本發(fā)明涉及含有新的異羥肟酸衍生物或其鹽以及抗菌性物質(zhì)的藥物組合物。本發(fā)明還涉及革蘭氏陰性菌感染癥的處理劑(処置剤)，新的異羥肟酸衍生物或其鹽在制造處理劑中的用途，試劑盒和制品。
背景技術(shù)：
背景技術(shù)
革蘭氏陰性菌由于具有由革蘭氏陽性菌中不存在的脂質(zhì)雙層構(gòu)成的外膜，與革蘭氏陽性菌相比，存在耐藥性強(qiáng)的傾向。另外，已知革蘭氏陰性菌具有多個(gè)藥物外排蛋白，該藥物外排蛋白與耐藥性相關(guān)(Antimicrobial Resistance，2002年，3月1日，34，第634-640頁)。
在革蘭氏陰性菌中，特別是綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)對(duì)各種抗菌性物質(zhì)顯示自然耐性(耐性)(固有耐性(耐性)(自然耐性(耐性)))的傾向強(qiáng)。近年來，在醫(yī)療現(xiàn)場(chǎng)，對(duì)碳青霉烯類藥物、喹諾酮類藥物或氨基糖苷類藥物等獲得了耐性(耐性)的綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)時(shí)常被分離(J.Antimicrob.Chemother.，2003年，第51卷，第347-352頁)。此外，多藥耐藥性綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)也被分離(Jpn.J.Antibiotics，2006年，第59卷，第5號(hào)，第355-363頁)，成為世界級(jí)的大問題。
多藥耐藥性菌不僅表現(xiàn)出對(duì)多種抗菌性物質(zhì)的耐性(耐性)，而且還具有限制可以使用的抗菌性物質(zhì)的問題。因此，除了開發(fā)新藥外，與現(xiàn)有的抗菌性物質(zhì)的組合使用是重要的選擇。然而，以耐性(耐性)細(xì)菌為對(duì)象的組合使用處理(処置)的理論尚未確定，并不能達(dá)到滿意的處理(処置)效果(化學(xué)療法の領(lǐng)域、2012年、第28卷、第9號(hào)))。
UDP-3-O-?；?N-乙酰葡糖胺脫乙酰酶(LpxC)是擔(dān)負(fù)脂質(zhì)A(作為外膜的構(gòu)成成分的LPS的疏水性錨)的合成的酶。
脂質(zhì)A的生物合成由10個(gè)階段的反應(yīng)組成，LpxC催化其第2階段，使UDP-3-O-?；?N-乙酰葡糖胺的乙?；撾x(J.Biol.Chem.，1995年，第270卷，第30384-30391頁)。脂質(zhì)A是外膜形成所必須的成分，對(duì)革蘭氏陰性菌的生存來說也是必須(J.Bacteriol.，1987年，第169卷，第5408-5415頁)。LpxC是脂質(zhì)A的生物合成過程中控制速度的重要的酶之一，是脂質(zhì)A的生物合成所必須的酶。因此，強(qiáng)烈期待抑制LpxC活性的藥物能夠成為對(duì)包括綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)在內(nèi)的革蘭氏陰性菌、特別是由于具有與以往藥物不同的作用機(jī)制對(duì)耐藥性綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)有效的抗菌劑。
迄今為止，已知具有LpxC抑制活性的化合物(專利文獻(xiàn)1～7)。
現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
專利文獻(xiàn)
專利文獻(xiàn)1:國(guó)際公開第04/062601號(hào)小冊(cè)子
專利文獻(xiàn)2:國(guó)際公開第07/069020號(hào)小冊(cè)子
專利文獻(xiàn)3:國(guó)際公開第08/154642號(hào)小冊(cè)子
專利文獻(xiàn)4:國(guó)際公開第10/031750號(hào)小冊(cè)子
專利文獻(xiàn)5:國(guó)際公開第10/017060號(hào)小冊(cè)子
專利文獻(xiàn)6:國(guó)際公開第10/032147號(hào)小冊(cè)子
專利文獻(xiàn)7:國(guó)際公開第11/132712號(hào)小冊(cè)子
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的問題
本發(fā)明的課題是提供可用于處理(処置)革蘭氏陰性菌感染癥的藥物組合物。
解決課題的手段
在這種情況下，本發(fā)明人進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，含有選自以下的異羥肟酸衍生物或其鹽以及抗菌性物質(zhì)的藥物組合物表現(xiàn)出強(qiáng)的抗菌活性，可用于處理(処置)革蘭氏陰性菌感染癥:(2S)-2-((4-((4-((1S)-1,2-二羥基乙基)苯基)乙炔基)苯甲?；?(甲基)氨基)-N-羥基-N’,2-二甲基丙二酰胺(以下有時(shí)稱為“化合物A”),(2S)-2-((4-((4-((1R)-1,2-二羥基乙基)苯基)乙炔基)苯甲?；?(甲基)氨基)-N-羥基-N’,2-二甲基丙二酰胺(以下有時(shí)稱為“化合物B”)和(2S)-N-羥基-2-((4-((4-((1S)-1-羥基-2-甲氧基乙基)苯基)乙炔基)苯甲?；?(甲基)氨基)-N’,2-二甲基丙二酰胺(以下有時(shí)稱為“化合物C”)，從而完成了本發(fā)明。
也就是說，本發(fā)明提供以下。
[1]用于處理(処置)革蘭氏陰性菌感染癥的藥物組合物，其包含選自化合物A、化合物B和化合物C的異羥肟酸衍生物或其鹽以及抗菌性物質(zhì)。
[2]在[1]中記載的藥物組合物，其中，所述異羥肟酸衍生物為化合物A。
[3]在[1]或[2]中記載的藥物組合物，其中，所述抗菌性物質(zhì)為抗菌藥。
[4]在[3]中記載的藥物組合物，其中，所述抗菌藥為選自以下的一種或兩種以上:β內(nèi)酰胺類抗菌藥，氨基糖苷類抗菌藥，新的喹諾酮類抗菌藥，糖肽類抗菌藥，利福霉素類抗菌藥，林可霉素類抗菌藥和大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥。
[5]革蘭氏陰性菌感染癥的處理劑，其含有選自化合物A、化合物B和化合物C的異羥肟酸衍生物或其鹽，其中，所述處理劑可以用于與抗菌性物質(zhì)組合使用。
[6]在[5]中記載的處理劑，其中，所述異羥肟酸衍生物為化合物A。
[7]在[5]或[6]中記載的處理劑，其中，所述抗菌性物質(zhì)為抗菌藥。
[8]在[7]中記載的處理劑，其中，所述抗菌藥是選自以下的一種或兩種以上:β內(nèi)酰胺類抗菌藥，氨基糖苷類抗菌藥，新的喹諾酮類抗菌藥，糖肽類抗菌藥，利福霉素類抗菌藥，林可霉素類抗菌藥和大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥。
[9]選自化合物A、化合物B和化合物C的異羥肟酸衍生物或其鹽在制造革蘭氏陰性菌感染癥的處理劑中的用途，所述處理劑可用于與抗菌性物質(zhì)組合使用。
[10]在[9]中記載的用途，其中異羥肟酸衍生物為化合物A。
[11]在[9]或[10]中記載的用途，其中，所述抗菌性物質(zhì)為抗菌藥。
[12]在[11]中記載的用途，其中，所述抗菌藥是選自以下的一種或兩種以上:β內(nèi)酰胺抗菌藥，氨基糖苷類抗菌藥，新的喹諾酮類抗菌藥，糖肽類抗菌藥，利福霉素類抗菌藥，林可霉素類抗菌藥和大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥。
[13]用于處理(処置)革蘭氏陰性菌感染癥的試劑盒，該試劑盒含有選自化合物A、化合物B和化合物C的異羥肟酸衍生物或其鹽，以及抗菌性物質(zhì)。
[14]在[13]中記載的試劑盒，其中異羥肟酸衍生物為化合物A。
[15]在[13]或[14]中記載的試劑盒，其中，所述抗菌性物質(zhì)為抗菌藥。
[16]在[15]中記載的試劑盒，其中，所述抗菌藥是選自以下的一種或兩種以上:β內(nèi)酰胺抗菌藥，氨基糖苷類抗菌藥，新的喹諾酮類抗菌藥，糖肽類抗菌藥，利福霉素類抗菌藥，林可霉素類抗菌藥和大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥。
[17]革蘭氏陰性菌感染癥的處理劑，其含有抗菌性物質(zhì)，所述處理劑可以用于與選自化合物A、化合物B和化合物C的異羥肟酸衍生物或其鹽組合使用。
[18]在[17]中記載的處理劑，其中，所述異羥肟酸衍生物為化合物A。
