本申請要求于2014年9月30日提交的美國臨時申請序列號62/057,981的優(yōu)先權，其全部內容通過引用并入本文。
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提供了使用特異性結合人CD28的域抗體治療自身免疫疾病、例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡的方法。序列表參考序列表以電子方式提交，并通過引用并入本文。背景系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種慢性進行性自身免疫疾病，特征是多效性(pleiotropic)的器官/組織累及和臨床表現(xiàn)。疾病的進展不時被復燃(flare)所打斷，復燃根據(jù)其定義要求修改療法。不受控制的SLE會導致終末器官損害，并增加發(fā)病率和死亡率。臨床表現(xiàn)是多樣化的，并且通常在單個患者中累及許多器官和組織。最常見的目標組織是皮膚(典型的臉頰斑或稱蝴蝶斑)、關節(jié)和腎臟，但實際上任何器官和組織均可成為目標。自身抗體，例如抗雙鏈脫氧核糖核酸(抗dsDNA)或抗核抗體(ANA)，幫助了人們定義SLE的自身免疫性質。然而，這些自身抗體不是特異病征性的。SLE由于多效臨床表現(xiàn)和特異性自身抗體的缺乏，是最典型的非器官特異性自身免疫疾病。美國風濕病學會(ACR)已經(jīng)開發(fā)了一組11個因素的SLE診斷指南。這種診斷和監(jiān)測疾病進展的固有復雜性妨礙了新治療的驗證。導致SLE的整個致病級聯(lián)是復雜的，尚未完全定義，盡管其在臨床上有多方面的表現(xiàn)。不過，現(xiàn)在已經(jīng)普遍認可T細胞在SLE中具有關鍵作用。SLE以高反應性T細胞、自身抗體的過度產生、以及和抗原呈遞細胞(APC)的超活化為特征。SLE患者中的自身抗體(特別是抗核抗體和抗dsDNA抗體)依賴于由共刺激分子和細胞因子所提供的T細胞輔助。除了提供B細胞輔助之外，T細胞可以直接浸潤關節(jié)、皮膚、腎臟和大腦，通過細胞毒作用間接引起或通過巨噬細胞和嗜中性粒細胞的募集和活化間接引起損傷。來自SLE患者的淋巴細胞顯示活化增加的跡象；例如，表達CD25的CD4+T細胞的百分比增加，CD19+B細胞上CD86的表達亦增加。增加的CD86表達被認為使(自身反應性)B細胞更易受T細胞輔助的影響，從而易化自身抗體產生。與此觀察結果一致的是，活化的B細胞的數(shù)量和抗dsDNA抗體的水平隨著疾病活動度(diseasedactivity)增加。此外，源自SLE患者的外周血單核細胞的外周血樹突狀細胞(DC)和DC顯示出CD86的表達增加，并且SLE患者中CD86/CD80的比例高于健康供體。與CD86不同，在狼瘡患者中CD4+和CD8+T細胞上的CD28表達似乎變化更大。無論CD28表達的水平如何，來自SLE患者的T細胞對抗CD28介導的活化似乎更易響應，并且與正常對照相比，具有活動性疾病的患者具有增加的CD28的基因表達。CTLA4(共抑制分子)在來自SLE患者的T細胞中也增加，但這似乎不支配異常T細胞活化?？傊?，這些數(shù)據(jù)表明CD28-CD86/CD80途徑在SLE患者中觀察到的缺陷性免疫應答中發(fā)揮中心作用。目前，SLE患者根據(jù)疾病的嚴重程度用抗瘧藥、CS例如口服潑尼松、和免疫抑制藥物如MTX、AZA、霉酚酸酯和環(huán)磷酰胺治療。盡管皮質類固醇和免疫抑制藥物通?？捎行У貢簳r控制復燃和疾病進展，但它們的降低的效力和嚴重的不良作用顯著限制了它們的長期使用。這導致許多藥物被超標簽用于治療狼瘡患者。在過去五十年中，僅有一種用于SLE的新藥(Belimumab)得到的批準，這突顯了令人滿意的治療選項的缺乏。盡管Belimumab得到了批準，但SLE患者仍然具有非常大的醫(yī)療需求尚未得到滿足，需要新的療法以令人滿意地治療SLE。抑制CD28介導的T細胞活化可以抑制在自身免疫、移植排斥或變應性反應過程中發(fā)生的不希望的T細胞應答。例如，抑制CD28介導的T細胞活化可以延遲移植排斥，預防急性同種異體移植物排斥，誘導供體特異性耐受，并且阻止慢性同種異體移植物排斥的發(fā)生和中斷其進展，以及預防移植物抗宿主病(GVH)，即當移植的T細胞對宿主組織同種異體抗原產生激烈的免疫反應時(Salamaetal.(2001)J.Clin.Invest.108:943-48)。抑制CD28介導的T細胞活化不僅會通過消除通過CD28的活化信號傳導而抑制免疫應答，也應該不會影響CD86和CD80與CTLA4的相互作用，從而保持CTLA4介導的T細胞應答的抑制。因此，抑制CD28介導的T細胞活化可用于預防自身免疫的誘導和減輕瘡以及其它自身免疫性疾病的進展和/或嚴重度(Salomanetal.(2001)Ann.Rev.Immunol.19:225-252)。因此，本發(fā)明的目的是提供用于治療患有SLE而不刺激CD28信號通路的受試者的改進方法。概要在某些實施方案中，本發(fā)明提供在患者中治療免疫疾病的方法，包括對所述患者施用治療有效量的包含可變域的抗CD28域抗體，其中所述可變域包含SEQIDNO:12的氨基酸序列(1h-239-891(D70C))或與SEQIDNO:12相差最多5個氨基酸，其中至少一個劑量的所述抗CD28域抗體以約1.25mg至約12.5mg的劑量施用。在具體實施方案中，免疫疾病是系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)。優(yōu)選地，患者是人類患者。在某些方面，所述抗CD28域抗體以選自約1.25mg，約5mg，約12.5mg的劑量施用。例如，劑量為至少1.25mg或至少5mg。任選地，劑量為約1.25mg，約5mg或約12.5mg。任選地，劑量按每周或每兩周施用。任選地，施用至少2個劑量，其中所述至少2個劑量相同或不同。例如，施用至少12個劑量。例如，施用至少24個劑量。在某些方面，所述抗CD28域抗體的可變域包含：(1)具有SEQIDNO:1的氨基酸序列的CDR1區(qū)；(2)具有SEQIDNO:2的氨基酸序列的CDR2區(qū)；和(3)具有SEQIDNO:3的氨基酸序列的CDR3區(qū)。舉例說明，所述抗CD28域抗體包含SEQIDNO:12的氨基酸序列。任選地，所述抗CD28域抗體包含具有SEQIDNO:3的氨基酸序列的40kDa支化聚乙二醇。在某些具體實施方案中，所述抗CD28域抗體是BMS-931699。在某些方面，所述抗CD28域抗體是皮下施用的。例如，所述抗CD28域抗體配制在用于皮下施用的藥物組合物中。此外，抗CD28域抗體是靜脈內施用的。例如，所述抗CD28域抗體配制在用于靜脈內施用的藥物組合物中。在某些方面，本發(fā)明的方法還包括對患者施用免疫抑制劑/免疫調節(jié)劑和/或抗炎劑。任選地，免疫抑制劑/免疫調節(jié)劑和/或抗炎劑在所述抗CD28域抗體之前施用。任選地，免疫抑制劑/免疫調節(jié)劑和/或抗炎劑在所述抗CD28域抗體之后施用。任選地，免疫抑制劑/免疫調節(jié)劑和/或抗炎劑與所述抗CD28域抗體同時施用。包括拮抗CD28的方法，該方法包括向個體施用有效量的本文公開的抗CD28dAb。還包括拮抗CD28結合的方法，包括向個體施用有效量的本文公開的抗CD28dAb，其中所述抗CD28dAb拮抗個體中CD28與CD80和/或CD86的結合。還包括治療、減輕或預防免疫疾病(例如自身免疫疾病或移植物相關疾病)的癥狀的方法，其包括將有效量的本文公開的抗CD28dAb施用于個體，所述個體具有免疫疾病或處于免疫疾病的風險中。包括治療、減輕或預防免疫疾病的方法，包括向具有免疫疾病或處于免疫疾病的風險中的個體施用有效量的本文公開的抗CD28dAb。包括本文公開的抗CD28dAb供制備治療或預防有需要的患者的免疫疾病的藥物的用途。還包括本文公開的抗CD28dAb用于制備治療或預防有需要的患者的免疫疾病的癥狀的藥物的用途。本文還包括本文公開的抗CD28dAb用于制備藥物的用途，所述藥物用于減輕有需要的患者中的免疫疾病的至少一種癥狀。進一步提供了一種配制在用于皮下施用的藥物組合物中的抗CD28域抗體。所述藥物組合物可以進一步包含藥學上可接受的載體。所述域抗體可以皮下施用。還提供一種用于在患者中治療免疫疾病的試劑盒，該試劑盒包括：(a)一定劑量的域抗體，包括抗CD28域抗體，以及(b)在公開的方法中使用所述域抗體中的說明。附圖說明圖1顯示了BMS-931699的FDA2期平行臂，隨機，雙盲，多中心國際研究的適應性設計示意圖的第1部分。圖2顯示了BMS-931699的FDA2期平行臂，隨機，雙盲，多中心國際研究的適應性設計示意圖的第2部分。圖3顯示了長期延長(LTE)設計示意圖。圖4顯示了在穩(wěn)定狀態(tài)下12.5mg每周(QW)，12.5mg每2周(QOW)，5mg每2周(QOW)和1.25mg每2周(QOW)的BMS-931699的預期受體占據(jù)率。詳細說明本公開提供了用于拮抗CD28活性的抗CD28域抗體和使用所述域抗體治療免疫疾病，例如狼瘡的方法。該域抗體可以與聚合物連接以改善藥代動力學性質，例如穩(wěn)定性和半衰期。本文包括用于將聚合物分子(例如，聚乙二醇；PEG)連接到蛋白質上、以調節(jié)該修飾的蛋白質的藥代動力學性質的組合物和方法。例如，已經(jīng)顯示，蛋白質的PEG修飾可改變該蛋白質的體內循環(huán)半衰期、抗原性、溶解性和抗蛋白水解性(Abuchowskietal.(1977)J.Biol.Chem.,252:3578；Nuccietal.(1991)Adv.DrugDeliveryReviews6:133；Francisetal.,PharmaceuticalBiotechnologyVol.3(Borchardt,R.T.ed.)；和StabilityofProteinPharmaceuticals:invivoPathwaysofDegradationandStrategiesforProteinStabilization1991pp235-263,Plenum,NY))。所公開的域抗體，包括BMS-931699(又稱為lulizumab或1h-239-891(D70C)，其型式中具有40kDa支化聚乙二醇)，單價結合CD28，并抑制CD80和CD86與CD28——T淋巴細胞的關鍵共刺激受體——的相互作用。最終，與域抗體靶向CD28可以提供抑制導致系統(tǒng)性紅斑狼瘡(乃至其他移植物相關或自身免疫性疾病)的自身免疫過程的機會。這樣的單價域抗體還可以避免使用能夠二價或多價結合CD28的抗體時可能發(fā)生的不良作用。本文所述的域抗體也不阻斷CD80和CD86與CTLA4的相互作用。本文所述的域抗體不與CTLA4交叉反應，因此不結合CTLA4和CD28上共有的結合CD80/86的基序。因而域抗體可以為自身免疫性疾病的患者提供改善的治療益處并減少副作用。因此，域抗體提供了一種新治療模式，這種模式對現(xiàn)有的患者而言是不可得的?？紤]到所有常規(guī)治療均失敗的系統(tǒng)性紅斑狼瘡及自身免疫性疾病受試者缺乏治療選項，這種具有獨特的作用機制和已知的安全性特征的域抗體顯示出有利的風險/效益概況。1.定義根據(jù)該詳細描述，應用以下縮寫和定義。必須注意，除非上下文另外明確要求，否則本文所使用的單數(shù)形式“一”，“一個”和“該”包括復數(shù)指示物。因此，例如，提及“一個抗體”包括多個這樣的抗體，并且提及“劑量”包括提及一個或多個劑量及其為本領域技術人員已知的等同物，等等。除非另有定義，本文使用的所有技術和科學術語具有與本領域普通技術人員通常理解的相同的含義。除非另有說明，本文所述的所有范圍包括具體的端點。以下提供以下術語。如本文中使用的，“固定劑量”是不管受試者體重如何施用的劑量。如本文中使用的，術語“人”當應用于域抗體或免疫球蛋白可變域時，是指該多肽具有來源于人免疫球蛋白的序列。當序列是：a)從人個體或從人個體的細胞或細胞系分離，b)從克隆的人抗體基因序列文庫(或人抗體V域序列文庫)分離；或c)當使用克隆的人抗體基因序列(或克隆的人V區(qū)序列(包括例如種系V基因區(qū)段))產生一種或多種多樣化序列，然后從中選擇結合所需靶抗原的序列時，序列是“來源于”人免疫球蛋白編碼序列的。至少，人域抗體與天然存在的人免疫球蛋白可變域序列、例如，在Kabat(“SequencesofProteinsofImmunologicalInterest”，USDepartmentofHealthandHumanServices,1991)中公開的天然存在的人免疫球蛋白可變域序列具有至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少85％氨基酸同一性(包括例如87％，90％，93％，95％、97％，99％或更高的同一性)。如本文中使用的，術語“域”是指折疊的蛋白質結構，其獨立于蛋白質的其余部分保留其三級結構。通常，域負責蛋白質的顯著的(discrete)的功能性質，并且在許多情況下，可以添加域，去除域或將域轉移至其他蛋白質，而不喪失蛋白質和/或域的其余部分的功能?！坝蚩贵w”是指折疊的多肽域，其包含作為免疫球蛋白可變域的特征的、且特異性地結合抗原(例如，解離常數(shù)為500nM或更低)的序列。因此，“域抗體”包括完整的抗體可變域以及修飾的可變域，例如其中一個或多個環(huán)已被不是抗體可變域特征的序列替代；或者已被截短或包含N-或C-末端延伸的抗體可變域，以及可變域的折疊片段，其保留500nM或更低(例如450nM或更低，400nM或更低，350nM或更低，300nM或更低，250nM或更低，200nM或更低，150nM或更低，100nM或更低)的解離常數(shù)，以及全長域的靶抗原特異性。在必要時，或在有任何疑問的情況下，Kabat等人提出的編號規(guī)則和邊界(Kabatetal.(1991)SequencesofImmunologicalInterest,5thed.U.S.Dept.Health&HumanServices,Washington,D.C.)適用于本文中提到的免疫球蛋白可變和恒定域?！癲Ab”在本文中與“域抗體”可互換使用。本發(fā)明中使用的“域抗體”或“dAb”是指“抗CD28域抗體”。如本文中使用的，短語“作為免疫球蛋白可變域的特征的序列”是指與免疫球蛋白可變域序列中包含的序列有20個以上，25個以上，30個以上，35個以上，40個以上，45個以上，或乃至50個以上的連續(xù)氨基酸相同。與本文公開的序列相似或相同(例如，至少約70％的序列同一性)的序列也包括在本文中。如本文中使用的，術語“同一性”是指兩個核苷酸或氨基酸序列在結構上彼此相似的程度。如本文中使用的，序列“相似性”衡量氨基酸序列在序列比對中的相應位置處共享相似的氨基酸殘基的程度。