本發(fā)明涉及包含大星芹提取物的組合物。
背景技術(shù)：
：應(yīng)激(Stress)，被稱作所有現(xiàn)代疾病的原因，是指：當(dāng)某種程度或更高程度的刺激(不管刺激的種類是什么)以有害的方式作用于身體、對身體構(gòu)成威脅時(shí)，作為對該威脅的應(yīng)答的非特異性一般適應(yīng)綜合征(Selye，H.:Thestressoflife，Toronto，LongnansGreenandCo.，pp.1-50，1958)。應(yīng)激的原因主要包括(1)身體因素：過度勞累，睡眠不足，創(chuàng)傷，中毒等；(2)外部因素：自然環(huán)境，文化情況，家庭或工作場所的人際關(guān)系等；和(3)內(nèi)部因素：人格，生活中的心理沖突，嬰兒或兒童經(jīng)歷的精神創(chuàng)傷等。當(dāng)應(yīng)激持續(xù)很長時(shí)間時(shí)，它可能引起身體疾病，例如心臟病，胃潰瘍和高血壓或心理失調(diào)，例如失眠，神經(jīng)癥和抑郁癥。此外，它可能引起其他疾病，因?yàn)樯眢w的生理活性和免疫活性降低，并且身體的體內(nèi)平衡受到不利影響。在充滿沖突和競爭的現(xiàn)代社會中，大多數(shù)人在身體/精神上受到更多的壓力，因?yàn)樗麄儽仨氝m應(yīng)結(jié)構(gòu)或功能上復(fù)雜變化的社會。由應(yīng)激引起的免疫活性的降低可能導(dǎo)致皮膚穩(wěn)態(tài)的破壞，這繼而可削弱保護(hù)皮膚免受有害外部因素的皮膚保濕和屏障功能。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：技術(shù)問題本發(fā)明在于提供一種具有優(yōu)異的維持皮膚穩(wěn)態(tài)的效果的組合物。技術(shù)方案在一方面，本發(fā)明提供一種用于維持皮膚穩(wěn)態(tài)的組合物，其包含屬于傘形科的作為活性成分的大星芹(masterwort，Peucedanumostruthium)提取物。有益效果本發(fā)明的用于保持皮膚穩(wěn)態(tài)的組合物包含作為活性成分的大星芹提取物，其表現(xiàn)出降低NK1R(神經(jīng)激肽1受體)和EDN1(內(nèi)皮素1)基因的表達(dá)的效果，且減少EDN1量及針對P物質(zhì)的抗應(yīng)激效應(yīng)的效果。因此，由于這些效果，本發(fā)明的組合物可有利于維持皮膚穩(wěn)態(tài)，具有降低EDN1量的效果以及抗應(yīng)激效應(yīng)，從而可廣泛用于外用于皮膚、藥物組合物和化妝品組合物的劑型，因?yàn)榧窗踩謱?xì)胞沒有負(fù)面影響。附圖說明圖1顯示了分析根據(jù)本發(fā)明的一方面的大星芹提取物對NK1R和EDN1基因的表達(dá)的影響的結(jié)果。圖2顯示了分析根據(jù)本發(fā)明的一方面的大星芹提取物對EDN1量的影響的結(jié)果。具體實(shí)施方式2014年4月30日提交的韓國專利申請?zhí)?0-2014-0052273的全部內(nèi)容并入本發(fā)明中。此外，本申請主張韓國專利申請?zhí)?0-2014-0052273的優(yōu)先權(quán)，其全部內(nèi)容通過引用并入本文。在下文中，將詳細(xì)描述本發(fā)明的具體實(shí)施例，使得本發(fā)明本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地實(shí)施本發(fā)明。在本發(fā)明的一方面，已知神經(jīng)肽P物質(zhì)與情緒障礙、焦慮、壓力、疼痛、嘔吐等的調(diào)節(jié)相關(guān)。因此，如果能夠控制由P物質(zhì)誘導(dǎo)的因子，則其可以防止由免疫活性中的應(yīng)激誘導(dǎo)的降低所引起的皮膚穩(wěn)態(tài)的下降。在本發(fā)明的一方面，P物質(zhì)可以具有以下氨基酸序列和以下化學(xué)式。P物質(zhì)的氨基酸序列：ArgProLysProGlnGlnPhePheGlyLeuMet(RPKPQQFFGLM)?！净瘜W(xué)式】已知，P物質(zhì)的濃度增加會導(dǎo)致其受體NK1R(神經(jīng)激肽1受體，也稱為P物質(zhì)受體(SPR)或速激肽受體1(TACR1))及其蛋白質(zhì)的表達(dá)增加。NK1R的信號傳導(dǎo)會刺激ECE1(內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1)，從而增加活化的EDN1(內(nèi)皮素1)基因及其蛋白的表達(dá)。因?yàn)镻物質(zhì)增加NK1R和EDN1基因的表達(dá)，所以能夠抑制兩種基因表達(dá)的物質(zhì)預(yù)期能夠抑制P物質(zhì)的活性，且展示出維持皮膚穩(wěn)態(tài)的效果及通過抑制由應(yīng)激物引起的生理效應(yīng)的抗應(yīng)激效果。此外，由于NK1R信號傳導(dǎo)，細(xì)胞中活化的EDN1的增加可能導(dǎo)致由黑素細(xì)胞產(chǎn)生的黑色素會增加。