變體腫瘤的患者中由當(dāng)?shù)卣{(diào)查人員評(píng)估的放射攝影研究。

基于這些診斷子集在具有ER陽性MBC的患者中的設(shè)想的(projected)流行度，此研究的登記包括具有PIK3CA基因中的活化性突變的隨機(jī)化患者及具有PTEN表達(dá)的喪失(和PIK3CA野生型)的隨機(jī)化患者(Saal et al.(2005)Cancer Res 65:2554-9；Stemke-Hale et al.(2008)Cancer Res 68:6084-91)。此樣本允許在總體群體及生物標(biāo)志物陽性和陰性子集兩者中對(duì)兩種實(shí)驗(yàn)藥劑進(jìn)行提供信息的評(píng)估(見統(tǒng)計(jì)方法部分)。如果具有生物標(biāo)志物陽性腫瘤的患者的流行度低于設(shè)想的，那么一旦隨機(jī)化足夠數(shù)目的患有野生型腫瘤的患者就可以將適格性進(jìn)一步限制于其腫瘤含有PIK3CA突變或PTEN蛋白質(zhì)喪失的患者(參見統(tǒng)計(jì)方法部分)。

在隨機(jī)化前需要存檔腫瘤樣品中的PIK3CA突變狀態(tài)和PTEN表達(dá)的前瞻性分析。為了最小化完成患者分層需要的存檔腫瘤樣品的分子分析延遲治療的可能性，在隨機(jī)化前對(duì)周期1第1天登記合格的患者給予單劑肌肉內(nèi)(IM)氟維司群(500mg)(這會(huì)啟動(dòng)氟維司群“導(dǎo)入(run-in)”期)。

在氟維司群導(dǎo)入期(周期1第1天至周期1第14天)期間以1:1:1比率(GDC-0941 340mg:GDC-0980 30mg:與GDC-0941 340mg或GDC-0980 30mg對(duì)應(yīng)的安慰劑)將患者隨機(jī)化至實(shí)驗(yàn)治療分支。與在周期1的第15天開始每天一次口服施用GDC-0941，GDC-0980或安慰劑組合，患者在周期1的第15天(在隨機(jī)化后)和后續(xù)28天周期的第1天接受氟維司群500mg。

使用三種變量對(duì)患者分層：PI3K途徑改變狀態(tài)，對(duì)在前AI療法的抗性(原發(fā)性或繼發(fā)性抗性)和可測(cè)量的疾病(對(duì)不可測(cè)量)。原發(fā)性抗性定義為1)在輔助性設(shè)置中完成AI治療的6個(gè)月(即26周)期間或之內(nèi)的疾病復(fù)發(fā)，或2)在轉(zhuǎn)移性設(shè)置中開始AI治療的6個(gè)月內(nèi)的疾病進(jìn)展和對(duì)AI治療沒有響應(yīng)。繼發(fā)性抗性定義為最少6個(gè)月的SD，或?qū)υ谇稗D(zhuǎn)移性AI治療的完全響應(yīng)(CR)或PR。經(jīng)由使用動(dòng)態(tài)分級(jí)隨機(jī)化算法及使用預(yù)定義的分層變量將患者分配到研究分支。患者接受研究治療直到進(jìn)展，不可耐受的毒性，選擇性退出研究，或研究完成或終止。接受安慰劑的患者有機(jī)會(huì)接受開放標(biāo)簽交換療法，以接受與他們接受的安慰劑匹配的實(shí)驗(yàn)研究治療。該方案為出于不利事件的劑量中斷或研究藥物治療的減少/降低提供詳細(xì)準(zhǔn)則。

結(jié)局測(cè)量：所有治療患者中和具有PI3K途徑異常的患者中的主要功效結(jié)局測(cè)量是：PFS(無進(jìn)展存活)，定義為自周期1第1天的第一劑氟維司群至疾病進(jìn)展的第一次觀察(如由調(diào)查人員按照改良實(shí)體瘤響應(yīng)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)第1.1版(RECIST v1.1)評(píng)估的)或研究時(shí)任何原因的死亡(最后一劑研究治療后≤30天)的時(shí)間。在所有治療患者中和具有PI3K途徑異常的患者中的次要活性結(jié)局測(cè)量如下：

