本發(fā)明涉及生發(fā)促進劑及其利用。另外，本發(fā)明涉及生發(fā)促進方法。
背景技術：
：因年齡增加、遺傳因素、社會壓力等原因所致的脫發(fā)癥而苦惱的人很多，正在對促進生發(fā)的育發(fā)劑、防止脫發(fā)的抗脫發(fā)劑等進行各種開發(fā)。例如，已知含有具有特定序列的大豆蛋白來源的肽作為有效成分的抗脫發(fā)劑(專利文獻1)。另一方面，本申請發(fā)明人從以前就對卵黃蛋白水解物的功能進行了研究，發(fā)現了抗氧化作用(專利文獻2)、骨強化作用(專利文獻3)、軟骨細胞增殖促進作用(專利文獻4)等。但是，未報道過卵黃蛋白水解物的生發(fā)促進作用，抗氧化作用、骨強化作用或軟骨細胞增殖促進作用與生發(fā)促進作用也沒有任何相關性?，F有技術文獻專利文獻專利文獻1：日本特開2008-247874號公報專利文獻2：日本特開2001-328919號公報專利文獻3：國際公開第wo2006/075558號專利文獻4：國際公開第wo2014/007318號技術實現要素：發(fā)明所要解決的問題本發(fā)明的目的在于提供卵黃蛋白水解物的新用途。用于解決問題的方法為了解決上述問題，本發(fā)明包含下述各發(fā)明。[1]一種生發(fā)促進劑，其特征在于，含有卵黃蛋白水解物作為有效成分。[2]如[1]所述的藥劑，其特征在于，具有促進毛乳頭細胞的生長因子產生的作用。[3]如[2]所述的藥劑，其特征在于，生長因子為選自由血管內皮細胞生長因子(vegf)、成纖維細胞生長因子-7(fgf-7)和胰島素樣生長因子-1(igf-1)組成的組中的一種以上。[4]如[1]～[3]中任一項所述的藥劑，其特征在于，其為口服劑。[5]一種藥物，其為用于促進生發(fā)的藥物，其含有[1]～[3]中任一項所述的藥劑。[6]一種補充劑，其為用于促進生發(fā)的補充劑，其含有[1]～[3]中任一項所述的藥劑。[7]一種食品添加劑，其為用于促進生發(fā)的食品添加劑，其含有[1]～[3]中任一項所述的藥劑。[8]卵黃蛋白水解物在制造生發(fā)促進劑中的應用。[9]一種非治療性的生發(fā)促進方法，其特征在于，使需要促進生發(fā)的人口服攝取卵黃蛋白水解物。本發(fā)明進一步包含下述各發(fā)明。[10]一種生發(fā)促進方法，其特征在于，對需要促進生發(fā)的動物給用[1]～[3]中任一項所述的藥劑的有效量。[11][1]～[3]中任一項所述的藥劑在生發(fā)促進中的應用。[12]如[1]～[3]中任一項所述的藥劑，其用于生發(fā)促進。[13]一種特定保健用食品、補充劑、營養(yǎng)輔助食品或功能性食品，其包含顯示出以生發(fā)促進為概念的宗旨的[1]～[3]中任一項所述的藥劑。發(fā)明效果根據本發(fā)明，能夠提供含有卵黃蛋白水解物作為有效成分的生發(fā)促進劑。由于卵黃蛋白水解物是來源于天然物的安全的物質，因此能夠廣泛作為可日常攝取的飲食品、藥物、飼料、補充劑、食品添加劑等使用。此外，本發(fā)明在可口服攝取這一點上是非常優(yōu)良的。附圖說明圖1是示出實施例1中制造的卵黃蛋白水解物的利用凝膠過濾色譜法進行的分子量分析的結果的圖。圖2是示出卵黃蛋白水解物混合飼料口服攝取第17天時的小鼠被毛再生面積的結果的圖。圖3是示出將普通飼料或卵黃蛋白水解物混合飼料口服攝取第17天時的小鼠背部被毛的情況進行比較的結果的圖。圖4是示出卵黃蛋白水解物的毛乳頭細胞的vegf產生促進效果的圖。