因此，可預(yù)期，當(dāng)EDN1的表達(dá)被抑制時(shí)，可以維持皮膚穩(wěn)態(tài)，因?yàn)榭梢砸种坪蛪褐萍?xì)胞中的黑色素生成，并且可以治療、改善或預(yù)防諸如色素沉著的由黑色素生成引起的皮膚疾病。在一方面，本發(fā)明可涉及包含作為活性成分的大星芹提取物的組合物。具體地，在本發(fā)明的一方面，所述組合物可以是用于維持皮膚穩(wěn)態(tài)的組合物。根據(jù)本發(fā)明的一方面的組合物可以為藥物組合物、食品組合物或化妝品組合物。具體地，在本發(fā)明的一方面，本發(fā)明的組合物可以為皮膚外用組合物。在本發(fā)明的一方面，術(shù)語“皮膚穩(wěn)態(tài)”可指，皮膚的環(huán)境或生理狀態(tài)如pH值、溫度、血流量、含水量等持續(xù)保持在正常狀態(tài)。在一方面，本發(fā)明可以涉及一種用于維持皮膚穩(wěn)態(tài)的方法，其包括向需要維持皮膚穩(wěn)態(tài)的受試者給藥大星芹提取物。具體地，可以通過本發(fā)明中描述的給藥方法進(jìn)行給藥。在一方面，本發(fā)明可以涉及大星芹提取物用于維持皮膚穩(wěn)態(tài)的用途。在一方面，本發(fā)明可涉及應(yīng)用于維持皮膚穩(wěn)態(tài)的大星芹提取物。在一方面，本發(fā)明可涉及用于抗應(yīng)激的組合物或用于減少應(yīng)激物的組合物，其包含作為活性成分的大星芹提取物。具體地，在本發(fā)明的一方面，應(yīng)激物可以是P物質(zhì)。在一方面，本發(fā)明可以涉及用于抗應(yīng)激或用于減少應(yīng)激物的方法，其包括向需要抗應(yīng)激或減輕應(yīng)激物的受試者給藥大星芹提取物。具體地，可以通過本發(fā)明中描述的給藥方法進(jìn)行給藥。在一方面，本發(fā)明可以涉及大星芹提取物在抗應(yīng)激或減輕應(yīng)激物中的用途。在一方面，本發(fā)明可以涉及應(yīng)用于抗應(yīng)激或減輕應(yīng)激物的大星芹提取物。在一方面，本發(fā)明可涉及用于增強(qiáng)皮膚免疫功能、皮膚保濕功能或皮膚屏障功能的組合物，其包含作為活性成分的大星芹提取物。在一個(gè)方面，本發(fā)明可以涉及用于增強(qiáng)皮膚免疫功能、皮膚保濕功能或皮膚屏障功能的方法，其包括向需要增強(qiáng)皮膚免疫功能、皮膚保濕功能或皮膚屏障功能的受試者給藥大星芹提取物。具體地，可以通過本發(fā)明中描述的給藥方進(jìn)行給藥。在一方面，本發(fā)明可涉及大星芹提取物在增強(qiáng)皮膚免疫功能、皮膚保濕功能或皮膚屏障功能的用途。在一方面，本發(fā)明可涉及應(yīng)用于增強(qiáng)皮膚免疫功能、皮膚保濕功能或皮膚屏障功能中的大星芹提取物。在一方面，本發(fā)明可以涉及用于抑制神經(jīng)肽P物質(zhì)的活性的組合物，其包含作為活性成分的大星芹提取物。在一個(gè)方面，本發(fā)明可以涉及抑制神經(jīng)肽P物質(zhì)的活性的方法，其包括向需要抑制神經(jīng)肽P物質(zhì)的活性的受試者給藥大星芹提取物。具體地，可以通過本發(fā)明中描述的給藥方法進(jìn)行給藥。在一方面，本發(fā)明可涉及大星芹提取物用于抑制神經(jīng)肽P物質(zhì)的活性的用途。在一方面，本發(fā)明可涉及應(yīng)用于抑制神經(jīng)肽P物質(zhì)的活性中的大星芹提取物。在一個(gè)方面，本發(fā)明可涉及用于抑制NK1R(神經(jīng)激肽1受體，也稱為P物質(zhì)受體(SPR)或速激肽受體1(TACR1))(ACCESSION：NM_001058)基因或EDN1(內(nèi)皮素1)(ACCESSION：NM_001168319)基因或用于減少EDN1的量，其包含作為活性成分的大星芹提取物。在一個(gè)方面，本
發(fā)明內(nèi)容可以涉及用于抑制NK1R基因或EDN1(內(nèi)皮素1)基因的表達(dá)或減少EDN1的量的方法，其包括向有需要抑制NK1R基因或EDN1基因或減少EDN1的量的受試者給藥大星芹提取物。具體地，可以通過本發(fā)明中所描述的給藥方法來進(jìn)行給藥。在一方面，本發(fā)明可以涉及大星芹提取物在抑制NK1R基因或EDN1(內(nèi)皮素1)基因的表達(dá)、或減少EDN1的量中的用途。在一方面，本發(fā)明可涉及應(yīng)用于抑制NK1R基因或EDN1(內(nèi)皮素1)基因的表達(dá)、或減少EDN1的量中的大星芹提取物。在本發(fā)明的一個(gè)方面，包含其的組合物中的大星芹提取物的濃度可以為基于所述組合物總體積的0.1-10ppm，但不限于此。