本發(fā)明涉及一種用于改善及預(yù)防牙周病的口腔組合物，其抗炎癥效果優(yōu)異且通過增加殺菌劑的齒面附著力從而使殺菌效果極大化。
背景技術(shù)：
：牙周病一般還稱為風(fēng)齒，根據(jù)程度分為牙齦炎(gingivitis)和牙周炎(periodontitis)。牙周病的直接原因在于：由口腔內(nèi)細(xì)菌在牙齒上持續(xù)地形成的被稱為牙菌斑(plaque)的細(xì)菌膜，牙菌斑未被去除而變硬時(shí)轉(zhuǎn)變?yōu)檠澜Y(jié)石。當(dāng)牙菌斑和牙結(jié)石堆積時(shí)牙齦從牙齒萎縮，由此縫隙張開導(dǎo)致在牙齒和牙齦之間形成牙囊腫，并且牙周炎越嚴(yán)重時(shí)牙囊腫的深度越深。隨著牙囊腫變深在齒周韌帶上產(chǎn)生炎癥從而產(chǎn)生骨流失的現(xiàn)象即為牙周病。癥狀較輕且恢復(fù)較快的形態(tài)的牙周病僅局限在牙齦(齒齦)、即軟組織的形態(tài)稱為牙齦炎，并且這樣的炎癥延伸至牙齦和齒槽骨(牙齦骨)周圍的情況稱為牙周炎。這種牙周炎的病因可列舉出，存在于口腔內(nèi)的有害細(xì)菌排出的炎癥誘發(fā)物質(zhì)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)。由所述脂多糖引起牙齦腫脹、出血等炎癥，至今為止已經(jīng)進(jìn)行了很多研究，通過添加用于改善這種炎癥的抗炎物質(zhì)(主要是生藥提取物)從而確認(rèn)效果。同時(shí)，雖然韓國國內(nèi)產(chǎn)品中已有分別使用泛酰醇、生育酚乙酸酯的先例，國外產(chǎn)品中已有使用甘草酸二鉀的產(chǎn)品的先例，但已確認(rèn)：沒有以改善及預(yù)防牙周病為目的而將所述成分全部、尤其選擇及組合地進(jìn)行制作的產(chǎn)品。牙周炎的另一病因可列舉出牙菌斑以及牙結(jié)石。為了預(yù)防及改善牙菌斑和牙結(jié)石，需要對直接病因口腔內(nèi)有害細(xì)菌進(jìn)行殺菌，為此現(xiàn)有研究以及市售產(chǎn)品中使用各種殺菌劑。但是，雖然增加殺菌劑的含量可以增加效果但無法避免口腔刺激，而且也不能忽視費(fèi)用問題，因此目前無法繼續(xù)增加含量。為此，開展的很多研究中，使用增稠物質(zhì)等提高相同含量的殺菌物質(zhì)的齒面附著率從而增強(qiáng)殺菌力。與此相關(guān)的技術(shù)例如有，韓國專利號(hào)10-2006-0089890中公開的增強(qiáng)二氯苯氧氯酚的口腔內(nèi)殘留效果的方法，韓國授權(quán)專利公報(bào)10-0659139中公開的將特定的非離子接觸面活性劑以最佳配比濃度增強(qiáng)抗菌力的組成，韓國專利號(hào)10-2012-0058713中公開的包含聚-γ-谷氨酸從而增強(qiáng)口腔內(nèi)陽離子抗菌劑殘留的組成。但是根據(jù)這樣的現(xiàn)有技術(shù)，只能實(shí)現(xiàn)利用抗菌作用的通過對牙周炎病菌進(jìn)行殺菌的預(yù)防，而對已經(jīng)發(fā)生的牙齦炎癥幾乎沒有改善效果。另外，雖然韓國授權(quán)專利10-0167019中公開了利用Nα-長鏈?；鶋A性氨基酸低級烷基酯或其鹽而增加作為殺菌物質(zhì)的氯化十六烷吡啶的齒面附著力，但實(shí)際應(yīng)用時(shí)沒有顯現(xiàn)出期待的效果。由此，本發(fā)明人們?yōu)榱碎_發(fā)牙周患者的口腔內(nèi)刺激較小且效果增強(qiáng)的用于改善及預(yù)防牙周病的口腔用組合物而進(jìn)行了認(rèn)真研究，結(jié)果確保了抗炎癥效果優(yōu)異、通過增加殺菌劑的齒面附著力而殺菌效果被極大化的優(yōu)秀的組成，并確認(rèn)這樣的組成在臨床試驗(yàn)中也顯現(xiàn)出優(yōu)秀的效果，從而完成了本發(fā)明。