去整合蛋白變異體及其醫(yī)藥用途的制作方法
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技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明關(guān)于去整合蛋白變異體，其專一性結(jié)合至一個或多個α5β1及αv整合蛋白(例如αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、及αvβ8)，但具有與αIIbβ3的降低結(jié)合活性，以及該去整合蛋白變異體在治療和預(yù)防與αv整合蛋白或α5β1整合蛋白相關(guān)的疾病上的用途。
背景技術(shù)：
整合蛋白與鄰近細(xì)胞上的膜外基質(zhì)蛋白或其它黏著受器結(jié)合的穿膜受器。整合蛋白的α及β次單元的異二聚物配對(heterodimeric pairing)賦予與一個或多個基質(zhì)結(jié)合的專一性(Weis等人，2011，Cold Spring Harb Perspect Med；1：a006478)。這個家族的黏著分子在生物學(xué)廣泛的領(lǐng)域中扮演一重要的角色，包括發(fā)炎、先天性及抗源專一性免疫、恒定、傷口痊愈、組織成形(tissue morphogenesis)及細(xì)胞生長與分化的調(diào)控。整合蛋白的異常調(diào)控涉及于很多疾病狀態(tài)(從自體免疫至血管栓塞疾病，再到癌癥轉(zhuǎn)移)的致病機(jī)轉(zhuǎn)。業(yè)經(jīng)投入廣大的努力于發(fā)現(xiàn)和開發(fā)用于臨床應(yīng)用的整合蛋白拮抗劑。
這些αv整合蛋白各自具有一αv次單元與一β1、β3、β5、β6或β8次單元配對，其等似乎在有關(guān)傷口修復(fù)、血管新生及癌癥的組織改造(tissue remodeling)過程中特別地重要(Weis等人，2011，見上文)。這些αv整合蛋白可做為癌癥、眼科及骨科的適應(yīng)癥的標(biāo)靶。整合蛋白αvβ3及αvβ5也與腫瘤、關(guān)節(jié)炎、干癬及老年性黃斑病變(age-related macular degeneration,AMD)有關(guān)。特別是，αvβ3整合蛋白在調(diào)節(jié)血管新生及抑制腫瘤轉(zhuǎn)移中是重要的，且αvβ6整合蛋白在一些癌癥中是增量表現(xiàn)的。其它存在于眼角膜中的αv整合蛋白(αvβ5、αvβ6及αvβ8)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化生長因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)的活化。
整合蛋白α5β1、αvβ3及αvβ5已被報告其在血管新生的過程中扮演一重要角色且在多種惡性腫瘤中表現(xiàn)，包括(但不限于)黑色素瘤、乳癌、前列腺癌、結(jié)腸癌及腦瘤(Staunton等人，2006，Adv Immunol.，91：111-57)。這些整合蛋白的腫瘤內(nèi)表現(xiàn)(intratumoral expression)與腫瘤(例如黑色素瘤、乳癌、及前列腺癌)的發(fā)展與轉(zhuǎn)移相關(guān)(Staunton等人，2006，見上文)。其等已被顯示通過多條途徑傳訊且?guī)椭鷥?nèi)皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)移與增生。在生物體內(nèi)，其等在腫瘤的新生血管及腫瘤細(xì)胞自身上過度表現(xiàn)，此暗示其功能可通過多種機(jī)制使腫瘤的發(fā)展成為可能。對抗整合蛋白α5β1、αvβ3及αvβ5的拮抗性抗體及小分子在生物體外和在生物體內(nèi)已顯示可抑制血管新生。整合蛋白α5β1、αvβ3及αvβ5的抑制因子可以抑制通過ERK、Akt及FAK的傳訊，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞及癌細(xì)胞的黏著、轉(zhuǎn)移及增生減少。這些拮抗劑也被發(fā)現(xiàn)通過凋亡蛋白酶依賴(caspase-dependent)機(jī)制引起細(xì)胞凋亡。因此，整合蛋白α5β1、αvβ3及αvβ5在血管新生的關(guān)鍵性角色及與腫瘤發(fā)展的關(guān)聯(lián)使其成為抗癌療法的有吸引力的目標(biāo)，且這些整合蛋白的許多拮抗劑已于臨床試驗測試。
αvβ3整合蛋白與αIIbβ3整合蛋白享有相同的β3次單元以及多個大分子配體(ligand)，包括血纖維蛋白原(fibrinogen)、纖維連接蛋白(fibronectin)、凝血栓蛋白(thrombospondin)、溫韋伯氏因子(von Willebrand factor)及玻璃黏結(jié)蛋白(vitronectin)。這些配體都含有三重組氨基酸序列：精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)。纖維連接蛋白及玻璃黏結(jié)蛋白也為α5β1及其它αv整合蛋白的配體。αIIbβ3整合蛋白為血小板上的一主要膜蛋白，且在血小板的凝集上扮演一重要的角色。多種αIIbβ3整合蛋白拮抗劑業(yè)經(jīng)開發(fā)用于治療患有急性冠心癥(acute coronary syndrome,ACS)的病人。然而，因為廣泛地抑制血小板凝集伴隨出血風(fēng)險的增加，發(fā)展中的研究著重于減少出血及其它αIIbβ3整合蛋白拮抗劑的副作用。通過阻斷單一整合蛋白或者多重αv整合蛋白設(shè)計用于不同適應(yīng)癥的藥物是必須的(Goodman，2012，Trends Pharmacol Sci.2012；33：405-412)。
去整合蛋白是一含RGD的低分子量勝肽家族，其與表現(xiàn)在血小板及其它細(xì)胞(包括血管內(nèi)皮細(xì)胞及一些腫瘤細(xì)胞)上的整合蛋白(例如αIIbβ3、α5β1、及αvβ3)結(jié)合。除了其有效的抗血小板活性外，去整合蛋白的研究已呈現(xiàn)在心血管疾病的診斷中以及在動脈栓塞、骨質(zhì)疏松及血管新生相關(guān)的腫瘤生長及轉(zhuǎn)移的治療藥劑的設(shè)計中的新用途。馬來亞蝮素(Rhodostomin，Rho)，一種來自馬來亞蝮蛇的毒液的去整合蛋白，業(yè)經(jīng)發(fā)現(xiàn)通過阻斷血小板醣蛋白αIIbβ3以在生物體外及生物體內(nèi)抑制血小板凝集。也發(fā)現(xiàn)，Rho可與整合蛋白αIIbβ3、α5β1及αvβ3以高親和力結(jié)合且與癌細(xì)胞互相作用。舉例而言，Rho被報告其以劑量依存的方式抑制乳房及前列腺惡性腫瘤細(xì)胞對未礦物化及礦物化的骨細(xì)胞外基質(zhì)的黏著性，但其不影響腫瘤細(xì)胞的存活力。Rho也可抑制乳房及前列腺惡性腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移及入侵。
然而，由于馬來亞蝮素非專一性地與整合蛋白αIIbβ3、α5β1及αvβ3結(jié)合，馬來亞蝮素的醫(yī)藥用途可能造成嚴(yán)重的副作用，例如因抑制血小板凝集造成出血。因此，在本技術(shù)領(lǐng)域中存在對整合蛋白α5β1及αvβ3具選擇性但對αIIbβ3具有降低的結(jié)合活性的去整合蛋白變異體的需求。本發(fā)明可滿足此一需求。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明關(guān)于在一個或多個去整合蛋白(例如馬來亞蝮素)的連接符區(qū)域、RGD環(huán)及C-端中，具有一個或多個突變的去整合蛋白變異體，其具有對αIIbβ3整合蛋白降低的結(jié)合活性，因而對血小板凝集造成弱抑制，但卻與一個或多個α5β1及αv整合蛋白(例如αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、及αvβ8)專一性地結(jié)合。
因此，在一總體方面上，本發(fā)明關(guān)于一包含選自由以下所組成的群組的至少一個的去整合蛋白變異體：
(a)一突變連接符(mutant linker)，其包含至少一位于SEQ ID NO：332(SRAGKIC)氨基酸序列的1至5位點上的突變；
(b)一突變RGD環(huán)(mutant RGD loop)，其包含選自由SEQ ID NO：329至331所組成的群組的氨基酸序列；以及
(c)一突變C-端(mutant C-terminus)，其包含至少一位于SEQ ID NO：334(PRYH)氨基酸序列的1至4位點上的突變，
其中，相較于一不具有選自由該突變連接符、該突變RGD環(huán)以及該突變C-端所組成的群組的至少一個的去整合蛋白，該去整合蛋白變異體具有與αIIbβ3整合蛋白的降低結(jié)合活性。較佳的，相較于一不具有選自由該突變連接符、該突變RGD環(huán)以及該突變C-端所組成的群組的至少一個的去整合蛋白，該去整合蛋白變異體也具有與αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8及α5β1整合蛋白的至少一個的提高結(jié)合活性。
根據(jù)本發(fā)明的實施例，該去整合蛋白變異體可以為任何去整合蛋白的變異體，該任何去整合蛋白包括(但不限于)選自由以下所組成的群組的去整合蛋白：馬來亞蝮素(rhodostomin)、白唇竹葉青蛇素(albolabrin)、百步蛇素(applagin)、墨西哥西海岸響尾蛇素(basilicin)、矛頭蝮素(batroxostatin)、鼓腹巨蛇素(bitistatin)、西部亞種響尾蛇素(cereberin)、角響尾蛇素(cerastin)、西部菱背響尾蛇素(crotatroxin)、南美響尾蛇素(duressin)、麗紋龜殼花蛇素(elegantin)、黃綠龜殼花蛇素(flavoredin)、黃綠龜殼花蛇毒解離素(flavostatin)、日本蝮蛇素(halysin)、西伯利亞蝮蛇毒解離素(halystatin)、巴西蝮素(jararacin)、巴西蝮蛇毒解離素(jarastatin)、馬來亞紅口蝮素(kistrin)、亞馬遜巨蝮素(lachesin)、西部亞種響尾蛇素(lutosin)、黑尾響尾蛇素(molossin)、韓國亞種短尾蝮素(salmosin)、白眉蝮素(saxatilin)、北美侏儒響尾蛇素(tergeminin)、黃綠龜殼花蛇毒解離素(trimestatin)、臺灣龜殼花素(trimucrin)、臺灣龜殼花去整合蛋白(trimutase)、烏蘇里蝮素(ussuristatin)及草原響尾蛇素(viridin)。較佳的，該去整合蛋白變異體具有選自由SEQ ID NO：1至6所組成的群組的氨基酸序列的去整合蛋白的變異體。更佳的，該去整合蛋白具有SEQ ID NO：1氨基酸序列的馬來亞蝮素的變異體。
在一較佳實施例中，該去整合蛋白變異體包含一突變RGD環(huán)、以及該突變連接符及該突變C-端中的至少一個，該突變RGD環(huán)包含至少一位于SEQ ID NO：333(RIPRGDMP)氨基酸序列的1至3、5、7及8位點上的突變。
在本發(fā)明的另一較佳實施例中，該去整合蛋白變異體包含一具有選自由SEQ ID NO：306至SEQ ID NO：318所組成的群組的氨基酸序列的突變連接符。
在本發(fā)明的又另一較佳實施例中，該去整合蛋白包含一具有選自該由SEQ ID NO：319至SEQ ID NO：328所組成的群組的氨基酸序列的突變C-端。
在本發(fā)明的一較佳實施例中，該去整合蛋白變異體包含一突變RGD環(huán)、以及一突變連接符及一突變C-端中的至少一個，該突變RGD環(huán)具有選自由SEQ ID NO：329至331所組成的群組的氨基酸序列，該突變連接符具有選自由SEQ ID NO：306至SEQ ID NO：318所組成的群組的氨基酸序列，該突變C-端具有選自由SEQ ID NO：319至SEQ ID NO：328所組成的群組的氨基酸序列。更佳的，該去整合蛋白包含闡述于本文中的突變RGD環(huán)、突變連接符以及突變C-端。
根據(jù)本發(fā)明的實施例，該去整合蛋白變異體包含選自由SEQ ID NO：7至SEQ ID No：179所組成的群組的氨基酸序列。較佳的，該根據(jù)本發(fā)明的一實施例的去整合蛋白變異體包含選自由SEQ ID NO：123、124、147、149及171所組成的群組的氨基酸序列。
較佳的，根據(jù)本發(fā)明的一實施例的去整合蛋白變異體經(jīng)修飾，例如用以改善輸送或穩(wěn)定性。舉例而言，該去整合蛋白變異體接上聚乙二醇(pegylated)或與一融合伴侶(fusion partner)，例如白蛋白或抗體的可結(jié)晶區(qū)(Fc)結(jié)合(conjugated)。
在另一總體方面上，本發(fā)明關(guān)于一編碼(encoding)如本發(fā)明所述的去整合蛋白變異體的多核苷酸，其可為一包含實際上可連接至編碼該去整合蛋白變異體的DNA序列的調(diào)控序列(例如啟動子)的表現(xiàn)載體(expression vector)。
本發(fā)明也關(guān)于一包含一編碼如本發(fā)明所述的去整合蛋白變異體的多核苷酸的重組宿主細(xì)胞(recombinant host cell)。該宿主細(xì)胞可為一原核細(xì)胞、一酵母菌細(xì)胞、一昆蟲細(xì)胞或一哺乳動物細(xì)胞。
本發(fā)明更關(guān)于一用以制造本發(fā)明的去整合蛋白變異體的方法，包含自根據(jù)本發(fā)明的一實施例的重組宿主細(xì)胞中生產(chǎn)該去整合蛋白變異體。
也提供一包含一本發(fā)明的去整合蛋白變異體及一藥學(xué)上可接受的載體的醫(yī)藥組合物。
在又另一總體方面上，本發(fā)明關(guān)于治療在一有需要的個體中與αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8及α5β1整合蛋白的至少一個相關(guān)的疾病，較佳為治療與α5β1及αvβ3整合蛋白的至少一個相關(guān)的疾病的方法。該方法包含向該個體投予本發(fā)明的醫(yī)藥組合物。
在本發(fā)明的一實施例中，該整合蛋白相關(guān)的疾病是一選自由以下所組成的群組的血管新生相關(guān)的眼部疾病(angiogenesis-related eye disease)：老年性黃斑病變(age-related macular degeneration)、糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy)、角膜神經(jīng)血管增生病變(corneal neovascularizing disease)、局部缺血導(dǎo)致的神經(jīng)血管增生視網(wǎng)膜病變(ischaemia-induced neovascularizing retinopathy)、高度近視(high myopia)及早熟性視網(wǎng)膜病變(retinopathy of prematurity)。
在本發(fā)明的另一實施例中，該整合蛋白相關(guān)的疾病是一選自由以下所組成的群組的癌癥：轉(zhuǎn)移性黑色素瘤、轉(zhuǎn)移性前列腺癌、轉(zhuǎn)移性乳癌、結(jié)腸直腸癌、肝癌、卵巢癌、子宮頸癌、胰臟癌、非小細(xì)胞肺癌及多形性神經(jīng)膠母細(xì)胞瘤。
在另一總體方面上，本發(fā)明關(guān)于利用本發(fā)明的去整合蛋白變異體制造可治療有需要的個體中與αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8及α5β1整合蛋白中至少一個相關(guān)的疾病的藥劑。
附圖說明
上述發(fā)明內(nèi)容及以下實施方式應(yīng)搭配附圖閱讀以獲得更清楚的理解。應(yīng)了解，本發(fā)明不限于附圖所示的明確實施例。
在附圖中：
圖1說明馬來亞蝮素的相互作用圖：(A)說明馬來亞蝮素的連接符區(qū)域、RGD環(huán)及C-端區(qū)域之間的相互作用；以及(B)參與在馬來亞蝮素與整合蛋白之間相互作用區(qū)域的氨基酸序列，根據(jù)本發(fā)明的一實施例的去整合蛋白變異體，其中可被突變的氨基酸殘基被標(biāo)示為“X”；
圖2顯示多種試劑對A375人類黑色素瘤細(xì)胞遷移所產(chǎn)生的抑制性：(A)野生型Rho、(B)AR-NP，一種根據(jù)本發(fā)明的一實施例的去整合蛋白變異體及(C)磷酸鹽緩沖生理食鹽水(PBS)；
圖3A是照片，其顯示與未處理的控制組小鼠相較，以AR-NP蛋白或ARLDDL蛋白處理的C57BL/6小鼠在基質(zhì)膠(MATRIGELTM plug)中的血管密度降低；
圖3B是一直方圖，其顯示與未處理的控制組小鼠相較，以AR-NP蛋白或ARLDDL蛋白一天處理兩次，5天后的C57BL/6小鼠在基質(zhì)膠中的血紅素含量降低；
圖3C是一直方圖，其顯示與未處理的控制組小鼠相較，以AR-NP蛋白或ARLDDL蛋白一天處理一次，服用5天的C57BL/6小鼠在基質(zhì)膠中的血紅素含量降低；
圖4A顯示在一早熟性視網(wǎng)膜病變(ROP)老鼠模式中的血管新生，及以AR-NP蛋白處理可減少ROP老鼠的血管新生的照片，箭頭處顯示新血管的血管輪廓(BVPs)；
圖4B是一直方圖，其顯示以AR-NP蛋白處理可減少ROP老鼠的新血管的BVPs；
圖4C是一直方圖，其顯示以AR-NP蛋白處理可減少ROP老鼠的內(nèi)皮細(xì)胞的BVPs；
圖5顯示相較于未處理的控制組，以AR-NP蛋白(0.1μM)處理7天可抑制小鼠主動脈環(huán)上的生長：上圖：以20倍放大倍率拍攝的影像；下圖：以100倍放大倍率拍攝的影像；
圖6顯示ARLDDL蛋白(0.1μM&1μM)及AR-NP蛋白(0.1μM&1μM)兩者都可抑制4-T1乳癌細(xì)胞的群落產(chǎn)生；
圖7顯示相較于未處理的控制組，AR-NP蛋白或ARLDDL蛋白可抑制RANKL引發(fā)的蝕骨細(xì)胞生成(RANKL-induced osteoclastogenesis)：AR-NP蛋白(B及C)；ARLDDL蛋白(D)；控制組(A)；
圖8顯示ARLDDL蛋白(0.1μM)及AR-NP蛋白(0.1μM)兩者都可明顯地抑制神經(jīng)膠瘤入侵；
圖9顯示在Wistar大鼠中5mg/kg的AR-NP蛋白對血壓及心跳速率影響并不顯著；
圖10顯示在SCID小鼠中A375黑色素瘤的生長被AR-NP蛋白所抑制，比例尺：1公分；
圖11顯示在K-rasG12D基因轉(zhuǎn)殖小鼠中腫瘤的生長被AR-NP(KG)蛋白所抑制；以及
圖12顯示在患U87腫瘤小鼠(U87-bearing mice)中腦腫瘤的生長被AR-NP(KG)蛋白所抑制。
具體實施方式
在背景技術(shù)及整篇說明書中引用或闡述了許多出版品、文章及專利；這些文獻(xiàn)的全文各自并于此處以供參考。包括在本發(fā)明說明書中的文件、技術(shù)、材料、設(shè)備、文章或諸如此類的討論是為了提供本發(fā)明的內(nèi)容。這些討論并非承認(rèn)任意或所有這些材料成為任何所公開或請求的發(fā)明的背景技術(shù)。
除非另外定義，此處所用的所有技術(shù)及科學(xué)術(shù)語具有與本領(lǐng)域技術(shù)人員通常所了解的相同意義。否則，此處所用的這些術(shù)語具有如本發(fā)明書所定的意義。本文所引用的所有專利、已公開專利申請案及出版品并于此處以供參考，如全文闡述于此。須注意除非內(nèi)文另外明確指出，否則本文及前述的權(quán)利要求書所用的單數(shù)形式的“一”、“該”包括復(fù)數(shù)形式。
如本文所用，“去整合蛋白”意指一類富含半胱氨酸的蛋白質(zhì)，其為整合蛋白的有效的可溶性配體，且參與調(diào)控許多過程，例如細(xì)胞-細(xì)胞以及細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)黏著、轉(zhuǎn)移及入侵、細(xì)胞周期進(jìn)程、許多后生動物生長過程中的分化及細(xì)胞形式特化、細(xì)胞死亡及凋亡。氨基酸主體的RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)在大多數(shù)單體去整合蛋白中是保守的，且位于彎曲環(huán)(整合蛋白結(jié)合環(huán))的尖端上，其借由雙硫鍵而穩(wěn)定并自多勝肽煉的主體上凸出。所有自蛇毒中純化的去整合蛋白都選擇性地結(jié)合至血纖維蛋白原受器或標(biāo)記血纖維蛋白原受器(例如αv-整合蛋白、α5β1整合蛋白及整合蛋白αIIbβ3)，與其結(jié)合將會導(dǎo)致血纖維蛋白原依賴的血小板(fibrinogen-dependent platelet)凝集及其他由這些血纖維蛋白原受器所調(diào)節(jié)的生物活性被抑制。在本發(fā)明中有用的去整合蛋白的例子包括(但不限于)：馬來亞蝮素、黃綠竹葉青素(triflavin)、鋸鱗蝰素(echistatin)、臺灣龜殼花素、麗紋龜殼花蛇素、赤尾鮐素(trigramin)、百步蛇素。可用于本發(fā)明的去整合蛋白的例示性勝肽序列提供于SEQ ID NO：1至6。
如本文所用，“去整合蛋白變異體”意指經(jīng)設(shè)計、功能性活化的蛋白質(zhì)、或其多勝肽或任意衍生物，其包含自野生型去整合蛋白衍生或修飾或突變的氨基酸序列。相較于自然存在的去整合蛋白，去整合蛋白變異體含有一個或多個突變。該一個或多個突變可以是對自然存在的去整合蛋白取代(substitution)、刪除(deletion)、或插入(insertion)一個或多個氨基酸。在一實施例中，相較于不具有該一個或多個突變的自然存在的去整合蛋白，去整合蛋白變異體對αIIbβ3整合蛋白具有較低的結(jié)合活性。更佳的，一去整合蛋白變異體與去整合蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8的一個或多個整合蛋白α5β1專一性地結(jié)合。最佳地，相較于自然存在的不具有該一個或多個突變的去整合蛋白，該去整合蛋白變異體具有與變異體αvβ3及變異體α5β1的一個或兩個的較高的結(jié)合活性。
在某些實施例中，去整合蛋白變異體包含一來自毒液的經(jīng)修飾Rho蛋白，其相較于自然存在的Rho含有至少一個氨基酸的取代、插入或刪除。經(jīng)修飾的Rho變異體及/或不同的去整合蛋白還包含轉(zhuǎn)譯后的修飾。
在一實施例中，本發(fā)明的去整合蛋白變異體包含一突變RGD環(huán)。于本文中，“突變RGD環(huán)”或“突變RGD區(qū)域”意指一包含一個或多個橫跨去整合蛋白RGD環(huán)的氨基酸序列中的突變的勝肽。野生型去整合蛋白的RGD環(huán)包含與整合蛋白結(jié)合的RGD殘基。舉例而言，Rho的RGD環(huán)包含SEQ ID NO：333(RIPRGDMP)氨基酸序列。在本發(fā)明的較佳實施例中，一突變RGD環(huán)包含至少一個位于SEQ ID NO：333氨基酸序列1至3、5、7及8位點上的突變。更佳的，突變RGD環(huán)包含選自由SEQ ID NO：329至331所組成的群組的氨基酸序列。
在另一實施例中，本發(fā)明的去整合蛋白變異體包含突變連接符。在本文中，“突變連接符”或“突變連接符區(qū)域”意指一包含一個或多個橫跨去整合蛋白連接符區(qū)域的氨基酸序列中的突變的勝肽。去整合蛋白的連接符區(qū)域位于緊鄰RGD環(huán)的N端。舉例而言，Rho的連接符區(qū)域包含SEQ ID NO：332(SRAGKIC)的氨基酸序列。在本發(fā)明的較佳實施例中，突變連接符包含至少一個位于SEQ ID NO：332氨基酸序列1至5位點上的突變。更佳的，突變連接符包含選自由SEQ ID NO：306至SEQ ID NO：318所組成的群組的氨基酸序列。
在又另一實施例中，本發(fā)明的一去整合蛋白變異體包含突變C-端。在本文中，“突變C-端”或“突變C-端區(qū)域”意指一包含一個或多個在去整合蛋白C-端區(qū)域的氨基酸序列中的突變的勝肽。去整合蛋白的C-端區(qū)域位于去整合蛋白的羧基端。舉例而言，Rho的C-端包含SEQ ID NO：334(PRYH)的氨基酸序列。在本發(fā)明的較佳實施例中，突變C-端包含至少一個位于SEQ ID NO：334氨基酸序列1至4位點上的突變。更佳的，突變C-端包含選自由SEQ ID NO：319至SEQ ID NO：328所組成的群組的氨基酸序列。
