本發(fā)明一般涉及創(chuàng)傷的治療以便于促進(jìn)其愈合的領(lǐng)域。更具體而言，本發(fā)明提供了蛋殼膜(esm)微粒和納米顆粒，其已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)當(dāng)存在于創(chuàng)傷中或創(chuàng)傷上時(shí)表現(xiàn)某些性質(zhì)，這些性質(zhì)使得它們?cè)诖龠M(jìn)創(chuàng)傷愈合中特別有利，包括慢性創(chuàng)傷包括燒傷的愈合，該慢性創(chuàng)傷處于針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的不適當(dāng)水平的mmp活性和/或過(guò)度炎癥反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)下，或在該慢性創(chuàng)傷中存在針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的不適當(dāng)水平的mmp活性和/或過(guò)度炎癥反應(yīng)。本發(fā)明進(jìn)一步提供了在所述治療中使用的包括微粉化esm顆粒的藥物組合物、創(chuàng)傷敷料和植入式醫(yī)療裝置。本發(fā)明仍進(jìn)一步提供了用于制造微粉化esm顆粒以及包括其的組合物、敷料和植入式醫(yī)療裝置的方法。

背景技術(shù)：

創(chuàng)傷——組織，通常皮膚的完整或裸露中的缺口——不可避免的發(fā)生于人和其它動(dòng)物的生命中。創(chuàng)傷可以通過(guò)外科手術(shù)，物理?yè)p傷(例如，機(jī)械損傷；熱損傷，例如源于過(guò)熱或過(guò)冷的那些；電損傷，例如通過(guò)與電勢(shì)的來(lái)源接觸引起的那些；和例如通過(guò)延長(zhǎng)的、大量的暴露于紅外線(xiàn)、紫外線(xiàn)或電離輻射引起的輻射傷害)引起，或通過(guò)自發(fā)地形成損害比如皮膚潰瘍(例如，靜脈性潰瘍、糖尿病性潰瘍或壓迫性潰瘍)、肛裂、口腔潰瘍和尋常痤瘡引起。

在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，創(chuàng)傷通常被定義為急性的或慢性的。急性創(chuàng)傷是如此創(chuàng)傷：其在止血之后順序地通過(guò)愈合過(guò)程的三個(gè)公認(rèn)階段(即，炎癥階段、增殖階段和重塑期)進(jìn)行，沒(méi)有拖延的時(shí)間進(jìn)程。慢性創(chuàng)傷被定義為未能愈合或者其中存在過(guò)多皮膚損失比如通過(guò)燒傷的那些。這些創(chuàng)傷不完成愈合過(guò)程的生物化學(xué)事件的有序順序，因?yàn)閯?chuàng)傷在愈合階段之一中變得拖延。通常，慢性創(chuàng)傷在炎癥期中拖延。慢性創(chuàng)傷是患者發(fā)病率的主要來(lái)源。

創(chuàng)傷愈合治療的首要目標(biāo)是閉合或重新形成創(chuàng)傷組織的外層，即，在皮膚創(chuàng)傷背景中的表皮，從而阻止失血或下面組織的感染。對(duì)于急性創(chuàng)傷，這可以是相對(duì)直截了當(dāng)?shù)?，治療很大程度依?lài)于創(chuàng)傷對(duì)象的自然愈合過(guò)程。但是，在慢性創(chuàng)傷的情況下，那些愈合過(guò)程不起它們應(yīng)該起到的作用并且因此在其治療中的關(guān)鍵目標(biāo)是增強(qiáng)和增大身體的反應(yīng)和幫助身體再生受損或破損組織。

常規(guī)創(chuàng)傷愈合治療集中于止血階段、過(guò)多滲出液的吸收和無(wú)菌屏障的維持以防止感染，同時(shí)皮膚損害愈合。常規(guī)產(chǎn)品也可以幫助原位維持外部藥物產(chǎn)品比如抗生素和類(lèi)固醇乳劑并且阻止它們與衣服等接觸時(shí)被侵蝕。先進(jìn)的創(chuàng)傷愈合產(chǎn)品不僅可以具有這些特征，而且它們的首要作用是維持潮濕的愈合環(huán)境。對(duì)于最理想的創(chuàng)傷愈合，關(guān)鍵在于創(chuàng)傷面(woundbed)是潮濕的但是不過(guò)于濕潤(rùn)，過(guò)于濕潤(rùn)將導(dǎo)致周?chē)つw以及創(chuàng)傷面的浸解。先進(jìn)的創(chuàng)傷護(hù)理產(chǎn)品也可以包括藥物產(chǎn)品以幫助創(chuàng)傷愈合，比如抗生素或生長(zhǎng)因子。

但是，慢性創(chuàng)傷的發(fā)展的主要原因是止血后創(chuàng)傷修復(fù)周期中的失衡，并且這些現(xiàn)有技術(shù)途徑不集中于那些其它愈合階段，具體而言，即炎癥、增殖和組織重塑(例如，上皮再生(re-epithelialisation))階段。

