本發(fā)明涉及用于治療疼痛的新型止痛藥，結(jié)果發(fā)現(xiàn)blt2激動劑可以脫敏感覺神經(jīng)元中trpv1介導(dǎo)的信號，因此本發(fā)明提供blt2激動劑作為新的疼痛治療劑。另一方面，本發(fā)明涉及blt2激動劑和blt1拮抗劑的組合物，用于治療受試者疼痛。包括本發(fā)明所述的新型止痛藥的藥物組合物和試劑盒被進一步提供。

描述

疼痛是一種復(fù)雜的反映真實或潛在組織損傷的主觀感覺和對于這種主觀感受的情感反應(yīng)。劇烈疼痛是指示潛在或真實損傷的生理信號。慢性疼痛可以是病理生理性的(原發(fā)的)或者精神心理性的，經(jīng)常伴有或伴隨導(dǎo)致抑郁的植物性癥狀。慢性疼痛導(dǎo)致個人受苦，以及巨大的社會經(jīng)濟成本?，F(xiàn)有的藥物止痛療法在效果和安全性方面都不是很令人滿意。病理生理性的疼痛可能是有傷害性起源的，炎癥性的或神經(jīng)病理性的。傷害性疼痛被判斷為與軀體或內(nèi)臟痛覺敏感神經(jīng)纖維的持續(xù)激活相稱。在外周神經(jīng)系統(tǒng)中，神經(jīng)病理性疼痛是由異常的軀體感覺過程所引起的神經(jīng)系統(tǒng)紊亂造成的。

神經(jīng)病理性疼痛是一種持續(xù)的或慢性的疼痛綜合癥，其可能是由神經(jīng)系統(tǒng)、外周神經(jīng)、背根神經(jīng)節(jié)、背根神經(jīng)或者中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷引起的。神經(jīng)病理性疼痛的典型表現(xiàn)包括異常疼痛，各種神經(jīng)痛如皰疹后神經(jīng)痛、三叉神經(jīng)痛和幻痛，和復(fù)雜的局部疼痛綜合癥如反射交感性營養(yǎng)不良和灼性神經(jīng)痛。灼性神經(jīng)痛的特點往往是伴隨痛覺過敏和異常疼痛的自發(fā)灼痛。不幸的是，目前沒有方法可以充分地、可預(yù)測地和明確地治療確定的神經(jīng)病理性疼痛，因為現(xiàn)有治療神經(jīng)病理性疼痛的方法只是試圖幫助病人通過心理或職業(yè)治療應(yīng)付疼痛，而不是減少或消除疼痛。神經(jīng)病理性或者慢性疼痛的治療對于醫(yī)生或病人都是一種挑戰(zhàn)，因為目前還沒有專門針對這種情況的藥物，而且由于目前使用的藥物只能產(chǎn)生一點寬慰，并基于其在急性疼痛條件下的療效或減輕繼發(fā)性影響(如焦慮和抑郁)的療效。慢性疼痛的發(fā)病率呈上升趨勢，其社會負擔(dān)在醫(yī)療和生產(chǎn)力喪失兩方面都是巨大的。目前還沒有科學(xué)有效的方法用來緩解慢性疼痛，于是，公共衛(wèi)生界把“疼痛管理”作為目標，同時使用多模式療法，希望改善一些生活質(zhì)量。因此，迫切需要一種能緩解慢性疼痛的藥物。

最近的研究發(fā)現(xiàn)瞬時受體電位離子通道家族成員(trpv1，trpa1和trpv4)在奧沙利鉑和紫杉醇誘導(dǎo)的神經(jīng)病變中作為機械和冷性異常疼痛的參與者。trpv1和trpa1的激活或敏化能提高cgrp和p物質(zhì)的釋放，而cgrp和p物質(zhì)均能引起神經(jīng)源性炎癥和t細胞的聚集。

辣椒素是一種高選擇性瞬時受體電位香草酸受體1(trpv1，前身為香草酸受體1(vr1))激動劑，一種配體門控的非選擇性陽離子通道，優(yōu)先表達在小直徑的感覺神經(jīng)元，尤其是那些專門檢測疼痛或傷害感覺的c纖維。trpv1對傷害性刺激包括辣椒素、熱和細胞外酸化有響應(yīng)，并將與同時接觸的這些刺激物結(jié)合在一起。激活trpv1表達(辣椒素敏感)的傷害性感受器的初步影響有燒灼感、痛覺過敏、異常疼痛和紅斑。然而，長期接觸低濃度辣椒素或單次接觸高濃度辣椒素或其他trpv1激動劑后，小直徑的感覺神經(jīng)元對各種刺激，包括辣椒素或熱刺激變得不敏感。這種長期接觸的特點也是降低疼痛響應(yīng)。這種辣椒素的后期效應(yīng)經(jīng)常被稱為“脫敏”，是開發(fā)用于治療各種疼痛綜合癥和其他疾病的局部辣椒素制劑的理論基礎(chǔ)。

到目前為止，兩類止痛藥主要被用于治療疼痛：非阿片類止痛藥，主要是對乙酰氨基酚和nsaids(非甾體類消炎藥)；阿片類(麻醉藥)激動劑(所述“阿片類”是一種天然或合成物質(zhì)的總稱，該物質(zhì)可結(jié)合到中樞神經(jīng)系統(tǒng)中特定的阿片受體，并產(chǎn)生激動作用)。不幸的是，兩類止痛藥，阿片類和非阿片類，都有一些不想要的副作用。阿片類最嚴重的副作用是呼吸系統(tǒng)抑制的可能性和長期治療后成癮的可能性。另一方面，nsaids,主要的非阿片類藥物，可以誘發(fā)多種胃腸道并發(fā)癥如潰瘍和出血，而且還有腎臟損傷(scholich和geisslinger，2006)。

因此，直到今天，還沒有找到特效的治療神經(jīng)病理性疼痛的療法。本發(fā)明的目的是提供新型止痛藥，以克服阿片類和nsaids的問題。

首先，上述問題通過白三烯b4受體2(blt2)激動劑來解決，所述blt2激動劑用于抑制受試者神經(jīng)系統(tǒng)感覺，其中所述神經(jīng)系統(tǒng)感覺通過瞬態(tài)電壓感受器陽離子通道子類v成員1(trpv1)的激活來介導(dǎo)。