圖5是示出由卵黃蛋白水解物產生的毛乳頭細胞的fgf-7mrna表達增加效果的圖。圖6是示出由卵黃蛋白水解物產生的毛乳頭細胞的igf-1mrna表達增加效果的圖。圖7是示出將普通飼料或卵黃蛋白水解物混合飼料口服攝取第14天時的誘導了毛發(fā)周期靜止期的小鼠背部被毛的情況進行比較的結果的圖。具體實施方式本發(fā)明提供含有卵黃蛋白水解物作為有效成分的生發(fā)促進劑。卵黃蛋白水解物只要是將卵黃蛋白水解而得到的物質即可。作為卵黃蛋白水解物的原料使用的卵黃可以列舉雞、鴨、鵪鶉等的卵黃，從生產率的觀點出發(fā)，優(yōu)選使用雞的卵黃。卵黃可以使用卵黃液、卵黃粉末、脫脂卵黃粉末等，其中優(yōu)選使用卵黃粉末、脫脂卵黃粉末。另外，從資源的有效利用和成本的觀點出發(fā)，優(yōu)選使用在從卵黃制造卵黃油、卵黃卵磷脂時作為副產物產生的脫脂卵黃。卵黃的脫脂處理優(yōu)選通過使食品加工中可使用的有機溶劑(例如乙醇、異丙醇、己烷等中的至少一種)作用于卵黃來實施。通常，通過在卵黃中添加這些溶劑、攪拌后收集生成的固體物質來進行?？梢詫⒃摬僮髦貜瓦M行多次。從簡便性和安全性的觀點出發(fā)，優(yōu)選使用乙醇。為了將卵黃蛋白水解而使用的蛋白水解酶沒有特別限定，優(yōu)選具有蛋白酶活性或羧肽酶活性且可用于食品制造的酶。可以列舉例如胃蛋白酶(ec.3.4.23.1)、胰蛋白酶(ec.3.4.21.4)、腎素(ec.3.4.23.15)、含有腎素的乳酪用途的粗制凝乳酶、羧肽酶a(ec.3.4.17.1)、芽孢桿菌屬細菌來源的蛋白酶(商品名“アルカラーゼ”諾維信公司制、商品名“オリエンターゼ22bf”hbi株式會社制、商品名“ヌクレイシン”hbi株式會社制、商品名“プロテアーゼs‘アマノ’g”天野酶制品株式會社制、商品名“サモアーゼpc10”大和化成株式會社制等)、曲霉屬曲霉菌來源蛋白酶(商品名“オリエンターゼons”hbi株式會社制、商品名“オリエンターゼ20a”hbi株式會社制、商品名“プロテアーゼp‘アマノ’3g”天野酶制品株式會社制、商品名“フレーバーザイム”諾維信公司制等)等。蛋白水解酶可以僅使用一種，也可以組合使用兩種以上。優(yōu)選為芽孢桿菌屬細菌來源的蛋白酶、胃蛋白酶或它們的組合。蛋白水解酶的濃度根據所使用的原料卵黃和酶進行適當變動，在原料使用脫脂卵黃的情況下，酶與脫脂卵黃的質量比優(yōu)選約1:20至約1:1000的范圍。另外，酶反應溫度、反應時間也根據所使用的原料卵黃和酶而不同，優(yōu)選在約25℃～約75℃下進行約1小時～約24小時的水解。所得到的卵黃蛋白水解物可以適當脫鹽后直接使用。另外，也可以通過利用超濾膜、凝膠過濾、各種柱層析、膜濾器、等電點的方法等進行純化、分級后使用。純化、分級后的卵黃蛋白水解物具有生發(fā)促進作用這一點例如可以通過實施例2、3中記載的方法等來確認。所得到的卵黃蛋白水解物在利用凝膠過濾色譜法進行的分子量分布分析中，相對于蛋白質、肽、氨基酸的合計的面積比，分子量約100以上且約20000以下的部分的面積比優(yōu)選占約65％以上，更優(yōu)選上述面積比占約75％以上，進一步優(yōu)選上述面積比占約85％以上，進一步優(yōu)選上述面積比占約90％以上。另外，作為更優(yōu)選的卵黃蛋白水解物，可以列舉如下的卵黃蛋白水解物：其為通過使用分子量1000的超濾膜的分級而得到的卵黃蛋白水解物，其中，在利用凝膠過濾色譜法的分子量分布分析中，相對于蛋白質、肽、氨基酸的總面積比，分子量約500以上且約20000以下的部分的面積比占約85％以上、優(yōu)選占約90％以上。