因此，能夠處理創(chuàng)傷中的過(guò)多炎癥反應(yīng)的創(chuàng)傷愈合治療將是有利的。而且，最近已經(jīng)表明，炎癥期愈合過(guò)程中的失衡可以導(dǎo)致創(chuàng)傷面中蛋白酶——例如，mmp(例如mmp-2、mmp-8和mmp-9)、膠原酶、彈性蛋白酶和纖維蛋白溶酶——的過(guò)度產(chǎn)生和/或過(guò)度活性。這導(dǎo)致新合成的細(xì)胞外基質(zhì)(ecm)的破壞以及創(chuàng)傷面內(nèi)內(nèi)源產(chǎn)生的生長(zhǎng)和分化因子的破壞。該失衡可以通過(guò)加入刺激生長(zhǎng)因子比如regranex^tm(重組人pdgf)來(lái)解決，但是，即使是這樣，外源性pdgf可以通過(guò)蛋白酶快速失活?？梢越鉀Q該問(wèn)題的另一種途徑是通過(guò)加入蛋白質(zhì)或其它物質(zhì)，其優(yōu)先地結(jié)合蛋白酶和從ecm成分和蛋白生長(zhǎng)因子比如pdgf的蛋白水解中轉(zhuǎn)移它們。這些產(chǎn)品包括膠原蛋白基物質(zhì)比如promogran^tm和復(fù)合ecm基物質(zhì)比如豬小腸粘膜下層(oasis^tm)。但是，這些產(chǎn)品源自哺乳動(dòng)物來(lái)源，通常地牛和豬，并且處于某些病毒或tse的轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)下。因此，非哺乳動(dòng)物來(lái)源將是優(yōu)選的。

通過(guò)蛋白酶例如mmp重塑ecm也在血管發(fā)生過(guò)程期間，例如在瘤(腫瘤)中，和在惡性瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程期間被觀察到。在這些過(guò)程中，蛋白酶被認(rèn)為至少部分地降解生長(zhǎng)的血管或瘤的細(xì)胞周?chē)膃cm，并且這使得這些細(xì)胞自由移動(dòng)以在新的位置創(chuàng)建生長(zhǎng)的血管或繼發(fā)性惡性瘤的壁。血管生成是正常的生理過(guò)程，但是在生長(zhǎng)的瘤中，該過(guò)程也被利用以提供瘤的毛細(xì)血管網(wǎng)絡(luò)從而允許進(jìn)一步生長(zhǎng)。能夠在這些生理環(huán)境中抑制蛋白酶的試劑將具有打擊瘤(具體而言，在手術(shù)切除之后)并阻止轉(zhuǎn)移的潛力。

最近，已經(jīng)表明，當(dāng)在受損的皮膚上放置完整的薄膜時(shí)，完整的雞蛋殼膜(esm)可以被用于促進(jìn)創(chuàng)傷愈合(yang等，2003.changgungmedj)。

esm是在鳥(niǎo)蛋的白蛋白和蛋殼之間發(fā)現(xiàn)的復(fù)合雙層的富含蛋白質(zhì)的纖維結(jié)構(gòu)。研究已經(jīng)表明，這些膜包含按重量計(jì)大約90％蛋白質(zhì)(包括膠原蛋白、彈性蛋白、纖連蛋白肽生長(zhǎng)因子、卵傳鐵蛋白、賴(lài)氨酰氧化酶(lysloxidase)和溶菌酶)，以及鎖鏈素、異鎖鏈素和黏多糖(例如，硫酸皮膚素(dermatanesulphate)、硫酸軟骨素和透明質(zhì)酸)。esm可以通過(guò)多種機(jī)械手段容易地與蛋殼和蛋的內(nèi)部組分分離以產(chǎn)生基本上純的esm制品。

當(dāng)在皮膚創(chuàng)傷上放置為完整片時(shí)，esm起半透膜的功能并允許濕氣傳輸并且因而在創(chuàng)傷面內(nèi)管理濕度。其特征相似于合成物質(zhì)比如biobrane^tm。但是，適合于在創(chuàng)傷愈合環(huán)境中使用的大小的完整esm難以商業(yè)可行的量制備。完整的esm需要人工操作來(lái)維持可用的大小，并且盡管那樣其將需要被應(yīng)用為單個(gè)膜的鑲嵌體。在加工期間，細(xì)微的(delicate)物質(zhì)需要與殘留的結(jié)合鈣和相關(guān)聯(lián)的蛋白組分分離，并需要防腐加工或終端滅菌。在這種背景下，因此對(duì)于制造醫(yī)療產(chǎn)品足夠的過(guò)程和質(zhì)量控制不是技術(shù)上或經(jīng)濟(jì)上可行的。

100-500μm的esm的粉末也已經(jīng)被提出用于經(jīng)由外部施用途徑治療某些創(chuàng)傷(wo2004/080428)。該提議的基礎(chǔ)是不清楚的而且也沒(méi)有提供成功治療的證據(jù)。

100-500μm的esm的粉末也已經(jīng)被提出用于經(jīng)由全身的，具體而言口服施用途徑治療與關(guān)節(jié)炎和其它炎癥病癥相關(guān)聯(lián)的疼痛和炎癥(us8580315)。

較小的esm顆粒已經(jīng)被描述和暗示用于治療急性皮膚創(chuàng)傷并作為新鮮創(chuàng)傷的替換皮膚移植物(us3196075和us3194732)。對(duì)慢性創(chuàng)傷的炎癥期的任何作用都沒(méi)有被公開(kāi)而且也沒(méi)有暗示在慢性創(chuàng)傷的環(huán)境下的實(shí)用性。