[19]在[17]或[18]中記載的處理劑，其中，所述抗菌性物質(zhì)為抗菌藥。
[20]在[19]中記載的處理劑，其中，所述抗菌藥為選自以下的一種或兩種以上:Β內(nèi)酰胺抗菌藥，氨基糖苷類抗菌藥，新的喹諾酮類抗菌藥，糖肽類抗菌藥，利福霉素類抗菌藥，林可霉素類抗菌藥和大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥。
[21]一種制品，其包括:(1)含有選自化合物A、化合物B和化合物C的異羥肟酸衍生物或其鹽的處理劑；(2)容器；和(3)指示書、說明書、包裝插頁或制品標(biāo)簽，所述指示書、說明書、包裝插頁或制品標(biāo)簽記載，將處理劑與抗菌性物質(zhì)組合，用于革蘭氏陰性菌感染癥的處理。
[22]在[21]中記載的制品，其中異羥肟酸衍生物為化合物A。
[23]在[21]或[22]中記載的制品，其中，所述抗菌性物質(zhì)為抗菌藥。
[24]在[23]中記載的制品，其中，所述抗菌藥是選自以下的一種或兩種以上:β內(nèi)酰胺抗菌藥，氨基糖苷類抗菌藥，新的喹諾酮類抗菌藥，糖肽類抗菌藥，利福霉素類抗菌藥，林可霉素類抗菌藥和大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥。
本發(fā)明還提供以下。
[A]指示書、說明書、包裝插頁或制品標(biāo)簽，所述指示書、說明書、包裝插頁或制品標(biāo)簽記載，將含有選自化合物A、化合物B和化合物C的異羥肟酸衍生物或其鹽的處理劑與抗菌性物質(zhì)組合，用于革蘭氏陰性菌感染癥的處理(処置)。
[B]在[A]中記載的指示書、說明書、包裝插頁或制品標(biāo)簽，其中異羥肟酸衍生物為化合物A。
[C]在[A]或[B]中記載的指示書、說明書、包裝插頁或制品標(biāo)簽，其中，所述抗菌性物質(zhì)是抗菌藥。
[D]在[C]中記載的指示書、說明書、包裝插頁或制品標(biāo)簽，其中，所述抗菌藥是選自以下的一種或兩種以上:β內(nèi)酰胺抗菌藥，氨基糖苷類抗菌藥，新的喹諾酮類抗菌藥，糖肽類抗菌藥，利福霉素類抗菌藥，林可霉素抗菌藥和大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥。
發(fā)明的效果
本發(fā)明藥物組合物具有強(qiáng)的抗菌活性，可用于處理(処置)革蘭氏陰性菌感染癥。
用于實(shí)施發(fā)明的實(shí)施方式
下面將詳細(xì)描述本發(fā)明。
“％”在本說明書中意味著“質(zhì)量％”，除非另有說明。
處理(処置)意味著針對(duì)疾病的預(yù)防或治療等。
處理劑意味著為了預(yù)防或治療等的目的、針對(duì)疾病而提供的物質(zhì)。
<異羥肟酸衍生物>
作為本發(fā)明中使用的異羥肟酸衍生物，可以列舉化合物A、化合物B和化合物C，優(yōu)選化合物A。
異羥肟酸衍生物可以根據(jù)例如下述的制造例來制造。
在異羥肟酸衍生物或其鹽中存在異構(gòu)體(例如，光學(xué)異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體和互変異構(gòu)體等)的情況下，本發(fā)明包括這些異構(gòu)體，還包括溶劑和物、水合物以及各種形狀的結(jié)晶。
作為異羥肟酸衍生物的鹽，例如可舉出與鈉和鉀等堿金屬形成的鹽；與鈣和鎂等堿土類金屬形成的鹽；銨鹽；以及與三甲胺、三乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基嗎啉、二乙胺、二環(huán)己胺、普魯卡因、二芐胺、N-芐基-β-苯乙胺、1-二苯羥甲胺(エフエナミソ)和N,N'-二芐基乙二胺等含氮有機(jī)堿形成的鹽等。
在上述的鹽中，作為優(yōu)選的鹽，可舉出藥理學(xué)上可接受的鹽。
異羥肟酸衍生物或其鹽的施用方法、施用量和施用次數(shù)可根據(jù)患者的年齡、體重和癥狀適宜選擇。通常，對(duì)成人來說，通過口服或腸胃外(例如，注射、滴注和向直腸部位施用等)施用，可1日分1次至數(shù)次施用0.01～1000mg/kg。
<抗菌性物質(zhì)>
作為本發(fā)明中使用的抗菌性物質(zhì)，可以列舉例如，抗菌藥和抗菌蛋白質(zhì)，優(yōu)選抗菌藥。
作為抗菌藥，可以列舉例如，β內(nèi)酰胺抗菌藥，氨基糖苷類抗菌藥，新的喹諾酮類抗菌藥，糖肽類抗菌藥，利福霉素類抗菌藥，林可霉素抗菌藥和大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥。
作為β內(nèi)酰胺抗菌藥，可以列舉例如，青霉素類抗菌藥，與β內(nèi)酰胺酶抑制劑配合的(組合的)青霉素類抗菌藥(βラクタマ一ゼ阻害剤配合セフェム系抗菌薬)，頭孢烯(セフエム)類抗菌藥，與β內(nèi)酰胺酶抑制劑配合的(組合的)頭孢烯(セフエム)類抗菌藥，碳青霉烯類抗菌藥，與β內(nèi)酰胺酶抑制劑配合的(組合的)碳青霉烯類抗菌藥，單酰胺菌素(モノバクタム)類抗菌藥和青霉烯(ぺネム)類抗菌藥，優(yōu)選的是，青霉素類抗菌藥，與β內(nèi)酰胺酶抑制劑配合的(組合的)青霉素類抗菌藥，頭孢烯(セフエム)類抗菌藥，與β內(nèi)酰胺酶抑制劑配合的(組合的)頭孢烯(セフエム)類抗菌藥和碳青霉烯類抗菌藥。
作為青霉素類抗菌藥，可以列舉例如，芐青霉素，青霉素O，青霉素V，青霉素G，甲氧西林，苯唑西林，氯唑西林，雙氯西林，羧芐西林，巴氨西林，替卡西林，阿洛西林(アゾシリン)，美洛西林，阿莫西林，舒他西林，酞氨西林(タラソピシリン)，侖氨西林，環(huán)己西林，匹美西林，阿撲西林，氨芐西林和哌拉西林，優(yōu)選的是，哌拉西林。
與β內(nèi)酰胺酶抑制劑配合的(組合的)青霉素類抗菌藥，可以列舉例如，氨芐西林-舒巴克坦配合劑(復(fù)方制劑)，克拉維酸-阿莫西林配合劑(復(fù)方制劑)和哌拉西林-三唑巴坦(タゾバクタム)配合劑(復(fù)方制劑)，優(yōu)選的是哌拉西林-三唑巴坦配合劑(復(fù)方制劑)。
作為頭孢烯類抗菌藥，可以列舉例如，頭孢唑林，頭孢噻吩，頭孢匹林(セフアピリソ)，頭孢氨芐，頭孢羥氨芐，頭孢噻啶，頭孢替唑，頭孢沙定，頭孢孟多，頭孢呋辛，頭孢尼西，頭孢雷特，頭孢克洛，頭孢丙烯(セフプロジル)，頭孢泊肟，氯碳頭孢，頭孢曲松，頭孢噻肟，頭孢唑肟，頭孢哌酮，頭孢磺啶，頭孢布烯，頭孢克肟，頭孢他美，頭孢托侖酯，頭孢匹羅，頭孢西丁，頭孢替坦，頭孢美唑，頭孢拉宗，頭孢米諾，拉氧頭孢，氟氧頭孢，頭孢替安，頭孢匹胺，頭孢甲肟，頭孢唑蘭，頭孢曲嗪，頭孢地尼，頭孢特侖匹酯，頭孢卡品匹酯，頭孢洛扎(セフトロザソ)，頭孢羅膦，頭孢拉定頭孢洛扎，頭孢他啶和頭孢吡肟，優(yōu)選的是，頭孢他啶和頭孢吡肟。
與β內(nèi)酰胺酶抑制劑配合的(組合的)頭孢烯(セフエム)類抗菌藥，可以列舉例如，頭孢哌酮-舒巴克坦配合劑(復(fù)方制劑)，頭孢他啶-阿維巴坦配合劑(復(fù)方制劑)，頭孢羅膦-阿維巴坦配合劑(復(fù)方制劑)和頭孢洛扎-三唑巴坦配合劑(復(fù)方制劑)。
作為碳青霉烯類抗菌藥，可以列舉例如，亞胺培南，帕尼培南，比阿培南，多利培南，厄他培南，替比培南，托莫培南，沙夫培南(saftrinem)，來那培南和美羅培南，優(yōu)選的是，多利培南，亞胺培南和美羅培南。
與β內(nèi)酰胺酶抑制劑配合的(組合的)碳青霉烯類抗菌藥，可以列舉例如，亞胺培南-MK-7655配合劑(復(fù)方制劑)和比阿培南-RPX7009配合劑(復(fù)方制劑)。
作為單酰胺菌素(モノバクタム)類抗菌藥，可以列舉例如，氨曲南和卡蘆莫南。
作為青酶烯抗菌藥，可以列舉例如，法羅培南和硫培南。
作為氨基糖苷類抗菌藥，可以列舉例如，鏈霉素，新霉素，卡那霉素，巴龍霉素，慶大霉素，妥布霉素，奈替米星，壯觀霉素，西索米星，地貝卡星(ジべカリソ)，卡那霉素B，核糖霉素，阿司米星，阿貝卡星，普拉米星(プラゾミシソ)，異帕米星和阿米卡星，優(yōu)選的是，阿米卡星。
作為新的喹諾酮類抗菌藥，可以列舉例如，萘啶酸，奧索利酸，吡洛米酸，吡哌酸，諾氟沙星，培氟沙星，依諾沙星，氧氟沙星，替馬沙星，洛美沙星，氟羅沙星，格帕沙星，司帕沙星，曲伐沙星，克林沙星，加替沙星，莫西沙星，西他沙星，吉非沙星(ガネフロキサシソ)，吉米沙星，加雷沙星，普盧利沙星，托氟沙星，貝西沙星，非那沙星，德拉沙星，阿巴沙星(アバフロキサシソ)，扎波沙星，奈諾沙星，帕珠沙星，環(huán)丙沙星和左氧氟沙星，優(yōu)選的是，環(huán)丙沙星，帕珠沙星和左氧氟沙星。
作為糖肽類抗菌藥，可以列舉例如，萬古霉素，替拉凡星和替考拉寧，優(yōu)選的是，萬古霉素和替考拉寧。