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的問題本發(fā)明的目的在于，提供一種抗炎癥及殺菌效果同時(shí)優(yōu)秀的用于預(yù)防或治療牙周病的醫(yī)藥組合物。本發(fā)明的另外一個(gè)目的在于，提供一種抗炎癥及殺菌效果同時(shí)優(yōu)秀的用于預(yù)防及改善牙周病的口腔組合物。用于解決問題的技術(shù)方案作為達(dá)成所述目的的一個(gè)方式，本發(fā)明提供一種包含甘草酸或其鹽、泛酰醇及生育酚乙酸酯的、用于預(yù)防及治療牙周病的醫(yī)藥組合物。作為另外一個(gè)方式，本發(fā)明提供一種包含甘草酸或其鹽、泛酰醇及生育酚乙酸酯的、用于預(yù)防及改善牙周病的口腔組合物。所述組合物還包含陽離子殺菌劑。本發(fā)明提供一種包含甘草酸或其鹽、泛酰醇及生育酚乙酸酯的用于預(yù)防或治療牙周病的醫(yī)藥組合物。另外，本發(fā)明提供一種包含甘草酸或其鹽、泛酰醇及生育酚乙酸酯的用于預(yù)防及改善牙周病的口腔組合物。發(fā)明效果本發(fā)明的組合物基于抗炎及殺菌效果而顯現(xiàn)出優(yōu)秀的抑制生成牙菌斑及預(yù)防牙齦炎的效果，從而能夠有效地應(yīng)用于預(yù)防、改善或治療牙周病的用途。附圖說明圖1為根據(jù)抗炎試驗(yàn)結(jié)果的圖表來表示實(shí)施例1-9、比較例1-5的NO生成量的程度的圖。圖2及圖3為表示牙齦炎或輕度的牙周病患者在使用實(shí)施例3-1和普通牙膏時(shí)牙菌斑指數(shù)的變化值和經(jīng)過6周后的變化量的圖。圖4及圖5為表示牙齦炎或輕度的牙周病患者在使用實(shí)施例3-1和普通牙膏時(shí)牙齦指數(shù)的變化值和經(jīng)過6周后的變化量的圖。具體實(shí)施方式本發(fā)明的發(fā)明人為了開發(fā)兼具優(yōu)異的抗炎效果及殺菌力的、用于預(yù)防及改善牙周病的口腔用組合物而進(jìn)行研究的過程中，確定將甘草酸或其鹽、泛酰醇及生育酚乙酸酯混合使用時(shí)具有優(yōu)異的抗炎癥效果，并確定將這些按照固定成分比使用時(shí)陽離子殺菌劑的牙齒粘著力增加，殺菌力隨之增強(qiáng)，從而完成了本發(fā)明。因此，在優(yōu)選的實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明的組合物可以為抗炎癥、殺菌或抗牙菌斑用組合物。本發(fā)明中所使用的甘草酸為來自甘草的成分，在炎癥反應(yīng)過程中減少炎癥反應(yīng)介質(zhì)物的生成從而具有抑制炎癥的效果，雖然在本發(fā)明中能夠以如甘草酸二鉀、甘草酸銨的形態(tài)而被使用，但并非限定于所述例示的鹽。由于甘草酸或其鹽能夠?qū)﹃栯x子殺菌劑的齒面附著效果產(chǎn)生影響，因此其組成含量的調(diào)整較為重要。具體的一個(gè)實(shí)施方式為，根據(jù)本發(fā)明的組合物，在整體為100重量份的組合物中，所述甘草酸或其鹽可以占0.001至2重量份、0.01至1重量份或0.05至0.5重量份。當(dāng)占2重量份以上時(shí)產(chǎn)品的香味降低，所包含的陽離子殺菌劑的齒面附著力減小而影響殺菌力，導(dǎo)致效果下降。本發(fā)明所使用的泛酰醇促進(jìn)細(xì)胞的生長和組織的恢復(fù)，并且防止炎癥和紅腫從而具有保護(hù)口腔內(nèi)傷口的效果。當(dāng)并用生育酚乙酸酯及甘草酸或其二鉀鹽時(shí)，顯現(xiàn)出更優(yōu)秀的改善牙齦炎癥的效果。在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方式中，在整體為100重量份的組合物中，所述泛酰醇可占0.005至5重量份、0.01至3重量份或0.1至2重量份。當(dāng)?shù)陀?.005重量份時(shí)對改善牙周病的效果及保護(hù)傷口的效果可能微乎其微，而當(dāng)超過5重量份時(shí)由于相對于添加量而效果上升的程度較小從而效率可能較低。