具體地，在本發(fā)明的一個(gè)方面中，包含所述提取物的組合物中的大星芹提取物的濃度可以為基于所述組合物的總體積的0.01ppm或以上、0.1ppm或以上、0.5ppm或以上、0.6ppm或以上、0.7ppm或以上、0.8ppm或以上、0.9ppm或以上、1.0ppm或以上、1.3ppm或以上、1.5ppm或以上、1.7ppm或以上、2.0ppm或以上、2.3ppm或以上、2.5ppm或以上、2.7ppm或以上、3.0ppm或以上、3.5ppm或以上、4.0ppm或以上、4.1ppm或以上、4.2ppm或以上、4.3ppm或以上、4.4ppm或以上、4.5ppm或以上、4.6ppm或以上、4.7ppm或以上、4.8ppm或以上、4.9ppm或以上、5ppm或以上、5.2ppm或以上、5.4ppm或以上、5.6ppm或以上、5.8ppm或以上、6.0ppm或以上、6.5ppm或以上、7.0ppm或以上、7.5ppm或以上、8.0ppm或以上、9.0ppm或以上、10.0ppm或以上、11.0ppm或以上、12.0ppm或以上、50ppm或以上、100ppm或以上、500ppm或以上、或者1000ppm或以上，但不限于此，且可以為2000ppm或以下、1000ppm或以下、500ppm或以下、100ppm或以下、50ppm或以下、40ppm或以下、30ppm或以下、20ppm或以下、15.0ppm或以下、10.0ppm或以下、8.0ppm或以下、6.0ppm或以下、5.8ppm或以下、5.6ppm或以下、5.4ppm或以下、5.2ppm或以下、5.0ppm或以下、4.8ppm或以下、4.6ppm或以下、4.4ppm或以下、4.2ppm或以下、4.0ppm或以下、3.7ppm或以下、3.5ppm或以下、3.3ppm或以下、3.0ppm或以下、2.8ppm或以下、2.6ppm或以下、2.4ppm或以下、2.2ppm或以下、2.0ppm或以下、1.8ppm或以下、1.6ppm或以下、1.4ppm或以下、1.2ppm或以下、1.0ppm或以下、0.8ppm或以下、0.6ppm或以下、0.3ppm或以下、或者0.1ppm或以下。在本發(fā)明的一個(gè)方面，所述大星芹可以是選自植物大星芹的葉、果實(shí)、花、莖和根中的一種或多種。具體地，在本發(fā)明的一方面，所述大星芹可以為植物大星芹的葉。在本發(fā)明的一個(gè)方面，所述大星芹提取物可以為植物大星芹的葉、果實(shí)、花、莖和根中的一種或多種的提取物，也可以為這些提取物的混合物。更具體地，在本發(fā)明的一方面，所述大星芹提取物可以為植物大星芹的葉的提取物。在本發(fā)明的一個(gè)方面，所述大星芹提取物可以通過包括以下步驟的方法來制備：(1)用水、有機(jī)溶劑或其組合物提取大星芹的步驟。在本發(fā)明的一個(gè)方面，所述方法可以在步驟(1)之前進(jìn)一步包括對大星芹進(jìn)行加工的步驟。具體地，所述加工可以是干燥和粉碎大星芹。然而，不限于此，可包括用于促進(jìn)提取的任何加工。具體地，所述干燥可以是日光干燥、熱空氣干燥、蒸發(fā)干燥、噴霧干燥或冷凍干燥，更具體為熱空氣干燥。另一方面，在本發(fā)明的一方面，可以直接提取沒有進(jìn)行任何加工的大星芹。在本發(fā)明的一個(gè)方面，所述方法可以進(jìn)一步包括在所述提取之后通過蒸餾除去所述溶劑的步驟。具體地，所述蒸餾可以是真空蒸餾。在本發(fā)明的一個(gè)方面，所述方法可以進(jìn)一步包括在所述蒸餾后向所得濃縮物中加入甘油和防腐劑中的一種或多種的步驟。在本發(fā)明的一個(gè)方面，所述方法可以進(jìn)一步包括在除去所述溶劑之后或在添加甘油和防腐劑中的一種或多種之后進(jìn)行過濾的步驟。在本發(fā)明的一個(gè)方面，所述大星芹提取物可以是選自水、有機(jī)溶劑及其混合物中的一種或多種的提取物。具體地，在本發(fā)明的一個(gè)方面中，所述有機(jī)溶劑可以是選自C1-C6低級醇、丁二醇和丙二醇中的一種或多種溶劑。更具體地，所述低級醇可以是乙醇。用于本發(fā)明的黑素細(xì)胞可以是PCT/KR2012/007815或韓國專利申請10-2011-0099728(角質(zhì)形成細(xì)胞適應(yīng)性黑素細(xì)胞，KaMC)中公開的黑素細(xì)胞。本發(fā)明中使用的黑素細(xì)胞可以是根據(jù)所述參考文獻(xiàn)中公開的方法和程序獲得的那些，并且還可以根據(jù)所述參考文獻(xiàn)中公開的方法進(jìn)行培養(yǎng)。黑色素細(xì)胞在布達(dá)佩斯條約下于2011年9月14日保藏于韓國生物科學(xué)和生物技術(shù)研究所的韓國典型培養(yǎng)物保藏中心(KCTC)，保藏號為KCTC12015BP。在本發(fā)明中，“皮膚”是指覆蓋生物體表面的器官。它由表皮、真皮和皮下脂肪層組成，并且以最廣泛的概念使用，不僅包括覆蓋身體的面部或整個(gè)外部部分的組織，而且包括頭皮和頭發(fā)。在本發(fā)明中，所述“大星芹(Peucedanumostruthium)”是指雙子葉開花植物，屬于前胡屬、傘形科、傘形目。它經(jīng)常發(fā)現(xiàn)于中歐和南歐的山區(qū)，被用作各種烈酒和比特酒的調(diào)味料。在本發(fā)明中，“提取物”是指從天然產(chǎn)物提取的物質(zhì)，不論提取方法、提取溶劑、提取的組分或提取物的類型如何。所述提取物在廣義上使用，包括任何物質(zhì)，其通過加工或處理從天然產(chǎn)物中提取的物質(zhì)而獲得。