作為利福霉素類抗菌藥，可以列舉例如，利福平。
作為林可霉素類抗菌藥，可以列舉例如，克林霉素。
作為大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥，可以列舉例如，紅霉素和阿奇霉素。
作為抗菌蛋白質(zhì)，可以列舉例如，溶菌酶及其鹽。
作為溶菌酶的鹽，可以列舉例如，與鹽酸、氫溴酸、硝酸和硫酸等的無機(jī)酸形成的鹽；與甲酸、乙酸、檸檬酸、草酸、富馬酸、馬來酸、琥珀酸、蘋果酸、酒石酸、天冬氨酸、三氯乙酸和三氟乙酸等的有機(jī)羧酸形成的鹽；和與甲磺酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸、均三甲苯磺酸和萘磺酸等的磺酸形成的鹽。
上述鹽中作為優(yōu)選的鹽，可以列舉包括藥理學(xué)上可接受的鹽。
<組合使用>
在本發(fā)明中，組合使用異羥肟酸衍生物或其鹽以及抗菌性物質(zhì)。
組合使用意味著組合異羥肟酸衍生物或其鹽與抗菌性物質(zhì)，并且包括將異羥肟酸衍生物或其鹽與抗菌性物質(zhì)同時(shí)、分開地或以特定順序施用的方式，以及將異羥肟酸衍生物或其鹽與抗菌性物質(zhì)作為混合物(配合劑(復(fù)方制劑))的方式。換句話說，“組合使用”不僅意味著異羥肟酸衍生物或其鹽以及抗菌性物質(zhì)的施用時(shí)間相同，而且還包括在1個(gè)施用時(shí)間表中施用異羥肟酸衍生物或其鹽以及抗菌性物質(zhì)的方式。異羥肟酸衍生物或其鹽以及抗菌性物質(zhì)的施用途徑可以相同，也可以不同。
<革蘭氏陰性菌感染癥>
作為革蘭氏陰性菌感染癥，可以列舉例如，由選自由以下組成的組的革蘭氏陰性菌導(dǎo)致的感染癥:例如假單胞菌(Pseudomonas)屬，狹長(zhǎng)平胞屬(Stenotrophomonas)屬，伯霍爾德桿菌(Burkholderia)屬，不動(dòng)桿菌(Acinetobacter)屬，產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes)屬，軍團(tuán)菌(Legionella)屬，博德特氏菌(Bordetella)屬，布魯桿菌(Brucella)屬，擬桿菌(Bacteroides)屬，梭桿菌(Fusobacterium)屬，奈瑟球菌(Neisseria)屬，莫拉菌(Moraxella)屬，彎曲桿菌(Campylobacter)屬，螺桿菌(Helicobacter)屬，弧菌(Vibrio)屬，氣單胞菌(Aeromonas)屬，嗜血桿菌(Haemophilus)屬，耶爾森氏菌(Yersinia)屬，金黃桿菌(Chryseobacterium)屬，伊麗莎白菌(Elizabethkingia)屬，黃桿菌(Flavobacterium)屬和腸桿菌科(Enterobacteriaceae)。
<藥物組合物>
本發(fā)明的藥物組合物含有異羥肟酸衍生物或其鹽以及抗菌性物質(zhì)，可以用于革蘭氏陰性菌感染癥的處理(処置)。
藥物組合物可以含有通常用于制劑的制劑輔助劑，例如賦形劑，載體和稀釋劑等。
藥物組合物可以配制成如片劑，膠囊，粉劑，糖漿劑，顆粒劑，丸劑，混懸劑，乳劑，溶液劑，粉末制劑，栓劑，滴眼劑，滴鼻劑，滴耳劑，貼劑，軟膏劑或注射劑等的形式。
施用途徑?jīng)]有特別限制，可以通過靜脈內(nèi)，口服，肌內(nèi)，皮下，吸入，噴霧或其它施用途徑施用藥物組合物。
異羥肟酸衍生物或其鹽可以與抗菌性物質(zhì)同時(shí)、分開地或以特定順序施用。
異羥肟酸衍生物如上所述。
抗菌性物質(zhì)如上所述。
革蘭氏陰性菌感染癥如上所述。
<處理劑>
本發(fā)明的處理劑含有異羥肟酸衍生物或其鹽，可以與抗菌性物質(zhì)組合使用，用于革蘭氏陰性菌感染癥的處理(処置)。
處理劑的施用途徑?jīng)]有特別限制，可以通過靜脈內(nèi)，口服，肌內(nèi)，皮下，吸入，噴霧或其它施用途徑施用。另外，處理劑可以與抗菌性物質(zhì)同時(shí)、分開地或以特定的順序施用。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的處理劑含有抗菌性物質(zhì)，可以與異羥肟酸衍生物或其鹽組合使用，可以用于革蘭氏陰性菌感染癥的處理(処置)。
處理劑的施用途徑?jīng)]有特別限制，可以通過靜脈內(nèi)，口服，肌內(nèi)，皮下，吸入，噴霧或其它施用途徑施用。另外，處理劑可以與異羥肟酸衍生物或其鹽同時(shí)、分開地或以特定的順序施用。
異羥肟酸衍生物如上所述。
抗菌性物質(zhì)如上所述。
革蘭氏陰性菌感染癥如上所述。
<用途>
本發(fā)明中，包括異羥肟酸衍生物或其鹽在制造革蘭氏陰性菌感染癥的處理劑中的用途，所述處理劑可以用于與抗菌性物質(zhì)組合使用。
異羥肟酸衍生物如上所述。
抗菌性物質(zhì)如上所述。
革蘭氏陰性菌感染癥如上所述。
<試劑盒>
本發(fā)明的試劑盒在單一包裝中含有異羥肟酸衍生物或其鹽和抗菌性物質(zhì)，可以用于革蘭氏陰性菌感染癥的處理(処置)。此外，試劑盒可以另外包括例如用于施用的器具、指示書、說明書、包裝插頁或制品標(biāo)簽。當(dāng)異羥肟酸衍生物或其鹽以及抗菌性物質(zhì)施用途徑不同時(shí)，或者當(dāng)各個(gè)成分的用量設(shè)定優(yōu)選由醫(yī)生進(jìn)行時(shí)，試劑盒是特別有用的。
異羥肟酸衍生物或其鹽的施用途徑?jīng)]有特別限制，可以通過靜脈內(nèi)，口服，肌內(nèi)，皮下，吸入，噴霧或其它施用途徑施用。此外，異羥肟酸衍生物或其鹽可以與抗菌性物質(zhì)同時(shí)、分別地、或以特定的順序施用。
異羥肟酸衍生物如上所述。
抗菌性物質(zhì)如上所述。
革蘭氏陰性菌感染癥如上所述。
<制品>
本發(fā)明的制品包括(1)含有異羥肟酸衍生物或其鹽的處理劑；(2)容器；和(3)指示書、說明書、包裝插頁或制品標(biāo)簽，所述指示書、說明書、包裝插頁或制品標(biāo)簽記載，將處理劑與抗菌性物質(zhì)組合，用于革蘭氏陰性菌感染癥的處理。
本發(fā)明的制品可以用于革蘭氏陰性菌感染癥的處理(処置)。
容器意味著內(nèi)部包含含有異羥肟酸衍生物或其鹽的處理劑的容器，可以列舉例如，罐，瓶，盒，安瓿，小瓶，塑料袋，條包裝(SP)板(片材)和壓穿包裝(泡罩包裝)(PTP)板(片材)。
異羥肟酸衍生物如上所述。
抗菌性物質(zhì)如上所述。
革蘭氏陰性菌感染癥如上所述。
本發(fā)明的藥物組合物、處理劑、試劑盒和制品可用于處理(処置)革蘭氏陰性菌感染癥。特別可用于處理(処置)由大腸桿菌，肺炎桿菌，綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)，鮑氏不動(dòng)桿菌(Acinetobacter baumannii)和/或嗜麥芽糖寡養(yǎng)單胞菌導(dǎo)致的感染癥。特別地，可用于處理(処置)鮑氏不動(dòng)桿菌導(dǎo)致的感染。
本發(fā)明的藥物組合物、處理劑、試劑盒和制品能夠治療更嚴(yán)重的革蘭氏陰性菌感染癥。此外，即使使用的每種藥物劑量減少而施用時(shí)也顯示出強(qiáng)的抗菌作用，從而能夠減少每種藥物的副作用。
以下，參照試驗(yàn)例來說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不限定于此。
每個(gè)縮寫具有以下含義。
AMK:阿米卡星
CAZ:頭孢他啶
CFPM:頭孢吡肟
CPFX:環(huán)丙沙星
DRPM:多利培南
IPM:亞胺培南
LVFX:左氧氟沙星
MEPM:美羅培南
PZFX:帕珠沙星
PIPC:哌拉西林
TAZ:三唑巴坦
TEIC:替考拉寧
VCM:萬古霉素
試驗(yàn)例1評(píng)價(jià)綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)LpxC酶抑制活性的試驗(yàn)
化合物A、化合物B和化合物C用作試驗(yàn)化合物。
綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)LpxC酶活性通過以下來測(cè)量:使LpxC與其底物UDP-3-O-(R-3-羥基癸酰基)-N-乙酰葡糖胺反應(yīng)，定量其反應(yīng)產(chǎn)物的量、產(chǎn)物中存在的氨基。該測(cè)定根據(jù)例如國(guó)際公開第WO 11/132712號(hào)小冊(cè)子等中記載的方法或以其為基礎(chǔ)的方法進(jìn)行。