本發(fā)明所使用的生育酚乙酸酯為維生素E，是可以促進(jìn)牙齦的血液循環(huán)并且影響治療牙齦傷口及炎癥的物質(zhì)，也是公知的抗氧化物質(zhì)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，在整體為100重量份的組合物中，所述生育酚乙酸酯可占0.01至1重量份、0.05至0.5重量份或0.1至0.5重量份。當(dāng)?shù)陀?.05重量份時(shí)效果可能微乎其微，而超過1重量份時(shí)可能影響制劑的穩(wěn)定性。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，所述組合物還可以包含陽離子殺菌劑。所述陽離子殺菌劑具有陽離子并與齒面細(xì)菌膜或唾液蛋白質(zhì)結(jié)合從而抑制牙結(jié)石并顯現(xiàn)出對唾液內(nèi)細(xì)菌的殺菌作用，具體使用選自氯化十六烷吡啶、己基二甲基芐基氯化銨、苯扎氯銨及雙氯苯雙胍己烷中的一種以上，優(yōu)選使用氯化十六烷吡啶但并非限定于此。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，在整體為100重量份的組合物中，所述陽離子殺菌劑可占0.01至1重量份或0.01至0.1重量份，但并非限定于此。所述口腔用組合物還可以包含添加劑，例如可以包含氟化合物、研磨劑、潤濕劑、甜味劑、香味劑、起泡劑、結(jié)合劑、防腐劑、pH調(diào)節(jié)劑等添加劑，但并非限定于此。所述氟化合物通過增強(qiáng)牙齒的耐酸性從而起到預(yù)防齲齒的作用，可以為選自例如氟化鈉、單氟磷酸鈉、氟化亞錫中的一種或它們的混合物，優(yōu)選為單氟磷酸鈉但并非限定于此。在整體為100重量份的所述口腔用組合物中，所述氟化合物可占0.01至2重量份、0.1至1.5重量份或0.5至1重量份。所述研磨劑可以為選自二氧化硅、碳酸鈣、含水氧化鋁、磷酸一氫鈣以及重碳酸鈉中的一種或它們的混合物，在整體為100重量份的所述口腔用組合物中，可占10至60重量份。所述潤濕劑可以為選自非結(jié)晶性山梨糖醇液、甘油、丙二醇及聚乙二醇中的一種或它們的混合物，相對于100重量份的所述全部口腔用組合物，可以被包含3至60重量份。所述甜味劑可以為選自糖精鈉、木糖醇、赤蘚糖醇、甜菊糖、三氯蔗糖、安賽蜜以及阿斯巴甜中的一種或它們的混合物，在整體為100重量份的所述口腔用組合物中，可占0.01至2重量份。所述香味劑可以為選自薄荷油、留蘭香油及薄荷醇中的一種或它們的混合物，并且所述香味劑的含量可以為在口腔用組合物中常用的含量，并未被特別地限定。所述起泡劑可以為選自月桂醇硫酸鈉、月桂酰肌氨酸鈉、椰油酰胺丙基甜菜堿、聚氧乙烯氫化蓖麻油以及聚氧乙烯聚氧丙烯縮合高分子中的一種或它們的混合物，在整體為100重量份的所述口腔用組合物中，可占0.5至5重量份。所述結(jié)合劑可以選自卡拉膠、黃原膠、羧甲基纖維素鈉以及聚乙烯吡咯烷酮中的一種或它們的混合物，在整體為100重量份的所述全部口腔用組合物中，可占0.1至5重量份。所述防腐劑可以為對羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯。所述pH調(diào)節(jié)劑可以為選自磷酸二氫鈉、磷酸一氫鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉、磷酸、酒石酸、酒石酸鈉中的一種或它們的混合物，本發(fā)明的口腔用組合物通過采用所述pH調(diào)節(jié)劑而調(diào)節(jié)為適當(dāng)?shù)膒H，例如pH5至8。根據(jù)本發(fā)明的組合物可以被制作為各種劑型，具體可包括牙膏、口腔清潔劑、漱口水、口腔按摩霜等劑型。另外，本發(fā)明所提供的口腔用組合物的配比成分除了在上述所說明的成分以外還可以根據(jù)組合物的用途和種類以各種配比使用。