若氨基酸的側鏈是相似的，則氨基酸彼此相似。具體地，“相似性”包括彼此保守取代的氨基酸。“保守”取代是在BLOSUM62取代矩陣(HentikoffandHentikoff(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:10915-10919)中具有正得分的取代。術語“序列A與序列Bn％相似”是指序列A和B之間的最佳全局比對的位置有n％是由相同的氨基酸或保守取代組成的。典型的保守取代是Met、Val、Leu和Ile之間的交換；Ser和Thr之間的交換；殘基Asp、Glu和Asn之間的交換；殘基Gln、Lys和Arg之間的交換；或芳族殘基Phe和Tyr之間的交換。如本文中使用的，術語“表位”是指被免疫球蛋白VH/VL對常規(guī)結合的結構單元。表位定義了對抗體的最小結合位點，因此代表抗體特異性的靶點。在域抗體的情況下，表位表示由域抗體在分離狀態(tài)下結合的結構單元。也就是說，結合位點由單獨一個免疫球蛋白可變域提供。表位可以是線性的或構象性的，并且可以小至三個氨基酸。如本文中使用的，“CD28活性”是涉及或緣于CD80、CD86和/或另一配體與CD28的結合的活性，包括但不限于CD28介導的細胞信號傳導的活化。CD28活性還包括T細胞增殖的誘導和T細胞對細胞因子例如白細胞介素2(IL-2)的分泌的誘導。如本文中使用的，術語“基本上不激動”是指給定的作用劑，例如域抗體，不實質活化一種或多種CD28活性，如術語“活化”在本文中定義的。具體而言，“基本上不激動”的作用劑是指作用劑不活化超過20％的被CD80和/或CD86與CD28結合所活化的活性，在一方面，該試劑不活化超過約10％，8％，5％，3％或2％或更小的被CD80和/或CD86與CD28結合活化的活性，包括零活化。作為非限制性實例，本文所述的基本上不激動CD28活性的域抗體不激動CD28活性超過抗CD28mAb9.3(Gibson,etal.(1996)JBC,271:7079-7083)在其它方面相同的測定條件下對CD28活性的激動獲得的活性的5％。如本文中使用的，術語“抑制”是指給定的可測量活性(例如，結合活性)相對于參照減少至少10％。當期望抑制時，這種抑制是至少約20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或更高，乃至且包括100％，即給定活性的完全抑制或缺無?？梢匀绫疚牡墓ぷ鲗嵤├兴龅啬菢訙y量CD28與CD80或CD86結合的抑制。如本文中使用的，術語“基本上抑制”是指相對于參照，給定的可測量活性(例如，CD28與CD80或CD86的結合)降低至少50％。例如，“基本上抑制”是指給定的可測量活性相對于參照降低至少約50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，95％，乃至且包括100％。如本文中使用的，“抑制結合”，就結合CD28的域抗體的結合，或CD80與CD28的結合，或CD86與CD28的結合而言，是指相對于參考的結合降低至少10％?！耙种平Y合”是指結合減少至少約20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或更多，乃至且包括100％。如本文中使用的，術語“活化”是指給定的可測量活性相對于參照增加至少5％，例如至少10％，25％，50％，75％，或甚至100％或更多。如本文中使用的，術語“單價”意指給定的域抗體僅可以結合其靶標的單個分子。天然存在的抗體通常是二價的，因為它們具有兩個功能性抗原結合環(huán)，每個結合環(huán)包含一個VH和一個VL域。當空間位阻不成問題時，二價抗體可以結合相同抗原的兩個分別的分子。相比之下，“單價”抗體具有僅結合一個這樣的抗原分子的能力。如該術語在本文中使用的，“單價”抗體還可以包含一個以上的抗原結合位點，例如兩個抗原結合位點，但是結合位點必須是針對不同的抗原，使得抗體一次只能結合一個CD28分子。單價抗體的抗原結合域可包含一個VH和一個VL域，但在一個方面中，僅包括一個單一的免疫球蛋白可變域，即，一個VH域或一個VL域，其具有結合CD28的能力而不需要對應的VL或VH域。單價抗體缺乏交聯(lián)單種抗原的分子的能力。如本文中所使用的，術語“VH域”和“VL域”是指由Kabat等人(Kabatetal.(1991)SequencesofImmunologicalInterest,5thed.U.S.Dept.Health&HumanServices,Washington,D.C.)定義的免疫球蛋白可變區(qū)，上述文獻通過引用并入本文。如本文中使用的，“連接”是指聚合物部分(例如PEG)與域抗體的氨基酸殘基的連接。PEG聚合物與域抗體(例如域抗體)的氨基酸殘基的連接被稱為“PEG化”，并且可以使用幾個PEG附接部分來實現(xiàn)，包括但不限于N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活性酯，琥珀酰亞胺基丙酸酯(SPA)，馬來酰亞胺(MAL)，乙烯基砜(VS)或硫醇。PEG聚合物或其它聚合物可以在預定位置與域抗體連接，或者可以隨機地連接于域抗體分子。PEG聚合物可以在預定位置與域抗體連接。PEG聚合物可以與域抗體中的任何殘基連接，然而，優(yōu)選地，聚合物連接到賴氨酸或半胱氨酸，賴氨酸或半胱氨酸天然存在于域抗體中或已經(jīng)工程構建到域抗體中，例如通過將域抗體中天然存在的殘基誘變?yōu)榘腚装彼峄蛸嚢彼?。PEG連接也可以通過連接到域抗體的肽接頭來介導。也就是說，PEG部分可以連接到與域抗體融合的肽接頭，其中接頭提供用于PEG連接的位點，例如游離半胱氨酸或賴氨酸。如本文中使用的，“連接”還可以指兩個或更多個域抗體(例如dAb單體)締合以形成二聚體，三聚體，四聚體或其它多聚體。域抗體單體可以通過本領域已知的幾種方法連接以形成多聚體，包括但不限于多個域抗體單體作為融合蛋白表達、兩個或多個單體通過單體之間的肽接頭的連接，或通過在翻譯后化學連接各單體，其中各單體直接彼此連接，或藉由二硫鍵通過接頭連接，或通過連接于二，三或多價連接部分(例如，多臂PEG)而連接。雖然本文具體考慮了dAb多聚體，例如在雙特異性或多特異性域抗體構建體的語境中，但需要強調的是，對于任何給定的域抗體構建體，構建體應當僅能夠結合一個分子的CD28，構建體應當僅具有一個CD28結合元件，而不應當交聯(lián)CD28。如本文中使用的，“聚合物”是指由重復單體單元組成的大分子，并且可以指合成或天然存在的聚合物，例如任選取代的直鏈或支化聚亞烷基，聚亞烯基或聚氧化烯聚合物或支化或非支化多糖。本文所用的“聚合物”特別指任選取代或支化的聚(乙二醇)、聚(丙二醇)或聚(乙烯醇)及其衍生物。本文所用的“PEG”或“PEG聚合物”是指聚乙二醇，更具體地可以指PEG的衍生化形式，包括但不限于PEG的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活性酯，例如琥珀酰亞胺丙酸酯，苯并三唑活性酯，用馬來酰亞胺、乙烯基砜或硫醇團衍生的PEG。例如，PEG制劑可以包括PEG-O-CH2CH2CH2-CO2-NHS；PEG-O-CH2-NHS；PEG-O-CH2CH2-CO2-NHS；PEG-S-CH2CH2-CO-NHS；PEG-O2CNH-CH(R)-CO2-NHS；PEG-NHCO-CH2CH2-CO-NHS；和PEG-O-CH2-CO2-NHS；其中R是(CH2)4)NHCO2(mPEG))。本文所述的PEG聚合物可以是直鏈分子，或可以是支化的，其中多個PEG部分存在于單一聚合物中。PEG或另一種作用劑(例如HSA)與本文所述的域抗體在示例性實施方案中的連接不會削弱多肽特異性結合CD28的能力。也就是說，相對于非PEG連接的對應物，PEG連接的域抗體將保留其結合活性。如本文中使用的，“保留活性”是指PEG連接的域抗體的活性水平為非PEG連接的域抗體的活性水平的至少10％，包括包含相同的一個或多個抗原結合域的非PEG連接的域抗體活性的至少約20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％乃至90％，包括高達約95％，98％和高達100％。更具體地，PEG-連接的域抗體與非PEG連接的域抗體相比的活性應當基于摩爾確定；即在每個試驗中應當使用等摩爾數(shù)的PEG-連接的域抗體和非-PEG-連接的域抗體。在確定特定的PEG連接的域抗體是否“保留活性”時，可以將PEG連接的域抗體的活性與在不存在PEG的情況下相同域抗體的活性進行比較。如本文中所使用的，術語“IC50”是指將給定的活性抑制約50％所需要的抑制劑的濃度。IC50是這樣測量的：在不同量的抑制劑(例如，域抗體)的存在下，測定給定的活性，例如與CD80或CD86的CD28的結合，并將抑制劑濃度對靶定的活性作圖。本文通過實施例所述的方法測量CD28與CD80或CD86的結合。或者，可以使用表面等離子體共振(SPR)。如本文所使用的，術語“EC50”是指化合物或域抗體引發(fā)受試者中的響應的濃度，其中所述響應是基線和最大響應之間一半。受試者對化合物或域抗體的基線與最大響應可以通過本領域已知的任何技術確定。如本文中使用的，術語“與域抗體融合”通常是指多肽通過使用重組DNA技術與給定抗體融合，盡管可以在蛋白質水平上發(fā)生化學的融合。因此，與另一種多肽(例如另一種具有不同結合特異性的抗體)“融合”的抗體在自然界中是不存在的，是通過重組手段產生的。術語“與域抗體融合”還包括多肽通過例如二硫鍵或其它化學聯(lián)接而與給定的域抗體連接，其中在自然界中該融合多肽不被發(fā)現(xiàn)與所述域抗體融合。將某一多肽融合到另一多肽(例如抗體)的重組和化學方法是本領域熟知的。如本文所使用的，術語“Fc域”是指包含CH2和CH3恒定域的恒定區(qū)抗體序列，所述CH2和CH3恒定域如Kabat等人(同上)所述界定。重鏈多肽的Fc部分具有自締合的能力，這種功能可促進二價抗體形成。術語“缺乏Fc域”意指給定的域抗體缺少免疫球蛋白Fc域(此類域根據(jù)Kabatetal.,1991,SequencesofImmunologicalInterest,5thed.U.S.Dept.Health&HumanServices,Washington,D.C.定義)中至少如下所述的部分：該部分足以介導含有所述Fc的域抗體的二聚化。測量含有Fc的域抗體的二聚化，例如通過色譜法或通過表面等離子體共振。缺乏Fc區(qū)域抗體的Fc避免血小板的相互作用，從而避免誘導血小板的聚集。如本文中使用的，術語“通用框架”是指這樣的單一抗體框架序列，其對應于如Kabat(Kabatetal.(1991)SequencesofImmunologicalInterest,5thed.U.S.Dept.Health&HumanServices,Washington,D.C.)所定義的抗體中序列上保守的區(qū)域、或者對應于由ChothiaandLesk,(1987)J.Mol.Biol.196:910-917所定義的人種系免疫球蛋白庫或結構。本文包括單個框架或一套這種框架的應用，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)此類應用容許通過僅在高變區(qū)中的變化而衍生出幾乎任何結合特異性。術語“約”將是本領域的普通技術人員能夠理解的，并且會因其使用的上下文中而在某種程度上有所變化。一般情況下，“約”涵蓋參考值的±10％的值的范圍。2.抗CD28域抗體本發(fā)明涉及特異性結合并抑制人CD28的域抗體(“抗CD28域抗體”)，其在涉及CD28途徑的疾病的治療中有用。因此，提供在需要這樣治療的患者中治療免疫疾病的方法，包括向患者施用治療有效量的抗CD28域抗體。提供單價結合CD28的域抗體。不希望受任何特定理論的束縛，相信對CD28的單價結合可消除像現(xiàn)有技術的抗體那樣交聯(lián)細胞表面受體的可能性。因此，在一個方面中，本文公開的域抗體不僅抑制或拮抗CD80或CD86對CD28的結合，而且基本上不激動CD28活性。在一個方面，所述結合單價CD28的抗體是人類域抗體。人類域抗體可以施用給人類患者，同時很大程度上避免其它物種，例如小鼠的抗體的施用經(jīng)常引起的抗抗體免疫應答。雖然鼠抗體可以通過嫁接人恒定域到鼠抗原結合域上而“人源化”，如本文所公開的人抗體的產生無需對鼠抗體序列的費力且耗時的遺傳操作。在某些實施方案中，域抗體可包括以下的CDR的一個或多個：CDR1：RASRPIWPFLE(SEQIDNO:1)CDR2：FTSRLRH(SEQIDNO:2)CDR3：LQNVANPAT(SEQIDNO:3)在一個實施方案中，所述抗CD28域抗體具有與SEQIDNO:1至少70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％相同的CDR1序列。在另一個實施方案中，CDR1與SEQIDNO:1相差最多5個氨基酸(例如，相差5，4，3，2，1或0個氨基酸)。在一個實施方案中，所述抗CD28域抗體具有與SEQIDNO:2至少70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％相同的CDR2序列。在另一個實施方案中，CDR2與SEQIDNO:2相差最多5個氨基酸(例如，相差5，4，3，2，1或0個氨基酸)。在一個實施方案中，所述抗CD28域抗體具有與SEQIDNO:3至少70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％相同的CDR3序列。在另一個實施方案中，CDR3與SEQIDNO:3相差最多5個氨基酸(例如，相差5，4，3，2，1或0個氨基酸)。在某些實施方案中，所述抗CD28域抗體包含與選自SEQIDNO:4-15的氨基酸序列至少70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％相同的氨基酸序列。在另一個實施方案中，抗CD28域抗體與選定的氨基酸序列相差最多5個氨基酸。例如，該域抗體與SEQIDNO:12相差最多5個氨基酸(例如，相差5，4，3，2，1或0個氨基酸)。在某些實施方案中，所述抗CD28域抗體包含選自SEQIDNO:4-15的氨基酸序列。在一個具體的實施方案中，抗CD28域抗體包含SEQIDNO:12的氨基酸序列。下面提供了抗CD28域抗體的某些示例性序列。