本發(fā)明涉及包含抑制海虱橈足幼體(copepodites)附著的化學信息素和可接受的賦形劑的化學信息素組合物，該抑制海虱橈足幼蟲附著的化學信息素包含合成棕櫚油酸、其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物，和/或它們的混合物。此外，本發(fā)明還涉及治療海虱的方法，該方法包括對有這種治療需要的魚施予化學信息素組合物，該化學信息素組合物包含抑制海虱附著的化學信息素和可接受的賦形劑，該抑制海虱附著的化學信息素包含合成棕櫚油酸、其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物，和/或它們的混合物。
背景技術(shù)：
：：海虱被認為是造成漁業(yè)生產(chǎn)中的衛(wèi)生和經(jīng)濟損失的最重要的原因之一(johnson等人，2004)。在大西洋鮭魚(atlanticsalmon/salmosalar)和虹鱒魚(rainbowtrout/oncorhynchusmykiss)中，鮭瘡痂魚虱(lepeophtheirussalmonis)和其它魚虱橈足幼體(caligidcopepodids)被視為鮭科魚(salmonidfish)養(yǎng)殖發(fā)展的主要障礙，這導致只要沒有令人滿意的處理方法，當局就會限制新養(yǎng)殖場的建立(stewart等人，2004)。目前似乎作為最常見且最重要的物種的鮭瘡痂魚虱(lepeophtheirussalmonis)顯示出包括截然不同的生命階段的復(fù)雜生命周期。其中，橈足幼體階段是特別令人感興趣，這是因為這是侵染時期(pike和wadsworth，1999)。作為第一幼體期(無節(jié)幼體i和無節(jié)幼體ii)，橈足幼體(copepodite)不具有功能性消化道，而是使用由它的脂肪組織的分解代射而獲得的能量。它的壽命似乎限于2個星期，在此期間它必須通過觸角鉤來附著在宿主上。橈足幼體作為最多的浮游生物，即使它們具有顯示出一定速度的運動的能力(這使得它們可以捕獲宿主并附著在其上)，它們也隨著河流被動移動。文獻報導道，通過響應(yīng)于線性水加速度(3±12hz的頻率，其持續(xù)1±3秒)的爆發(fā)式游泳(burstswimming)來促進與宿主的接觸(heuch&karlsen，1997)。這種行為可能源自于在自由放養(yǎng)的橈足幼體中觀察到的避免捕食者的策略(heuch&karlsen，1997)。魚鰭上首次侵染的高頻率可以被認為是支持以下假說的另一論點：橈足幼體被它們周圍所產(chǎn)生的小規(guī)模水運動所激活(tully等人，1993a)。一些作者(anon，1993)已經(jīng)提出，可能存在一個重要的通過鰓腔，附著幼體(chalimus)在變態(tài)之后向體表遷移的被動侵染。最近的研究表明，這個理論可能由實驗性侵染期間的人為因素造成。在關(guān)于自然大規(guī)模侵染的報導中的低頻率的腮侵染應(yīng)當被認為是反對這一假說的有力論據(jù)(tully等人，1993b和2002)。在鉤在魚上之后，橈足幼體似乎使用了化學感應(yīng)信息。已經(jīng)描述了觸角的化學受體，這可以解釋附著在不合適的宿主(非鮭科魚)上的橈足幼體的離開及返回河流(bron，1993)。不同的研究已經(jīng)描述了化學信息素在瘡痂魚虱屬(lepeophtheirus)的侵染行為中的作用。在使得可以鑒定一些化學成分的任何研究之前，不同的觀察強調(diào)了化學信息參與的可能性。橈足幼體的觸角攜帶感官捕捉器，并且它還負責鉤在魚上(bon，1993)。如前所述，當橈足類附著在非鮭科魚上時，它們傾向于脫鉤，并且出現(xiàn)這種區(qū)別似乎很可能是由于化學信息。通過魚皮釋放的化學信號的存在并不令人感到驚訝，這是因為已經(jīng)證明皮膚粘液包括各種脂類化合物，眾所周知其參與各種物種之間的化學通信(lewis，1970)。但是，最重要的文獻的獲得是由于“魚類調(diào)理水(fishconditionedwater)”的吸引效應(yīng)的證據(jù)，所述“魚類調(diào)理水”是通過對魚已經(jīng)在其中進行游泳的水進行取樣而獲得的(ingvarsdóttir等人，2002；bailey&mordue，2003；pino-marambio等人，2007&2008)。已經(jīng)識別出了一些確切的化合物，并且在它們之間，異佛爾酮和1-辛烯-3-醇看起來似乎被觸角選擇性地檢測到。令人遺憾地，已經(jīng)獲得的關(guān)于成年海虱的大部分已發(fā)表的數(shù)據(jù)并不針對寄生物的侵染生命周期。一些其它的數(shù)據(jù)表明，應(yīng)激影響鮭科魚(salmonids)面對海虱侵染的攻擊的脆弱性(tully等人，1993a&b；mackinnon，1998；mustafa&mackinnon，1999)。這種應(yīng)激可能涉及各種刺激，在這些刺激中，銀化(smoltification)(barton等人，1985)和社會應(yīng)激(socialstress)在無法被視為真正馴化的物種中似乎是至關(guān)重要的(sloman等人，2001；gilmour等人，2005)。血漿皮質(zhì)醇的升高可能通過降低皮膚粘液中的抗體的濃度(特別是igm免疫球蛋白的濃度)來起作用(magnadóttir，1998；hou等人，1999)。這些抗體看起來似乎在抗侵染的免疫中發(fā)揮作用，其可能影響附著幼體所攜帶的毛的附著(tully等人，2002)。魚類養(yǎng)殖已導致魚從農(nóng)場中逃脫，并融入野鮭魚種群。這對野生魚類種群的疾病傳播和食物競爭具有影響。相比野生魚，養(yǎng)殖魚具有很多改變的特征。一個這樣的特征在于，養(yǎng)殖魚比它們的野生魚更具侵略性(johnson&abrahams，1991)。另一特征在于，養(yǎng)殖魚的后代的生長快于野生魚(fleming等人2000)。由于魚類養(yǎng)殖，鮭魚虱的宿主的數(shù)目已成倍增加。存在兩種海虱，即瘡痂魚虱屬(鮭瘡痂魚虱(lepeophtheirussalmonis))和魚虱屬(calguselongatus)?？梢酝ㄟ^它們的褐色馬蹄形殼體來識別它們。它們穩(wěn)固地附著于魚類上，并且通過食用魚鱗(scale)、細胞組織、血液和粘膜來損傷它們。魚的免疫系統(tǒng)被削弱，導致繼發(fā)感染和魚類死亡的可能性。具有大于10～15只鮭魚虱的鮭魚幼鮭(smolts)是病弱的，并且在返回河流進行產(chǎn)卵之前不大可能從其在海中的旅居中幸存。海虱的低非致死性侵染可以引起魚類的應(yīng)激反應(yīng)，導致鹽分不平衡、免疫力下降和感染增加(tully等人，2002)。通常，12～15只海虱可以殺死一條野生鮭魚。鮭魚虱有基本的治療方法，一種是生物學方法和另一種是化學方法。使用隆頭魚(其為隆頭魚科(familylabridae)(鱸形目(orderperciformes))的海洋魚類)，可以摘取和吃掉外寄生蟲鮭魚虱，這是一種生物學方法。出于該目的，在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中使用梳隆頭魚(goldsinnywrasse)、梳隆頭魚屬(ctenolabrus)、巴蘭隆頭魚(ballamwrasse)、貝氏隆頭魚(labrusbergyltaascanius)、鋸隆頭魚(corkwingwrasse)、嬌扁隆頭魚(symphodusmeliops(l.))、rockcook魚、小口棘隆頭魚((centrolabrusexoletus)(l.))、布谷隆頭魚(cuckoowrasse)、雙斑隆頭魚(labrusbimaculatusl)和帕氏刺隆頭魚(scale-rayedwrasse)(帕氏刺隆頭魚(acantholabruspalloni))?；瘜W方法涉及滅虱浴或者在魚飼料中使用藥粒的使用。針對鮭魚虱使用的浴治療包括：有機磷酸酯比如敵敵畏、敵百蟲和甲基吡啶磷；擬除蟲菊酯比如氯氰菊酯和溴氰菊酯；除蟲菊提取物和過氧化氫。飼料治療包括阿維菌素比如甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、二氟脲、氟苯脲(teflubenzuron)、氯氰菊酯、順式-氯氰菊酯和伊佛霉素。通常，slice(甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽)的添加持續(xù)8個星期。然而，隨著時間對浴療和魚飼料治療的耐藥性變得明顯，這導致的低效治療、對非目標生物的毒性，對魚是有應(yīng)激的并且是昂貴的。在許多情況下，需要治療的休藥期(withdrawalperiod)，并且經(jīng)常會發(fā)生再次侵染，特別是在養(yǎng)殖鮭魚中，其中定期的寄生物治療對耐藥性發(fā)展施加了持續(xù)的壓力。us專利7，879，809記載了使用多殺菌素或者生理上可接受的衍生物或者其鹽控制在水產(chǎn)養(yǎng)殖魚中的體外寄生物侵染。多殺菌素已知是廣譜的有機殺蟲劑。us專利6,982,285記載了一種具有活性成分1-[4-氯-3-(3-氯-5-三氟甲基-2-吡啶基氧基)苯基]-3-(2，6-二氟苯甲?；?脲的注射溶液來控制魚寄生物。盡管藥物和化學品用于治療魚寄生物比如海虱為本領(lǐng)域已知，但是它們經(jīng)常對環(huán)境不利。耐藥性在多數(shù)情況下發(fā)生，從而導致在鮭魚和其它養(yǎng)殖魚類中缺乏治療效果和死亡率升高。因此，需要解決海虱侵染的其它方案?；瘜W信息素是由植物或動物發(fā)出的可以在另一生物體中引起行為或生理學應(yīng)答的化學物質(zhì)。當化學信息素影響相同物種的個體時，它被稱作信息素(pheromone)。當化學信息素影響不同物種的個體時，它被稱為異種化感物(allelochemical)。參與種間通訊的那些化學物質(zhì)信號被歸為異種化感物信號的一般范疇。異種化感物信號通常被分成兩個亞組，并且它們的功能影響信號釋放者和消息接受者之間的關(guān)系。當存在發(fā)出的化學物質(zhì)信號涉及有利于釋放者，則該亞組被稱為異源外激素(allomone；利己素)。