在較佳實施例中，本發(fā)明的一去整合蛋白變異體包含去整合蛋白的突變RGD環(huán)、以及去整合蛋白的突變連接符及突變C-端的至少一個。
在更多較佳實施例中，本發(fā)明的一去整合蛋白變異體包含如本文所述的去整合蛋白的突變RGD環(huán)、突變連接符以及突變C-端。
本發(fā)明的一去整合蛋白變異體可包括自然存在及非自然存在的氨基酸。自然存在的氨基酸的例子包括(但不限于)一般形成勝肽、多勝肽及蛋白質(zhì)的20個基本、自然存在的氨基酸的任一個。下表1表列20個自然存在的氨基酸。
表1
非自然存在的氨基酸自然產(chǎn)生或者化學(xué)合成的非蛋白氨基酸。非自然存在的氨基酸的例子包括(但不限于)β-氨基酸(β3及β2)、同源氨基酸、脯氨酸及丙酮酸的衍生物、三取代丙氨酸衍生物、甘氨酸衍生物、環(huán)取代苯丙氨酸及酪氨酸衍生物、線性核心氨基酸、N-甲基氨基酸等。
在本文中，“保守性取代”是指以另一個具有相同凈電荷及接近相同大小與形狀的氨基酸對一氨基酸進(jìn)行取代。當(dāng)其在側(cè)鏈中的碳及雜原子的總數(shù)差距不超過約4時，具有脂肪族或經(jīng)取代脂肪族氨基酸側(cè)鏈的氨基酸具有接近相同的大小。當(dāng)其側(cè)鏈的分支數(shù)差距不超過1時，其具有接近相同的形狀。在其側(cè)鏈具苯基或經(jīng)取代苯基的氨基酸被認(rèn)為是具有大約相同的大小與形狀。下列為五組氨基酸。以另一來自同一組的氨基酸取代一多勝肽中的氨基酸導(dǎo)致保守性取代：第1組：甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸及具有C1-C4脂肪族或C1-C4經(jīng)羥基取代的脂肪族側(cè)鏈(直鏈或單分支)的非自然存在氨基酸；第2組：谷氨酸、天門冬氨酸及具有經(jīng)羧酸取代的C1-C4脂肪族側(cè)鏈(未分支或一分支點)的非自然存在氨基酸；第3組：賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸及具有經(jīng)胺或胍基取代的C1-C4脂肪族側(cè)鏈(未分支或一分支點)的非自然存在氨基酸；第4組：谷氨酰氨酸、天冬酰氨酸及具有經(jīng)酰胺取代的C1-C4脂肪族側(cè)鏈(未分支或一分支點)的非自然存在氨基酸；第5組：苯丙氨酸、苯甘氨酸、酪氨酸及色氨酸。
在本文中，“高度保守性取代”是指以另一個在側(cè)鏈具有相同官能基且大小與形狀幾乎相同的氨基酸對一氨基酸進(jìn)行取代。當(dāng)其在側(cè)鏈中的碳及雜原子的總數(shù)差距不超過約2時，具有脂肪族或經(jīng)取代脂肪族氨基酸側(cè)鏈的氨基酸具有幾乎相同的大小。當(dāng)其在側(cè)鏈具有相同數(shù)目的分支時，其具有幾乎相同的形狀。高度保守性取代的例子包括纈氨酸取代亮氨酸、蘇氨酸取代絲氨酸、天門冬氨酸取代谷氨酸及苯甘氨酸取代苯丙氨酸。
在本文中，術(shù)語“分離蛋白(isolated protein)”或“分離多勝肽(isolated polypeptide)”意指通過核酸(包括，特別是，基因體DNA、cDNA、重組DNA、重組RNA、或合成起始點的核酸、或其組合)編碼的蛋白質(zhì)，其中(1)不包含至少某些常見的蛋白質(zhì)、(2)實質(zhì)上不包含來自相同來源，例如來自相同細(xì)胞或物種的其它蛋白質(zhì)、(3)由來自不同物種的細(xì)胞所表現(xiàn)、(4)由自然存在于來源細(xì)胞所分離的至少50％的多核苷酸、脂質(zhì)、碳水化合物或其他材料、(5)與自然狀態(tài)下連接“分離蛋白”的全部或部分多勝肽不相連(通過共價或非共價相互作用)、(6)與在自然狀態(tài)下不相連的多勝肽協(xié)同性連接(通過共價或非共價相互作用)、或(7)在自然狀態(tài)下不存在。較佳的，該分離蛋白本質(zhì)上不含其他污染性蛋白質(zhì)或多勝肽或者在其自然環(huán)境發(fā)現(xiàn)會干擾其醫(yī)藥、診斷、預(yù)防或研究的用途的其他污染物。
在本文中，術(shù)語“多核苷酸”、“核苷酸”、“寡核苷酸”及“核酸”可交換使用來意指包含DNA、RNA、其衍生物、或其組合的核酸。
在本文中，可交換使用術(shù)語“多勝肽”及“蛋白質(zhì)”來表示由自然存在且非重組細(xì)胞、基因改造或重組細(xì)胞、或化學(xué)合成所產(chǎn)生，且包含具有原生蛋白質(zhì)的氨基酸序列或在原生序列上刪除、添加、及/或取代一個或多個氨基酸的分子的蛋白質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明，該去整合蛋白特別涵蓋經(jīng)修飾Rho蛋白或其片段或其變異體的多勝肽或蛋白質(zhì)。在某些具體實施例中，去整合蛋白涵蓋抑制整合蛋白活性的Rho蛋白或其片段或其變異體。在某些具體實施例中，去整合蛋白以αv-整合蛋白同功型(例如選自αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8、及整合蛋白α5β1的任意群組)為標(biāo)靶。在某些其它具體實施例中，整合蛋白不為αIIbβ3。
在本文中，“宿主細(xì)胞”是個別細(xì)胞或者細(xì)胞培養(yǎng)物，該細(xì)胞培養(yǎng)物可為或已為任意重組載體或多核苷酸的一接受者。宿主細(xì)胞包括單一宿主細(xì)胞的子代，且該子代因自然、偶發(fā)、或蓄意的突變及/或改變而不須與原親代細(xì)胞完全相同(在形態(tài)上或在總DNA補體上)。宿主細(xì)胞包括以本發(fā)明的重組載體或多核苷酸在生物體外或生物體內(nèi)轉(zhuǎn)染(transfect)或感染(infect)的細(xì)胞。包含本發(fā)明的重組載體的宿主細(xì)胞可稱作“重組宿主細(xì)胞”。合適的宿主細(xì)胞包括原核或真核細(xì)胞，包括，舉例而言，細(xì)菌、酵母菌、真菌、植物、昆蟲、及哺乳動物細(xì)胞。
在本文中，術(shù)語“結(jié)合活性”意指去整合蛋白或去整合蛋白變異體與整合蛋白的結(jié)合，其導(dǎo)致對整合蛋白活性的抑制、阻斷、中和、降低、消除、或影響的一個或多個。在某些實施例中，去整合蛋白或去整合蛋白變異體通過結(jié)合至整合蛋白及隔絕整合蛋白而與其它分子(例如其它ECM蛋白)結(jié)合來抑制整合蛋白活性。在某些其它實施例中，去整合蛋白或去整合蛋白變異體通過結(jié)合至整合蛋白及阻止整合蛋白觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)下游訊息傳遞活動來抑制整合蛋白活性。
在本文中，術(shù)語“抑制”在本文的整合蛋白活性的上下文中，意指去整合蛋白或去整合蛋白變異體的性質(zhì)，其降低整合蛋白的活性，可通過多種功能性檢測方法，包括但不限于結(jié)合分析法、轉(zhuǎn)移分析法、凋亡分析法、及細(xì)胞黏著分析法進(jìn)行分析。在本發(fā)明的某些實施例中，整合蛋白是一包括αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8的αv-整合蛋白同功型。在某些其它具體實施例中，整合蛋白為α5β1。在某些進(jìn)一步的實施例中，相較于不具有去整合蛋白或去整合蛋白變異體的控制組，去整合蛋白或去整含蛋白變異體可抑制大約0％至100％的整合蛋白活性。
在本文中，術(shù)語“選擇性結(jié)合”、“選擇性抑制”、“差別性結(jié)合”、“差別性抑制”意指對一特定標(biāo)的整合蛋白分子展現(xiàn)與其它一個或多個整合蛋白不同的專一性的去整合蛋白或去整合蛋白變異體的性質(zhì)。舉例而言，本發(fā)明的去整合蛋白變異體選擇性地結(jié)合至整合蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、α5β1的一個或多個，因此對整合蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、α5β1的一個或多個具有較其它整合蛋白(例如αIIbβ3)為高的親和力。在某些實施例中，包含經(jīng)修飾Rho片段的去整合蛋白變異體選擇性地抑制選自由整合蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、及整合蛋白α5β1所組成的群組的一個或多個整合蛋白的活性。在較佳實施例中，去整合蛋白變異體包含專一性抑制整合蛋白αvβ3及整合蛋白α5β1兩個、抑制整合蛋白αvβ5及整合蛋白α5β1兩個、或抑制整合蛋白αvβ6及整合蛋白α5β1兩個的活性的經(jīng)修飾Rho片段。
術(shù)語“同源性”、“同源的”在本文意指在對應(yīng)去整合蛋白片段(例如Rho片段)之間，整個序列相似性及/或相同性的程度。高度序列同源性表示保有蛋白質(zhì)活性。一些公開可取得的算法或軟件程序可用于決定序列同源性。決定額外保守性或非保守性氨基酸取代的適當(dāng)性及序列同源性的程度在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)。
在本文中，“個體”意指任意動物，包括(但不限于)人類及其他靈長目動物、嚙齒動物(例如小鼠、大鼠、及天竺鼠)、兔類動物(lagomorphs)(例如兔子)、牛屬動物(例如牛)、綿羊(ovine)(例如綿羊(sheep))、山羊(caprine)(例如山羊(goat))、豬(porcine)(例如豬(swine))、馬科動物(例如馬)、犬(例如狗)、貓(feline)(例如貓(cat))、家禽(例如雞、火雞、鴨、鵝、其它鶉雞類鳥等)及野生的或野生動物，包括(但不限于)動物，例如有蹄動物(例如鹿)、熊、兔類動物、嚙齒動物、鳥等。該術(shù)語不傾向被限制于特定年紀(jì)或性別。因此，成年及新生個體以及胎兒，無論是雄性或雌性，都包含于該術(shù)語中?！坝兄委熜枰钡膫€體是指通過抑制一個或多個整合蛋白活性治療疾病及/或情況，以達(dá)到有利的治療及/或預(yù)防的結(jié)果的個體。有利的結(jié)果包括減緩癥狀的嚴(yán)重性或延遲癥狀的開始、延長壽命及/或更快或更完全消除該疾病或情況。
“藥學(xué)上可接受的載體”意指任意現(xiàn)有形式的非毒性固體、半固體或液體填料、稀釋劑、封裝原料、配方助劑、或賦形劑。藥學(xué)上可接受的載體在所利用的劑量及濃度下對接受者呈非毒性且與配方中的其它成份相容。
在本文中，“藥學(xué)上可接受的鹽”意指化合物的衍生物，其中該親代化合物通過產(chǎn)生其酸或堿鹽來進(jìn)行修飾。
在本文中，“與整合蛋白相關(guān)的疾病”意指任何需要醫(yī)學(xué)介入或?qū)ζ涠葬t(yī)學(xué)介入合意者的與整合蛋白相關(guān)的病況、病癥、或癥候群。此醫(yī)學(xué)介入可包括治療、診斷、及/或預(yù)防。
在本文中，“有效量”或“足夠量”意指本發(fā)明所述去整合蛋白變異體的有效劑量以抑制、預(yù)防、或治療特定疾病、病癥、病況、或副作用的癥狀。
術(shù)語“治療”意指降低特定疾病、病癥、病況、或副作用的癥狀的發(fā)生頻率、范圍、嚴(yán)重性及/或持續(xù)時間。
術(shù)語“預(yù)防”意指抑制或避免特定疾病、病癥、情況、或副作用的癥狀。
去整合蛋白變異體
在本發(fā)明中已發(fā)現(xiàn)多種來自蛇毒的去整合蛋白(例如來自馬來亞蝮蛇的馬來亞蝮素(Rho))的變異體，表現(xiàn)與一個或多個αv-整合蛋白(例如αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8中一個或多個)及其它整合蛋白(例如α5β1)選擇性結(jié)合，及與αIIbβ3的降低的結(jié)合活性的不同能力。通過在感興趣的去整合蛋白的連接符區(qū)域、RGD環(huán)及C-端的一處或多處上突變氨基酸序列，使其可具有與某些整合蛋白選擇性結(jié)合的能力。
因此，本發(fā)明的一總體方面關(guān)于去整合蛋白變異體。根據(jù)本發(fā)明的一實施例，去整合蛋白變異體具有與αIIbβ3的降低的結(jié)合活性，且專一性地結(jié)合至α5β1、αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、及αvβ8的至少一個。
較佳的，相較于衍生出該去整合蛋白變異體的野生型去整合蛋白，該去整合蛋白變異體具有與αIIbβ3的降低的結(jié)合活性，但具有與α5β1、αvβ3的至少一個的提高的結(jié)合活性。
舉例而言，已發(fā)現(xiàn)在RGD環(huán)上的Rho突變(例如46XXXRXDXX53)可增加對αvβ3及/或α5β1整合蛋白的專一性，在C-端區(qū)域的突變(例如65XXXX68)可造成與αIIbβ3的較少結(jié)合(因此對血小板凝集的抑制較弱及較少的出血副作用)，及在連接符區(qū)域的突變(例如39XXXXXIC45)也可減少與αIIbβ3的結(jié)合，其中三個區(qū)域各自以在野生型Rho中的氨基酸殘基數(shù)目來辨別，且根據(jù)本發(fā)明的實施例，可被修飾(例如通過插入、刪除、或取代)的氨基酸殘基獨立地被標(biāo)示為“X”。
根據(jù)本發(fā)明的實施例，去整合蛋白變異體包含在RGD環(huán)中的突變(例如46XXXRXDXX53)，即，一突變RGD環(huán)。
在一實施例中，一去整合蛋白變異體包含一具有共通序列(consensus sequence)49RXD51的突變RGD環(huán)。這些變異體的例子包括但不限于那些具有氨基酸序列選自由SEQ ID NO：7至24所組成的群組。
在另一實施例中，一去整合蛋白變異體包含一具有共通序列48XRGD51的突變RGD環(huán)。這些變異體的例子包括但不限于那些具有氨基酸序列選自由SEQ ID NO：25至42所組成的群組。
在另一實施例中，一去整合蛋白變異體包含一具有共通序列48XRGDXP53的突變RGD環(huán)。這些變異體的例子包括但不限于那些具有氨基酸序列選自由SEQ ID NO：43至61所組成的群組。
在另一實施例中，一去整合蛋白變異體包含一具有共通序列48XRGDMX53的突變RGD環(huán)。這些變異體的例子包括但不限于那些具有氨基酸序列選自由SEQ ID NO：62至78所組成的群組。
在另一實施例中，一去整合蛋白變異體包含一具有共通序列46XXPRGD51的突變RGD環(huán)。這些變異體的例子包括但不限于那些具有氨基酸序列選自由SEQ ID NO：79至94所組成的群組。
在另一實施例中，一去整合蛋白變異體包含一具有共通序列48XRXDXP53的突變RGD環(huán)。這些變異體的例子包括但不限于那些具有氨基酸序列選自由SEQ ID NO：95至101所組成的群組。
根據(jù)本發(fā)明的其它實施例，一去整合蛋白變異體包含一在C-端區(qū)域中的突變(例如65XXXX68)，即，突變C-端。
在一實施例中，一去整合蛋白變異體包含一具有共通序列65PRXXXXX71的突變C-端。這些變異體的例子包括但不限于那些具有氨基酸序列選自由SEQ ID NO：102至107所組成的群組。
在另一實施例中，一去整合蛋白變異體包含一具有共通序列65PRXXXXX71的突變C-端，且更包含一如本文所述的突變RGD環(huán)。舉例而言，該突變RGD環(huán)可具有48ARGDMP53(SEQ ID NO：335)共通序列。這些變異體的例子包括但不限于那些具有氨基酸序列選自由SEQ ID NO：115至119所組成的群組。
根據(jù)本發(fā)明的又其它實施例，一去整合蛋白變異體包含一在連接符區(qū)域中的突變(例如39XXXXXIC45)，即，突變連接符。
在一實施例中，一去整合蛋白變異體包含一具有共通序列39KKKRTIC47(SEQ ID NO：306)的突變連接符。較佳的，該去整合蛋白變異體還包含一如本文所述的突變RGD環(huán)。舉例而言，該突變RGD環(huán)可具有48XRXDXP53共通序列。這些變異體的例子包括但不限于那些具有氨基酸序列選自由SEQ ID NO：108至114所組成的群組。
根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步的實施例，一去整合蛋白變異體包含一在連接符區(qū)域中的突變(例如39XXXXXIC45)、一在RGD環(huán)中的突變(例如46XXXRXDXX53)及一在C-端區(qū)域中的突變(例如65XXXX68)。這些變異體的例子包括但不限于那些具有氨基酸序列選自由SEQ ID NO：120至179所組成的群組。
鑒于本公開內(nèi)容，適合本發(fā)明的目的的任意方法可用來制造本發(fā)明的去整合蛋白變異體。舉例而言，去整合蛋白變異體可通過定點突變(site-directed mutagenesis)方法來建構(gòu)。鑒于本公開內(nèi)容，本發(fā)明的去整合蛋白變異體可利用本技術(shù)領(lǐng)域已知的方法表現(xiàn)。以細(xì)胞為基礎(chǔ)(cell-based)的方法及無細(xì)胞(cell-free)方法適用于生產(chǎn)本發(fā)明的勝肽。以細(xì)胞為基礎(chǔ)的方法一般涉及將核酸構(gòu)筑(nucleic acid construct)在生物體外引入宿主細(xì)胞中及在適合表現(xiàn)的條件下培養(yǎng)該宿主細(xì)胞，然后自培養(yǎng)基或者宿主細(xì)胞中(例如通過打破宿主細(xì)胞)，或自兩者中收取勝肽。本發(fā)明也提供使用廣為本技術(shù)領(lǐng)域所知在體外轉(zhuǎn)錄/轉(zhuǎn)譯的無細(xì)胞方法去生產(chǎn)去整合蛋白變異體的方法。
去整合蛋白變異體可通過一能編碼經(jīng)修飾氨基酸序列的經(jīng)修飾去整合蛋白核苷酸序列來編碼，而使得該多勝肽實質(zhì)上降低對整合蛋白αIIbβ3受器阻斷活性及/或提高對αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、及αvβ8、及其它整合蛋白(例如α5β1)的一個或多個的專一性。通過修飾用于衍生自蛇毒的去整合蛋白的編碼序列，可獲得用于去整合蛋白變異體的編碼序列。去整合蛋白變異體可選自馬來亞蝮素、白唇竹葉青蛇素、百步蛇素、墨西哥西海岸響尾蛇素、矛頭蝮素、鼓腹巨蛇素、西部亞種響尾蛇素、角響尾蛇素、西部菱背響尾蛇素、南美響尾蛇素、麗紋龜殼花蛇素、黃綠龜殼花蛇素、黃綠龜殼花蛇毒解離素、日本蝮蛇素、西伯利亞蝮蛇毒解離素、巴西蝮素、巴西蝮蛇毒解離素、馬來亞紅口蝮素、亞馬遜巨蝮素、西部亞種響尾蛇素、黑尾響尾蛇素、韓國亞種短尾蝮素、白眉蝮素、北美侏儒響尾蛇素、黃綠龜殼花蛇毒解離素、臺灣龜殼花素、臺灣龜殼花去整合蛋白、烏蘇里蝮素及草原響尾蛇素。
因此，本發(fā)明的另一總體方面關(guān)于一編碼如本發(fā)明所述的去整合蛋白變異體的多核苷酸。本發(fā)明的又另一總體方面關(guān)于一包含一編碼如本發(fā)明所述的去整合蛋白變異體的多核苷酸的宿主細(xì)胞。
一般而言，不論經(jīng)修飾或未經(jīng)修飾的異源勝肽可如上所述由其自身表現(xiàn)，或以融合蛋白表現(xiàn)，且不僅可包括分泌信號，而且可包括分泌性前導(dǎo)序列(leader sequence)。本發(fā)明的分泌性前導(dǎo)序列可引導(dǎo)某些蛋白質(zhì)至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(endoplasmic reticulum，ER)或間質(zhì)體(periplasma)。ER將膜結(jié)合蛋白與其他蛋白質(zhì)分開。一旦被定位于ER，蛋白質(zhì)可進(jìn)一步被引導(dǎo)至高基氏體(Golgi apparatus)以分配至液胞(vesicle)(包括分泌性液胞、細(xì)胞膜、溶小體(lysosome)及其他胞器)。在間質(zhì)體的狀況下，蛋白質(zhì)分泌至葛蘭氏陰性菌(Gram negative bacterium)(例如大腸桿菌)之間質(zhì)空間(periplasma space)中。
此外，去整合蛋白變異體可額外添加勝肽官能基(peptide moiety)及/或純化標(biāo)簽。這些區(qū)域可在多勝肽的最終制備前移除。為了引發(fā)分泌或排出、改善穩(wěn)定性、及促進(jìn)純化等諸多原因而對多勝肽添加勝肽官能基為本領(lǐng)域熟悉且例行的技術(shù)。合適的純化標(biāo)簽包括，舉例而言，V5、多組氨酸(polyhistidine)、抗生物素(avidin)、生物素(biotin)。將勝肽與化合物，例如生物素結(jié)合可使用本技術(shù)領(lǐng)域中所熟知的技術(shù)來達(dá)成。(Hermanson編著(1996)Bioconjugate Techniques；Academic Press)。也可使用本技術(shù)領(lǐng)域已知的技術(shù)將勝肽與放射性同位素、毒素、酵素、熒光標(biāo)簽、膠態(tài)金、核酸、溫諾平(vinorelbine)及艾徽素(doxorubicin)結(jié)合。(Hermanson編著(1996)Bioconjugate Techniques；Academic Press；Stefano等人(2006))。
適合用于本發(fā)明的融合伴侶包括，舉例而言，胎球蛋白(fetuin)、人類血清白蛋白、免疫球蛋白CH2/CH3區(qū)域(Fc)、及/或其一個或多個片段。也提供經(jīng)結(jié)合的蛋白質(zhì)，例如聚乙二醇的結(jié)合物。
本發(fā)明的勝肽也可以本領(lǐng)域已知的技術(shù)化學(xué)合成(例如，見Hunkapiller等人Nature，310：105 111(1984)；Grant編著(1992)Synthetic Peptides,A Users Guide，W.H.Freeman and Co.；美國專利6,974,884))。舉例而言，可以使用勝肽合成器或通過使用本領(lǐng)域已知的固相方法合成一對應(yīng)多勝肽片段的多勝肽。
此外，如果需要，可以取代或插入的方式在多勝肽序列中加入非典型氨基酸或化學(xué)氨基酸類似物。非典型氨基酸包括但不限于常見氨基酸的D-異構(gòu)物、2，4-二胺基丁酸、a-胺基異丁酸、4-胺基丁酸、胺基丁酸(Abu)、2-胺基丁酸、γ-胺基丁酸、ε-胺基己酸(Ahx)、6-胺基己酸、胺基異丁酸(Aib)、2-胺基異丁酸、3-胺基丙酸、鳥氨酸、正亮氨酸、正纈氨酸、羥脯氨酸、肌氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、磺基丙氨酸、三級丁基甘氨酸、三級丁基丙氨酸、苯甘氨酸、環(huán)己基丙氨酸、b-丙氨酸、氟氨基酸、設(shè)計者氨基酸(designer amino acid)，例如b-甲基氨基酸、鈣-甲基氨基酸、鈉-甲基氨基酸及一般氨基酸類似物。此外，氨基酸可以為D(右旋的)或L(左旋的)。
本發(fā)明的去整合蛋白變異體可通過標(biāo)準(zhǔn)方法而自化學(xué)合成及重組細(xì)胞培養(yǎng)物中回收及純化，該方法包含但不限于硫酸銨或乙醇沉淀、酸萃取、陰離子或陽離子交換層析法、磷酸纖維素層析法、疏水作用層析法、親合力層析法、氫氧基磷灰石層析法、及凝集素層析法。在一實施例中，選用高效液相層析法(HPLC)來純化。當(dāng)多勝肽在分離及/或純化的過程中發(fā)生變性時，可選用熟知用于再折疊(refolding)蛋白質(zhì)的技術(shù)以產(chǎn)生具活性的構(gòu)型。
本發(fā)明的去整合蛋白變異體可以一個或多個各樣親水性聚合物進(jìn)行修飾或與其共價結(jié)合以增加該勝肽的可溶性及循環(huán)半衰期。用于與勝肽結(jié)合的適宜非蛋白親水性聚合物包括但不限于聚烷基醚，如以下例子所列示：聚乙二醇、聚丙二醇、聚乳酸、聚乙醇酸、聚氧化烯烴、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素及纖維素衍生物、聚葡萄糖及聚葡萄糖衍生物。一般而言，這些親水性聚合物的平均分子量在約500道爾頓(dalton)至約100，000道爾頓，約2，000道爾頓至約40，000道爾頓，或約5，000道爾頓至約20，000道爾頓的范圍。該勝肽可利用下列文獻(xiàn)所述的任意方法而與這些聚合物一起衍生或與的結(jié)合：Zallipsky,S.(1995)Bioconjugate Chem.，6：150-165；Monfardini,C.等人(1995)Bioconjugate Chem.，6：62-69；美國專利4，640，835；4，496，689；4，301，144；4，670，417；4，791，192；4，179，337，或WO 95/34326。