h-239-891(SEQIDNO:4):DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPIWPFLEWYQQKPGKAPKLLIYFTSRLRHGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQNVANPATFSQGTKVEIKR1h-239-891(Q3C)(SEQIDNO:5):DICMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPIWPFLEWYQQKPGKAPKLLIYFTSRLRHGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQNVANPATFSQGTKVEIKR1h-239-891(S9C)(SEQIDNO:6):DIQMTQSPCSLSASVGDRVTITCRASRPIWPFLEWYQQKPGKAPKLLIYFTSRLRHGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQNVANPATFSQGTKVEIKR1h-239-891(R18C)(SEQIDNO:7):DIQMTQSPSSLSASVGDCVTITCRASRPIWPFLEWYQQKPGKAPKLLIYFTSRLRHGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQNVANPATFSQGTKVEIKR1h-239-891(G41C)(SEQIDNO:8):DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPIWPFLEWYQQKPCKAPKLLIYFTSRLRHGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQNVANPATFSQGTKVEIKR1h-239-891(K42C)(SEQIDNO:9):DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPIWPFLEWYQQKPGCAPKLLIYFTSRLRHGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQNVANPATFSQGTKVEIKR1h-239-891(K45C)(SEQIDNO:10):DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPIWPFLEWYQQKPGKAPCLLIYFTSRLRHGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQNVANPATFSQGTKVEIKR1h-239-891(S60C)(SEQIDNO:11):DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPIWPFLEWYQQKPGKAPKLLIYFTSRLRHGVPCRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQNVANPATFSQGTKVEIKR1h-239-891(D70C)(SEQIDNO:12):DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPIWPFLEWYQQKPGKAPKLLIYFTSRLRHGVPSRFSGSGSGTCFTLTISSLQPEDFATYYCLQNVANPATFSQGTKVEIKR1h-239-891(T74C)(SEQIDNO:13):DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPIWPFLEWYQQKPGKAPKLLIYFTSRLRHGVPSRFSGSGSGTDFTLCISSLQPEDFATYYCLQNVANPATFSQGTKVEIKR1h-239-891(Q79C)(SEQIDNO:14):DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPIWPFLEWYQQKPGKAPKLLIYFTSRLRHGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLCPEDFATYYCLQNVANPATFSQGTKVEIKR1h-239-891(K103C)(SEQIDNO:15):DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPIWPFLEWYQQKPGKAPKLLIYFTSRLRHGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQNVANPATFSQGTCVEIKR在某些具體實施方案中，抗CD28域抗體可以包含H-239-891(D70C)(SEQIDNO:543)?？笴D28域抗體可包含40kDa支化的聚乙二醇?？笴D28域抗體可以是BMS-931699。例如，BMS-931699是T細胞增殖和細胞因子產生的強力抑制劑，其EC50分別為35±14ng/mL和25±6ng/mL。BMS-908613-P40B(BMS-931699的獼猴替代品)在抑制CD80-和CD86驅動的T細胞增殖上等效。重要的是，用BMS-931699沒有觀察到激動劑或共激動劑活性，如由T細胞增殖或細胞因子釋放所確定的。在一個實施方案中，所述域抗體與CD28的結合基本上不激動CD28活性。具體地，所述dAb不激動與T細胞受體信號傳導聯(lián)合的CD28信號傳導。在另一個實施方案中，所述域抗體抑制CD28對CD80的結合。在另一個實施方案中，所述域抗體抑制CD28對CD80的結合，而基本上不激動CD28的信號傳導。在另一個實施方案中，所述域抗體抑制CD28對CD86的結合。在另一個實施方案中，所述域抗體抑制CD28對CD86的結合，而基本上不激動CD28的信號傳導。在一個方面中，所述dAb基本上不誘導與T細胞受體信號傳導聯(lián)合的T細胞的增殖。在另一個方面，所述dAb基本上不誘導與T細胞受體信號傳導聯(lián)合的T細胞細胞因子分泌。在一個實施方案中，細胞因子是選自下組中的至少一種細胞因子：GM-CSF,IL-2,IL-3,IL-4,IL-5,IL-6,IL-10,IL-12IL-13,IL-15,IL-17,IL-21,IL-22,IL-24,TGFβ,TNF-α,TNF-β,IFN-α,IFN-β,IFN-γ。在一個方面中，因為人抗體當施用人類受試者以治療或預防疾病時將避免發(fā)生對該抗體的免疫反應，所述域抗體是這樣的人域抗體，其單價地結合CD28，并且在一個示例性實施方案中，基本上不激動CD28活性。在一個實施方案中，所述域抗體與人CD28相互作用的Kd通過表面等離子體共振測量為50nM至1pM(包括端值)。例如，對人CD28的Kd可以是25nM至20pM，10nM至20pM，5nm至20pM，1nM至20pM，0.5nM至20pM，0.1nM至20pM，0.1nM至50pM，75pM至20pM，或甚至50pM至20pM。在一個實施方案中，對人CD28的Kd為約50pM。在一個實施方案中，域抗體以50nM或更低的EC50抑制CD80與CD28的結合。在一個實施方案中，域抗體以50nM或更低的EC50抑制CD86與CD28的結合。在另一個實施方案中，域抗體對CD28具有結合特異性，Koff速率常數(shù)為1×10-3s-1或更小，1×10-4s-1或更小，1×10-5s-1或更小，或1×10-6s-1或更小，如通過表面等離子體共振測定的。在一個實施方案中，域抗體在標準測定中以50nM或更小的EC50中和CD28。在另一個實施方案中，域抗體包含結合CD28的單個免疫球蛋白可變域。在一個實施方案中，單個免疫球蛋白可變域是VH或VL域。在另一個實施方案中，域抗體包含兩個可變域(例如一個VH域和一個VL域)的同源多聚體或異源多聚體，但其中一個可變域具有不需要相應的VL或VH域而結合CD28的能力。也就是說，dAb可獨立于額外的VH或VL域結合抗原。這些實施方案中的可變域可以包含三個互補決定區(qū)(CDR)。在另一個實施方案中，域抗體不含F(xiàn)c域。Fc域的界限在Kabat等人(1991，SequencesofImmunologicalInterest，第5版，U.S.Dept.Health&HumanServices，Washington，D.C；通過引用并入本文)中列出?；蛘?，F(xiàn)c域由CH2-CH3區(qū)組成，任選包括與CH2連接的鉸鏈區(qū)。在一個方面中，域抗體包含通用框架。在這個方面中，域抗體可以包含一個以上的框架區(qū)，所述框架區(qū)包含與由人種系抗體基因區(qū)段編碼的相應框架(FW)區(qū)的氨基酸序列相同的氨基酸序列，或者，相對于由人種系抗體基因區(qū)段編碼的所述相應框架區(qū)的氨基酸序列，所述一個以上的框架區(qū)的氨基酸序列總共包含最多5個，例如1、2、3、4或5個氨基酸差異。在一個實施方案中，dAb包含的FW1，F(xiàn)W2，F(xiàn)W3和FW4的氨基酸序列對應于人抗體(例如人種系抗體)的FW1，F(xiàn)W2，F(xiàn)W3和FW4。在另一個實施方案中，域抗體的FW1，F(xiàn)W2，F(xiàn)W3和FW4的氨基酸序列中的一些或全部與由人種系抗體基因區(qū)段編碼的相應框架區(qū)的氨基酸序列相同。例如，F(xiàn)W2可以與人抗體的FW2相同。在另一個實施方案中，F(xiàn)W1，F(xiàn)W2，F(xiàn)W3和FW4的氨基酸序列相對于由所述人種系抗體基因區(qū)段編碼的相應框架區(qū)的氨基酸序列總共包含最多10個氨基酸差異。在上述的另一個實施方案中，人種系抗體基因區(qū)段可以選自DP47、DP45、DP48和DPK9。在一個實施方案中，通用框架包含選自DP47、DP45和DP38的VH框架，和/或VL框架是DPK9。在一個方面，域抗體被型式化以增加其體內半衰期。特別地，域抗體相對于相同的無型式域抗體具有增加的體內t-α或t-β半衰期。在一個實施方案中，當與在其它相同條件下測定的未修飾的蛋白質相比時，域抗體組合物的tα半衰期增加10％或更多。在另一個實施方案中，域抗體組合物的tα-半衰期增加50％或更多。在另一個實施方案中，域抗體組合物的tα-半衰期增加2X或更多。在另一個實施方案中，域抗體組合物的tα-半衰期增加5X或更多，例如10X，15X，20X，25X，30X，40X，50X或更多。在另一個實施方案中，域抗體組合物的tα-半衰期增加100X，200X，300X，400X，500X或更多。在另一個實施方案中，域抗體具有0.25至6小時(包括端值)的tα半衰期。在另一個實施方案中，tα半衰期在30分鐘至12小時的范圍內(包括端值)。在另一個實施方案中，域抗體的tα半衰期在1至6小時的范圍內。在另一個實施方案中，當與在其它相同條件下測定的未修飾的蛋白質相比時，域抗體的tβ半衰期增加10％或更多。在另一個實施方案中，域抗體的tβ半衰期增加50％或更多。在另一個實施方案中，抗體域抗體的tβ半衰期增加2X或更多。在另一個實施方案中，域抗體的tβ半衰期增加5X或更多，例如10X，15X，20X，25X，30X，40X或更多。在另一個實施方案中，域抗體的tβ半衰期增加50X或更多。在另一個實施方案中，域抗體具有1小時至744小時(包括端值)的tβ半衰期。在另一個實施方案中，tβ半衰期在12至48小時的范圍內(包括端值)。在另一個實施方案中，tβ半衰期在12至26小時的范圍內(包括端值)。在另一個實施方案中，tβ半衰期為約336小時。除了上述標準之外或替代上述標準，提供了含域抗體的組合物，其包含具有在1mg·min/ml或更大范圍內的AUC值(曲線下面積)的配體。在一個實施方案中，該范圍的下限為5、10、15、20、30、100、200或300mg·min/ml。并且/或者，配體或組合物具有在高達600mg·min/ml范圍內的AUC。在一個實施方案中，該范圍的上限為500、400、300、200、150、100、75或50mg·min/ml。有利地，配體的AUC在選自下組的范圍內：15至150mg·min/ml；15至100mg·min/ml；15至75mg·min/ml；和15至50mg·min/ml。在另一個實施方案中，型式化包括dAb的PEG化。在一個實施方案中，PEG是共價連接的。在另一個實施方案中，PEG在半胱氨酸或賴氨酸殘基處與域抗體連接。在另一個實施方案中，PEG連接的域抗體具有至少24kD的流體動力學尺寸。在另一個實施方案中，總PEG大小為20至60kD，包括端值。在另一個實施方案中，PEG連接的域抗體具有至少200kD的流體動力學尺寸。在另一個實施方案中，相對于缺少連接的聚乙二醇的相同多肽組合物，PEG連接的域抗體具有增加的體內半衰期。在另一個實施方案中，域抗體組合物的tα半衰期增加10％或更多。在另一個實施方案中，域抗體組合物的tα半衰期增加50％或更多。在另一個實施方案中，域抗體組合物的tα半衰期增加2X或更多。在另一個實施方案中，域抗體組合物的tα-半衰期增加5X或更多，例如10X，15X，20X，25X，30X，40X，50X或更多。在另一個實施方案中，域抗體組合物的tα-半衰期增加100X，200X，300X，400X，500X或更多。在另一個實施方案中，PEG連接的域抗體具有0.25至6小時(包括端值)的tα半衰期。在另一個實施方案中，tα半衰期在30分鐘至12小時的范圍內(包括端值)。在另一個實施方案中，域抗體的tα半衰期在1至6小時的范圍內。在另一個實施方案中，PEG-連接的域抗體的tβ半衰期增加10％或更多。在另一個實施方案中，PEG-連接的域抗體的tβ半衰期增加50％或更多。在另一個實施方案中，PEG連接的域抗體的tβ半衰期增加2X或更多。在另一個實施方案中，PEG-連接的域抗體的tβ半衰期增加5X或更多，例如10X，15X，20X，25X，30X，40X或更多。在另一個實施方案中，PEG連接的域抗體的tβ半衰期增加50倍或更多。在另一個實施方案中，PEG連接的域抗體具有1至170小時(包括端值)的t半衰期。在另一個實施方案中，tβ半衰期在12至48小時的范圍內(包括端值)。在另一個實施方案中，tβ半衰期在12至26小時的范圍內(包括端值)。在另一個實施方案中，PEG連接的域抗體具有在1mg.min/ml或更多的范圍內的AUC值(曲線下面積)。在一個實施方案中，該范圍的下限為約5，10，15，20，30，100，200或300mg·min/ml。并且/或者，配體或組合物具有在最高高達約600mg·min/ml范圍內的AUC。在一個實施方案中，該范圍的上限為約500，400，300，200，150，100，75或50mg·min/ml。有利地，配體將具有選自以下的范圍內的AUC：約15至150mg·min/ml，約15至100mg·min/ml，約15至75mg·min/ml，約15至50mg·min/ml。