現(xiàn)已經(jīng)驚人地發(fā)現(xiàn)，具有小于100μm的平均粒徑的微粉化esm顆粒具有特定的許多(repertoire)性質(zhì)，這些性質(zhì)使得它們?cè)谥委熉詣?chuàng)傷包括燒傷中尤其有利，該慢性創(chuàng)傷處于如下風(fēng)險(xiǎn)下，或其中存在：(i)具體而言，針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的不適當(dāng)水平的基質(zhì)金屬蛋白酶(mmp)活性；和/或(ii)為了促進(jìn)其愈合的過(guò)度炎癥反應(yīng)。

這些性質(zhì)包括(i)降低創(chuàng)傷中ecm和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的降解的能力，例如通過(guò)降低創(chuàng)傷中針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的mmp的活性；(ii)抗炎作用；(iii)抑菌作用；(iv)促進(jìn)組織重新形成的能力，這通過(guò)促進(jìn)創(chuàng)傷組織的細(xì)胞遷移進(jìn)入創(chuàng)傷和/或例如通過(guò)扮演那些細(xì)胞的支架的能力增殖和/或分化那些細(xì)胞；(v)不干擾潮濕愈合環(huán)境的維持的能力和(vi)在載體基質(zhì)(例如凝膠基質(zhì)，包括水凝膠和水膠體凝膠)內(nèi)加工的順從性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

因此，在第一方面，提供了促進(jìn)慢性創(chuàng)傷的愈合的方法，該慢性創(chuàng)傷處于如下風(fēng)險(xiǎn)下，或者其中存在，

(i)針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的不適當(dāng)水平的mmp活性，和/或

(ii)過(guò)度炎癥反應(yīng)。

其中基本上由微粉化蛋殼膜(esm)組成的和具有小于100μm的中值粒徑的一種或多種顆粒以足以促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的量被應(yīng)用至所述創(chuàng)傷。

可選地，本發(fā)明的該方面提供了基本上由微粉化esm組成的和具有小于100μm的中值粒徑的顆粒，其用于促進(jìn)慢性創(chuàng)傷的愈合，該慢性創(chuàng)傷處于如下風(fēng)險(xiǎn)下，或者其中存在，

(i)針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的不適當(dāng)水平的mmp活性，和/或

(ii)過(guò)度炎癥反應(yīng)。

仍可選地，本發(fā)明的該方面提供了基本上由微粉化esm組成的和具有小于100μm的中值粒徑的顆粒在制造用于促進(jìn)慢性創(chuàng)傷的愈合的藥物中的用途，該慢性創(chuàng)傷處于如下風(fēng)險(xiǎn)下，或者其中存在，

(i)針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的不適當(dāng)水平的mmp活性，和/或

(ii)過(guò)度炎癥反應(yīng)。

在某些實(shí)施方式中，創(chuàng)傷是如此創(chuàng)傷：其處于如下風(fēng)險(xiǎn)下，或其中存在針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的不適當(dāng)即過(guò)度水平的mmp-2、mmp-8和/或mmp-9活性。在其它實(shí)施方式中，創(chuàng)傷是如此創(chuàng)傷：其處于如下風(fēng)險(xiǎn)下，或其中存在整體mmp活性的不適當(dāng)?shù)?，即過(guò)度的水平。在其它實(shí)施方式中，創(chuàng)傷是如此創(chuàng)傷：其處于如下風(fēng)險(xiǎn)下，或其中存在不適當(dāng)即過(guò)度水平的ecm和/或肽生長(zhǎng)或分化因子降解。具有這些特征的創(chuàng)傷可以用上面描述的方法鑒定，所述方法用于測(cè)量ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子降解或用于監(jiān)測(cè)針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子或一般而言創(chuàng)傷基底(woundsubstrate)的整體或特定mmp活性。

在某些實(shí)施方式中，目標(biāo)創(chuàng)傷是，或也是如此創(chuàng)傷：其處于變得發(fā)炎的風(fēng)險(xiǎn)下，或其為發(fā)炎，例如如此創(chuàng)傷：其包含免疫細(xì)胞(例如，巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、肥大細(xì)胞和/或中性白細(xì)胞)和/或不適當(dāng)即過(guò)度水平的促炎標(biāo)記物(例如本文公開(kāi)的那些)和/或不適當(dāng)即不足水平的促炎標(biāo)記物(例如本文公開(kāi)的那些)。

在下文中，為了簡(jiǎn)潔和清楚，提及“創(chuàng)傷”或“目標(biāo)創(chuàng)傷”意味著提及上面提及的慢性創(chuàng)傷，除非上下文明確指示其它方面。