據(jù)悉，白三烯(lt)b4導(dǎo)致疼痛，并且是中性粒細胞強有力的趨化因子，從而促進炎癥和誘導(dǎo)疼痛。兩個g-蛋白偶聯(lián)受體，blt1和blt2被證明可以被ltb4激活。先前顯示，blt1介導(dǎo)ltb4的趨化性和疼痛刺激作用。

已經(jīng)意外的發(fā)現(xiàn)，blt2激動劑的使用減少trpv1敏化(一個主要的傷害因子)，其被各種刺激如ltb4、pge2受體(ep4)配體以及緩激肽誘導(dǎo)的蛋白激酶a(pka)激活誘導(dǎo)。發(fā)明人已經(jīng)開發(fā)了一種新的工具來減少trpv1介導(dǎo)的感覺神經(jīng)元的激活，并提供新化合物，它們是有用的止痛藥。

本文中所使用的術(shù)語“blt2激動劑”是指導(dǎo)致blt2表達或活性的數(shù)量或比率增加的物質(zhì)。此類物質(zhì)可以直接起作用，例如通過結(jié)合blt2，并增加blt2表達或活性的數(shù)量或比率。blt2激動劑也能通過其它方式增加blt2表達或活性的數(shù)量或比率，例如，通過結(jié)合blt2這樣一種方式來增強或促進blt2與blt2配體的相互作用；通過結(jié)合并修飾blt2影響blt2激活，如誘導(dǎo)構(gòu)象變化，或除去或增加一部分；通過結(jié)合blt2并增加它的穩(wěn)定性。blt2激動劑也能間接起作用，例如通過結(jié)合調(diào)控分子或基因區(qū)域，從而調(diào)節(jié)調(diào)控蛋白或基因區(qū)域的功能，并影響blt2表達或活性的數(shù)量或比率的增加。因此，blt2激動劑可以通過任何導(dǎo)致blt2表達或活性的數(shù)量或比率增加的機制起作用。

blt2激動劑可以是，例如，一個天然或非天然產(chǎn)生的分子如多肽、肽、肽類、核酸、碳水化合物和脂類。blt2激動劑還可以是一個抗體或其抗原結(jié)合片段如單克隆抗體，人源化抗體、嵌合抗體、微抗體、雙功能抗體，單鏈抗體(scfv)，可變區(qū)片段(fv或fd)，fab或f(ab)2。blt2激動劑也可以是一個特定于blt2的多克隆抗體。blt2激動劑還可以是部分或全合成的衍生物、天然高分子的模擬或類似物、或者小的有機或無機分子。

blt2激動劑是一種抗體，該抗體可以，例如，結(jié)合blt2并通過模仿配體結(jié)合激活受體信號，或改變調(diào)節(jié)blt2表達或活性的分子的活性，致使blt2表達或活性的數(shù)量或比率增加。本發(fā)明方法中使用的抗體可以是天然產(chǎn)生的抗體包括單克隆或多克隆抗體或其片段，或非天然產(chǎn)生的抗體包括但不限于單鏈抗體、嵌合抗體、雙功能抗體、互補決定區(qū)嫁接(cdr-grafted)抗體，以及人源化抗體或其抗原結(jié)合片段。

根據(jù)本發(fā)明的blt2激動劑也是表達blt2蛋白或其功能性片段的表達結(jié)構(gòu)。術(shù)語“表達結(jié)構(gòu)”指用于轉(zhuǎn)錄成rna的任何雙鏈dna和雙鏈rna，例如，一個結(jié)構(gòu)包含至少一個可連接到下游感興趣的基因或編碼區(qū)的啟動子(例如，cdna或基因組dna片段，它們能編碼蛋白質(zhì)或任何感興趣的rna)，尤其是blt2基因或其片段。受體細胞中表達結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)染和表達允許細胞通過表達結(jié)構(gòu)表達rna或蛋白質(zhì)編碼。表達結(jié)構(gòu)可能是一個基因工程質(zhì)粒、病毒、人工染色體(來自于例如噬菌體、腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄酶病毒、痘病毒、皰疹病毒)、或在下面“表達載體”中描述的實施例。表達結(jié)構(gòu)能在活體細胞中被復(fù)制，或者它也能被合成。就本申請而言，術(shù)語“表達結(jié)構(gòu)”，“表達載體”，“載體”和“質(zhì)粒”被互換使用，目的在于一般性、說明性地解釋本發(fā)明申請，并不旨在限制本發(fā)明表達結(jié)構(gòu)為特別的類型。此外，術(shù)語表達結(jié)構(gòu)或載體也旨在包括實例，其用于檢測的細胞已經(jīng)內(nèi)源性地包括這些dna序列。特別優(yōu)選的是，表達結(jié)構(gòu)特定地允許blt2在感覺神經(jīng)元中表達。

本文中所使用的“表達”包括多核苷酸轉(zhuǎn)錄為mrna并翻譯成肽、多肽或蛋白質(zhì)的過程。如果多核苷酸來自基因組dna，且選擇合適的宿主，表達可能包括mrna的剪接。表達所需要的調(diào)控因子包括結(jié)合rna聚合酶的啟動子序列和與核糖體結(jié)合的轉(zhuǎn)錄起始序列。例如，細菌表達載體包括啟動子如lac啟動子、用于轉(zhuǎn)錄shine-dalgrarno的起始序列、以及起始密碼子aug(sambrook，j。，fritsh,e.f.,andmaniatis,t.,molecularcloning:alaboratorymanual.2^nd,ed.,coldspringharborlaboratory,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,n.y.,1989)。同樣的，真核表達載體包括異源或同源的rna聚合酶ii啟動子、下游多聚腺苷酸化信號、起始密碼子aug和用于核糖體脫離的終止密碼子。這些載體可以商業(yè)上獲得，也可以通過現(xiàn)有技術(shù)已知的序列重組方法獲得，例如，下面描述的一般構(gòu)建載體的方法。