具體地，所述加工或處理可以是對所述提取物進(jìn)行發(fā)酵或酶處理。因此，在本發(fā)明中，所述提取物以廣義概念使用，包括發(fā)酵產(chǎn)物、濃縮物和干燥產(chǎn)物。具體地，在本發(fā)明中，所述提取物可以是發(fā)酵產(chǎn)物。在本發(fā)明中，“大星芹提取物”包括通過提取大星芹而獲得的任何物質(zhì)，不論其提取方法、提取溶劑、提取的組分或提取物的類型如何。它包括通過包括用熱、酸、堿、酶等處理的提取方法來獲得的物質(zhì)，并且以廣泛的概念使用，包括可以從大星芹中通過加工或處理從大星芹中提取的物質(zhì)而獲得的任何物質(zhì)。具體地，加工或處理可以是對大星芹提取物進(jìn)行發(fā)酵或酶處理。因此，本發(fā)明的大星芹提取物可以是發(fā)酵產(chǎn)物。在本發(fā)明的一個(gè)方面，“大星芹”可以是提取物，生的大星芹、生的大星芹的粉碎產(chǎn)物、生的大星芹的干燥產(chǎn)物、生的大星芹的干燥粉碎產(chǎn)物或大星芹的發(fā)酵產(chǎn)物，但不限于此。此外，本發(fā)明中使用的大星芹的獲取途徑是不受限制的。它可以是栽培的或商購的。此外，可以使用大星芹的地面上的部分或根部分的全部或部分。更具體地，可以使用選自植物大星芹的葉、果實(shí)、莖、根和花中的一種或多種。本發(fā)明的大星芹不一定需要干燥，只要可以充分提取大星芹的活性成分就可以采取任何形式。在本發(fā)明的一個(gè)方面，水包括蒸餾水或純凈水，并且有機(jī)溶劑包括選自如C1-C5低級醇、丙酮、醚、乙酸乙酯、二乙醚、乙基甲基酮和氯仿中的一種或多種，但不限于此。在本發(fā)明的一方面，所述大星芹提取物可以包含大星芹的C1-C6醇提取物。具體地，所述醇可以是甲醇或乙醇。在本發(fā)明的一個(gè)方面，所述大星芹提取物可以根據(jù)包括通過用水、有機(jī)溶劑或其混合物提取大星芹的步驟的方法而獲得。在本發(fā)明的一個(gè)方面，所述大星芹提取物可以是選自水、有機(jī)溶劑及其組合中的溶劑的粗提取物。有機(jī)溶劑可以是C1-C6醇。具體地，所述C1-C6醇可以是甲醇或乙醇。在本發(fā)明的一個(gè)方面，當(dāng)用溶劑提取所述大星芹時(shí)，所加入的溶劑的量可以是大星芹的量的約5-15倍。具體地，所述溶劑的加入量可以為大星芹的10倍，但不限于此。在本發(fā)明的一個(gè)方面，所述提取可以通過熱水提取、乙醇提取、加熱提取、冷提取、回流提取、回流冷凝提取、超聲波提取等來進(jìn)行。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何提取方法可無限制地使用。具體地，可以通過熱水提取或乙醇提取進(jìn)行提取。在本發(fā)明的一個(gè)方面，提取可以在室溫下進(jìn)行。然而，為了更有效的提取，其可以在高溫下進(jìn)行。具體地，所述提取可以在約40-100℃，更具體地在約80℃進(jìn)行，但不限于此。所訴提取可進(jìn)行約2-14小時(shí)，具體為約8-14小時(shí)，更具體為約11-13小時(shí)，最具體為12小時(shí)。然而，提取時(shí)間不限于此，可以根據(jù)諸如提取溶劑、提取溫度等條件而有所不同。所述提取可以進(jìn)行多于一次，以獲得更大量的活性成分。所述提取可以連續(xù)進(jìn)行1-5次，更具體地連續(xù)進(jìn)行3次，并且所得提取物可以組合在一起用于下次使用。在本發(fā)明的一個(gè)方面，所述大星芹提取物可以包含如上所述的大星芹的粗提取物，并且還可以包含具有低極性的有機(jī)溶劑的可溶性餾分，其通過用有機(jī)溶劑進(jìn)一步提取粗提取物而獲得。在本發(fā)明的一方面，有機(jī)溶劑可以是己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇等，但不限于此。所述提取物或所述提取物的可溶性餾分可以直接使用，過濾然后濃縮來使用，或者在濃縮并干燥后使用。在本發(fā)明的一方面，所述干燥可以是蒸發(fā)干燥、噴霧干燥或冷凍干燥。具體地，冷凍干燥可以在-50至-70℃進(jìn)行3-4天。根據(jù)本發(fā)明的一方面的化妝品組合物的劑型沒有特別限制，但可以根據(jù)目的適當(dāng)?shù)剡x擇。例如，所述組合物可被制備成選自化妝水、柔膚水、爽膚水、收斂水、乳液、保濕乳液、滋養(yǎng)乳液、按摩霜、滋養(yǎng)霜、保濕霜、護(hù)手霜、粉底、精華液、滋養(yǎng)精華液、面膜、香皂、清潔泡沫、清潔洗劑、清潔霜、身體乳液和身體清潔劑中的一種或多種劑型，但不限于此。當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的化妝品組合物被制備成糊劑、霜?jiǎng)┗蚰z時(shí)，可將動物纖維、植物纖維、蠟、石蠟、淀粉、黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、硅氧烷、膨潤土、二氧化硅、滑石、氧化鋅等用作載體組分。