促進(jìn)創(chuàng)傷愈合，其意思是利用如本文限定的含微粉化esm的顆粒治療創(chuàng)傷加速了討論中的創(chuàng)傷的愈合過(guò)程(即創(chuàng)傷通過(guò)愈合過(guò)程的三個(gè)公認(rèn)階段的進(jìn)展)。愈合過(guò)程的加速可以表現(xiàn)為通過(guò)一個(gè)、兩個(gè)或所有愈合階段(即，炎癥階段、增殖階段和/或重塑期)的進(jìn)展速度的加快。如果在創(chuàng)傷愈合階段的一個(gè)中拖延，則加速可能表現(xiàn)為在拖延之后重新開(kāi)始線(xiàn)性、連續(xù)的愈合過(guò)程。換句話(huà)說(shuō)，治療使創(chuàng)傷從非愈合狀態(tài)改變到其中創(chuàng)傷開(kāi)始進(jìn)展通過(guò)愈合階段的狀態(tài)。在重新開(kāi)始之后的所述進(jìn)展可以處于正常速度下或者與正常急性創(chuàng)傷將愈合的速度相比甚至更慢的速度下。創(chuàng)傷愈合的促進(jìn)也可以被視為阻止討論中的創(chuàng)傷的愈合過(guò)程減速的量。愈合過(guò)程的減速可以表現(xiàn)為通過(guò)一個(gè)、兩個(gè)或所有愈合階段的進(jìn)展的速度的降低。如果創(chuàng)傷是線(xiàn)性、連續(xù)愈合過(guò)程的重新開(kāi)始，則在拖延之后，減速可能表現(xiàn)為返回到在愈合階段的一個(gè)中拖延。換句話(huà)說(shuō)，治療阻止創(chuàng)傷從愈合狀態(tài)改變?yōu)榉怯蠣顟B(tài)。創(chuàng)傷愈合的促進(jìn)可以進(jìn)一步被視為對(duì)現(xiàn)有創(chuàng)傷的治療的量或阻止現(xiàn)有創(chuàng)傷的生長(zhǎng)的量和/或阻止現(xiàn)有愈合創(chuàng)傷變?yōu)椴挥匣蚵詣?chuàng)傷的量。

利用如本文限定的包含微粉化esm的顆粒(其術(shù)語(yǔ)在本文中與“esm顆粒”和“esm的顆?！被Q使用)治療目標(biāo)創(chuàng)傷以便于促進(jìn)愈合可以降低或限制創(chuàng)傷中針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的mmp的活性。因此，本發(fā)明可以被視為包括促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的方法，在該創(chuàng)傷中針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的mmp的活性被降低或限制，其中如本文限定的一種或多種esm顆粒以足以降低或限制創(chuàng)傷中針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的mmp的活性的量被應(yīng)用至所述創(chuàng)傷。

mmp-2(也被稱(chēng)為72kdaiv型膠原酶或明膠酶a)、mmp-8(也被稱(chēng)為嗜中性白細(xì)胞膠原酶或pmnl膠原酶)和/或mmp-9(也被稱(chēng)為92kdaiv型膠原酶、92kda明膠酶或明膠酶b)通常發(fā)現(xiàn)于創(chuàng)傷中，尤其是慢性創(chuàng)傷中，并且在優(yōu)選的實(shí)施方式中，正是具體針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的這些mpp的活性被降低。

在某些實(shí)施方式中，創(chuàng)傷中針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的mpp的活性被降低或限制為對(duì)經(jīng)歷治療的創(chuàng)傷的愈合過(guò)程無(wú)害的水平。這種降低可以被觀察為創(chuàng)傷(或創(chuàng)傷積液(fluid))中ecm蛋白(例如膠原蛋白和彈性蛋白)和/或肽生長(zhǎng)或分化因子片段的水平的降低，其又是這些蛋白的降解的指示，并且其可以通過(guò)常規(guī)技術(shù)包括免疫組織化學(xué)/免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)和/或生物分子(例如，蛋白質(zhì))染色劑和染料檢測(cè)，或通過(guò)分析創(chuàng)傷積液利用色譜技術(shù)檢測(cè)。限制可以被觀察為維持這種水平。

每種創(chuàng)傷將需要不同(例如降低)水平的針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的mmp活性，并且甚至隨著時(shí)間的推移，在這一點(diǎn)上對(duì)相同創(chuàng)傷的要求可能不同。雖然如果必要這可以在沒(méi)有過(guò)度負(fù)擔(dān)的情況下由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定，但是本文公開(kāi)的包含微粉化esm的顆粒的關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)在于其相對(duì)容易實(shí)現(xiàn)有效水平的mmp抑制并且因此麻煩的劑量?jī)?yōu)化不是常規(guī)必需的。的確，在大多數(shù)情況下，由本文限定的esm顆粒引起的mmp活性的任何降低在促進(jìn)創(chuàng)傷愈合中將是有效的。

用數(shù)字表示，在將本發(fā)明中使用的包含微粉化esm的顆粒應(yīng)用至經(jīng)歷治療的創(chuàng)傷之后，創(chuàng)傷中針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子(或整體ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子降解)的mmp的活性將優(yōu)選地降低至少5％，例如至少10％、15％、20％、25％、30％。在某些實(shí)施方式中，可以必要的是維持針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子(或整體ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子降解)的mmp活性的一些水平，并且在這樣的實(shí)施方式中，針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子(或整體ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子降解)的mmp活性的降低不多于90％，例如不多于80％、70％、60％、50％、40％、30％、25％、20％、15％、10％或5％?？梢杂蛇@些值的任意組合衍生的任何和所有范圍端點(diǎn)被具體考慮。