根據(jù)該定義，異源外激素(allomone)是由一種物種產(chǎn)生的激素或者物質(zhì)，其可以對另一物種產(chǎn)生影響，特別是有益于釋放物種的影響。例如，通過特定花釋放的誘人的異源外激素可以吸引可以給這些花授粉的各種昆蟲。相反地，當所釋放的化學物質(zhì)信號涉及有利于接受者時，則該亞組被稱為種間激素(kairomone；利它素)。根據(jù)定義，種間激素是可以吸引其它物種、有時甚至是天敵的信息素或者物質(zhì)。種間激素有時與寄生物對特定宿主的定位有關(guān)聯(lián)。例如，通過人皮膚釋放的乳酸就是一種針對許多蚊科(culicidae)的已知的種間激素。異源外激素和種間激素是天然物質(zhì)，其降解不會對最終使用者造成傷害。這些化學物質(zhì)也不會引起免疫并且是安全的。因此，本領(lǐng)域中需要提供一種對環(huán)境友好的組合物和方法以用于抑制海虱附著于魚上，其可以易于施予并且是有效的，而不會傷害魚類或?qū)︳~類產(chǎn)生應(yīng)激或者影響水環(huán)境。如技術(shù)實現(xiàn)要素：、優(yōu)選實施方案的描述和權(quán)利要求所證實的，本發(fā)明實現(xiàn)了上述需要和其它目的。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及一種化學信息素組合物，該化學信息素組合物包含抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素和可接受的賦形劑，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素包含合成棕櫚油酸、其鹽、其衍生物、其異構(gòu)體和/或其結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或它們的混合物(其驅(qū)使海虱離開魚)。另一方面，本發(fā)明還涉及一種化學信息素組合物，該化學信息素組合物包含抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素、以及無毒的填料和/或增強劑組合物和可接受的賦形劑，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素包含0.1ppm～約10ppm的合成棕櫚油酸、其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或它們的混合物。另一方面，本發(fā)明還涉及一種化學信息素組合物，該化學信息素組合物包含抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素和可接受的賦形劑，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素包含0.6ppm～約6ppm的合成棕櫚油酸、其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或它們的混合物。本文中所述的可接受的賦形劑是藥學上可接受的賦形劑或獸醫(yī)可接受的賦形劑。如本文所述，包含合成棕櫚油酸的抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物可以進一步包含無毒的填料或增強劑組合物。無毒的填料選自下組：脂肪酸、醇、胺、角鯊烯、甘油及它們的混合物，而增強劑組合物含有來自吲哚衍生物的胺和脂肪酸、這些胺和脂肪酸的酯、酮、丙酮、醇或者甾醇。另一方面，本文中所述的抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物是合成棕櫚油酸的酯、醇、酮、酰胺、醚、醛或甾醇衍生物、其鹽、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或混合物，以及可接受的賦形劑?；瘜W信息素組合物可以呈以下形式：粉末、片劑、丸劑、膠囊、粒狀(granulated)、粒狀顆粒(granularparticle)、干片(dryflake)或者其它適于使用的形式。它還可以呈緩釋制劑的形式：置于膠束、脂質(zhì)體、納米顆粒、微粒中或者被微膠囊化?；瘜W信息素組合物還可以被凍干。本發(fā)明的另一方面是含有包含抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素的組合物的溶液，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素包含合成棕櫚油酸、其鹽、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持它們的化學信息素能力)，和/或混合物。該溶液可以用可接受的賦形劑比如藥學上可接受的賦形劑或藥學上可接受的賦形劑進行配制。該溶液還可以包含如本文所述的無毒的填料、或者如本文所述的增強劑組合物。本發(fā)明的另一方面是該溶液包含抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物包含約0.1ppm～約10ppm的合成棕櫚油酸、其鹽、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)和/或混合物。該溶液可以用可接受的賦形劑比如藥學上可接受的賦形劑或獸醫(yī)可接受的賦形劑進行配制。該溶液還可以包含如本文所述的無毒的填料、或者如本文所述的增強劑組合物。本發(fā)明的另一方面是該溶液包含抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物包含約0.6ppm～約6ppm的合成棕櫚油酸、其鹽、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持它們的化學信息素能力)，和/或混合物。該溶液可以用可接受的賦形劑比如藥學上可接受的賦形劑或獸醫(yī)可接受的賦形劑進行配制。該溶液還可以包含如本文所述的無毒的填料、或者如本文所述的增強劑組合物。溶液可以呈噴霧劑、氣溶膠、乳液、懸浮液、滴劑的形式，可以被放置在水下擴散器中或在緩釋基質(zhì)中。它可以被添加至魚駐留的水中，或者被放置在魚食中。還可以將它通過口服或注射施予魚。本發(fā)明的另一方面是一種驅(qū)使海虱離開魚的方法，所述方法包括對魚施予包含抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素和可接受的賦形劑的化學信息素組合物，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素包含合成棕櫚油酸、其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或它們的混合物。本發(fā)明的另一方面是一種驅(qū)使海虱離開魚的方法，所述方法包括對魚施予包含抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素和可接受的賦形劑的化學信息素組合物，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素包含0.1ppm～10ppm的合成棕櫚油酸、其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，以及它們的混合物。本發(fā)明的另一方面是一種驅(qū)使海虱離開魚的方法，所述方法包括對魚施予包含抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素和可接受的賦形劑的化學信息素組合物，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素包含0.6ppm～6ppm的合成棕櫚油酸、其的鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，以及它們的混合物。本發(fā)明的另一方面是用于抑制海虱附著于魚上的化學信息素組合物，該化學信息素組合物包含合成棕櫚油酸、其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，以及它們的混合物，以及可接受的賦形劑。本發(fā)明的另一方面是用于抑制海虱附著于魚上的化學信息素組合物，該化學信息素組合物包含約0.1ppm～約10ppm的合成棕櫚油酸、其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，以及它們的混合物，以及可接受的賦形劑。本發(fā)明的另一方面是用于抑制海虱附著于魚上的化學信息素組合物，該化學信息素組合物包含約0.6ppm～約6ppm的合成棕櫚油酸、其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，以及它們的混合物，以及可接受的賦形劑。附圖說明圖1是海虱在幼年鮭魚上的照片。圖2是顯示smileychamber試驗設(shè)置的示意圖，其是改編自常規(guī)嗅覺儀的試驗。圖3是原始smileychamber試驗的照片。圖4是實驗中所使用的嗅覺儀(olfactory)的照片。圖5是在過濾嗅覺儀的流出液體之后計數(shù)的橈足幼體的照片。圖6是侵染試驗開始時的照片。幼鮭放置在水箱中，在水箱中，它們將被飼養(yǎng)在3ppm的包含合成棕櫚油酸的化學信息素產(chǎn)品或安慰劑(placebo)中。圖7是顯示通過使用金屬勺子摩擦魚以除去所有可能附著在魚上的橈足幼體而收獲的橈足幼體的照片。圖8是顯示實施例6中對照鮭魚和對照鱈魚相比經(jīng)處理鮭魚的結(jié)果的箱形圖。圖9是顯示實施例6的對照組中的橈足幼體的數(shù)目的圖表。圖10是顯示實施例6的經(jīng)處理鮭魚組中的橈足幼體的數(shù)目的圖表。圖11是顯示實施例6的對照鱈魚組中的橈足幼體的數(shù)目的圖表。具體實施方式優(yōu)選的實施方案的描述本文中使用的“魚”包括以下中的任一成員：脊索動物門(phylumchordata)脊椎動物亞門(subphylumvertebrate)和無頜總綱(superclassesagnatha)、軟骨魚綱(chrondrichthyes)和硬骨魚綱(osteichthyes)，綱：輻鰭亞綱(actinopterygii)，目：鮭形目(salmoniformes)或鱸形目(perciformes)或鲇形目(siluriformes)。