當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的化妝品組合物被制備成粉末或噴霧劑時(shí)，可將乳糖、滑石、二氧化硅、氫氧化鋁、硅酸鈣或聚酰胺粉末用作載體組分。特別地，當(dāng)被它制成噴霧劑時(shí)，其可以進(jìn)一步包含推進(jìn)劑，例如氯氟烴、丙烷/丁烷或二甲醚。當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的化妝品組合物被制成溶液或乳液時(shí)，可將溶劑、增溶劑或乳化劑用作載體組分。例如，可以使用水、乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1,3-丁二醇油、甘油脂肪酸酯、或聚乙二醇或脫水山梨醇的脂肪酸酯。當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的化妝品組合物被制成懸浮液時(shí)，作為載體成分可以使用如水、乙醇或丙二醇的稀釋劑、如乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯和聚氧乙烯脫水山梨醇酯的懸浮劑、微晶纖維素、鋁金屬氫氧化物(aluminummetahydroxide)、膨潤土、瓊脂，黃蓍膠等。當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的化妝品組合物被制成含表面活性劑的清潔劑時(shí)，可將脂肪醇硫酸鹽、脂肪醇醚硫酸鹽、磺基琥珀酸單酯、羥乙基磺酸鹽、咪唑啉衍生物、甲基?；撬猁}、肌氨酸鹽、脂肪酸酰胺醚硫酸鹽、烷基酰胺基甜菜堿、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物、乙氧基化甘油脂肪酸酯等用作載體成分。除了大星芹提取物之外，根據(jù)本發(fā)明的化妝品組合物還可以包含功能性添加劑和常用于化妝品組合物中的成分。功能性添加劑可以包括選自水溶性維生素、油溶性維生素、多肽、多糖、鞘脂和海藻提取物中的物質(zhì)。如有需要，本發(fā)明的化妝品組合物除了包含功能性添加劑之外還可以包含常用于化妝品組合物中的成分。進(jìn)一步所包含的成分的例子可以包括油、脂肪、濕潤劑、潤膚劑、表面活性劑、有機(jī)或無機(jī)顏料、有機(jī)粉末、UV吸收劑、防腐劑、滅菌劑、抗氧化劑、植物提取物、pH調(diào)節(jié)劑、醇、著色劑、香料、血液循環(huán)促進(jìn)劑、清涼劑、止汗劑、純凈水等。本發(fā)明還涉及皮膚外用組合物，其包含作為活性成分的大星芹提取物。皮膚外用組合物是指可以從皮膚外部涂抹的任何類型的組合物，其中可以包括各種類型的化妝品。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以是各種口服或腸胃外劑型的形式。當(dāng)將所述組合物制成劑型時(shí)，使用常用的稀釋劑或賦形劑，例如填充劑、增量劑、粘合劑、潤濕劑、崩解劑、表面活性劑等。用于口服給藥的固體劑型包括片劑、丸劑、粉劑、顆粒劑、軟或硬膠囊等，并且這些固體劑型可以通過與至少一種賦形劑如淀粉、碳酸鈣、蔗糖、乳糖、明膠等混合制備。除了簡單賦形劑之外，還可以使用潤滑劑如硬脂酸鎂、滑石等。用于口服給藥的液體劑型的例子包含懸浮液、內(nèi)部使用的液體、乳劑、糖漿等。除了通常使用的簡單稀釋劑如水和液體石蠟之外，還可以包含各種賦形劑，例如保濕劑、甜味劑、芳香劑、防腐劑等。用于腸胃外給藥的劑型包括滅菌水溶液、非水溶液、懸浮液、乳液、凍干產(chǎn)品和栓劑。非水溶液或懸浮液可以包含丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油、可注射的酯如油酸乙酯等。作為栓劑的基質(zhì)，可以使用witepsol、聚乙二醇、吐溫61、可可脂、月桂油、甘油明膠等。本發(fā)明的組合物可以包含所述活性成分的藥學(xué)上可接受的鹽，并且可以單獨(dú)使用或與另一種藥學(xué)活性化合物組合使用。所述鹽沒有特別限制，只要其是藥學(xué)上可接受的鹽即可。例如，可以使用鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、氫氟酸、氫溴酸、甲酸、乙酸、酒石酸、乳酸、檸檬酸、富馬酸、馬來酸、琥珀酸、甲磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘磺酸等的鹽。本發(fā)明的組合物可以根據(jù)所期望的目的進(jìn)行胃腸外或口服給藥。每日給藥劑量可以為0.1-500mg/kg/體重，特別是1-100mg/kg/體重，每天給藥一次或幾次。特定患者的給藥劑量可以根據(jù)患者的體重、年齡、性別和健康狀況、飲食、給藥時(shí)間、給藥方法、排泄率、疾病的嚴(yán)重程度等而有所不同。根據(jù)常用方法，本發(fā)明的藥物組合物可以配制成任何藥學(xué)上合適的形式，可包括：口服劑型，例如粉末、顆粒劑、片劑、軟或硬膠囊、懸浮劑、乳劑、糖漿、氣溶膠等；皮膚外用劑型，例如軟膏、霜?jiǎng)┑?；栓劑、注射劑、注射用無菌溶液等。