·未確認(rèn)的和已確認(rèn)的客觀腫瘤響應(yīng)的比率，如由調(diào)查人員按照改良RECIST v1.1評(píng)估的

·臨床受益率，如通過經(jīng)歷完全響應(yīng)(CR)，部分響應(yīng)，或穩(wěn)定疾病達(dá)至少24周的患者的百分比定義的

·已確認(rèn)的客觀響應(yīng)的持續(xù)時(shí)間，定義為自客觀腫瘤響應(yīng)的第一次觀察直到疾病進(jìn)展的第一次觀察(如由調(diào)查人員按照改良RECIST v1.1評(píng)估的)，穩(wěn)定疾病或更好的最近腫瘤評(píng)估，或研究時(shí)任何原因的死亡(最后一劑研究治療后≤30天)的時(shí)間，

·OS定義為自治療啟動(dòng)直到任何原因的死亡的時(shí)間。會(huì)使用下面的結(jié)局測(cè)量來評(píng)估與GDC-0941組合時(shí)的氟維司群，或安慰劑的安全性和可耐受性：

·依照NCI CTCAE v4.0分級(jí)的AE的發(fā)生率，性質(zhì)，和嚴(yán)重性，

·施用研究治療期間和之后生命體征，身體發(fā)現(xiàn)，和臨床實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的臨床重大變化。藥動(dòng)學(xué)(PK)結(jié)局測(cè)量是氟維司群的GDC-0941單點(diǎn)濃度的參數(shù)(AUC0-last，Cmax，Cmin)。探索性結(jié)局測(cè)量如下：

·腫瘤DNA和RNA中的全基因組測(cè)量，包括突變狀態(tài)，RNA基因表達(dá)值，DNA拷貝數(shù)，和蛋白質(zhì)表達(dá)

·CTC的計(jì)數(shù)和來自外周血的ctDNA中PIK3CA突變狀態(tài)

·HRQL和癥狀嚴(yán)重性和干擾的患者報(bào)告的結(jié)局，要使用歐洲癌癥研究和治療組織(European Organization for Research and Treatment of Cancer,EORTC)QLQ-C30，QLQ-BR23(附錄K)，mBPI-sf，和每日疼痛日志評(píng)估

患者：用于此研究的適格標(biāo)準(zhǔn)選擇為增強(qiáng)此試驗(yàn)中的患者的安全性。許多排除標(biāo)準(zhǔn)具體基于研究藥物治療的已知安全性概況，以及GDC-0941的非臨床和臨床數(shù)據(jù)。關(guān)鍵的納入標(biāo)準(zhǔn)如下：在進(jìn)入研究時(shí)，年齡≥18歲的絕經(jīng)后女性，具有雌激素受體陽性，人表皮生長(zhǎng)因子受體2型(HER2)陰性晚期或轉(zhuǎn)移性乳腺癌，按照國(guó)家或當(dāng)?shù)刂委煖?zhǔn)則，推薦用內(nèi)分泌療法(即氟維司群)治療，并且用細(xì)胞毒性化學(xué)療法治療對(duì)于患者是不必要的。在研究的部分I中，患者必須已經(jīng)經(jīng)歷輔助性設(shè)置中用AI治療期間(或在中斷AI后的6個(gè)月內(nèi))的疾病復(fù)發(fā)或者轉(zhuǎn)移性設(shè)置中用AI治療期間的進(jìn)展。AI必須是登記前最近的治療，并且患者在復(fù)發(fā)或疾病進(jìn)展前必須已經(jīng)接受至少4周用AI治療。在研究的部分II中，患者必須已經(jīng)經(jīng)歷在用AI治療期間或之后已經(jīng)進(jìn)展的疾病。出于毒性而非方案完成或者出于疾病進(jìn)展而中斷AI的患者不是適格的。

其它關(guān)鍵的納入標(biāo)準(zhǔn)包括0或1的東部腫瘤學(xué)合作組(Eastern Cooperative Oncology Group,ECOG)表現(xiàn)狀態(tài)，所有患者必須同意提供其疾病的腫瘤樣品，通過RECIST v1.1的可測(cè)量的疾病或在周期1的第1天的28天內(nèi)有放射學(xué)掃描的疾病，足夠的血液學(xué)和終末器官(end-organ)功能。