例如但不限于，以下魚類物種可以如本發(fā)明涵蓋所提及：鯰魚、鯉魚、鱒魚、鮭魚、海鱸魚(seabass)、海鯛、白魚(whitefish)、紅點鮭(char)、茴魚(grayling)和鱸魚。本發(fā)明所涵蓋的鯰魚中，包括溝鯰(channelcatfish)、藍鯰魚(bluecatfish)、扁頭鯰(flatheadcatfish)、黃鯰魚(yellowcatfish)等。鯉魚包括火鯉(commoncarp)、銀鯉、草鯉等。鱒魚包括：綠背切喉鱒魚(greenbackcutthroattrout)、riogrand切喉鱒、蛇河切喉鱒、斑鱒、溪鱒(brooktrout)、hybridcut-bow鱒魚、虹鱒、palomino虹鱒等。鮭魚包括奇努克鮭(chinooksalmon)、銀鮭(cohosalmon)、紅鮭(sockeyesalmon)、狗鮭(chumsalmon)、粉鮭(pinksalmon)、大西洋鮭、鋼頭鮭(steelheadsalmon)等。海鱸(seabass)包括bank海鱸、智利海鱸(chileanseabass)、黑海鱸(blackseabass)、巖石海鱸(rockseabass)、斑點海鱸(spottedseabass)等。海鯛包括黑海鯛、金頭海鯛和紅海鯛(redseabream)。白魚包括通常的白魚、湖白魚(lakewhitefish)、大西洋白魚、柱白魚(roundwhitefish)、山白魚、北鮭(inconnu)、太平洋白魚、里海白魚、石頜鯛(whitesteenbras)等。紅點鮭包括花羔(dollyvarden)紅點鮭、大西洋紅點鮭、wisconsin象牙紅點鮭等。茴魚包括歐洲茴魚、北極茴魚等。鱸魚包括：攀鱸、歐洲鱸魚(europeanperch)、巴爾喀什鱸魚(balkhashperch)、黃鱸(yellowperch)、金鱸(goldenperch)、銀鱸(silverperch)、河鱸(spangledperch)、白鱸(whiteperch)等?！棒~的應(yīng)激”是指導致釋放與應(yīng)激相關(guān)的激素或?qū)е绿囟ǖ纳韺W應(yīng)答的身體、化學或精神不適。應(yīng)激引起身體反應(yīng)比如心率、血壓增加、血糖升高、皮質(zhì)醇水平釋放。它包含皮質(zhì)醇水平升高至超過100ng/ml。增高的皮質(zhì)醇水平可以導致鮭科魚的心肌重構(gòu)(johansen等人，thejournalofexperimentalbiology(2011)214，1313-1321)。在魚類中存在不同類型的應(yīng)激，其包括囚禁應(yīng)激(confinementstress)、處理應(yīng)激(handlingstress)、分選應(yīng)激(sortingstress)、分級應(yīng)激(gradingstress)和運輸應(yīng)激(transportationstress)。應(yīng)激可能有助于降低魚的抵抗力，從而導致疾病的擴散和寄生物侵染。它還對魚類的攝食行為、成長和競爭能力具有影響(gregory等人，physiologicalandbiochemicalzoology(1999)72(3)：286-295)。本文所述的“水產(chǎn)養(yǎng)殖”是指在受控條件下培育魚類的科學、技術(shù)和商業(yè)。“活性成分”是指賦予其作為抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素的治療特性的分子，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素包含合成棕櫚油酸、其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持它們的化學信息素能力)，以及它們的混合物。本說明書中使用的術(shù)語“海虱”包括管口目(siphonostomatoida)魚虱科(calgidae)中的任何橈足類(copepod)，其包括瘡痂魚虱屬(lepeophtheirus)和魚虱屬(caligus)。其例子包括：鮭瘡痂魚虱(lepeophtheirussalmonis)、lepeophtheiruspectoralis、lepeophtheirusthompsoni、lepeophtheiruseuropaensis、伸長魚虱(caliguselongatus)、caligusorientalis、caligusteres、智利魚虱(caligusrogercresseyi)、caliguspunctatus、caligusepidemicus、海虱(calgusclemensi)等。海虱在不同的水中被發(fā)現(xiàn)。因此，例如鮭瘡痂魚虱影響在北半球的更冷水域的大西洋鮭。它還侵染日本鮭科魚(salmonidsinjapan)。c.orientalis還在日本虹鱒中被發(fā)現(xiàn)。c.elongatus是英國水域中最普遍的物種，c.teres和c.rogercresseyi是智利水域中最普遍的物種，c.epidemicus、c.punctatus和c.orientalis是亞洲水域中最普遍的物種，l.pectoralis出現(xiàn)在東北大西洋、波羅的海和白海，c.elongatus出現(xiàn)在南半球(特別是在澳大利亞)。本說明書中使用的“橈足幼體”是指任意的各種各樣非常小的橈足類亞綱(subclasscopepoda)的甲殼綱動物，其具有細長的身體和分叉的尾巴。與大部分甲殼綱動物不同，橈足類(copepods)缺少背部的甲殼，并且不具有復(fù)眼。鹽水和淡水中的橈足類都很豐富，并且是許多水生動物的重要食物來源。橈足類包括水蚤。本文中使用的術(shù)語“cop”是“橈足幼體(copepodite)”的縮寫。本說明書中使用的“化學信息素”是指，由植物或動物發(fā)出的能夠在另一生物體中引起行為或生理學應(yīng)答的化學物質(zhì)。當化學信息素影響相同物種的個體時，它被稱作信息素。當化學信息素影響不同物種的個體時，它被稱為異種化感物?！爱愒赐饧に亍笔侵福ㄟ^一種生物體產(chǎn)生的化學信息素，其可以引誘在另一物種的生物體中的響應(yīng)。它產(chǎn)生對釋放者有利的響應(yīng)。例如，一些植物產(chǎn)生了驅(qū)除昆蟲并阻止它們進食的異源外激素。本文中使用的“種間激素(kairomone)”是，通過一種物種的生物體釋放的、有益于或者影響另一物種的生物體的化學物質(zhì)信使(messenger)。種間激素的一個例子是吸引或者驅(qū)除動物的花香。本說明書中使用的“棕櫚油酸”包括順式-9-十六烯酸或者反式-9-十六烯酸，并且分子式為c16h30o2。棕櫚油酸(palmitoleicacid)還被稱為鯊油酸(zoomaricacid)、棕櫚亞油酸(palmitolinoleicacid)、(9z)-十六烯酸、(z)-十六-9-烯酸、(9z)-十六-9-烯酸、順式-δ(9)-十六烯酸，16：1n-7或者16：1δ9?！昂铣傻摹笔侵缸貦坝退崾腔瘜W上或酶法制備的，而不是從自然界中分離的。本文中使用的“衍生物”包括合成棕櫚油酸的酯、醇、酮、酰胺、醚、醛、和甾醇、它們的衍生物、它們的鹽、它們的異構(gòu)體和/或它們的結(jié)構(gòu)類似物，和/或它們的混合物。這些合成棕櫚油酸衍生物可以代替如本文所述的的組合物中的一種或多種化學信息素，并且具有相同的效果。脂肪酸的衍生物可以通過本領(lǐng)域已知的方法合成。例如通過酸催化劑催化的、脂肪酸與醇的直接酯化產(chǎn)生脂肪酸酯和水。通過氫化，脂肪醛可以轉(zhuǎn)變?yōu)橹敬肌Ｖ舅狨０房梢匀缦轮苽洌涸跓o水條件下，使脂肪酸的酯和低級醇與氨或者單或二烷基甲基或乙基胺反應(yīng)，然后將低級醇從反應(yīng)中除去?！爱悩?gòu)體”包括結(jié)構(gòu)異構(gòu)和立體異構(gòu)。結(jié)構(gòu)異構(gòu)體(structuralisomer)為具有相同的構(gòu)成原子但彼此排列不同的異構(gòu)體。結(jié)構(gòu)異構(gòu)體的例子為丙醇和異丙醇?？臻g異構(gòu)體在分子上包含以相同方式連結(jié)的相同的原子，并且彼此僅在原子或原子組的空間排列上不同。空間異構(gòu)體的例子為葡萄糖(glucose)和右旋糖(dextrose)。棕櫚油酸異構(gòu)體的例子包括：11-順式-十六烯酸和9-順式、12-順式十六烷酸，以及反式-9-十六烯酸?！敖Y(jié)構(gòu)類擬物”是指在結(jié)構(gòu)上彼此相似、但是在特定成分上彼此不同的一組化合物。結(jié)構(gòu)類擬物可以在一個以上原子、官能團或子結(jié)構(gòu)(其被子結(jié)構(gòu)的其它原子、官能團所取代)上存在差異。其例子包括：2-甲氧基-5-十六烯酸、鹵代棕櫚油酸比如ω-氟代棕櫚油酸、硝化棕櫚油酸、氯化棕櫚油酸、ω-羥基壬烯二酸等。本說明書中使用的術(shù)語“混合物”包括合成棕櫚油酸以及其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物，其保持抑制海虱附著于魚上的活性。例如，混合物可以包括合成棕櫚油酸和合成棕櫚油酸的異構(gòu)體，或者它們可以包括合成棕櫚油酸的結(jié)構(gòu)類似物和合成棕櫚油酸的衍生物。術(shù)語“溶液”是指固體或油通過溶解或懸浮而分散在液體中的液體。“可接受的賦形劑”是指任何藥學上可接受的賦形劑或者獸醫(yī)賦形劑，它不會干擾抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物活性(該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物包含合成棕櫚油酸、其鹽、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物，和/或混合物)，并且對其所施予的魚無毒?！霸鰪妱┙M合物”是指活性組合物，其在魚中是物種特異性的，并且其可用于增強如本文中所述的基本化學信息素組合物或者與如本文中所述的基本化學信息素組合物協(xié)同地起作用，以增強如本文所述的基本化學信息素組合物在魚中的有效性。