如此得到的卵黃蛋白水解物具有生發(fā)促進作用、育發(fā)促進作用、養(yǎng)發(fā)作用、抗脫發(fā)作用等，因此能夠適合用作生發(fā)促進劑、育發(fā)促進劑、養(yǎng)發(fā)劑、抗脫發(fā)劑等的有效成分。本發(fā)明的生發(fā)促進劑可以改稱為育發(fā)促進劑、養(yǎng)發(fā)劑、抗脫發(fā)劑。本發(fā)明的生發(fā)促進劑中，卵黃蛋白水解物的含量沒有特別限定，優(yōu)選含有約0.05質量％～約50質量％的卵黃蛋白水解物，更優(yōu)選含有約0.1質量％～約25質量％。另外，卵黃蛋白水解物的每1天的給藥量根據給藥對象而不同，例如在對象為成人的情況下，通常為約0.05mg/天～約2000mg/天，優(yōu)選為約0.1mg/天～約1000mg/天。本發(fā)明的生發(fā)促進劑能夠促進毛乳頭細胞的生長因子產生。生長因子沒有特別限定，可以列舉例如血管內皮細胞生長因子(vegf)、成纖維細胞生長因子-7(fgf-7)、胰島素樣生長因子-1(igf-1)等，優(yōu)選為選自由vegf、fgf-7和igf-1組成的組中的一種以上，進一步優(yōu)選為vegf、fgf-7和igf-1。本發(fā)明的生發(fā)促進劑可以改稱為毛乳頭細胞的生長因子產生促進劑、毛乳頭細胞的血管內皮細胞生長因子(vegf)產生促進劑、毛乳頭細胞的成纖維細胞生長因子-7(fgf-7)產生促進劑、毛乳頭細胞的胰島素樣生長因子-1(igf-1)產生促進劑。本發(fā)明的生發(fā)促進劑可以通過口服或非口服中的任意一種途徑對哺乳動物進行給藥。作為口服劑，可以列舉顆粒劑、散劑、片劑(包含糖衣片)、丸劑、膠囊劑、糖漿劑、乳劑、懸濁劑等。作為非口服劑，可以列舉注射劑(例如皮下注射劑、靜脈內注射劑、肌肉內注射劑、腹腔內注射劑)、點滴劑、外用劑(例如經鼻給藥制劑、經皮制劑、軟膏劑)、栓劑(例如直腸栓劑、陰道栓劑)等。這些制劑可以利用本領域中通常進行的方法使用藥學上容許的載體進行制劑化。作為藥學上容許的載體，可以列舉賦形劑、粘結劑、稀釋劑、添加劑、香料、緩沖劑、增稠劑、著色劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、分散劑、助懸劑、防腐劑等，例如可以使用碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、砂糖、乳糖、果膠、糊精、淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低熔點蠟、可可脂等作為載體。口服用的固體劑(片劑、丸劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑等)可以優(yōu)選將有效成分與例如賦形劑(乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、微晶纖維素、淀粉等)、粘結劑(羥丙基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮、偏硅酸鋁酸鎂等)、崩解劑(纖維素乙醇酸鈣等)、潤滑劑(硬脂酸鎂等)、穩(wěn)定劑、助溶劑(谷氨酸、天冬氨酸等)等添加劑混合，按照常法進行制劑化。