具體地說，綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)LpxC酶(從綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)制備染色體DNA，通過使用LpxC特異性引物的PCR法(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))獲得綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)LpxC基因，并將該基因并入載體中，使用大腸桿菌表達(dá)而獲得)中，添加20μmol/L UDP-3-O-(R-3-羥基癸?；?-N-乙酰葡糖胺(和光純藥(和光純薬))，在25℃下孵育1小時(shí)。該反應(yīng)在含有0.02％Brij(ブリツジ)35和80μmol/L二硫蘇糖醇的40mmol/L HEPES(ヘペス)緩沖溶液(pH8.0)中進(jìn)行。通過向反應(yīng)溶液中加入20％乙酸(終濃度為0.95％)終止反應(yīng)后，加入溶解于無水二噁烷的熒光胺(終濃度為1.6mg/mL)，在激發(fā)波長(zhǎng)/熒光波長(zhǎng)＝390nm/495nm處檢測(cè)反應(yīng)產(chǎn)物的量。使各種濃度的試驗(yàn)化合物在前述反應(yīng)中共存，由此得到抑制曲線。從這種抑制曲線中，求出反應(yīng)產(chǎn)物的量被抑制50％的試驗(yàn)化合物的濃度(IC50值)，并將其用作綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)LpxC酶抑制活性的指標(biāo)。
其結(jié)果是，試驗(yàn)化合物的所有IC50值都小于50nM。
試驗(yàn)化合物表現(xiàn)出優(yōu)異的綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)LpxC酶抑制活性。
試驗(yàn)例2評(píng)價(jià)抗菌活性的試驗(yàn)
最小生長(zhǎng)抑制濃度(MIC)測(cè)量根據(jù)CLSI(Clinical and Laboratory Standards Institute(クリニカルアソドラボラトリ一スタソダ一ズイソステイテュ一ト))標(biāo)準(zhǔn)方法，使用下面顯示的微量液體稀釋法。
使用液體稀釋法，評(píng)價(jià)試驗(yàn)化合物與抗菌性物質(zhì)之間的相互作用。
化合物A、B和C用作試驗(yàn)化合物。
作為抗菌性物質(zhì)，使用美羅培南(市售品)，亞胺培南(市售品)，多利培南(市售品)，頭孢吡肟(市售品)，阿米卡星(市售品)，左氧氟沙星(Chem-Impex International，Inc.))，環(huán)丙沙星(LKT Laboratories，Inc.)，哌拉西林(市售品)，哌拉西林/三唑巴坦(三唑巴坦:大鵬薬品工業(yè)株式會(huì)社)，萬古霉素(市售品)，頭孢他啶(市售品)，帕珠沙星(富山化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社)，替考拉寧(市售品)和人溶菌酶(和光純薬))。
作為細(xì)菌，使用綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)S-3097菌株，綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)S-2994菌株，肺炎桿菌Y-891菌株，肺炎桿菌BAA-1899菌株，大腸桿菌TK-1428菌株，大腸桿菌TK-1537菌株，嗜麥芽糖寡養(yǎng)單胞菌PM-171菌株，嗜麥芽糖寡養(yǎng)單胞菌NBRC13692菌株，鮑氏不動(dòng)桿菌BAA-1791菌株和鮑氏不動(dòng)桿菌BAA-1794菌株。
將在Mueller-Hinton瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜的受試細(xì)菌刮掉并懸浮使得對(duì)應(yīng)于0.5McFarland標(biāo)準(zhǔn)(マクフア一ラソド)，將該懸浮液稀釋10倍以用作接種液。將0.005mL的接種液接種到僅含有試驗(yàn)化合物、僅含有每種抗菌性物質(zhì)、含有試驗(yàn)化合物和每種抗菌性物質(zhì)的陽離子調(diào)節(jié)的Mueller-Hinton培養(yǎng)基中，在35℃培養(yǎng)18至20小時(shí)。將肉眼觀察不到細(xì)菌生長(zhǎng)的最小藥劑量作為MIC。
對(duì)單獨(dú)的試驗(yàn)化合物的抗菌活性、單獨(dú)的每種抗菌性物質(zhì)的抗菌活性，以及試驗(yàn)化合物與每種抗菌性物質(zhì)的組合的抗菌活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，計(jì)算FIC指標(biāo)。
FIC指標(biāo)是根據(jù)以下求得的值的最小值:(試驗(yàn)化合物組合使用時(shí)的MIC值/試驗(yàn)化合物單獨(dú)使用時(shí)的MIC值)+(抗菌性物質(zhì)組合使用時(shí)的MIC值/抗菌性物質(zhì)單獨(dú)使用時(shí)的MIC值)。
在FIC指標(biāo)為0.5以下的情況下，確定存在由于兩種藥劑的組合導(dǎo)致的協(xié)同效應(yīng)。在FIC指標(biāo)為0.51以上且1以下的情況下，確定存在相加效應(yīng)(Diagnostic Microbiology and Infectious Disease、2004年、第49卷、第197頁)。
化合物A與抗菌性物質(zhì)的組合結(jié)果示于表中。
[表格1]
綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)S-3097菌株
[表2]
綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)S-2994菌株
[表3]
肺炎桿菌Y-891菌株
*TAZ＝4μg/mL
[表4]
肺炎桿菌BAA-1899菌株
[表5]
大腸桿菌TK-1428菌株
[表6]
大腸桿菌TK-1537菌株
[表7]
嗜麥芽糖寡養(yǎng)單胞菌PM-171菌株
[表8]
嗜麥芽糖寡養(yǎng)單胞菌NBRC13692菌株
[表9]
鮑氏不動(dòng)桿菌BAA-1791菌株
[表10]
鮑氏不動(dòng)桿菌BAA-1794菌株
*TAZ＝4μg/mL
化合物B與各抗菌性物質(zhì)的組合結(jié)果示于表
[表11]
綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)S-3097菌株
*TAZ＝4μg/mL
[表12]
綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)S-2994菌株
[表13]
肺炎桿菌BAA-1899菌株
[表14]
大腸桿菌TK-1428菌株
*TAZ＝4μg/mL
[表15]
大腸桿菌TK-1537菌株
[表16]
嗜麥芽糖寡養(yǎng)單胞菌NBRC13692菌株
[表17]
鮑氏不動(dòng)桿菌BAA-1791菌株
化合物C與各個(gè)抗菌性物質(zhì)的組合結(jié)果示于表
[表18]
綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)S-3097菌株
*TAZ＝4μg/mL
[表19]
綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)S-2994菌株
[表20]
肺炎桿菌BAA-1899菌株
[表21]
大腸桿菌TK-1428菌株
*TAZ＝4μg/mL
[表22]
大腸桿菌TK-1537菌株
[表23]
嗜麥芽糖寡養(yǎng)單胞菌NBRC13692菌株
[表24]
鮑氏不動(dòng)桿菌BAA-1791菌株
針對(duì)綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)S-3097菌株、存在碳青霉烯耐性(耐性)的綠膿桿菌(綠膿假單胞菌)S-2994菌株和多藥耐藥性鮑氏不動(dòng)桿菌，化合物A、B或C與抗菌性物質(zhì)的組合表現(xiàn)出比單獨(dú)的化合物A、B或C更優(yōu)異的抗菌活性。此外，即使針對(duì)菌肺炎桿菌、大腸桿菌和嗜麥芽糖寡養(yǎng)單胞菌，化合物A、B或C與抗菌性物質(zhì)的組合也表現(xiàn)出比單獨(dú)的化合物A、B或C更好的抗菌活性。