“施予(administering)”是指，將如本文中所述的包含合成棕櫚油酸的抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物施用于魚的水環(huán)境、或者將如本文中所述的包含合成棕櫚油酸的抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物施用于魚餌用以攝食、或者將如本文所述的抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物直接施用在魚上或施用于魚內(nèi)。因此，本發(fā)明也預(yù)期到對魚口服、注射、局部施予以及將化學信息素組合物置于魚的環(huán)境?！碍h(huán)境”是指魚周圍環(huán)境?！盎旧嫌伞M成”是指，抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物具有合成棕櫚油酸的活性成分，但可以包括其它不會影響所述活性成分的化學信息素特性的化合物。本發(fā)明涉及包含抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素和可接受的賦形劑的化學信息素組合物，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素包含合成棕櫚油酸、其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或混合物。如本文中所述，化學信息素組合物包含抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素和可接受的賦形劑，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素包含約0.1ppm～約10ppm、或者約0.6ppm～約6ppm之間、或者約1ppm～約5ppm之間、或者約0.05ppm～約20ppm之間的合成棕櫚油酸、其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或它們的混合物。另一方面，本發(fā)明還涉及化學信息素組合物，該化學信息素組合物包含抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素和無毒的填料或增強劑組合物、以及可接受的賦形劑，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素包含約0.1ppm～約10ppm之間、或者約0.6ppm～約6ppm之間、或者約1ppm～約5ppm之間、或者約0.05ppm～約20ppm之間的合成棕櫚油酸的鹽、合成棕櫚油酸的衍生物、合成棕櫚油酸的異構(gòu)體和/或合成棕櫚油酸的結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或它們的混合物。另一方面，本發(fā)明還涉及組合物，該組合物包含抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素和可接受的賦形劑，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素包含約0.6ppm～約6ppm的合成棕櫚油酸、其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或它們的混合物?？山邮艿馁x形劑是藥學上可接受的賦形劑或獸醫(yī)可接受的賦形劑。它包括溶劑、分散體介質(zhì)、吸收延遲劑等。這些藥學上可接受的賦形劑如remington的pharmaceuticalsciences第21版(2005)中所述?？山邮艿馁x形劑可以例如是乙二醇醚或者生理鹽水。可接受的賦形劑將隨配制化學信息素組合物的方式而變化。它可以在制劑期間被添加入抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物中，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物包含合成棕櫚油酸、或其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或它們的混合物。本文所述的化學信息素組合物的藥學上可接受的鹽包括為合成棕櫚油酸的有機鹽或無機鹽的那些物質(zhì)。這些是已知的，并且描述在醫(yī)師桌面參考手冊(physician’sdeskreference)、默克索引和古德曼+吉爾曼治療學的藥理學基礎(chǔ)中。藥學上可接受的鹽例如為與無機酸(比如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸等)形成的、或者與有機酸(比如草酸、富馬酸、酒石酸、丙二酸、醋酸、檸檬酸、安息香酸等)的鈉、鉀、銨、鈣和鎂鹽。本文中所述的抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物可以進一步包含無毒的填料或者增強劑組合物。無毒的填料選自下組：脂肪酸、醇、胺、角鯊烯、甘油及它們的混合物，而增強劑組合物含有：來自吲哚衍生物的胺和脂肪酸、這些胺和脂肪酸的酯、酮、丙酮、醇或者甾醇。另一方面，本文中所述的抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物是合成棕櫚油酸的酯、醇、酮、酰胺、醚、醛或甾醇衍生物、其鹽、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或它們的混合物。本文中所述的抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物可以配制在化學載體上，前提條件是：保持合成棕櫚油酸、其鹽、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或它們的混合物的生物活性結(jié)構(gòu)。這種載體分子包括冠狀化合物比如冠醚、脂質(zhì)體、納米顆粒、微粒和載體蛋白?？梢詫⑷魏畏N類的脂質(zhì)體用于誘陷本文中所公開的化學信息素組合物?？梢允褂萌魏翁烊换蚝铣傻牧字热缌姿岣视王ズ颓手瑏碇谱髦|(zhì)體?？梢允褂锰烊涣字?，比如磷脂酰膽堿(pc)、磷脂酰乙醇胺(pe)和磷脂酰絲氨酸?？墒褂玫暮铣闪字ǘ王Ａ字Ｄ憠A、二油酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰膽堿和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺。根據(jù)應(yīng)用，可以將膽固醇混入脂質(zhì)體中?？梢砸栽?∶1或者甚至2∶1的膽固醇對pc的摩爾比之間變化的濃度，混入膽固醇。脂質(zhì)體可以是單層囊泡(unilamellarvesicles)或者多層囊泡(multiamellarvesicles)。脂質(zhì)體還可以交聯(lián)。本發(fā)明的脂質(zhì)體可以通過本領(lǐng)域已知的方法，使用被動加載技術(shù)或主動加載技術(shù)進行制備。機械分散法的例子包括脂質(zhì)膜水合方法、微乳液法、超聲處理、法壓法(frenchpressmethod)、薄膜擠壓法、干燥重構(gòu)脂質(zhì)體法(driedreconstitutedvesiclemethod)、凍融脂質(zhì)體法。溶劑分散方法包括乙醇注射、醚注射、雙乳液囊泡、反相蒸發(fā)囊泡和穩(wěn)定的復(fù)層囊泡(stableplurilamellarvesicles)。對于脂質(zhì)體制備，還可以使用去污劑比如膽酸鹽和曲通100和通過透析、稀釋或柱層析來除去去污劑。此外，還可以使用納米顆粒來遞送如本文所述的化學信息素組合物。這些顆粒的尺寸小于或等于100nm。它們可以由以下材料進行制作：天然材料或衍生物、樹枝狀聚合物(dendrimer)、富勒烯、聚合物、二氧化硅、清蛋白、金、水凝膠和本領(lǐng)域已知的其它材料。用于制造納米顆粒的天然材料的例子包括殼聚糖、葡聚糖、明膠、藻酸鹽和淀粉?？杀挥糜诒景l(fā)明的納米顆粒中的各種聚合物包括聚乳酸、聚(氰基)丙烯酸酯、聚乙烯胺、嵌段共聚物、聚已酸內(nèi)酯和聚(乳酸共乙醇酸)(plga)。納米顆?？梢酝坑懈鞣N材料，比如葡聚糖涂層、腸溶包衣、聚合物涂層、金涂層、聚乙二醇(peg)涂層和碳水化合物涂層。納米顆粒可以使用不同的方法進行制備，比如研磨、熱解(pyrolysis)、使用熱等離子體法、氣相技術(shù)、多重乳液-溶劑蒸發(fā)法、氣流聚焦、電噴射、流體納米沉淀法、乳液擴散-蒸發(fā)法、改性相轉(zhuǎn)化/溶劑擴散法、或者溶膠-凝膠法。這些方法描述在文獻中，并且為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知。微粒是尺寸在0.1～100μm之間的顆粒。它們可以使用與納米顆粒的材料類似的材料，由天然聚合物或合成聚合物制作。因此，以下是一些用來制備微粒的材料：纖維素、淀粉、溶血磷脂酰膽堿、聚(乳酸)、磷酸膽堿、聚(dl-丙交酯-共-乙交酯)、藻酸鹽-精胺、聚氨基酸、聚磷腈、清蛋白、葡聚糖、eudragits100、eudragitl100、明膠和3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基-封端的聚二甲硅氧烷。本發(fā)明的微粒還可以與其它材料接枝。作為例子，使用聚甲基丙烯酸甲酯或聚丙烯酸酯接枝的淀粉微粒、或者有機硅接枝的淀粉微粒。此外，還可以使用與上述針對納米顆粒所述的那些材料相同的涂料來涂覆微粒：即葡聚糖涂層、腸溶包衣、聚合物涂層、金涂層、eudragits100涂層、peg涂層和碳水化合物涂層。在配制微粒中，可以使用若干方法，比如噴霧-干燥、乳液/蒸發(fā)、雙重乳液/蒸發(fā)、鹽析、溶劑置換/沉淀、低溫制備(cryopreparation)和油包油乳液/溶劑蒸發(fā)。這些以及其它方法描述在以下文獻中(例如參見kendall等人，eur.j.pharm.，sci37，284-290(2009))，并且為本領(lǐng)域已知。