具體地，本發(fā)明的藥物組合物可以被制成施用于皮膚外部的注射劑或劑型。本發(fā)明的組合物可以經(jīng)由包括胃腸外途徑和口服途徑等各種途徑給包括大鼠、小鼠、牛、人等的哺乳動物進(jìn)行給藥?？梢灶A(yù)期所有類型的給藥。例如，其可以口服給藥、經(jīng)皮給藥、直腸給藥、靜脈內(nèi)給藥、肌內(nèi)給藥、皮下給藥、子宮內(nèi)給藥或腦室內(nèi)給藥。根據(jù)本發(fā)明的組合物可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員容易選擇的多種途徑進(jìn)行給藥。特別地，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可作為皮膚外用劑型施用于皮膚上。在本發(fā)明的一個(gè)方面，所述食品組合物可以是保健功能性食品組合物。根據(jù)本發(fā)明的食品組合物的劑型沒有特別限制。例如，其可以配制成片劑、顆粒劑、粉末、液體如飲料、焦糖、凝膠、棒劑等。每種劑型的食品組合物除了包含活性成分外，還包含本領(lǐng)域中通常使用的成分，這些成分的可以由本領(lǐng)域的技術(shù)人員毫無困難地進(jìn)行選擇。在這種情況下，可以實(shí)現(xiàn)協(xié)同效應(yīng)。在根據(jù)本發(fā)明的食品組合物中，在本領(lǐng)域技術(shù)人員的水平內(nèi)可以確定活性成分的給藥劑量。例如，每日劑量可以是0.1-5000mg/kg/天，更具體為50-500mg/kg/天。然而，不限于此，施用劑量可以根據(jù)各種因素而變化，例如受試者的年齡和健康狀況，并發(fā)癥的存在等。例如，根據(jù)本發(fā)明的食品組合物可以是各種食品，例如口香糖、焦糖、糖果、冰棒、糖果等、飲料如軟飲料、礦泉水、酒精飲料、或包含維生素、礦物質(zhì)等的健康功能性食品。此外，根據(jù)本發(fā)明的食品組合物可以包含各種營養(yǎng)素、維生素、礦物質(zhì)(電解質(zhì))、包含合成和天然香料的風(fēng)味劑、著色劑、增量劑(干酪，巧克力等)、果膠酸及其鹽、藻酸及其鹽、有機(jī)酸、保護(hù)性膠體增稠劑、pH調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、防腐劑，甘油、醇、碳酸飲料中使用的碳酸化劑等。此外，本發(fā)明的功能性食品組合物可包含用于制備天然果汁、果汁飲料和蔬菜飲料的果肉。這些成分可以單獨(dú)使用或組合使用。這些添加劑的含量不是很重要。通常，將本發(fā)明的組合物按100重量份計(jì)，它們的含量在約0-20重量份的范圍內(nèi)。在下文中，將通過實(shí)施例和測試實(shí)施例詳述本發(fā)明。然而，以下實(shí)施例和測試實(shí)施例僅用于說明為目的，本發(fā)明的范圍不受實(shí)施例和測試實(shí)施例的限制。【實(shí)施例1】大星芹(Peucedanumostruthium)提取物的制備收割大星芹的葉子，熱風(fēng)干燥，并粉碎成粉末。用乙醇/水溶液提取而獲得粉末，然后通過真空蒸餾除去乙醇。在所獲濃縮物中，添加甘油和防腐劑后，通過過濾得到大星芹提取物。根據(jù)上述方法制備的大星芹提取物(ImperatoriaAO)亦可從DSM營養(yǎng)制品有限公司(4002Basel,Switzerland)購買，并使用于以下的測試實(shí)施例?！緶y試實(shí)施例1】基因表達(dá)測定(1)細(xì)胞培養(yǎng)在37℃的5％CO2培養(yǎng)箱中，在6孔板中的人黑素細(xì)胞生長補(bǔ)充劑(HMGS；GibcoBRL，NY，USA)的M-254培養(yǎng)基(GibcoBRL，NY，USA)內(nèi)，培養(yǎng)被保藏在韓國典型培養(yǎng)物保藏中心中的黑素細(xì)胞(KaMC；KCTC12015BP)，每隔一天更換培養(yǎng)基，直到細(xì)胞占據(jù)板面積的95％(95％融合)。(2)用提取物的處理當(dāng)6孔板上的黑素細(xì)胞密度達(dá)到約80％(融合)時(shí)，將它們與2nM的應(yīng)激誘導(dǎo)P物質(zhì)(BachemFechemikalien，Bubendorf，Switzerland)或不同濃度(0、0.1、1、2和5ppm)的實(shí)施例1的大星芹提取物一起共孵化5天。未用P物質(zhì)或?qū)嵤├?的大星芹提取物處理的細(xì)胞用作對照組。(3)RNA的提取和定量在從6孔板上培養(yǎng)的黑素細(xì)胞中去除培養(yǎng)基后，用冷的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌細(xì)胞2次并完全去除剩余的水。待向細(xì)胞中加入1mLTRIzol試劑(Invitrogen，CA，USA)并收集所有細(xì)胞后，將細(xì)胞與200μL氯仿充分混合并在室溫下保持5分鐘。然后，在4℃和12,000rpm下離心15分鐘后，將透明上清液轉(zhuǎn)移至新管中，與相同體積的異丙醇(Sigma-Aldrich，St.Louis，USA)充分混合，并在室溫下保持10分鐘。