根據需要，可以用包衣劑(白糖、明膠、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯等)進行包覆，或者可以用兩個以上的層進行包覆?？诜玫囊簞?水劑、懸濁劑、乳劑、糖漿劑、酏劑等)通過將有效成分溶解、懸濁或乳化到通常使用的稀釋劑(純化水、乙醇或它們的混合液等)中來進行制劑化。該液劑可以進一步含有潤濕劑、助懸劑、乳化劑、甜味劑、風味劑、芳香劑、保存劑、緩沖劑等。作為非口服劑，可以列舉例如皮膚外用劑。皮膚外用劑可以應用于液劑、霜劑、軟膏劑、凝膠劑、氣溶膠劑等，只要是適合于外用的劑型，則不限定于這些。皮膚外用劑中，可以根據需要配合水、低級醇、助溶劑、表面活性劑、乳化穩(wěn)定劑、凝膠化劑、粘合劑、以及為了得到所期望的劑型而通常使用的基劑成分，也可以根據使用目的在不損害本發(fā)明效果的范圍內適當配合血管擴張劑、腎上腺皮質激素、保濕劑、殺菌劑、清涼劑、維生素類、香料、色素等。作為非口服劑，可以列舉例如注射劑。注射劑包含溶液、懸濁液、乳濁液和使用時溶解或懸濁于溶劑中來使用的固體的注射劑。注射劑通過將有效成分溶解、懸濁或乳化于溶劑中來進行制劑化。作為溶劑，例如可以使用注射用蒸餾水、生理鹽水、植物油、丙二醇、聚乙二醇、乙醇之類的醇類等和它們的組合。該注射劑中可以進一步含有穩(wěn)定劑、助溶劑(谷氨酸、天冬氨酸、聚山梨醇酯80(注冊商標)等)、助懸劑、乳化劑、無痛化劑、緩沖劑、保存劑等。這些注射劑在最終工序中滅菌或者通過無菌操作法來制造。另外，也可以制造無菌的固體劑、例如冷凍干燥品，在其使用前進行無菌化或者溶解在無菌的注射用蒸餾水或其他溶劑中來使用。本發(fā)明提供用于促進生發(fā)的藥物。本發(fā)明的藥物只要含有上述本發(fā)明的生發(fā)促進劑即可。本發(fā)明的藥物可以以口服用的固體劑(片劑、丸劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑等)、口服用的液劑等形態(tài)實施。這些制劑可以通過與上述同樣的方法進行制劑化。本發(fā)明提供用于促進生發(fā)的補充劑。本發(fā)明的補充劑只要含有上述本發(fā)明的生發(fā)促進劑即可。本發(fā)明的補充劑可以以口服用的固體劑(片劑、丸劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑等)或口服用的液劑等形態(tài)實施。這些制劑可以通過與上述同樣的方法進行制劑化。本發(fā)明提供添加有用于促進生發(fā)的卵黃蛋白水解物或者增加了卵黃蛋白水解物的量的飲食品而非飲食品本身。本發(fā)明的飲食品只要含有上述本發(fā)明的生發(fā)促進劑即可。飲食品包括健康食品、功能性食品、特定保健用食品、患者用食品。飲食品的形態(tài)沒有特別限定，例如可以制成自然流食、半消化態(tài)營養(yǎng)食品或成分營養(yǎng)食品、或者飲料劑等加工形態(tài)。作為飲食品的形態(tài)，可以列舉例如茶飲料、清涼飲料、碳酸飲料、營養(yǎng)飲料、果實飲料、乳酸飲料等飲料、蕎麥面、烏冬面、中華面、速食面等面類、糖、糖果、口香糖、巧克力、零食點心、餅干、果凍、果醬、奶油、烘焙糕點、面包等糕點和面包類、魚糕、火腿、香腸等水產畜產加工食品、加工乳、發(fā)酵乳等乳制品、色拉油、天婦羅油、人造奶油、蛋黃醬、起酥油、鮮奶油、調味汁等油脂和油脂加工食品、沙司、調料汁等調味料、咖喱、燉菜、蓋飯、粥、菜粥等蒸煮袋食品、冰激凌、沙冰、刨冰等冰制食品等。