如本文中所述的化學信息素組合物可以呈以下形式：粉末、片劑、丸劑、膠囊、粒狀、粒狀顆粒、干片或者其它適于使用的形式。此外，它還可以呈置于膠束中或者被微膠囊化的緩釋制劑形式?；瘜W信息素組合物還可以被凍干。在一個實施方式中，如本文中所述的化學信息素組合物使用本領(lǐng)域已知的聚合物的化學配方(比如eudragit、乙基纖維素、微晶纖維素、滑石和硬脂酸鎂)，被配制成無毒的在水中可分散的片劑。將聚合物與化學信息素組合物進行混合，然后使用壓片機進行壓縮。片劑的尺寸可以根據(jù)要處理的面積大小和魚的數(shù)量而變化?？梢员惶砑尤肱浞街械牧硗獾妮d體包括：葡萄糖、乳糖、甘露糖、阿拉伯樹膠、明膠、甘露糖醇、淀粉糊、三硅酸鎂、滑石、玉米淀粉、角蛋白、膠體二氧化硅、馬鈴薯淀粉、脲、短鏈脂肪酸、中等鏈長甘油三酯、葡聚糖、低聚果糖(oligofructans)和適用于制備制劑的其它載體，其呈固體、半固體或者液體形式。此外，可以使用輔助的穩(wěn)定劑、增稠劑或著色劑，例如作為穩(wěn)定劑和干燥劑，比如丙酮糖(triulose)。本文中所述的化學信息素組合物可以在如下所述的各種溶液中稀釋，并且可以各種液體形式使用。本發(fā)明的另一方面是含有抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物的溶液，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物包含合成棕櫚油酸、或其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或它們的混合物。另一方面，含有抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物、和無毒的填料或增強劑組合物的溶液形成了本發(fā)明的一部分，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素組合物包含合成棕櫚油酸、或其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或它們的混合物。溶液可以包含約0.1ppm～約10ppm之間、或約0.6ppm～約6ppm之間、或約1ppm～約5ppm之間、或約0.05ppm～約20ppm之間的合成棕櫚油酸或其鹽、衍生物、異構(gòu)體、和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或它們的混合物?？梢詫o毒的填料或增強劑組合物添加入所述溶液中。另一方面，一種包含抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素的溶液，包含約0.6ppm～約6ppm的合成棕櫚油酸或其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或它們的混合物。通過將溶劑添加入合成棕櫚油酸或其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持它們的化學信息素能力)，和/或它們的混合物溶液中，可以制作溶液。溶劑的例子包括堿性溶液、乙醇(ethylalcohol)、乙醇(ethanol)、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺、二甲亞砜、生理鹽水等。溶液可以呈噴霧劑、氣溶膠、水下擴散器、緩釋基質(zhì)的形式，可注射，并且呈滴劑形式?？梢詫⑺砑尤胨凶鳛樵。蛘邔⑺胖迷隰~食中，或者可以將它施用于魚，或者將它注入魚內(nèi)。因此，本發(fā)明包括口服治療、局部治療和可注射治療。此外，本發(fā)明還包括將如本文中所述的化學信息素組合物放置在魚環(huán)境中?？梢詫Ⅳ~引誘劑比如乳酪、玉米粒、鹽蝦、龍蝦(crawfish)等添加入如本文所述的組合物或溶液中。本發(fā)明的另一方面是驅(qū)使海虱離開魚的方法，所述方法包括對魚施予化學信息素組合物或化學信息素溶液，該化學信息素組合物或化學信息素溶液包含抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素和可接受的賦形劑，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素包含合成棕櫚油酸、其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或它們的混合物。本發(fā)明的另一方面是驅(qū)使海虱離開魚的方法，所述方法包括對魚施予化學信息素組合物或化學信息素溶液，該化學信息素組合物或化學信息素溶液包含抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素和無毒的填料或增強劑組合物、以及可接受的賦形劑，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素包含合成棕櫚油酸、其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或它們的混合物。本發(fā)明的另一方面是驅(qū)使海虱離開魚的方法，所述方法包括對魚施予化學信息素組合物或化學信息素溶液，該化學信息素組合物或化學信息素溶液包含抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素和可接受的賦形劑，該抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素包含約0.1ppm～約10ppm、或約0.6ppm～約6ppm、或約1ppm～約5ppm、或約0.05ppm～約20ppm的合成棕櫚油酸、其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或它們的混合物。此外，還可以將無毒的填料或增強劑組合物添加入該組合物中。在這種方法中，化學信息素組合物或化學信息素溶液被施予45分鐘～2小時、或10分鐘～5小時、或20分鐘～3小時。時間段取決于如本文中所述的化學信息素組合物或如本文中所述的化學信息素溶液如何配制。本發(fā)明的另一方面是用于抑制海虱附著于魚上的如本文中所述的化學信息素組合物或如本文中所述的化學信息素溶液。該化學信息素組合物或化學信息素溶液，用于抑制海虱附著于魚上，其中，所述化學信息素組合物或化學信息素溶液包含約0.1ppm～約10ppm、或約0.6ppm～約6ppm、或約1ppm～約5ppm、或約0.05ppm～約20ppm的合成棕櫚油酸、其鹽、衍生物、異構(gòu)體和/或結(jié)構(gòu)類似物(其保持驅(qū)使海虱離開魚的化學信息素能力)，和/或它們的混合物。本文中所述的化學信息素組合物和溶液包含脂肪酸。脂肪酸以固體形式可從各種公司中購得。此外，它們還可以通過本領(lǐng)域已知的方法化學合成或酶法合成。然而，由于其難以溶解脂肪酸，因而通常在恒定攪拌下，并且在約37℃～約38℃之間(更優(yōu)選約38℃)的溫度下，將脂肪酸添加入溶劑中。一旦獲得，可以測試本發(fā)明的組合物抑制海虱的功效?，F(xiàn)在，將通過以下實施例的描述來說明本發(fā)明，毫無疑問地，其實質(zhì)上并不是為了限制本發(fā)明。進一步地，本發(fā)明的特征將從以下觀察中變得更清楚，毫無疑問地，這僅僅是為了說明本發(fā)明的范圍而不是以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實施例實施例1-推定的化學信息素的化學鑒定對60條鮭科魚(salmonidfish)(36條鮭魚(salmon)和24條虹鱒)進行采樣，用于局部解剖粘液和血液分析。出于同樣的目的，將12條鮭魚的互補的種群(complementarypopulation)用于全身粘液采樣，而將屬于鱈科的12條非鮭科魚也進行采樣。鱈科種群(population)包含以下屬(genus)和種(species)：-大西洋真鱈(gadusmorhua)：5條魚-綠青鱈(pollachiusvirens)：10條魚-青鱈(pollachiuspollachius)：2條魚-黑線鱈(melanogrammusaeglefinus)：1條魚對所有樣品(包括血樣和血涂片)進行化學分析。對血樣分析蛋白、皮質(zhì)醇血漿水平和揮發(fā)性化合物，而對血涂片分析異嗜性細胞/淋巴細胞比值(heterophilestolymphocytesratio，hlr)和白細胞。將一半的粘液樣品保持在-18℃下用于免疫評估和蛋白鑒定，而將另一半用于揮發(fā)性化合物的鑒定。根據(jù)may-grünwald-giemsa方法對血涂片進行染色，用于白血細胞計數(shù)，然后計算異嗜性細胞/淋巴細胞比值(hlr)?；旧?，這個方法包括：將血涂片固定在甲醇中15分鐘，使用may-grunwald進行染色5分鐘，在giemsa中進行染色10分鐘，在ph＝6.8下的緩沖液中進行沖洗，在丙酮中脫水兩次，在二甲苯中洗凈三次，對白細胞、異嗜性細胞和淋巴細胞數(shù)到合計60個細胞。使用來自生命科學的酶聯(lián)免疫吸附(elisa)檢測，對血樣進行測試，以評估皮質(zhì)醇血漿水平。首先，通過使用用于選擇性水溶性或脂溶性的不同的溶劑比如二氯甲烷，提取揮發(fā)性化合物。利用gc-gc/ms法，分析這種提取液。對色譜圖和它們的變異進一步進行分析。到目前為止被考慮的唯一指標是皮質(zhì)醇的血漿濃度。測量值與文獻中公布的值相當。盡管如此，還是獲得了一些異常數(shù)值，特別是從鮭魚(salmon)中。在鮭魚(salmon)中，攜帶海虱的魚相比于沒有寄生物的那些魚，在它們之間沒有顯著差異。兩組顯示出大約100,000pg/ml的高濃度血漿皮質(zhì)醇，但兩組樣品是從采樣前剛宰殺的魚中獲得的。相反地，在虹鱒中，相比于非侵染魚(61,408.75pg/ml)，侵染魚類具有較高的血漿皮質(zhì)醇濃度(78,490.55pg/ml)。鮭魚(salmon)中不存在差異可能與在血液采樣之前宰殺魚有關(guān)。血液樣品和粘液樣品使用二氯甲烷進行提取，然后使用使它們經(jīng)過由perkinelmer公司制造的渦輪質(zhì)譜儀進行氣相色譜/質(zhì)譜(gc/ms)。