從上述結(jié)果可以明確，化合物A、B和C或其鹽與各種抗菌性物質(zhì)的組合表現(xiàn)出協(xié)同的抗菌活性，并且對(duì)于處理(処置)由革蘭氏陰性菌引起的感染癥是有效的。
試驗(yàn)例3 Vero細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)
作為試驗(yàn)化合物，使用化合物A、化合物B和化合物C。
將試驗(yàn)化合物用二甲亞砜溶解，使用E'MEM調(diào)制成各濃度后，以0.1mL/孔分注到96孔微板的各孔中。將Vero細(xì)胞懸浮液通過添加有20％FBS的E'MEM調(diào)制至3×104細(xì)胞/mL，將0.1mL接種至各孔，在5％CO2、37℃培養(yǎng)3日。培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，制作添加有1mg/mL 2，3-雙-(2-甲氧基-4-硝基-5-磺基苯基)-5-((苯基氨基)羰基)-2H-四唑鎓內(nèi)鹽單鈉鹽(XTT)和25μM吩嗪甲磺酸鹽(PMS)的PBS，將50μL添加到各孔中。約2小時(shí)后，使用微量培養(yǎng)板讀取器，測(cè)定450nm的吸光度。
計(jì)算未添加試驗(yàn)化合物的對(duì)照與各孔的吸光度比，計(jì)算抑制50％細(xì)胞增殖的化合物的濃度(CC50；μg/mL)。
其結(jié)果是，試驗(yàn)化合物的CC50均為100μg/mL以上。
試驗(yàn)例4 hERG抑制活性的評(píng)價(jià)
作為試驗(yàn)化合物，使用化合物A和化合物C。
使用引入hERG基因(人體乙醚麻醉舞蹈癥(eag)相關(guān)基因)的HEK 293細(xì)胞(人胚腎293細(xì)胞，CYTOMYX公司)。
培養(yǎng)液使用向含有10％胎牛血清和1％非必須氨基酸的MEM培養(yǎng)基中加入遺傳霉素(Geneticin)至400μg/mL濃度而得到的培養(yǎng)液。細(xì)胞在二氧化碳培養(yǎng)機(jī)中(37.0℃，5％CO2)培養(yǎng)。
hERG電流的測(cè)定采用全細(xì)胞鉗位法進(jìn)行。將粘接有測(cè)定用細(xì)胞的蓋玻片放入平皿內(nèi)，用灌流液(組成(mmol/L):NaCl 137、KCl 4、HEPES 10、CaCl2 1.8、MgCl2 1、葡萄糖10，pH 7.4)以2mL/min的速度灌流。灌流槽內(nèi)的溫度維持在25℃。使細(xì)胞與填充有內(nèi)液(組成(mmol/L):KCl 130，MgCl2 1，EGTA 5，HEPES 10，MgATP 5，pH 7.2)的玻璃電極(2.0～8.0MΩ)接觸，膜片破碎后，經(jīng)由膜片鉗軟件pClamp 10(Molecular Devices Corporation)，使用膜片鉗放大器(EPC-7Plus，HEKA)，測(cè)定hERG電流。脈沖方案設(shè)定為:保持電位-80mV、去極化脈沖+20mV 1.5秒、復(fù)極化脈沖-50mV 1.5秒，確認(rèn)得到穩(wěn)定的電流波形后，應(yīng)用試驗(yàn)化合物。
分析應(yīng)用前和應(yīng)用10分鐘后的hERG電流波形中的尾電流的峰值，計(jì)算應(yīng)用10分鐘后相對(duì)于應(yīng)用前的比率(相對(duì)值，％)。
其結(jié)果是，試驗(yàn)化合物均不顯示達(dá)到300μmol/L的hERG抑制活性。
試驗(yàn)例5用于檢查是否存在遺傳毒性的體外微核試驗(yàn)
作為試驗(yàn)化合物，使用化合物A。
為了調(diào)查試驗(yàn)化合物對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞有無染色體異常的誘發(fā)性，實(shí)施體外微核試驗(yàn)。試驗(yàn)使用中國(guó)倉(cāng)鼠肺纖維母細(xì)胞(CHL/IU細(xì)胞)，通過短時(shí)間處理法(代謝激活的存在下和非存在下)和30小時(shí)處理法來實(shí)施。予以說明，試驗(yàn)化合物的濃度參考“關(guān)于醫(yī)藥品的遺傳毒性試驗(yàn)和解釋的指南”，設(shè)定1.00mmol/L為最高用量。標(biāo)本觀察針對(duì)0.25、0.50和1.00mmol/L的用量來實(shí)施。
向60mm平皿(IWAKI)中播種15×104個(gè)細(xì)胞，使用含有10％新生小牛血清(Sigma-Aldrich Co.)和50U/mL·50μg/mL的青霉素-鏈霉素(Sigma-Aldrich Co.)的MEM培養(yǎng)基(Sigma-Aldrich Co.)，在37℃、5％CO2下預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)。預(yù)培養(yǎng)結(jié)束后，添加介質(zhì)(DMSO)或試驗(yàn)化合物。在短時(shí)間處理法中，在培養(yǎng)6小時(shí)后，用PBS(-)(Sigma-Aldrich Co.)洗滌細(xì)胞后，更換為新的培養(yǎng)基，再培養(yǎng)24小時(shí)。在30小時(shí)的處理法中，添加試驗(yàn)化合物后，培養(yǎng)30小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束后，用0.05％胰蛋白酶-EDTA溶液(Sigma-Aldrich Co.)剝離細(xì)胞。離心分離后，除去上清液，加入0.075mol/L氯化鉀水溶液3mL，在室溫下進(jìn)行5分鐘低滲處理后，用冰冷的固定液(甲醇:乙酸＝19:1)固定細(xì)胞，制作載玻片標(biāo)本(吉姆薩染色(Merck))。針對(duì)每1種用量，觀察2000個(gè)細(xì)胞，計(jì)算具有微核的細(xì)胞的數(shù)目。試驗(yàn)化合物組的微核出現(xiàn)頻率與介質(zhì)對(duì)照組相比統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性增加的情況設(shè)為陽性，試驗(yàn)化合物組的微核出現(xiàn)頻率與介質(zhì)對(duì)照同等的情況設(shè)為陰性。
其結(jié)果是，在任一種處理方法中，試驗(yàn)化合物在1mmol/L以下的用量下為陰性。
試驗(yàn)例6血漿中蛋白質(zhì)結(jié)合率的測(cè)定
作為試驗(yàn)化合物，使用化合物A和化合物C。
向人血清中加入試驗(yàn)化合物，調(diào)制添加有1μg/mL化合物的血清，在室溫下靜置1小時(shí)以上。通過離心超濾法(分級(jí)分子量10，000，1500×g，25℃，10分鐘)，采集20μL濾液，加入人血清和內(nèi)標(biāo)溶液(呋塞米-乙腈溶液)。向添加有化合物的血清中加入PBS和內(nèi)標(biāo)溶液。攪拌后，離心分離，通過LC-MS/MS定量上清液中的濃度。
使用下述計(jì)算式求出蛋白結(jié)合率。
蛋白結(jié)合率(％)＝(1-(濾液的濃度)/(添加有化合物的血清的濃度))×100
其結(jié)果是，試驗(yàn)化合物的蛋白質(zhì)結(jié)合率均為80％以下。
試驗(yàn)例7人中肝藥物代謝酶的抑制作用
作為試驗(yàn)化合物，使用化合物A和化合物C。
使用混合人肝微粒體。底物及其最終添加濃度、陽性對(duì)照及其最終添加濃度如表25和26所述。反應(yīng)在磷酸緩沖液(100mmol/L，pH7.4)中進(jìn)行，反應(yīng)體系的最終濃度達(dá)到:人肝微粒體蛋白質(zhì)0.5mg/mL、氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)1.55mmol/L、葡萄糖-6-磷酸3.3mmol/L、氯化鎂3.3mmol/L、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PDH)0.4單位/mL。反應(yīng)液中的各化合物的最終濃度為100μM。將這些反應(yīng)液在37℃下預(yù)孵育30分鐘后，添加底物，在37℃下反應(yīng)10分鐘。通過添加1.5倍體積的內(nèi)標(biāo)物溶液(含有0.25mmol/L右咖烷和2％甲酸的乙腈溶液)使反應(yīng)停止后，離心分離，通過LC-MS/MS定量上清液中的代謝物濃度。
