本公開提供了與抗-CD147抗體相關(guān)或源自抗-CD147抗體的組合物和方法。更具體地，本公開提供了結(jié)合CD147的全人抗體、這類抗體的CD147-結(jié)合片段和衍生物及包含這類片段的CD147-結(jié)合多肽。再進一步地，本公開提供了編碼這類抗體、抗體片段和衍生物及多肽的核酸，包含這類多核苷酸的細(xì)胞，制備這類抗體、抗體片段和衍生物及多肽的方法，及使用這類抗體、抗體片段和衍生物及多肽的方法，包括治療或診斷患有CD147相關(guān)障礙或病癥的受試者的方法。本公開還提供了用于治療CD147-表達腫瘤，(包括肝細(xì)胞癌和和鱗狀細(xì)胞癌)及選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、實驗性肺損傷、動脈粥樣硬化、丙型肝炎病毒引起的慢性肝病、缺血性心肌損傷和心力衰竭的非腫瘤疾病的方法。

背景技術(shù)：

CD147涉及許多生理功能，如淋巴細(xì)胞反應(yīng)性、精子發(fā)生、移植、受精和發(fā)育早期的神經(jīng)功能。CD147是受體的免疫球蛋白家族的成員。這一家族的成員在涉及許多免疫相關(guān)功能、分化和發(fā)育的細(xì)胞間通訊中發(fā)揮作用。CD147在精子發(fā)生、淋巴細(xì)胞激活、單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白(MCT)的表達中發(fā)揮作用且已經(jīng)鑒別為阿爾茲海默病淀粉樣β-肽產(chǎn)生中的γ-分泌酶復(fù)合物的調(diào)控亞基(Gabison和Mourah Connect Tissue Res.49:175-179,2008；Inacono等，Exp.Mol.Pathol.83:283-295,2007；Nabeshima等，Pathol.Int.56:359-367,2006；Gabison等，Biochimie 87:361-368,2005和Muramatsu等，Histol.Histopathol.18:981-987,2003)。

這些見解中的一些從cd147-/-小鼠的研究獲得。這些動物在基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)調(diào)節(jié)、精子發(fā)生、淋巴細(xì)胞反應(yīng)性和發(fā)育早期的神經(jīng)功能中是缺陷的。這樣的雌性小鼠由于移植和受精的失敗而是不育的(Muramatsu等，Histol.Histopathol.18:981-987,2003)。CD147參與MCT-1和MCT-3至質(zhì)膜的轉(zhuǎn)運，因為這些轉(zhuǎn)運蛋白累積的降低已經(jīng)在cd147敲除小鼠的視網(wǎng)膜中觀察到。CD147在細(xì)胞粘附中的功能作用通過其參與血腦屏障及其與整合素的相互作用支持。

CD147牽涉到許多病理過程，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、實驗性肺損傷、動脈粥樣硬化、丙型肝炎病毒誘導(dǎo)的慢性肝病、缺血性心肌損傷和心力衰竭(Gabison等Biochimie 87:361-368,2005)。移植患者用CD147抗體的治療由于T-細(xì)胞活化的抑制而是有效的(Deeg等,Blood 98:2052-2058,2001)。

CD147，一種免疫球蛋白(Ig)超家族的跨膜蛋白在不同物種中獨立地鑒別并在不同物種之間具有許多命名，如M6、Neurothelin、5A11、HT7、OX-47、CE9、EMMPRIN、Basigin和gp42(Kasinrerk等J.Immunol.149:847-854,1992；Altruda等Gene 85:445-451,1989；Miyauchi等,J.Biochem.107:316-323,1990；Seulberger等EMBO J.9:2151-2158,1990和Fossum等,Eur.J.Immunol.21:671-679,1991)。最常見的標(biāo)準(zhǔn)異形體是由21氨基酸的信號序列、186殘基長的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(由兩個Ig樣結(jié)構(gòu)域組成)、21氨基酸的跨膜結(jié)構(gòu)域和41殘基的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的單鏈I型跨膜分子。

跨膜區(qū)帶有亮氨酸拉鏈和帶電殘基(谷氨酸)。對應(yīng)基因位于染色體19p13.3上并編碼29kDa骨架蛋白。已經(jīng)鑒別了三個N糖基化位點，且在十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)上的遷移根據(jù)糖基化程度在39和65kDa之間發(fā)生。

CD147在造血和非造血細(xì)胞如單核細(xì)胞、粒細(xì)胞、上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞上具有寬表達譜。弱表達在靜息T淋巴細(xì)胞上注意到，而表達在激活的T淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞上增加(Kasinrerk等J.Immunol.149:847-854,1992；Altruda等Gene 85:445-451,1989；Miyauchi等J.Biochem.107:316-323,1990；Seulberger等EMBO J.9:2151-2158,1990；Fossum等,Eur.J.Immunol.21:671-679,1991和Ochrietor等Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.44:4086-4096,2003)。跨膜序列的氨基酸序列如上所述在所有列出的物種之間的完美保守性(Iacono等Exp.Mol.Pathol.83:283-295,2007)是顯著的特征，其包括保守的谷氨酸殘基的存在。這一發(fā)現(xiàn)表明跨膜氨基酸參與質(zhì)膜內(nèi)的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域比細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域更保守，指出了關(guān)于與位于胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)的保守蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的類似考慮。CD147表達通過RNAi的抑制導(dǎo)致體外顯著降低的血管生成。CD147可以通過幾種機制(包括增殖、存活、MMP分泌和磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B(PBK/Akt)激活)調(diào)節(jié)血管生成。

在幾種癌細(xì)胞系中，CD147鑒別為抗凋亡功能和化療抗性的介質(zhì)。在HO-8910卵巢癌細(xì)胞中，CD147RNAi減少腫瘤細(xì)胞侵入、致腫瘤性和對紫杉醇的化療敏感性(Zou等Cancer Lett.248:211-218,2007)。CD147的上調(diào)在幾種多藥抗性癌細(xì)胞系中觀察到(Toole等Drug Resist.Update 11:110-121,2008)。

獨立地，報告了CD147參與癌細(xì)胞對多種化療劑的抗性(Li等Cell.Mol.Life Sci.66:504-515,2009)。另外，CD147鑒別為以透明質(zhì)酸依賴性的方式促進腫瘤細(xì)胞的非雄激素依賴性生長的受體(Marieb等Cancer Res.64:1229-1232,2004)。在人口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞(SCC)中，CD147-指導(dǎo)的RNAi減少X-染色體連鎖凋亡蛋白抑制劑(XIAP)表達和提高對5-氟尿嘧啶的化療敏感性(Kuang等Cancer Lett.276:189-195,2009)。在乳腺癌細(xì)胞素中，其顯示CD147賦予對失巢凋亡(anoikis)的抗性，如通過半胱天冬酶的激活證明的。

針對與不同表位的CD147相互作用的許多mAb已經(jīng)建立(Koch等Int.Immunol.11:777-786,1999)。大多數(shù)抗體僅結(jié)合植物凝集素(PHA)刺激的T-細(xì)胞，不結(jié)合靜息T-細(xì)胞。這一現(xiàn)象通過低親和力抗體對激活的T-細(xì)胞上的簇集CD147分子的二價結(jié)合而不是通過在激活的T-細(xì)胞上特別展示的新表位(neoepitopes)來解釋。高親和力抗體能夠在單價方式結(jié)合靜息T-細(xì)胞，其是CD147的低表達者。

通過低親和力抗體的二聚化誘導(dǎo)導(dǎo)致CD3-介導(dǎo)的T-細(xì)胞激活的抑制。高親和力mAb MEM-M6/6(識別獨特表位)抑制T細(xì)胞激活80％，且如前節(jié)中概述的，也抑制結(jié)腸癌和黑素瘤細(xì)胞而不是非轉(zhuǎn)化的成纖維細(xì)胞的增殖(Baba等Biochem.Biophys.Res.Commun.374:111-116,2008)。CD147通過mAb的觸發(fā)顯示為引起來自人T-淋巴細(xì)胞中的微結(jié)構(gòu)域的糖基磷脂酰肌醇(GPI)-錨定的共受體CD48和CD59的移位(Staffler等J.Immunol.171:1707-1714,2003)。微結(jié)構(gòu)域的擾動造成T-細(xì)胞增殖的抑制。利用COS-7轉(zhuǎn)染體和覆蓋不同CD147表位的mAb，證明CD147包含參與細(xì)胞粘附(同型細(xì)胞聚集)和淋巴細(xì)胞激活的調(diào)節(jié)的不同表位(Chiampanichayakul等Immunobiology 211:167-78,2006)。

針對肝細(xì)胞癌(HCC)的治療評估不同組的針對CD147的mAb(Xu等Mol.Cancer Res.5:605-614,2007)。mAb Hb18G和Licartin(一種131I-標(biāo)記的mAb Hb18G的F(ab')2片段)介導(dǎo)培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞中MMP分泌的抑制并抑制侵入，且Licartin顯著抑制HCC細(xì)胞的生長。mAb Hb18G和Licartin有效地降低生長和轉(zhuǎn)移以及基質(zhì)因子如MMP、VEGF和成纖維表面蛋白的表達(Xu等Mol.Cancer Res.5:605-614,2007)。臨床研究報告了用Licartin對HCC患者的靶向放射免疫治療(Xu等Hepatology 45:269-276,2007)。在II期臨床試驗中完成兩個周期的73名患者中，6名(8％)注意到具有部分反應(yīng)，14名(19％)具有輕微反應(yīng)和43名(59％)具有穩(wěn)定的疾病。患者無進展存活率顯著高于具有進展疾病的患者。稱為CNTO 3899的嵌合CD147抗體(IgG1)作為用于頭頸鱗狀細(xì)胞癌的潛在治療的藥劑進行評估(Dean等Clin.Cancer Res.15:4058-4065,2009)。該抗體抑制SSC-1和FaDu細(xì)胞的增殖高達57％。也注意到膠原蛋白降解的抑制。顯著的腫瘤生長抑制在SSC-1異種移植物中注意到。CNTO 3899在體外和在異種移植物中增強SSC-1和FaDu細(xì)胞的放射反應(yīng)。此外，相同的研究證明CD147功能與促炎性和促血管生成因子如IL1β、IL6、IL8和VEGF的細(xì)胞因子產(chǎn)生相關(guān)。細(xì)胞因子，MMP和VEGF，的抑制看起來介導(dǎo)這一mAb的作用機制。所概述的研究表明，CD147mAb在不存在免疫效應(yīng)細(xì)胞的情況下對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制是細(xì)胞類型特異性的和/或可能依賴于mAb針對的不同表位。T-細(xì)胞激活和/或耗竭的抑制未用CNTO 3899、Hb18G或Licartin進行研究。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本公開提供了以至少10^-6M的結(jié)合親和力結(jié)合CD147表位的IgG類的全人抗體，其具有與選自以下的氨基酸序列至少95％同一的重鏈可變域序列：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.62及其組合，且具有與由以下組成的氨基酸序列至少95％同一的輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.63及其組合。優(yōu)選地，全人抗體具有重鏈和輕鏈兩者，其中該抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2(本文中稱為C4R1A2)、SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4(本文中稱為C4R1A5)、SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6(本文中稱為C4R1A6)、SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8(本文中稱為C4R1A8)、SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10(本文中稱為C4R1A9)、SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12(本文中稱為C4R1B2)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14(本文中稱為C4R1C10)、SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16(本文中稱為C4R1C11)、SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18(本文中稱為C4R1C3)、SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20(本文中稱為C4R1D11)、SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22(本文中稱為C4R1F12)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.25(本文中稱為C4R1G1)、SEQ ID NO.26/SEQ ID NO.27(本文中稱為C4R1G4)、SEQ ID NO.28/SEQ ID NO.29(本文中稱為C4R1G7)、SEQ ID NO.30/SEQ ID NO.31(本文中稱為C4R1H10)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.32(本文中稱為C4R1H11)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.33(本文中稱為C4R1H4)、SEQ ID NO.34/SEQ ID NO.35(本文中稱為C4sh1Al)、SEQ ID NO.36/SEQ ID NO.37(本文中稱為C4sh1A2)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.39(本文中稱為C4sh1A3)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.40(本文中稱為C4sh1A4)、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.42(本文中稱為C4sh1A5)、SEQ ID NO.43/SEQ ID NO.44(本文中稱為C4sh1A6)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.45(本文中稱為C4sh1A9)、SEQ ID NO.46/SEQ ID NO.47(本文中稱為C4sh1B10)、SEQ ID NO.48/SEQ ID NO.49(本文中稱為C4sh1Bl1)、SEQ ID NO.50/SEQ ID NO.51(本文中稱為C4sh1B2)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.52(本文中稱為C4sh1C10)、SEQ ID NO.53/SEQ ID NO.54(本文中稱為C4sh1C5)、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.54(本文中稱為C4sh1C6)、SEQ ID NO.56/SEQ ID NO.57(C4sh1E10)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.58(本文中稱為C4sh1E12)、SEQ ID NO.59/SEQ ID NO.60(本文中稱為C4sh1Fl l)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.61(本文中稱為C4sh1G4)、SEQ ID NO.62/SEQ ID NO.63(本文中稱為C4sh1H9)及其組合。

本公開提供了Fab全人抗體片段，其具有來自重鏈的可變域區(qū)域和來自輕鏈的可變域區(qū)域，其中重鏈可變域序列與選自以下的氨基酸序列至少95％同一：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.62及其組合，且具有與由以下組成的氨基酸序列至少95％同一的輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.63及其組合。優(yōu)選地，全人抗體Fab片段具有重鏈可變域區(qū)域和輕鏈可變域區(qū)域兩者，其中該抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.26/SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.28/SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.30/SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.34/SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.36/SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.43/SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.46/SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.48/SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.50/SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.53/SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.56/SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.59/SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.62/SEQ ID NO.63及其組合。