醫(yī)藥組合物
本發(fā)明的另一總體方面關(guān)于一包含一本發(fā)明的去整合蛋白變異體及一藥學(xué)上可接受載體的醫(yī)藥組合物。視需要，該醫(yī)藥組合物可被調(diào)配成固體、半固體、液體或氣態(tài)形態(tài)的制劑，例如錠片、膠囊、粉末、顆粒、軟膏、溶液、栓劑、注射劑、吸入劑、噴霧劑。以下方法及賦形劑僅為示例且不具任何限制性。
在一些實施例中，本發(fā)明的去整合蛋白變異體與本技術(shù)領(lǐng)域所知的廣泛的藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑及稀釋劑一起形成配方而提供。這些醫(yī)藥載體、賦形劑及稀釋劑包括于USP藥學(xué)賦形劑一覽表所列者。USP and NF Excipients,Listed by Categories,p.2404-2406,USP 24NF 19,United States Pharmacopeial Convention Inc.，Rockville,Md.(ISBN 1-889788-03-1)。藥學(xué)上可接受的賦形劑，例如載劑、佐劑、載體、或稀釋劑大眾可輕易取得。此外，藥學(xué)可接受的輔助物質(zhì)，例如pH調(diào)整劑及緩沖劑、張力調(diào)整劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑及諸如此類大眾可輕易取得。
適宜的載體包括(但不限于)水、葡萄糖、海藻糖、組氨酸、甘油、生理食鹽水、乙醇、及其組合。該載體可包含額外的輔劑，例如潤濕劑或乳化劑、pH緩沖劑、或促進(jìn)該配方的效果的佐劑。外用的載體包括液體石油、十六酸異丙脂、聚乙二醇、乙醇(95％)、聚氧乙烯單月桂酸酯(polyoxyethylene monolaurate)(5％)于水中的溶液、或月桂基硫酸鈉(sodium lauryl sulfate)(5％)于水中的溶液。視需要可添加其它材料，例如抗氧化劑、保濕劑、黏度安定劑、及相似劑。也可包括透皮促進(jìn)劑(percutaneous penetration enhancer)，例如月桂氮酮(Azone)。
用于制備這些劑型的實際方法對本領(lǐng)域技術(shù)人員是已知的，或是顯然的。所投用的組合物或配方，不論在何情況下，包含足以在接受治療的個體內(nèi)達(dá)到所需狀態(tài)的劑量。
根據(jù)某些實施例，本發(fā)明的去整合蛋白變異體可借由在水性或非水性溶劑，例如植物或其他相似的油、合成的脂肪酸甘油酯、較高脂肪酸的酯類、或丙二醇內(nèi)溶解、懸浮或乳化而調(diào)配成供注射用的制劑，并如需要，可添加現(xiàn)有添加物，例如助溶劑、等張劑、懸浮劑、乳化劑、穩(wěn)定劑及防腐劑。也可使用如本技術(shù)領(lǐng)域中所現(xiàn)有的其它以口服或注射方式遞送的配方。
在醫(yī)藥劑型中，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以以其藥學(xué)上可接受鹽類的形式投藥，或其也可單獨使用或適當(dāng)?shù)嘏c其它具藥學(xué)活性的化合物聯(lián)合與組合。該組合物根據(jù)可能的投藥方式的形態(tài)來調(diào)配。在一較佳實施例中，該醫(yī)藥組合物調(diào)配成以注射的方式投藥，例如調(diào)配成供注射的液體形式。
治療方法
本發(fā)明也關(guān)于對有需求的個體使用該去整合蛋白變異體來治療及/或預(yù)防與一或多種選自由α5β1、αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6及αvβ8所組成的群組的整合蛋白相關(guān)的疾病。這些疾病包括但不限于骨質(zhì)酥松癥、骨腫瘤或骨癌生長及與其相關(guān)的癥狀、血管新生相關(guān)的腫瘤生長及轉(zhuǎn)移、骨骼中的腫瘤轉(zhuǎn)移、惡性腫瘤引起的高血鈣癥、血管新生相關(guān)的眼部疾病、派杰氏癥(Paget’s disease)、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、及退化性關(guān)節(jié)炎。該方法包含對該有治療需求的個體投予一有效治療劑量的醫(yī)藥組合物，包含本發(fā)明的去整合蛋白變異體及藥學(xué)上可接受載體。
在本發(fā)明的一實施例中，本發(fā)明的去整合蛋白變異體用于治療及/或預(yù)防一血管新生相關(guān)的眼部疾病，其包括但不限于老年性黃斑病變、糖尿病視網(wǎng)膜病變、角膜神經(jīng)血管增生病變、局部缺血導(dǎo)致的神經(jīng)血管增生視網(wǎng)膜病變、高度近視、及早熟性視網(wǎng)膜病變。
在本發(fā)明的另一實施例中，本發(fā)明的去整合蛋白變異體用于治療及/或預(yù)防一血管新生相關(guān)的疾病，包括但不限于癌癥、眼部相關(guān)疾病、例如黃斑部退化、水腫。
在另一實施例中，本發(fā)明的去整合蛋白變異體與存在于眼角膜的αv-整合蛋白(αvβ5、αvβ6、及αvβ8)結(jié)合，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化生長因子β(TGFβ)的活化以治療相關(guān)疾病。這些疾病包括眼部疾病、關(guān)節(jié)炎及癌癥。在另一方面，該發(fā)明的多勝肽一抗血管新生藥物，用于緩解關(guān)節(jié)炎疼痛并預(yù)防因這些疾病引起且具破壞性血管所造成的關(guān)節(jié)損壞。證據(jù)也證實該發(fā)明的多勝肽與現(xiàn)有化學(xué)療法或放射性療法結(jié)合時，可同時通過不同策略成為有用攻擊癌癥的“多重彈頭”方法的一部分。
在本發(fā)明的又另一實施例中，本發(fā)明的去整合蛋白變異體用于治療及/或預(yù)防骨質(zhì)酥松癥。骨質(zhì)酥松癥與選自由以下所組成的群組的病理狀態(tài)有關(guān)：停經(jīng)后雌激素不足、續(xù)發(fā)性骨質(zhì)酥松癥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、卵巢切除、派杰氏癥、骨癌、骨腫瘤、退化性關(guān)節(jié)炎、蝕骨細(xì)胞形成增加、蝕骨細(xì)胞活性增加。此外，該骨質(zhì)酥松癥包括但不限于卵巢切除引起的骨質(zhì)酥松癥或骨質(zhì)流失、及停經(jīng)后骨質(zhì)酥松癥或骨質(zhì)流失。
本發(fā)明的又另一實施例是一利用該去整合蛋白變異體于治療及/或預(yù)防在哺乳類(包括人類)中因卵巢切除或停經(jīng)后骨質(zhì)酥松癥所引起的病理性變化的方法。該方法包括對該有需要的哺乳類投予有效治療劑量的分離多勝肽、或其藥學(xué)上可接受的鹽類，其相較于野生型去整合蛋白具有對整合蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、或α5β1受器的拮抗活性，及實質(zhì)上降低對整合蛋白αIIbβ3受器的阻斷活性，因此可治療及/或預(yù)防哺乳類動物因卵巢切除所引起的生理變化。
在另一方面，本發(fā)明提供一用于抑制血小板凝集的方法，包含對一有這些治療需求的個體投予有效量的本發(fā)明的去整合蛋白變異體或本發(fā)明的醫(yī)藥組成物。
本發(fā)明的去整合蛋白變異體可通過全身性注射，例如通過靜脈注射；或通過注射或施加至相關(guān)位點，例如通過直接注射、或當(dāng)該位點在手術(shù)中暴露時直接施加至該位點；或舉例而言，如果該疾病位于皮膚上，可通過局部施用而投予至一有治療需求的個體。
本發(fā)明的去整合蛋白變異體可作為單一藥物治療?；蛘撸景l(fā)明的去整合蛋白變異體可與標(biāo)準(zhǔn)方案結(jié)合使用以治療整合蛋白相關(guān)疾病。舉例而言，本發(fā)明的多勝肽可與具有效治療劑量的一種或多種其它藥劑一并使用。較佳的，另一藥劑選自由以下所組成的群組：抗癌藥劑、抗發(fā)炎藥劑、免疫調(diào)整藥劑及抗骨質(zhì)酥松藥劑。較佳的，抗癌藥劑選自由以下所組成的群組：抗血管新生藥劑、細(xì)胞毒性藥劑及抗腫瘤藥劑。其它藥劑可以在本發(fā)明的勝肽投予之前、同時、或之后投予。
在一些實施例中，本發(fā)明的去整合蛋白變異體對于對抗與高度表現(xiàn)造骨蛋白(osteopontin)有關(guān)的癌癥特別有效。在較佳實施例中，本發(fā)明的多勝肽可抑制造骨蛋白所引起的腫瘤入侵。
去整合蛋白變異體可以多種方式投予，包括經(jīng)口、口腔、鼻腔、直腸、腸胃外、腹膜、皮內(nèi)、經(jīng)皮、皮下、靜脈、動脈、心內(nèi)、心室內(nèi)(intraventricular)、顱內(nèi)、氣管內(nèi)、及脊髓投藥等，或除此之外可通過植入或吸入方式投藥。
以下本發(fā)明的實例為進(jìn)一步說明本發(fā)明的本質(zhì)。應(yīng)了解以下實例并非用以限制本發(fā)明，且本發(fā)明的保護(hù)范圍由前述權(quán)利要求書來界定。
實例
實例1：表現(xiàn)野生型Rho及Rho突變種(去整合蛋白變異體)的表現(xiàn)載體的建構(gòu)
編碼Rho的脫氧核醣核酸(DNA)是由在畢赤酵母(Pichia pastoris)中優(yōu)先使用的密碼子所組成。Rho DNA通過聚合酶連鎖反應(yīng)(PCR)與具有EcoR1辨認(rèn)區(qū)(recognition site)以及編碼六個組氨酸殘基以用于促進(jìn)純化的正股引子(sense primer)5’-GAATTCGAATTCCATCATCATCATCATCATCATGGTAAGGAATGTGACTGTTCT-3’(SEQ ID NO：183)放大。反股引子(antisense primer)具有5’-CCGCGGCCGCGGTCAGTGGTATCTTGGACAGTCAGC-3’(SEQ ID NO：180)或5’-CCGCGGCCGCGGTTAGTGGTATCTTGGACAGTCAGC-3’(SEQ ID NO：184)序列，包含Sac II辨認(rèn)區(qū)及TCA(或TTA)終止密碼子。純化PCR產(chǎn)物然后接合(ligate)至酵母菌重組載體(pPICZαA)的Eco R1及Sac II區(qū)。該重組質(zhì)體用來轉(zhuǎn)殖(transform)DH5α菌株，且以低鹽溶菌肉湯(LB)(在pH 7.0下1％胰化蛋白、0.5％酵母菌萃取物、0.5％氯化鈉、1.5％瓊脂)及25微克/毫升(μg/ml)抗生素吉歐霉素(Zeocin)在瓊脂平板上篩選群落。
編碼Rho的突變體的多種DNA構(gòu)成物(DNA construct)是通過利用重疊寡核苷酸策略的PCR與含有EcoRI及SacII限制酶切位點的引子來合成及放大。為了說明目的，表2列出一些去整合蛋白變異體的共通序列，及根據(jù)本發(fā)明的實施例用于建構(gòu)這些變異體的引子，其中引子序列以5’至3’呈現(xiàn)(左至右)。
鑒于本公開內(nèi)容，編碼包含于本發(fā)明的其它變異體的表現(xiàn)載體已經(jīng)用相似的方式建構(gòu)或可用相似的方式建構(gòu)。多種用于合成或確認(rèn)去整合蛋白變異體的引子列于SEQ ID NO：180至305。
實例2 Rho突變體的表現(xiàn)及純化
在Pichia pastoris中馬來亞蝮素突變體及變異體的蛋白質(zhì)表現(xiàn)是根據(jù)稍微修飾的Pichia EasyCompTM套組操作說明進(jìn)行。簡言之，含有編碼馬來亞蝮素或去整合蛋白的變異體的DNA的共10微克質(zhì)體以SacI酵素作用后將形成線性質(zhì)體。Pichia菌株X33通過熱休克方法，使用來自的EasyCompTM套組將線性質(zhì)體轉(zhuǎn)殖到Pichia基因體。該轉(zhuǎn)殖株通過單一交叉在5’AOX1基因座整合。使用PCR擴(kuò)增技術(shù)分析轉(zhuǎn)殖的Pichia菌株以確定Rho基因是否已整合入該Pichia基因體，且菌株通過酶解酶(Lyticase)(Sigma)溶解。群落在含有酵母浸出蛋白胨葡萄糖(YPD)(1％酵母菌萃取物、2％蛋白胨、2％葡萄糖、及2％瓊脂)及100微克/毫升吉歐霉素的瓊脂平板上篩選。為了挑選表現(xiàn)最高去整合蛋白的變異體的群落，篩選若干具多復(fù)本去整合蛋白插入的群落。
重組Rho突變體如下制造：經(jīng)篩選的群落是在30℃下含有100微克/毫升吉歐霉素的YPD培養(yǎng)基(1％酵母菌萃取物、2％蛋白胨、及2％葡萄糖)中生長。48小時后，通過離心收集細(xì)胞及在1升的最小甲醇培養(yǎng)基(含有1.34％具硫酸銨不具氨基酸的酵母菌氮基底及4x10-5％生物素)中生長。每24小時添加一次總共1％的甲醇以引發(fā)Rho或變異體的表現(xiàn)，歷時2天。通過離心收集上清液并以5升的緩沖液A(5mM EDTA、8M尿素、10mM鈉-磷酸鹽緩沖液、pH 7.7)透析。該最終溶液裝入鎳-螯合管柱且以200mM咪唑(imidazole)的梯度洗滌。通過HPLC(反相C18HPLC)進(jìn)一步純化該重組馬來亞蝮素及去整合蛋白的變異體。經(jīng)純化的去整合蛋白的重組變異體，通過tricine-SDS-PAGE判斷，具有大于95％的純度。
表2用于建構(gòu)Rho及Rho變異體的引子的說明
實例3通過抑制細(xì)胞黏附實驗分析Rho突變種對不同αv整合蛋白及α5β1整合蛋白的選擇性
Rho突變體及變異體的抑制活性通過如前所述的細(xì)胞黏著抑制實驗來評估(Zhang等人，1998J Biol Chem 73：7345-7350)。CHO-αIIbβ3細(xì)胞至血纖維蛋白原、CHO-αvβ3細(xì)胞至血纖維蛋白原、K562細(xì)胞至纖網(wǎng)蛋白(fibronectin)、HT-29細(xì)胞至玻璃黏結(jié)蛋白及HT-29細(xì)胞至纖網(wǎng)蛋白的黏結(jié)用來測定受試蛋白對整合蛋白αIIbβ3、αvβ3、α5β1、αvβ5及αvβ6的抑制活性。簡言之，96-孔Immulon-2微量滴定板(Costar，紐約州康寧市(Corning,NY))以含有50至500nM的上述基質(zhì)蛋白的100微升經(jīng)磷酸鹽緩沖生理食鹽水(PBS：10mM磷酸鹽緩沖液，0.15M氯化鈉、pH 7.4)涂覆，且在4℃下過夜培養(yǎng)?；|(zhì)及其涂覆濃度血纖維蛋白原(Fg)200微克/毫升、玻璃黏結(jié)蛋白(Vn)50微克/毫升及纖網(wǎng)蛋白(Fn)25微克/毫升。實驗中具非專一性蛋白質(zhì)的結(jié)合作用通過在每個孔中加入200微升的熱變性1％牛血清白蛋白(BSA)(Calbiochem)在室溫下共同培養(yǎng)1.5小時來阻斷，之后去除熱變性BSA且以200微升的PBS清洗每個孔兩次。
表現(xiàn)整合蛋白αvβ3(CHO-αvβ3)及αIIbβ3(CHO-αIIbβ3)的CHO細(xì)胞由Y.Takada博士(斯克里普斯學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)(Scripps Research Institute))所提供且保存于DMEM中。人類紅血球性白血病K562及結(jié)腸直腸腺癌HT-29細(xì)胞購自ATCC且培養(yǎng)于含有5％FCS的洛斯維-帕克紀(jì)念研究所(Roswell Park Memorial Institute,RPMI)-1640培養(yǎng)基中。在含有1mM EDTA的PBS緩沖液中清洗收獲的K562及HT-29細(xì)胞，且在含有1mM MgSO4、2mM CaCl2及500μM MnCl2的臺氏緩沖液(Tyrode’s buffer)(150mM NaCl、5mM KCl、及10mM Hepes，pH7.35)中再懸浮。稀釋細(xì)胞(CHO、K562、及HT-29)至3x105細(xì)胞/毫升，且100微升的該細(xì)胞用于該實驗。添加Rho及其突變體至經(jīng)培養(yǎng)細(xì)胞且在37℃、5％CO2下培養(yǎng)15分鐘。Rho及其變異體作為抑制劑在0.001至500μM下使用。然后將該經(jīng)處理細(xì)胞添加進(jìn)該經(jīng)涂覆盤并在37℃、5％CO2下反應(yīng)1小時。之后去除該培養(yǎng)溶液，且通過以200微升的PBS清洗兩次來移除未黏著細(xì)胞。
通過結(jié)晶紫染色法計量黏結(jié)細(xì)胞。簡言之，以100微升的10％福爾馬林固定該孔10分鐘并干燥。然后添加50微升的0.05％結(jié)晶紫進(jìn)入該孔在室溫下20分鐘。以200微升的蒸餾水清洗每個孔四次并干燥。染色通過添加150微升的染色溶液(50％酒精及0.1％乙酸)達(dá)成。吸亮度的結(jié)果在600納米吸收光譜下讀取，且該讀取值對應(yīng)黏結(jié)細(xì)胞的數(shù)量。抑制被定義為％抑制＝100–[OD600(Rho野生型或去整合蛋白處理的樣品)/OD600(未處理的樣品)]x100。
IC50被定義為抑制50％由特定整合蛋白所調(diào)節(jié)的細(xì)胞黏結(jié)所需的去整合蛋白變異體濃度(nM)。因此，具較低的IC50的去整合蛋白變異體表示其在抑制各自的整合蛋白的細(xì)胞黏結(jié)活性中具有較好的專一性與活性效力，因此去整合蛋白變異體對該各自的整合蛋白有較高的結(jié)合活性(或選擇性)。IC50的結(jié)果總結(jié)如下述表3至14。
一系列涉及RGD環(huán)區(qū)域(R50XD、48XRGD、ARGD52XP、ARGDM53X、46X47XPRGD、及ARGD51X52X)、連接符區(qū)域(39X40X41X42X43X)及C-端區(qū)域(66X67X68X69X70X、66XLYG、D67XY)的Rho突變體重組地表現(xiàn)及純化至一致性。使用細(xì)胞黏結(jié)及血小板凝集實驗測定其整合蛋白-結(jié)合親合力。已發(fā)現(xiàn)，馬來亞蝮素的變異體或在這些區(qū)域具一個或多個修飾的去整合蛋白對αvβ3、αvβ5、αvβ6、α5β1及αIIbβ3具有不同的選擇性結(jié)合親合力(表3至14)。
舉例而言，已發(fā)現(xiàn)在RXD結(jié)構(gòu)區(qū)域(motif)具有某些突變的Rho變異體，其中，該“Gly50(G)”殘基被Leu(L)、Val(V)、Ile(I)、Glu(E)、Asp(D)、Gln(Q)、Phe(F)、Trp(W)、His(H)、Lys(K)、或Arg(R)取代，依以下順序具有其最高的對整合蛋白效果：αIIbβ3(～1686倍)>α5β1(～586倍)>αvβ5(～348倍)>αvβ6(～179倍)>αvβ3(～26倍)，顯示其對αvβ3的結(jié)合選擇性(表3)。在XRGD結(jié)構(gòu)區(qū)域具有突變的Rho變異體，其中該P48殘基被其他氨基酸取代，依以下順序具有其最高的對整合蛋白效果：α5β1(～71倍)>αIIbβ3(～41倍)>αvβ3(～5倍)(表4)。在ARGDXP結(jié)構(gòu)區(qū)域具有突變的Rho變異體，其中該M52殘基被其他氨基酸取代，依以下順序具有其最高的對整合蛋白效果：αIIbβ3(～209倍)>α5β1(～122倍)>αVβ3(～14倍)(表5)。在ARGDMX結(jié)構(gòu)區(qū)域具有突變的Rho變異體，其中該P53殘基被其他氨基酸取代，依以下順序具有其最高的對整合蛋白效果：αIIbβ3(～258倍)>α5β1(～45倍)>αVβ3(～40倍)(表6)。在XXPRGD結(jié)構(gòu)區(qū)域具有突變的Rho變異體，其中，該R46及I47殘基是被其他氨基酸取代，依以下順序具有其最高的對整合蛋白效果：αIIbβ3(～73倍)>α5β1(～19倍)>αVβ3(～10倍)(表7)。這些結(jié)果顯示在RGD環(huán)中的突變在整合蛋白αIIbβ3及α5β1中展現(xiàn)對抑制活性的顯著影響，但對αVβ3整合蛋白則否。
馬來亞蝮素的突變體或具有除RGD結(jié)構(gòu)區(qū)域外的一個或多個修飾(例如在連接符區(qū)域或C-端中)的去整合蛋白展現(xiàn)選擇性結(jié)合至αVβ3、αVβ5、αVβ6、α5β1、或αIIbβ3的能力(表8至14)。舉例而言，在連接符區(qū)域(39X40X41X42X43X)具有突變的Rho變異體，其中，該SRAGK被KKKRT、KKART、MKKGT、IEEGT、MKEGT、AKKRT、KAKRT、KKART、KKKAT、KKKRA、KAKRA及SKAGT氨基酸取代，依以下順序具有其最高的對整合蛋白效果：αIIbβ3(～2倍)>α5β1(～5倍)>αVβ3(～14倍)(表8)。這些結(jié)果顯示在Rho連接符區(qū)域的突變展現(xiàn)在整合蛋白αVβ3中對抑制活性的顯著影響。
在C-端區(qū)域(66X67X68X69X70X)具有突變的Rho變異體，其中，該RYH被RYH、RNGL、RGLYG、RGLY、RDLYG、RDLY、RNGLYG、及RNPWNG氨基酸取代，依以下順序具有其最高的對整合蛋白效果：αIIbβ3(～13倍)>αVβ5(～8倍)＝αVβ6(～8倍)>αVβ3(～4倍)>α5β1(～2倍)(表9)。這些結(jié)果顯示在Rho的C-端區(qū)域的突變展現(xiàn)在整合蛋白αIIbβ3、αVβ5、αVβ6中對抑制活性的顯著影響。
在C-端區(qū)域66XLYG具有突變的Rho變異體，其中該殘基66位置被G、P、R、K、Y、D及E氨基酸取代，依以下順序具有其最高的對整合蛋白效果：αIIbβ3(～6493倍)>α5β1(～40倍)>αvβ5(～8倍)>αvβ6(～6倍)>αvβ3(～1倍)，顯示其對整合蛋白αIIbβ3及α5β1的顯著影響(表10)。
通過修飾去整合蛋白(Rho)的RGD環(huán)區(qū)域、連接符區(qū)域及C-端區(qū)域，成功地得到對整合蛋白αvβ3及α5β1具專一性的去整合蛋白(Rho)變異體。舉例而言，突變體39KKART-46ARGRGDNP-66DLYG展現(xiàn)良好的對整合蛋白αvβ3及α5β1抑制活性，但對αIIbβ3、αvβ5及αvβ6則無(表11)。在RGD環(huán)及連接符區(qū)域中的突變提高其在抑制整合蛋白αvβ3及α5β1的活性，且顯著地降低其在抑制整合蛋白αIIbβ3的活性。在C-端區(qū)域中的突變降低其在抑制整合蛋白αvβ5及αvβ6的活性。
通過修飾去整合蛋白(Rho)的RGD環(huán)區(qū)域、連接符區(qū)域及C-端區(qū)域，成功地得到對整合蛋白αvβ3、αvβ5、及α5β1具專一性的去整合蛋白(Rho)變異體。舉例而言，突變體39KKART-46ARARGDDL-66GLYG展現(xiàn)優(yōu)異的對整合蛋白αvβ3、αvβ5及α5β1抑制活性，但對αIIbβ3及αvβ6則無(表12)。在連接符區(qū)域中SRAGK變成KKART的突變提高其在抑制RGD-結(jié)合整合蛋白的活性。在RGD環(huán)中R46A、I47R、P48A、M52D、及P53L突變降低其在抑制整合蛋白αIIbβ3及αvβ6的活性。在C-端區(qū)域中66RYH變成66GLYG的突變降低其在抑制整合蛋白αIIbβ3的活性。
通過修飾去整合蛋白(Rho)的RGD環(huán)區(qū)域、連接符區(qū)域及C-端區(qū)域，成功地得到對整合蛋白αvβx及α5β1具專一性的去整合蛋白(Rho)變異體。舉例而言，突變體39KKART-46ARGRGDNP-66DLYG展現(xiàn)優(yōu)異的對整合蛋白αvβ3及α5β1抑制活性，但對αIIbβ3、αvβ5、及αvβ6則無(表11)。在RGD環(huán)及連接符區(qū)域中的突變提高其在抑制整合蛋白αvβ3及α5β1的活性，且顯著地降低其在抑制整合蛋白αIIbβ3的活性。在C-端區(qū)域中的突變降低其在抑制整合蛋白αvβ5及αvβ6的活性。