在180℃下，使用(ei+)以70ev的能量轟擊實現(xiàn)探測。使用長度為30m的jw柱型db5(id＝0.25mm；25μm的薄膜；以1/20的分流以及45秒的分流/不分流)。為了確認從gc/ms分析中獲得的特定分子的結(jié)構(gòu)，進行甲烷中的正化學電離(ci+)，以可視化分子峰(分子質(zhì)量)。該方法為本領(lǐng)域已知。使用數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果，以獲得最可能圖譜。具有這種數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)庫是本領(lǐng)域中公知的。對五種可能令人感興趣的化學信息素進行鑒定。這些化學信息素如下所述。來自青鱈屬(pollachius)的推定的異源外激素(pasa：青鱈屬抗海虱異源外激素)該分泌物由青鱈(pollock)(綠青鱈(pollachiusvirens))獲得。它是揮發(fā)性化合物的締合，其不存在于鮭科魚(salmonid)中。該分泌物是令人感興趣的，這是由于這些魚的種群似乎大量存在于其中養(yǎng)殖有鮭科魚(salmonid)的箱子中。此外，盡管這些野生魚消耗鮭魚的食物(它們中的大多數(shù)在捕獲之后回吐三文魚顆粒)，并且早已經(jīng)存在于食物中和鮭科魚(salmonid)皮膚粘液中的揮發(fā)性化合物存在于它們的皮膚粘液中，但是這些魚未遭受海虱攻擊。來自健康的鮭科魚(salmonid)的推定的異源外激素(hrsa1和hrsa2：健康穩(wěn)定的鮭科魚異源外激素(healthyresistantsalmonidallomone)1和健康穩(wěn)定的鮭科魚異源外激素2)在非侵染的鮭魚和虹鱒的皮膚粘液中，發(fā)現(xiàn)了揮發(fā)性化合物的締合，其可以來幫助橈足幼體避免定殖于具有有效免疫系統(tǒng)的魚類中。而且，通過將化合物的該締合與非侵染鮭魚或鱒魚(它們與侵染魚生活在一起)的分析進行比較，可以將化合物的該締合細分為兩個亞組：hrsa1和hrsa2。來自侵染鮭科魚的推定的種間激素(vssk：易危鮭科魚海虱種間激素(vulnerablesalmonidsealicekairomon))在被侵染的鮭魚和虹鱒的皮膚粘液中，發(fā)現(xiàn)了揮發(fā)性化合物的締合，其可以通過幫助橈足幼體選擇免疫系統(tǒng)受損且使得它們易受寄生物攻擊的魚。該分泌物必須與在攜帶海虱的魚中增加的另一化學模式區(qū)分開來。推定的海虱引誘信息素(lhsp：瘡痂魚虱屬宿主信號信息素(lepeophtheirushostsignallingphero))該分泌物可以通過虱子(在虱子在宿主上發(fā)育之后)釋放，或者該分泌物可以是由海虱誘發(fā)的、來自魚的分泌物。對于所有下述篩選試驗，溶液已被盲法(blinded)，并將針對推定的異源外激素的溶液定為a、b、d、e、f，將針對推定的種間激素的溶液定為m、n、p、q、r、s。在下述實施例中，對這些溶液進行描述。實施例2-推定的化學信息素的篩選在評估推定的化學信息素的效果中，采用smileychamber試驗(圖2和圖3)。這是改編自日常嗅覺儀的試驗。將針對各新型化學信息素的一組四個600ml的燒杯和四個2m的長管進行分隔。使用流動著的溫淡水將smileychamber和橈足幼體圓柱進行洗滌30秒，使用去污劑進行30秒(任溫淡水流動)，讓溫淡水流動另一30秒，清空隔間(chamber)并且將2-丙醇噴灑在隔間中并集中在管支架上和有機硅上，再次讓溫淡水流動30秒，然后讓來自水分配器的冷水流動，最后添加海水。視需要，可以重復(fù)進行這個清洗流程若干次。然后，用300～500ml的海水填充三個燒杯。剩余的燒杯用6ppm的化學信息素進行填充。smileychamber用300ml的海水進行填充，或者用正好足以覆蓋管的量的海水填充。將泵速設(shè)為20rpm(5.49ml/min)。針對管子，在隔間的對照側(cè)和測試側(cè)上以及燒杯上進行同樣的設(shè)置。將橈足幼體圓柱放置在兩個出口管中間，然后通過手在圓柱上施加壓力的同時，將橈足幼體倒入圓柱中，從而開始實驗。進行核查，以確保橈足幼體沒有逃離圓柱。將泡沫聚苯乙烯墻放置在smileychamber周圍，然后打開置于該隔間之上的兩盞燈。然后，打開泵，開始計時。在38秒之后，含有30％棕櫚油酸、20％c13十三烷醛和50％油醇的物質(zhì)a、以及含有50％棕櫚油酸和50％角鯊烯的物質(zhì)b開始進入隔間。在3分30秒之后，將帶有橈足幼體的圓柱緩慢地直線升高，將相機放置在該蓋子上。在t0、t3min、t6min、t9min和t10min下拍照。在結(jié)束實驗10分鐘之后，關(guān)掉泵。將照相機、蓋子和泡沫聚苯乙烯墻移除，然后觀察對照側(cè)和測試側(cè)之間的活性的差異的視覺印象，以及視覺上的橈足幼體的粗略計數(shù)。對數(shù)據(jù)進行分析，以觀察起反應(yīng)橈足幼體是否向一個方向移動。使用染色劑觀察試驗顯示：在6分鐘之后，從一側(cè)到另一側(cè)存在反流(reflux)，從而導致兩個通道的混合。出于這個原因，評估的主參數(shù)是t6min下的圖片。根據(jù)實驗方案，對推定的異源外激素與調(diào)理水競爭進行測試。該調(diào)理水由與鮭魚粘液進行混合的海水構(gòu)成。為避免傷害魚類或者被任何血液污染樣品，粘液通過以下方法獲得：將500g的鮭魚放置在一次性使用塑料袋中15秒。粘液粘附于塑料袋壁上，然后將該粘液與600ml的海水進行混合。在用于測試前，將該調(diào)理水存儲在+4℃下。檢驗三種推定的種間激素(e含有30％的棕櫚油酸、30％的油酸和40％的角鯊烯，q含有30％的棕櫚油酸、30％的油酸和40％的棕櫚酸，以及r含有30％的月桂酸、30％的棕櫚酸和40％的油酸)和2種推定的異源外激素(a含有30％的棕櫚油酸、20％的c13十三烷醛和50％的油醇，以及b含有50％的棕櫚油酸和50％的角鯊烯)。使用調(diào)理水的試驗被用來鑒定試驗所需的合適濃度。在3種檢測種間激素的情況下，含有30％的棕櫚油酸、30％的油酸和40％的角鯊烯的e是最有效的化合物，其顯示出非常明顯的引誘效果并且在橈足幼體中引起明顯的躁動。考慮到參照引誘劑異佛爾酮用作對照，含有30％的棕櫚油酸、30％的油酸和40％的角鯊烯的e溶液顯示出非常相當?shù)墓π?。含?0％的棕櫚油酸、30％的油酸和40％的棕櫚酸的q雖然具有多功能，但是卻不具有可比的效果。含有30％的棕櫚油酸、30％的油酸和40％角鯊烯的e，由易危鮭魚獲得的推定種間激素似乎是令人感興趣的種間激素，其功效必須在進一步試驗中確認。如上所述的代碼e對應(yīng)于推定的種間激素群vccmis(來自侵染鮭科魚的皮膚粘液的揮發(fā)性化合物)。在被侵染的籠里生活的非侵染鮭魚和鱒魚的分泌物中識別出的異源外激素a(含有30％的棕櫚油酸、20％的c13十三烷醛和50％的油醇)和異源外激素b(含有50％的棕櫚油酸和50％的角鯊烯)，測試它們與調(diào)理水的競爭。在4次重復(fù)實驗中，b未顯示出任何可見的效果。相反地，如上所述的a卻顯示數(shù)一些令人感興趣的效果。進行10次重復(fù)實驗，其中僅5次提供有用的數(shù)據(jù)。a似乎抑制了調(diào)理水的引誘效果。如上所述，a屬于推定的異源外激素hrsr的群(由健康穩(wěn)定的鮭科魚釋放的)。實施例3-通過線型嗅覺儀篩選本試驗的目的是為了獲得更確切的結(jié)果，在橈足幼體計數(shù)上具有更高的精密度。由于橈足幼體似乎運動性有限，因而使用被劃分為3個區(qū)室的小設(shè)備將嗅覺儀簡化(圖4)。該系統(tǒng)首先對攜帶化學信息素的那些通道(一個通道，其具有使用乙醇作為溶劑的參照物；一個通道，其具有測試混合物)的對稱性進行驗證。實驗方案中的另一改善是對計數(shù)法的改進，以確保在嗅覺儀中被引入的且在各自區(qū)室中被統(tǒng)計的橈足幼體的數(shù)量被準確計數(shù)。為了計數(shù)橈足幼體，它們首先被從飼養(yǎng)箱中撈出，然后被劃分成滴劑，并且放置在elisa型塑料板的孔中。立體顯微鏡被用來計數(shù)橈足幼體，因此橈足幼體的確切數(shù)量已知并且被輸入嗅覺儀。線型嗅覺儀被劃分為3個內(nèi)部區(qū)室：左分支和右分支、以及中心區(qū)域，加上外部流出區(qū)域(其中，橈足幼體被收集在培養(yǎng)皿中，并過濾以計數(shù)橈足幼體)。30只橈足幼體幼蟲被加入嗅覺儀的主分支中，其中，它們面對在8℃～12℃的溫度下的恒定流量(0.84ml/s)。該液流被劃分成2個子液流，各自來自250ml的瓶子。從一個子液流中，橈足幼體僅接收試驗產(chǎn)物的溶劑(乙醇)，從另一個子液流中，橈足幼體接收濃度為10ppm的推定的化學信息素混合物。試驗進行十(10)分鐘。在該時間段后，停止液流，將手術(shù)鑷施用于嗅覺儀上的管上，以阻斷包含于4個區(qū)域中的水。通過立體顯微鏡檢查該水，以計數(shù)橈足幼體(圖5)。檢驗3種推定的異源外激素混合物(a、b、d)和4種推定的種間激素(e、q、r、s)。異源外激素混合物包含以下組合物：a：含有30％的棕櫚油酸、20％的c13十三烷醛和50％的油醇。b：含有50％的棕櫚油酸和50％的角鯊烯。d：含有60％的油醇和40％的角鯊烯。種間激素混合物包含以下組合物：e：含有30％的棕櫚油酸、30％的油酸和40％的角鯊烯。q：含有30％的棕櫚油酸、30％的油酸和40％的棕櫚酸。r：含有30％的月桂酸、30％的棕櫚酸和40％的油酸。s：含有40％的月桂酸、40％的肉豆蔻酸和20％油酸。結(jié)果如以下表1～6所示。通過威爾科克森符號秩(wilcoxonsignedrank)計算統(tǒng)計分析。表1-異源外激素a在沒有來自編號6的數(shù)據(jù)的情況下，重新計算數(shù)據(jù)，如下表2所述。表2-異源外激素a(無#6)下圖顯示：由于異源外激素a，橈足幼體的平均數(shù)量在安慰劑分支中顯著高于在處理分支中。表3-種間激素e表4-種間激素q表5-種間激素r表6-種間激素s在該檢驗中所使用的所有混合物之間，提供的真正令人感興趣結(jié)果的唯一一個是a。該溶液可以被視為推定的異源外激素混合物。相反地，使用e的檢驗導致了一些互相矛盾的結(jié)果、產(chǎn)物(沒有提供顯著的引誘效果)。