本公開提供了單鏈人抗體，其具有來自重鏈的可變域區(qū)域和來自輕鏈的可變域區(qū)域及連接該重鏈和輕鏈可變域區(qū)域的肽接頭，其中重鏈可變域序列與選自以下的氨基酸序列至少95％同一：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.62及其組合，且具有與由以下組成的氨基酸序列至少95％同一的輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.63及其組合。優(yōu)選地，全人單鏈抗體具有重鏈可變域區(qū)域和輕鏈可變域區(qū)域兩者，其中單鏈全人抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.26/SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.28/SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.30/SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.34/SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.36/SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.43/SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.46/SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.48/SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.50/SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.53/SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.56/SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.59/SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.62/SEQ ID NO.63及其組合。

本公開進一步提供了用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、實驗性肺損傷、動脈粥樣硬化、由丙型肝炎病毒引起的慢性肝疾病、缺血性心肌損傷和心力衰竭的方法，該方法包括施用抗-CD147多肽，其中全人抗體具有與選自以下的氨基酸序列至少95％同一的重鏈可變域序列：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.62及其組合，且具有與由以下組成的氨基酸序列至少95％同一的輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.63及其組合；

其中Fab全人抗體片段具有與選自以下的氨基酸序列至少95％同一的重鏈可變域序列：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.62及其組合，且具有與由以下組成的氨基酸序列至少95％同一的輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.63及其組合；和

其中單鏈人抗體具有與選自以下的氨基酸序列至少95％同一的重鏈可變域序列：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.62及其組合，且具有與由以下組成的氨基酸序列至少95％同一的輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.63及其組合。

優(yōu)選地，全人抗體具有重鏈和輕鏈兩者，其中該抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2(本文中稱為C4R1A2)、SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4(本文中稱為C4R1A5)、SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6(本文中稱為C4R1A6)、SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8(本文中稱為C4R1A8)、SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10(本文中稱為C4R1A9)、SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12(本文中稱為C4R1B2)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14(本文中稱為C4R1C10)、SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16(本文中稱為C4R1C11)、SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18(本文中稱為C4R1C3)、SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20(本文中稱為C4R1D11)、SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22(本文中稱為C4R1F12)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.25(本文中稱為C4R1G1)、SEQ ID NO.26/SEQ ID NO.27(本文中稱為C4R1G4)、SEQ ID NO.28/SEQ ID NO.29(本文中稱為C4R1G7)、SEQ ID NO.30/SEQ ID NO.31(本文中稱為C4R1H10)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.32(本文中稱為C4R1H11)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.33(本文中稱為C4R1H4)、SEQ ID NO.34/SEQ ID NO.35(本文中稱為C4sh1Al)、SEQ ID NO.36/SEQ ID NO.37(本文中稱為C4sh1A2)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.39(本文中稱為C4sh1A3)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.40(本文中稱為C4sh1A4)、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.42(本文中稱為C4sh1A5)、SEQ ID NO.43/SEQ ID NO.44(本文中稱為C4sh1A6)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.45(本文中稱為C4sh1A9)、SEQ ID NO.46/SEQ ID NO.47(本文中稱為C4sh1B10)、SEQ ID NO.48/SEQ ID NO.49(本文中稱為C4sh1B11)、SEQ ID NO.50/SEQ ID NO.51(本文中稱為C4sh1B2)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.52(本文中稱為C4sh1C10)、SEQ ID NO.53/SEQ ID NO.54(本文中稱為C4sh1C5)、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.54(本文中稱為C4sh1C6)、SEQ ID NO.56/SEQ ID NO.57(C4sh1E10)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.58(本文中稱為C4sh1E12)、SEQ ID NO.59/SEQ ID NO.60(本文中稱為C4sh1F11)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.61(本文中稱為C4sh1G4)、SEQ ID NO.62/SEQ ID NO.63(本文中稱為C4sh1H9)及其組合。優(yōu)選地，全人抗體Fab片段具有重鏈可變域區(qū)域和輕鏈可變域區(qū)域兩者，其中抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2(本文中稱為C4R1A2)、SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4(本文中稱為C4R1A5)、SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6(本文中稱為C4R1A6)、SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8(本文中稱為C4R1A8)、SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10(本文中稱為C4R1A9)、SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12(本文中稱為C4R1B2)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14(本文中稱為C4R1C10)、SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16(本文中稱為C4R1C11)、SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18(本文中稱為C4R1C3)、SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20(本文中稱為C4R1D11)、SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22(本文中稱為C4R1F12)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.25(本文中稱為C4R1G1)、SEQ ID NO.26/SEQ ID NO.27(本文中稱為C4R1G4)、SEQ ID NO.28/SEQ ID NO.29(本文中稱為C4R1G7)、SEQ ID NO.30/SEQ ID NO.31(本文中稱為C4R1H10)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.32(本文中稱為C4R1H11)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.33(本文中稱為C4R1H4)、SEQ ID NO.34/SEQ ID NO.35(本文中稱為C4sh1Al)、SEQ ID NO.36/SEQ ID NO.37(本文中稱為C4sh1A2)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.39(本文中稱為C4sh1A3)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.40(本文中稱為C4sh1A4)、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.42(本文中稱為C4sh1A5)、SEQ ID NO.43/SEQ ID NO.44(本文中稱為C4sh1A6)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.45(本文中稱為C4sh1A9)、SEQ ID NO.46/SEQ ID NO.47(本文中稱為C4sh1B10)、SEQ ID NO.48/SEQ ID NO.49(本文中稱為C4sh1B11)、SEQ ID NO.50/SEQ ID NO.51(本文中稱為C4sh1B2)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.52(本文中稱為C4sh1C10)、SEQ ID NO.53/SEQ ID NO.54(本文中稱為C4sh1C5)、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.54(本文中稱為C4sh1C6)、SEQ ID NO.56/SEQ ID NO.57(C4sh1E10)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.58(本文中稱為C4sh1E12)、SEQ ID NO.59/SEQ ID NO.60(本文中稱為C4sh1F11)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.61(本文中稱為C4sh1G4)、SEQ ID NO.62/SEQ ID NO.63(本文中稱為C4sh1H9)及其組合。優(yōu)選地，全人單鏈抗體具有重鏈可變域區(qū)域和輕鏈可變域區(qū)域兩者，其中單鏈全人抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.26/SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.28/SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.30/SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.34/SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.36/SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.43/SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.46/SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.48/SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.50/SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.53/SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.56/SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.59/SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.62/SEQ ID NO.63及其組合。

優(yōu)選地，該方法用于治療各種癌癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、實驗性肺損傷、動脈粥樣硬化、由丙型肝炎病毒引起的慢性肝病、缺血性心肌損傷和心力衰竭。

附圖說明

圖1和2顯示七種抗-CD147抗體可以結(jié)合人或小鼠CD147兩者。

圖3-A顯示示例性抗-CD147抗體與前列腺癌細(xì)胞(PC3)表面表達的人CD147的結(jié)合，如通過流式細(xì)胞術(shù)分析的。

圖3-B顯示示例性抗-CD147抗體與髓性白血病細(xì)胞(K562)表面表達的人CD147的結(jié)合，如通過流式細(xì)胞術(shù)分析的。

圖3-C顯示示例性抗-CD147抗體與非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(A549)表面表達的人CD147的結(jié)合，如通過流式細(xì)胞術(shù)分析的。

圖4證明抗-CD147抗體在與蛋白G-DM1分子復(fù)合時的細(xì)胞毒性潛能。

具體實施方式

本公開提供了以10^-6M或更小的結(jié)合親和力結(jié)合CD147表位的IgG類的全人抗體，其具有與選自以下的氨基酸序列至少95％同一的重鏈可變域序列：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.62及其組合，且具有與由以下組成的氨基酸序列至少95％同一的輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.63及其組合。優(yōu)選地，全人抗體具有重鏈和輕鏈兩者，其中該抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2(本文中稱為C4R1A2)、SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4(本文中稱為C4R1A5)、SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6(本文中稱為C4R1A6)、SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8(本文中稱為C4R1A8)、SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10(本文中稱為C4R1A9)、SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12(本文中稱為C4R1B2)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14(本文中稱為C4R1C10)、SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16(本文中稱為C4R1C11)、SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18(本文中稱為C4R1C3)、SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20(本文中稱為C4R1D11)、SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22(本文中稱為C4R1F12)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.25(本文中稱為C4R1G1)、SEQ ID NO.26/SEQ ID NO.27(本文中稱為C4R1G4)、SEQ ID NO.28/SEQ ID NO.29(本文中稱為C4R1G7)、SEQ ID NO.30/SEQ ID NO.31(本文中稱為C4R1H10)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.32(本文中稱為C4R1H11)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.33(本文中稱為C4R1H4)、SEQ ID NO.34/SEQ ID NO.35(本文中稱為C4sh1Al)、SEQ ID NO.36/SEQ ID NO.37(本文中稱為C4sh1A2)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.39(本文中稱為C4sh1A3)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.40(本文中稱為C4sh1A4)、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.42(本文中稱為C4sh1A5)、SEQ ID NO.43/SEQ ID NO.44(本文中稱為C4sh1A6)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.45(本文中稱為C4sh1A9)、SEQ ID NO.46/SEQ ID NO.47(本文中稱為C4sh1B10)、SEQ ID NO.48/SEQ ID NO.49(本文中稱為C4sh1B11)、SEQ ID NO.50/SEQ ID NO.51(本文中稱為C4sh1B2)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.52(本文中稱為C4sh1C10)、SEQ ID NO.53/SEQ ID NO.54(本文中稱為C4sh1C5)、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.54(本文中稱為C4sh1C6)、SEQ ID NO.56/SEQ ID NO.57(C4sh1E10)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.58(本文中稱為C4sh1E12)、SEQ ID NO.59/SEQ ID NO.60(本文中稱為C4sh1F11)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.61(本文中稱為C4sh1G4)、SEQ ID NO.62/SEQ ID NO.63(本文中稱為C4sh1H9)及其組合。優(yōu)選地，全人抗體Fab片段具有重鏈可變域區(qū)域和輕鏈可變域區(qū)域兩者，其中抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2(本文中稱為C4R1A2)、SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4(本文中稱為C4R1A5)、SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6(本文中稱為C4R1A6)、SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8(本文中稱為C4R1A8)、SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10(本文中稱為C4R1A9)、SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12(本文中稱為C4R1B2)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14(本文中稱為C4R1C10)、SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16(本文中稱為C4R1C11)、SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18(本文中稱為C4R1C3)、SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20(本文中稱為C4R1D11)、SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22(本文中稱為C4R1F12)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.25(本文中稱為C4R1G1)、SEQ ID NO.26/SEQ ID NO.27(本文中稱為C4R1G4)、SEQ ID NO.28/SEQ ID NO.29(本文中稱為C4R1G7)、SEQ ID NO.30/SEQ ID NO.31(本文中稱為C4R1H10)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.32(本文中稱為C4R1H11)、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.33(本文中稱為C4R1H4)、SEQ ID NO.34/SEQ ID NO.35(本文中稱為C4sh1Al)、SEQ ID NO.36/SEQ ID NO.37(本文中稱為C4sh1A2)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.39(本文中稱為C4sh1A3)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.40(本文中稱為C4sh1A4)、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.42(本文中稱為C4sh1A5)、SEQ ID NO.43/SEQ ID NO.44(本文中稱為C4sh1A6)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.45(本文中稱為C4sh1A9)、SEQ ID NO.46/SEQ ID NO.47(本文中稱為C4sh1B10)、SEQ ID NO.48/SEQ ID NO.49(本文中稱為C4sh1B11)、SEQ ID NO.50/SEQ ID NO.51(本文中稱為C4sh1B2)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.52(本文中稱為C4sh1C10)、SEQ ID NO.53/SEQ ID NO.54(本文中稱為C4sh1C5)、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.54(本文中稱為C4sh1C6)、SEQ ID NO.56/SEQ ID NO.57(C4sh1E10)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.58(本文中稱為C4sh1E12)、SEQ ID NO.59/SEQ ID NO.60(本文中稱為C4sh1F11)、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.61(本文中稱為C4sh1G4)、SEQ ID NO.62/SEQ ID NO.63(本文中稱為C4sh1H9)及其組合。

本公開提供了Fab全人抗體片段，其具有來自重鏈的可變域區(qū)域和來自輕鏈的可變域區(qū)域，其中重鏈可變域序列與選自以下的氨基酸序列至少95％同一：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.62及其組合，且具有與由以下組成的氨基酸序列至少95％同一的輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.63及其組合。優(yōu)選地，全人抗體Fab片段具有重鏈可變域區(qū)域和輕鏈可變域區(qū)域兩者，其中該抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.26/SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.28/SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.30/SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.34/SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.36/SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.43/SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.46/SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.48/SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.50/SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.53/SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.56/SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.59/SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.62/SEQ ID NO.63及其組合。

本公開提供了單鏈人抗體，其具有來自重鏈的可變域區(qū)域和來自輕鏈的可變域區(qū)域及連接該重鏈和輕鏈可變域區(qū)域的肽接頭，其中重鏈可變域序列與選自以下的氨基酸序列至少95％同一：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.62及其組合，且具有與由以下組成的氨基酸序列至少95％同一的輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.63及其組合。優(yōu)選地，全人單鏈抗體具有重鏈可變域區(qū)域和輕鏈可變域區(qū)域兩者，其中單鏈全人抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.26/SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.28/SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.30/SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.34/SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.36/SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.43/SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.46/SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.48/SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.50/SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.53/SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.56/SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.59/SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.62/SEQ ID NO.63及其組合。