dAb可以以約100nM，約50nM，約1nM，約500pM，約100pM，約50pM，約10pM，約5pM或約1pM的EC50抑制CD28與CD80和/或CD86的結合。例如，域抗體抑制CD28與CD80的結合的EC50在1pM至1.5μM的范圍內；抑制CD28與CD80結合的EC50。EC50可以在1pM至1μM，1pM至900nM，1pM至800nM，1pM至700nM，1pM至600nM，1pM至500nM，1pM至400nM1pM至300nM，1pM至200nM，1pM至100nM，1pM至50nM，1pM至10nM，1pM至1nM，1pM至500pM，1pM至100pM，1pM至50pM，1pM至10pM，或1pM至5pM的范圍內。其它可接受的范圍包括例如50pM至1μM，100pM至500nM，125pM至250nM，150pM至200nM，150pM至100nM，和200pM至50nM。在另一個實施方案中，域抗體抑制CD28與CD86的結合，其EC50在1pM至1.5μM的范圍內(包括端值)；抑制CD28與CD86結合的EC50。EC50可以在1pM至1μM，1pM至900nM，1pM至800nM，1pM至700nM，1pM至600nM，1pM至500nM，1pM至400nM，1pM至300nM，1pM至200nM，1pM至100nM，1pM至50nM，1pM至10nM，1pM至1nM，1pM至500pM，1pM至100pM，1pM至100nM，1pM至50pM，1pM至10pM，或1pM至5pM的范圍內。其它可接受的范圍包括例如50pM至1μM、100pM至500nM、125pM至250nM、150pM至200nM、150pM至100nM和200pM至50nM。域抗體可以包含一個或多個框架區(qū)，其包含與由人種系抗體基因區(qū)段編碼的相應框架區(qū)的氨基酸序列相同的氨基酸序列，或者一個或多個所述框架區(qū)的氨基酸序列相對于由人種系抗體基因區(qū)段編碼的所述相應框架區(qū)的氨基酸序列總共包含至多5個氨基酸差異。在一個實施方案中，域抗體的FW1、FW2、FW3和FW4的氨基酸序列與由人種系抗體基因區(qū)段編碼的相應框架區(qū)的氨基酸序列相同，或者FW1、FW2、FW3和FW4相對于由所述人種系抗體基因區(qū)段編碼的相應框架區(qū)的氨基酸序列總共包含至多10個氨基酸差異。在一個實施方案中，域抗體的FW1、FW2和FW3的氨基酸序列與由人種系抗體基因區(qū)段編碼的相應框架區(qū)的氨基酸序列相同。人種系抗體基因區(qū)段可以選自DP47，DP45，DP48和DPK9。3.域抗體的應用如本文所述的域抗體可用于拮抗CD28的活性。因此，如本文所述的域抗體可用于治療患有完全由或部分由CD28活性介導的狀況、疾病或病癥的患者。例如，如本文所述的域抗體可用于治療或預防涉及CD28介導的途徑的不適當激活的疾病或病癥，例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)。如本文所用，當涉及疾病的癥狀時，“治療”，“減少”，“預防”或“減輕”是指基于臨床可測量的參數(shù)，癥狀減少至少10％，或臨床上接受的疾病或癥狀嚴重程度量表上至少的一個點。如本文所用的，術語“系統(tǒng)性紅斑狼瘡的癥狀”是指SLE的本領域技術人員已知的任何臨床相關癥狀，包括但不限于BICLA(基于BILAG的復合紅斑狼瘡評估)，SRI(系統(tǒng)性紅斑狼瘡響應者指數(shù))。非限制性實例包括IgG自身抗體(例如針對核抗原例如染色質、snRNP(特別是U1，Sm，Ro/SSA和La/SSB)、磷脂和細胞表面分子的IgG自身抗體)，溶血性貧血，血小板減少癥，白細胞減少，腎小球腎炎，血管炎，關節(jié)炎和漿膜炎)?；颊叩拇祟惏Y狀的減少是與用安慰劑治療的患者相比臨床可測量參數(shù)的至少10％的減少，或臨床上接受的疾病嚴重程度量表上至少一個點的減少。在一個方面，自身免疫性疾病常常涉及CD28途徑的不適當調節(jié)或活性。向患有這種疾病(包括自身免疫疾病)的個體施用本文所述的域抗體可以減少該疾病的一種或多種癥狀。本文所述的域抗體可以用于治療的疾病的非限制性實例包括但不限于艾迪生病，變態(tài)反應，強直性脊柱炎，哮喘，動脈粥樣硬化，耳的自身免疫性疾病，眼的自身免疫性疾病，自身免疫性萎縮性胃炎，自身免疫性肝炎，自身免疫性溶血性貧血，自身免疫性腮腺炎，原發(fā)性膽汁性肝硬化，良性淋巴細胞性脈管炎，結腸炎，冠心病，克羅恩病，糖尿病(I型)，糖尿病，包括1型和/或2型糖尿病，附睪炎，腎小球腎炎，古德帕斯徹綜合征，格雷夫斯病，吉蘭巴雷綜合征，橋本氏病，溶血性貧血，特發(fā)性血小板減少性紫癜，炎性腸病(IBD)，對重組藥物產品(例如血友病中的因子VII)的免疫應答，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，狼瘡腎炎，男性不育癥，混合性結締組織病，多發(fā)性硬化，重癥肌無力，原發(fā)性粘液性水腫，天皰瘡，惡性貧血，多肌炎，銀屑病，銀屑病關節(jié)炎，風濕熱，類風濕性關節(jié)炎，結節(jié)病，硬皮病，干燥綜合征，脊椎關節(jié)病，交感性眼炎、淋巴細胞淋巴瘤，T細胞急性淋巴母細胞白血病，睪丸偏心T細胞淋巴瘤，甲狀腺炎，移植排斥，潰瘍性結腸炎，自身免疫性葡萄膜炎和血管炎。自身免疫介導的狀況包括但不限于其中受影響的組織是初級靶標，并且在一些情況下是次級靶標的狀況。這樣的狀況包括但不限于AIDS，特應性變態(tài)反應，支氣管哮喘，濕疹，麻風，精神分裂癥，遺傳性抑郁癥，組織和器官移植，慢性疲勞綜合征，阿爾茨海默病，帕金森病，心肌梗塞，癲癇，Arthus現(xiàn)象，過敏反應，酒精和藥物成癮。本文描述的域抗體還可以用于治療移植物相關疾病，如移植物抗宿主病(GVHD)、急性移植排斥和慢性移植排斥。在某些實施方案中，本發(fā)明提供了治療患者的免疫疾病的方法，包括向患者施用治療有效量的抗CD28域抗體。為了舉例說明，免疫性疾病可以是系統(tǒng)性紅斑狼瘡。與接受安慰劑的患者相比，接受抗CD28域抗體的患者可具有減少的SLE癥狀。例如，與接受安慰劑的患者相比，接受抗CD28域抗體的患者可具有更低水平的C3、C4、抗dsDNA和/或抗ANA。例如，與接受安慰劑的患者相比，接受抗CD28域抗體的患者可具有減少的關節(jié)炎癥狀。例如，與接受安慰劑的患者相比，接受抗CD28域抗體的患者可具有減少的炎癥性皮膚病癥狀。所述治療還可包括施用免疫抑制劑/免疫調節(jié)劑和/或抗炎劑。治療可以與免疫抑制劑/免疫調節(jié)劑和/或抗炎劑聯(lián)合施用。此類額外的免疫抑制/免疫調節(jié)和/或抗炎劑或療法可以包括鈣調神經(jīng)磷酸酶抑制劑，環(huán)孢菌素，環(huán)磷酰胺(cytoxan)，潑尼松，硫唑嘌呤，甲氨蝶呤，皮質類固醇，非甾體抗炎藥/Cox-2抑制劑，羥氯喹，柳氮磺吡啶，金鹽，依那西普，英夫利昔單抗，阿那白滯素，咪唑立賓，霉酚酸，霉酚酸酯，干擾素β-1a，干擾素β-1b，乙酸格拉默，鹽酸米托蒽醌和/或其它生物制劑如抗TNF。域抗體還可以與一種或多種下列試劑組合施用以調節(jié)免疫應答：CTLA4，可溶性gp39(也稱為CD40配體(CD40L)、CD154、T-BAM、TRAP)，可溶性CD29，可溶性CD40，可溶性CD80，可溶性CD86，可溶性CD56，可溶性Thy-1，可溶性CD3，可溶性TCR，可溶性VLA-4，可溶性VCAM-1，可溶性LECAM-1，可溶性ELAM-1，可溶性CD44，與gp39反應的抗體，與CD40反應的抗體，與B7反應的抗體，與CD28反應的抗體，與LFA-1反應的抗體，與LFA-2反應的抗體，與IL-2反應的抗體，與IL-12反應的抗體，與IFN-γ反應的抗體，與CD2反應的抗體，與CD48反應的抗體，與任何ICAM(例如ICAM-2)反應的抗體，與CTLA4反應的抗體，與Thy-1反應的抗體，與CD56反應的抗體，與CD3反應的抗體，與CD29反應的抗體，與TCR反應的抗體，與VLA-4反應的抗體，與VCAM-1反應的抗體，與LECAM-1反應的抗體，與ELAM-1反應的抗體，與CD44反應的抗體，針對白細胞受體，例如MHC，CD2，CD3，CD4，CD11a/CD18，CD7，CD25，CD27，B7，CD40，CD45，CD58，CD137，ICOS，CD150(SLAM)，OX40，4-1BB或其配體的單克隆抗體。當本發(fā)明的域抗體與另一免疫抑制劑/免疫調節(jié)劑或抗炎劑或治療(例如如上所述)組合施用時，可同時或按順序進行施用。當dAb與另一種藥劑(例如上文指定的藥劑)同時施用時，dAb和該藥劑可在同一藥物組合物中施用。所述治療可產生至少一種可通過選自以下的生物標志物測量的治療效應：T細胞上的CD28受體占據(jù)率，C3、C4、抗dsDNA、抗ANA、抗Ro自身抗體、抗La自身抗體、抗RNP自身抗體，抗-Sm自身抗體，抗APL自身抗體，CRP，總IgG，總IgM，全血中的RNA轉錄物，尿中的NGAL，尿中的TWEAK，尿中的MCP-1，尿中的IL-1，總可溶性CD28，T細胞活化，白細胞表面CD4，白細胞表面CD8，白細胞表面CD28，白細胞表面CD57和白細胞細胞內粒酶B，血清IL-6，血清IL-18，血清TNF-α，血清α-干擾素、血清BLyS(BAFF)，CD154，sCD28和微泡(microvessicles)。4.藥物組合物，劑量和施用本文所述的抗CD28域抗體可以摻入適合于施用于受試者的藥物組合物中。通常，藥物組合物包含域抗體和藥學上可接受的載體。如本文所用，“藥學上可接受的載體”包括任何生理上相容的溶劑、分散介質、包衣，抗細菌劑和抗真菌劑，等滲劑和吸收延遲劑等。術語“藥學上可接受的載體”排除包含?；蝰R血清的組織培養(yǎng)基。藥學上可接受的載體的實例包括水，鹽水，磷酸鹽緩沖鹽水，葡萄糖，甘油，乙醇等中的一種或多種，以及它們的組合。在許多情況下，優(yōu)選在組合物中包含等滲劑，例如糖，多元醇如甘露醇，山梨醇或氯化鈉。藥學上可接受的物質包括少量輔助物質，例如潤濕劑或乳化劑，防腐劑或緩沖劑，其增強域抗體的保存期限或有效性。如本文描述的組合物可以是各種形式。這些包括，例如，液體、半固體和固體劑型，例如液體溶液(例如，可注射和可輸注溶液)，分散體或懸浮液，粉劑，脂質體和栓劑。優(yōu)選的形式取決于意圖的施用和治療應用方式。典型的優(yōu)選組合物是可注射或可輸注的溶液，例如與那些用于以其他抗體被動免疫接種人的組合物的形式。施用的一種模式是腸胃外(例如，靜脈內、皮下、腹膜內、肌內)。治療組合物通常必須在制造和貯存的條件下是無菌和穩(wěn)定的。組合物可以配制成溶液，微乳劑，分散體，脂質體或適合于高藥物濃度的其他有序結構。無菌可注射溶液可以通過在合適的溶劑中將所需量的活性化合物與一種上述列舉的成分或上述列舉成分的組合(根據(jù)需要)合并，隨后過濾滅菌來制備。一般地，分散體通過將活性化合物摻入的無菌溶媒中來制備，其中所述無菌溶媒含有基本分散介質和來自上述列舉者的所需其它成分。對于制備無菌注射溶液用的無菌粉末，制備方法包括真空干燥和冷凍干燥，從預先無菌過濾的溶液產生活性成分加上任何其他需要的成分的粉末。溶液的適當流動性可以被保持，例如，通過使用包衣如卵磷脂，通過維持所需的顆粒大小(在分散體的情況下)和通過使用表面活性劑。本文所述的域抗體可通過多種本領域已知的方法給藥，盡管用于許多治療應用。所述多肽可以通過靜脈內(IV)、肌內(IM)或皮下(SC)注射給藥。如熟練的技術人員會理解的，施用途徑和/或模式將根據(jù)所期望的結果而變化。在某些實施方案中，活性化合物可以與會保護該化合物免于快速釋放的載體一起制備，如控釋制劑，包括植入物，和微囊化遞送系統(tǒng)。域抗體非常適合于配制成延長釋放制劑，這部分是因為它們的尺寸小，每劑的摩爾數(shù)可以顯著高于例如全尺寸的抗體的劑量?？梢允褂每缮锝到獾?、生物相容的聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯，聚酸酐，聚乙醇酸，膠原，聚原酸酯，和聚乳酸。注射組合物的延長吸收可通過在組合物中加入延遲吸收的作用劑，例如單硬脂酸鹽和明膠來實現(xiàn)。許多用于制備這樣的制劑的方法已獲得專利或者是本領域技術人員所公知的。參見，例如，SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems,J.R.Robinson,ed.,MarcelDekker,Inc.,NewYork,1978。其他可適用于多肽試劑(例如本文中公開的單價域抗體)的受控或延長釋放的方法在例如美國專利號6,306,406和6,346,274，以及，例如美國專利公開號US20020182254和US20020051808中有描述，所有文獻均通過提述并入本文用于所有目的。例如，所述域抗體可配制在用于皮下施用的藥物組合物中，該組合物可以包括藥學上可接受的載體。該藥物組合物可以進一步包含在20mM磷酸鹽，pH值5.9中的12.5mg/mLBMS-931699，含用5％(重量/體積)山梨糖醇。組合物中還可以摻入其他的活性化合物。在某些實施方案中，域抗體與一種或多種另外的治療劑共配制和/或共施用。例如，域抗體可以與一種或多種結合其他靶標的另外的抗體(例如，結合其他細胞因子或結合細胞表面分子的抗體)共配制和/或共施用，或者與一種或更多的細胞因子共配制和/或共施用。這樣的組合療法可利用所施用的治療劑的較低劑量，從而避免可能的與各種單一療法相關的毒性或并發(fā)癥。本文所公開的藥物組合物可包括域抗體的“治療有效量”或“預防有效量”。“治療有效量”是指在必要的劑量數(shù)和時程條件下有效實現(xiàn)期望的治療結果的量。域抗體的治療有效量可根據(jù)例如個體的疾病狀態(tài)、年齡、性別和體重以及域抗體在個體中引起所需反應的能力等因素而變化。治療有效量也是這樣的量，在該量下治療有益效果超過抗體或抗體部分的任何毒性或有害作用?！邦A防有效量”是指在必要的劑量數(shù)和時程條件下有效達到所需的預防結果的量。通常，因為預防劑量在疾病之前或疾病的早期階段用于受試者，故預防有效量將小于治療有效量。對劑量方案可以加以調整以提供最佳所需應答(例如，治療或預防應答)。例如，可以進行單次推注，可以經(jīng)過一段時間施用幾個分份劑量，或者可以視治療情況的緊急程度的要求按比例減少或增加劑量。有利的是，為了便于給藥和劑量的均一，將腸胃外組合物配制成單位劑型。本文使用的“單位劑型”是指物理上獨立的單位，適合作為單一劑量用于待治療的哺乳動物受試者；每個單位含有計算為產生所需治療效果的預定量的活性化合物以及所需的藥物載體。治療或預防有效量的域抗體的一個非限制性范圍為0.1-20mg/kg，在一個方面，為1-10mg/kg。