關(guān)鍵的排除標(biāo)準(zhǔn)包括：(1)針對(duì)晚期乳腺癌或MBC用氟維司群，PI3K抑制劑，或mTOR抑制劑的在先治療，(2)患者在周期1的第1天前的2周內(nèi)需要抗高血糖療法，在先抗癌療法或放射療法，(3)用一種細(xì)胞毒性化學(xué)療法方案的在先治療或(4)在用于MBC的兩種內(nèi)分泌療法上經(jīng)歷復(fù)發(fā)性或進(jìn)展性疾病。需要抗高血糖療法的患者，那些具有臨床重大心臟，肺功能障礙，活動(dòng)性自身免疫性疾病，免疫受損狀態(tài)，肝疾病的臨床重大歷史的患者，和那些具有未治療或活動(dòng)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)轉(zhuǎn)移的患者也自研究參與排除。在登記前自所有患者獲得知情同意書。

測(cè)定方法：針對(duì)PI3K的突變分析：在約30％的乳腺癌中找到PIK3CA基因中的體細(xì)胞突變，并且最常在外顯子9和20中在編碼氨基酸E542，E545和H1047的密碼子中發(fā)生。擴(kuò)增PIK3CA的外顯子9和20的實(shí)時(shí)PCR(RT-PCR)測(cè)定法提供了靈敏且定量的方法自存檔腫瘤材料檢測(cè)突變。自腫瘤樣品提取DNA，并進(jìn)行檢測(cè)野生型等位基因的定量RT-PCR(qRT-PCR)測(cè)定法以及用于包括但不限于以下氨基酸變化的核苷酸替代的測(cè)定法：E542(K)，E545(A，G，或K)，和H1047(L，R，Y)。在用于定量實(shí)時(shí)PCR的Cobas z 480(Roche Molecular Diagnostics)上運(yùn)行來自所有樣品的測(cè)定法，并且使用合適的截留和自動(dòng)化軟件做出突變呼叫(call)。在組織病理學(xué)審查后，通過宏觀或顯微解剖對(duì)腫瘤含量<20％的樣品富集腫瘤含量。

為了患者分層目的，含有PIK3CA突變體的腫瘤定義為含有任何一種預(yù)先定義的活化性突變的樣品。PIK3CA野生型指派定義為不含任何預(yù)先定義的活化性突變的樣品。PIK3CA狀態(tài)未知的指派是如下的樣品，其中任何一種預(yù)先定義的突變未被確定地評(píng)估且沒有任何別的活化性突變。另外，自從患者收集的血漿樣品提取ctDNA，并且用于經(jīng)由使用上文描述的qRT-PCR測(cè)定法檢測(cè)致癌突變。在基線時(shí)和在治療后測(cè)量的突變的流行度可以提供關(guān)于對(duì)療法的響應(yīng)或抗性的信息。出于隨機(jī)化目的，不會(huì)使用來自ctDNA分析的結(jié)果對(duì)患者分層。

經(jīng)由使用已經(jīng)使用數(shù)種可得細(xì)胞系對(duì)照驗(yàn)證了特異性的方案通過IHC檢查PTEN狀態(tài)。只有在內(nèi)部對(duì)照基質(zhì)或正常(非腫瘤)組織元件中觀察到合適的染色時(shí)才對(duì)存檔腫瘤材料評(píng)分。也可以通過用于mRNA水平的qRT-PCR測(cè)定法或熒光原位雜交(FISH)測(cè)定法中的染色體丟失來檢查PTEN狀態(tài)。