本公開進一步提供了用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、實驗性肺損傷、動脈粥樣硬化、由丙型肝炎病毒引起的慢性肝疾病、缺血性心肌損傷和心力衰竭的方法，該方法包括施用抗-CD147多肽，其中所述抗-CD147多肽選自以至少10^-6M的結(jié)合親和力結(jié)合CD147表位的IgG類的全人抗體、具有來自重鏈的可變域區(qū)域和來自輕鏈的可變域區(qū)域的Fab全人抗體片段、具有來自重鏈的可變域區(qū)域和來自輕鏈的可變域區(qū)域及連接所述重鏈和輕鏈可變域區(qū)域的肽接頭的單鏈人抗體，及其組合；

其中全人抗體具有與選自以下的氨基酸序列至少95％同一的重鏈可變域序列：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.62及其組合，且具有與由以下組成的氨基酸序列至少95％同一的輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.63及其組合；

其中所述Fab全人抗體片段具有與選自以下的氨基酸序列至少95％同一的重鏈可變域序列：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.62及其組合，且具有與由以下組成的氨基酸序列至少95％同一的輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.63及其組合；和

其中所述單鏈人抗體具有與選自以下的氨基酸序列至少95％同一的重鏈可變域序列：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.62及其組合，且具有與由以下組成的氨基酸序列至少95％同一的輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.63及其組合。

優(yōu)選地，全人抗體具有重鏈和輕鏈兩者，其中該抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.26/SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.28/SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.30/SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.34/SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.36/SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.43/SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.46/SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.48/SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.50/SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.53/SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.56/SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.59/SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.62/SEQ ID NO.63及其組合。優(yōu)選地，全人抗體Fab片段具有重鏈可變域區(qū)域和輕鏈可變域區(qū)域兩者，其中該抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.26/SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.28/SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.30/SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.34/SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.36/SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.43/SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.46/SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.48/SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.50/SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.53/SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.56/SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.59/SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.62/SEQ ID NO.63及其組合。優(yōu)選地，全人單鏈抗體具有重鏈可變域區(qū)域和輕鏈可變域區(qū)域兩者，其中單鏈全人抗體具有選自以下的重鏈/輕鏈可變域序列：SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9/SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11/SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15/SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17/SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21/SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.26/SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.28/SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.30/SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.13/SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.34/SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.36/SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.43/SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.46/SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.48/SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.50/SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.53/SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.41/SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.56/SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.59/SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.38/SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.62/SEQ ID NO.63及其組合。

優(yōu)選地，該方法用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、實驗性肺損傷、動脈粥樣硬化、由丙型肝炎病毒引起的慢性肝病、缺血性心肌損傷和心力衰竭。

“抗原結(jié)合蛋白”是包含結(jié)合至抗原的部分和，任選地，允許抗原結(jié)合部分采取促進抗原結(jié)合蛋白與抗原結(jié)合的構(gòu)象的骨架或框架部分的蛋白質(zhì)?？乖Y(jié)合蛋白的例子包括抗體、抗體片段(例如，抗體的抗原結(jié)合部分)、抗體衍生物和抗體類似物?？乖Y(jié)合蛋白可以包含，例如，具有移植的CDR或CDR衍生物的可選的蛋白質(zhì)骨架或人工骨架。這些骨架包括，但不限于抗體衍生的骨架(包含引入以例如使抗原結(jié)合蛋白的三維結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的突變)以及完全合成的骨架(包含，例如，生物相容性聚合物)。參見，例如，Korndorfer等人，2003，Proteins:Structure,Function,and Bioinformatics,Volume 53,Issue 1:121-129；Roque等人，2004，Biotechnol.Prog.20:639-654。此外，可以使用肽抗體模擬物(“PAM”)以及基于抗體模擬物的骨架(利用纖維連接蛋白組分作為骨架)。

抗原結(jié)合蛋白可以具有，例如，天然存在的免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)?！懊庖咔虻鞍住笔撬木垠w分子。在天然存在的免疫球蛋白中，每個四聚體由兩個相同的多肽鏈對組成，每對具有一條“輕”鏈(約25kDa)和一條“重”鏈(約50-70kDa)。每條鏈的氨基端部分包括主要負(fù)責(zé)抗原識別的約100至110或更多個氨基酸的可變區(qū)。每條鏈的羧基端部分限定主要負(fù)責(zé)效應(yīng)子功能的恒定區(qū)。人輕鏈分類為κ或λ輕鏈。重鏈分類為μ、δ、γ、α或ε，并分別定義抗體同種型為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在輕鏈和重鏈內(nèi)，可變區(qū)和恒定區(qū)通過約12或更多個氨基酸的“J”區(qū)連接，并且重鏈還包括約10個或更多個氨基酸的“D”區(qū)。通常參見，F(xiàn)undamental Immunology第7章(Paul,W.編輯，第二版，Raven出版社，N.Y.(1989))(通過引用結(jié)合其全部內(nèi)容用于所有目的)。每個輕/重鏈對的可變區(qū)形成抗體結(jié)合位點，使得完整的免疫球蛋白具有兩個結(jié)合位點。

天然存在的免疫球蛋白鏈的可變區(qū)表現(xiàn)出相同的總體結(jié)構(gòu)：由通過三個高變區(qū)(也稱為互補決定區(qū)或CDR)連接的相對保守的框架區(qū)(FR)。從N端至C端，輕鏈和重鏈都包含結(jié)構(gòu)域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。每個結(jié)構(gòu)域的氨基酸的指定按照Kabat等人在Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,US Dept.of Health and Human Services,PHS,NIH,NIH出版號91-3242,1991中的定義命名。免疫球蛋白鏈中氨基酸的其它編號系統(tǒng)包括IMGT.RTM(國際ImMunoGeneTics信息系統(tǒng)；Lefranc等人，Dev.Comp.Immunol.29:185-203；2005)和AHo(Honegger和Pluckthun,J.Mol.Biol.309(3):657-670；2001)。

可以從含有具有變化的抗原特異性的免疫球蛋白的來源比如血清或血漿獲得抗體。如果將這樣的抗體進行親和純化，它們可以針對特定的抗原特異性富集。通常由少于約10％的對特定抗原具有特異性結(jié)合活性的抗體制備這類富集的抗體制劑。使這些制劑進行若干輪親和純化可以提高對抗原具有特異性結(jié)合活性的抗體的比例。以這種方式制備的抗體通常稱為“單特異性的”。單特異性抗體制劑可以由約10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或99.9％的對特定抗原具有特異性結(jié)合活性的抗體構(gòu)成。

除非另有說明，“抗體”是指完整的免疫球蛋白或與完整抗體為特異性結(jié)合而競爭的其抗原結(jié)合部分?？梢酝ㄟ^重組DNA技術(shù)或通過完整抗體的酶促或化學(xué)切割產(chǎn)生抗原結(jié)合部分?？乖Y(jié)合部分包括，特別是，F(xiàn)ab、Fab'、F(ab')₂、Fv、域抗體(dAb)和互補決定區(qū)(CDR)片段、單鏈抗體(scFv)、嵌合抗體、雙抗體(diabodies)、三抗體(triabodies)、四抗體(tetrabodies)和含有至少足以賦予多肽對抗原的特異性結(jié)合的免疫球蛋白的部分的多肽。

Fab片段為具有VL、VH、CL和CH1結(jié)構(gòu)域的單價片段；F(ab')₂片段為具有通過在鉸鏈區(qū)的二硫鍵連接的2個Fab片段的雙價片段；Fd片段具有VH和CH1結(jié)構(gòu)域；Fv片段具有抗體單臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域；并且dAb片段具有VH結(jié)構(gòu)域、VL結(jié)構(gòu)域或者VH或VL結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)合片段(美國專利號6,846,634、6,696,245，美國申請公開號20/0202512、2004/0202995、2004/0038291、2004/0009507、2003/0039958和Ward等人，Nature 341:544-546,1989)。

單鏈抗體(scFv)為其中VL和VH區(qū)通過接頭(例如，合成的氨基酸殘基的序列)連接以形成連續(xù)的蛋白鏈(其中該接頭足夠長以允許蛋白鏈自身回折并形成單價抗原結(jié)合位點)的抗體(參見，例如Bird等人，1988,Science 242:423-26和Huston等人，1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-83)。雙抗體為包含2條多肽鏈的二價抗體，其中每條多肽鏈包含由接頭連接的VH和VL結(jié)構(gòu)域，該接頭太短而不允許相同鏈上的2個結(jié)構(gòu)域之間配對，因此使得每個結(jié)構(gòu)域與在另一多肽鏈上的互補結(jié)構(gòu)域配對(參見，例如Holliger等人，1993,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-48和Poljak等人，1994,Structure 2:1121-23)。如果雙抗體的兩條多肽鏈?zhǔn)窍嗤模敲从善渑鋵Ξa(chǎn)生的雙抗體將具有2個相同的抗原結(jié)合位點。具有不同序列的多肽鏈可以用于形成具有2個不同抗原結(jié)合位點的雙抗體。類似地，三抗體和四抗體分別為包含3條和4條多肽鏈并分別形成3個和4個抗原結(jié)合位點(其可以是相同的或不同的)的抗體。

可以利用Kabat等人(同上)、Lefranc等人(同上)和/或Honegger和Pluckthun(同上)描述的系統(tǒng)確定給定抗體的互補決定區(qū)(CDR)和框架區(qū)(FR)。可以將一個或多個CDR共價或非共價地整合到分子中以使其成為抗原結(jié)合蛋白?？乖Y(jié)合蛋白可以使CDR作為較大多肽鏈的部分并入，可以共價地將CDR連接至另一多肽鏈，或可以非共價地并入CDR。CDR允許抗原結(jié)合蛋白特異性地結(jié)合特定的目標(biāo)抗原。

抗原結(jié)合蛋白可以具有一個或多個結(jié)合位點。如果存在多于一個結(jié)合位點，那么結(jié)合位點可以彼此相同或可以不同。例如，天然存在的人免疫球蛋白通常具有兩個相同的結(jié)合位點，而“雙特異性”或“雙功能”抗體具有兩個不同的結(jié)合位點。

術(shù)語“人抗體”包括具有源自人免疫球蛋白序列的一個或多個可變區(qū)和恒定區(qū)的所有抗體。在一個實施方式中，所有的可變域和恒定域源自人免疫球蛋白序列(全人抗體)。這些抗體可以以多種方式制備，其實例如下文所述，包括通過用目標(biāo)抗原對小鼠(其經(jīng)遺傳修飾以表達來源于人重鏈和/或輕鏈編碼基因的抗體)進行免疫。

人源化抗體的序列與來源于非人物種的抗體的序列不同在于一個或多個氨基酸置換、刪除和/或添加，以使得在施用于人類受試者時，人源化抗體與非人物種的抗體相比較少可能誘導(dǎo)免疫應(yīng)答和/或誘導(dǎo)較不嚴(yán)重的免疫應(yīng)答。在一個實施方式中，非人物種抗體的重鏈和/或輕鏈的框架和恒定域中的某些氨基酸突變以產(chǎn)生人源化抗體。在另一實施方式中，來自人抗體的恒定域與非人物種的可變域融合。在另一實施方式中，改變非人抗體的一個或多個CDR序列中的一個或多個氨基酸殘基以降低非人抗體在施用于人類受試者時可能的免疫原性，其中改變的氨基酸殘基對于抗體與其抗原的免疫特異性結(jié)合不是關(guān)鍵的，或?qū)Π被嵝蛄羞M行的改變是保守性改變，使得人源化抗體與抗原的結(jié)合不會比非人抗體與抗原的結(jié)合明顯更差。如何制備人源化抗體的例子可以在美國專利號6,054,297、5,886,152和5,877,293中找到。

術(shù)語“嵌合抗體”指的是含有來自一個抗體的一個或多個區(qū)域和來自一個或多個其它抗體的一個或多個區(qū)域的抗體。在一個實施方式中，一個或多個CDR來源于人抗-CD147抗體。在另一實施方式中，所有的CDR來源于人抗-CD147抗體。在另一實施方式中，來自多于一個人抗-CD147抗體的CDR混合并在嵌合抗體中匹配。例如，嵌合抗體可以包含來自第一人抗體的輕鏈的CDR1，來自第二人抗-CD147抗體的輕鏈的CDR2和CDR3，以及來自第三抗-CD147抗體的重鏈的CDR。其它組合是可能的。

此外，框架區(qū)可以來源于相同抗-CD147抗體中的一個、來自一個或多個不同抗體(比如人抗體)或來自人源化抗體。在嵌合抗體的一個例子中，重鏈和/或輕鏈的一部分與來自特定物種或者屬于特定抗體類別或子類的抗體相同、同源或來源于該抗體，而鏈的其余部分與來自另一物種或者屬于另一抗體類別或子類的抗體相同、同源或來源于該抗體。也包括這些抗體的表現(xiàn)出所需生物活性(即，特異性結(jié)合CD147的能力)的片段。

本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本說明書的教導(dǎo)并使用本領(lǐng)域已知技術(shù)容易地制備抗體片段或類似物。片段或類似物的優(yōu)選氨基端和羧基端存在于功能域的邊界附近?？梢酝ㄟ^將核苷酸和/或氨基酸序列數(shù)據(jù)與公共或?qū)Ｓ行蛄袛?shù)據(jù)庫比較識別結(jié)構(gòu)域和功能域。計算機化的比較方法可用于識別在已知結(jié)構(gòu)和/或功能的其它蛋白質(zhì)中存在的序列基序或預(yù)測的蛋白質(zhì)構(gòu)象結(jié)構(gòu)域。識別折疊成已知三維結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)序列的方法是已知的。參見，Bowie等人,1991,Science 253:164。