另外，本發(fā)明的飲食品包括顯示出以生發(fā)促進為概念的宗旨的特定保健用食品、補充劑、營養(yǎng)輔助食品、功能性食品等。另外，本發(fā)明的飲食品可以含有乳糖、淀粉、結晶纖維素、磷酸鈉等藥物用賦形劑。本發(fā)明提供用于促進生發(fā)的食品添加劑而非飲食品本身。本發(fā)明的食品添加劑只要含有上述本發(fā)明的生發(fā)促進劑即可。本發(fā)明的食品添加劑的形態(tài)沒有特別限定，可以列舉例如液狀、糊狀、粉末狀、鱗片狀、顆粒狀等。本發(fā)明的食品添加劑也包括飲料用的添加劑。本發(fā)明的食品添加劑可以基于通常的食品添加劑的制造方法來制造。本發(fā)明提供用于促進生發(fā)的飼料。本發(fā)明的飼料只要含有上述本發(fā)明的生發(fā)促進劑即可。作為飼料，可以列舉例如牛、馬、豬、綿羊、山羊、美洲鴕、羊駝、駱駝、兔、水貂、狐貍、毛絲鼠、鵝、鴨等的家畜用飼料、狗、貓等的寵物用飼料等。本發(fā)明的飼料除了在飼料中添加本發(fā)明的生發(fā)促進劑等以外，可以使用通常的飼料制造方法來加工制造。作為本發(fā)明的生發(fā)促進劑的有效成分的卵黃蛋白水解物是存在于食用經驗長的卵黃中的成分，因此安全性高，作用溫和，可以進行長期的攝取或使用。另外，有效成分的卵黃蛋白水解物為兼具多種作用的多功能成分，通過與用于生發(fā)促進而使用的其他有效成分組合使用，可以期待疊加或協(xié)同性的效果的提高。作為用于生發(fā)促進而使用的其他有效成分，可以列舉米諾地爾、非那雄胺等。本發(fā)明包含對需要促進生發(fā)的人給用卵黃蛋白水解物的有效量的生發(fā)促進方法。另外，還包含使需要促進生發(fā)的人口服攝取卵黃蛋白水解物的非治療性的生發(fā)促進方法。需要說明的是，“非治療性的”是不包括醫(yī)療行為、即通過治療對人體或動物的身體進行處置的行為的概念。本發(fā)明包含對需要促進生發(fā)的動物給用本發(fā)明的生發(fā)促進劑的有效量的生發(fā)促進方法。動物沒有特別限定，例如可以為人、人以外的哺乳動物等。人以外的哺乳動物沒有特別限定，可以列舉牛、馬、豬、綿羊、山羊、美洲鴕、羊駝、駱駝、兔、水貂、狐貍、毛絲鼠、鵝、鴨等。本發(fā)明包含用于促進生發(fā)的本發(fā)明的生發(fā)促進劑的應用。本發(fā)明包含用于促進生發(fā)而使用的本發(fā)明的生發(fā)促進劑。[實施例]以下，通過實施例詳細地對本發(fā)明進行說明，但本發(fā)明并不限定于這些實施例。[實施例1：卵黃蛋白水解物的制造](1)脫脂卵黃的制備向卵黃粉末1kg中添加乙醇5l，使用混合機攪拌30分鐘后，回收固體物質。將該操作重復3次，由卵黃進行脫脂，風干，得到568g的脫脂卵黃粉末。(2)卵黃蛋白水解物的制備向(1)中得到的脫脂卵黃粉末500g中添加水2.5kg和諾維信公司制的アルカラーゼ(商品名、地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)來源的蛋白酶)25g，將ph調節(jié)為7，在55℃下進行3小時酶反應，然后，通過80℃下15分鐘的熱處理使酶失活，以3000×g進行20分鐘的離心分離，除去不溶物，過濾后，將濾液噴霧干燥，得到約140g的卵黃蛋白水解物。