實例4 Rho突變體對抑制血小板凝集活性測試
也測試去整合蛋白(Rho)變異體抑制通過αIIbβ3調(diào)節(jié)的血小板凝集的能力。收集來自至少兩星期未接受任何藥物治療的健康捐贈者的靜脈血樣品，以9(靜脈血)：1(3.8％檸檬酸鈉)比例混合。以150x g離心血液樣品10分鐘，離心后靜置5分鐘吸取上清液以得到富血小板血漿(platelet-rich plasma,PRP)。再通過2000x g離心25分鐘，自剩余血液中的上清液吸取貧血小板血漿(platelet-poor plasma,PPP)。血小板凝集的計算在血液分析儀上測量且被稀釋至250,000血小板/微升。在Hema Tracer 601血小板凝集計中，在37℃下培養(yǎng)190微升的PRP及10微升的Rho或PBS緩沖液的溶液5分鐘。進(jìn)一步添加10微升的200μM二磷酸腺苷(ADP)以通過光透射監(jiān)測血小板凝集反應(yīng)。血小板凝集的抑制結(jié)果總結(jié)于下述表3至14。
表3：RXD去整合蛋白變異體對整合蛋白的選擇性及對血小板凝集的抑制能力
表4：XRGD去整合蛋白變異體對整合蛋白的選擇性及對血小板凝集的抑制能力
表5：ARGDXP去整合蛋白變異體對整合蛋白的選擇性及對血小板凝集的抑制能力
表6：ARGDMX去整合蛋白變異體對整合蛋白的選擇性及對血小板凝集的抑制能力
表7：XXPRGD去整合蛋白變異體對整合蛋白的選擇性及對血小板凝集的抑制能力
表8：具突變型RGD環(huán)、突變型連接符及/或突變型C-端的去整合蛋白變異體對整合蛋白的選擇性及對血小板凝集的抑制能力
表9：具突變型C-端的去整合蛋白變異體對整合蛋白的選擇性及對血小板凝集的抑制能力
表10：9KKART-46ARGRGDNP-65PXLYG去整合蛋白變異體對整合蛋白的選擇性及對血小板凝集的抑制能力
表11：去整合蛋白變異體對整合蛋白αvβ3及α5β1的專一性
表12：去整合蛋白變異體對整合蛋白αvβ3、αvβ5、及α5β1的專一性
表13：去整合蛋白變異體對整合蛋白αvβx及α5β1的專一性
表14：突變?nèi)フ系鞍走B接符、RGD環(huán)、及C-端中的一或多者區(qū)域?qū)φ系鞍走x擇性及對血小板凝集的抑制能力
實例5去整合蛋白變異體及野生型馬來亞蝮素抑制人類黑色素瘤細(xì)胞遷移的能力
細(xì)胞遷移培養(yǎng)盤(transwell filter)在使用前于含有DMEM的血清中平衡2小時。添加含有10％FBS的DMEM至細(xì)胞遷移培養(yǎng)盤的下方隔室。在100毫升不含血清的DMEM中，每個細(xì)胞遷移培養(yǎng)盤上方加入2x104個A375人類黑色素瘤細(xì)胞。細(xì)胞在37℃、5％CO2下遷移6小時，且接著通過在室溫下將該細(xì)胞遷移培養(yǎng)盤浸入甲醇中15分鐘來固定。添加馬來亞蝮素、AR-NP蛋白(共通序列見表13)、或PBS緩沖液入上腔中。以水清洗細(xì)胞遷移培養(yǎng)盤一次，且在20％甲醇/水中以0.2％結(jié)晶紫溶液染色10分鐘。以棉花棒將細(xì)胞自細(xì)胞遷移培養(yǎng)盤膜的上表面移除。自每張膜上五個隨機(jī)范圍中，以200倍放大倍率計算轉(zhuǎn)移至膜的下表面的細(xì)胞。
本研究中Rho蛋白、AR-NP蛋白、或PBS緩沖液的抑制活性如圖2所示。簡言之，AR-NP蛋白明顯地抑制A375人類黑色素瘤細(xì)胞的遷移。
實例6：去整合蛋白變異體在基質(zhì)膠血管新生實驗(Matrigel Angiogenesis Assay)中抑制血管新生能力
皮下注射含有VEGF(100納克/毫升)的基質(zhì)膠及肝素(24至26U/ml)至B6小鼠。為量化血紅素或組織學(xué)，5天后回收、秤重及處理該膠。血紅素的計算以德瑞金(Drabkin)試劑套組525(Sigma)測量。組織學(xué)分析中，以4％聚甲醛中固定該基質(zhì)膠團(tuán)塊，并包埋在石蠟中；通過標(biāo)準(zhǔn)程序以蘇木精-伊紅染色4微米的切面。
皮下注射含有VEGF(150納克)及肝素(30IU)的部分(300微升)MATRIGELTM(碧帝實驗室(Becton Dickinson Lab.))至6周至8周齡的C57BL/6小鼠的背部。該MATRIGELTM快速地形成基質(zhì)膠。24小時后靜脈投予一次AR-NP蛋白(1毫克/公斤)或ARLDDL蛋白(1毫克/公斤)(共通序列見表13)。5天后，取出及拍攝該基質(zhì)膠(上部分圖)。通過以德瑞金方法及德瑞金試劑套組525(Sigma)(B&C)測量基質(zhì)膠的血紅素，做為血管形成的指示來量化新生血管。分析顯示當(dāng)在5天血管新生期間只注射一次藥物時，AR-NP蛋白較ARLDDL蛋白更有效。見圖3。
實例7：利用早熟性視網(wǎng)膜病變(ROP)的高氧/常氧-誘發(fā)模式測量去整合蛋白變異體抑制血管新生的能力
暴露一周齡的C57BL/6J小鼠或ICR小鼠及其母親至75％±2％氧氣維持5天(高氧)，接著回到常氧的環(huán)境維持另外5天(高氧期間：P7至P12)以誘發(fā)相對低氧的環(huán)境，且接著進(jìn)一步在室內(nèi)空氣中住7天(低氧-誘發(fā)血管新生期間：P12至P19)。在第12天通過玻璃體內(nèi)途徑投予AR-NP蛋白(1皮克(pg))，且在第19天犧牲小鼠。未暴露的控制組動物養(yǎng)在室內(nèi)空氣中。動物保持在一衡定在21±1℃的溫度及12小時光-暗循環(huán)下。氧氣濃度以血氧計測量。在氧氣暴露(第12天)結(jié)束及回到常氧的環(huán)境后5天(第17天)，犧牲實驗小鼠，且以新生血管及內(nèi)皮細(xì)胞評估視網(wǎng)膜血管新生。
本研究的結(jié)果顯示于圖4中，分析顯示AR-NP蛋白顯著地降低在老鼠模式的視網(wǎng)膜中的血管新生。
實例8：小鼠主動脈環(huán)實驗測試去整合蛋白變異體抑制血管新生能力
解剖出8至12周齡的小鼠的主動脈環(huán)，且切成大約0.5毫米寬的環(huán)。該主動脈環(huán)固定于200毫升的基質(zhì)膠中，以由2.5％FCS補充的DMEM及具有或不具有抑制劑或控制劑的30納克/毫升的VEGF覆蓋。該實驗在CO2培養(yǎng)箱中、37℃下進(jìn)行。培養(yǎng)7天后，以4％甲醛固定該主動脈環(huán)，并以結(jié)晶紫染色。自每個環(huán)長出的芽的數(shù)目以倒立顯微鏡計算。
老鼠的主動脈環(huán)以VEGF及0.1μM AR-NP蛋白在含有100毫克/毫升纖網(wǎng)蛋白的基質(zhì)膠中的培養(yǎng)。每3天更換培養(yǎng)基。圖顯示培養(yǎng)7天后微血管的萌芽。AR-NP蛋白顯著地降低血管的萌芽(見圖5)。
實例9：去整合蛋白變異體抑制乳癌細(xì)胞群落形成能力
在圖6中的代表性影像顯示4-T1乳癌細(xì)胞群落形成實驗的結(jié)果。以培養(yǎng)基中0.35％瓊脂在上層及0.7％瓊脂在下層的形式，將4-T1乳癌細(xì)胞植入6孔盤中。每3天補充0.3毫升培養(yǎng)基。18天后，通過結(jié)晶子染色及計算來確認(rèn)每個培養(yǎng)皿中細(xì)胞群聚的數(shù)目。分析顯示，ARLDDL蛋白(0.1μM&1μM)及AR-NP蛋白(0.1μM&1μM)兩者都抑制4-T1乳癌細(xì)胞的群落形成。
實例10：去整合蛋白變異體抑制蝕骨細(xì)胞生成的能力
6至8周齡的SD大鼠是得自國研院動物中心(Animal Center of National Laboratory)且養(yǎng)在受控環(huán)境下，包括21±1℃的室內(nèi)溫度及12小時光-暗循環(huán)。動物以任意取食的普瑞納實驗室嚙齒動物飼料(Purina Laboratory Rodent Diet)及蒸餾水喂養(yǎng)。骨髓細(xì)胞通過自股骨及脛骨中移除來制備，且以由20mM HEPES及10％熱去活化的FBS、2mM麩酰胺酸、盤尼西林(100U/ml)、及鏈霉素(100克/毫升)補充的DMEM(Invitrogen，加州卡爾斯巴德(Carlsbad,California))沖洗該骨髓腔。在24小時后收集非黏著的細(xì)胞(造血細(xì)胞)且用作蝕骨細(xì)胞前驅(qū)物。細(xì)胞以1x106個細(xì)胞/孔，植入存在有人類重組可溶性RANKL(50納克/毫升)及M-CSF(20納克/毫升)的24孔盤中。每3天置換培養(yǎng)基。在第8天以TRAP染色測量蝕骨細(xì)胞的形成。簡言之，黏著細(xì)胞在PBS中以10％甲醛固定3分鐘，然后以萘酚AS-MX磷酸鹽及酒石酸鹽溶液在37℃下染色1小時。借由計算TRAP陽性及含有三個細(xì)胞核以上的多核細(xì)胞的數(shù)目，評分在每個孔中的類蝕骨細(xì)胞。
在第1天至第7天添加去整合蛋白變異體蛋白質(zhì)藥物。其中AR-NP具對抗α5β1及αvβ3整合蛋白的去整合蛋白變異體，抑制蝕骨細(xì)胞生成的IC50是3.61nM。如圖7所示，與未處理的控制組相較，AR-NP蛋白或ARLDDL蛋白都具抑制RANKL誘發(fā)的蝕骨細(xì)胞生成能力。
實例11：去整合蛋白變異體抑制神經(jīng)膠瘤細(xì)胞入侵能力
人類神經(jīng)膠瘤細(xì)胞(U251)與含有100克/毫升玻尿酸的基質(zhì)膠在上腔中培養(yǎng)。添加去整合蛋白變異體入上腔及下腔兩者中。24小時后，以結(jié)晶紫染色及計算在下腔中的細(xì)胞。如圖8所示，ARLDDL蛋白(0.1μM)及AR-NP蛋白(0.1μM)兩者都明顯地抑制神經(jīng)膠瘤細(xì)胞入侵能力。
實例12：去整合蛋白變異體AR-NP在血壓及心跳速率上的影響
血壓及心跳速率是自在異氟烷(isoflurane)麻醉下的Wistar大鼠的尾巴以非侵入方式記錄。在得到穩(wěn)定測量后自尾靜脈投予AR-NP蛋白。實驗結(jié)果顯示5毫克/公斤的AR-NP蛋白并不顯著地影響血壓及心跳速率(圖9)。一般用于藥理作用的AR-NP蛋白劑量是1毫克/公斤。
實例13：去整合蛋白變異體AR-NP抑制A375黑色素瘤生長能力
皮下注射A375腫瘤細(xì)胞(5x106個)至4至5周齡的雄性SCID小鼠的側(cè)腹中。細(xì)胞植入一周后，以AR-NP(KKART-ARGRGDNP)蛋白(2毫克/公斤，5天/周，腹腔注射)注射小鼠。每兩天測量腫瘤體積。藥物處理18天后切除腫瘤并秤重。比例尺：1公分。實驗結(jié)果顯示通過AR-NP蛋白處理后顯著地抑制腫瘤生長(見圖10)。
實例14：在K-rasG12D基因轉(zhuǎn)殖小鼠中測試去整合蛋白變異體AR-NP抑制腫瘤生長能力
以400毫克/升的脫氧羥四環(huán)素喂養(yǎng)K-RasG12D基因轉(zhuǎn)殖小鼠，以誘發(fā)肺癌。3.5周后，2毫克/公斤的AR-NP蛋白以兩天的間距腹腔注射基因轉(zhuǎn)殖小鼠，維持一個月。第15次藥物注射后兩周，犧牲小鼠。以印度墨(Indiaink)注射肺，且在費克特溶液(Fekete’s solution)中固定。計算在肺上的腫瘤團(tuán)塊的數(shù)目。**代表P值<0.001。如圖11所示，在K-rasG12D基因轉(zhuǎn)殖小鼠中，去整合蛋白變異體AR-NP蛋白具抑制肺腫瘤生長能力。
實例15：在U87腦瘤小鼠模式中測試去整合蛋白變異體AR-NP抑制腦腫瘤生長能力
NOD-SCID小鼠原來是購買及喂養(yǎng)/保持在特別的具良好控制環(huán)境(具有12小時/12小時的光/暗循環(huán)及受控制的濕度及溫度)的無病原動物飼養(yǎng)所。使用重大約22克至25克的8周至10周齡的小鼠。以得麻效/舒泰(Dexdomitor/Zoletil)(20微克/公斤/2毫克/公斤)的混合物腹腔麻醉小鼠，然后放置在立體定位架中，通過切開術(shù)將顱骨暴露。在顱內(nèi)注射前收獲U87-MG細(xì)胞，并在磷酸鹽緩沖生理食鹽水(PBS)中調(diào)整至2.5x105個細(xì)胞/微升的密度。在自前囟(Bregma)指定的坐標(biāo)使用微量注射泵及10毫升漢彌爾頓注射器(Hamilton syringe)配合30S-線規(guī)(gage)針頭，注射2微升的U87-MG腦瘤細(xì)胞至紋狀體。然后清理顱骨，以骨臘將洞封住，及縫合切口。
MRI在80微秒中以300毫特斯拉/公尺(mT/m)的主動屏蔽梯度在水平7.0特斯拉光譜儀中進(jìn)行。腫瘤的輪廓基于腫瘤及腦組織之間T2WI的比較來勾畫。使用MR視覺軟件(MR vision software)借由加總被腫瘤覆蓋的切片的腫瘤面積，計算總腫瘤體積(立方毫米)。在每個時間點隨著腫瘤體積的變化繪制生長曲線。在腫瘤植入后23天開始，一天一次，一周5天，通過小鼠尾靜脈注射5毫克/公斤去整合蛋白變異體AR-NP。如在圖12中的結(jié)果所顯示，去整合蛋白變異體AR-NP具有抑制在U87腦瘤小鼠模式中的腦腫瘤生長的能力。
雖然已詳述本發(fā)明細(xì)節(jié)，且參照其特定實施例，對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不背離期精神與范圍下可在其中作多種變化及修飾是顯然的。
SEQUENCE LISTING
<110> 莊偉哲
<120> 去整合蛋白變異體及其醫(yī)藥用途
<130> 688947-1PCT
<150> US 62/040,503
<151> 2014-08-22
<160> 336
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 68
<212> PRT
<213> 馬來亞蝮蛇
<220>
<221> 勝肽
<222> (1)..(68)
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<213> 黃綠龜殼花
<220>
<221> 勝肽
<222> (1)..(70)
<400> 2
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<212> PRT
<213> 鋸鱗蝰
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<212> PRT
<213> 龜殼花
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<212> PRT
<213> 麗紋龜殼花
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<212> PRT
<213> 赤尾鮐
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<223> RXD勝肽，在X突變
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<223> RXD勝肽，在X突變
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<223> RXD勝肽，在X突變
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<223> RXD勝肽，在X突變
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<223> RXD勝肽，在X突變
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<223> RXD勝肽，在X突變
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<223> RXD勝肽，在X突變
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<213> 人工序列
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<223> RXD勝肽，在X突變
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<223> RXD勝肽，在X突變
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<223> RXD勝肽，在X突變
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<220>
<223> RXD勝肽，在X突變
<400> 18
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Asn Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 19
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RXD勝肽，在X突變
<400> 19
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Gln Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 20
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RXD勝肽，在X突變
<400> 20
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Asp Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 21
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RXD勝肽，在X突變
<400> 21
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Glu Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 22
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RXD勝肽，在X突變
<400> 22
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg His Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 23
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RXD勝肽，在X突變
<400> 23
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Lys Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 24
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RXD勝肽，在X突變
<400> 24
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Arg Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 25
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGD勝肽，在X突變
<400> 25
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 26
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGD勝肽，在X突變
<400> 26
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Asp
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 27
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGD勝肽，在X突變
<400> 27
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Glu
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 28
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGD勝肽，在X突變
<400> 28
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Val
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 29
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGD勝肽，在X突變
<400> 29
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Leu
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 30
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGD勝肽，在X突變
<400> 30
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ile
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 31
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGD勝肽，在X突變
<400> 31
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Met
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 32
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGD勝肽，在X突變
<400> 32
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 33
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGD勝肽，在X突變
<400> 33
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ser
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 34
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGD勝肽，在X突變
<400> 34
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Thr
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 35
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGD勝肽，在X突變
<400> 35
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Asn
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 36
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGD勝肽，在X突變
<400> 36
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Gln
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 37
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGD勝肽，在X突變
<400> 37
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Arg