“CDR移植抗體”是包含來源于特定物種或同種型的抗體的一個或多個CDR和相同或不同物種或同種型的另一抗體的框架的抗體。

“多特異性抗體”是識別在一個或多個抗原上的超過一個表位的抗體。這種類型的抗體的子類為“雙特異性抗體”，其識別在相同或不同抗原上的2個不同的表位。

如果抗原結(jié)合蛋白以1納摩爾或更小的解離常數(shù)結(jié)合抗原(例如，人CD147)，那么該抗原結(jié)合蛋白“特異性地結(jié)合”該抗原。

“抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域”、“抗原結(jié)合區(qū)”或“抗原結(jié)合位點”為含有與抗原相互作用并造成抗原結(jié)合蛋白對抗原的特異性和親和力的氨基酸殘基(或其它部分)的抗原結(jié)合蛋白的部分。對于特異性地結(jié)合其抗原的抗體，這包括其CDR域中至少一個的至少一部分。

“表位”為分子的被抗原結(jié)合蛋白(例如，抗體)結(jié)合的部分。表位可以包括分子的非鄰近部分(例如在多肽中，在多肽的一級序列中非連續(xù)的但在多肽的三級和四級結(jié)構(gòu)的情況下彼此足夠接近以被抗原結(jié)合蛋白結(jié)合的氨基酸殘基)。

兩個多核苷酸或兩個多肽序列的“百分同一性”通過利用GAP計算機程序(GCG Wisconsin Package的部分，版本10.3(Accelrys，圣地亞哥，加利福尼亞州)使用其默認(rèn)參數(shù)比較該序列來確定。

術(shù)語“多核苷酸”、“寡核苷酸”和“核酸”在全文中可互換地使用并包括DNA分子(例如，cDNA或基因組DNA)、RNA分子(例如，mRNA)、用核苷酸類似物(例如，肽核酸和非天然存在的核苷酸類似物)產(chǎn)生的DNA或RNA的類似物及其雜合體。核酸分子可以為單鏈或雙鏈的。在一個實施方式中，本發(fā)明的核酸分子包含編碼抗體或其片段、衍生物、突變蛋白或變體的連續(xù)開放閱讀框。

如果兩個單鏈多核苷酸的序列可以按反平行定向?qū)R以使得一個多核苷酸中的每個核苷酸與另一多核苷酸中的其互補核苷酸相對的而沒有引入空位和在任一序列的5'或3'端沒有未配對的核苷酸，那么這兩個單鏈多核苷酸是彼此的“互補序列”。如果兩個多核苷酸可以在中等嚴(yán)格條件下彼此雜交，那么一個多核苷酸與另一多核苷酸互補。因此，多核苷酸可以與另一多核苷酸互補而不是其互補序列。

“載體”為可以用于將與其連接的另一核酸引入細(xì)胞中的核酸。一種類型的載體為“質(zhì)?！保渲傅氖蔷€性或環(huán)狀雙鏈DNA分子，可以將另外的核酸片段連接至該雙鏈DNA分子中。另一類型的載體為病毒載體(例如，復(fù)制缺陷型逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒)，其中可將另外的DNA片段引入到病毒基因組中。某些載體能夠在其所引入的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制(例如，包含細(xì)菌復(fù)制起點的細(xì)菌載體和附加型哺乳動物載體)。其它載體(例如，非附加型哺乳動物載體)在引入宿主細(xì)胞中后被整合到宿主細(xì)胞的基因組中，且由此與宿主基因組一起復(fù)制?！氨磉_載體”為可以直接指導(dǎo)選定多核苷酸的表達的載體類型。

如果調(diào)控序列影響核苷酸序列的表達(例如，表達的水平、時機或位置)，那么該核苷酸序列“可操作地連接”于調(diào)控序列?！罢{(diào)控序列”為影響其可操作地連接的核酸的表達(例如，表達的水平、時機或位置)的核酸。調(diào)控序列可以，例如，直接在所調(diào)節(jié)的核酸上，或通過一個或多個其它分子(例如，結(jié)合于該調(diào)控序列和/或該核酸的多肽)的作用施加其影響。調(diào)控序列的例子包括啟動子、增強子和其它表達控制元件(例如，聚腺苷酸化信號)。調(diào)控序列的另外的例子在，例如，Goeddel,1990,Gene Expression Technology:Methods in Enzymology 185,Academic Press,San Diego,Calif.和Baron等人,1995,Nucleic Acids Res.23:3605-06中描述。

“宿主細(xì)胞”為可以用于表達核酸(例如，本發(fā)明的核酸)的細(xì)胞。宿主細(xì)胞可以是原核細(xì)胞，例如，大腸桿菌，或其可以是真核細(xì)胞，例如，單細(xì)胞真核生物(例如，酵母或其它真菌)、植物細(xì)胞(例如，煙草或番茄植物細(xì)胞)、動物細(xì)胞(例如，人細(xì)胞、猴細(xì)胞、倉鼠細(xì)胞、大鼠細(xì)胞、小鼠細(xì)胞或昆蟲細(xì)胞)或雜交瘤。宿主細(xì)胞的例子包括COS-7系猴腎細(xì)胞(ATCC CRL 1651)(參見Gluzman等人，1981,Cell 23:175)、L細(xì)胞、C127細(xì)胞、3T3細(xì)胞(ATCC CCL 163)、中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞或其衍生物如Veggie CHO和相關(guān)細(xì)胞系(其在無血清培養(yǎng)基中生長)(參見Rasmussen等人，1998,Cytotechnology 28:31)或CHO株DX-B11(其為DHFR缺陷的)(參見Urlaub等人，1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216-20)、HeLa細(xì)胞、BHK(ATCC CRL 10)細(xì)胞系、來源于非洲綠猴腎細(xì)胞系CV1的CV1/EBNA細(xì)胞系(ATCC CCL 70)(參見McMahan等人，1991,EMBO J.10:2821)、人胚腎細(xì)胞(比如293、293EBNA或MSR293)、人表皮A431細(xì)胞，人Colo205細(xì)胞、其它轉(zhuǎn)化的靈長類細(xì)胞系、正常二倍體細(xì)胞、來源于原代組織、原代外植體的體外培養(yǎng)物的細(xì)胞株、HL-60、U937、HaK或Jurkat細(xì)胞。通常，宿主細(xì)胞是可用多肽編碼核酸(其隨后可以在宿主細(xì)胞中表達)轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)細(xì)胞。短語“重組宿主細(xì)胞”可以用于表示已經(jīng)用待表達的核酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞。宿主細(xì)胞也可以為包含核酸，但除非將調(diào)控序列引入到該宿主細(xì)胞中以使該調(diào)控序列可操作地與該核酸連接，該核酸不以所需的水平表達的細(xì)胞。應(yīng)該理解，術(shù)語宿主細(xì)胞不僅僅指特定的受試細(xì)胞，還指這種細(xì)胞的后代或潛在的后代。因為在后續(xù)的世代中可能由于例如突變或環(huán)境影響而出現(xiàn)一些變化，因此實際上這類后代可能與親代細(xì)胞不相同，但仍然包含在本文使用的術(shù)語的范圍內(nèi)。

可以利用本領(lǐng)域已知的任何標(biāo)準(zhǔn)方法產(chǎn)生本公開的多肽。在一個實例中，通過重組DNA方法將編碼多肽的核酸序列(例如，cDNA)插入到重組表達載體中并且在促進表達的條件下表達DNA序列來產(chǎn)生該多肽。

可以化學(xué)合成編碼本文公開的各種多肽中任何一種的核酸?？梢赃x擇密碼子使用以改善在細(xì)胞中的表達。這類密碼子選擇取決于選擇的細(xì)胞類型。已經(jīng)開發(fā)了用于大腸桿菌和其它細(xì)菌以及哺乳動物細(xì)胞、植物細(xì)胞、酵母細(xì)胞和昆蟲細(xì)胞的專用的密碼子使用模式。參見，例如：Mayfield等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2003，100(2):438-42、Sinclair等人，Protein Expr.Purif.2002(1):96-105、Connell N D.Curr.Opin.Biotechnol.2001，12(5):446-9、Makrides等人，Microbiol.Rev.1996，60(3):512-38和Sharp等人，Yeast.1991，7(7):657-78。

用于核酸操作的一般技術(shù)在，例如，Sambrook等人，Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Vols.1-3,Cold Spring Harbor Laboratory Press,2ed.,1989或F.Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology(Green Publishing and Wiley-Interscience:NewYork,1987)及其定期更新中描述，其內(nèi)容通過引用結(jié)合于本文中。編碼多肽的DNA可操作地連接至源自哺乳動物、病毒或昆蟲基因的合適的轉(zhuǎn)錄或翻譯調(diào)控元件。這些調(diào)控元件包括轉(zhuǎn)錄啟動子、任選的控制轉(zhuǎn)錄的操縱子序列、編碼合適的mRNA核糖體結(jié)合位點的序列及控制轉(zhuǎn)錄和翻譯的終止的序列。在宿主中復(fù)制的能力(通常由復(fù)制起點賦予)和幫助識別轉(zhuǎn)化體的選擇基因另外地并入。

重組DNA也可以包括可以用于純化蛋白質(zhì)的任何類型的蛋白質(zhì)標(biāo)簽序列。蛋白質(zhì)標(biāo)簽的例子包括，但不限于組氨酸標(biāo)簽、FLAG標(biāo)簽、myc標(biāo)簽、HA標(biāo)簽或GST標(biāo)簽。用于細(xì)菌、真菌、酵母和哺乳動物細(xì)胞宿主的合適的克隆和表達載體可以在Cloning Vectors:A Laboratory Manual,(Elsevier,N.Y.,1985)中找到。

利用適合于宿主細(xì)胞的方法將表達構(gòu)建體引入宿主細(xì)胞中。本領(lǐng)域已知將核酸引入宿主細(xì)胞中的多種方法，包括但不限于：電穿孔，采用氯化鈣、氯化銣、磷酸鈣、DEAE-葡聚糖或其它物質(zhì)的轉(zhuǎn)染，基因槍法，脂質(zhì)轉(zhuǎn)染和感染(其中載體是傳染劑)。合適的宿主細(xì)胞包括原核細(xì)胞、酵母、哺乳動物細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞。合適的細(xì)菌包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性有機體，例如，大腸桿菌或芽孢桿菌屬。酵母，優(yōu)選來自酵母屬物種，比如釀酒酵母，也可用于產(chǎn)生多肽。各種哺乳動物或昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)也可以用于表達重組蛋白。Luckow和Summers綜述了在昆蟲細(xì)胞中用于產(chǎn)生異源蛋白質(zhì)的桿狀病毒系統(tǒng)(Bio/Technology,6:47,1988)。合適的哺乳動物宿主細(xì)胞系的例子包括內(nèi)皮細(xì)胞、COS-7猴腎細(xì)胞、CV-1、L細(xì)胞、C127、3T3、中國倉鼠卵巢(CHO)、人胚腎細(xì)胞、HeLa、293、293T和BHK細(xì)胞系。純化的多肽通過培養(yǎng)合適的宿主/載體系統(tǒng)以表達重組蛋白來制備。對于許多應(yīng)用，本文公開的許多多肽的小尺寸使得在大腸桿菌中表達成為優(yōu)選的表達方法。然后從培養(yǎng)基或細(xì)胞提取物純化蛋白質(zhì)。

本文公開的蛋白質(zhì)也可以使用細(xì)胞翻譯系統(tǒng)產(chǎn)生。為了此類目的，必須修飾編碼多肽的核酸以允許進行體外轉(zhuǎn)錄而產(chǎn)生mRNA并且允許利用在特定的無細(xì)胞系統(tǒng)(真核的，比如哺乳動物或酵母無細(xì)胞翻譯系統(tǒng)，或原核的，比如，細(xì)菌無細(xì)胞翻譯系統(tǒng))中的mRNA無細(xì)胞翻譯。CD147-結(jié)合多肽也可以通過化學(xué)合成產(chǎn)生(例如，通過在Solid Phase Peptide Synthesis,2^nd ed.,1984,The Pierce Chemical Co.,Rockford,111中描述的方法)。也可以通過化學(xué)合成產(chǎn)生對蛋白質(zhì)的修飾。本公開的多肽可以通過蛋白質(zhì)化學(xué)領(lǐng)域公知的蛋白質(zhì)分離/純化方法進行純化。非限制性例子包括萃取、重結(jié)晶、鹽析(例如，用硫酸銨或硫酸鈉)、離心、透析、超濾、吸附色譜、離子交換色譜、疏水性色譜、正相色譜、反相色譜、凝膠過濾、凝膠滲透色譜，親和色譜、電泳、逆流分布或這些的任意組合。純化后，可以通過本領(lǐng)域已知的多種方法中的任何一種，包括但不限于，過濾和透析，使多肽交換到不同的緩沖液中和/或濃縮。

純化的多肽優(yōu)選至少85％純，更優(yōu)選至少95％純，并且最優(yōu)選至少98％純。無論純度的確切數(shù)值如何，多肽都足夠純以用作藥物產(chǎn)品。

多肽的翻譯后修飾

在某些實施方式中，本發(fā)明的結(jié)合多肽可以進一步包括翻譯后修飾。示例性的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括磷酸化、乙?；⒓谆DP-核糖基化、泛素化、糖基化、羰基化、SUMO化、生物素化或者多肽側(cè)鏈或疏水性基團的添加。結(jié)果，修飾的可溶性多肽可含有非氨基酸成分，例如脂質(zhì)、多糖或單糖和磷酸類。糖基化的優(yōu)選形式是唾液酸化，其將一個或多個唾液酸部分與多肽結(jié)合。唾液酸部分改善溶解性和血清半衰期，同時還降低該蛋白質(zhì)的可能的免疫原性。參見Raju等人，Biochemistry.2001，31；40(30):8868-76。