利用下述條件的凝膠過濾色譜法對所得到的卵黃蛋白水解物進行分子量的分析。柱：diol60(6.0×300mm)(商品名、ymc公司制)洗脫液：0.2m磷酸鉀緩沖液、0.2mnacl(ph6.9)/乙腈(70:30)流速：0.7ml/分鐘檢測波長：280nm將分子量分析的結果示于圖1。由圖1可知，實施例1的卵黃蛋白水解物相對于表示蛋白質、肽、氨基酸的合計的總面積，分子量100以上且20000以下的部分的面積比占約90％。[實施例2：動物試驗(使用c3h小鼠的育發(fā)作用的評價)]小鼠使用日本slc株式會社處理的spfc3h/henslc(雄性)。以各試驗組的平均體重盡量均等的方式隨機地分配個體。小鼠的飼育條件設定為：每籠5只，室溫25℃，明暗12小時循環(huán)。購入6周齡的小鼠后，進行1周的預飼育，使其熟悉試驗環(huán)境。使用安全剃刀剃去達到7周齡的小鼠的背部被毛。在試驗開始前，使小鼠自由地攝取固體飼料crf-1(東方酵母工業(yè)株式會社)作為飼料，攝取公共自來水作為飲用水。將試驗條件示于表1。[表1]在剃毛的3天后開始試驗。具體而言，使各樣本給藥組口服攝取將表1記載的量的卵黃蛋白水解物與普通飼料(crf-1)混合而成的飼料，使陰性對照組口服攝取普通飼料(crf-1)。在最終觀察日(第17天)，在麻醉后使全部試驗組的小鼠安樂死，固定到攝影臺上，對剃毛部進行拍攝。根據所拍攝的圖像，使用圖像分析軟件對被毛再生部的面積進行定量化，判定生發(fā)促進效果的有無。將卵黃蛋白水解物混合飼料口服攝取第17天時的小鼠被毛再生面積的結果示于圖2。另外，將對普通飼料或卵黃蛋白水解物混合飼料口服攝取第17天時的小鼠背部被毛的情況進行比較而得到的結果示于圖3。在卵黃蛋白水解物的口服攝取組中，依賴于卵黃蛋白水解物的攝取量，被毛再生得到促進，在100mg/kg以上觀察到顯著差異。[實施例3：細胞試驗(使用毛乳頭細胞的生長因子的測定)](1)血管內皮細胞生長因子(vegf)產生量的測定將處于對數增殖期的人頭發(fā)毛乳頭細胞(hfdpc、cellapplications,inc.)在毛乳頭細胞增殖培養(yǎng)基(pcgm、cellapplications,inc.)中制備成3×104個細胞/ml，將1ml接種到24孔板(膠原蛋白包被)中進行預培養(yǎng)。通過顯微鏡觀察確認細胞的生育狀況后，更換全部培養(yǎng)液。向培養(yǎng)液中添加各樣品，開始培養(yǎng)。此時，將卵黃蛋白水解物以達到100mg/ml或500mg/ml的方式溶解于pbs(-)中，分別以相對于培養(yǎng)液總量為1％的方式進行添加(終濃度1mg/ml或5mg/ml)。另外，作為促進vegf產生的模型藥劑，將米諾地爾(sigma-aldrichco.llc.)以達到3mm的方式溶解于乙醇中，以相對于培養(yǎng)液總量為1％的方式進行添加(終濃度30μm)。培養(yǎng)2天后，使用人vegfelisa試劑盒(r&dsystems)測定培養(yǎng)液中的vegf濃度。將結果示于圖4。確認到：依賴于卵黃蛋白水解物的添加濃度，由毛乳頭細胞分泌到培養(yǎng)液中的vegf量增加。(2)成纖維細胞生長因子-7(fgf-7)mrna表達量的測定將處于對數增殖期的人頭發(fā)毛乳頭細胞在dmem培養(yǎng)基(10％血清)中制備成3×104個細胞/ml，將1ml接種到24孔板(膠原蛋白包被)中進行預培養(yǎng)。