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 38
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGD勝肽，在X突變
<400> 38
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Lys
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 39
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGD勝肽，在X突變
<400> 39
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile His
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 40
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGD勝肽，在X突變
<400> 40
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Phe
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 41
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGD勝肽，在X突變
<400> 41
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Tyr
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 42
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGD勝肽，在X突變
<400> 42
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Trp
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 43
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDXP勝肽，在X突變
<400> 43
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 44
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDXP勝肽，在X突變
<400> 44
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asp Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 45
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDXP勝肽，在X突變
<400> 45
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Glu Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 46
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDXP勝肽，在X突變
<400> 46
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Leu Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 47
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDXP勝肽，在X突變
<400> 47
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Val Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 48
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDXP勝肽，在X突變
<400> 48
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Ile Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 49
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDXP勝肽，在X突變
<400> 49
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Lys Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 50
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDXP勝肽，在X突變
<400> 50
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Ala Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 51
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDXP勝肽，在X突變
<400> 51
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Ser Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 52
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDXP勝肽，在X突變
<400> 52
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Thr Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 53
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDXP勝肽，在X突變
<400> 53
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 54
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDXP勝肽，在X突變
<400> 54
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Gln Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 55
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDXP勝肽，在X突變
<400> 55
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Trp Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 56
<211> 67
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDXP勝肽，在X突變
<400> 56
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ala Arg
35 40 45
Gly Asp Tyr Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys Pro
50 55 60
Arg Tyr His
65
<210> 57
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDXP勝肽，在X突變
<400> 57
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Phe Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 58
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDXP勝肽，在X突變
<400> 58
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp His Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 59
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RXGDXP勝肽，在X突變
<400> 59
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Arg Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 60
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDXP勝肽，在X突變
<400> 60
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Gly Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 61
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDXP勝肽，在X突變
<400> 61
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Pro Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 62
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDMX，在X突變
<400> 62
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Asn Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 63
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDMX，在X突變
<400> 63
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Gln Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 64
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDMX，在X突變
<400> 64
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Asp Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 65
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDMX，在X突變
<400> 65
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Glu Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 66
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDMX，在X突變
<400> 66
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met His Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 67
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDMX，在X突變
<400> 67
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Arg Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 68
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDMX，在X突變
<400> 68
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Lys Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 69
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDMX，在X突變
<400> 69
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Gly Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 70
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDMX，在X突變
<400> 70
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Leu Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 71
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDMX，在X突變
<400> 71
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Trp Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 72
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDMX，在X突變
<400> 72
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Phe Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 73
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDMX，在X突變
<400> 73
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Tyr Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 74
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDMX，在X突變
<400> 74
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Met Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 75
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDMX，在X突變
<400> 75
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Ala Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 76
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDMX，在X突變
<400> 76
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Ile Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 77
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDMX，在X突變
<400> 77
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Val Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 78
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRGDMX，在X突變
<400> 78
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Thr Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 79
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXPRGD，在X突變
<400> 79
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Arg Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 80
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXPRGD，在X突變
<400> 80
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Met Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 81
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXPRGD，在X突變
<400> 81
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Val Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 82
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXPRGD，在X突變
<400> 82
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ala Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 83
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXPRGD，在X突變
<400> 83
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Gln Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 84
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXPRGD，在X突變
<400> 84
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Glu Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 85
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXPRGD，在X突變
<400> 85
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Phe Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 86
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXPRGD，在X突變
<400> 86
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Pro Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 87
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXPRGD，在X突變
<400> 87
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Lys Arg Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 88
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXPRGD，在X突變
<400> 88
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Lys Lys Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 89
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXPRGD，在X突變
<400> 89
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Lys Met Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 90
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXPRGD，在X突變
<400> 90
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Lys Ile Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 91
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXPRGD，在X突變
<400> 91
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Phe Ile Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 92
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXPRGD，在X突變
<400> 92
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Gln Ile Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 93
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXPRGD，在X突變
<400> 93
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Ala Ile Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 94
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXPRGD，在X突變
<400> 94
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Glu Ile Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 95
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRXDXP，在X突變
<400> 95