在一個實施方式中，所述可溶性多肽的修飾形式包括將所述可溶性多肽連接至非蛋白質(zhì)性的聚合物。在一個實施方式中，該聚合物為聚乙二醇("PEG")、聚丙二醇或聚氧化烯類，如美國專利號4,640,835、4,496,689、4,301,144、4,670,417、4,791,192或4,179,337中所述的方式。

PEG是可在市場上買到或可以根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法通過乙二醇的開環(huán)聚合制備(Sandler和Karo,Polymer Synthesis,Academic Press,New York,Vol.3,138-161頁)的水溶性聚合物。術(shù)語“PEG”廣泛地用于涵蓋任何聚乙二醇分子而不考慮大小或在PEG末端的修飾，并且可以由下式表示：X-O(CH₂CH₂O)_n-CH₂CH₂OH(1)，其中n為20至2300，并且X為H或末端修飾，例如：C_1-4烷基。在一個實施方式中，本發(fā)明的PEG在一端以羥基或甲氧基封端，即，X為H或CH₃("甲氧基PEG")。PEG可以包含結(jié)合反應(yīng)所需的進一步的化學(xué)基團，其由分子的化學(xué)合成產(chǎn)生，或者是使分子的部分具有最佳距離的間隔物。另外，這種PEG可以由一條或多條連接在一起的PEG側(cè)鏈組成。具有多于一條PEG側(cè)鏈的PEG被稱為多臂或枝化PEG。枝化PEG可以通過，例如，將聚環(huán)氧乙烷添加到各種多元醇(包括甘油、季戊四醇和山梨糖醇)而制備。例如，四臂的枝化PEG可以由季戊四醇和環(huán)氧乙烷制備。例如，EP-A0473084和美國專利號5,932,462描述了枝化PEG。PEG的一種形式包括由賴氨酸的伯氨基基團連接的兩個PEG側(cè)鏈(PEG2)(Monfardini等人，Bioconjugate Chem.6(1995)62-69)。

相對于未修飾的結(jié)合多肽的清除率，PEG修飾的多肽的血清清除速率可以降低約10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或甚至90％。PEG修飾的多肽的半衰期(t 1/2)相對于未修飾蛋白質(zhì)的半衰期增加。相對于未修飾的結(jié)合多肽的半衰期，PEG結(jié)合多肽的半衰期可以增加至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、125％、150％、175％、200％、250％、300％、400％或500％，或者甚至1000％。在一些實施方式中，在體外測定蛋白質(zhì)半衰期，比如，在緩沖鹽水溶液中或在血清中。在其它實施方式中，蛋白質(zhì)半衰期是體內(nèi)半衰期，比如在動物的血清或其它體液中的蛋白質(zhì)半衰期。

治療性制劑和施用方式

本公開特征用于治療或預(yù)防金黃色葡萄球菌的方法，包括施用抗-CD147抗體。施用的技術(shù)和劑量根據(jù)特定多肽的類型和待治療的特定病癥而不同，但可以由技術(shù)人員容易地確定。通常，管理機構(gòu)要求用作治療劑的蛋白質(zhì)試劑進行配制以具有可接受的低水平熱原。因此，治療性制劑與其它制劑的區(qū)別通常在于：其基本上是無熱原的，或者至少含有的熱原不超過由適當(dāng)?shù)墓芾頇C構(gòu)(例如，F(xiàn)DA)確定的可接受水平。

本公開的治療性組合物可以以單位劑量形式與藥學(xué)上可接受的稀釋劑、載體或賦形劑一起施用。作為非限制性的例子，可以腸胃外(例如，靜脈內(nèi)、皮下)、口服或局部施用。此外，可以采用任何基因治療技術(shù)(使用編碼本發(fā)明多肽的核酸)，例如裸DNA遞送、重組基因和載體、基于細(xì)胞的遞送，包括患者細(xì)胞的離體操作，等。

該組合物可以是用于口服施用的丸劑、片劑、膠囊、液體或持續(xù)釋放片劑，或者用于靜脈內(nèi)、皮下或腸胃外施用的液體，或者用于局部施用的凝膠、洗劑、軟膏、霜劑或者聚合物或其它持續(xù)釋放媒介的形式。

在例如"Remington:The Science and Practice of Pharmacy"(20^th ed.,ed.A.R.Gennaro A R.,2000,Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia,Pa.)中可以找到本領(lǐng)域公知的用于制備制劑的方法。用于腸胃外施用的制劑可以，例如，含有賦形劑、無菌水、鹽水、聚烷撐二醇比如聚乙二醇、植物來源的油或氫化萘類。生物相容性的、可生物降解的交酯聚合物、丙交酯/乙交酯共聚物或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物可以用于控制化合物的釋放。納米顆粒制劑(例如，可生物降解的納米顆粒、固體脂質(zhì)納米顆粒、脂質(zhì)體)可用于控制化合物的生物分布。其它潛在有用的腸胃外遞送體系包括乙烯-乙酸乙烯酯共聚物顆粒、滲透泵、可植入式輸注系統(tǒng)和脂質(zhì)體。制劑中化合物的濃度根據(jù)許多因素變化，包括待施用藥物的劑量和施用途徑。

多肽可任選地作為藥學(xué)上可接受的鹽施用，比如在制藥工業(yè)中常用的無毒的酸加成鹽或金屬復(fù)合物。酸加成鹽的例子包括有機酸，比如乙酸、乳酸、撲酸、馬來酸、檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸、琥珀酸、苯甲酸、棕櫚酸、辛二酸、水楊酸、酒石酸、甲磺酸、甲苯磺酸，或三氟乙酸等；聚合酸，比如單寧酸、羧甲基纖維素等；和無機酸，如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸等。金屬復(fù)合物包括鋅、鐵等等。在一個實例中，多肽在乙酸鈉存在的情況下配制以提高熱穩(wěn)定性。

用于口服用途的制劑包括含有與非毒性的藥物學(xué)可接受的賦形劑混合的活性成分的片劑。這些賦形劑可以是例如惰性稀釋劑或填充劑(例如，蔗糖和山梨醇)、潤滑劑、助流劑和抗粘劑(例如，硬脂酸鎂、硬脂酸鋅、硬脂酸、硅石、氫化植物油或滑石)。

用于口服用途的制劑也可以作為可咀嚼片劑，或作為硬明膠膠囊(其中活性成分與惰性固體稀釋劑混合)或作為軟明膠膠囊劑(其中活性成分與水或油介質(zhì)混合)提供。

治療有效劑量是指產(chǎn)生用于施用目的的治療效果的劑量。確切的劑量取決于待治療的病癥，并且本領(lǐng)域技術(shù)人員可以利用已知技術(shù)確定。通常，多肽以每天約0.01μg/kg至約50mg/kg，優(yōu)選每天0.01mg/kg至約30mg/kg，最優(yōu)選每天0.1mg/kg至約20mg/kg施用。多肽可以每天(例如，每天一次、二次、三次或四次)或優(yōu)選以較低頻率(例如、每周、每兩周、每三周、每月或每季度)給予。此外，如本領(lǐng)域已知的，根據(jù)年齡以及體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥時間、藥物相互作用和疾病的嚴(yán)重程度做出調(diào)整可能是必要的，并且將由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)實驗確定。

示例性用途

CD147結(jié)合多肽可單獨或與一種或多種另外的治療如化療、放療、免疫療法、外科手術(shù)介入或這些方法的任何組合聯(lián)合施用。如上所述的，長期治療在其它治療策略的情況下作為輔助療法同樣是可能的。

在這些方法的某些實施方式中，可以一起(同時地)或在不同時間(依次地)施用一種或多種多肽治療劑。此外，多肽治療劑可以與用于治療癌癥或用于治療CD147-表達腫瘤(包括肝細(xì)胞癌和鱗狀細(xì)胞癌)和非腫瘤疾病(選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、實驗性肺損傷、動脈粥樣硬化、由丙型肝炎病毒引起的慢性肝病、缺血性心肌損傷和心力衰竭)的另一類型的化合物一起施用。

在某些實施方式中，可以單獨使用本發(fā)明的所述抗-CD147抗體。

在某些實施方式中，為了診斷的目的，可以標(biāo)記或不標(biāo)記結(jié)合多肽或其片段。通常診斷分析需要檢測由結(jié)合多肽與CD147的結(jié)合產(chǎn)生的復(fù)合物的形成。與抗體類似，可以直接標(biāo)記結(jié)合多肽或片段?？梢圆捎枚喾N標(biāo)記，包括，但不限于：放射性核素、熒光劑、酶、酶底物、酶輔因子、酶抑制劑和配體(如，生物素、半抗原)。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知許多合適的免疫分析法(參見，例如，美國專利號3,817,827、3,850,752、3,901,654和4,098,876)。在未標(biāo)記時，結(jié)合多肽可以用于分析中，比如凝集分析。未標(biāo)記的結(jié)合多肽也可以與另外(一種或多種)合適的試劑結(jié)合使用，該試劑可以用于檢測結(jié)合多肽，比如，與結(jié)合多肽反應(yīng)的標(biāo)記抗體或其它合適的試劑(例如，標(biāo)記的蛋白A)。

在一個實施方式中，本發(fā)明的結(jié)合多肽可以用于酶免疫分析法中，其中所述多肽與酶偶聯(lián)。當(dāng)包含CD147蛋白的生物樣品與所述結(jié)合多肽組合時，在結(jié)合多肽和CD147蛋白之間發(fā)生結(jié)合。在一個實施方式中，含有表達CD147蛋白的細(xì)胞(例如，內(nèi)皮細(xì)胞)的樣品與所述抗體組合，并且在結(jié)合多肽和攜帶被該結(jié)合多肽識別的CD147蛋白的細(xì)胞之間發(fā)生結(jié)合。這些結(jié)合的細(xì)胞可以與未結(jié)合的試劑分離并且可以測定特異地結(jié)合細(xì)胞的結(jié)合多肽-酶偶聯(lián)物的存在，例如，通過將樣品與酶的底物(其在受到酶的作用時產(chǎn)生顏色變化或其它可檢測的變化)接觸。在另一實施方式中，所述結(jié)合多肽可以是未標(biāo)記的，并且可以加入識別所述結(jié)合多肽的第二標(biāo)記多肽(例如，抗體)。

在某些方面，還可以制備用于檢測生物樣品中CD147蛋白的存在的試劑盒。這些試劑盒將包括與CD147蛋白或所述受體的部分結(jié)合的CD147結(jié)合多肽，以及一種或多種適于檢測結(jié)合多肽和受體蛋白或其部分之間的復(fù)合物的存在的輔助試劑。本發(fā)明的多肽組合物可以單獨地或與對于其它表位特異性的另外的抗體組合以凍干形式提供。結(jié)合多肽和/或抗體(其可以是標(biāo)記或未標(biāo)記的)可以與輔助成分(例如，緩沖劑如Tris、磷酸鹽和碳酸鹽，穩(wěn)定劑，賦形劑，殺生物劑和/或惰性蛋白質(zhì)，例如，牛血清白蛋白)一起包括在試劑盒中。例如，結(jié)合多肽和/或抗體可以作為與輔助成分的凍干混合物提供，或輔助成分可以單獨地提供用于由使用者組合。一般地，這些輔助材料重量基于活性結(jié)合多肽或抗體的量以小于約5％重量存在，且通?；诙嚯幕蚩贵w濃度以至少約0.001％重量的總量存在。當(dāng)采用能夠與結(jié)合多肽結(jié)合的第二抗體時，這種抗體可以在試劑盒中提供，例如在單獨的小瓶或容器中。第二抗體(如果存在)通常是標(biāo)記的，并且可以以與上文描述的抗體制劑相似的方式配制。

使用標(biāo)準(zhǔn)的一字母或三字母的縮寫表示多肽序列。除非另有說明，每條多肽序列具有左側(cè)的氨基端和右側(cè)的羧基端；各單鏈核酸序列和各雙鏈核酸序列的頂部鏈具有左鍘的5'端和右鍘的3'端。還可以通過解釋特定多肽序列與參考序列如何不同來描述該特定多肽序列。

除非另有說明，以下術(shù)語應(yīng)該理解為具有下面的意思：

術(shù)語“肽”、“多肽”和“蛋白質(zhì)”各自指包含通過肽鍵彼此接合的兩個或更多個氨基酸殘基的分子。這些術(shù)語包含，例如，天然和人工蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)片段和蛋白質(zhì)序列的多肽類似物(比如突變蛋白、變體和融合蛋白)以及翻譯后或者以其它方式共價或非共價地修飾的蛋白質(zhì)。肽、多肽或蛋白質(zhì)可以為單體的或多聚的。

多肽(例如，抗體)的“變體”包括其中相對于另一多肽序列，一個或多個氨基酸殘基插入氨基酸序列中、從氨基酸序列刪除和/或被置換的氨基酸序列。公開的變體包括，例如，融合蛋白。

多肽的“衍生物”為已經(jīng)進行化學(xué)修飾的多肽(例如，抗體)，例如，通過與另一化學(xué)部分(比如，聚乙二醇或白蛋白，例如，人血清白蛋白)偶聯(lián)、磷酸化和糖基化。除非另有說明，除了包括2條全長重鏈和兩條全長輕鏈的抗體之外，術(shù)語“抗體”包括其衍生物、變體、片段或突變蛋白，其例子在下文有描述。

“抗原結(jié)合蛋白”是包含與抗原結(jié)合的部分和，任選地，允許抗原結(jié)合部分采取利于抗原結(jié)合蛋白與抗原結(jié)合的構(gòu)象的骨架或框架部分的蛋白質(zhì)?？乖Y(jié)合蛋白的例子包括抗體、抗體片段(例如，抗體的抗原結(jié)合部分)、抗體衍生物和抗體類似物?？乖Y(jié)合蛋白可以包括，例如，具有移植的CDR或CDR衍生物的可替代的蛋白質(zhì)骨架或人工骨架。這些骨架包括，但不限于，抗體來源的骨架(包含引入以例如使抗原結(jié)合蛋白的三維結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的突變)以及完全合成的骨架(包含，例如，生物相容性聚合物)。參見，例如，Korndorfer等人,2003,Proteins:Structure,Function,and Bioinformatics,Volume 53,Issue 1:121-129；Roque等人,2004,Biotechnol.Prog.20:639-654。此外，可以使用肽抗體模擬物(“PAM”)以及基于抗體模擬物的骨架(利用纖維連接蛋白組分作為骨架)。