除去全部培養(yǎng)液，置換為無血清dmem培養(yǎng)基。然后，迅速將各樣品添加到培養(yǎng)液中，在co2培養(yǎng)箱內培養(yǎng)2小時。此時，將卵黃蛋白水解物以達到100mg/ml的方式溶解于pbs(-)中，以相對于培養(yǎng)液總量為1％的方式進行添加(終濃度1mg/ml)。另外，作為fgf-7的表達誘導劑，將腺苷(和光純藥工業(yè)株式會社制)以達到10mm的方式溶解于dmso中，以相對于培養(yǎng)液總量為1％的方式進行添加(終濃度100μm)。除去全部培養(yǎng)液，迅速將細胞溶解于1ml的isogen2(日本基因)中，按照制造公司推薦的操作規(guī)程對總rna進行純化。將其作為模板，使用primescriptrtreagent試劑盒(takara)，按照制造公司推薦的操作規(guī)程來合成cdna。將該反應液作為模板，使用sybrpremixextaq(takara)和lightcycler480(roche)，分別按照制造公司推薦的操作規(guī)程進行實時pcr。將此時使用的引物的堿基序列示于表2。[表2]正向反向fgf-7tctgtcgaacacagtggtacctgag(序列號1)agtacctttagtcctgtcaccg(序列號2)gapdhgcaccgtcaaggctgagaac(序列號3)atggtggtgaagacgccagt(序列號4)將結果示于圖5。表明通過向培養(yǎng)液中添加卵黃蛋白水解物，fgf-7的mrna量增加。(3)胰島素樣生長因子(igf-1)mrna表達量的測定將處于對數增殖期的人頭發(fā)毛乳頭細胞在dmem培養(yǎng)基(10％血清)中制備成3×104個細胞/ml，將1ml接種到24孔板(膠原蛋白包被)中進行預培養(yǎng)。除去全部培養(yǎng)液，置換為無血清dmem培養(yǎng)基。然后，迅速將樣品添加到培養(yǎng)液中，在co2培養(yǎng)箱內培養(yǎng)4小時。此時，將卵黃蛋白水解物以達到100mg/ml的方式溶解于pbs(-)中，以相對于培養(yǎng)液總量為1％的方式進行添加(終濃度1mg/ml)。另外，作為igf-1的表達誘導劑，將腺苷以達到10mm的方式溶解于dmso中，以相對于培養(yǎng)液總量為1％的方式進行添加(終濃度100μm)。除去全部培養(yǎng)液，迅速將細胞溶解于1ml的isogen2(日本基因)中，按照制造公司推薦的操作規(guī)程對總rna進行純化。將其作為模板，使用primescriptrtreagent試劑盒(takara)，按照制造公司推薦的操作規(guī)程來合成cdna。將該反應液作為模板，使用sybrpremixextaq(takara)和lightcycler480(roche)，分別按照制造公司推薦的操作規(guī)程進行實時pcr。將此時使用的引物的堿基序列示于表3。[表3]正向反向igf-1tttcaagccacccattgacc(序列號5)gcgggtacaagataaatatccaaac(序列號6)gapdhgcaccgtcaaggctgagaac(序列號3)atggtggtgaagacgccagt(序列號4)將結果示于圖6。表明通過向培養(yǎng)液中添加卵黃蛋白水解物，igf-1的mrna量增加。[實施例4：動物試驗(使用c57bl/6小鼠的生長期誘導作用的評價)]小鼠使用日本查爾斯河株式會社處理的c57bl/6(雌性)。