不希望受理論束縛，針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子(或整體ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子降解)的mmp活性的降低或限制可以基于許多機(jī)制。這可以包括但不限于創(chuàng)傷mmp的直接抑制、創(chuàng)傷mmp的吸收和失活、通過(guò)提供可選的/過(guò)量的基底滴定出(titratingoutof)創(chuàng)傷mmp、抑制創(chuàng)傷mmp激活中涉及的酶(例如絲氨酸蛋白酶，包括纖維蛋白溶酶、中性白細(xì)胞彈性蛋白酶和肥大細(xì)胞糜蛋白酶)、上調(diào)創(chuàng)傷中mmp的內(nèi)源抑制劑(例如，timp；金屬蛋白酶的組織抑制劑)、抑制創(chuàng)傷的細(xì)胞和/或炎癥細(xì)胞——例如，單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性白細(xì)胞和肥大細(xì)胞——表達(dá)和/或分泌mmp。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能在沒(méi)有過(guò)度負(fù)擔(dān)的情況下利用常規(guī)分析技術(shù)——其一些是商業(yè)可得的——測(cè)量創(chuàng)傷中的這些作用。上面敘述的百分比降低在這些環(huán)境下應(yīng)用。

針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的mmp活性的降低或限制可以反映在經(jīng)歷治療的創(chuàng)傷中整體mmp活性的降低或維持。整體mmp活性是針對(duì)所有創(chuàng)傷基底的所有mmp活性的測(cè)量。整體mmp活性可以在沒(méi)有過(guò)度負(fù)擔(dān)的情況下利用常規(guī)分析技術(shù)測(cè)量，其一些是商業(yè)可得的。用數(shù)值表達(dá)，在將本發(fā)明中使用的esm顆粒應(yīng)用至經(jīng)歷治療的創(chuàng)傷之后，創(chuàng)傷中的整體mmp活性將優(yōu)選地降低至少5％，例如至少10％、15％、20％、25％、30％。

在某些實(shí)施方式中，可以必要的是維持整體mmp活性，并且具體而言針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的mmp活性的一些水平，并且在這樣的實(shí)施方式中，整體mmp活性，具體而言針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的mmp活性的降低不多于90％，例如不多于80％、70％、60％、50％、40％、30％、25％、20％、15％、10％或5％?？梢杂蛇@些值中的任意值衍生的范圍端點(diǎn)的任何和所有組合特別地被考慮。

在其它實(shí)施方式中，具體mmp的整體活性被考慮，例如mmp-2、mmp-8和/或mmp-9。在這些實(shí)施方式中，整體mmp活性是針對(duì)所有創(chuàng)傷基底的討論中的特定mmp的活性。

在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法可以包括如下步驟：其中對(duì)象將被診斷為患有處于針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子(或mmp活性的整體水平)的不適當(dāng)即過(guò)度水平的mmp活性的風(fēng)險(xiǎn)下的創(chuàng)傷，或者將受益于針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的mmp活性(或mmp活性的整體水平)的降低或限制(例如，維持)的創(chuàng)傷。在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法可以包括如下步驟：其中對(duì)象將被診斷為患有處于ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子降解的不適當(dāng)即過(guò)度水平的風(fēng)險(xiǎn)下的創(chuàng)傷。

在進(jìn)一步實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法在將在本發(fā)明中使用的esm顆粒應(yīng)用至創(chuàng)傷之后可以包括如此步驟：其中監(jiān)測(cè)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的降解，和/或監(jiān)測(cè)針對(duì)ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的mmp活性，和/或監(jiān)測(cè)整體mmp活性。在其它實(shí)施方式中，mmp2、8和/或9通常被考慮代替mmp?？蛇x地或另外地，本發(fā)明的方法在將在本發(fā)明中使用的esm顆粒應(yīng)用至創(chuàng)傷之后可以包括如此步驟：其中監(jiān)測(cè)創(chuàng)傷的臨床指標(biāo)(例如創(chuàng)傷大小(深度和/或面積)、愈合時(shí)間、創(chuàng)傷或周?chē)M織中的一般不適或疼痛)。這些監(jiān)測(cè)步驟可以包括就在將在本發(fā)明中使用的esm顆粒應(yīng)用至創(chuàng)傷之前或者在對(duì)象的治療中甚至更早的其它點(diǎn)時(shí)與相同度量標(biāo)準(zhǔn)的比較。

在該方面，在本發(fā)明中使用的esm顆粒的“足夠(或有效)量”是如本文中限定的如此的esm顆粒的量：其導(dǎo)致對(duì)上面描述的mmp活性以及ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的降解的作用，并且從而促進(jìn)創(chuàng)傷的愈合。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠容易地基于常規(guī)劑量反應(yīng)方案，以及便利地，上面討論的和如實(shí)施例3中示例的用于評(píng)估m(xù)mp活性以及ecm蛋白和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的降解的常規(guī)技術(shù)，確定esm顆粒的有效(足夠)量將是多少。

利用如本文限定的esm顆粒治療目標(biāo)創(chuàng)傷以便于促進(jìn)愈合可以或者也可以降低或限制創(chuàng)傷中的炎癥。因此，本發(fā)明可以被視為包括促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的方法，其中創(chuàng)傷中的炎癥被或也被降低或限制，其中如本文限定的esm顆粒以足以降低或限制其中炎癥的量被應(yīng)用至所述創(chuàng)傷。