在一些實施例中，blt2激動劑是一種化合物，當其接觸外周神經(jīng)元時，能夠通過ltb4或pka降低trpv1敏化。例如，這可以在下述實施例3和實施例4提供的實驗裝置中進行測試。總之，drg神經(jīng)元與候選blt2激動劑，連同ltb4或pka激活劑(如onoae329)一起孵化。辣椒素刺激后，檢測到細胞內(nèi)鈣增加。如果與對比化合物相比，使用候選blt2激動劑孵育能降低細胞內(nèi)鈣的增加，那么所述候選化合物是根據(jù)本發(fā)明的blt2激動劑。

在本發(fā)明優(yōu)選的實施例中，blt2激動劑不是blt1激動劑；優(yōu)選的，blt2激動劑是選擇性的blt2激動劑；或者更優(yōu)選的，blt2激動劑也是一種blt1拮抗劑。

本發(fā)明優(yōu)選的blt2激動劑是4’-[[(氧代戊基)苯胺]甲基]-[1,1’-聯(lián)苯]-2-羧酸(cay10583)，以及該化合物的衍生物、類似物和鹽。

blt2激動劑可以選自wo2005/102388中公開的任何blt2激動劑。

在本發(fā)明優(yōu)選的實施例中，通過trpv1激活介導(dǎo)的神經(jīng)系統(tǒng)感覺是任何種類的疼痛。

本文中所使用的術(shù)語“疼痛”指的是一種不愉快的感覺。例如受試者感覺不適、悲痛或痛苦。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，不同痛苦的情況可以根據(jù)明顯相反的或其他有用的類型進行分類。相反類型的例子包括傷害性疼痛與非傷害性疼痛，以及急性疼痛與慢性疼痛。本領(lǐng)域技術(shù)人員所使用的其它常見類型疼痛的例子包括傷害性疼痛和幻痛。

本文中所使用的術(shù)語“傷害性”是指將有害的或潛在的有害刺激轉(zhuǎn)化成一種感覺。

本文中所使用的術(shù)語“傷害性疼痛”是指外周神經(jīng)系統(tǒng)中初級感覺疼痛纖維激活引起的疼痛。外周神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元通常對有害的或痛苦的刺激有響應(yīng)，因此通常被稱為傷害感受器或傷害性神經(jīng)元。此外，傷害性途徑延伸到軀體感覺皮層。

本文中所使用的術(shù)語“非傷害性疼痛”是指中樞神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)元激活引起的疼痛。引起非傷害性疼痛的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)元的例子包括，脊髓背角神經(jīng)元如中間神經(jīng)元和投射神經(jīng)元，或已知參與疼痛感覺的大腦部分的神經(jīng)元如延髓頭端腹內(nèi)側(cè)區(qū)(rvm)和導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)(pag)。

本文中所使用的術(shù)語“急性疼痛”是指短暫的或持續(xù)少于一個月的疼痛。急性疼痛通常與直接傷害過程有關(guān)，如軟組織損傷、感染、或炎癥，目的在于通知動物有害因素，從而治療和預(yù)防進一步的傷害。

本文中所使用的術(shù)語“慢性疼痛”是指持續(xù)時間超過一個月、或超過急性組織損傷的分辨率、或復(fù)發(fā)的、或與組織損傷和/或慢性疾病有關(guān)的疼痛。所述慢性疾病預(yù)計會繼續(xù)或發(fā)展，其例子包括癌癥、關(guān)節(jié)炎、炎癥疾病、慢性創(chuàng)面、心血管意外、脊髓病變、中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變或術(shù)后恢復(fù)。

本文中所使用的術(shù)語“神經(jīng)病變”是指對神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能產(chǎn)生不利影響的任何因素。神經(jīng)病變可以發(fā)生在中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)的任何地方，但只有在某些情況下才產(chǎn)生神經(jīng)病理性疼痛。

本文中所使用的術(shù)語“神經(jīng)病理性疼痛”是指神經(jīng)系統(tǒng)本身受損或功能異常所引起的疼痛，它可以獨立存在于神經(jīng)系統(tǒng)以外的任何形式的組織損傷?？蓪?dǎo)致神經(jīng)病理性疼痛的因素的例子包括疾病(例如，hiv、皰疹、糖尿病、癌癥、自身免疫疾病)，急性創(chuàng)傷(外科手術(shù)、傷害、觸電)和慢性創(chuàng)傷(重復(fù)性運動障礙、化學(xué)毒性，如乙醇、化療和重金屬)。

本文中所使用的術(shù)語“幻痛”是指一種情況，即病人感覺身體的一部分疼痛，而身體的這部分不是因截肢而不存在，就是因外周神經(jīng)全部破壞而完全無感。

本文中所使用的術(shù)語“痛覺過敏”是指對傷害性或疼痛性刺激的敏感度增加。這里所使用的術(shù)語“異常疼痛”描述了一種情況，即正常的非傷害性刺激被認為是疼痛的。痛覺過敏和異常疼痛均可分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩種類型或情況。原發(fā)性痛覺過敏/異常疼痛是指，已經(jīng)發(fā)生了組織損傷的身體區(qū)域?qū)μ弁春拖惹胺翘弁创碳さ拿舾行栽黾?。繼發(fā)性痛覺過敏/異常疼痛是指全局性的疼痛敏感性增加，其需要從大腦中的各種疼痛處理中心下行輸入到外圍。

本發(fā)明的另一個實施例還涉及上述blt2激動劑的用途，其中所述blt2激動劑與至少一種其它抑制trpv1敏化的化合物組合使用。

根據(jù)本發(fā)明，為了預(yù)防和治療疼痛，blt2激動劑被施用給疑似或者正在經(jīng)歷疼痛的受試者。進一步更有選的是，給疑似或者正在經(jīng)歷疼痛的受試者進一步施用至少一種其它抑制trpv1敏化的化合物。

在本發(fā)明的背景中，所述至少一種其它抑制trpv1敏化的化合物優(yōu)選為白三烯b4受體1(blt1)拮抗劑或抑制劑。

通過用于預(yù)防和治療疼痛的組合物，現(xiàn)有疼痛治療的問題被進一步解決，其中所述組合物包括(i)如上文所述的blt2激動劑和(ii)至少一種其它抑制trpv1敏化的化合物。優(yōu)選地，所述至少一種其它抑制trpv1敏化的化合物是blt1拮抗劑或抑制劑(見上文)。最優(yōu)選的，所述組合物包括blt2激動劑和blt1拮抗劑。