與之前檢驗的矛盾可能是由于在smileychamber系統(tǒng)中缺乏精度而導致的后果。實施例4：評價侵染測試中的推定的化學信息素考慮到先前測試的結(jié)果，注意力集中在推定的化學信息素a、b、e、f和p，其在前述實施例1～3中所述的測試中被積極地選擇或者未進行測試。基于這些結(jié)果，將試圖識別出導致橈足幼體脫離的特定信號。以下是化學信息素a、b、e、f和p中所述的化合物：a：含有30％的棕櫚油酸、20％的c13十三烷醛和50％的油醇。b：含有50％的棕櫚油酸和50％的角鯊烯。e：含有30％的棕櫚油酸、30％的油酸和40％的角鯊烯。f：含有50％的角鯊烯、30％的c13十三烷醛和30％的油酸。p：含有17％的肉豆蔻酸、17％的棕櫚酸、56％的棕櫚油酸和10％的油酸。在檢驗裝置(其包括四個23cm直徑的箱槽，該箱槽具有流出口(outflow))中，該檢驗使幼年鮭魚(重量差不多70克的幼鮭(smolt))暴露于高密度組的橈足幼體中45分鐘。該檢驗裝置用帳篷狀物進行保護，其不允許在魚周圍有任何陰影或不受控制的光。光線可以改變具有向光性的橈足幼體的行為。各箱槽接納幼鮭45min(圖6)。首先，將橈足幼體從它們的飼育箱槽中撈出，并在立體顯微鏡上進行計數(shù)。制備四種侵染劑量的橈足幼體(其各含有60只橈足幼體)，用于各檢驗的運行。將幼鮭們放置在含有處理溶液(或者安慰劑)的箱槽中，其活性物質(zhì)中的濃度為6ppm。該浴持續(xù)了10分鐘。然后，將幼鮭們放置在箱槽(其中，幼鮭們被保持在3ppm與先前的水浴中所使用的相同的處理(產(chǎn)品或安慰劑))中，以開始檢驗。該工藝的目的在于防止它們皮膚上的活性制品的濃度的任何顯著降低。在第一段10分鐘期間，打開流出口，關(guān)閉帳篷狀物。在那時，再次填充各箱槽，以達到充氧液體的初始體積(使用相同的溶液、制品或安慰劑進行再次填充)。然后，將流出口關(guān)閉5分鐘，在箱槽中加入侵染劑量。然后，打開流出口，并且保持打開狀態(tài)30分鐘，在每10分鐘再次填充(未打開帳篷狀物)。在暴露于橈足幼體45分鐘之后，以10倍于一般劑量(30～40mg/l)的濃度，施予中毒劑量的麻醉劑對幼鮭進行安樂死。將死亡的魚放置在塑料袋中，在塑料袋中，用海水對它們進行擦拭和沖洗。如圖7所示地，用金屬勺子來刮擦魚的皮膚，以除去所有可能附著在魚上的橈足幼體。對各魚進行清洗，從而使所有的橈足幼體和貝類從魚皮中脫離。將從清洗液中收集的液體進行過濾，以統(tǒng)計寄生物。在濾器上統(tǒng)計橈足幼體，以獲知魚外部身體上的橈足幼體的數(shù)量。然后，將鰓進行解剖，以統(tǒng)計在鰓上的橈足幼體的數(shù)目。檢驗的第一階段是在檢驗的復(fù)制品之間，對身體上和鰓上的橈足幼體的數(shù)目進行比較。這個階段的目的是在于驗證檢驗，并且測量它的標準差。檢驗的第二階段是在經(jīng)處理幼鮭和參照幼鮭之間，對身體上和鰓上的橈足幼體(下表中簡稱為cop)的數(shù)目進行比較，作為對照，參照幼鮭僅被浸浴于海水加乙醇的五種溶液中。結(jié)果如下表所示。表7-參照(reference)/對照(control)復(fù)制物身上的橈足幼體鰓上的橈足幼體12112211318541825233618171858242921510305平均值21.23.0標準差3.81.8表8-化學信息素a復(fù)制物身上的橈足幼體鰓上的橈足幼體1210215231724151512461817221平均值17.11.6標準差3.51.3表9-化學信息素b復(fù)制物身上的橈足幼體鰓上的橈足幼體123322413170425352516137平均值21.22.5標準差5.02.5表10-化學信息素e復(fù)制物身上的橈足幼體鰓上的橈足幼體125321713185415455262227768151平均值15.53.0標準差6.81.9表11-化學信息素f復(fù)制物身上的橈足幼體鰓上的橈足幼體1234230431544254平均值23.34.0標準差6.20.0表12-化學信息素p復(fù)制物身上的橈足幼體鰓上的橈足幼體1236221632154215平均值21.55.5標準差1.00.6該檢驗的再現(xiàn)性似乎非常有趣，其中，魚身上的橈足幼體的數(shù)量似乎是恒定。根據(jù)文獻(tully等人，2002)，在該檢驗中，這種侵染低且極有可能涉及非常高濃度的橈足幼體。這些數(shù)據(jù)并未對任意的檢驗溶液產(chǎn)生任何顯著影響。觀察由如上所述的a所獲得的結(jié)果，它表明：相比于先前的檢驗，該溶液在該檢驗中并未顯示出相同的效果。如上所述的a不能夠抑制橈足幼體附著在幼鮭上。盡管缺乏意義，但是相比于參照或者相比于其他推定的異源外激素，使用如上所述的a處理的在幼鮭上的身體橈足幼體的數(shù)目不知何故較低。令人感興趣地，所有那些推定混合物包含一種通用的化合物，棕櫚油酸。實施例5-使用棕櫚油酸重復(fù)實施例4使用棕櫚油酸，重復(fù)與實施例4中相同的檢驗。結(jié)果如下表13所示。表13-棕櫚油酸復(fù)制物身上的橈足幼體鰓上的橈足幼體1602113375483平均值8.02.8標準差2.22.1棕櫚油酸提供重要的侵染降低。相比于bron等人(1993)和tully等人(2002)的數(shù)據(jù)，該測試提出了通過這樣的實驗侵染所揭示的可能“身體侵染(bodyinfestation)”的問題。橈足幼體受到突然加速的影響而傾向于附著于移動主體上(heuch和karlsen，1997)。在該實施例中，高密度橈足幼體的種群連續(xù)圍繞魚周圍。有理由懷疑，即使存在有效的異源外激素，它也會導致橈足幼體的多次相繼的附著-脫離。因此，當檢驗結(jié)束時，總有一些橈足幼體剛剛附著在身體上，且當在死魚上被收獲時，其沒有時間脫離。這種假說揭露了任何驗證可能的異源外激素產(chǎn)品的努力都有假陰性結(jié)果的風險。實施例6-驗證異源外激素棕櫚油酸確認該假說(橈足幼體在死魚上被收獲之前沒有時間脫離)的最佳方法是在三個分支實驗方案中進行相同的測試：兩個相同的分支作為預(yù)先實驗方案(參照分支和處理分支)，以及包括陰性參照的新型分支，其通過下述這種魚來進行：該物種不是瘡痂魚虱屬(lepeophtheirus)的天然宿主。在該實施例中，除了使用下述3組魚之外，根據(jù)完全相同的實驗方案測試合成棕櫚油酸：(1)陽性參照：未經(jīng)處理的小鮭魚；(2)陰性參照：大小相當?shù)挠啄犄L魚(大西洋真鱈(gadusmorhua))；以及(3)處理組：接受棕櫚油酸的小鮭魚。如實施例4中所述地，進行相同的實驗。結(jié)果如下表14和下表15所述。表14表15箱形圖結(jié)果如圖8所示。對結(jié)果進行統(tǒng)計分析，其如圖9～圖11所示。進行l(wèi)evenes檢驗，其是用來評估針對兩個以上的組計算的變量的方差齊性(equalityofvariances)的推理統(tǒng)計。結(jié)果如下表16所示。表163組的分布呈正態(tài)(normal)。進行tukey氏hsd檢驗，結(jié)果如下表17所示。表17這些結(jié)果顯示：在對照鮭魚和對照鱈魚之間存在高度顯著差異，在對照鮭魚和經(jīng)處理鮭魚之間存在高度顯著差異，而在經(jīng)處理鮭魚和對照鱈魚之間不存在顯著差異。討論和結(jié)論：在實施例4～6中的“被動的身體侵染”的假說得到驗證。橈足幼體附著在鱈魚上，該鱈魚為不是瘡痂魚虱屬(lepeophtheirus)的天然宿主的魚。在鰓上的侵染也還是被動侵染，其與試驗性侵染中的橈足幼體的高密度高度相關(guān)。異源外激素棕櫚油酸誘導了附著在鮭魚身體上的橈足幼體數(shù)量的顯著降低。經(jīng)合成棕櫚油酸處理的鮭魚以與鱈魚(是鮭瘡痂魚虱(lepeophtheirussalmonis)的天然的非侵染物種)相當?shù)姆绞奖磺秩?。實施?-抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素的異構(gòu)體作為鮭瘡痂魚虱(lepeophtheirussalmonis)橈足幼體對大西洋鮭(atlanticsalmon/salmosalar)的侵染行為的抑制劑的功效該實施例的目的在于檢驗抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素(scais)的異構(gòu)體作為鮭瘡痂魚虱(lepoephtheirussalmonis)橈足幼體對大西洋鮭(atlanticsalmon/salmonsalar)的侵染行為的抑制劑的功效。在該實施例中使用的抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素(scais)的該異構(gòu)體是反式-9-十六烯酸。通過使用4輪4條魚來實現(xiàn)該測試，其中8條使用反式-9-十六烯酸處理，而另外8條用作對照。針對各輪，測試4條魚；即2條經(jīng)處理魚和2條對照。為了被納入研究，幼鮭體重必須在70g～150g之間，橈足幼體必須能夠主動游泳。如果幼鮭患病(魚鱗(scale)缺損、魚鰭損傷、白內(nèi)障和/或游動異常)，則不在研究中使用它們。如果橈足幼體在剌激后不動，將它們從研究中剔除。針對各輪，將4條魚捕獲并引入至4個2-l的平底燒杯(其中添加有1.75l的海水)中。經(jīng)處理的魚在它們的海水中放入了6ppm的反式-9-十六烯酸，而在對照中僅使用海水。將0.52ml的處理或?qū)φ罩苯幼⑷?.75l的海水中。將4條魚浸浴在該溶液中10分鐘。然后，將魚轉(zhuǎn)移至另一3.5l的燒杯(其中加入了3.5l的海水)，所述海水使用3ppm的反式-9-十六烯酸處理，或者是僅海水的對照。將0.52ml的處理或?qū)φ罩苯幼⑷?.5l的海水中。平底燒杯配備有閥門，從而從該平底燒杯中清空0.875l。當魚被引入燒杯中時，打開閥門。在閥門打開10分鐘之后，燒杯中加入0.875l的處理的反式-9-十六烯酸或者0.875l的對照的海水。此后10分鐘(在將魚引入燒杯中之后的20分鐘)，關(guān)閉閥門，將以每條魚對應(yīng)60只橈足幼體(的比例)加入各平底燒杯中。5分鐘后(在將魚引入燒杯中之后25分鐘)，打開閥門。稍后10分鐘(在將魚引入燒杯中之后35分鐘)，各燒杯供應(yīng)有0.875l的反式-9-十六烯酸或者0.875l的對照海水。