抗原結(jié)合蛋白可以具有，例如，天然存在的免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)?！懊庖咔虻鞍住笔撬木垠w分子。在天然存在的免疫球蛋白中，每個四聚體由兩個相同的多肽鏈對組成，每對具有一條“輕”鏈(約25kDa)和一條“重”鏈(約50-70kDa)。每條鏈的氨基端部分包括主要負(fù)責(zé)抗原識別的約100至110或更多個氨基酸的可變區(qū)。每條鏈的羧基端部分限定主要負(fù)責(zé)效應(yīng)子功能的恒定區(qū)。人輕鏈分類為κ或λ輕鏈。重鏈分類為μ、δ、γ、α或ε，并分別定義抗體同種型為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。優(yōu)選地，本文公開的抗EGFR抗體的特征在于在重鏈VH和輕鏈VL氨基酸序列中的其可變域區(qū)域序列。優(yōu)選的抗體為A6，其為κIgG抗體。在輕鏈和重鏈內(nèi)，可變區(qū)和恒定區(qū)通過約12或更多個氨基酸的“J”區(qū)連接，其中重鏈還包括約10個或更多個氨基酸的“D”區(qū)。通常參見，F(xiàn)undamental Immunology，第7章(Paul,W.編輯,第二版.Raven出版,N.Y.(1989))。每個輕/重鏈對的可變區(qū)形成抗體結(jié)合位點，使得完整的免疫球蛋白具有兩個結(jié)合位點。

“多特異性抗體”是識別在一個或多個抗原上的超過一個表位的抗體。該類型抗體的子類為“雙特異性抗體”，其識別在相同或不同抗原上的2個不同的表位。

如果抗原結(jié)合蛋白以100納摩爾或更小的解離常數(shù)結(jié)合抗原(例如，人CD147)，那么其“特異性地結(jié)合”該抗原。

“抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域”、“抗原結(jié)合區(qū)”或“抗原結(jié)合位點”為含有與抗原相互作用并造成抗原結(jié)合蛋白對抗原的特異性和親和力的氨基酸殘基(或其它部分)的抗原結(jié)合蛋白的部分。對于特異性地結(jié)合其抗原的抗體，這包括其CDR結(jié)構(gòu)域中至少一個的至少一部分。

“表位”為分子的被抗原結(jié)合蛋白(例如，被抗體)結(jié)合的部分。表位可以包括分子的非鄰近部分(例如在多肽中，在多肽的一級序列中不鄰近但在多肽的三級和四級結(jié)構(gòu)的情況下彼此足夠接近從而能夠被抗原結(jié)合蛋白結(jié)合的氨基酸殘基)。

兩條多核苷酸或兩條多肽序列的“百分同一性”通過利用GAP計算機程序(GCG Wisconsin Package的部分，版本10.3(Accelrys，圣地亞哥，加利福尼亞州))使用其默認(rèn)參數(shù)比較序列來確定。

“宿主細(xì)胞”為可以用于表達核酸的細(xì)胞。宿主細(xì)胞可以是原核細(xì)胞，例如，大腸桿菌，或其可以是真核細(xì)胞，例如，單細(xì)胞真核生物(例如，酵母或其它真菌)、植物細(xì)胞(例如，煙草或番茄植物細(xì)胞)、動物細(xì)胞(例如，人細(xì)胞、猴細(xì)胞、倉鼠細(xì)胞、大鼠細(xì)胞、小鼠細(xì)胞或昆蟲細(xì)胞)或雜交瘤。宿主細(xì)胞的例子包括COS-7系猴腎細(xì)胞(ATCC CRL 1651)(參見Gluzman等人，1981,Cell 23:175)、L細(xì)胞、C127細(xì)胞、3T3細(xì)胞(ATCC CCL 163)、中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞或其衍生物如Veggie CHO和相關(guān)細(xì)胞系(其在無血清培養(yǎng)基中生長)(Rasmussen等人，1998,Cytotechnology 28:31)或CHO菌株DX-B11(其是DHFR缺陷的)(參見Urlaub等人，1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216-20)、HeLa細(xì)胞、BHK(ATCC CRL 10)細(xì)胞系、源于非洲綠猴腎細(xì)胞系CV1的CV1/EBNA細(xì)胞系(ATCC CCL 70)(McMahan等人，1991,EMBO J.10:2821)、人胚腎細(xì)胞(如293、293EBNA或MSR 293)、人表皮A431細(xì)胞、人Colo205細(xì)胞、其它轉(zhuǎn)化的靈長類細(xì)胞系、正常二倍體細(xì)胞、來源于原代組織、原代外植體的體外培養(yǎng)物的細(xì)胞株、HL-60、U937、HaK或Jurkat細(xì)胞。通常，宿主細(xì)胞是可以用多肽編碼核酸(其隨后可以在宿主細(xì)胞中表達)轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)細(xì)胞。短語“重組宿主細(xì)胞”可以用于表示已經(jīng)用待表達的核酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞。宿主細(xì)胞也可以為包含核酸但除非將調(diào)控序列引入到該宿主細(xì)胞中以使得該調(diào)控序列可操作地與該核酸連接，否則該核酸不以所需的水平表達的細(xì)胞。應(yīng)該理解，術(shù)語宿主細(xì)胞不僅僅指特定的受試細(xì)胞，還指這種細(xì)胞的后代或潛在的后代。因為某些改變可能由于例如突變或環(huán)境影響而在后續(xù)的世代中出現(xiàn)，因此實際上，這些后代可能與親代細(xì)胞不相同，但仍然包括在本文使用的術(shù)語的范圍內(nèi)。

抗原結(jié)合蛋白

抗原結(jié)合蛋白(例如，抗體、抗體片段、抗體衍生物、抗體突變蛋白和抗體變體)為結(jié)合CD147的多肽。

包含一個或多個抗原結(jié)合蛋白的寡聚體可以用作CD147拮抗劑。寡聚體可以為共價連接或非共價連接的二聚體、三聚體或更高級的寡聚體的形式。考慮使用包含兩個或更多個抗原結(jié)合蛋白的寡聚體，一個例子是同源二聚體。其它寡聚體包括異源二聚體、同源三聚體、異源三聚體、同源四聚體、異源四聚體等。

一個實施方式涉及包含通過在與抗原結(jié)合蛋白融合的肽部分之間的共價或非共價相互作用連接的多個抗原結(jié)合蛋白的寡聚體。這類肽可以是肽接頭(間隔物)，或具有促進低聚化的性質(zhì)的肽。亮氨酸拉鏈和來源于抗體的某些多肽屬于能夠促進與其連接的抗原結(jié)合蛋白的低聚化的肽，如下文更詳細(xì)描述的。

在特定實施方式中，寡聚體包含兩個至四個抗原結(jié)合蛋白。寡聚體的抗原結(jié)合蛋白可以是任何形式的，如上述形式的任何一種，例如，變體或片段。優(yōu)選地，寡聚體包含具有CD147結(jié)合活性的抗原結(jié)合蛋白。

在一個實施方式中，寡聚體使用源自免疫球蛋白的多肽制備。例如，Ashkenazi等人,1991,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:10535、Byrn等人,1990,Nature 344:677和Hollenbaugh等人,1992"Construction of Immunoglobulin Fusion Proteins",Current Protocols in Immunology,Suppl.4，第10.19.1-10.19.11頁已經(jīng)描述了包含與抗體來源的多肽的各個部分(包括Fc結(jié)構(gòu)域)融合的某些異源多肽的融合蛋白的制備。

一個實施方式涉及通過將抗-CD147抗體的CD147結(jié)合片段與抗體的Fc區(qū)融合產(chǎn)生的包含兩個融合蛋白的二聚體?？梢酝ㄟ^例如，將編碼融合蛋白的基因融合體插入合適的表達載體中，在用重組表達載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞中表達該基因融合體和使表達的融合蛋白非常像抗體分子一樣地組裝，由此在Fc部分之間形成鏈間二硫鍵以產(chǎn)生二聚體來制備該二聚體。

術(shù)語“Fc多肽”包括源自抗體Fc區(qū)的多肽的天然和突變蛋白形式。也包括含有促進二聚化的鉸鏈區(qū)的這種多肽的截短形式。包含F(xiàn)c部分的融合蛋白(以及由其形成的寡聚體)具有如下優(yōu)勢：易于通過在蛋白A或蛋白G柱上的親和色譜純化。

制備低聚抗原結(jié)合蛋白的另一方法包括使用亮氨酸拉鏈。亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域為促進亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域存在于其中的蛋白質(zhì)的低聚化的肽。亮氨酸拉鏈最初在幾種DNA結(jié)合蛋白中識別(Landschulz等人,1988,Science 240:1759)，并且此后在多種不同的蛋白質(zhì)中發(fā)現(xiàn)。已知的亮氨酸拉鏈中有二聚化或三聚化的天然存在的肽及其衍生物。WO94/10308中描述了適于產(chǎn)生可溶性低聚蛋白的亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域的例子，并且Hoppe等人,1994,FEBS Letters 344:191中描述了來源于肺表面活性蛋白D(SPD)的亮氨酸拉鏈。Fanslow等人,1994,Semin.Immunol.6:267-78中描述了修飾的亮氨酸拉鏈的使用，該修飾的亮氨酸拉鏈允許與其融合的異源蛋白質(zhì)穩(wěn)定地三聚化。在一種方法中，在合適的宿主細(xì)胞中表達包含與亮氨酸拉鏈肽融合的抗CD147抗體片段或衍生物的重組融合蛋白，并從培養(yǎng)物上清液回收形成的可溶性低聚抗-CD147抗體片段或衍生物。

可以通過常規(guī)技術(shù)產(chǎn)生本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白的抗原結(jié)合片段。這些片段的例子包括，但不限于Fab和F(ab')₂片段。

本公開提供了結(jié)合CD147的單克隆抗體。單克隆抗體可以利用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)產(chǎn)生，例如，通過使在完成免疫方案后從轉(zhuǎn)基因動物中收集的脾細(xì)胞永生化?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的任何技術(shù)使脾細(xì)胞永生化，例如，通過使脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合以產(chǎn)生雜交瘤。在產(chǎn)生雜交瘤的融合過程中使用的骨髓瘤細(xì)胞優(yōu)選為不產(chǎn)生抗體的，具有高融合效率和酶缺陷的(這使得該骨髓瘤細(xì)胞不能在僅支持期望的融合細(xì)胞(雜交瘤)生長的某些選擇培養(yǎng)基中生長)。在小鼠融合中使用的合適的細(xì)胞系的例子包括Sp-20、P3-X63/Ag8、P3-X63-Ag8.653、NS1/1.Ag 41、Sp210-Ag14、FO、NSO/U、MPC-11、MPC11-X45-GTG1.7和S194/5XX0Bul；在大鼠融合中使用的細(xì)胞系的例子包括R210.RCY3、Y3-Ag1.2.3、IR983F和48210。可用于細(xì)胞融合的其它細(xì)胞系為U-266、GM1500-GRG2、LICR-LON-HMy2和UC729-6。

針對CD147的抗原結(jié)合蛋白可以在體外或體內(nèi)用于，例如，檢測CD147多肽的存在的分析中。也可以采用該抗原結(jié)合蛋白通過免疫親和色譜純化CD147蛋白。阻斷性抗原結(jié)合蛋白可以用于本文公開的方法中。可以使用作為CD147拮抗劑發(fā)揮作用的抗原結(jié)合蛋白治療任何CD147誘導(dǎo)的病癥，包括但不限于各種癌癥。

抗原結(jié)合蛋白可以在體外過程中使用，或體內(nèi)施用以抑制CD147誘導(dǎo)的生物活性。因此，可以治療由CD147的蛋白水解活化(直接或間接地)引起或惡化的病癥，本文提供了其實例。在一個實施方式中，本發(fā)明提供治療方法，包括對需要的哺乳動物體內(nèi)施用有效降低CD147誘導(dǎo)的生物活性的量的CD147阻斷抗原結(jié)合蛋白。

抗原結(jié)合蛋白包括抑制CD147的生物活性的全人單克隆抗體。

可以通過許多常規(guī)技術(shù)的任何一種制備抗原結(jié)合蛋白。例如，它們可以從天然表達該抗原結(jié)合蛋白的細(xì)胞純化(例如，抗體可以從產(chǎn)生該抗體的雜交瘤純化)，或利用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)在重組表達體系中產(chǎn)生。參見，例如，Monoclonal Antibodies,Hybridomas:A New Dimension in Biological Analyses,Kennet等人.(編輯),Plenum出版社,紐約(1980)和Antibodies:A Laboratory Manual,Harlow and Land(編輯),Cold Spring Harbor Laboratory出版社，冷泉港實驗室,紐約(1988)。