在本發(fā)明的背景中，術(shù)語“組合物”指在一個配方中，兩種或兩種以上活性物質(zhì)的組合，同時也指在治療中個性化配方意義上的組合物，所述個性化配方為活性物質(zhì)之間間隔固定的時間給藥。因此，術(shù)語“組合物”應(yīng)該包括兩個或兩個以上有療效化合物的聯(lián)合用藥的臨床現(xiàn)實，正如本發(fā)明的背景中描述的。

聯(lián)合用藥：在本發(fā)明的背景中，兩種或兩種以上的化合物的聯(lián)合用藥被定義為在一年內(nèi)給病人用藥兩種或兩種以上化合物，包括兩種或兩種以上藥物的分別給藥和同時給藥，其中每種所述藥物都含有所述化合物中的一種，不管兩種或兩種以上的化合物是合并在一個配方或它們是在兩個或兩個以上獨立的配方中。

本發(fā)明一個實施例中，所述組合物包括，在所述預(yù)防和治療過程中，通過給受試者連續(xù)或同時給藥將(i)和(ii)組合在一起。優(yōu)選的，在所述預(yù)防和治療過程中，所述拮抗劑和化療藥物同時給藥。

本文中所使用的術(shù)語“blt1拮抗劑”是指導(dǎo)致blt1表達或活性的數(shù)量或比率降低的物質(zhì)。此類物質(zhì)可以直接起作用，例如通過結(jié)合blt1，并降低blt1表達或活性的數(shù)量或比率。blt1拮抗劑也能通過其它方式降低blt1表達或活性的數(shù)量或比率，例如通過結(jié)合blt1這樣一種方式來減少或阻止blt1與blt1配體的相互作用；通過結(jié)合并修飾blt1，如除去或增加一部分；通過結(jié)合blt1并降低它的穩(wěn)定性等。blt1拮抗劑也能間接起作用，例如通過結(jié)合調(diào)控分子或基因區(qū)域，從而調(diào)節(jié)調(diào)控蛋白或基因區(qū)域的功能，并導(dǎo)致blt1表達或活性的數(shù)量或比率的降低。因此，blt1拮抗劑可以通過任何導(dǎo)致blt1表達或活性的數(shù)量或比率降低的機制起作用。

blt1拮抗劑可以是，例如，一個天然或非天然產(chǎn)生的分子如多肽、肽、肽類、核酸、碳水化合物和脂類。blt1拮抗劑還可以是一個抗體或其抗原結(jié)合片段如單克隆抗體，人源化抗體、嵌合抗體、微抗體、雙功能抗體，單鏈抗體(scfv)，可變區(qū)片段(fv或fd)，fab或f(ab)2。blt1拮抗劑也可以是一個特定于blt1的多克隆抗體。blt1拮抗劑還可以是部分或全合成的衍生物、天然高分子的模擬或類似物、或者小的有機或無機分子。

blt1拮抗劑是一種抗體，該抗體可以，例如，結(jié)合blt1并抑制結(jié)合到blt1配體，或改變調(diào)節(jié)blt1表達或活性的分子的活性，致使blt2表達或活性的數(shù)量和比率被降低。本發(fā)明方法中使用的抗體可以是天然產(chǎn)生的抗體包括單克隆或多克隆抗體或其片段，或非天然產(chǎn)生的抗體包括但不限于單鏈抗體、嵌合抗體、雙功能抗體，互補決定區(qū)嫁接(cdr-grafted)抗體，以及人源化抗體或其抗原結(jié)合片段。

本發(fā)明中的blt1拮抗劑也可以是，例如，反義核苷酸序列、rna分子、或適配子序列。在細胞內(nèi)反義核苷酸序列能結(jié)合核苷酸序列，并調(diào)節(jié)blt1表達的水平，blt1配體調(diào)節(jié)其它控制blt1表達或活性的基因的表達。同樣的，rna分子如催化核酶，能結(jié)合和改變blt1基因或其它控制blt1表達或活性的基因的表達。核酸適配體是一種核酸序列，其有三個尺寸可以結(jié)合到目標分子。

是核苷酸的blt1拮抗劑也可以是用于rna干擾方法的雙鏈rna分子。rna干擾(rnai)是rna降解轉(zhuǎn)錄后序列特異性的基因沉默過程，其通過同源性雙鏈rna(dsrna)序列啟動基因沉默。適用于rnai的雙鏈rna(dsrna)包含大約21個連續(xù)核苷酸的正義和反義鏈，其對應(yīng)靶向形成19個rna堿基對的基因，剩下的兩個核苷酸懸在每個3’末端(elbashir等,nature411:494-498(2001)；bass,nature411:428-429(2001)；zamore,nat.struct.biol.8:746-750(2001))。大約25-30個核苷酸也被成功用于rnai(karabinos等，proc.natl.acad.sci.usa98:7863-7868(2001))。dsrna可以在體外合成并通過現(xiàn)有的方法引入細胞。

本發(fā)明優(yōu)選的blt1拮抗劑為6-(6-(3r-羥基-1e,5z-十一烯-1-基)-2吡啶基)-1,5s己二醇(u75302)。在本發(fā)明的背景中，其它有用的blt1和/或ltb4拮抗劑(或抑制劑)為化合物ly293111、ono4057、cp195543、cgs25019c、biomed101、biil284bs、dw1350、ly255283和上述任何類似物。

根據(jù)本發(fā)明可替代的實施例，也涉及trpv1介導(dǎo)的感覺，其為味覺、皮膚癢、灼熱感或者傷害性(疼痛)感覺。如上面所述的，所述疼痛可以選自炎癥性疼痛、炎癥性痛覺過敏、痛覺過敏、神經(jīng)痛、偏頭痛、癌癥疼痛、內(nèi)臟痛、骨關(guān)節(jié)炎痛、慢性疼痛和術(shù)后疼痛。然而，神經(jīng)病理性疼痛是最優(yōu)選的。