創(chuàng)傷中的炎癥可以被看見(jiàn)為紅斑、腫脹、局部溫?zé)?localwarmth)、水腫(odema)和/或膿。炎癥的這些信號(hào)的一種或多種的解剖學(xué)程度和/或強(qiáng)度的降低相當(dāng)于炎癥的降低。炎癥的這些信號(hào)的一種或多種的解剖學(xué)程度和/或強(qiáng)度的維持、或增加的阻止相當(dāng)于炎癥的限制。

可選地或另外地，創(chuàng)傷中的促炎和/或抗炎標(biāo)記物例如細(xì)胞因子和趨化因子，和/或免疫細(xì)胞的水平或活性可以被測(cè)量，例如在創(chuàng)傷組織的樣本中和/或在來(lái)自創(chuàng)傷內(nèi)部的樣本中。更具體地，tnfα、il-1、il-6、nf-κb、ros、組胺、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、肥大細(xì)胞和/或中性白細(xì)胞的水平或活性可以被測(cè)量。這可以例如通過(guò)創(chuàng)傷樣本的免疫分析或流式細(xì)胞術(shù)，或適合的活性分析進(jìn)行。

創(chuàng)傷樣本中一種或多種促炎標(biāo)記物和/或免疫細(xì)胞的水平或活性的降低可以被認(rèn)為相當(dāng)于創(chuàng)傷中炎癥的降低。同樣，創(chuàng)傷樣本中一種或多種抗炎標(biāo)記物的水平或活性的增加可以被認(rèn)為相當(dāng)于創(chuàng)傷中炎癥的降低。一種或多種促炎標(biāo)記物和/或免疫細(xì)胞的水平或活性的維持、或其水平或活性的增加的阻止，或者創(chuàng)傷中一種或多種抗炎標(biāo)記物的水平或活性的維持、或其水平或活性的降低的阻止可以被認(rèn)為相當(dāng)于創(chuàng)傷中炎癥的限制。

在該方面，在本發(fā)明中使用的esm顆粒的“足夠(或有效)量”是如此的esm顆粒的量：其導(dǎo)致對(duì)上面描述的創(chuàng)傷中的炎癥的作用，具體而言對(duì)促炎和/或抗炎標(biāo)記物水平或活性和/或免疫細(xì)胞水平或活性的作用，并且從而促進(jìn)創(chuàng)傷的愈合。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠容易地基于常規(guī)劑量反應(yīng)方案，和便利地如上面討論的和如實(shí)施例2中示例的用于評(píng)估創(chuàng)傷炎癥的常規(guī)技術(shù)，確定esm顆粒的有效(足夠)量將是多少。

在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法可以包括如此步驟：其中對(duì)象將被診斷為患有處于，或也處于發(fā)展為炎癥的風(fēng)險(xiǎn)下的創(chuàng)傷，或者將受益于對(duì)其炎癥進(jìn)行治療(即炎癥降低或限制)的創(chuàng)傷。

在進(jìn)一步實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法在將在本發(fā)明中使用的esm顆粒應(yīng)用至創(chuàng)傷之后可以包括如此步驟：其中監(jiān)測(cè)創(chuàng)傷中炎癥的程度。這些監(jiān)測(cè)步驟可以包括就在將在本發(fā)明中使用的esm顆粒應(yīng)用至創(chuàng)傷之前或者在對(duì)象的治療中甚至更早的其它點(diǎn)時(shí)與相同度量標(biāo)準(zhǔn)的比較。

在某些實(shí)施方式中，在本發(fā)明中使用的esm顆粒具有小于95μm的中值粒徑，例如小于90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、25、20、15、10、5、或1μm，例如小于900、850、800、750、700、650、600、550、500、450、400、350、300、250、200、150、100、50、10、5或1nm。

在某些實(shí)施方式中，在本發(fā)明中使用的esm顆粒也具有等于或大于1nm的中值粒徑，例如等于或大于5、10、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900或950nm，或等于或大于1μm，例如等于或大于5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或95μm?？梢杂蛇@些值的任意組合衍生的任何和所有范圍端點(diǎn)特別地被考慮。

顆?？梢允侨魏稳S形狀。其可以是基本上對(duì)稱(chēng)的或非對(duì)稱(chēng)的。其可以是基本上球形的、三棱形的或圓柱形的。其可以是基本上不規(guī)則的或規(guī)則的或具有二者的區(qū)域。其可以是有角的、圓形的或錐形的或具有其部分。在某些實(shí)施方式中，顆粒具有一個(gè)長(zhǎng)度尺寸，其顯著大于其余尺寸，并且因此可以被稱(chēng)為例如桿狀的、針狀的或纖維的(桿、針或纖維并且可以適合于作為圓柱形的或三棱形的(例如，立方形的)，這取決于基本上垂直于顯著更大長(zhǎng)度的尺寸的橫截面形狀。

在某些實(shí)施方式中，在本發(fā)明中使用的顆粒具有至少1.5的第一長(zhǎng)度尺寸與垂直于其布置的第二長(zhǎng)度尺寸之間的縱橫比(第一長(zhǎng)度尺寸：第二長(zhǎng)度尺寸)，例如至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、80、90或100。在其它實(shí)施方式中，在本發(fā)明中使用的顆粒具有不大于2的第一長(zhǎng)度尺寸與基本上垂直于其布置的第二長(zhǎng)度尺寸之間的縱橫比(第一長(zhǎng)度尺寸：第二長(zhǎng)度尺寸)，例如不大于3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、80、90或100?？梢杂蛇@些值的任意組合衍生的任何和所有范圍端點(diǎn)特別地被考慮，例如在本發(fā)明中使用的顆?？梢跃哂?、6、7、8、9或10中任一個(gè)至20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或70中任一個(gè)的縱橫比。