可以使用本領(lǐng)域已知的任何表達系統(tǒng)制備本發(fā)明的重組多肽。通常，用包含編碼所需多肽的DNA的重組表達載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞?？梢圆捎玫乃拗骷?xì)胞包括原核細(xì)胞、酵母或高等真核細(xì)胞。原核細(xì)胞包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物體，例如，大腸桿菌或芽孢桿菌。高等真核細(xì)胞包括昆蟲細(xì)胞和哺乳動物來源的已建立細(xì)胞系。合適的哺乳動物宿主細(xì)胞系的例子包括COS-7系猴腎細(xì)胞(ATCC CRL 1651)(Gluzman等人,1981,Cell 23:175)、L細(xì)胞、293細(xì)胞、C127細(xì)胞、3T3細(xì)胞(ATCC CCL 163)、中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、BHK(ATCC CRL 10)細(xì)胞系和如McMahan等人，1991,EMBO J.10:2821所述的源自非洲綠猴腎細(xì)胞系CV1的CV1/EBNA細(xì)胞系(ATCC CCL 70)。Pouwels等人，(Cloning Vectors:A Laboratory Manual,Elsevier,N.Y.,1985)描述了用于細(xì)菌、真菌、酵母和哺乳動物細(xì)胞宿主的合適的克隆和表達載體。

轉(zhuǎn)化的細(xì)胞可以在促進多肽表達的條件下培養(yǎng)，并且多肽通過常規(guī)蛋白質(zhì)純化過程回收。一種這樣的純化過程包括使用親和色譜，例如在CD147的全部或部分(例如，細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域)與其結(jié)合的基質(zhì)上。本文考慮使用的多肽包括基本上沒有污染的內(nèi)源物質(zhì)的基本上同源的重組哺乳動物抗-CD147抗體多肽。

可以通過許多已知技術(shù)中的任何一種制備抗原結(jié)合蛋白并針對所需的性質(zhì)進行篩選。某些技術(shù)包括分離編碼目標(biāo)抗原結(jié)合蛋白(例如，抗-CD147抗體)的多肽鏈(或其部分)的核酸，和通過重組DNA技術(shù)操作該核酸。例如，核酸可以與另一目標(biāo)核酸融合，或被改變(例如，通過誘突或其它常規(guī)技術(shù))以添加、刪除或置換一個或多個氨基酸殘基。

單鏈抗體可以通過經(jīng)由氨基酸橋(短肽接頭)連接重鏈和輕鏈可變域(Fv區(qū))片段而得到單一多肽鏈來形成。這樣的單鏈Fv(scFv)通過將編碼肽接頭的DNA在編碼兩個可變域多肽(VL和VH)的DNA之間融合來制備。取決于在兩個可變域之間的柔性接頭的長度，得到的多肽可以本身回折以形成抗原結(jié)合單體，或其可以形成多聚體(例如，二聚體、三聚體或四聚體)(Kortt等人,1997,Prot.Eng.10:423；Kortt等人,2001,Biomol.Eng.18:95-108)。通過將不同的包含VL和VH的多肽組合可以形成結(jié)合不同表位的多聚scFv(Kriangkum等人,2001,Biomol.Eng.18:31-40)。為產(chǎn)生單鏈抗體而開發(fā)的技術(shù)包括在美國專利4,946,778；Bird,1988,Science 242:423；Huston等人,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879；Ward等人,1989,Nature 334:544和de Graaf等人,2002,Methods Mol.Biol.178:379-87中描述的那些技術(shù)。

已知用于從目標(biāo)抗體衍生不同亞類或同種型的抗體(即，亞類轉(zhuǎn)換)的技術(shù)。因此，例如，可以從IgM抗體衍生IgG抗體，反之亦然。這些技術(shù)允許制備具有給定抗體(親本抗體)的抗原結(jié)合性質(zhì)，但也展示與不同于親本抗體的抗體同種型或亞類相關(guān)的生物學(xué)性質(zhì)的新抗體?？梢圆捎弥亟MDNA技術(shù)。在這些過程中可以采用編碼特定抗體多肽的克隆的DNA，例如，編碼所需同種型的抗體的恒定域的DNA(Lantto等人,2002,Methods Mol.Biol.178:303-16)。此外，如果IgG4是需要的，那么在鉸鏈區(qū)中引入點突變(CPSCP->CPPCP)(Bloom等人,1997,Protein Science 6:407)以減輕形成H鏈內(nèi)二硫鍵(其可以導(dǎo)致IgG4抗體的異質(zhì)性)的趨勢也可能是理想的。

在特定實施方式中，本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白對CD147的結(jié)合親和力(K_a)為至少10⁶。在其它實施方式中，抗原結(jié)合蛋白表現(xiàn)的K_a為至少10⁷、至少10⁸、至少10⁹或至少10¹⁰。在另一實施方式中，該抗原結(jié)合蛋白表現(xiàn)的K_a與本文實施例中描述的抗體的K_a基本上相同。

在另一實施方式中，本公開提供了對CD147具有低解離速率的抗原結(jié)合蛋白。在一個實施方式中，該抗原結(jié)合蛋白的K_off為1×10^-4至10^-1或更低。在另一實施方式中，該K_off為5×10^-5至10^-1或更低。在另一實施方式中，該K_off與本文描述的抗體的K_off基本上相同。在另一實施方式中，該抗原結(jié)合蛋白以與本文描述的抗體基本上相同的K_off結(jié)合CD147。

在另一方面，本公開提供抑制CD147的活性的抗原結(jié)合蛋白。在一個實施方式中，該抗原結(jié)合蛋白的IC₅₀為1000nM或更低。在另一實施方式中，該IC₅₀為100nM或更低；在另一實施方式中，該IC₅₀為10nM或更低。在另一實施方式中，該IC₅₀與在本文實施例中描述的抗體的IC₅₀基本上相同。在另一實施方式中，該抗原結(jié)合蛋白以與本文描述的抗體基本上相同的IC₅₀抑制CD147的活性。

在另一方面，本公開提供了結(jié)合在細(xì)胞表面上表達的人CD147的抗原結(jié)合蛋白，且在如此結(jié)合時，其抑制細(xì)胞中的CD147信號傳導(dǎo)活性而不導(dǎo)致細(xì)胞表面上CD147量的顯著下降?？梢允褂萌魏螠y定或估算細(xì)胞表面上和/或內(nèi)部的CD147量的方法。在其它實施方式中，抗原結(jié)合蛋白與CD147表達細(xì)胞的結(jié)合導(dǎo)致少于約75％、50％、40％、30％、20％、15％、10％、5％、1％或0.1％的細(xì)胞表面CD147內(nèi)化。

在另一方面，本公開提供了在體外或體內(nèi)(例如，當(dāng)施用于人類受試者時)具有至少一天的半衰期的抗原結(jié)合蛋白。在一個實施方式中，抗原結(jié)合蛋白的半衰期為至少三天。在另一實施方式中，抗原結(jié)合蛋白的半衰期為四天或更長。在另一實施方式中，該抗原結(jié)合蛋白的半衰期為八天或更長。在另一實施方式中，抗原結(jié)合蛋白被衍生化或修飾以使得其相比于未衍生化或未修飾的抗原結(jié)合蛋白具有更長的半衰期。在另一實施方式中，抗原結(jié)合蛋白含有一個或多個點突變以增加血清半衰期，比如在WO00/09560中所述，該文獻通過引入并入本文。

本公開進一步提供了多特異性抗原結(jié)合蛋白，例如，雙特異性抗原結(jié)合蛋白，比如，通過兩個不同的抗原結(jié)合位點或區(qū)域結(jié)合CD147的兩個不同表位，或結(jié)合CD147的表位和另一分子的表位的抗原結(jié)合蛋白。此外，本文公開的雙特異性抗原結(jié)合蛋白可以包含來自本文描述的抗體之一的CD147結(jié)合位點和來自本文描述抗體中另一種(包括通過引用其它公開文獻在本文中描述的那些)的第二CD147結(jié)合區(qū)域?？蛇x地，雙特異性抗原結(jié)合蛋白可以包含來自本文描述的抗體之一的抗原結(jié)合位點和來自本領(lǐng)域已知的另一CD147抗體或來自通過已知的方法或本文描述的方法制備的抗體的第二抗原結(jié)合位點。

本領(lǐng)域已知許多用于制備雙特異性抗體的方法。這些方法包括如Milstein等人,1983,Nature 305:537描述的雜種-雜交瘤的使用和抗體片段的化學(xué)偶聯(lián)(Brennan等人,1985,Science 229:81；Glennie等人,1987,J.Immunol.139:2367；美國專利號6,010,902)。此外?？梢酝ㄟ^重組手段產(chǎn)生雙特性抗體，例如，通過利用亮氨酸拉鏈部分(即，來自Fos和Jun蛋白，其優(yōu)先形成異源二聚體；Kostelny等人,1992,J.Immunol.148:1547)或如美國專利號5,582,996中描述的其它“鎖-鑰”相互作用的結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)。另外的有用技術(shù)包括美國專利號5,959,083和5,807,706中描述的那些技術(shù)。

在另一方面，該抗原結(jié)合蛋白包括抗體的衍生物。衍生化的抗體可以包含賦予該抗體所需的性質(zhì)(比如，在特定用途中增加的半衰期)的任何分子或物質(zhì)。衍生化的抗體可以包含，例如，可檢測(或標(biāo)記)的部分(例如，放射性的、比色的、抗原性的或酶性的分子)，可檢測的珠(例如，磁珠或電子致密(例如，金)珠)或者結(jié)合另一分子(例如，生物素或鏈霉親和素)的分子，治療或診斷部分(例如，放射性的、細(xì)胞毒性的或在藥學(xué)活性的部分)，或者增加抗體對特定用途(例如，施用于受試者如人類受試者，或其它體內(nèi)或體外用途)的適用性的分子。可以用于抗體衍生化的分子的例子包括白蛋白(例如，人血清白蛋白)和聚乙二醇(PEG)。可以利用本領(lǐng)域公知的技術(shù)制備白蛋白連接的和聚乙二醇化的抗體衍生物。在一個實施方式中，抗體與轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)或TTR變體綴合或以其他方式連接。TTR或TTR變體可以用例如選自以下的化學(xué)物質(zhì)進行化學(xué)修飾：葡聚糖、聚(n-乙烯基吡咯烷酮)、聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚環(huán)氧丙烷/環(huán)氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇和聚乙烯醇。

所有鑒別的mAb使用ELISA篩選與重組人和鼠CD147蛋白(可從R&D Systems或Sino Biologies商購)交叉反應(yīng)。使用OctetRed儀，公開的mAb評估針對重組人CD147蛋白的親和力并基于親和力數(shù)據(jù)分級。所公開的克隆顯示出針對人CD147的至少單位數(shù)納摩爾的親和力。

優(yōu)選地，所公開的抗體通過吸入施用，但完全IgG抗體的霧化可能證明由于其分子大小(～150kDa)導(dǎo)致的限制。為使可商購的霧化裝置最大化，較小的Fab片段可能是需要的。在這種情況下，我們也可能需要從親本IgG分子生成Fab片段。因此，我們使用標(biāo)準(zhǔn)酶基消化方法進行初步研究以生成Fab片段，其然后與全IgG分子平行地表征。

實施例1

本實施例提供CD147結(jié)合劑對重組小鼠CD147的交叉反應(yīng)性的分析。簡言之，NI-NTA ELISA板捕獲有重組人或小鼠CD147，且然后用抗-CD147抗體孵育。測量抗體的結(jié)合。圖1和2顯示七種抗-CD147抗體可以結(jié)合人或小鼠CD147兩者。

實施例2

本實施例顯示抗-CD147抗體與人癌細(xì)胞上表達的內(nèi)源人CD147的結(jié)合，如通過流式細(xì)胞術(shù)測定的?？贵w的EC₅₀值如下測定。

CD147表達細(xì)胞(PC-3、A549或K562)用無酶細(xì)胞解離緩沖劑(GIBCO)收獲并轉(zhuǎn)移到V-形底96孔板(50,000細(xì)胞/孔)。細(xì)胞用FACS緩沖液(PBS+2％FBS)中的系列稀釋的抗-CD147抗體在冰上孵育45min。在FACS緩沖液中2次洗滌后，添加1:1000稀釋的藻紅蛋白偶聯(lián)抗-人IgG(γ-鏈特異性的)并孵育20min。在最終洗滌后，熒光強度在Intellicyt High Throughput Flow Cytometer(HTFC)上測量。數(shù)據(jù)使用Graphpad Prism軟件和非線性回歸擬合進行分析。數(shù)據(jù)點顯示為陽性標(biāo)記的細(xì)胞的中位熒光強度(MFI)+/-標(biāo)準(zhǔn)誤。EC₅₀值報告為獲得50％的最大CD147抗體與CD147表達細(xì)胞的結(jié)合的抗體濃度。

如圖3A-C和表1中所示，所選擇的抗體以可變的親和力與表達的細(xì)胞CD147結(jié)合，并顯示0.6-168nM范圍的EC₅₀值。表1：表1總結(jié)抗-CD147抗體與任一表達CD147的細(xì)胞的結(jié)合特征(EC₅₀,以NanoMol.L^-1計)。

表1

實施例2

本實施例闡明了顯示抗-CD147抗體在使用第二抗體-藥物偶聯(lián)物技術(shù)(*)的細(xì)胞毒性分析中的評估的體外數(shù)據(jù)。本實施例證明抗-CD147用作抗體藥物偶聯(lián)物的潛能。

*"Secondary Antibody-Drug Conjugates As Tools for ADC Discovery".Helen Mao,Poster(IBC 24*Annual,2013).