例如，域抗體可以以約1.25mg至約12.5mg的劑量施用；即劑量可以為至少1.25mg，至少5mg，至少12.5mg，約1.25mg，約5mg，或約12.5mg?？梢云は率┯?.25mg至約12.5mgmg的域抗體。劑量可以按照固定的或變化的時間表施用。例如，劑量可以每周或每兩周施用。所述劑量可以根據(jù)設定的治療方案施用，例如每兩周一次持續(xù)24周(共12個劑量)或每周一次持續(xù)24周(共24個劑量)。應注意，劑量值可能取決于要緩解的病癥的類型和嚴重性而變化。應進一步理解，對于任何特定受試者，應根據(jù)個體需要和主治醫(yī)生的專業(yè)判斷隨時間調整具體劑量方案。本文所述的域抗體治療的功效由本領域技術人員基于所治療的疾病狀態(tài)或病癥的一種或多種癥狀或指標的改善來判斷。在一個以上臨床指標中至少10％的改善(增加或減少，取決于所測量的指標)被認為是“有效治療”，但更大的改善亦包括在內，例如約20％，30％，40％50％，75％，90％或甚至100％，或者根據(jù)所測量的指示物，超過100％(例如，兩倍，三倍，十倍等，直到并包括達到無疾病狀態(tài)。指標可以是物理測量，例如酶、細胞因子、生長因子或代謝物水平，細胞生長或細胞死亡的速率，或異常細胞的存在或量。還可以測量，例如，疾病或病癥的癥狀復燃(flare-up)之間的時間量的差異(例如對于緩解中或復發(fā)中的疾病，如多發(fā)性硬化而言)?；蛘?，可以依賴于非物理測量，例如報告的疼痛或不適的減輕或其他疾病狀態(tài)的指標來衡量治療的有效性。在進行非物理測量時，可以使用各種臨床可接受的量表或指數(shù)，例如克羅恩病活動指數(shù)或CDAI(Best等(1976)Gastroenterology70：439)，其將物理指標(例如作為血細胞比容和液態(tài)或極軟糞便的量)以及其他患者報告的因素(例如腹部疼痛或抽搐的嚴重程度和一般健康)相結合來指定疾病得分。如該術語在本文中所使用的，如果相對于在未用本文所述的組合物處理的相似個體(人或動物模型)中的相應癥狀，一種或多種癥狀的發(fā)作被延遲或者嚴重程度減少至少10％，或者被消除，則使用本文所述的組合物進行的“預防”是“有效的”。盡管本文所述的域抗體結合人CD28，但如果在動物模型系統(tǒng)中評價其效果，該多肽必須與動物模型系統(tǒng)中的一種或多種抗原交叉反應，在一個方面，以高親和力交叉反應。本領域技術人員可以容易地確定對于給定的動物模型系統(tǒng)和給定的域抗體是否滿足該條件。如果滿足該條件，可以通過在模擬疾病狀態(tài)的條件下將域抗體施用于動物模型，并監(jiān)測該疾病狀態(tài)的一個或多個指標是否有至少10％改善，來檢查域抗體的功效。實施例實施例1：PEG化的1h-239-891(D70C)在食蟹猴中的藥代動力學在食蟹猴中進行研究以評價用30kDa線性PEG(P30L)或40kDa支化PEG(P40B)聚乙二醇化的1h-239-891(D70C)以用0.05mg/kg和5mg/kg的單次靜脈內(IV)給藥，或以0.05、0.5、5mg/kg(mpk)的皮下(SC)給藥后的藥代動力學。表1和2分別總結了1h-239-891(D70C)-P30L和-P40B的IV和SCPK參數(shù)。對于P30L和P40BPEG型式均觀察到非線性藥代動力學。P30L和P40B的終末半衰期(T1/2)分別為1.6和2.5天。在0.05mg/kg的P30L、以及0.05和5mg/kg的P40B的SC給藥后，1h-239-891(D70C)的吸收幾乎完全(生物利用度F>90％)，但5mg/kg的P30L下降到70％。穩(wěn)態(tài)分布體積(Vss)在兩種PEG型式之間是相當?shù)摹Ｈ欢?，P40B的系統(tǒng)清除率(CL)是30L的系統(tǒng)清除率(CL)的三分之一，這大體上解釋了觀察到的這兩種型式之間AUC和T1/2的差異。例如，在0.05mg/kg下，由于終末期的藥物濃度低于定量水平(LLQ)，無法精確地測定T1/2。表1：1h-239-891(D70C)的PK參數(shù)-P30L*由于終末期的藥物濃度低于LLQ，無法準確確定表2：1h-239-891(D70C)的PK參數(shù)-P40B*由于終末期的藥物濃度低于LLQ，無法準確確定實施例2：BMS-931699替代藥理學使用替代性的識別小鼠CD28的CD28dAb，其具有類似于BMS-931699的效力，來評價在小鼠功效模型中CD28直接抑制的影響。在一個小鼠KLH抗體應答模型中，BMS1m-74-14982-P40B(BMS-931699的小鼠替代物)在小鼠中在0.1mg/kg完全阻抑了IgG滴度，其中體內EC50為18ng/mL。最大功效需要劑量后24小時～100％的CD28受體占據(jù)率(RO)。在相同的模型中，mCTLA4Ig在3mg/kg完全抑制了IgG反應，體內EC50為1656ng/mL。在NZB/NZWF1狼瘡模型中在疾病發(fā)作后(治療模式)用BMS1m-74-14982-P40B治療，可有效減少蛋白尿、血清自身抗體滴度、局部細胞因子基因表達、以及腎小球腎炎/免疫復合物沉積。大多數(shù)終點在0.5mg/kg劑量受到完全影響，而存活和抗dsDNA則需要更高的濃度，分別為2mg/kg和8mg/kg?？偟膩砜?，體外和體內研究提供了dAb技術的概念驗證，也為CD28dAb在臨床上對自身免疫性疾病的有效性提供了信心。支持BMS-931699臨床開發(fā)的非臨床安全性評估包括：1)在猴中使用BMS-908613-P40B進行的單劑量PK/PD研究，以支持最小預期生物效應水平(MABEL)劑量理論；2)在小鼠中使用BMS1m-74-14982-S60C-P40B進行的單劑量探索性毒性研究，以評估嚙齒動物模型中CD28拮抗作用的潛在毒性；3)BMS-931699在食蟹猴中的GLP1個月和6個月重復劑量毒性樞紐性研究；4)對人T細胞的潛在BMS-931699相關效應(細胞因子釋放、T細胞活化/增殖)的探索性體外研究；和5)良好實驗室操作(GLP)人組織交叉反應性研究，以證明靶點分布并提示任何潛在的非預期的表位結合。選擇食蟹猴作為毒理學物種，因為BMS-931699可與獼猴CD28相當?shù)亟Y合，在猴中具有藥理活性，并且不與嚙齒動物CD28交叉反應。已經(jīng)在體內用BMS-908613-P40B(TDAR的抑制)和用BMS-931699(各種淋巴結中皮質淋巴細胞的減少，反映生發(fā)中心活性的減少)證明了對食蟹猴的預期PD作用。在體外，BMS-931699和BMS-908613-P40B在體外混合淋巴細胞反應(MLR)測定中顯示相似的與人CD28結合的親和力和相似的效力。使用BMS-931699的嚙齒動物替代物——BMS1m-74-14982-S60C-P40B來評估小鼠中的潛在毒性可能性。在小鼠的單劑量探索性毒性研究中，BMS1m-74-14982-S60C-P40B在高達18mg/kg(AUC≤5184μg·h/mL)的SC劑量沒有任何相關的不良藥物相關所見(adversedrug-relatedfindings)。在猴的單劑量探索性PK/PD研究中，BMS-908613-P40B在高達5mg/kg(AUC≤6793μg·h/mL)的SC劑量沒有任何相關的不良藥物相關所見，包括任何對血漿細胞因子的效應。劑量≥0.5mg/kg時的BMS-908613-P40B相關效應僅限于當給藥24小時后施用KLH時，可逆且劑量依賴地阻抑針對KLH的初級TADR——這是預期之內的藥理學效應。在食蟹猴中的一項具有8周恢復期的5周間歇劑量毒性研究中，BMS-931699的高達15mg/kg的IV劑量(從0時至168小時的聯(lián)合性別平均AUC[AUC(0-168h)]≤16,700μg·hr/mL)或3.5mg/kg的SC劑量(平均AUC≤3520μg·hr/mL)，臨床上耐受性良好。值得注意的是，在所有劑量(在第22天平均值[AUC(0-168h)]≥1860μg·h/mL)的BMS-931699相關效應包括外周血調節(jié)性T淋巴細胞(Treg)的非不良性減少，淋巴結中的皮質淋巴細胞的最小到適度減少，以及各種組織中的與炎癥或壞死性改變或器官功能改變無關的最小至輕微的巨噬細胞和/或上皮細胞空泡化。淋巴結中Treg和皮層淋巴細胞的減少是預期的藥理作用，而在多種組織中的空泡化歸因于BMS-931699的PEG部分。在8周恢復期后，除了脈絡叢上皮和垂體中的空泡化之外，所有BMS-931699相關效應顯示部分到完全消退?；趪乐匦缘颓覜]有相關的炎癥或退行性變化，認為未觀察到不良反應的水平(NOAEL)是15mg/kg/周IV(第22日的平均AUC[0-168h]為15,200μg·h/mL)和3.5mg/kg/周SC(第22天日的平均AUC[0-168h]為3330μg·h/mL)。在具有6個月恢復期的6個月間歇性劑量毒性研究中，當BMS-931699作為10mg/kg的每周SC劑量(AUC[[0-168h]12,100μg·h/mL)施用時，BMS-931699在食蟹猴中臨床上良好耐受≤6個月。所有劑量下的主要BMS-931699相關所見是外周血Treg、B淋巴細胞、血清IgG和淋巴結或脾中的皮質淋巴細胞的藥理學介導的減少。由于Treg的變化是最小的、可逆的，并且不與任何其他關聯(lián)性不良結果相關，因此不將Treg的變化視為不良。在≥1mg/kg/周(AUC[0-168h]1,350μg·h/mL)下的其他非不良顯微鏡檢查所見包括巨噬細胞和/或上皮細胞在幾種組織(腦的脈絡叢、腎臟、腋窩淋巴結、和注射部位)，以及腎間質的厚度增加。在≥3.5mg/kg/周(4,450μg·h/mL的AUC[0-168h])下，注意到垂體中巨噬細胞的PEG相關的空泡化以及皮下注射部位的炎癥和出血的發(fā)生率和嚴重程度增加。其他在10mg/kg/周的所見包括在下頜和腸系膜淋巴結、腦的周室器、膀胱、卵巢、子宮以及脾中的巨噬細胞的PEG相關空泡化。所有上述所見均顯示出可逆性(部分或完全)的證據(jù)，但腎間質的厚度增加和垂體、腦的周室器、膀胱和子宮中巨噬細胞的空泡化除外。這些所見均不伴有退行性或炎癥性改變，被認為非不良性。在1mg/kg/周的1名雌性中觀察到淋巴瘤，其被認為是繼發(fā)于潛伏感染LCV的食蟹猴中BMS-931699誘導的免疫抑制；基于該所見，在本研究中未確定NOAEL。在單劑量探索性PK和PD研究、以及重復劑量猴毒性研究中，有低發(fā)生率的免疫原性出現(xiàn)。此外，抗藥物抗體(ADA)的存在未影響猴中BMS-931669的PK、PD或毒性動力學。在猴子的5周或6個月研究中，使用大于或等于人類推薦量的BMS-931699濃度和注射速率，在BMS-931699IV或SC注射部位沒有觀察到不良刺激或局部不耐受。在一種體外測定系統(tǒng)中，將純化的人T細胞與BMS-931699或超激動性抗CD28單克隆抗體(mAb)TGN5.11A1一起溫育，以監(jiān)測對T淋巴細胞活化、增殖和細胞因子釋放的潛在效應。結果沒有BMS-931699相關的影響，而TGN5.11A1誘導了細胞因子釋放和細胞激活二者。在使用23種人組織的綜合組的GLP組織交叉反應性研究中，BMS-931699的結合在大多數(shù)人組織中限于單核細胞。由于CD28主要由T細胞表達，全組人組織中的血淋巴細胞和單核細胞均被染色是預期的反應性?？傮w而言，BMS-931699已經(jīng)展現(xiàn)了可接受的藥理學、非臨床PK、PD和毒理學性質，支持繼續(xù)進行臨床開發(fā)。作為在猴中的樞紐性GLP重復劑量毒性研究的一部分，評估了IV和/或SC施用BMS-931699對心血管、中樞/外周神經(jīng)和/或呼吸系統(tǒng)的潛在影響。在猴子中5次每周IV/SC劑量、或6個月的每周IV劑量的BMS-931699之后，下述各項的臨床評估無所見：認為與BMS-931699相關的物理、神經(jīng)學和眼科檢查的結果；體溫；心率；定性和定量心電圖評估；呼吸速率；肺聲音和粘膜顏色的評價；和動脈血氧飽和度測定。實施例3：臨床前代謝和藥代動力學分別在小鼠和食蟹猴中評價BMS1m-74-14982-S60C-P40Br和BMS-908613-P40Br的PK。在靜脈內(IV)施用(小鼠中為0.2mg/kg；猴中為0.05和5mg/kg)后，循環(huán)中的BMS-1m74-14982-S60C-P40B和BMS-908613-P40B濃度顯示雙指數(shù)下降。小鼠中BMS1m-74-14982-S60C-P40B和BMS-908613-P40B的穩(wěn)態(tài)分布體積(Vss)為(0.13L/kg)，大于小鼠中報告的血漿體積，表明藥物大部分駐留在細胞外空間。然而，在猴中，BMS-908613-P40B的Vss(0.053L/kg)與報告的血漿體積相似，表明非常有限的血管外分布。小鼠中BMS-1m74-14982-S60C-P40B的血清清除率和猴中BMS-908613-P40B的血漿清除率分別為3.9mL/h/kg和0.82至1.1mL/h/kg。IV施用后的表觀消除半衰期(T-HALF)在小鼠中為27小時，在猴中為50至71小時。在單次SC施用(小鼠中為0.2mg/kg；猴中為0.05、0.5和5mg/kg)后，BMS-1m74-14982-S60C-P40B和BMS-908613-P40B被良好地吸收，生物利用度為78％(小鼠)和96至111％(猴)。峰值血漿或血清濃度(Tmax)的時間通常為約24小時(范圍＝8至36小時)。在SCPK研究(DS09012)中，BMS-908613-P40B在雌性猴中表現(xiàn)出超過劑量比例的暴露增加(在0.05、0.5和5mg/kg，峰值血漿濃度[Cmax]分別為0.335、5.0、和61.9μg/mL，并且從時間零到無窮大的濃度-時間曲線下的面積[AUC(INF)]值分別為43.4、642和6790μg*h/mL)。在隨后的猴SCPK/PD研究(DS09013)中，其中猴用卵白蛋白和KLH免疫，在雄性中觀察到0.05和5mg/kg之間的線性PK，但是，和研究DS09012中一樣，雌性中暴露有超比例增加的趨勢，而雄性中沒有。在對小鼠腹膜內施用(0.08、0.4和2mg/kg)后，BMS1m74-14982-S60C-P40Br顯示出大致與劑量成比例的暴露增加。Tmax為4-9小時。實施例4：首次人體研究：臨床藥理學與安全BMS-931699的早期臨床研究計劃包括首次人體(FIH)單遞增劑量(SAD)研究(第1部分)以及新抗原免疫SAD研究(第2部分)，隨后是多遞增劑量(MAD)研究?？偣?56名受試者參加了FIHSAD研究IM128001，包括第1部分中(單遞增劑量研究)的108名受試者和SAD第2部分(KLH免疫)中的48名受試者。共有108名受試者接受活性研究藥物，48名接受安慰劑。總地來說，BMS-931699在高達100mgIV的單次劑量后是安全的和良好耐受的。