神經(jīng)病理性疼痛可以選自外周神經(jīng)疼痛綜合癥、化療引起的周圍神經(jīng)病變、復(fù)雜區(qū)域疼痛綜合癥、hiv感覺神經(jīng)病變、繼發(fā)于腫瘤浸潤的神經(jīng)病變、疼痛性糖尿病神經(jīng)病變、幻肢疼痛、皰疹后神經(jīng)痛、術(shù)后疼痛、三叉神經(jīng)痛、中樞神經(jīng)疼痛綜合癥、中樞性卒中后疼痛、多發(fā)性硬化癥疼痛、帕金森病疼痛或者脊髓損傷疼痛。

本發(fā)明另一方面提供了一種用于預(yù)防和治療疼痛的藥物組合物，其包括本發(fā)明所定義的blt2激動劑或本發(fā)明所定義的組合物。所述藥物組合物可以進一步包括藥學(xué)上可接受的載體和/或輔藥。

用于治療和預(yù)防疼痛的藥物組合物和試劑盒也構(gòu)成本發(fā)明的一部分。在一些實施例中，所述制劑包括上述的blt2激動劑。

本文中所使用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”包括所有溶劑、增溶劑、填料、穩(wěn)定劑、粘合劑、吸附劑、基質(zhì)、緩沖劑、潤滑劑、控釋賦形劑，稀釋劑、乳化劑、保濕劑、潤滑劑、分散介質(zhì)、涂料、抗菌和抗真菌劑、等滲劑，以及吸收延緩劑等，其符合藥事管理。此種用于藥物活性物質(zhì)的媒介和試劑的使用是本領(lǐng)域所熟知的。除非任何常規(guī)媒介或試劑與活性化合物配伍禁忌，否則將其用于所述制劑是被考慮接受的。補充劑也可以加入到所述制劑中。在某些實施例中，藥學(xué)上可接受的載體包括血清白蛋白。

將本發(fā)明的藥物組合物配制成與其所期望的給藥途徑相容。給藥途徑的例子包括腸胃外，例如鞘內(nèi)、動脈、靜脈、皮內(nèi)、皮下、口服、經(jīng)皮(局部)和經(jīng)粘膜給藥。

用于腸胃外，皮內(nèi)或皮下使用的溶液或懸浮液可以包括以下組分：無菌稀釋劑如注射用水、生理鹽水、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑如苯甲醇或甲基對羥基苯甲酸酯；抗氧化劑如抗壞血酸或硫酸氫鈉；螯合劑如乙二胺四乙酸；緩沖劑如醋酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；以及調(diào)節(jié)張力的制劑劑如氯化鈉或葡萄糖?？梢杂盟峄驂A，如鹽酸或氫氧化鈉，來調(diào)節(jié)ph?？梢詫⒛c胃外制劑裝入安瓶、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多劑量小瓶。

適用注射使用的藥物組合物包括無菌水溶液(其中水溶性的)或分散體，以及用于臨時制備無菌可注射溶液或分散體的無菌粉末。用于靜脈內(nèi)給藥，適宜的載體包括生理鹽水、抑菌水、cremophorel^tm(basf,parsippany,n.j.)或磷酸鹽緩沖溶液(pbs)。在所有情況下，制劑必須是無菌的，并且應(yīng)該是流體可達到容易注射的程度。它在制備和貯藏條件下必須是穩(wěn)定的，并且必須防止它受到微生物如細菌和真菌的污染。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，其包括例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇及液體聚乙二醇等)，以及它們適宜的混合物。例如，通過使用涂料如卵磷脂、在分散體的情況下通過保持所需的顆大小，以及使用表面活性劑，可以保持適當?shù)牧鲃有浴？梢酝ㄟ^各種抗菌和抗真菌劑，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等，來防止微生物的作用。在許多情況下，優(yōu)選的組合物包括等滲劑，例如糖、多元醇(如甘露醇、山梨醇)、氯化鈉?？梢酝ㄟ^在組合物中包括延緩吸收的試劑，例如硬脂酸鋁和明膠，來延長可注射組合物的吸收。

可以通過將所需量的活性化合物(例如神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白)加入包含上述的一種或多種輔料的適當溶劑中，當要求時，接著過濾滅菌，來制備無菌可注射液。通常，通過將活性化合物加入無菌賦形劑來制備分散體，其中無菌賦形劑包含基本的分散介質(zhì)和需要的其它上述輔料。在用于制備無菌可注射液的無菌粉末得情況，優(yōu)選的制備方法為真空干燥和冷干，此方法將先前無菌過濾得到的活性成分加上其它的所需輔料的溶液制成粉末。

口服制劑通常包括惰性稀釋劑和可食用載體，可以將它們裝入明膠膠囊或壓制成片劑。對口服治療給藥來說，活性化合物可以結(jié)合于輔藥并以片劑、含片或膠囊的形式加以使用。還可以用流體載體來制備口服制劑，用作漱口劑，其中所述液體載體中的化合物被口服使用和發(fā)出嘩嘩聲，并且被吐出或咽下。藥學(xué)上相容的粘合劑，和/或輔助材料可以作為制劑的一部分。片劑、丸劑、膠囊劑、含片等可以包含任何以下輔料，或類似性質(zhì)的化合物：粘合劑如微晶纖維素、黃蓍樹膠或明膠；輔藥如淀粉或乳糖；崩解劑如海藻酸、primogel或玉米淀粉；潤滑劑如硬脂酸鎂或sterotes；助流劑如二氧化硅(膠體)；甜味劑如蔗糖和糖精；或調(diào)味劑如薄荷、水楊酸甲酯或橙味香料。

為了通過吸入給藥，可以以噴霧劑的形式遞送化合物，其中噴霧劑來自加壓容器或分配器(其含有適宜的推進劑，例如，氣體如二氧化碳)或霧化器。

也可以通過粘膜或經(jīng)皮膚方式進行系統(tǒng)給藥。為了經(jīng)粘膜或經(jīng)皮膚給藥，可以在劑型中使用適合于待滲透屏障的滲透劑。這樣的滲透劑在本領(lǐng)域通常是已知的，并且包括，例如用于經(jīng)粘膜給藥的清潔劑、膽鹽，以及梭鏈孢酸衍生物。經(jīng)粘膜給藥可以通過鼻腔噴霧劑或栓劑的使用來完成。如本領(lǐng)域通常所知的，為了經(jīng)皮膚給藥，所述藥物組合物可被配制成油膏劑、藥膏、凝膠劑或乳膏劑。