在4℃和12,000rpm下再次離心10分鐘后，棄去上清。向剩余的顆粒中加入1mL的100％EtOH(Sigma-Aldrich，St.Louis，USA)并輕微洗滌后，在4℃和12,000rpm下離心5分鐘。在再次加入1mL的70％EtOH并洗滌后，在4℃和12,000rpm下離心5分鐘，將所述顆粒干燥直至它們變得透明。通過向經(jīng)干燥的顆粒中加入50μL三重蒸餾水來完成RNA提取。使用SynergyII(Biotek，USA)對1μL的RNA進(jìn)行定量。(4)cDNA的合成為了合成cDNA，將1μg的經(jīng)定量的RNA放入0.2-mL試管中并利用RevertAidFirstStrandcDNA合成試劑盒(ThermoScientific，USA)，通過使用C-1000熱循環(huán)PCR儀(Bio-Rad，USA)根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)來合成cDNA。(5)實(shí)時(shí)PCR的基因表達(dá)測定通過使用蒸餾水，將合成的cDNA稀釋至1/20。待向9μL稀釋的cDNA中加入10μL的TaqmanGeneExpressionMasterMix(LifeTechnologies，USA)和1μL的NK1R(ACCESSION：NM_001058)和EDN1(ACCESSION：NM_001168319)基因的Assays-on-DemandTM(LifeTechnologies，USA)后，通過使用7500FastReal-TimePCR(LifeTechnologies，USA)與作為對照組的甘油醛3-磷酸脫氫酶(GAPDH，ACCESSION：NM001256799)進(jìn)行比較來相對定量分析所述基因的表達(dá)。也就是說，將NK1R和EDN1基因的表達(dá)水平與GAPDH的表達(dá)水平進(jìn)行比較。其結(jié)果展示于圖1。如圖1所示，可以看出當(dāng)用2nM的P物質(zhì)處理并將對照組的表達(dá)設(shè)為1時(shí)，NK1R和EDN1基因的表達(dá)分別增加到4.2和3.6。當(dāng)用2nMP物質(zhì)處理細(xì)胞，然后加入5ppm本發(fā)明的一方面的大星芹提取物時(shí)，NK1R和EDN1基因的表達(dá)分別降低至3.5和1.96。從該結(jié)果，證實(shí)了根據(jù)本發(fā)明的一方面的大星芹提取物有效減少由P物質(zhì)誘導(dǎo)的生物現(xiàn)象。尤其，它對EDN1基因的抑制是顯著有效的。這表明，根據(jù)本發(fā)明的一方面的大星芹提取物具有恢復(fù)已由應(yīng)激破壞的皮膚穩(wěn)態(tài)的效果和抗應(yīng)激效應(yīng)的效果。特別地，考慮到NK1R基因是表達(dá)P物質(zhì)的受體蛋白質(zhì)的基因，預(yù)期該基因表達(dá)的降低將導(dǎo)致身體對P物質(zhì)的攝取的減少，并防止由應(yīng)激物如P物質(zhì)引起的皮膚穩(wěn)態(tài)的破壞。【測試實(shí)施例2】內(nèi)皮素1的定量(1)細(xì)胞的回收和蛋白質(zhì)的定量將在6孔板上培養(yǎng)的黑素細(xì)胞(KaMC)加入到400μL的Accutase溶液(Millipore，CA，USA)中。攪拌1分鐘后，通過加入600μL的M-254培養(yǎng)基來回收共1mL的含細(xì)胞的培養(yǎng)基。然后，在12,000rpm下離心15分鐘后，棄去上清，并向剩余的顆粒中加入20μL的MCL裂解緩沖液(Sigma-Aldrich，St.Louis，USA)。待充分混合并再次在12,000rpm下離心15分鐘后，分離上清和細(xì)胞碎片。將1μL經(jīng)分離的上清加入到96孔板中后，加入蒸餾水至終體積為25μL。然后，使用BCA蛋白測定試劑盒(ThermoScientific，IL，USA)在562nm下測定蛋白質(zhì)的量。其結(jié)果展示于表1中?！颈?】(2)內(nèi)皮素1ELISA測定回收用測試實(shí)施例1中(2)的提取物所處理的細(xì)胞培養(yǎng)基，通過使用人總內(nèi)皮素ELISA試劑盒(MyBioSource，USA)在450nm測量所述培養(yǎng)基所含的內(nèi)皮素1(EDN1)的量。圖2顯示了根據(jù)式1計(jì)算蛋白質(zhì)在總蛋白中的比例的結(jié)果?！臼?】內(nèi)皮素含量(％)＝(吸光度/總蛋白含量)×100如圖2所示，當(dāng)用2nM的P物質(zhì)處理所述細(xì)胞并將對照組的量作為100％時(shí)，內(nèi)皮素1的含量增加到124％P。當(dāng)用2nM的P物質(zhì)處理所述細(xì)胞，然后加入5ppm根據(jù)本發(fā)明的一方面的大星芹提取物時(shí)，內(nèi)皮素1的含量與對照組相比降低至100％。該結(jié)果表明，根據(jù)本發(fā)明的一方面的大星芹提取物具有減少內(nèi)皮素1的量的顯著效果。