在這些實(shí)施方式中，第一長(zhǎng)度尺寸是顆粒中的最大長(zhǎng)度尺寸并且可以被稱(chēng)為縱向尺寸。因此，第二長(zhǎng)度尺寸可以被稱(chēng)為橫向尺寸。第二長(zhǎng)度尺寸是最長(zhǎng)橫向尺寸或者顆粒的橫向尺寸的中值平均值，例如，如沿著縱向尺寸的長(zhǎng)度測(cè)量的。

在某些實(shí)施方式中，縱向尺寸是0.1μm至500μm，例如0.1μm至400μm、0.1μm至300μm、0.1μm至200μm、0.1μm至100μm、0.1μm至80μm、0.1μm至60μm、0.1μm至40μm、0.1μm至20μm、0.1μm至10μm、0.1μm至1μm、0.1μm至0.5μm、0.5μm至500μm、0.5μm至400μm、0.5μm至300μm、0.5μm至200μm、0.5μm至100μm、0.5μm至80μm、0.5μm至60μm、0.5μm至40μm、0.5μm至20μm、0.5μm至10μm、0.5μm至1μm、1μm至500μm、1μm至400μm、1μm至300μm、1μm至200μm、1μm至100μm、1μm至80μm、1μm至60μm、1μm至40μm、1μm至20μm、1μm至10μm、10μm至500μm、10μm至400μm、10μm至300μm、10μm至200μm、10μm至100μm、10μm至80μm、10μm至60μm、10μm至40μm、10μm至20μm、20μm至500μm、20μm至400μm、20μm至300μm、20μm至200μm、20μm至100μm、20μm至80μm、20μm至60μm、20μm至40μm、40μm至500μm、40μm至400μm、40μm至300μm、40μm至200μm、40μm至100μm、40μm至80μm、40μm至60μm、60μm至500μm、60μm至400μm、60μm至300μm、60μm至200μm、60μm至100μm、60μm至80μm、80μm至500μm、80μm至400μm、80μm至300μm、80μm至200μm、80μm至100μm、100μm至500μm、100μm至400μm、100μm至300μm、100μm至200μm、200μm至500μm、200μm至400μm、200μm至300μm、300μm至500μm、300μm至400μm或400μm至500μm。

在某些實(shí)施方式中，橫向尺寸或其平均是0.01μm至20μm，例如0.01μm至16μm、0.01μm至12μm、0.01μm至8μm、0.01μm至4μm、0.01μm至2μm、0.01μm至1.6μm、0.01μm至1.2μm、0.01μm至0.8μm、0.01μm至0.4μm、0.01μm至0.2μm、0.01μm至0.1μm、0.01μm至0.05μm、0.05μm至20μm、0.05μm至16μm、0.05μm至12μm、0.05μm至8μm、0.05μm至4μm、0.05μm至2μm、0.05μm至1.6μm、0.05μm至1.2μm、0.05μm至0.8μm、0.05μm至0.4μm、0.05μm至0.2μm、0.05μm至0.1μm、0.1μm至20μm、0.1μm至16μm、0.1μm至12μm、0.1μm至8μm、0.1μm至4μm、0.1μm至2μm、0.1μm至1.6μm、0.1μm至1.2μm、0.1μm至0.8μm、0.1μm至0.4μm、0.1μm至0.2μm、0.2μm至20μm、0.2μm至16μm、0.2μm至12μm、0.2μm至8μm、0.2μm至4μm、0.2μm至2μm、0.2μm至1.6μm、0.2μm至1.2μm、0.2μm至0.8μm、0.2μm至0.4μm、0.4μm至20μm、0.4μm至16μm、0.4μm至12μm、0.4μm至8μm、0.4μm至4μm、0.4μm至2μm、0.4μm至1.6μm、0.4μm至1.2μm、0.4μm至0.8μm、0.8μm至20μm、0.8μm至16μm、0.8μm至12μm、0.8μm至8μm、0.8μm至4μm、0.8μm至2μm、0.8μm至1.6μm、0.8μm至1.2μm、1.2μm至20μm、1.2μm至16μm、1.2μm至12μm、1.2μm至8μm、1.2μm至4μm、1.2μm至2μm、1.2μm至1.6μm、1.6μm至20μm、1.6μm至16μm、1.6μm至12μm、1.6μm至8μm、1.6μm至4μm、1.6μm至2μm、2μm至20μm、2μm至16μm、2μm至12μm、2μm至8μm、2μm至4μm、4μm至20μm、4μm至16μm、4μm至12μm或4μm至8μm。

上面公開(kāi)的縱向和橫向尺寸及其范圍的任何和所有組合特別地被考慮，尤其是與任何和所有縱橫比及其范圍的組合。鑒于上述，可見(jiàn)在本發(fā)明中使用的某些顆粒是桿、針或纖維。