10分鐘后(在將魚引入燒杯中之后45分鐘)，各燒杯中加入0.875l的反式-9-十六烯酸或者0.875l的對照海水。10分鐘后(在將魚引入燒杯中之后55分鐘)，各燒杯中加入有0.875l的反式-9-十六烯酸或者0.875l的對照海水。然后，為了用過量的麻醉產(chǎn)品殺死魚，將2ml的注射入各平底燒杯中。然后，將魚引入被編碼的塑料袋中。在鰓室中，使用手術(shù)鉗拿著魚，并在魚上的不同部位擦洗三次。首先在塑料袋中擦洗魚的頂部，然后沖洗，接著在塑料袋中，擦洗魚的底部，然后沖洗，然后在塑料袋中將整個魚進行擦洗和沖洗。然后，將魚從塑料袋中拿出，然后稱重。然后，將塑料袋中的內(nèi)容物騰空于過濾器上，然后使用放大鏡，在各過濾器上統(tǒng)計橈足類的數(shù)目。對其他的魚和其它輪的魚，重復(fù)該工藝。表18示出了測試的魚的輪數(shù)，以及它們是否使用反式-9-十六烯酸進行處理或者使用對照的海水進行處理。表18輪左中心左中心右右1scais異scais異對照對照2對照scais異scais異對照3對照對照scais異scais異4scais異對照對照scais異其中，表18中的scais異是指反式-9-十六烯酸。表19是由該實施例獲得的結(jié)果。表19其中，表19中的scais異是指反式-9-十六烯酸。在排除標準或試驗缺陷的情況下，使用儲備魚重復(fù)實驗，直至獲得8條經(jīng)處理魚和8條對照魚(的結(jié)果)。如果被定性為荒謬的結(jié)果，則從數(shù)據(jù)中刪除異常值(非典型值)。如果數(shù)據(jù)的中心化(centering)和減少高于絕對值3，則它被認為是異常值。在該研究中并未發(fā)現(xiàn)非典型數(shù)值。使用9.4sas軟件(2002-2012，sasinstitute公司，cary，北卡羅來納，美國)，進行數(shù)據(jù)分析。使用sas9.4軟件中的單變量程序，使用殘差診斷圖(residualdiagnosticsplots)，對所有數(shù)據(jù)進行測試，以證明偏離正態(tài)(normality)的假設(shè)。根據(jù)正態(tài)和方差，使用在sas94軟件中的使用ttest程序的studentt檢驗、或者使用nparlway程序的wilcoxon兩樣本檢驗，進行對照組和經(jīng)處理組之間的比較(根據(jù)附著的橈足幼體的身體質(zhì)量和數(shù)量)。使用用ttest程序進行的魚檢驗，來驗證方差的齊性(homogeneity)。顯著性閾值(significancethreshold)通常設(shè)定為5％。表20其中，表20中的scai異是指反式-9-十六烯酸，nb是指數(shù)量。進行正態(tài)檢驗，反式-9-十六烯酸的結(jié)果如下表21中所述。表21進行正態(tài)檢驗，對照的結(jié)果如下表22中所述。表22所有使用的檢測推斷出針對反式-9-十六烯酸和對照進行檢驗的魚類的身體質(zhì)量的正態(tài)。針對方差同質(zhì)性的費舍爾檢驗的結(jié)果如下表23所示。表23對于“身體質(zhì)量”，處理組之間的方差是同質(zhì)的。使用studentt檢驗，其結(jié)果如下表24所示。表24根據(jù)“身體質(zhì)量”，在處理組之間鮭魚是同質(zhì)的。(p＝0.4027)結(jié)論對于“身體質(zhì)量”，大西洋鮭在試驗組之間是同質(zhì)的。“反式-9-十六烯酸(scais異)”對附著在大西洋鮭中的橈足幼體的數(shù)目具有顯著影響，而附著在經(jīng)反式-9-十六烯酸(scais異)處理的鮭魚中的橈足幼體的數(shù)量較低。實施例8-抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素片劑的制作含有抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素的水可分散片劑如下制作。將132g的抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素與150g的eudragitrl、200g的乙酸乙酯和110g的微晶纖維素進行共混。將25％的硬脂酸鎂和5％的滑石一起共混，然后添加入含有化學信息素的初始配方中。使用站旋轉(zhuǎn)式壓片機(stationrotarytabletingmachine，其具有8mm直徑的平?jīng)_頭)，壓縮混合物。實施例9-抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素片劑的功效該實施例的目的在于評估抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素(scais，其通過水可分散片劑連續(xù)釋放)在鮭瘡痂魚虱(lepeophtheirussalmonis)橈足類幼體對大西洋鮭幼鮭(大西洋鮭(salmosalar))的侵染行為上的功效。該實施例中使用的抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素(scais)為順式-9-十六烯酸(棕櫚油酸)。在該研究中，使用重量大約為90g的處于幼鮭時期以及產(chǎn)自(daugstad6392vikebukt，挪威)的72條大西洋鮭(sa/mosalar)。使用的2400只橈足幼體來自物種鮭瘡痂魚虱(lepeophtheirussalmonis)產(chǎn)自(bergen，挪威)。為了被納入研究，幼鮭體重必須在70g～150g之間，橈足幼體必須能夠主動游泳。如果幼鮭患病(魚鱗(scale)缺損、魚鰭損傷、白內(nèi)障和/或游動異常)，則不在研究中使用它們。如果橈足幼體在刺激后不動，將它們從研究中剔除。如果在試驗期間幼鮭被游在它們的背上，則它們被排除在研究中的數(shù)據(jù)之外。在實施處理之后的1小時、24小時、72小時和120小時時，測量侵染檢驗。在處理后的0小時、1小時、24小時、72小時和120小時時，進行血液檢驗。使用每箱槽40條魚，在兩組平行組的大西洋鮭幼鮭中進行研究：一組使用順式-9-十六烯酸的抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素片劑進行處理(其被放置在網(wǎng)袋(stringbag)下中間，其中水駐留在養(yǎng)殖箱槽中)，以及另一組是僅使用乙醇的對照。為了獲得血樣，兩個箱槽中各自關(guān)4條魚，并將魚引入0.7ml/l的的麻醉浴中。在1分鐘之后，使用具有0.6mm針的25ml注射器，在魚的尾靜脈中收集血樣。將一滴血液放置在載玻片上，使用塑料條進行血液涂片。使用迪夫快速染色劑(diff-quickstain，其是瑞氏-姬姆薩染色劑(wright-giemsastain)的改性的染劑)，測量來自這些血涂片的異嗜性粒細胞(heterophils)與淋巴細胞的比值(h/l)。將其余的血液注入4ml的肝素化管中，并將其存儲在-18℃下的冷藏箱中，直到隨后的血漿皮質(zhì)醇分析。通過酶聯(lián)免疫吸附(elisa)實驗試劑盒，對全部的血漿皮質(zhì)醇進行檢驗，其來自以1∶25(ng.ml-1)稀釋的血樣。按照以下方式，在實施處理之后的1小時、24小時、72小時和120小時進行侵染檢驗。兩個箱槽(對照和測試)中各自關(guān)兩條魚，將魚引入4個3.5l的平底燒杯(其添加有從各魚的原始箱槽中采樣的3.5l的水)。平底燒杯配備有閥門，當?shù)攘康娜芤罕灰霟瓡r，該閥門能夠清空0.875l的溶液。當將魚引入燒杯中時，打開閥門。在引入魚的10分鐘之后，平底燒杯中加入0.875l的它們各自的溶液(測試或?qū)φ?。在10分鐘之后(在將魚引入平底燒杯中之后的20分鐘)，關(guān)閉閥門。將以每條魚對應(yīng)60只橈足幼體(的比例)加入各平底燒杯中。在加入橈足幼體5分鐘后(在將魚引入平底燒杯中的之后的25分鐘)，打開閥門。10分鐘后(在將魚引入平底燒杯中之后的35分鐘)，各平底燒杯中加入它的各自處理溶液(順式-9-十六烯酸或者對照)。在10分鐘之后(在將魚引入平底燒杯中之后的45分鐘)，各平底燒杯中加入它的各自處理溶液(順式-9-十六烯酸或者對照)。10分鐘后(在將魚引入平底燒杯中之后的55分鐘)，各平底燒杯中加入它的各自處理溶液(順式-9-十六烯酸或者對照)。10分鐘后(在將魚引入平底燒杯中之后的65分鐘)，將2ml的加入各平底燒杯中，以通過過量的麻醉品來殺死魚。當魚死掉時，單獨將它們引入塑料袋中。使用手術(shù)鉗，將各條魚保持在塑料袋中，手術(shù)鉗被引入魚的鰓室。然后，在塑料袋中將魚擦洗3次；即使用水擦洗并沖洗魚的頂部，使用水擦洗并沖洗魚的底部，以及使用水擦洗并沖洗整條魚。然后，將魚從塑料袋中拿出，然后稱重。然后，將塑料袋的水內(nèi)容物清空于過濾器，以收集橈足幼體。使用放大鏡來統(tǒng)計各自過濾器上的橈足幼體的數(shù)量。對其它7輪的魚，重復(fù)該工藝。在排除標準或試驗缺陷的情況下，使用儲備魚來重復(fù)實驗。為了處理丟失數(shù)據(jù)和異常值，這種類型的數(shù)據(jù)不包括在整體結(jié)果中。初步分析顯示有利于經(jīng)處理組的陽性傾向。附著于對照幼鮭上的橈足幼體的平均數(shù)量為15.4，而附著于處理組上的平均數(shù)量為10.6。這些結(jié)果顯示：抑制海虱橈足幼體附著的化學信息(順式-9-十六烯酸)迅速并有效地結(jié)合于魚的粘液，以在封閉的3.5l的箱槽中(每條魚對應(yīng)60只橈足幼體)的高強度侵染檢驗中提供顯著的保護。棕櫚油酸(順式-9-十六烯酸)和反式-9-十六烯酸的異構(gòu)體可以被視為scais(抑制海虱橈足幼體附著的化學信息素)，負責篩選鮭魚虱可接受的宿主。棕櫚油酸(低分子量化合物，視作許多物種中的代謝產(chǎn)物，并且由于它的非毒性而眾所周知)是用于預(yù)防鮭魚養(yǎng)殖中海虱侵染的有希望的選項。盡管已經(jīng)以各種優(yōu)選實施方案的方式描述了本發(fā)明，但是技術(shù)人員會明白：可以在不脫離其范圍的情況下做出各種修改、替換、省略和變化。因此，其意圖是，本發(fā)明的范圍由以下權(quán)利要求(包括其等同方案)的范圍限定。當前第1頁12當前第1頁12