實(shí)施例下面，為幫助理解本發(fā)明列舉出實(shí)施例并詳細(xì)地進(jìn)行說明。但是以下實(shí)施例只是對本發(fā)明的內(nèi)容的例示，而本發(fā)明的范圍并非限定于以下實(shí)施例。本發(fā)明的實(shí)施例是為了將本發(fā)明向本領(lǐng)域技術(shù)人員更完整地進(jìn)行說明而被提供的。<制備例1>制備實(shí)施例1至9、比較例1至5的組合物如下表1，制備出改善牙齦炎癥的各種濃度成分的組合物。為了排除被添加于制劑中的其他原料的影響，僅以如下表中的組成比例來制備組合物。將作為比較例而被使用的組合物的成分記載于表2至表3中。為了有助于對牙周病用而市售的益周適(GSK)及Itchi(Dong-wha藥品)的藥效成分組成和本發(fā)明的組成進(jìn)行對比，比較例4制備出具有與所述市售產(chǎn)品相同的組成的組合物，而為了確定溶劑對組合物的影響而制備比較例5。【表1】含量(％)甘草酸二鉀泛酰醇生育酚乙酸酯乙醇純凈水實(shí)施例10.00510.25至100實(shí)施例20.010.10.25至100實(shí)施例30.110.25至100實(shí)施例4110.25至100實(shí)施例50.10.010.25至100實(shí)施例60.130.25至100實(shí)施例70.110.25至100實(shí)施例80.110.055至100實(shí)施例90.110.55至100【表2】含量(％)甘草酸二鉀泛酰醇生育酚乙酸酯乙醇純凈水比較例10.1--5至100比較例2-1-5至100比較例3--0.25至100【表3】含量(％)甘菊酊劑拉檀根酊劑沒藥酊劑乙醇純凈水比較例40.1250.1250.0625至100比較例5---5至100<制備例2>制備實(shí)施例1-1至9-1及比較例1-1至1-3的液體牙膏為了確定添加所述改善炎癥組合物后制得的基于陽離子殺菌劑的液體牙膏的殺菌力，制備了液體牙膏。作為實(shí)施例1-1至9-1及比較例1-1至1-3的牙膏，以如下表4中所記載的組成比例使用甘草酸二鉀、泛酰醇、及生育酚乙酸酯；并且使用：單氟磷酸鈉重量百分比0.76％，氯化十六烷吡啶重量百分比0.05％，聚氧乙烯氫化蓖麻油重量百分比0.5％，乙醇重量百分比5％，香味劑適量，添加純凈水使整體含量為重量百分比100％，從而制備液體牙膏。將生育酚乙酸酯、香味劑、聚氧乙烯氫化蓖麻油溶解到乙醇中，并將剩下的成分溶解到純凈水中。將前面制備的乙醇組的溶液倒入純凈水組中進(jìn)行溶解然后定容制備?！颈?】<試驗(yàn)例1>氧化氮(NO)生成抑制能力的評價(jià)為了確定抗炎癥成分甘草酸二鉀在不同濃度時(shí)的抗炎癥效果，對源自牙周病病原菌牙齦卟啉單胞菌(P.gingivalis)的脂多糖(LPS)進(jìn)行處理從而誘發(fā)炎癥，并且基于評價(jià)物質(zhì)對LPS處理后生成的炎癥介質(zhì)物NO量的減小程度進(jìn)行了評價(jià)。具體方法如下。將巨噬細(xì)胞(Raw264.7cell)(韓國細(xì)胞株銀行(KCLB),韓國)種植(seeding)在96孔培養(yǎng)板中并培養(yǎng)24小時(shí)。換成培養(yǎng)基(DMEM培養(yǎng)基+10％FBS+青霉素+鏈霉素)并在約1小時(shí)之后進(jìn)行藥物處理，在進(jìn)行藥物處理1小時(shí)之后對LPS進(jìn)行處理，并且在24小時(shí)后提取50uL/well的培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基，與測量液(將1％的磺胺的5％的磷酸和0.1％的萘乙二胺的5％的磷酸在測量之前以1：1進(jìn)行混合使用：1％sulfanilamidein5％phosphoricacidand0.1％naphthylethylenediaminein5％phosphoricacid)以1:1進(jìn)行混合，并且在540nm處利用吸光度測量了NO生成值。