沒有死亡。沒有報告生命體征、身體所見或ECG的臨床上相關的變化。在單劑量的BMS-931699之后沒有觀察到促炎細胞因子的臨床上有意義的變化，證實了在人類中缺乏CD28受體激動活性。報道了兩例嚴重不良事件(SAE)，但兩者均被認為與研究藥物無關。這些包括一起急性腎功能衰竭事件和一起闌尾炎事件。在7名受試者中發(fā)生急性輸注反應；這些事件中3例導致在輸注完成之前停止研究藥物。所有急性輸注反應的強度緩和。在研究藥物治療組和安慰劑組中均報道了孤立的無癥狀丙氨酸轉氨酶(ALT)增加，沒有受試者符合Hy's標準。最常見的不良反應(AE)包括頭痛，感覺熱，口咽疼痛，背痛，瘙癢和上呼吸道感染。在用SC劑量的BMS-931699(6.25mg每隔一周[EOW]、12.5mg每周[QW]或37.5mgQW)或安慰劑(3:1隨機化)中治療5周的24名受試者(3個群組的8名受試者)中進行MAD研究IM128003。如SAD研究中所報道的一樣，來自MAD研究的初步結果顯示沒有CD28激動活性的證據(jù)，CD28激動活性由臨床上顯著的細胞因子釋放和/或淋巴細胞變化所定義。在BMS-931699治療的健康受試者群組(5/18；27.8％)中觀察到感染，但在暴露和感染率之間沒有觀察到相關性?？偣?，在5名受試者中報道了6起感染，其中4名受試者中的5起感染被認為是相關事件。一名以12.5mg每周方案給藥的受試者經(jīng)歷了2次感染發(fā)作：在研究的第40天口腔皰疹，7天后發(fā)生上呼吸道感染，兩起事件的嚴重性均被界定為輕度。一名以12.5mg每周方案給藥的受試者在研究第69天呈現(xiàn)癤(嚴重性為輕度)。一名以37.5mg每周給藥的受試者在第89天呈現(xiàn)中等嚴重性的扁桃體膿腫，需要抗生素治療(500mg阿莫西林每日三次[TID]，持續(xù)10天。一名受試者在每周施用37.5mgBMS-931699后在第81天具有輕度病毒感染，這被認為是不相關的。一名受試者在每2周施用6.25mg后具有嚴重蜂窩織炎的SAE。該受試者在第49天因其右手第三指根部皮膚損傷后發(fā)生蜂窩織炎而要求住院治療。當住院時，該患者接受IV抗生素治療，并且手術引流病灶。該SAE在右手的創(chuàng)傷性皮膚損傷之后發(fā)生，造成了皮膚完整性的破壞而有助于蜂窩織炎的發(fā)展。然而，不能排除BMS-931699可能使受試者對隨后的感染更敏感。因此，該SAE被認為可能與研究藥物有關。BMS-931699的藥代動力學IM128001的藥代動力學總結：單遞增劑量研究SAD研究IM128001評價在0.01mg至100mg(0.01、0.05、0.25、3、9、25、50和100mg)的劑量范圍內在30分鐘IV輸注后的BMS-931699，以及在9、25、50mg劑量SC給藥后的BMS-931699。BMS-931699在單次IV和SC施用后表現(xiàn)出線性PK。IV和SC施用的BMS-931699的Cmax和AUC(INF)在3mg至100mg的范圍內與劑量成比例地增加。在健康受試者中，BMS-931699的AUC和Cmax值在3mg至100mg的單劑量IV和9mg至50mg的單劑量SC之后以劑量成比例的方式增加。平均總身體清除率(CLT)、Vz和Vss分別在0.42-0.59L/min、3.4-5.1L、和3.2-4.5L的范圍內，并且在單次IV施用后的所有劑量組中相對一致。平均表觀總身體清除率(CLT)/F和Vz/F分別在0.59-0.70L/min和6.0-7.3L的范圍內，并且在單次SC施用后的所有劑量組中相對一致。在健康受試者中單劑量或多劑量后BMS-931699的T-HALF類似(單劑量為4至5.5天，多劑量為6至7天)。SC施用后的BMS-931699相對AUC(INF)的生物利用度為68.2％。IM128003的藥代動力學匯總：多劑量遞增研究MAD研究IM128003在三個治療組中評價BMS-931699：每隔一周6.25mg(3劑)，每周12.5mg(5劑)和每周37.5mg(5劑)。在每隔一周和每周SC施用后，BMS-931699的藥代動力學在每隔一周6.25mg至每周37.5mg的范圍內是線性的。對于6.25mgEOW，12.5mgQW和37.5mgQW，AUC的累積指數(shù)的幾何平均值分別為1.3、2.4和3。在多次劑量的BMS-931699之后，觀察到中值T-HALF為6至7天。平均CL/F(0.345至0.46L/min)與在SAD研究中觀察到的一致。MAD中報道的T-HALF與SAD研究相比稍長的原因可能是由于在MAD研究中在末期有更多可測量的濃度數(shù)據(jù)可用來估計BMS-931699的T-HALF。實施例5：2期臨床試驗劑量選擇理論在一項2期劑量范圍研究中，選擇四種BMS-931699治療用于人的初步評估，包括每隔一周1.25mg、每隔一周5mg、每隔一周12.5mg和每周12.5mg。這些給藥方案是基于PK/PD關系選擇的，使用在匙孔血藍蛋白(KLH)-抗原攻擊后的受體占據(jù)率(RO)和IgG抑制作為SLE患者中免疫抑制活性和臨床療效的預測標志。使用基于人MAD數(shù)據(jù)的受體占據(jù)率的PK/PD模型進行模擬，以鑒定出將提供寬范圍的受體占據(jù)率從而跨越PK-受體占據(jù)率曲線的給藥方案。這些模擬預測，每隔一周1.25mg，每隔一周5mg，每隔一周12.5mg和每周12.5mg方案在大多數(shù)患者的整個給藥間隔分別提供大約≥40％，≥70％，≥80％，≥90％的受體占據(jù)率(圖4)。與每隔一周1.25mg和每隔一周5mg的方案相關的受體占據(jù)率的分布落在PK-受體占據(jù)率曲線的陡峭部分，而每隔一周和每周方案的12.5mg落在最大值高原部分。臨床前猴數(shù)據(jù)提示，最大免疫抑制(如KLH-抗原攻擊后IgG抑制測量的)需要≥80％的受體占用率持續(xù)2周，并且當受體水平降低到80％以下時，免疫抑制活性減弱，抗KLH抗體形成上升。單遞增劑量(SAD)研究的結果證實了這一假設。在達到約80％受體占據(jù)率時，全部治療組中均觀察到近最大IgG抑制。值得注意的是，在最低KLH處理組(9mg)中，當％RO下降到80％以下時，隨后有IgG形成的回彈。因此認為引發(fā)免疫抑制活性需要高水平的靶點作用，例如80％受體占據(jù)率或更大。從6個月的猴研究中測試的最低劑量來看，預期每隔一周給藥方案的1.25mg的最低建議劑量的相關暴露非常低(在正常健康志愿者的MAD研究中測試的最低劑量低5倍)，具有大的預計安全范圍(50X)。每隔一周1.25mg的預測受體占據(jù)率分布預期對于整個治療群體而言會降至低于80％，而對于大多數(shù)人類受試者，預期該劑量維持受體占據(jù)率高于40％?；谏鲜?0％受體占據(jù)率和KLH抑制之間的相關性的發(fā)現(xiàn)，預期每隔一周5mg的方案在約50％的患者中會引發(fā)≥80％的受體占據(jù)率，從而提供一些免疫抑制活性，進而誘導一些臨床響應，雖然不是最佳的。此外，從6個月猴毒理學研究中測試的最低劑量看，該給藥方案的相關暴露(AUC(TAU))相當?shù)?，具有大的預計安全范圍(12.7X)。更高的每隔一周和每周12.5mg的劑量預期對于整個治療群體會提供>80％和>90％的受體占據(jù)率，并且預期會引起接近最大的免疫抑制活性，可能導致接近最大的有效響應。與6個月猴研究中測試的最低劑量相比，與這2種方案相關的暴露低得多(5.1X和2.5X)。前述四種劑量的預計暴露處于健康人類受試者的MAD研究中測試的暴露范圍內。該POC研究中的最高劑量仍將是MAD研究中的最高劑量的三分之一。實施例6：研究設計和持續(xù)時間進行具有自適應設計的2期平行臂隨機雙盲多中心國際研究。該研究包括一個短期時段，具有兩個部分：第1部分(圖1)和第2部分(圖2)；以及一個長期延伸(LTE)時段(圖3)。第1部分重點評估安全性和受體占有率。第1部分限于安全性/RO期中分析(IA)中包括的30至50名患者(約6-10名患者/臂)。每個臂的6至10位患者完成28天(4周)的治療。這些患者在安全性/ROIA之外繼續(xù)接受研究治療，治療進行最長達24周，并且在治療完成后再追蹤6周。共有最多達50名隨機受試者接受治療6個月。如果安全性/ROIA分析表明應該放棄一個或多個臂，則治療可能會更短。一旦累積安全性概況被認為是可接受的，并且有每群組6-10名受試者給藥>28天的受體占有率數(shù)據(jù)可用，則開啟第2部分。將大約300名受試者隨機分入本研究部分(根據(jù)期中無效性分析的結果，隨機分入第2部分的患者數(shù)量可能增加)。所有受試者接受篩選評價以確定適格性，并允許在施用其第一劑研究藥物之前28天內進行潑尼松(或潑尼松等效物)的劑量下降滴定。劑量可以如下調適：·安全性和受體占據(jù)率(RO)期中分析：當每臂約6至10名受試者已達到研究第29天(4周治療的)時，執(zhí)行安全性和受體占據(jù)率分析。基于該分析的結果，可以調節(jié)臂劑量或完全放棄?！ぎ斆總€臂約30名受試者已達到研究第85天(治療12周或中止)時，進行無效性期中分析以及根據(jù)BICLA響應、SLE應答者指數(shù)響應、ACR28和一些SLE生物標志(例如自身抗體，補體水平等)的劑量調適，同時可能進行探索性暴露反應分析。分析由一個非盲的主持者團隊(Sponsorteam)進行，而在站點和受試者級別上保持盲目?；诮Y果，可以修改劑量水平和樣本量。·進行中的安全性評估由一個獨立的數(shù)據(jù)監(jiān)察委員會(DMC)和內部非盲安全監(jiān)控團隊來實施。兩個實體可就基于安全性的觀察結果，就研究行為和劑量調整給主持者提供建議。長期延伸(LTE)時段是可選的，并且包括已經(jīng)完成第169天(第24周)治療并同意參與的合格受試者。這個研究期間仍然是盲目的，但不再有安慰劑臂。合格的受試者保持在其原分配的劑量臂上，除非他們在短期時段是在安慰劑臂上。在第169天(24周)將安慰劑臂重新隨機分入現(xiàn)有的活性臂之一。安慰劑受試者的再隨機分配通過IVRS進行，并且只有未盲的藥劑師/藥物制備者知道新的隨機化臂。LTE對研究團隊和研究人員而言仍然是盲目的。研究的大致持續(xù)時間是：短期時段中28天的篩選(4周)，168天(24周)的治療、和42天(6周)的安全隨訪，總共約238天(34周)。如果受試者適格并且選擇繼續(xù)進入LTE，則在短期時段完成之后完成42天隨訪，受試者直接進入LTE。如果受試者選擇不進入LTE，則在治療結束42天后完成隨訪。在撰寫本文時，長期延伸時段沒有確定的結束日期，然而，上述LTE規(guī)定可能基于正在進行的盧立單抗(lulizumab)開發(fā)程序的結果進一步調整。在LTE期間中斷治療的受試者在接受其最后一劑研究藥物后約6周完成隨訪。在第1部分或第2部分中隨機分配的受試者接受治療長達24周，并進行相同的程序并遵循相同的訪視計劃。實施例7：總體風險/效益評估本實施例總結BMS-931699治療的潛在風險和在臨床研究中要求注意的事項。此評估是基于在迄今為止BMS-931699的非臨床數(shù)據(jù)和臨床經(jīng)驗，如前述實施例中闡明的。阻斷CD28的功能預期會調節(jié)免疫應答。免疫應答的調節(jié)可能導致易感染。在非臨床研究中，沒有BMS-913699治療導致了細菌或病毒感染的證據(jù)。迄今為止，已在健康受試者中施用了單一劑量和重復劑量的BMS-931699?；趤碜允承泛镏袉我缓椭貜蛣┝縄V和SC非臨床毒理學研究的研究結果和來自研究IM128001和IM128003，BMS-931699的臨床數(shù)據(jù)，已經(jīng)證明安全性可接受，支持繼續(xù)開發(fā)。每周最高建議劑量12.5mg的預期穩(wěn)定狀態(tài)下的暴露[AUC(TAU)]比在猴中的6個月毒性研究中的最低測試劑量1mg/kg/周(在此劑量下觀察到最小至中度的巨噬細胞空泡化)低約2.5X。該2期研究中的最高劑量是MAD研究中最高劑量的三分之一。在2期的第1部分中全程進行高強度的安全監(jiān)控，允許及早檢測任何安全信號。實施例8：劑量調適如上所述，2期研究以4個方案開始：每隔一周1.25mg，每隔一周5mg，每隔一周12.5mg和每周12.5mg。實施安全性/受體占據(jù)率期中分析以確保暴露和受體占據(jù)率觀察結果接近原始預測。在研究的第1部分中當每個治療臂至少6名患者達到研究第29天時進行安全性和受體占據(jù)率的期中分析(IA)。確認受體占據(jù)率觀察結果接近最初的預測，并且BMS-931699在SLE患者中得到良好耐受。其余的患者參加研究?；谠撈谥蟹治龅慕Y果，可以中斷最初包括在第1部分中的給藥方案和/或可以根據(jù)下面概述的標準添加新的給藥方案。當根據(jù)IA已就要繼續(xù)進行的給藥方案作出決定之后，開啟該研究的第2部分的入選工作：安全性安全性分析側重于所有不良事件(AE)，嚴重AE、和預先確定的特殊關注事件(例如感染AE)的發(fā)生率和嚴重性，和DMC要求的任何其他安全性分析。DMC與非盲內部安全監(jiān)測團隊可能聯(lián)合要求停止一個或多個劑量，如果滿足停止標準或出現(xiàn)其他臨床監(jiān)察員(MedicalMonitor)和/或DMC認為足夠值得擔憂的安全信號。非盲安全監(jiān)測小組不參與定期研究活動。受體占據(jù)率計算每個治療臂第29天的中值受體占據(jù)率?！と绻魏蝿┝康闹兄凳荏w占據(jù)率<20％，主持者考慮放棄該劑量?！と绻袆┝康闹兄凳荏w占據(jù)率>90％，主持者考慮在研究的第2部分添加或替換一個劑量，以確保有足夠的藥效學范圍(劑量不超過每周12.5mg)。如果受體占據(jù)率結果落入上述的參數(shù)之外，則考慮減少劑量和/或降低給藥頻率。該調整出于安全原因進行，或當SLE患者中觀察到預料之外的受體占據(jù)率概貌時進行。調整劑量和/或頻率的決定由臨床團隊對數(shù)據(jù)進行審查后作出。受試者不改變劑量。如果臂被修改或刪除，隨機分配到該臂中的受試者中止。在研究的第2部分，當每個臂30名患者(包括來自第1部分的患者)已完成至少85天治療期或中止時，進行無效性和劑量調適期中分析?？赡苡捎谌狈Ο熜Ф艞壱粋€或多個治療臂，或者可以添加治療臂用于探索次優(yōu)劑量?？梢耘c該期中分析并行地進行功效和安全性的暴露-響應分析，以幫助為這一附加的較低治療臂選擇劑量。長期延伸時段有期中分析以便于劑量調適。如果鑒定了顯著安全問題，一個或多個劑量臂可能被放棄。如果因安全原因放棄一個或多個劑量臂，所有目前接受該一個或多個劑量的受試者停止接受研究藥物。實施例9：納入標準滿足系統(tǒng)性紅斑狼瘡分類的美國風濕病學標準的18至70歲的男性或女性(未在哺乳或懷孕)是適格的(表3)。該分類基于11個標準。