由P物質(zhì)誘導(dǎo)的內(nèi)皮素1的量的減少表明，根據(jù)本發(fā)明的一方面的大星芹提取物通過抑制由應(yīng)激物引起的生理效應(yīng)來提供維持皮膚穩(wěn)態(tài)的顯著效果及抗應(yīng)激效應(yīng)。以下，將描述根據(jù)本發(fā)明的一方面的組合物的劑型實(shí)施例。然而，也可以制成其他劑型，因此本發(fā)明的范圍不限于這些劑型實(shí)施例?！緞┬蛯?shí)施例1】軟膠囊根據(jù)常用方法，混合8mg實(shí)施例1的大星芹提取物、9mg維生素E、9mg維生素C、2mg棕櫚油、8mg氫化植物油、4mg黃蜂蠟和9mg卵磷脂，然后通過每個(gè)膠囊填充400mg混合物來制備軟膠囊。與此同時(shí)，用66重量份明膠、24重量份甘油和10重量份山梨醇制備軟膠囊片，然后被所述混合物所填充，來制備包含400mg的本發(fā)明的組合物的軟膠囊?！緞┬蛯?shí)施例2】片劑將8mg實(shí)施例1的大星芹提取物、9mg維生素E、9mg維生素C、200mg低聚半乳糖、60mg乳糖和140mg麥芽糖進(jìn)行混合并使用流化床烘干機(jī)。然后，在加入6mg糖酯后，根據(jù)常用方法將混合物制備成包含500mg組合物的片劑。【劑型實(shí)施例3】飲劑將8mg實(shí)施例1的大星芹提取物、9mg維生素E、9mg維生素C、10g葡萄糖、0.6g檸檬酸和25g寡糖糖漿進(jìn)行混合，并加入300mL純凈水。將200mL混合物裝入瓶中。然后，通過在130℃下滅菌4-5秒來制備飲劑?！緞┬蛯?shí)施例4】顆粒劑將8mg實(shí)施例1的大星芹提取物、9mg維生素E、9mg維生素C、250mg無水結(jié)晶葡萄糖和550mg淀粉進(jìn)行混合并使用流化床制粒機(jī)造粒。將所得顆粒填充在袋中?！緞┬蛯?shí)施例5】注射劑根據(jù)常用方法，用表2所述的組合物制備注射劑?！颈?】成分含量實(shí)施例1的大星芹提取物10-50mg滅菌注射用蒸餾水適量pH調(diào)節(jié)劑適量【劑型實(shí)施例6】保健功能性食品根據(jù)常用方法，用表3所述的組合物制備保健功能性食品?！颈?】雖然上面描述了適用于保健功能性食品的維生素和礦物質(zhì)混合物的具體組合物，但是這些組合可以根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)整?！緞┬蛯?shí)施例7】健康飲料根據(jù)常用方法，用表4中所述的組合物制備健康飲料?！颈?】成分含量實(shí)施例1的大星芹提取物1000mg檸檬酸1000mg寡糖100g牛磺酸1g純凈水余量根據(jù)常用的保健飲料制備方法，將上述成分混合并在攪拌的同時(shí)在85℃下加熱約1小時(shí)。將所得溶液過濾并滅菌。【劑型實(shí)施例8】柔膚水(化妝水)根據(jù)常用方法，用表5中所述的組合物制備柔膚水?！颈?】成分含量(wt％)實(shí)施例1的大星芹提取物0.2甘油3.0丁二醇2.0丙二醇2.0羧基乙烯基聚合物0.1PEG-12壬基苯基醚0.2聚山梨醇酯800.4乙醇10.0三乙醇胺0.1防腐劑、顏料和香料適量純凈水余量【劑型實(shí)施例9】滋養(yǎng)乳液(乳液)根據(jù)常用方法，用表6中所述的組合物制備滋養(yǎng)乳液。【表6】【劑型實(shí)施例10】滋養(yǎng)霜根據(jù)常用方法，用表7中所述的組合物制備滋養(yǎng)霜?！颈?】成分含量(wt％)實(shí)施例1的大星芹提取物2.0甘油3.0丁二醇3.0液體石蠟7.0β-葡聚糖7.0卡波姆0.1辛酸/癸酸甘油三酯3.0角鯊?fù)?.0十六烷基葡糖苷1.5硬脂酸脫水山梨醇酯0.4聚山梨醇酯601.2三乙醇胺0.1防腐劑、顏料和香料適量純凈水余量【劑型實(shí)施例11】按摩霜根據(jù)常用方法，用表8中所述的組合物制備按摩霜?！颈?】成分含量(wt％)實(shí)施例1的大星芹提取物2.0甘油8.0丁二醇4.0液體石蠟45.0β-葡聚糖7.0卡波姆0.1辛酸/癸酸甘油三酯3.0蜂蠟4.0十六烷基葡糖苷1.5脫水山梨醇倍半油酸酯0.9凡士林3.0石蠟1.5防腐劑、顏料和香料適量純凈水余量【劑型實(shí)施例12】面膜根據(jù)常用方法，用表9中所述的組合物制備面膜?！颈?】盡管已經(jīng)示出和描述了示例性實(shí)施例，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，在不脫離由所附權(quán)利要求限定的本發(fā)明的精神和范圍的情況下，可以對其進(jìn)行形式和細(xì)節(jié)上的各種改變。因此，應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)范圍由所附權(quán)利要求及其等同物限定?！颈２鼐幪枴勘２貦C(jī)構(gòu)：韓國生物科學(xué)和生物技術(shù)研究所韓國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏編號：KCTC12015BP保藏日期：2011年9月14。當(dāng)前第1頁1 2 3