將結(jié)果示于如下表5及圖1中?！颈?】如所述表5及圖1所示，與比較例1至5相比，在包含甘草酸二鉀、泛酰醇、生育酚乙酸酯的實(shí)施例中的組合物效果優(yōu)異，炎癥反應(yīng)介質(zhì)物NO生成量減少。另外，實(shí)施例1至9與具有市售產(chǎn)品組成的比較例4相比抗炎作用更優(yōu)異。雖然在實(shí)施例中確定了根據(jù)三種物質(zhì)組合物的濃度的NO生成量變化，但結(jié)果顯示泛酰醇和生育酚乙酸酯在固定濃度以上時(shí)效果不再增加。為了確定這樣的抗炎物質(zhì)被投入到制劑中時(shí)產(chǎn)生的影響而實(shí)施了附加試驗(yàn)。<試驗(yàn)例2>陽離子殺菌劑的齒面附著力評價(jià)將羥基磷灰石(HA)(Bio-RadLaboratories，Inc.，U.S)250mg以直徑成為13mm的方式形成圓盤(disc)后在600℃下燒結(jié)6小時(shí)，從而制備了HAdisc。將上述HAdisc投入到提取的唾液2mL中并放置18小時(shí)進(jìn)行前處理后，再次轉(zhuǎn)移至分別具有實(shí)施例1-1至9-1及比較例1-1至3-1的試驗(yàn)液1mL的小瓶(vial)中，并置入37℃100rpm條件的水槽(waterbath)中反應(yīng)30分鐘。之后將disc取出，并用蒸餾水6mL洗滌粘在表面上的試驗(yàn)液，并且置入盛有萃取溶劑(50mM月桂醇硫酸鈉，40mM檸檬酸緩沖液(pH3.0)/乙腈＝30/70)10mL的小瓶(vial)中，進(jìn)行20分鐘的超聲處理(sonication)。將萃取的液體用0.45um過濾器過濾并且根據(jù)氯化十六烷吡啶(Cetylpyridiniumchloride,CPC)定量法進(jìn)行了高效液相色譜法(HPLC)分析，將結(jié)果示于如下表6中。【表6】對添加甘草酸二鉀和泛酰醇而制備的實(shí)施例進(jìn)行吸附力評價(jià)，其結(jié)果確定：雖然甘草酸二鉀降低殺菌劑的吸附力，但相反泛酰醇提高氯化十六烷吡啶的齒面附著力。首先對相同劑型、包含類似成分的市售產(chǎn)品的G.U.MDentalRinseGNN(Sunstar,Japan)的氯化十六烷吡啶的齒面附著力進(jìn)行確定結(jié)果，其值為12.6ug/mL。如所述表7所示，實(shí)施例1-1至9-1的齒面附著力顯現(xiàn)出與G.U.MDentalGNN相比更優(yōu)異。與比較例的結(jié)果相比則可確定：在實(shí)施例1-1至9-1組成的制劑中甘草酸二鉀的量越少、泛酰醇的量越多則齒面附著力越大，兩種成分的投入含量較為重要。上述所提及的實(shí)施例的結(jié)果顯示：上述甘草酸二鉀和泛酰醇的含量能夠改善氯化十六烷吡啶的齒面附著力。對所述已進(jìn)行的抗炎癥效果、氯化十六烷吡啶的齒面附著力這兩種試驗(yàn)進(jìn)行綜合分析，顯示實(shí)施例3-1最優(yōu)異。另外考慮到或許通過提高齒面附著力能夠增強(qiáng)殺菌效果，為此采用兩種試驗(yàn)結(jié)果最優(yōu)異的實(shí)施例3-1和吸附力較低的比較例1-1這兩種制劑，對牙周病病原菌的殺菌力進(jìn)行了評價(jià)。<試驗(yàn)例3>針對牙周病病原菌的殺菌力的試驗(yàn)對公知的牙周病病原菌的兩種菌株的牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonasgingivalis)和伴放線放線桿菌(Aggregatibacteractinomycetemcomitans)進(jìn)行了附著及浮游抗菌力試驗(yàn)。通過對殺菌物質(zhì)的吸附力較高的制劑和較低的制劑進(jìn)行比較，從而確定附著力的改善是否能夠改善殺菌力。[牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonasgingivalis)培養(yǎng)]在添加羊的血(Sheepblood)、氯化血紅素(hemin)、甲萘醌(menadione)的大豆酪蛋白瓊脂(TSA)培養(yǎng)基中，將菌株進(jìn)行劃線接種，并置入?yún)捬跞萜髦?，并且?7℃恒溫箱中培養(yǎng)直至觀察到細(xì)菌菌落為止。當(dāng)觀察到菌落時(shí)，接種到添加有5％馬血清(Horseserum)、氯化血紅素(Hemin)、甲萘醌(menadione)的胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)中，進(jìn)行培養(yǎng)直至A560＝0.7(約1×109)。在傳代培養(yǎng)后，在75cm2的細(xì)胞培養(yǎng)瓶(cellcultureflask)中接種添加了馬血清(horseserum)、甲萘醌(heminmenadione)的胰酪胨大豆肉湯(TSB)培養(yǎng)基和培養(yǎng)菌0.1％，并且每隔24小時(shí)交換培養(yǎng)基并培養(yǎng)8天。[伴放線放線桿菌(Aggregatibacteractinomycetemcomitans)培養(yǎng)]在腦心浸液瓊脂(BHIagar)中將菌株進(jìn)行劃線接種并在被調(diào)節(jié)為37℃、5％CO2的恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)直至觀察到細(xì)菌菌落。當(dāng)觀察到菌落時(shí)接種到腦心浸液肉湯(BHIbroth)中并進(jìn)行培養(yǎng)直至A560＝0.7(約1×109)。在75cm2的細(xì)胞培養(yǎng)瓶(Cellcultureflask)中接種腦心浸液肉湯(BHIbroth)和培養(yǎng)菌0.1％，并且每隔24小時(shí)交換培養(yǎng)基并培養(yǎng)3天。[附著試驗(yàn)(BiofilmMethod)]在培養(yǎng)該菌株后將盛在瓶(flask)中的培養(yǎng)菌丟棄。用硫化鉛(PBS)對瓶(flask)內(nèi)部進(jìn)行3次清洗后添加3的試驗(yàn)溶液并搖晃18秒。用硫化鉛(PBS)對瓶(flask)內(nèi)部進(jìn)行3次清洗后，添加1的硫化鉛(PBS)并用細(xì)胞刮棒(CellScraper)刮掉生物膜。將刮下來的生物膜搖晃(Vortexing)15秒。將懸濁液用硫化鉛(PBS)稀釋10倍，并且涂抹到事先準(zhǔn)備的腦心浸液瓊脂(BHIAgar)和大豆酪蛋白瓊脂平板(TSAPlate)中，伴放線放線桿菌(A.actinomycetemcomitans)培養(yǎng)3天后，牙齦卟啉單胞菌(P.gingivalis)培養(yǎng)7天后對菌落進(jìn)行觀察。作為陰性對照組，以硫化鉛(PBS)取代試驗(yàn)溶液進(jìn)行了處理。[浮游試驗(yàn)(PlanktonicMethod)]取1在肉湯(Broth)中培養(yǎng)的菌群并在13,500rpm下進(jìn)行離心分離后去除了上層液。在沉淀物中添加試驗(yàn)溶液并且粉碎15秒之后在13,500rpm下進(jìn)行了30秒的離心分離。去除上層液之后用硫化鉛(PBS)清洗3次并用1的硫化鉛(PBS)進(jìn)行懸濁。將懸濁液用硫化鉛(PBS)稀釋10倍后涂抹到事先準(zhǔn)備的腦心浸液(BHI)、大豆酪蛋白瓊脂平板(TSAPlate)中，伴放線放線桿菌(A.actinomycetemcomitans)培養(yǎng)3天，牙齦卟啉單胞菌(P.gingivalis)培養(yǎng)7天后對菌落進(jìn)行了觀察。作為陰性對照組，以硫化鉛(PBS)取代試驗(yàn)溶液進(jìn)行了處理。