為了在臨床研究中鑒別患者的目的，如果某人在任何觀察間隔期間存在11個標準中的任何4個或更多個，無論是連續(xù)(順序)地或同時(一致)地存在，則該人被認為具有系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)。在第1天給藥之前必須滿足四個標準才能進入研究。然而，4個標準可能在研究進入時不存在，而是在疾病過程中的某個時間已發(fā)生并被記錄：表3：1982年修訂的系統(tǒng)性紅斑狼瘡分類標準此外：·受試者在≥1:80的篩選時具有升高的抗核抗體，由中心實驗室通過免疫熒光測定測得，和/或由中心實驗室測定具有高于正常水平的陽性抗dsDNA和/或抗Sm。(如果中心實驗室結果為陰性，并且在現(xiàn)場記錄到陽性結果，則允許重復一次中心實驗室的值)?！な茉囌咴诤Y選時也具有系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動指數(shù)2000(SLEDAI-2K)評分≥6以適格。分數(shù)中至少4分可歸因于臨床標準，包括以下臨床參數(shù)中的至少一個：關節(jié)炎、皮疹、肌炎、粘膜潰瘍、胸膜炎、心包炎、血管炎，且排除來自狼瘡性頭痛和器質性腦綜合征的分數(shù)?！ぴ诘?天，受試者具有≥4的SLEDAI-2K得分，包括來自以下臨床組分中的至少一種的分數(shù)：關節(jié)炎，皮疹，肌炎，粘膜潰瘍，胸膜炎，心包炎，血管炎和發(fā)熱，且排除需要實驗室結果的參數(shù)(血尿，尿膿，尿結石，蛋白尿，陽性抗dsDNA，減少的補體，血小板減少和白細胞減少)。排除來自狼瘡性頭痛和器質性腦綜合征的分數(shù)?！な茉囌呔哂兄辽僖环N下列SLE表現(xiàn)，如經(jīng)修改用于本研究的不列顛群島狼瘡評估組(BILAG)2004標準所定義的：o(1)在皮膚粘膜身體系統(tǒng)中BILAGA或B評分o(2)在肌肉骨骼系統(tǒng)中BILAGA或B評分，由于如下定義的活動性多關節(jié)炎：·(a)“BILAGA”：嚴重關節(jié)炎(BILAG#41)，在≥2個關節(jié)中觀察到活動性滑膜炎，伴有明顯的運動功能范圍喪失，并且顯著阻礙日常生活的基本活動，在過去4周內已累積存在數(shù)日，包括在篩選訪視時?；続DL定義為需要輔助或輔助裝置的以下活動(至少一個必須存在并且在源中記錄)：離床活動、如廁、梳洗包括洗浴、穿衣、自行進食(對高達10mg/天的類固醇，抗瘧藥，NSAID無響應)?！?b)“BILAGB”：中度關節(jié)炎或腱炎或腱鞘炎(BILAG#42)定義為≥1個關節(jié)(觀察或通過歷史)的腱炎/腱鞘炎或活動性滑膜炎，部分喪失功能運動范圍，導致部分喪失功能活動度，表現(xiàn)在對工具性ADL(例如烹飪、駕駛、使用電話或計算機、購物、清潔等)的影響，這在過去4周中的數(shù)日中存在，且在篩選時存在。o(3)如果由于關節(jié)炎在肌粘膜身體系統(tǒng)或肌肉骨骼身體系統(tǒng)中僅存在一個“B”而無“A”得分，則其他身體系統(tǒng)中必須存在至少一個B，以得到總共2“B”BILAG身體系統(tǒng)得分。除非不耐受，受試者必須當前接受至少一種以下類固醇節(jié)用藥物至少12周，并且在簽署同意書之前接受至少56天(8周)的穩(wěn)定劑量：硫唑嘌呤(AZA)、氯喹、羥氯喹、甲氨蝶呤(MTX)、來氟米特、霉酚酸酯/霉酚酸。受試者在整個研究中必須保持穩(wěn)定的劑量。不需要潑尼松(或潑尼松等效物)；然而，如果受試者正在服用潑尼松(或潑尼松等效物)，則在篩選時劑量不能超過30mg/日受試者方可合格，并且必須在第1天(隨機化)之前穩(wěn)定在最大10mg/日至少5日時間。任何其他免疫抑制或生物藥物在進入研究之前需要沖洗期。如果受試者接受非甾體抗炎藥(NSAID)(包括市售的COX-2抑制劑)，則劑量必須在第1日的第一劑研究藥物(隨機化)之前穩(wěn)定14天，并且受試者在研究全程中必須保持相同劑量。注意：若訪視時評估BILAG、SLEDAI2K、關節(jié)計數(shù)、皮膚紅斑狼瘡疾病面積和嚴重程度指數(shù)(CLASI)和MDGA，則訪視前NSAIDS應停藥至少12小時。在研究藥物施用開始前24小時內，育齡女性患者具有陰性的血清或尿妊娠試驗(最小靈敏度25IU/L或等同單位的人絨毛膜促性腺激素)。女性患者不在哺乳。育齡女性患者必須在研究藥物治療持續(xù)時間內、加上治療完成后總共65天[5個研究藥物的半衰期(7天)再加30天(排卵周期持續(xù)時間)]內使用避孕。與育齡女性患者性活躍的男性必須在治療持續(xù)時間內加治療完成后共125天時間內[5個研究藥物的半衰期(7天)加90天(精子周轉持續(xù)時間)使用避孕。無精子癥的男性和持續(xù)沒有異性性活動的育齡女性可以免于避孕要求。然而他們仍然必須接受懷孕測試。實施例10：排除標準下列受試者不納入第二階段的研究：a)具有藥物誘發(fā)性SLE，而不是“特發(fā)性”SLE的受試者。b)具有其他自身免疫性疾病[例如類風濕關節(jié)炎(RA)，多發(fā)性硬化癥(MS)]的受試者。(1型糖尿病，甲狀腺自身免疫病和繼發(fā)性干燥綜合征的受試者是適格的)。c)其SLE或SLE樣綜合征的唯一或主要特征是原發(fā)性抗磷脂抗體綜合征的受試者被排除在外。但是，具有繼發(fā)性抗磷脂綜合征患者被包括在研究中，除非他們在簽署同意書之前一年內發(fā)生了嚴重的血栓性成事件(例如肺栓塞、中風、或深靜脈血栓形成)。慢性香豆或依諾肝素用藥的患者可以納入研究。具有下述醫(yī)學狀況、伴發(fā)病和病史的受試者不納入第二階段的研究：a)在研究藥物施用(第1天)的6周內進行過任何大手術的受試者或計劃在研究過程中進行的任何非急需(elective)手術。b)具有結核病(TB)的任何歷史或風險的受試者，特別是具有以下的受試者：(1)活動性TB的當前臨床、放射照相、或實驗室證據(jù)。(2)過去3年內活動性結核病的病史，除非根據(jù)當前的世界衛(wèi)生組織指南，有記錄表明先前的抗結核治療在持續(xù)時間和類型上是合適的。(3)潛伏性TB，定義為在沒有臨床表現(xiàn)的情況下的陽性定量淋巴結(QFG)或其他診斷測試，除非受試者已經(jīng)接受至少1個月的異煙肼或當?shù)匦l(wèi)生當局指南推薦的其他試劑治療，并且干擾素γ釋放測定(IGRA)測試，例如QFG或T-Spot，在第1天之前為陰性。(4)在篩選時或在第1天之前3個月內的陽性QFG測試(或其他診斷測試)是可接受的，只要到第1天為止有記錄陰性結果。c)具有活動性或不穩(wěn)定性的狼瘡神經(jīng)精神病學表現(xiàn)的受試者，包括但不限于由BILAG“A”標準定義的任何狀況，但多發(fā)性單精癥和多發(fā)性神經(jīng)病除外，此二者是允許的。d)具有活動性、重度的狼瘡性腎炎(WHOIII、IV類)，需要或可能需要用細胞毒劑或高劑量皮質類固醇治療的受試者?；加性谙鹊?、受控的腎病，具有高達3g/天的殘留蛋白尿或3mg/mg或339mg/mmol的尿蛋白/肌酐比的受試者是允許的。e)患過在篩選前小于2個月消退的帶狀皰疹的受試者。f)在潛在篩選時具有活動性或潛伏的細菌或病毒感染的證據(jù)(由研究者評估)的受試者，包括具有人免疫缺陷病毒(HIV)感染(由HIV-1，-2抗體陽性定義)的證據(jù)的受試者。g)目前在服用羥氯喹或氯喹，在篩選6個月內具有視網(wǎng)膜病的證據(jù)或在篩選前一年內沒有進行眼科評估且不進行該檢查，或在參與研究期間不愿意或不能進行常規(guī)眼科檢查的受試者。h)研究者認為其在研究期間很可能需要額外的全身性糖皮質激素治療的伴發(fā)病(例如哮喘)是排除性的。然而，用吸入性皮質類固醇治療哮喘的治療是允許。i)乳腺癌篩查疑似惡性腫瘤，在附加的臨床、實驗室或其他診斷評價后不能合理地排除惡性腫瘤的可能性的女性受試者。j)在過去五年內具有癌癥病史的受試者(除了通過局部切除術治愈的非黑素瘤皮膚細胞癌之外)?，F(xiàn)有的非黑素瘤皮膚細胞癌必須在隨機化(第1天治療)之前去除。經(jīng)過確定性手術介入治療的原位癌是允許的。k)具有任何急性和/或慢性嚴重細菌或病毒感染(例如肺炎、腎臟感染和鼻竇炎)的受試者。在第1天(隨機化)之前，必須在醫(yī)療圖表中有消退的記錄。g)在研究藥物施用的4周內(對于僅血漿，2周內)向血庫或在臨床研究中(篩選訪視除外)捐獻血液。h)在研究藥物施用的4周內輸血。i)不能進行靜脈穿刺和/或耐受靜脈通路的受試者。j)具有任何顯著的藥物變應反應(例如過敏反應或肝毒性)的受試者。k)研究者確定的任何其他可靠的醫(yī)療、精神病學和/或社會原因。具有以下醫(yī)學狀況、伴發(fā)病和病史的受試者不納入2期研究：a)器官功能障礙，或身體檢查、生命體征、ECG或臨床實驗室檢查中任何臨床上顯著偏離正常，超出與目標人群相符的范圍的證據(jù)。b)乙型肝炎表面抗原陽性。c)丙型肝炎抗體陽性，具有陽性重組免疫印跡測定(RIBA)或聚合酶鏈式反應(PCR)。d)白細胞(WBC)<1,200/mm3(1.2×109/L)。e)血小板<50,000/mm3(50×109/L)。f)血紅蛋白<8g/dL或<7g/dL，如果由于與SLE相關的溶血性貧血。g)蛋白尿>3.0g/天(3000mg/天)或相當水平的蛋白尿，如通過蛋白質/肌酸酐比率(3mg/mg或339mg/mmol)評估的。h)血清肌酐>2.0mg/dL。i)定義為紅細胞(RBC)柱的活動性尿沉渣。j)血清丙氨酸轉氨酶(ALT)>2x正常上限(ULN)，除非根據(jù)研究者的判斷是明顯與狼瘡有關的。k)血清天冬氨酸轉氨酶(AST)>2xULN，除非根據(jù)研究者的判斷是明顯與狼瘡有關的。l)非法濫用藥物的尿液篩查陽性，但如這些藥物是由主治醫(yī)師處方的(必須記錄在案)的則除外，且在該國家或地區(qū)內并不非法的其他藥物除外m)任何其他根據(jù)研究人員的意見可能使參與本研究的受試者處于不可接受的風險的實驗室檢查結果。在研究藥物施用之前服用的、在研究中禁用和/或限制性藥物描述如下：1)先前暴露于BMS-931699。2)在研究藥物給藥前1周內使用任何其他藥物，包括非處方藥物和草藥制劑，除了那些由BMS臨床監(jiān)察員審查通過的藥物。3)在研究全程內禁止使用環(huán)磷酰胺，任何靜脈內、任何關節(jié)內或生物制劑。4)對于發(fā)生中性粒細胞減少(絕對嗜中性粒細胞計數(shù)<1.3×103/μL)的受試者，應當中斷霉酚酸酯/霉酚酸或根據(jù)包裝說明書減少劑量。5)在篩選30天內接受過任何活疫苗的受試者。(此外，在最后一次劑量后的2個月內不應使用活疫苗，而任何其他滅活疫苗如破傷風等，如果在治療期間使用，應根據(jù)當?shù)刂改鲜褂?。6)計劃或預期在研究過程中進行非急需性手術的受試者。在研究期間不施用伴隨藥物(處方藥，非處方藥或草藥)，除非研究者開具這些藥物以治療特定臨床事件。實施例11：BMS-931699或安慰劑的施用取決于劑量組，每周一次以溶液形式皮下(SC)單次注射施用BMS-931699或外觀相似的安慰劑。臨床標簽反映產品名稱為“BMS-931699-01”以與小瓶上的產品描述相關聯(lián)。BMS-931699-01注射液的組成為：含5％(w/v)山梨醇的20mM磷酸鹽，pH5.9中的12.5mg/mLBMS-931699。BMS-931699-01注射劑包裝在具有13mm開口、1塊標簽牌、開放標簽的3cc小瓶中。BMS-931699-1注射液呈現(xiàn)澄清至微乳白色，無色至淺黃色的溶液。BMS-931699-01注射液冷藏在2-8℃(36-46°F)。下表4表示每個劑量組的每劑的總劑量和小瓶數(shù)。表4：治療施用治療每日總劑量配方力量小瓶數(shù)11.25mgSCEOW12.5mg/mL125mgSCEOW12.5mg/mL1312.5mgSCEOW12.5mg/mL1412.5mgSC每周12.5mg/mL15安慰劑安慰劑生理鹽水(NSS)對于皮下(SC)給藥，對于12.5mg的劑量不需要稀釋藥物產品溶液(12.5mg/mL)。然而，5mg和1.25mg的劑量需要稀釋。使用21號，1.5英寸(3.8cm)無菌針從小瓶中抽取該產品，使用27號，0.5英寸(1.3cm)無菌針用于SC給藥。使用適當尺寸的常規(guī)的市售聚碳酸酯注射器用于抽取和施用。在抽取產品到適當大小的注射器中后，在4小時內施用。如果不立即給藥，填充好的注射器避光保持在2°-8℃(36°-46°F)備用。用于BMS-931699注射的安慰劑是生理鹽水溶液，其以與針對BMS-931699注射描述的類似的方式施用。研究人員將劑量施用給受試者。在第1天，將受試者以1:1:1:1:1隨機化方案隨機分配至表4中的給藥組之一。在第1天的早上，每個受試者接受單一SC劑量的BMS-931699或安慰劑。主要注射點是上臂之一。然而，其他注射點也是可接受的。目前沒有已知的與BMS-931699相關的食物和流體攝入的限制。要求每名隨機化的受試者每周都到診所/研究中心接受給藥。這確保雙盲的維持，無論給藥方案如何不同。隨機分配到每周皮下注射安慰劑或BMS-931699的受試者按照時間表每周給藥，而隨機化分配到每隔一周的臂之一的受試者一周接受皮下注射BMS-931699、下一周接受皮下注射安慰劑，如此交替。實施例12：生物標志在研究中納入藥效學、靶點作用和疾病相關的生物標志測定，以指導劑量選擇、監(jiān)測功效，以及可能地預測治療響應。抽取血液和尿液用于測量BMS-931699的靶點作用和藥效學效應的標志，包括CD28受體占據(jù)率、C3、C4和自身抗體。研究中納入靶點作用，如通過T細胞上的CD28受體占據(jù)率所評估的，以指導3期研究的劑量選擇、監(jiān)測功效并且可能地預測治療反應。表征BMS-931699的濃度水平與CD28受體占據(jù)率之間的關系。其他生物標志包括：其他細胞因子和趨化因子、抗雙鏈脫氧核糖核酸(抗dsDNA)、抗核抗體(抗ANA)、抗-Ro(也稱為抗SSA、抗SSA/RO或抗Ro/SSA)自身抗體、抗狼瘡(抗-La)(也稱為抗Sjggren綜合征B型抗原(抗SS-B))自身抗體、抗核糖核蛋白(抗RNP)自身抗體、抗Sm核抗原自身抗體、抗APL自身抗體和其他自身抗體。C反應蛋白(CRP)、總免疫球蛋白G(IgG)、總免疫球蛋白M(IgM)，全血中的RNA轉錄物，尿中的蛋白質(NGAL，TWEAK，MCP-1，IL-18，IL-1)、總可溶性CD28、T細胞活化、外周血單個核細胞(PMBC)和全血中的白細胞表型(表面CD4、表面CD8、表面CD28、表面CD57、和細胞內顆粒酶B)、可溶性炎癥介質(血清IL-6、IL-18、TNF-α、α-干擾素、BLyS(BAFF)，CD154、sCD28和其他可溶性受體，微囊泡)也可以用作生物標志。