使用在合適的美國(guó)病理學(xué)家學(xué)院(College of American Pathologists,CAP)/美國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)(American Society of Clinical Oncology)準(zhǔn)則下運(yùn)行的IHC測(cè)定法在CAP認(rèn)證的實(shí)驗(yàn)室中確認(rèn)ER(雌激素受體)和PgR(孕酮受體)狀態(tài)，以確認(rèn)HR陽性乳腺癌的診斷。此分析的結(jié)果不是滿足登記標(biāo)準(zhǔn)所要求的，并且在患者隨機(jī)化之前可能不可得。如果來自中心實(shí)驗(yàn)室分析的結(jié)果提示患者的腫瘤是ER和PgR陰性，那么對(duì)主治調(diào)查人員告知此結(jié)果，并且患者繼續(xù)參與研究由主治調(diào)查人員自行處理。

HER2狀態(tài)：還經(jīng)由依照HercepTest包裝插頁中的說明書使用DAKO HercepTest試劑盒通過IHC對(duì)腫瘤樣品測(cè)試HER2蛋白質(zhì)過表達(dá)。認(rèn)為3+的IHC結(jié)果是HER2陽性。認(rèn)為2+的IHC結(jié)果是不明確的，并且對(duì)組織測(cè)試HER2基因擴(kuò)增。經(jīng)由依照PathVysion包裝插頁中的說明書使用標(biāo)準(zhǔn)HER2 FISH試劑盒(Abbott Laboratories)對(duì)存檔原發(fā)性腫瘤材料評(píng)估HER2基因擴(kuò)增。

也可以對(duì)自FFPE切片獲得的DNA分析相關(guān)癌基因和腫瘤抑制基因中的突變或拷貝數(shù)變化。具體地，使用基于(Life Technologies)平臺(tái)的多重突變測(cè)定法測(cè)定KRAS，NRAS，BRAF，EGFR和AKT1中的突變狀態(tài)。如果在運(yùn)行PIK3CA突變測(cè)定法后保留足夠的樣品，那么也可以對(duì)ctDNA實(shí)施這些測(cè)定法。在(Life Technologies)平臺(tái)上實(shí)施c-MYC，CCND1，F(xiàn)GFR1，F(xiàn)GFR2，IGF1R，PIK3CA，CDK4和牽涉PI3K信號(hào)傳導(dǎo)的潛在其它基因的基于qPCR的拷貝數(shù)測(cè)定法。

如果在已經(jīng)實(shí)施上述測(cè)定法后保留足夠的DNA，那么可以實(shí)施用于突變檢測(cè)的全基因組方法。外顯子重測(cè)序的目標(biāo)是雙倍的。一個(gè)目標(biāo)是對(duì)潛在感興趣的已知基因的宿主詢問內(nèi)分泌抗性或?qū)ρ芯恐委煹捻憫?yīng)/抗性。例子包括PI3K途徑中的其它基因，其它RTK，已知的腫瘤抑制基因，及具有可能與內(nèi)分泌生物學(xué)抗性或研究治療響應(yīng)相關(guān)的預(yù)先存在邏輯假設(shè)的其它基因。第二個(gè)目標(biāo)是實(shí)施較廣泛的假設(shè)產(chǎn)生分析，以評(píng)估基因組中的任何蛋白質(zhì)編碼突變?cè)谄淠[瘤已經(jīng)變得對(duì)內(nèi)分泌療法有抗性或與對(duì)研究治療的響應(yīng)/抗性相關(guān)聯(lián)的患者中是否以或更高或更低的頻率發(fā)生。目前在探索和評(píng)價(jià)用于外顯子再測(cè)序的兩種方法：使用基于靈敏質(zhì)譜術(shù)的Sequenom系統(tǒng)和外顯子捕獲再測(cè)序的進(jìn)化技術(shù)掃描已知的突變(Hodges et al.(2007)Nat Genet 39:1522-7)?？梢允褂眠@兩種方法之一或二者。考慮到全基因組測(cè)序領(lǐng)域正在快速演變，還可能實(shí)施另一種技術(shù)，這取決于要分析來自此試驗(yàn)的活組織檢查時(shí)的驗(yàn)證的水平和領(lǐng)域。在腫瘤組織不生成足夠用于外顯子再測(cè)序的DNA的情況中，使用全基因組擴(kuò)增。若可得的話，可以利用自冷凍的非FFPE組織分離的剩余的DNA進(jìn)行DNA拷貝數(shù)概況分析。在必要時(shí)，使用全基因組擴(kuò)增材料。使用商品化的陣列比較基因組雜交平臺(tái)(Agilent Co.)。目標(biāo)是開發(fā)拷貝數(shù)變化數(shù)據(jù)庫，可以詢問所述數(shù)據(jù)庫以詢問假設(shè)驅(qū)動(dòng)的問題或鑒定新穎的響應(yīng)預(yù)測(cè)器。