[數(shù)學(xué)式1]計(jì)算生菌數(shù)：N＝C×DN：生菌數(shù)，C：菌落數(shù)(各個(gè)菌落數(shù)平均值)，D：稀釋倍數(shù)(稀釋液的稀釋倍數(shù))[數(shù)學(xué)式2]減少率：D(％)＝[(A-B)/A]×100D：生菌數(shù)減少率，A：對照組的生菌數(shù)，B：樣品處理組的生菌數(shù)將附著試驗(yàn)結(jié)果示于表7中，將浮游試驗(yàn)結(jié)果示于表8中?！颈?】【表8】如上述表8及表9中所示，在實(shí)施例3-1的組成條件下，陽離子殺菌劑的齒面附著力增大，顯示對牙周病病原菌具有優(yōu)異的殺菌力。另外，可以發(fā)現(xiàn)隨著齒面附著力增大而殺菌力增大。綜上，采用上述全部試驗(yàn)結(jié)果，通過如下的臨床試驗(yàn)對實(shí)施例3-1的改善及預(yù)防齒周炎的效果進(jìn)行了確認(rèn)。<試驗(yàn)例4>牙結(jié)石及齒緣指數(shù)測量為了確定本發(fā)明的牙菌斑及牙齦指數(shù)，在齒科醫(yī)院招募被試者進(jìn)行了試驗(yàn)。以牙齦炎及輕度的牙周炎患者成人男女46名為對象，采用市售中的液體牙膏(Gageurin)和本發(fā)明的實(shí)施例3-1以開放實(shí)驗(yàn)的方式進(jìn)行了試驗(yàn)，試驗(yàn)期間為共6周。對試驗(yàn)前基本量(baseline)進(jìn)行測量并定標(biāo)，并且在第2、4、6周對牙菌斑指數(shù)(PlaqueIndex,PI)、牙齦指數(shù)(Gingivalindex,GI)進(jìn)行了測量。在試驗(yàn)期間使他們每天使用3次牙膏并且在飯后使用。牙菌斑指數(shù)在作為上下顎代表牙齒的#16、21、24、36、41、44牙齒中使用Loe-Silnessplaqueindex(PI)進(jìn)行觀察，利用牙菌斑著色劑(GUMRedcote,SunstarButler,Chicago,IL,USA)來對牙齦緣上牙菌斑積蓄狀態(tài)進(jìn)行觀察。在每個(gè)牙齒6個(gè)部位(唇面、遠(yuǎn)中面、近中面、舌面、遠(yuǎn)中舌面、近中舌面)處進(jìn)行評分，并且用各個(gè)齒面分?jǐn)?shù)的平均值求出每個(gè)被試驗(yàn)者的全部PI分?jǐn)?shù)。牙齦指數(shù)在#16、21、24、36、41、44牙齒中使用Loe-Silnessgingivalindex(GI)，在每個(gè)牙齒的6個(gè)部位(唇面、遠(yuǎn)中面、近中面、舌面、遠(yuǎn)中舌面、近中舌面)處對牙齦炎癥狀態(tài)進(jìn)行評分，并且用各個(gè)齒面分?jǐn)?shù)的平均值求出每個(gè)被試驗(yàn)者的全部GI分?jǐn)?shù)。試驗(yàn)結(jié)果示于如下表9及圖2至圖5中。【表9】(*p<0.05)根據(jù)所述表9及圖2及圖4，牙菌斑指數(shù)(PI)和牙齦指數(shù)(GI)雖然在兩個(gè)組都隨著時(shí)間的經(jīng)過而減少，但經(jīng)過6周后實(shí)施例3-1的PI、GI指數(shù)減少更多，與普通牙膏相比改善率大，且抑制牙菌斑生成(實(shí)施例77.19％vs.對照組51.65％)及預(yù)防牙齦炎(實(shí)施例73.13％vs.對照菌25.74％)的效果(參照圖3及圖5)優(yōu)異。另外，在試驗(yàn)期間未見異常反應(yīng)及副作用。如上所述，本發(fā)明的含有氯化十六烷吡啶、單氟磷酸鈉、生育酚乙酸酯、甘草酸二鉀及泛酰醇的預(yù)防及改善牙周病用口腔組合物在牙齦指數(shù)、牙菌斑指數(shù)中顯現(xiàn)出了優(yōu)異的效果。因此，通過上述5種成分的組合增大了抗炎作用，并且通過添加泛酰醇使齒面附著力增大。由此可知，本發(fā)明通過增強(qiáng)抗菌作用，能夠進(jìn)一步增強(qiáng)牙周疾病的改善效果。當(dāng)前第1頁1 2 3