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Glu Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 96
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRXDXP，在X突變
<400> 96
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Arg
35 40 45
Arg Gly Asp Glu Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 97
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRXDXP，在X突變
<400> 97
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Leu Asp Glu Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 98
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRXDXP，在X突變
<400> 98
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Arg
35 40 45
Arg Leu Asp Glu Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 99
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRXDXP，在X突變
<400> 99
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Gln Asp Glu Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 100
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRXDXP，在X突變
<400> 100
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Arg
35 40 45
Arg Gln Asp Glu Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 101
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XRXDXP，在X突變
<400> 101
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Arg
35 40 45
Arg Gln Asp Ser Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 102
<211> 70
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PRGDMP-PRXXXXX，在X突變
<400> 102
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Trp Asn Asp Leu
65 70
<210> 103
<211> 70
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PRGDMP-PRXXXXX，在X突變
<400> 103
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Arg Phe His
65 70
<210> 104
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PRGDMP-PRXXXXX，在X突變
<400> 104
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Arg Phe His Ala
65 70
<210> 105
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PRGDMP-PRXXXXX，在X突變
<400> 105
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Pro Trp Asn Gly
65 70
<210> 106
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PRGDMP-PRXXXXX，在X突變
<400> 106
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 107
<211> 69
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PRGDMP-PRXXXXX勝肽，在X突變
<400> 107
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Gly Leu Tyr Gly
65
<210> 108
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> KKKRT-XRXDXP勝肽，在X突變
<400> 108
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Lys Arg Thr Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Leu Asp Asp Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 109
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> KKKRT-XRXDXP勝肽，在X突變
<400> 109
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Lys Arg Thr Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Met Asp Asp Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 110
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> KKKRT-XRXDXP勝肽，在X突變
<400> 110
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Lys Arg Thr Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Pro Asp Asp Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 111
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> KKKRT-XRXDXP勝肽，在X突變
<400> 111
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Lys Arg Thr Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Leu Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 112
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> KKKRT-XRXDXP勝肽，在X突變
<400> 112
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Lys Arg Thr Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Leu Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 113
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> KKKRT-XRXDXP勝肽，在X突變
<400> 113
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Lys Arg Thr Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Leu Asp Asp Val Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 114
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> KKKRT-XRXDXP勝肽，在X突變
<400> 114
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Lys Arg Thr Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Leu Asp Asp Leu Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 115
<211> 66
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ARGDMP-PRXXXXX勝肽，在X突變
<400> 115
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg
65
<210> 116
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ARGDMP-PRXXXXX勝肽，在X突變
<400> 116
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 117
<211> 69
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ARGDMP-PRXXXXX勝肽，在X突變
<400> 117
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu
65
<210> 118
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ARGDMP-PRXXXXX勝肽，在X突變
<400> 118
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Pro Trp Asn Gly
65 70
<210> 119
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ARGDMP-PRXXXXX勝肽，在X突變
<400> 119
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 120
<211> 69
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 120
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Tyr Leu Tyr Gly
65
<210> 121
<211> 69
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 121
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Glu Leu Tyr Gly
65
<210> 122
<211> 69
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 122
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asp Leu Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Gly Leu Tyr Gly
65
<210> 123
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 123
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 124
<211> 69
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 124
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Gly Leu Tyr Gly
65
<210> 125
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 125
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Leu Asp Asp Leu Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 126
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 126
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Asp Asp Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 127
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 127
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Lys Arg Thr Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 128
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 128
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 129
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 129
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Lys Arg Thr Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 130
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 130
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Arg Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 131
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 131
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Lys Arg Thr Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 132
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 132
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Lys Arg Thr Ile Cys Arg Arg Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 133
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 133
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Lys Arg Thr Ile Cys Arg Arg Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 134
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 134
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Met Lys Lys Arg Thr Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 135
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 135
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ile Glu Glu Gly Thr Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 136
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 136
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Gly Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 137
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 137
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Leu Lys Glu Gly Thr Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 138
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 138
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ala Lys Lys Arg Thr Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 139
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 139
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Ala Lys Arg Thr Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 140
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 140
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 141
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 141
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Lys Ala Thr Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 142
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 142
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Lys Arg Ala Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 143
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 143
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
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20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Ala Lys Arg Ala Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 144
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 144
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
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20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Lys Ala Gly Thr Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 145
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 145
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
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20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Arg Ala
35 40 45
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50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 146
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
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20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
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50 55 60
Pro Gly Leu Tyr
65
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<211> 69
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 147
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
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Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
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50 55 60
Pro Asp Leu Tyr Gly
65
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<211> 69
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 148
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