使用下述計(jì)算式，求得添加抑制劑時(shí)的抑制活性率。
抑制活性率(％)＝(1-(試驗(yàn)化合物存在下的CYP代謝物濃度)/(試驗(yàn)化合物不存在下的CYP代謝物濃度))×100
其結(jié)果是，試驗(yàn)化合物的抑制活性率均為30％以下。
[表25]
[表26]
接下來，對(duì)本發(fā)明中使用的化合物的制造例進(jìn)行說明，但本發(fā)明不限于此。
除非特別提及，否則硅膠柱色譜是快速柱色譜法，其載體是富士硅膠化工有限公司(富士シリシア化學(xué)株式會(huì)社)、B.W.硅膠、BW-300。
洗脫液中的混合比為體積比。
各縮寫具有以下含義。
DMSO-d6:重二甲亞砜
ESI:電噴霧離子化法
IPE:二異丙基醚
Me:甲基
TBS:叔丁基二甲基甲硅烷基
THP:四氫-2H-吡喃-2-基
s:單峰
d:雙峰
dd:雙二重峰
m:多重峰
在NMR譜中，例如，在[1.81]，1.82(3H，s)的記載表示，來自非對(duì)映體混合物的各非對(duì)映體的峰在1.81和1.82處被觀測(cè)到單峰，總質(zhì)子數(shù)為3H。
制造例1
向N-甲基吡咯烷酮1000mL中加入N-甲基芐胺421g和2-溴-2-甲基丙二酸二乙酯400g，在100℃下攪拌1小時(shí)后，冷卻反應(yīng)混合物。依次加入甲苯1.5L和水1.5L，然后加入鹽酸70mL。分離有機(jī)層，在減壓下蒸餾除去溶劑，得到無色油狀物499g。
向得到的油狀物400g中依次加入乙酸乙酯2.0L、10％鈀‐碳(50％濕)32g和乙酸81.9g，在氫氣氛下(0.5MPa)在45℃下攪拌18小時(shí)30分鐘。冷卻反應(yīng)混合物，用硅藻土過濾后，將殘余物用乙酸乙酯400mL洗滌。向?yàn)V液中加入水1200mL，用鹽酸調(diào)整至pH2以下，分離水層。向得到的水層(槽)中加入乙酸乙酯1200mL，用20％氫氧化鈉水溶液調(diào)整至pH9。分離有機(jī)層，減壓蒸餾除去溶劑，得到無色油狀物204g。
向得到的油狀物200g中加入乙腈1.0L和碳酸氫鈉198g。接著，在冰冷卻下用25分鐘滴加氯甲酸芐酯168g。將反應(yīng)混合物升溫至室溫，攪拌7小時(shí)45分鐘，靜置過夜。接著將反應(yīng)混合物在40～45℃下攪拌1小時(shí)30分鐘，冷卻后，濾出不溶物。將殘余物用乙腈200mL洗滌。合并濾液和洗滌液，在減壓下濃縮，得到無色油狀物324g。
向水1968mL中加入磷酸二氫鈉二水合物15.36g，加入0.05mol/L氫氧化鈉水溶液1125mL。在24℃下向該水溶液中加入得到的油狀物120g和乙腈360mL的混合物，在相同溫度下攪拌2小時(shí)45分鐘后，靜置過夜。再將反應(yīng)混合物在相同溫度下攪拌6小時(shí)后，靜置22小時(shí)。接著向豬肝酯酶2.9g(20單位/mg)中加入0.05mol/L磷酸緩沖液30mL(pH7.4)，照射30分鐘超聲波，將由此得到的懸浮液在25℃下加入到反應(yīng)混合物中。將反應(yīng)混合物用1mol/L氫氧化鈉水溶液調(diào)整至pH6.7～7.1的范圍，在26℃下攪拌5小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入乙酸乙酯1200mL，在冰冷卻下依次加入鹽酸37mL、氯化鈉300g和Celpure48g。在相同溫度下攪拌1小時(shí)后，濾出不溶物。將殘余物用乙酸乙酯240mL洗滌，合并濾液和洗滌液。分離有機(jī)層，將水層用乙酸乙酯180mL提取。合并有機(jī)層和提取液，加入無水硫酸鈉48g和活性炭1.2g，攪拌30分鐘后，用硅藻土過濾。將殘余物用乙酸乙酯180mL洗滌，合并濾液和洗滌液，在減壓下蒸餾除去溶劑1540mL，向得到的殘留物中加入庚烷240mL，用2小時(shí)冷卻至18℃。濾出固體物質(zhì)，用庚烷120mL洗滌2次，得到作為無色晶體的(((((2R)-2-羧基-1-乙氧基-1-氧代丙烷-2-基)(甲基)氨基甲?；?氧基)甲基)苯88.18g(>99.9％ee)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ值:1.15-1.20(3H，m)，1.61(3H，s)，2.86(3H，s)，3.95-4.15(2H，m)，5.07(2H，s)，7.28-7.43(5H，m)
HPLC測(cè)定條件
柱:4.6×150mm CHIRALPAK IA 5μm
測(cè)定波長(zhǎng):210nm
柱溫度:40℃
流動(dòng)相:己烷:乙醇＝95:5(0.1％三氟乙酸)
流速:0.7mL/分鐘
制造例2
向(((((2R)-2-羧基-1-乙氧基-1-氧代丙烷-2-基)(甲基)氨基甲酰基)氧基)甲基)苯250g中加入乙酸乙酯1300mL和N,N‐二甲基甲酰胺1.0mL，在5℃下用20分鐘滴加草酰氯133g，然后加入乙酸乙酯200mL。將反應(yīng)混合物升溫至20℃，攪拌4小時(shí)。在減壓下蒸餾除去溶劑1395mL，向得到的殘留物中加入四氫呋喃1000mL，冷卻至8℃。在相同溫度下，依次加入三乙胺94.1g和O-(四氫-2H-吡喃-2-基)羥胺109g，一邊用3小時(shí)升溫至20℃一邊攪拌。將反應(yīng)混合物靜置過夜后，加入丙酮225mL，攪拌40分鐘。接著加入甲苯750mL和水1000mL，冷卻至10℃后，加入鹽酸62mL。再用6mol/L鹽酸和20％氫氧化鈉水溶液調(diào)整至pH3，分離水層。向得到的水層中加入乙酸乙酯1250mL，加入20％氫氧化鈉水溶液210mL。接著，加入氯化鈉1450g，升溫至30℃。分離有機(jī)層，將水層用乙酸乙酯750mL提取。合并有機(jī)層和提取液，在減壓下蒸餾除去溶劑。向得到的殘留物中加入甲苯250mL，在減壓下蒸餾除去溶劑，得到橙色油狀物215g。
在室溫下向得到的油狀物213g中加入40％甲胺/甲醇溶液，在40～43℃下攪拌8小時(shí)30分鐘后，靜置過夜。再在45℃下攪拌5小時(shí)，然后在減壓下蒸餾除去溶劑。向得到的殘留物中加入甲苯，在減壓下蒸餾除去溶劑。接著，向得到的殘留物中加入四氫呋喃，在減壓下蒸餾除去溶劑，得到黃色油狀物203g。
向得到的油狀物203g中加入四氫呋喃1400mL，在35℃下加入碳酸氫鈉117g。接著，在相同溫度下加入4-碘苯甲酰氯168g和四氫呋喃200mL的混合物以及四氫呋喃100mL，攪拌5小時(shí)。在相同溫度下，向反應(yīng)混合物中加入碳酸氫鈉58.2g和嗎啉29mL，攪拌2小時(shí)后，在室溫下靜置過夜。向反應(yīng)混合物中依次加入乙酸乙酯1370mL、水1700mL和氯化鈉170g，分離有機(jī)層。向得到的有機(jī)層中加入水860mL和氯化鈉42.7g，攪拌15分鐘后，分離有機(jī)層。過濾得到的有機(jī)層，在減壓下蒸餾除去濾液的溶劑。向得到的殘留物中加入乙酸乙酯300mL和甲苯300mL，在30℃下攪拌1小時(shí)后，靜置過夜。濾出固體物質(zhì)，用乙酸乙酯/甲苯混合液(1:1、300mL)洗滌，得到褐色固體206g。向得到的褐色固體中加入乙酸乙酯2000mL，在40℃下攪拌1小時(shí)后，在冰冷卻下冷卻，濾出固體物質(zhì)。將固體物質(zhì)用乙酸乙酯洗滌，得到作為無色晶體的(2S)-2-((4-碘苯甲?；?(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺148.9g(>99.9％ee)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ值:1.40-1.75(6H，m)，1.61(3H，s)，[2.62]2.63(3H，d，J＝3.7Hz)，2.99(3H，d，J＝2.7Hz)，3.40-3.60(1H，m)，[3.82-3.92]3.92-4.02(1H，m)，[4.74-4.80]4.80-4.86(1H，m)，[7.31]7.33(2H，d，J＝8.2Hz)，7.85(2H，d，J＝8.3Hz)，[8.25-8.33]8.35-8.43(1H，m)，11.52(1H，s)
HPLC測(cè)定條件
柱:4.6×250mm CHIRALPAK ID 5μm
測(cè)定波長(zhǎng):230nm
柱溫度:40℃
流動(dòng)相:己烷:乙醇＝85:15
流速:1.0mL/分鐘
制造例3