在一些實施例中，所述藥物組合物被制成緩釋或控釋制劑?？梢允褂蒙锟山到獾?、生物相容的聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯、以及聚乳酸。用于制備此類劑型的方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。這些原料還可以商業(yè)上獲自，例如，alza公司、nova藥物股份有限公司。脂質(zhì)體懸浮液(包括靶向感染細胞的脂質(zhì)體，其具有相對于病毒抗原的單克隆抗體)也可以用作藥學(xué)上可接受的載體。這些脂質(zhì)體懸浮液可以按照本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備。

尤其有利的是，以劑量單位形式配制口服或腸胃外制劑，以便于給藥并實現(xiàn)劑量的均勻性。如在本文中所使用的，劑量單位形式是指適合于作為單位劑量的物理上分離的單位，用于待治療的受試者；每個單位包含預(yù)定量的活性化合物，用來連同所需要的藥物載體而產(chǎn)生所期望的治療效果。對本發(fā)明的劑量單位形式的技術(shù)要求受控于并依賴于活性化合物的獨特的特性和要達到的特定的治療效果、以及在復(fù)合這樣的用于治療個體的活性化合物的技術(shù)領(lǐng)域中所固有的限制。

可以在細胞培養(yǎng)或?qū)嶒瀯游镏?，通過例如用于確定ld50(導(dǎo)致50％的群體死亡的劑量)和ed50(可有效治療50％的群體的劑量)的標準制藥程序來確定上述化合物的毒性和治療效力。毒性和治療效果之間的劑量比率是治療指數(shù)并且它可以表示為比率ld50/ed50。呈現(xiàn)較大治療指數(shù)的化合物是優(yōu)選的。雖然可以使用呈現(xiàn)毒性副作用的化合物，但應(yīng)當小心設(shè)計這樣的遞送系統(tǒng)，其將上述化合物靶向受影響組織的部位以將對未感染細胞的潛在損傷降低到最小程度，從而降低副作用。

獲自細胞培養(yǎng)測定和動物研究的數(shù)據(jù)可以用于制定供人類之用的劑量范圍。上述化合物的劑量優(yōu)選在循環(huán)濃度的范圍內(nèi)，其中循環(huán)濃度包括ed50并具有很小或沒有毒性。劑量可以在該范圍內(nèi)變化，其取決于所采用的劑型和所使用的給藥途徑。對于在本發(fā)明的方法中所使用的任何一種化合物，可以最初根據(jù)細胞培養(yǎng)測定來估計治療有效劑量?？梢栽趧游锬Ｐ椭信渲埔环N劑量以達到這樣的循環(huán)血漿濃度范圍，其包括ic50(即，試驗化合物的濃度，其達到癥狀的半最大抑制)，如在細胞培養(yǎng)中確定的。上述信息可以用來更精確地確定在人類中的有用劑量。可以將藥物組合物與給藥說明書包括在容器，包裝，或分配器中。

本發(fā)明中上述的技術(shù)問題也可以進一步通過用于細胞中trpv1脫敏的方法來解決，其中所述方法包括blt2激活的步驟。細胞中blt2激活更可能受到細胞和有效量的blt2激動劑接觸的影響。

本文中，“細胞”優(yōu)選為blt2表達細胞；優(yōu)選的，其中所述細胞為神經(jīng)元；優(yōu)選的，為外周神經(jīng)元；更優(yōu)選的，為背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元(drg)。

涉及上述方法的一些實施例是活體外或體外方法。

本發(fā)明的另一方面涉及一種用于給需要此類治療的受試者trpv1脫敏的方法，所述方法包括給所述受試者使用有效量的blt2激動劑的步驟。所述脫敏是trpv1介導(dǎo)的感覺的脫敏，這些感覺優(yōu)選為癢、灼熱、味覺或疼痛。

本發(fā)明的一些實施例中，所述方法用于治療和預(yù)防受試者疼痛。

優(yōu)選的方法進一步包括給所述受試者施用治療有效量的trpv1拮抗劑和/或blt1拮抗劑。

在本發(fā)明的背景中，術(shù)語“受試者”優(yōu)選指哺乳動物；更優(yōu)選的，指人。本發(fā)明的受試者可能處于遭受疼痛的危險之中或正在遭受疼痛，其中所述疼痛如上述定義。

本發(fā)明所描述的拮抗劑優(yōu)選自此類化合物，包括抑制性rna、抑制性抗體或其片段、和/或小分子。

在本發(fā)明的背景中，優(yōu)選的，至少一種其它有效疼痛治療劑如嗎啡、阿片類或非阿片類止痛藥、或其它止痛藥被施用給所述受試者。

本發(fā)明的另一方面，提供了一種預(yù)防和治療受試者疼痛的方法，該方法包括給所述受試者施用治療有效量的根據(jù)本發(fā)明的lbt2激動劑的步驟。

上述方法中可治療的疾病在上面已被描述。

治療和預(yù)防過程中，優(yōu)選的是，至少一種其它有效的疼痛治療劑如其它止痛藥(例如阿片類或非阿片類止痛藥)被施用給所述受試者。

本發(fā)明的另外一個方面涉及一種用于降低受試者瞬態(tài)電壓感受器陽離子通道子類v成員1(trpv1)敏感度的方法，包括給所述受試者施用治療有效量的blt2激動劑。

下面將在有參考附圖和序號的例子中進一步描述本發(fā)明，但不限于此。為了本發(fā)明的目的，這里引用的所有參考資料均已引用的方式結(jié)合于全文。在附圖中：

圖1：ltb4劑量依賴性地敏化drg神經(jīng)元中的trpv1。(a)drg神經(jīng)元用辣椒素刺激兩次(200nm,每次15秒)，并在第二次辣椒素刺激之前，用賦形劑或ltb4孵育2分鐘。(b)使用(a)中描述的方案，第一次和第二次辣椒素響應(yīng)的劑量依賴性差異比。數(shù)據(jù)代表神經(jīng)元數(shù)(n＝20-86)的均值標準差；kruskal-wallis檢測方差分析；dunn’s多重比較檢驗；*p<0.05，****p<0.0001t分布檢驗。