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20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Lys Leu Tyr Gly
65
<210> 149
<211> 69
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 149
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Leu Tyr Gly
65
<210> 150
<211> 69
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 150
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
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20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asp Leu Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Gly Leu Tyr Gly
65
<210> 151
<211> 70
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 151
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
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20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Arg Ile Ala
35 40 45
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50 55 60
Asp Cys Pro Arg Tyr His
65 70
<210> 152
<211> 69
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 152
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Gly Leu Ala Gly
65
<210> 153
<211> 69
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 153
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Gly Leu Pro Gly
65
<210> 154
<211> 69
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 154
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Gly Leu Arg Gly
65
<210> 155
<211> 69
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 155
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Gly Leu Asp Gly
65
<210> 156
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 156
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
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Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Asp Gly Tyr
65
<210> 157
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 157
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Asp Lys Tyr
65
<210> 158
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 158
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
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50 55 60
Pro Asp His Tyr
65
<210> 159
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 159
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Asp Glu Tyr
65
<210> 160
<211> 69
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 160
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Pro Leu Tyr Gly
65
<210> 161
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 161
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Asp Leu Tyr
65
<210> 162
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突
<400> 162
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Asp Leu Gly
65
<210> 163
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 163
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Asp Leu Glu
65
<210> 164
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 164
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Asp Leu Lys
65
<210> 165
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 165
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Asp Leu His
65
<210> 166
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 166
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Lys Arg Thr Ile Cys Arg Arg Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 167
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 167
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
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Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Lys Arg Thr Ile Cys Ala Ile Ala
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50 55 60
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65
<210> 168
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 168
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Lys Arg Thr Ile Cys Ala Arg Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 169
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 169
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Lys Arg Thr Ile Cys Ala Arg Ala
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 170
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 170
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr His
65
<210> 171
<211> 70
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 171
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Trp Asn Asp Leu
65 70
<210> 172
<211> 70
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 172
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Arg Phe His
65 70
<210> 173
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 173
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Pro Phe His Ala
65 70
<210> 174
<211> 69
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 174
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Trp Asn Gly
65
<210> 175
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 175
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys Ala Arg Gly
35 40 45
Arg Gly Asp Asn Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
65 70
<210> 176
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 176
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Ala Arg Tyr His
65
<210> 177
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 177
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Ala Tyr His
65
<210> 178
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 178
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Ala His
65
<210> 179
<211> 68
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XXXXX-ICXXXRGDXP-XXXXX勝肽，在X突變
<400> 179
Gly Lys Glu Cys Asp Cys Ser Ser Pro Glu Asn Pro Cys Cys Asp Ala
1 5 10 15
Ala Thr Cys Lys Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Gly Glu Gly Leu Cys
20 25 30
Cys Glu Gln Cys Lys Phe Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys Arg Ile Pro
35 40 45
Arg Gly Asp Met Pro Asp Asp Arg Cys Thr Gly Gln Ser Ala Asp Cys
50 55 60
Pro Arg Tyr Ala
65
<210> 180
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 180
ccgcggccgc ggtcagtggt atcttggaca gtcagc 36
<210> 181
<211> 12
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 181
agaggtgaca tg 12
<210> 182
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 182
catgtcacct ctaccgattc tac 23
<210> 183
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 183
gaattcgaat tccatcatca tcatcatcat ggtaaggaat gtgactgttc t 51
<210> 184
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 184
ccgcggccgc ggttagtggt atcttggaca gtcagc 36
<210> 185
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 185
catgtcacct ctcaagattc tac 23
<210> 186
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 186
catgtcacct cttctgattc tac 23
<210> 187
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 187
catgtcacct ctaacgattc tac 23
<210> 188
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 188
catgtcacct ctatggattc tac 23
<210> 189
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 189
catgtcacct ctccagattc tac 23
<210> 190
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 190
catgtcacct ctaaagattc tac 23
<210> 191
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 191
tgtagaatcg ctagaggtga catg 24
<210> 192
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 192
catgtcacct ctagcgattc taca 24
<210> 193
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 193
catgtcacct ctagagattc tac 23
<210> 194
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 194
catgtcacct ctcatgattc tac 23
<210> 195
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 195
catgtcacct ctagtgattc tac 23
<210> 196
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 196
catgtcacct ctgttgattc tac 23
<210> 197
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 197
catgtcacct ctttggattc tac 23
<210> 198
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 198
catgtcacct ctgtagattc tac 23
<210> 199
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 199
catgtcacct ctaatgattc tac 23
<210> 200
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 200
catgtcacct ctcttgattc tac 23
<210> 201
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 201
catgtcacct ctttcgattc tac 23
<210> 202
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 202
catgtcacct ctatcgattc tac 23
<210> 203
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 203
gtagaatccc aagagctgac atgcc 25
<210> 204
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 204
gtagaatccc aagaagagac atgcc 25
<210> 205
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 205
gtagaatccc aagaaacgac atgcc 25
<210> 206
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 206
gtagaatccc aagagatgac atgcc 25
<210> 207
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 207
gtagaatccc aagagaagac atgcc 25
<210> 208
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 208
gtagaatccc aagacaagac atgcc 25
<210> 209
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 209
gtagaatccc aagaaaggac atgcc 25
<210> 210
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 210
gtagaatccc aagaatggac atgcc 25
<210> 211
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 211
gtagaatccc aagatttgac atgcc 25
<210> 212
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 212
gtagaatccc aagaccagac atgcc 25
<210> 213
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 213
gtagaatccc aagatctgac atgcc 25
<210> 214
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 214
gtagaatccc aagaactgac atgcc 25
<210> 215
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 215
gtagaatccc aagatgggac atgcc 25
<210> 216
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 216
gtagaatccc aagagttgac atgcc 25
<210> 217
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 217
gtagaatccc aagatacgac atgcc 25
<210> 218
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 218
tcttgggatt ctac 14
<210> 219
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 219
gaatcccaag acttgacatg ccag 24
<210> 220
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 220
ctggcatgtc aagtcttggg attc 24
<210> 221
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 221
agaatcccaa gacacgacat gccagac 27
<210> 222
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 222
gtctggcatg tcgtgtcttg ggattct 27
<210> 223
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 223
agaatcccaa gaatcgacat gccagac 27
<210> 224
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 224
gtctggcatg tcgattcttg ggattct 27
<210> 225
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 225
caagaggtga caacccagac gacag 25
<210> 226
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 226
caagaggtga cgacccagac gacag 25
<210> 227
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 227
caagaggtga cggtccagac gacag 25
<210> 228
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 228
caagaggtga ctggccagac gacag 25
<210> 229