以各試驗組的平均體重盡量均等的方式隨機地分配個體。小鼠的飼育條件設定為：每籠5只，室溫25℃，明暗12小時循環(huán)。購入6周齡的小鼠后，進行1周的預飼育，使其熟悉試驗環(huán)境。使用市售的除毛膏對達到7周齡的小鼠的背部被毛進行脫毛。在試驗開始前，使小鼠自由地攝取固體飼料crf-1(東方酵母工業(yè)株式會社)作為飼料，攝取公共自來水作為飲用水。將試驗條件示于表4。[表4]劃分試驗組攝取量(mg/kg)只數陰性對照酪蛋白混合飼料1005樣本卵黃蛋白水解物混合飼料10057周齡的c57bl/6小鼠的毛發(fā)周期處于靜止期，但由于脫毛刺激而逐漸轉移至生長期。在自脫毛起3天后開始試驗。具體而言，使各樣本給藥組口服攝取將表4記載的量的卵黃蛋白水解物與普通飼料(crf-1)混合而成的飼料，使陰性對照組口服攝取混合有酪蛋白的普通飼料(crf-1)。在最終觀察日(給藥第9天)，在麻醉后使全部試驗組的小鼠安樂死，利用電動剃刀將背部皮膚剃毛，摘取正中線的兩側的皮膚(從耳根起靠下側)。將摘取的皮膚固定到10％中性緩沖福爾馬林液中，制作與體軸平行的4μm的石蠟切片，進行he染色。此時，對各組觀察500個毛囊，計測處于成熟的生長期(anagenvi)的毛囊的頻率。在卵黃蛋白水解物的口服攝取組中，與酪蛋白的口服攝取組相比，處于anagenvi的毛囊的頻率增加。由此表明，卵黃蛋白水解物通過口服攝取來誘導生長期毛囊的成熟化，顯示出生發(fā)促進作用。[實施例5：動物試驗(在由男性激素所致的靜止期誘導中的育發(fā)作用的評價)]小鼠使用日本查爾斯河株式會社處理的c57bl/6(雌性)。以各試驗組的平均體重盡量均等的方式隨機地分配個體。小鼠的飼育條件設定為：每籠3只，室溫25℃，明暗12小時循環(huán)。購入6周齡的小鼠后，進行1周的預飼育，使其熟悉試驗環(huán)境。使用市售的除毛膏對達到7周齡的小鼠的背部被毛進行脫毛。在試驗開始前，使小鼠自由地攝取固體飼料crf-1(東方酵母工業(yè)株式會社)作為飼料，攝取公共自來水作為飲用水。7周齡的c57bl/6小鼠的毛發(fā)周期處于靜止期，但由于脫毛刺激而逐漸轉移至生長期。因此，為了抑制這樣的毛發(fā)周期的轉移，從脫毛后開始進行男性激素的給用。具體而言，將二氫睪酮(dht)以達到2mg/ml的方式溶解于含有20質量％乙醇的磷酸緩沖生理鹽溶液中，每隔一天在脫毛部的皮下注射100μl。另外，從脫毛2天后開始給予表5所示的混合飼料，使其自由地攝取飼料。[表5]dht給藥試驗組混合率只數無酪蛋白混合飼料2質量％3有酪蛋白混合飼料2質量％3有卵黃蛋白水解物混合飼料2質量％3在最終觀察日(給藥第14天)，將全部試驗組的小鼠在麻醉下固定到攝影臺上，對脫毛部進行拍攝。如圖7所示，在未給用dht的酪蛋白混合飼料組中，背面變化為黑色，確認到毛發(fā)生長，但由于dht的給藥而抑制了這樣的黑色化。另一方面，與給用dht的酪蛋白混合飼料組相比，在卵黃蛋白水解物混合飼料組中，皮膚黑色化的部位增加，觀察到毛發(fā)生長。由此表明，通過卵黃蛋白水解物的口服攝取，誘導了從靜止期向生長期的轉移，毛發(fā)生長得到促進。需要說明的是，本發(fā)明并不限定于上述各實施方式和實施例，可以在權利要求所示的范圍內進行各種變更，將不同實施方式中分別公開的技術手段適當組合而得到的實施方式也包含在本發(fā)明的技術范圍內。產業(yè)上的可利用性本發(fā)明作為生發(fā)促進劑有用。當前第1頁12