圖2：在外周神經(jīng)元中，blt1和blt2共同表達。制備一天后的drg神經(jīng)元的melc分析圖像。blt1、blt2、凝集素ib4和cgrp的圖像被顯示為虛的，白色棒代表xxμm,ib4陽性神經(jīng)元(n＝179)和cgrp陽性神經(jīng)元(n＝111)的百分比表達blt1或blt2。

圖3：使用ltb4，blt1介導(dǎo)trpv1敏化，且blt2介導(dǎo)trpv1脫敏。(a)drg神經(jīng)元用辣椒素刺激兩次(200nm，每次15秒)，且在第二次辣椒素刺激前，用賦形劑或指定的化合物孵育2分鐘。使用blt1拮抗劑(u73502，1μm)或blt2激動劑(cay10583，400nm)預(yù)孵育后，ltb4(100nm或1μm)能降低trpv1敏化。然而，blt2拮抗劑(ly2552833，10μm)能增加trpv1敏化。數(shù)據(jù)代表20-105個細胞的均值標準差；kruskal-wallis檢測方差分析；dunn’s多重比較檢驗；*p<0.05,**p<0.01，****p<0.0001，t分布檢驗；不顯著。

圖4：通過ep4和緩激肽激活lbt2來抑制trpv1脫敏。(a)drg神經(jīng)元用辣椒素刺激兩次(200nm，每次15秒)，且在第二次辣椒素刺激前，用ep4激動劑onoae329(500nm)，或onoae329和cya10583(400nm)孵育2分鐘。(b)使用a組中描述的方案，第一次和第二次辣椒素響應(yīng)的差異比，數(shù)據(jù)代表下面神經(jīng)元數(shù)的均值標準差：52(賦形劑)，109(onoae329)，106(onoae329+cya10583)；單因素方差分析；dunn’s多重比較檢驗；**p<0.0096。(c+d)除了500nm的緩激肽被用于trpv1敏化外，其余的均和a+b方案相同，數(shù)據(jù)代表下面神經(jīng)元數(shù)的均值標準差：33(賦形劑)，83(onoae329)，93(onoae329+cya10583)；單因素方差分析；holm-sidak’s多重比較檢驗；*p＝0,0126。

圖5：激活blt2降低小鼠熱疼痛閾值。cay10583(10μl,5μm)或賦形劑被爪底注射給藥。在指定的時間點熱閾值被確定。數(shù)據(jù)代表6個動物的均值標準差：雙向方差分析/bonferroni；*p<0.05，**p<0.005，****p<0.0005。

實施例

材料和方法

動物：

所有的實驗動物根據(jù)美國國立衛(wèi)生研究院實驗動物指南和使用指南中的建議執(zhí)行，并由當?shù)氐膫惱砦瘑T會批準用于動物研究(darmstadt)。對于所有的行為實驗，發(fā)明人使用6-12周齡的雄性c57bl/6n小鼠，其購買于商業(yè)育種公司(clarlesriver,sulzfeld,germany,janvier,legeneset-saint-isle,fr)。為了比較機械閾值，發(fā)明人使用年齡和性別相匹配的同窩仔畜加以控制。

行為檢測：

對機械性異常疼痛或熱過敏的測定，小鼠被留宿在高架網(wǎng)格上的測試籠中至少2小時，基線測量被用于熱閾值的測定，其通過使用hargreaves裝置(ugobasile,comerio,va,italy)檢測機械刺激后后爪縮回潛伏期。第一天，小鼠被留宿在熱玻璃板上(32℃)的測試籠中至少2小時，然后使用由高強度的投影燈構(gòu)成的輻射熱裝置刺激足底中部區(qū)域，直到縮回發(fā)生。在5-10分鐘的時間內(nèi)，對未注射和注射的爪子交替進行測量。對于所有的行為測試，研究者對小鼠的治療或基因型是不知情的。10μl的ltb4(5μm)，cay10583(5μm)或賦形劑被爪底注射。

初級背根神經(jīng)節(jié)(drg)培養(yǎng)：

小鼠的drgs取自脊髓節(jié)段，并直接轉(zhuǎn)移到冰冷的包含cacl2和mgcl2的平衡鹽溶液(invitrogen,carsbad,ca,usa)中。接下來，在含有l(wèi)-谷氨酰胺(2nm)、青霉素(100u/ml)、鏈霉素(100g/ml)、b-27和慶大霉素(50μg/ml)(都來自于invitrogen,carsbad,ca,usa)的培養(yǎng)基中，分離的drgs在37℃下，被膠原酶/中性蛋白酶(500u/ml膠原酶；2.5u/ml中性蛋白酶)孵育75分鐘。除去膠原酶/中性蛋白酶溶液后，細胞用含有10％fcs的培養(yǎng)基清洗兩次，在用0.05％胰蛋白酶(invitrogen,carsbad,ca,usa)孵育10分鐘。兩次清洗的步驟被重復(fù)，并使用1mlgilson移液器將細胞進行機械分離。最后，神經(jīng)元被接種在多聚賴氨酸包被的蓋玻片上，并在含有l(wèi)-谷氨酰胺(2nm)、青霉素(100u/ml)、鏈霉素(100g/ml)、b-27和慶大霉素(50μg/ml)的培養(yǎng)基中孵育過夜，直至通過鈣離子成像評估。

鈣離子成像：

鈣離子成像實驗按照已發(fā)布的方法操作。簡單的說，使用了leica鈣離子成像裝置，其包括，配備了dfc360fx(ccd-)相機的leicadmi4000b倒置顯微鏡、fura-2的過濾器和nplan10x/0.25ph1物鏡(所有的均來自于leicamicrosystems,wetzlar,germany)。每2秒成像一次，并用lasaf軟件處理。對于每個實驗，發(fā)明人選擇有大量細胞的區(qū)域，并同時監(jiān)測40至110個細胞。鈣離子成像實驗使用已制備好24至48小時的drg神經(jīng)元。用5μmfura-2-am-ester和0.02％的pluronicf-127(均來自于biotium,hayward,ca)充滿細胞，并在37℃孵育30到60分鐘，然后使用外用溶液(包括，單位為mm,nacl[145],cacl2[1.25],mgcl2[1],kcl[5],d-葡萄糖[10],hepes[10]),ph值為7.3)清洗)。基線測量以1-2ml/min的流速在外用溶液中完成。用辣椒素(200nm)刺激神經(jīng)元，其需要用ltb4(100-1000nm)，blt2激動劑cay10583(400nm)，blt2拮抗劑ly2552833(10μm)，或blt1拮抗劑u75302(1μm)進行2分鐘的預(yù)處理。