在氮?dú)夥障?，?1S)-1-(4-溴苯基)乙烷-1,2-二醇1.08g、雙三苯基膦二氯化鈀(II)350mg、碘化銅(I)190mg和乙酸丁酯10mL的混合物中加入三異丙基甲硅烷基乙炔7.8mL和三乙胺7.0mL，在回流下攪拌1小時(shí)。冷卻反應(yīng)混合物，加入飽和氯化銨水溶液，用6mol/L鹽酸調(diào)整至pH6.2后，加入Celpure和乙酸乙酯，濾出不溶物。分離濾液的有機(jī)層，用飽和氯化鈉水溶液洗滌后，用無水硫酸鎂干燥。在減壓下蒸餾除去溶劑，使得到的殘留物經(jīng)歷硅膠柱色譜法[洗脫液：乙酸乙酯:己烷＝40:60→45:55]，得到黃色油狀物1.32g。
在冰冷卻下，向得到的黃色油狀物1.32g和四氫呋喃13mL的混合物中加入1mol/L四丁基氟化銨/四氫呋喃溶液6.2mL，在相同溫度下攪拌30分鐘后，在室溫下攪拌45分鐘。向反應(yīng)混合物中加入飽和氯化銨水溶液，用1mol/L鹽酸調(diào)整至pH2.0后，加入乙酸乙酯。分離有機(jī)層，將水層用乙酸乙酯提取2次。合并有機(jī)層和提取液，用飽和氯化鈉水溶液洗滌后，用無水硫酸鎂干燥。在減壓下蒸餾除去溶劑，將得到的殘留物用硅膠柱色譜法[洗脫液：乙酸乙酯:己烷＝50:50→70:30]純化，得到淡褐色固體513mg。向其中加入己烷，濾出固體物質(zhì)，得到作為淡褐色固體的(1S)-1-(4-乙炔基苯基)乙烷-1,2-二醇466mg。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ值:1.97-2.07(1H，m)，2.56(1H，d，J＝3.4Hz)，3.08(1H，s)，3.56-3.70(1H，m)，3.71-3.82(1H，m)，4.79-4.88(1H，m)，7.34(2H，d，J＝8.3Hz)，7.49(2H，d，J＝8.3Hz)
制造例4
在氮?dú)夥障?，在冰冷卻下，向(2S)-2-((4-碘苯甲?；?(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺587mg、(1S)-1-(4-乙炔基苯基)乙烷-1,2-二醇253mg、雙(三苯膦)二氯化鈀(II)84mg、碘化銅(I)46mg和四氫呋喃6.0mL的混合物中加入三乙胺0.59mL，在相同溫度下攪拌2小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入飽和氯化銨水溶液和乙酸乙酯，用1mol/L鹽酸調(diào)節(jié)至pH6.4。分離有機(jī)層，水層用乙酸乙酯提取。合并有機(jī)層和提取液，用飽和氯化鈉水溶液洗滌后，用無水硫酸鈉干燥。在減壓下蒸餾除去溶劑，將得到的殘留物用硅膠柱色譜法[洗脫液：丙酮:氯仿＝40:60]純化，得到作為淡黃色泡狀固體的(2S)-2-((4-((4-((1S)-1,2-二羥基乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺767mg。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ值:1.50-1.68(3H，m)，1.71-1.92(3H，m)，[1.82]，1.83(3H，s)，2.08-2.14(1H，m)，2.63-2.68(1H，m)，[2.86]，2.87(3H，d，J＝4.1Hz)，[3.17]，3.20(3H，s)，3.53-3.83(3H，m)，3.83-4.07(1H，m)，4.83-4.89(1H，m)，4.93-5.03(1H，m)，7.37(2H，d，J＝8.0Hz)，7.48-7.61(6H，m)，[6.97-7.04]，7.61-7.67(1H，m)，[10.10]，10.51(1H，s)
制造例5
在冰冷卻下，向(2S)-2-((4-((4-((1S)-1,2-二羥基乙基)苯基)乙炔基)苯甲?；?(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺767mg和甲醇6.0mL的混合物中加入對(duì)甲苯磺酸一水合物46mg，在相同溫度下攪拌40分鐘后，在室溫下攪拌1小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入水和乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鈉水溶液中和。分離有機(jī)層，向水層中加入乙酸乙酯和氯化鈉，濾出固體物質(zhì)。分離濾液的有機(jī)層，向水層中加入乙酸乙酯和氯化鈉，濾出固體物質(zhì)。分離濾液的有機(jī)層，合并迄今為止得到的有機(jī)層和固體物質(zhì)，在減壓下蒸餾除去溶劑。將得到的殘留物用硅膠柱色譜法[洗脫液：甲醇:氯仿＝10:90→15:85]純化，得到黃色泡狀固體585mg。向其中加入乙酸乙酯和IPE，濾出固體物質(zhì)，得到作為黃色固體的(2S)-2-((4-((4-((1S)-1,2-二羥基乙基)苯基)乙炔基)苯甲?；?(甲基)氨基)-N-羥基-N’,2-二甲基丙二酰胺(化合物A)463mg。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ值:1.77(3H，s)，2.79(3H，s)，3.17(3H，s)，3.55-3.68(2H，m)，4.67-4.74(1H，m)，7.41(2H，d，J＝8.3Hz)，7.51(2H，d，J＝8.3Hz)，7.55(2H，d，J＝8.5Hz)，7.68(2H，d，J＝8.5Hz)；MS(ESI):462[M+Na]+，438[M-H]-
制造例6
通過與制造例3同樣的方法，由(1R)-1-(4-溴苯基)乙烷-1,2-二醇1.09g，得到作為白色固體的(1R)-1-(4-乙炔基苯基)乙烷-1,2-二醇558mg。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ值:2.00(1H，dd，J＝7.1，4.9Hz)，2.54(1H，d，J＝3.4Hz)，3.08(1H，s)，3.60-3.68(1H，m)，3.73-3.81(1H，m)，4.80-4.88(1H，m)，7.34(2H，d，J＝8.1Hz)，7.49(2H，d，J＝8.0Hz)
制造例7
通過與制造例4同樣的方法，由(2S)-2-((4-碘苯甲酰基)(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺587mg和(1R)-1-(4-乙炔基苯基)乙烷-1,2-二醇291mg，得到作為淡褐色泡狀固體的(2S)-2-((4-((4-((1R)-1,2-二羥基乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺797mg。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ值:1.53-1.69(3H，m)，1.76-1.92(3H，m)，[1.81]，1.82(3H，s)，2.27-2.37(1H，m)，2.83-2.91(4H，m)，[3.17]，3.19(3H，s)，3.53-3.83(3H，m)，[3.83-3.92]，3.98-4.08(1H，m)，4.81-4.88(1H，m)，4.94-5.04(1H，m)，7.35(2H，d，J＝8.1Hz)，7.45-7.59(6H，m)，[6.96-7.06]，7.59-7.68(1H，m)，[10.14]，10.56(1H，s)
制造例8
在冰冷卻下，向(2S)-2-((4-((4-((1R)-1,2-二羥基乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺797mg和甲醇6.3mL的混合物中加入對(duì)甲苯磺酸一水合物46mg，在相同溫度下攪拌30分鐘后，在室溫下攪拌45分鐘。向反應(yīng)混合物中加入水和乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鈉水溶液中和。分離有機(jī)層，將水層用乙酸乙酯提取2次。向水層中加入氯化鈉，濾出固體物質(zhì)。向?yàn)V液中加入氯化鈉和乙酸乙酯，濾出固體物質(zhì)。分離濾液的有機(jī)層，合并迄今為止得到的有機(jī)層、提取液和固體物質(zhì)，在減壓下蒸餾除去溶劑。將得到的殘留物用硅膠柱色譜法[洗脫液：甲醇:氯仿＝10:90→15:85]純化，得到黃色泡狀固體556mg。向其中加入乙酸乙酯和IPE，濾出固體物質(zhì)，得到作為黃色固體的(2S)-2-((4-((4-((1R)-1,2-二羥基乙基)苯基)乙炔基)苯甲?；?(甲基)氨基)-N-羥基-N’,2-二甲基丙二酰胺(化合物B)458mg。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ值:1.78(3H，s)，2.80(3H，s)，3.17(3H，s)，3.57-3.67(2H，m)，4.68-4.74(1H，m)，7.42(2H，d，J＝8.3Hz)，7.52(2H，d，J＝8.3Hz)，7.56(2H，d，J＝8.6Hz)，7.61(2H，d，J＝8.6Hz)；MS(ESI):462[M+Na]+，438[M-H]-