在有足夠的存檔或新鮮組織來分離RNA的情況中，實(shí)施乳腺癌，PI3K信號(hào)傳導(dǎo)和/或內(nèi)分泌療法抗性中重要的一組基因的基因mRNA和MiRNA表達(dá)概況分析。在冷凍的腫瘤組織可得的情況中，提取RNA，并且經(jīng)由使用經(jīng)驗(yàn)證的商品化平臺(tái)(諸如Affymetrix或Agilent)進(jìn)行全局基因表達(dá)或miRNA水平概況分析。目標(biāo)是檢查是否有與臨床響應(yīng)相關(guān)的基因表達(dá)樣式。

免疫組織化學(xué)測(cè)定法：Ki67抗原是一種重要的細(xì)胞周期相關(guān)核蛋白，其由活躍細(xì)胞周期的所有階段(G1，S，G2和M期)中的增殖細(xì)胞表達(dá)。因而，它是腫瘤增殖狀態(tài)的有用的標(biāo)志物。經(jīng)由使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)通過IHC測(cè)定Ki67蛋白質(zhì)水平。如果保留足夠的切片，那么也可以對(duì)分析物，諸如pPRAS40，p4EB-P1和pS6實(shí)施IHC，因?yàn)檫@些蛋白質(zhì)的磷酸化可能與新生性細(xì)胞中的途徑活化狀態(tài)相關(guān)。

反相蛋白質(zhì)陣列：反相蛋白質(zhì)陣列提供了在非常少量的腫瘤材料(諸如可以自活組織檢查或存檔的冷凍的非FFPE組織的激光捕獲顯微解剖獲得)中對(duì)數(shù)百個(gè)可能的磷酸化事件進(jìn)行概況分析的潛力。該技術(shù)的基礎(chǔ)是將連續(xù)稀釋的來自細(xì)胞系或腫瘤樣品的少量裂解物在微陣列載片上固定化。如此，在載片上排列多個(gè)樣品，并且可以用檢測(cè)特定磷酸表位的抗體探查。使用此技術(shù)，我們對(duì)代表已知在乳腺癌中失調(diào)的許多途徑的100個(gè)關(guān)鍵信號(hào)傳導(dǎo)節(jié)點(diǎn)(包括但不限于HER家族中的受體和PI3K/mTOR，雌激素和RAS/MAPK信號(hào)傳導(dǎo)途徑的多種組分)進(jìn)行概況分析。

循環(huán)腫瘤細(xì)胞分析：經(jīng)由使用Cellsearch，Biocept，Cellective和/或其它CTC計(jì)數(shù)和分子概況分析平臺(tái)對(duì)全血實(shí)施CTC分析。自血液分離的CTC經(jīng)歷分子分析，諸如PI3K突變狀態(tài)和PTEN狀態(tài)。出于隨機(jī)化目的，不會(huì)使用來自CTC分析的結(jié)果對(duì)患者分層。

藥動(dòng)學(xué)測(cè)定法：經(jīng)由使用經(jīng)驗(yàn)證的液相層析串聯(lián)質(zhì)譜術(shù)(LC-MS/MS)測(cè)定法對(duì)血漿樣品評(píng)價(jià)GDC-0941和氟維司群?？梢允褂脴悠愤M(jìn)行GDC-0941相關(guān)代謝物的探索性評(píng)估，別的藥效學(xué)開發(fā)和/或氟維司群血漿水平的測(cè)定。