與SLE相關的一些藥效學終點表征如下：基于血液的(RNA)評估在指定的時間收集全血核糖核酸(RNA)樣品到PAX基因管中。這些樣品提供廣泛的基因組概貌，用以尋找與炎癥和/或自身免疫途徑相關的新的藥效學和功效生物標志。此外，使用這些樣品在基線搜索可預測BMS-931699治療的受試者的功效的基因表達。白細胞表型分型收集外周血用于通過流式細胞術免疫表型分型?？梢员碚鱐細胞的活化和亞群。標志可以包括，但不限于，表面CD4、CD8、CD28、CD57和細胞內顆粒酶B的組合。可以分析其它外周細胞，包括B細胞、單核細胞/巨噬細胞、樹突細胞和NK細胞。尿生物標志收集尿液并分析SLE和其它炎性病癥的標志。分析樣品的炎癥標記物(包括但不限于IL-18，IL-1，NGAL，uTWEAK，MCP-1)的蛋白質組概貌。進行探索性分析以鑒定生物標志，用以監(jiān)測腎臟受累的患者的PD和對治療的響應。外周血清和血漿生物標志收集血清和血漿用于測量與炎癥、SLE或共刺激阻斷相關的可溶性炎癥介質(包括但不限于血清IL-6、IL-18、TNF-α、α-干擾素、BLyS(BAFF)、CD154、sCD28和其他可溶性受體，微囊泡)。進行探索性分析以鑒定SLE的生物標志，并監(jiān)測PD和BMS-931699對炎癥途徑的影響。結果研究評估受試者完成慢性疾病治療疲勞功能評估(FACIT-F)、FDA短表36調查問卷(SF-36)、和受試者的疾病活動全面評估(PGA)。這些頁面是本研究中的源文檔。所有結果研究評估應在預定的到場訪視施用研究藥物之前完成。探索性功效結果量度健康相關的生活質量SF-36用于度量健康相關的生活質量。計算個體子量表得分和兩個總結得分：(1)身體成分匯總(physicalcomponentsummary,PCS)包括身體功能、角色-身體、身體疼痛和一般健康；(2)心理成分匯總(MCS)，包括活力、社會功能、角色情感和心理健康。SF-36是一種廣泛認可的工具，F(xiàn)DA認可其為一種經(jīng)過驗證的用于測量多種疾病狀態(tài)下健康相關的生活質量的手段。疲勞疲勞由FACIT-F評估。FACIT-F是一種以疲勞為重點的與健康相關的生活質量問卷。FACIT-F包括以下組成部分：身體健康，社會/家庭福利，情緒健康，功能健康和其他關心的問題。已經(jīng)參考其具體實施例具體示出和描述了本文所闡述的公開內容。本領域技術人員將理解，在不脫離所附權利要求所涵蓋的范圍的情況下，可以在形式和細節(jié)上進行各種改變。序列表<110>百時美施貴寶公司<120>使用針對CD28的域抗體治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的方法<130>12394-WO-PCT<150>62/057981<151>2014-09-30<160>15<170>PatentInversion3.5<210>1<211>11<212>PRT<213>人工序列<220><223>SyntheticPeptide<400>1ArgAlaSerArgProIleTrpProPheLeuGlu1510<210>2<211>7<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成肽<400>2PheThrSerArgLeuArgHis15<210>3<211>9<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成肽<400>3LeuGlnAsnValAlaAsnProAlaThr15<210>4<211>108<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成肽<400>4AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerArgProIleTrpProPhe202530LeuGluTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysLeuLeuIle354045TyrPheThrSerArgLeuArgHisGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysLeuGlnAsnValAlaAsnProAla859095ThrPheSerGlnGlyThrLysValGluIleLysArg100105<210>5<211>108<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成肽<400>5AspIleCysMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerArgProIleTrpProPhe202530LeuGluTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysLeuLeuIle354045TyrPheThrSerArgLeuArgHisGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysLeuGlnAsnValAlaAsnProAla859095ThrPheSerGlnGlyThrLysValGluIleLysArg100105<210>6<211>108<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成肽<400>6AspIleGlnMetThrGlnSerProCysSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerArgProIleTrpProPhe202530LeuGluTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysLeuLeuIle354045TyrPheThrSerArgLeuArgHisGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysLeuGlnAsnValAlaAsnProAla859095ThrPheSerGlnGlyThrLysValGluIleLysArg100105<210>7<211>108<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成肽<400>7AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspCysValThrIleThrCysArgAlaSerArgProIleTrpProPhe202530LeuGluTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysLeuLeuIle354045TyrPheThrSerArgLeuArgHisGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysLeuGlnAsnValAlaAsnProAla859095ThrPheSerGlnGlyThrLysValGluIleLysArg100105<210>8<211>108<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成肽<400>8AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerArgProIleTrpProPhe202530LeuGluTrpTyrGlnGlnLysProCysLysAlaProLysLeuLeuIle354045TyrPheThrSerArgLeuArgHisGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysLeuGlnAsnValAlaAsnProAla859095ThrPheSerGlnGlyThrLysValGluIleLysArg100105<210>9<211>108<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成肽<400>9AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerArgProIleTrpProPhe202530LeuGluTrpTyrGlnGlnLysProGlyCysAlaProLysLeuLeuIle354045TyrPheThrSerArgLeuArgHisGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysLeuGlnAsnValAlaAsnProAla859095ThrPheSerGlnGlyThrLysValGluIleLysArg100105<210>10<211>108<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成肽<400>10AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerArgProIleTrpProPhe202530LeuGluTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProCysLeuLeuIle354045TyrPheThrSerArgLeuArgHisGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysLeuGlnAsnValAlaAsnProAla859095ThrPheSerGlnGlyThrLysValGluIleLysArg100105<210>11<211>108<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成肽<400>11AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerArgProIleTrpProPhe202530LeuGluTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysLeuLeuIle354045TyrPheThrSerArgLeuArgHisGlyValProCysArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysLeuGlnAsnValAlaAsnProAla859095ThrPheSerGlnGlyThrLysValGluIleLysArg100105<210>12<211>108<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成肽<400>12AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerArgProIleTrpProPhe202530LeuGluTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysLeuLeuIle354045TyrPheThrSerArgLeuArgHisGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrCysPheThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysLeuGlnAsnValAlaAsnProAla859095ThrPheSerGlnGlyThrLysValGluIleLysArg100105<210>13<211>108<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成肽<400>13AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerArgProIleTrpProPhe202530LeuGluTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysLeuLeuIle354045TyrPheThrSerArgLeuArgHisGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuCysIleSerSerLeuGlnPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysLeuGlnAsnValAlaAsnProAla859095ThrPheSerGlnGlyThrLysValGluIleLysArg100105<210>14<211>108<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成肽<400>14AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerArgProIleTrpProPhe202530LeuGluTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysLeuLeuIle354045TyrPheThrSerArgLeuArgHisGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuCysPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysLeuGlnAsnValAlaAsnProAla859095ThrPheSerGlnGlyThrLysValGluIleLysArg100105<210>15<211>108<212>PRT<213>人工序列<220><223>合成肽<400>15AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerArgProIleTrpProPhe202530LeuGluTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysLeuLeuIle354045TyrPheThrSerArgLeuArgHisGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysLeuGlnAsnValAlaAsnProAla859095ThrPheSerGlnGlyThrCysValGluIleLysArg100105當前第1頁1 2 3