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 229
caagaggtga cttcccagac gacag 25
<210> 230
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 230
caagaggtga caaaccagac gacag 25
<210> 231
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 231
caagaggtga cctgccagac gacag 25
<210> 232
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 232
caagaggtga cgcaccagac gacag 25
<210> 233
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 233
caagaggtga cgaaccagac gacag 25
<210> 234
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 234
tagaggtgat agaccaga 18
<210> 235
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 235
tagaggtgat tctccaga 18
<210> 236
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 236
tagaggtgat gttccaga 18
<210> 237
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 237
tagaggtgat actccaga 18
<210> 238
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 238
tagaggtgat attccaga 18
<210> 239
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 239
tagaggtgat caaccaga 18
<210> 240
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 240
tagaggtgat ccaccaga 18
<210> 241
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 241
tagaggtgat catccaga 18
<210> 242
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 242
tagaggtgat tacccaga 18
<210> 243
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 243
ccgcggccgc ggttaaccgt acaaaccgtt tcttggacag tc 42
<210> 244
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 244
ttcaagaaga agagaactat ctgcagaatc 30
<210> 245
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 245
ctcttcttct tgaacttaca ttg 23
<210> 246
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 246
tctagagctg gtaagatctg tagacgc 27
<210> 247
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 247
accagctcta gagaatctac attg 24
<210> 248
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 248
gctaagaaga gaact 15
<210> 249
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 249
agttctcttc ttagcgaact tacattg 27
<210> 250
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 250
gctaagagaa ctatc 15
<210> 251
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 251
gatagttctc ttagccttga acttaca 27
<210> 252
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 252
gctactatct gcaga 15
<210> 253
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 253
tctgcagata gtagccttct tcttgaa 27
<210> 254
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 254
gctatctgca gaatc 15
<210> 255
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 255
gattctgcag atagctctct tcttctt 27
<210> 256
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 256
ggtactatct gcaga 15
<210> 257
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 257
gcagatagta ccagccttag agaacttaca 30
<210> 258
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 258
gcagatagta ccttcttcga tgaacttaca ttg 33
<210> 259
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 259
gcagatagta ccttccttca agaacttaca ttg 33
<210> 260
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 260
gcagatagta cccttcttca tgaacttaca ttg 33
<210> 261
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 261
aagttcaagg ctaagagagc tatc 24
<210> 262
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 262
agccttgaac ttaca 15
<210> 263
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 263
ggtgctggta agatctgcag aatc 24
<210> 264
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 264
cttaccagca cccttgaact taca 24
<210> 265
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 265
gctatcccaa gaggt 15
<210> 266
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 266
tcttgggatg ccagatc 17
<210> 267
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 267
actatctgcg ctatcgcaag 20
<210> 268
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 268
agcgcagata gttctc 16
<210> 269
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 269
actatctgcg ctagagcaag agg 23
<210> 270
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 270
agcgcagata gttctc 16
<210> 271
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 271
gacgaaccag acgacagatg 20
<210> 272
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 272
gtctggttcg tcacctct 18
<210> 273
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 273
gtctggttcg tcccatct 18
<210> 274
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 274
gtctggttcg tcctttct 18
<210> 275
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 275
gactctccag acgacagatg 20
<210> 276
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 276
gtctggagag tcttgtct 18
<210> 277
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 277
atcaagcaag gtgacatg 18
<210> 278
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 278
gtcaccttgc ttgattct 18
<210> 279
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 279
gatccagacg acagatg 17
<210> 280
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 280
gtcgtctgga tcatccaatc ttgcgcgtct ac 32
<210> 281
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 281
gtcgtctgga tcatccattc ttgcgcgtct ac 32
<210> 282
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 282
gtcgtctgga tcatctggtc ttgcgcgtct ac 32
<210> 283
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 283
acatctgtcg tctggcatat ccaatcttg 29
<210> 284
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 284
acatctgtcg tctgggttat ccaatcttg 29
<210> 285
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 285
acatctgtcg tcaacatcat ccaatc 26
<210> 286
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 286
gacgacagat gtac 14
<210> 287
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 287
ctatctgtag aatcgcaag 19
<210> 288
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 288
gattctacag atag 14
<210> 289
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 289
aagatctgta gaagaccaag agg 23
<210> 290
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 290
aagatctgta gagctccaag agg 23
<210> 291
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 291
aagatctgta gagttccaag agg 23
<210> 292
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 292
aagatctgta gaatgccaag agg 23
<210> 293
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 293
aagatctgta gaccaccaag agg 23
<210> 294
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 294
aagatctgta gagaaccaag agg 23
<210> 295
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 295
aagatctgta gacaaccaag agg 23
<210> 296
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 296
aagatctgta gatttccaag agg 23
<210> 297
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 297
tctacagatc ttac 14
<210> 298
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 298
ggtaagatct gtaagagacc aagagg 26
<210> 299
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 299
ggtaagatct gtaagattcc aagagg 26
<210> 300
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 300
ggtaagatct gtaagatgcc aagagg 26
<210> 301
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 301
ggtaagatct gtaagaagcc aagagg 26
<210> 302
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 302
ggtaagatct gtgaaatccc aagagg 26
<210> 303
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 303
ggtaagatct gtcaaatccc aagagg 26
<210> 304
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正股引子
<400> 304
ggtaagatct gttttatccc aagagg 26
<210> 305
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反股引子
<400> 305
acagatctta ccag 14
<210> 306
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變連接符
<400> 306
Lys Lys Lys Arg Thr Ile Cys
1 5
<210> 307
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變連接符
<400> 307
Met Lys Lys Gly Thr Ile Cys
1 5
<210> 308
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變連接符
<400> 308
Ile Glu Glu Gly Thr Ile Cys
1 5
<210> 309
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變連接符
<400> 309
Lys Gly Ala Gly Lys Ile Cys
1 5
<210> 310
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變連接符
<400> 310
Leu Lys Glu Gly Thr Ile Cys
1 5
<210> 311
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變連接符
<400> 311
Ala Lys Lys Arg Thr Ile Cys
1 5
<210> 312
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變連接符
<400> 312
Lys Ala Lys Arg Thr Ile Cys
1 5
<210> 313
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變連接符
<400> 313
Lys Lys Ala Arg Thr Ile Cys
1 5
<210> 314
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變連接符
<400> 314
Lys Lys Lys Ala Thr Ile Cys
1 5
<210> 315
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變連接符
<400> 315
Lys Lys Lys Arg Ala Ile Cys
1 5
<210> 316
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變連接符
<400> 316
Lys Ala Lys Arg Ala Ile Cys
1 5
<210> 317
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變連接符
<400> 317
Ser Lys Ala Gly Thr Ile Cys
1 5
<210> 318
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變連接符
<400> 318
Lys Lys Lys Arg Thr Ile Cys
1 5
<210> 319
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變C-端
<400> 319
Pro Arg Trp Asn Asp Leu
1 5
<210> 320
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變C-端
<400> 320
Pro Arg Asn Pro Trp Asn Gly
1 5
<210> 321
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變C-端
<400> 321
Pro Arg Asn Arg Phe His
1 5
<210> 322
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變C-端
<400> 322
Pro Arg Asn Arg Phe His Ala
1 5
<210> 323
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變C-端
<400> 323
Pro Arg Asn Gly Leu Tyr Gly
1 5
<210> 324
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變C-端
<400> 324
Pro Gly Leu Tyr Gly
1 5
<210> 325
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變C-端
<400> 325
Pro Gly Leu Tyr
1
<210> 326
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變C-端
<400> 326
Pro Asp Leu Tyr Gly
1 5
<210> 327
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變C-端
<400> 327
Pro Pro Leu Tyr Gly
1 5
<210> 328
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變C-端
<400> 328
Pro Arg Leu Tyr Gly
1 5
<210> 329
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變RGD
<400> 329
Arg Ile Ala Arg Gly Asp Asn Pro
1 5
<210> 330
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變RGD
<400> 330
Arg Arg Ala Arg Gly Asp Asn Pro
1 5
<210> 331
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變RGD
<400> 331
Ala Arg Gly Arg Gly Asp Asn Pro
1 5
<210> 332
<211> 7
<212> PRT
<213> 馬來亞蝮蛇
<400> 332
Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys
1 5
<210> 333
<211> 8
<212> PRT
<213> 馬來亞蝮蛇
<400> 333
Arg Ile Pro Arg Gly Asp Met Pro
1 5
<210> 334
<211> 4
<212> PRT
<213> 馬來亞蝮蛇
<400> 334
Pro Arg Tyr His
1
<210> 335
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 335
Ala Arg Gly Asp Met Pro
1 5
<210> 336
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 突變連接符
<400> 336
Ser Arg Ala Gly Lys Ile Cys
1 5
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