用于探索性藥動(dòng)學(xué)/藥效學(xué)基因型-表型相關(guān)性的DNA：已確立，藥物代謝酶和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的遺傳變體能影響藥物的PK，這影響它們的安全性和功效。例如，攜帶編碼尿苷二磷酸葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶1A1(其推動(dòng)SN-38(伊立替康的活性代謝物)的代謝和排泄)的基因的缺陷等位基因的患者有較高的風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生與使用標(biāo)準(zhǔn)劑量的伊立替康有關(guān)的不利影響(O’Dwyer and Catalano(2006)J Clin Oncol 24:4534-8)。來自GDC-0941的體外代謝研究的初步結(jié)果提示它們由多種I期細(xì)胞色素P450酶(包括CYP2C8和CYP3A4/5)部分代謝。盡管體外研究有助于闡明酶在藥物代謝中的作用，但是出于許多原因，諸如酶在體外和體內(nèi)遇到的藥物濃度的差異，這些結(jié)果并不總是預(yù)示體內(nèi)代謝。為此原因，在本研究中自所有患者收集用于DNA分離的血液樣品，用于可能影響GDC-0941的PK的基因或生物標(biāo)志物的潛在藥物遺傳學(xué)分析。分析樣品的決定基于PK數(shù)據(jù)的審查。也使用來自體外代謝的結(jié)果和每種分子可得的臨床藥理學(xué)數(shù)據(jù)的總體指導(dǎo)基因型分型工作。對(duì)可辨別的DNA樣品實(shí)施分析，因?yàn)橛斜匾獙⒒颊叩腜K數(shù)據(jù)與基因型聯(lián)系起來。此分析局限于可能牽涉GDC-0941的PK(例如藥物代謝，部署或消除)和/或藥效學(xué)響應(yīng)的基因的評(píng)估?？梢栽谘芯客瓿珊箝L(zhǎng)達(dá)2年貯存和分析樣品，此時(shí)破壞為此分析收集的所有DNA樣品。

統(tǒng)計(jì)方法：在解決主要和次要終點(diǎn)時(shí)，不會(huì)為多重比較做出調(diào)整。在個(gè)別的探索性終點(diǎn)中使用多重比較調(diào)整以說明全基因組相關(guān)性比較。假設(shè)總體登記率為每個(gè)地點(diǎn)每個(gè)月0.14名患者，預(yù)期在30和90名患者已經(jīng)完成8周后，并且在已經(jīng)發(fā)生進(jìn)行性疾病的90例事件后，在第一名患者登記后分別約9和17個(gè)月時(shí)發(fā)生安全性分組的預(yù)先計(jì)劃的安全性分析。預(yù)期在第一名患者登記后約27個(gè)月發(fā)生最終分析。

功效分析：基于在中心實(shí)驗(yàn)室實(shí)施的結(jié)果，對(duì)所有確認(rèn)為ER陽性和/或PgR陽性的隨機(jī)化患者實(shí)施主要功效分析。如果基于在中心實(shí)驗(yàn)室實(shí)施的分析，有相當(dāng)多數(shù)目的患者其腫瘤呈ER和PgR陰性，那么可以登記另外的患者以滿足支持研究的主要目的需要的登記要求。另外的靈敏度分析可以包括隨機(jī)化并接受至少一劑任何研究藥物的所有患者。主要功效分析由兩個(gè)診斷亞組中預(yù)先規(guī)定數(shù)目的總體事件(PTEN無效患者中的45例事件和PI3KCA突變體患者中的60例事件)的發(fā)生來觸發(fā)。使用未分層的存活分析來評(píng)估PFS和經(jīng)確認(rèn)的響應(yīng)的持續(xù)時(shí)間。還實(shí)施另外的分層靈敏度分析。在主要功效分析中和在靈敏度分析中為所有患者，并且類似地為每個(gè)診斷性PI3K途徑層(即PIK3CA突變體，PTEN無效，雙重野生型，PI3KCA突變體/PTEN無效組合，和“未知”)中的患者產(chǎn)生Kaplan-Meier曲線?？傮w上和依照PI3K途徑改變層提供PFS的未分層危害比評(píng)估和90％置信區(qū)間(CI)，其比較氟維司群與GDC-0941的組合對(duì)氟維司群+安慰劑。另外的分析包括經(jīng)由使用分層時(shí)序檢驗(yàn)的PFS的危害比評(píng)估。