多表位配體圖譜(melc)：

melc技術(shù)已經(jīng)被描述過(pierre等，2008；pierre,2010)。10μl的ltb4，cay10583或載體被注射入后爪，在指定的時間點殺死動物，水腫爪被放入組織冷凍劑(leicamicrosystemnussloch,germany)中，使用leicacm3050低溫恒溫器(-20℃，leica,wetzlar,germany)切成10μm厚冷凍切片，并將其放在硅烷包被的蓋玻片上。組織被固定在4％多聚甲醛的pbs中，用0.1％triton的pbs透化，并在室溫下，用3％bsa的pbs封閉1個小時。樣品被放置在一個倒置的寬視場的熒光顯微鏡(leicadmire2；x63oillensna1.32)的操作臺上。使用抗體之前的圖片被取得。通過一個自動程序，首先用預(yù)定的熒光標記的抗體(補充數(shù)據(jù)1)將切片孵育15min，再用pbs沖洗。隨后，相位對比度和熒光信號通過冷卻電荷耦合器件照相機(apogeekx4；apogeeinstruments,roseville,ca,2x分級模式生成1024×1024像素的圖像；最后的像素大小為286×286nm²)。為了在加入下一個之前刪除抗體的特定信號，漂白步驟被執(zhí)行，在數(shù)據(jù)分析過程中，漂白后的圖像被記錄，并從下面熒光標記的圖像中去掉。使用相應(yīng)的相襯圖像，每個抗體產(chǎn)生的熒光圖像像素對齊。使用平場校正，圖像糾正了照明故障。

數(shù)據(jù)分析及統(tǒng)計：

所有的數(shù)據(jù)代表均值標準差。為了確定所有的行為實驗的方差分析(anova)有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異，重復(fù)測量被使用，隨后使用graphpad棱鏡進行事后bonferroni校正。對于只有兩組的體外實驗比較，t分布檢驗被進行。p<0.05被認為有統(tǒng)計學(xué)顯著性。

實施例1：ltb4濃度增加降低了ltb4介導(dǎo)的trpv1敏化

ltb4在高濃度trpv1的條件下被激活已被證明。在這一點上，發(fā)明人研究在低濃度下，是否ltb4能敏化trpv1激活。因此，發(fā)明人用選擇性trpv1激動劑辣椒素刺激小鼠drg神經(jīng)元的原代培養(yǎng)兩次，并在第二次刺激前，用濃度增加的ltb4孵育細胞。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)用100nmltb4預(yù)孵育將辣椒素誘導(dǎo)的細胞內(nèi)鈣離子增加一倍(圖1a，b)。出乎意料的，當時用高濃度(200-1000nm；圖1b)ltb4時，對于ltb4響應(yīng)的增加被降低。

ltb4誘導(dǎo)trpv1敏化的窄的濃度范圍導(dǎo)致我們假定ltb4受體、高親和力受體blt1和低親和力受體blt2均對trpv1敏化起到相反的作用。因此，在低濃度(10nm)ltb4下，敏化可能被高親和力ltb4受體blt1介導(dǎo)。隨著ltb4濃度增加，低親和力ltb4受體blt2可能被激活并降低tpv1敏化。

實施例2：感覺神經(jīng)元中blt2的表達

下一步，drg神經(jīng)元中blt1和blt2的表達被確定。使用表明，使用melc系統(tǒng)的連續(xù)免疫組織化學(xué)顯示在小鼠drg神經(jīng)元中blt1和blt2共存(圖2)。blt1和blt2表達神經(jīng)元是感覺神經(jīng)元，因為他們也表達降鈣素基因相關(guān)肽(cgrp)(肽能感覺神經(jīng)元的標記物)或凝集素b4(ib4)(非肽能感覺神經(jīng)元的標記物)(圖2)?？偣布s40％的所有ib4和cgrp表達的神經(jīng)元也表達blt1和blt2。

實施例3：blt2激動劑cay10583消除了ltb4介導(dǎo)的trpv1敏化

為了研究是否blt1介導(dǎo)trpv1敏化，發(fā)明人檢測了blt1拮抗劑u75302對于ltb4誘導(dǎo)的trpv1敏化。事實上，u75302能消除被100nmltb4介導(dǎo)的trpv1敏化(圖3)。然后，發(fā)明人研究了blt2拮抗劑ly2552833對于trpv1敏化的作用。按照這個觀點，blt2降低了trpv1敏化；ly255833對于被100nmltb4引起的trpv1敏化沒有顯著效果，但是可以降低被1000nmltb4引起的trpv1敏化(圖3).最后，blt2激動劑cay10583本身對于辣椒素誘發(fā)的trpv1激活沒有影響，但通過100nmltb4消除了trpv1敏化(圖3)。

實施例4：blt2激動劑cay10583消除了onoae329和pkc介導(dǎo)的trpv1敏化。

然后，通過已知用于敏化trpv1的受體激活信號通路研究blt2激動劑cay10583對于trpv1敏化的影響。因此，使用pge2受體4(ep4)onoae329敏化trpv1。在這一點上，通過增加camp的合成達到敏化，隨后蛋白激酶(pka)激活，且trpv1磷酸化(bhave等，2002)。用onoae329預(yù)處理的小鼠drg神經(jīng)元對響應(yīng)辣椒素的trpv1誘導(dǎo)了一個強的敏化，這種現(xiàn)象在blt2激動劑cay10583存在時消除了(圖4a，b)。同樣的，緩激肽介導(dǎo)的透過pkc的trpv1磷酸化和敏化在cay10583存在時顯著下降(圖4c，d)。

實施例5：blt2激動劑cay10583減少了大鼠的疼痛感

為了研究blt2激活潛在的鎮(zhèn)痛效果，blt2激動劑cay10583或載體被注射到鼠的后爪，然后熱疼痛閾值被測量。按照發(fā)明人的數(shù)據(jù)顯示體外的trpv1敏化降低了，相比只接收載體的鼠，cay10583能顯著提高熱疼痛閾值(圖5)。參考文獻

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