CD147表達細(xì)胞(A549或PC-3)用無酶細(xì)胞解離緩沖劑(GIBCO)收獲，接種到白色96-孔透明底平板(1,000細(xì)胞/孔，90ul)中并允許在37℃下粘附過夜?？贵w在細(xì)胞培養(yǎng)基中以1:4的摩爾比與ProteinG-DM1(Concortis Biosystems)預(yù)復(fù)合。在室溫下10min后，系列稀釋的抗體-ProteinG-DM1復(fù)合物在細(xì)胞培養(yǎng)基中制備，在室溫下再孵育10min，并一式三份添加到細(xì)胞(10μl/孔)。在37℃下96H孵育后，細(xì)胞增殖如下分析：100μl的Cell Titer Glo緩沖液(Promega)添加到各孔。平板在室溫下伴隨振搖孵育20min。發(fā)光信號然后在Flexstation 3讀板儀(Molecular Device)上測量。數(shù)據(jù)報告為相對發(fā)光單位。劑量-反應(yīng)曲線在GraphPad prism中生成，且IC50值使用非線性回歸擬合計算(log(抑制劑)vs.反應(yīng)-變量斜率方程(variable slope equation))。

圖2中顯示的結(jié)果表明抗-CD147抗體，特別是C4sh1A6和C4sh1B2，可以在與細(xì)胞毒素如DM-1復(fù)合時誘導(dǎo)細(xì)胞殺傷。這闡明了CD147抗體作為抗體-藥物偶聯(lián)物的潛能。

序列表

序列表

<110> Sorrento Therapeutics, Inc.

<120> 結(jié)合CD147的抗體療法

<130> CD147-1A

<160> 64

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 115

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr

20 25 30

Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly

35 40 45

Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

50 55 60

Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met

65 70 75 80

Glu Leu Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Asn Leu Phe Ile Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 2

<211> 110

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ser Tyr

20 25 30

Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser

85 90 95

Ser Thr Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 3

<211> 118

<212> PRT

<213> 智人

<400> 3

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Arg Val Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Ser Thr Tyr Asn Gly Asn Thr Leu Tyr Ala Gln Lys Leu

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Thr Asp Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 4

<211> 110

<212> PRT

<213> 智人

<400> 4

Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr

20 25 30

Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Asp Lys Pro Pro Lys Leu

35 40 45

Ile Ile Tyr Tyr Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Tyr Arg Ser Asn

85 90 95

Thr Asn Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110

<210> 5

<211> 120

<212> PRT

<213> 智人

<400> 5

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser His

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Asp Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ser Glu Ala Tyr Tyr His Gly Met Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 6

<211> 110

<212> PRT

<213> 智人

<400> 6

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Thr Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Ala Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 7

<211> 118

<212> PRT

<213> 智人

<400> 7

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Arg Val Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Ser Thr Tyr Asn Gly Asn Thr Leu Tyr Ala Gln Lys Leu

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Thr Asp Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 8

<211> 111

<212> PRT

<213> 智人

<400> 8

Gln Ala Gly Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr

20 25 30

Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Asn Val Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Gly

85 90 95

Thr Thr Leu Ser Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 9

<211> 119

<212> PRT

<213> 智人

<400> 9

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Thr Gly Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 10

<211> 111

<212> PRT

<213> 智人

<400> 10

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr

20 25 30

Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Ala Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Gly Val Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ala Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Arg Val

65 70 75 80

Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Val Trp Glu Arg Ser

85 90 95

Ser Gly Gln Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 11

<211> 120

<212> PRT

<213> 智人

<400> 11

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile His Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Gly Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ala Arg Asp Leu Asp Gly Gly Ser Phe Asp His Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 12

<211> 110

<212> PRT

<213> 智人

<400> 12

Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ser Tyr

20 25 30

Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Asp Val Thr Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Arg Ser

85 90 95

Ser Thr Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110

<210> 13

<211> 119

<212> PRT

<213> 智人

<400> 13

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

20 25 30

Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Pro Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Lys Pro Ser Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Pro Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Glu Gly Ile Gly Ala Ala Ser Asn Asp Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 14

<211> 109

<212> PRT

<213> 智人

<400> 14

Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly

20 25 30

His Tyr Pro Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Thr

35 40 45

Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Asn Lys His Ser Trp Thr Pro Ala Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala

65 70 75 80

Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Leu Leu Ser Tyr Ser Gly

85 90 95

Ala Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105

<210> 15

<211> 119

<212> PRT

<213> 智人

<400> 15

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

20 25 30

Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Pro Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Lys Pro Ser Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Pro Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Glu Gly Ile Gly Ala Ala Ser Asn Asp Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 16

<211> 109

<212> PRT

<213> 智人

<400> 16

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Asp Val Thr Ser Gly

20 25 30

His Tyr Pro Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Thr

35 40 45

Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Asn Lys His Ser Trp Thr Pro Ala Arg Phe

50 55 60

Ser Ala Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala

65 70 75 80

Gln Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Leu Ala Tyr Ser Glu

85 90 95

Val Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 17

<211> 124

<212> PRT

<213> 智人

<400> 17

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Arg Ser Tyr

20 25 30

Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Phe Leu Asn Pro Ser Asp Gly Gly Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Val Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asn Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Val Gly Ile Thr Ser Thr Glu Thr Arg Ala Glu Tyr Phe Gln

100 105 110

His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 18

<211> 110

<212> PRT

<213> 智人

<400> 18

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ala Ser Asp Ile Gly His Ser

20 25 30

Phe Tyr Val Ser Trp Tyr Arg Gln Tyr Pro Gly Lys Ala Pro Asp Leu

35 40 45

Leu Ile Phe Gln Val Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Ala Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ile Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Gly

85 90 95

Thr Ser Ile Val Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 19

<211> 118

<212> PRT

<213> 智人

<400> 19

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr

20 25 30

Trp Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Pro Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Lys Pro Arg Asp Gly Ala Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Thr Thr Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Gly Leu Leu Glu Gly Asp Asp Ala Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 20

<211> 109

<212> PRT

<213> 智人

<400> 20

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly

20 25 30

His Tyr Pro Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Thr

35 40 45

Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Asn Lys His Ser Trp Thr Pro Ala Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala

65 70 75 80

Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Leu Leu Ser Tyr Ser Gly

85 90 95

Ala Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 21

<211> 119

<212> PRT

<213> 智人

<400> 21

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 22

<211> 108

<212> PRT

<213> 智人

<400> 22

Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Gln

85 90 95

Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 23

<211> 125

<212> PRT

<213> 智人

<400> 23

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gly Ile Ile Trp Asn Gly Gly Thr Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Asp Leu Asn Tyr Tyr Ile Ser Gly Asp Tyr Tyr Asp Ala Phe

100 105 110

Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 24

<211> 108

<212> PRT

<213> 智人

<400> 24

Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln

1 5 10 15

Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala

20 25 30

Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr

35 40 45

Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His

85 90 95

Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 25

<211> 109

<212> PRT

<213> 智人

<400> 25

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Asp Thr Gly Ala Val Asn Ser Gly

20 25 30

His Tyr Pro Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Ala

35 40 45

Leu Ile Tyr Asp Thr Gly Asn Lys His Ser Trp Thr Pro Ala Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala

65 70 75 80

Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Leu Leu Ser Tyr Ser Gly

85 90 95

Thr Arg Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 26

<211> 122

<212> PRT

<213> 智人

<400> 26

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Pro Lys Gly His Ser Gly Gly Trp Tyr Ala Phe Asp Ile Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 27

<211> 110

<212> PRT

<213> 智人

<400> 27

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Arg Arg

20 25 30

Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Asn Asp Arg Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Glu Leu Gln

65 70 75 80

Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Thr Asn Leu

85 90 95

Ser Ala Gly Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 28

<211> 119

<212> PRT

<213> 智人

<400> 28

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ala Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Arg Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Gly Arg Thr Phe Tyr Arg Ser Arg Trp Asn Asn Glu Tyr Ala

50 55 60

Glu Thr Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Thr Asn

65 70 75 80

His Phe Ser Leu Gln Leu Thr Ser Val Ser Pro Glu Asp Thr Ala Ile

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Gly Asn Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 29

<211> 90

<212> PRT

<213> 智人

<400> 29

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln

1 5 10 15

Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Asn Asn Lys

20 25 30

Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr

35 40 45

Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln Thr Gly Asp Glu Ala Asp

50 55 60

Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu Ser Ala Gly Asp Val Val

65 70 75 80

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

85 90

<210> 30

<211> 119

<212> PRT

<213> 智人

<400> 30

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Ser Glu Asp Ser Ile Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 31

<211> 109

<212> PRT

<213> 智人

<400> 31

Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ala Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr Asp Ile Pro Ala Arg Phe Ile

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro

85 90 95

Arg Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 32

<211> 109

<212> PRT

<213> 智人

<400> 32

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Asn Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly

20 25 30

His Tyr Pro Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Thr

35 40 45

Leu Ile Tyr Asp Ala Thr Asn Lys Gln Ser Trp Thr Pro Ala Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala

65 70 75 80

Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Leu Leu Ser Tyr Ser Gly

85 90 95

Val Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 33

<211> 109

<212> PRT

<213> 智人

<400> 33

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly

20 25 30

His Tyr Pro Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Thr

35 40 45

Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Asn Lys His Ser Trp Thr Pro Ala Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala

65 70 75 80

Gln Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Leu Leu Ser Ser Ser Gly

85 90 95

Ala Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 34

<211> 117

<212> PRT

<213> 智人

<400> 34

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Arg Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Met Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile His Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Lys Pro Ala Asn Gly Asp Ile Thr Tyr Ser Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Gly Asp Ile Ser Ala Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Lys Gly Gly Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 35

<211> 110

<212> PRT

<213> 智人

<400> 35

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr

20 25 30

Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Asp Val His Lys Arg Pro Ser Gly Thr Ser Thr Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Arg Ser Gly

85 90 95

Ser Thr Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110

<210> 36

<211> 118

<212> PRT

<213> 智人

<400> 36

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Arg Ile Ser Cys Gln Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ile Asn His

20 25 30

Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Val

50 55 60

Gln Gly His Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Asp Arg Asn Val Tyr Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 37

<211> 110

<212> PRT

<213> 智人

<400> 37

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr

20 25 30

Lys Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser

85 90 95

Ser Thr Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110

<210> 38

<211> 117

<212> PRT

<213> 智人

<400> 38

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Arg Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Met Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile His Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Lys Pro Ala Asn Gly Asp Ile Thr Tyr Ser Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Gly Asp Ile Ser Ala Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Gly Gly Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 39

<211> 110

<212> PRT

<213> 智人

<400> 39

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Asn Tyr

20 25 30

Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Val Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Thr Ser

85 90 95

Ser Thr Tyr Val Phe Gly Ile Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110

<210> 40

<211> 117

<212> PRT

<213> 智人

<400> 40

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Arg Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Met Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile His Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Lys Pro Ala Asn Gly Asp Ile Thr Tyr Ser Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Gly Asp Ile Ser Ala Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Gly Gly Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 41

<211> 110

<212> PRT

<213> 智人

<400> 41

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Met Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Thr Tyr

20 25 30

Asp Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Tyr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Asp Val Ala Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Thr

85 90 95

Lys Val Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110

<210> 42

<211> 115

<212> PRT

<213> 智人

<400> 42

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Trp Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gln Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 43

<211> 107

<212> PRT

<213> 智人

<400> 43

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ala Thr Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 44

<211> 117

<212> PRT

<213> 智人

<400> 44

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gly Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr His Ala Asp Pro Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Val Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Gly Asp Arg Ser Gly Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 45

<211> 107

<212> PRT

<213> 智人

<400> 45

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Ser

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Gly Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Met Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 46

<211> 112

<212> PRT

<213> 智人

<400> 46

Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr

20 25 30

Asn Leu Val Ala Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser

85 90 95

Ser Thr Ser His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110

<210> 47

<211> 116

<212> PRT

<213> 智人

<400> 47

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 48

<211> 110

<212> PRT

<213> 智人

<400> 48

Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ser Tyr

20 25 30

Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Glu Val Arg Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Ala Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Thr Ser Ser

85 90 95

Ser Thr Phe Val Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 49

<211> 115

<212> PRT

<213> 智人

<400> 49

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Trp Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gln Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 50

<211> 110

<212> PRT

<213> 智人

<400> 50

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Thr

20 25 30

Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Phe Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Met

85 90 95

Arg Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 51

<211> 116

<212> PRT

<213> 智人

<400> 51

Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ser Thr Asn Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 52

<211> 110

<212> PRT

<213> 智人

<400> 52

Gln Ala Gly Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr

20 25 30

Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ile Asn Ser

85 90 95

Gly Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 53

<211> 110

<212> PRT

<213> 智人

<400> 53

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ala Asp Val Gly His Tyr

20 25 30

Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Asp Val Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Thr Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser

85 90 95

Ser Thr Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 54

<211> 120

<212> PRT

<213> 智人

<400> 54

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser His

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Asp Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ser Glu Ala Tyr Tyr His Gly Met Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 55

<211> 110

<212> PRT

<213> 智人

<400> 55

Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Tyr Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 56

<211> 107

<212> PRT

<213> 智人

<400> 56

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Asn Ile Lys Thr Ala

20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Lys Ser Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu His Ser Gly Val Thr Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ser Tyr Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 57

<211> 117

<212> PRT

<213> 智人

<400> 57

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile His Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Lys Pro Ala Asn Gly Asp Ile Thr Tyr Ser Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Gly Asp Ile Ser Ala Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Gly Gly Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 58

<211> 110

<212> PRT

<213> 智人

<400> 58

Gln Ala Gly Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Trp Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ala Tyr

20 25 30

Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Tyr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Asp Val Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser

85 90 95

Thr Thr Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 59

<211> 112

<212> PRT

<213> 智人

<400> 59

Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr

20 25 30

Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Arg Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Asp Val Ser Asp Arg Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Thr Ser Arg

85 90 95

Thr Thr Pro Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 60

<211> 120

<212> PRT

<213> 智人

<400> 60

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Thr Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ser Lys Asn Ala Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Gly Trp Val Val His Ala Met Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 61

<211> 109

<212> PRT

<213> 智人

<400> 61

Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn

20 25 30

Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Ser Asn

85 90 95

Thr Leu Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105

<210> 62

<211> 111

<212> PRT

<213> 智人

<400> 62

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ser Tyr

20 25 30

Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Asp Val Ser Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser

85 90 95

Ser Thr Leu Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 63

<211> 115

<212> PRT

<213> 智人

<400> 63

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Trp Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gln Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 64

<211> 110

<212> PRT

<213> 智人

<400> 64

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr

20 25 30

Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln His His Pro Asp Arg Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Leu Tyr His Val Thr Gln Arg Pro Ser Gly Ile Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Thr

85 90 95

Ser Thr Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110