在最后一次腫瘤評(píng)估日(或者如果在基線拜訪后沒有實(shí)施腫瘤評(píng)估，那么在周期1的第1天的第一次氟維司群治療日加1天)檢查沒有疾病進(jìn)展或死亡的隨機(jī)化患者的數(shù)據(jù)。在已知患者無進(jìn)展的腫瘤評(píng)估的最后日期檢查失去隨訪的患者的數(shù)據(jù)。經(jīng)由使用分類分析對(duì)每個(gè)治療分支評(píng)估最佳(經(jīng)確認(rèn)的和未確認(rèn)的)腫瘤響應(yīng)的評(píng)估以及90％CI。計(jì)算氟維司群+GDC-0941對(duì)氟維司群+安慰劑分支中腫瘤響應(yīng)率的差異，并且總體上和依照PI3K層提供90％CI。使用相同的方法分析疾病穩(wěn)定化和CBR。使用與用于PFS終點(diǎn)的方法相同的方法分析經(jīng)確認(rèn)的響應(yīng)的持續(xù)時(shí)間和OS。經(jīng)由使用其接受交換治療的第一天作為評(píng)估PFS的基線及其在交換治療啟動(dòng)前的最后一次掃描作為基線腫瘤測(cè)量，交換患者在其交換后的功效數(shù)據(jù)依照研究分支分開匯總。

下文呈現(xiàn)了來自實(shí)體瘤響應(yīng)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)(RECIST)，第1.1版，(Eisenhauer EA,Therasse P,Bogaerts J,et al.New response evaluation criteria in solid tumors:修改的RECIST準(zhǔn)則(第1.1版).Eur J Cancer(2009)45:228-47)的選擇部分，為了清楚起見根據(jù)需要稍微修改并且添加解釋文本。

基線時(shí)腫瘤的可測(cè)量性：在基線時(shí)，如下所述將腫瘤損傷/淋巴結(jié)分類為可測(cè)量的或不可測(cè)量的。

腫瘤損傷：必須在至少一個(gè)維度上精確測(cè)量腫瘤損傷(要記錄測(cè)量平面中的最長(zhǎng)直徑)，最小尺寸如下：

·根據(jù)計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)(CT)或磁共振成像(MRI)掃描(CT/MRI掃描切片厚度/間隔不大于5mm)的10mm

·通過臨床檢查的10mm測(cè)徑器測(cè)量(不能用測(cè)徑器精確測(cè)量的損傷應(yīng)記錄為不可測(cè)量的)

·根據(jù)胸部X射線的20mm

惡性淋巴結(jié)：要認(rèn)定是病理學(xué)擴(kuò)大和可測(cè)量的，在通過CT掃描評(píng)估時(shí)(推薦CT掃描切片厚度不大于5mm)，淋巴結(jié)在短軸上必須≥15mm。

在基線和隨訪時(shí)，僅測(cè)量和追蹤短軸。對(duì)于關(guān)于淋巴結(jié)測(cè)量的信息，還可見下文關(guān)于“靶和非靶損傷的基線記錄”的注釋。

響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)

靶損傷的評(píng)估：用于測(cè)定靶損傷的客觀腫瘤響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)是：

·完全響應(yīng)(CR)：所有靶損害消失，任何病理性淋巴結(jié)(無論是靶還是非靶)必須短軸縮小至<10mm。

·部分響應(yīng)(PR)：靶損傷的直徑的總和縮小至少30％，采用基線直徑總和作為參照。

·進(jìn)行性疾病(PD)：靶損傷的直徑的總和增大至少20％，采用研究時(shí)(包括基線)最小總和(最低點(diǎn))作為參照。

在相對(duì)增大20％外，總和還必須展現(xiàn)至少5mm的絕對(duì)增大。

出現(xiàn)一個(gè)或多個(gè)新?lián)p傷也認(rèn)為是進(jìn)展。

盡管為了清楚理解的目的通過例示和實(shí)施例相當(dāng)詳細(xì)地描述了前述發(fā)明，但是描述和實(shí)施例不應(yīng)解釋為限制本發(fā)明的范圍。通過援引明確完整收錄本文中引用的所有專利和科學(xué)文獻(xiàn)的公開內(nèi)容。