制造例9
在氮?dú)夥障?、在冰冷卻下，向采用與制造例3同樣的方法得到的(1S)-1-(4-((三異丙基甲硅烷基)乙炔基)苯基)乙烷-1,2-二醇2.79g、二氯甲烷28mL、三乙胺2.7mL和N，N-二甲基氨基吡啶213mg的混合物中加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯1.45g，在室溫下攪拌2小時(shí)，在相同溫度下靜置過夜。向反應(yīng)混合物中加入飽和氯化銨水溶液和乙酸乙酯，用6mol/L鹽酸調(diào)整至pH4.0。分離有機(jī)層，用飽和氯化鈉水溶液洗滌后，用無水硫酸鎂干燥。在減壓下蒸餾除去溶劑，得到褐色油狀物3.70g。
向得到的褐色油狀物3.70g中加入二氯甲烷28mL和對(duì)甲苯磺酸吡啶鹽439mg，在冰冷卻下，加入3，4-二氫-2H-吡喃2.4mL后，在室溫下攪拌5小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入三乙胺3.0mL，在減壓下蒸餾除去溶劑。向得到的殘留物中加入水和乙酸乙酯。分離有機(jī)層，用飽和氯化鈉水溶液洗滌后，用無水硫酸鎂干燥。在減壓下蒸餾除去溶劑，將得到的殘留物用硅膠柱色譜法[洗脫液：乙醚:己烷＝10:90]純化，得到黃色油狀物3.65g。
向得到的黃色油狀物3.65g中加入四氫呋喃18mL，在冰冷卻下，加入1mol/L四正丁基氟化銨/四氫呋喃溶液17mL，在室溫下攪拌1小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入飽和氯化銨水溶液和乙酸乙酯。分離有機(jī)層，用飽和氯化鈉水溶液洗滌后，用無水硫酸鈉干燥。在減壓下蒸餾除去溶劑，將得到的殘留物用硅膠柱色譜法[洗脫液：乙酸乙酯:己烷＝30:70→40:60]純化，得到作為白色固體的(2S)-2-(4-乙炔基苯基)-2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)乙醇1.78g。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ值:1.40-1.93(6H，m)，2.11-2.20(1H，m)，[3.06]，3.07(1H，s)，3.51-3.61(1H，m)，3.62-3.76(2H，m)，[3.25-3.34]，3.92-4.07(1H，m)，[4.48-4.53]，4.79-4.86(1H，m)，[4.70-4.75]，4.87-4.93(1H，m)，[7.29]，7.35(2H，d，J＝8.3Hz)，7.45(2H，d，J＝8.0Hz)
制造例10
在氮?dú)夥障?、在冰冷卻下，向(2S)-2-(4-乙炔基苯基)-2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)乙醇800mg、二甲亞砜4.0mL和碘甲烷0.4mL的混合物中加入氫氧化鉀545mg，在室溫下攪拌1小時(shí)30分鐘。向反應(yīng)混合物中加入甲苯和飽和氯化銨水溶液，用6mol/L鹽酸調(diào)整至pH6.1。分離有機(jī)層，用飽和氯化鈉水溶液洗滌后，用無水硫酸鎂干燥。在減壓下蒸餾除去溶劑，將得到的殘留物用硅膠柱色譜法[洗脫液：乙酸乙酯:己烷＝10:90]純化，得到作為無色油狀物的2-((1S)-1-(4-乙炔基苯基)-2-甲氧基乙氧基)四氫-2H-吡喃836mg。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ值:1.40-1.94(6H，m)，[3.05]，3.07(1H，s)，[3.36]，3.39(3H，s)，3.45-3.56(2H，m)，[3.56-3.62]，3.62-3.69(1H，m)，[3.28-3.35]，3.97-4.06(1H，m)，[4.80-4.85]，4.91-4.97(1H，m)，[4.41-4.46]，4.97-5.01(1H，m)，[7.30]，7.37(2H，d，J＝8.4Hz)，7.44-7.51(2H，m)
制造例11
在氮?dú)夥障?、在冰冷卻下，向2-((1S)-1-(4-乙炔基苯基)-2-甲氧基乙氧基)四氫-2H-吡喃478mg、四氫呋喃3.0mL、(2S)-2-((4-碘苯甲?；?(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺300mg、雙三苯膦鈀(II)二氯化物43mg和碘化銅(I)23mg的混合物中加入三乙胺0.51mL，在相同溫度下攪拌2小時(shí)30分鐘。向反應(yīng)混合物中加入飽和氯化銨水溶液和乙酸乙酯，用6mol/L鹽酸調(diào)整至pH6.0。分離有機(jī)層，用飽和氯化鈉水溶液洗滌后，用無水硫酸鎂干燥。在減壓下蒸餾除去溶劑，將得到的殘留物用硅膠柱色譜法[洗脫液：丙酮:氯仿＝10:90]純化，得到作為褐色泡狀固體的(2S)-2-((4-((4-((1S)-2-甲氧基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)乙基)苯基)乙炔基)苯甲?；?(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺485mg。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ值:1.42-1.94(12H，m)，[1.81]，1.82(3H，s)，[2.85]，2.86(3H，d，J＝4.4Hz)，[3.17]，3.20(3H，s)，[3.37]，3.40(3H，s)，3.47-3.72(4H，m)，[3.29-3.36]，3.83-3.91(1H，m)，3.97-4.07(1H，m)，[4.43-4.48]，4.93-4.98(1H，m)，[4.84]，4.95(1H，dd，J＝7.3，4.2Hz)，4.98-5.03(1H，m)，[7.34]，7.41(2H，d，J＝8.3Hz)，7.44-7.61(6H，m)，[6.96-7.04]，7.62-7.72(1H，m)，[10.01]，10.53(1H，s)
制造例12
在冰冷卻下，向(2S)-2-((4-((4-((1S)-2-甲氧基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)乙基)苯基)乙炔基)苯甲酰基)(甲基)氨基)-N,2-二甲基-N’-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)丙二酰胺485mg和甲醇4.8mL的混合物中加入對(duì)甲苯磺酸一水合物23mg，在相同溫度下攪拌10分鐘后，在室溫下攪拌1小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入水和乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鈉水溶液中和。分離有機(jī)層，將得到的水層用乙酸乙酯提取。向水層中加入氯化鈉，用乙酸乙酯提取2次。合并有機(jī)層和提取液，用無水硫酸鈉干燥。在減壓下蒸餾除去溶劑，將得到的殘留物用硅膠柱色譜法[洗脫液：甲醇:氯仿＝4:96→6:94]純化，得到褐色固體288mg。向其中加入乙酸乙酯和IPE，濾出固體物質(zhì)，得到作為褐色固體的(2S)-N-羥基-2-((4-((4-((1S)-1-羥基-2-甲氧基乙基)苯基)乙炔基)苯甲?；?(甲基)氨基)-N’,2-二甲基丙二酰胺(化合物C)240mg。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ值:1.77(3H，s)，2.79(3H，s)，3.17(3H，s)，3.37(3H，s)，3.50(2H，d，J＝5.9Hz)，7.41(2H，d，J＝8.3Hz)，7.47-7.65(6H，m)；MS(ESI):476[M+Na]+，452[M-H]-
工業(yè)適用性
含有異羥肟酸衍生物或其鹽以及抗菌性物質(zhì)的藥物組合物具有強(qiáng)的抗菌活性，可用于處理(処置)革蘭氏陰性菌感染癥。