考慮到本發(fā)明的顆粒形狀的普遍性，在顆粒不是基本上例如本質(zhì)上球形的背景下，提及顆粒直徑因此意味著提及當(dāng)量球徑。在這些實(shí)施方式中，顆粒具有由將導(dǎo)致與使用的顆粒大小測(cè)量技術(shù)中所述直徑的相同物質(zhì)組成的球體相同的大小讀數(shù)的大小尺寸限定的形狀。在某些實(shí)施方式中，使用的大小尺寸是體積或表面積，優(yōu)選地體積。

中值(平均)直徑或當(dāng)量球徑可以通過(guò)任何常規(guī)方式評(píng)估，例如電阻脈沖/coulter方法、沉降(重力或離心)、光學(xué)成像(例如sem、靜態(tài)圖像分析、動(dòng)態(tài)圖像分析)、激光衍射或光散射，但是出于本發(fā)明的目的，coulter方法，以可調(diào)電阻脈沖感測(cè)(tunableresistivepulsesensing)的形式，或光學(xué)手段，應(yīng)當(dāng)被用于測(cè)定顆粒大小。

esm是在蛋中發(fā)現(xiàn)的在鳥(niǎo)蛋的蛋白和蛋殼之間的纖維雙層，例如雞雁小綱(斗雞(gamefowl)/陸禽(landfowl)(雞形目)和水禽(雁形目))和家禽的蛋，具體而言雞、鴨、鵝、火雞、珍珠雞、鴕鳥(niǎo)、鴿子、野雞、鷓鴣、松雞或鷗。泰和雞(gallusgallusdomesticus)和家雞的蛋是尤其優(yōu)選的。根據(jù)本發(fā)明，雙層中的任一層或兩層可以被使用。

在本發(fā)明中使用的顆?；旧嫌晌⒎刍问降倪@樣的膜組成。“基本上由……組成”意思是顆粒包含至少80％w/w微粉化的esm，例如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％w/w的微粉化esm。在某些實(shí)施方式中，顆粒由微粉化的esm組成。在這些實(shí)施方式中，水分即水不包含在w/w的計(jì)算中，即計(jì)算基于不是水的成分。但是，顆粒仍然可以包含一些水分，例如多達(dá)顆?？傎|(zhì)量的20％、15％、10％、5％或1％可以由水分子貢獻(xiàn)。微粉化的esm的單個(gè)顆?？梢跃哂腥魏涡螤睿缟厦婷枋龅哪切?。微粉化的esm的形狀與本發(fā)明中使用的顆粒的形狀可以是相同或不同的。如果存在許多微粉化的esm的顆粒，則它們的形狀可以是基本上相同的(即在本發(fā)明中使用的顆粒中的微粉化的esm的形狀可以是基本上同質(zhì)的)或者可以不同(異質(zhì)的)。在某些實(shí)施方式中，在本發(fā)明中使用的顆粒中的微粉化的esm的顆粒是纖維、桿或針。

在上述限定允許的程度下，在本發(fā)明中使用的顆?？梢赃M(jìn)一步包含非esm物質(zhì)，例如賦形劑或進(jìn)一步的本文公開(kāi)的治療劑。優(yōu)選地，顆粒基本上不含其它(非esm)蛋成分(與esm相比，其可以被視為“污染”物質(zhì))，例如蛋白、蛋黃和/或蛋殼(碳酸鈣)。“基本上不含”意思是顆粒包含不多于5％w/w，例如不多于4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％w/w的非esm蛋成分。

在某些實(shí)施方式中，顆粒的esm成分是esm的單一微粉化顆粒，具體而言微粉化的esm的纖維、桿或針。

據(jù)信，具有高縱橫比的微粉化esm的顆粒，例如纖維、桿或針和上面描述的大小的纖維、桿或針(其在本文中可以互換地被稱(chēng)為微纖維、微桿和微針或納米纖維、納米桿和納米針，這取決于大小)相對(duì)于esm的其它形式將具有某些物理優(yōu)勢(shì)(例如wo2004/080428的那些)，至少在本文描述的醫(yī)學(xué)治療的背景下。具體而言，這樣的布置被認(rèn)為能夠提供理想水平的表面積、轉(zhuǎn)換率、濕潤(rùn)性、保濕性、鋪展性，和具體而言mmp抑制，尤其是在創(chuàng)傷愈合和組織工程敷料/支架的背景下。

在某些實(shí)施方式中，在本發(fā)明中使用的顆粒不是基本上例如本質(zhì)上球形的，即不是具有如上面限定的小于1.5，例如1.4、1.3、1.2或1.1的縱橫比的顆粒。在其它實(shí)施方式中，在本發(fā)明中使用的顆粒不是球形的，即不是具有如上面限定的1的縱橫比的顆粒。

在進(jìn)一步方面，提供了基本上由微粉化蛋殼膜(esm)組成的顆粒，其中所述顆粒具有小于100μm的中值粒徑。

在本發(fā)明中使用的顆粒的esm可以通過(guò)常規(guī)手段與其它蛋成分分離?？梢詮钠浞蛛xesm的蛋可以受精(fertilise)或未受精。蛋可以是完整的，即在孵化之前，或者可以是空的，即在孵化之后或在提取蛋內(nèi)含物(蛋清和蛋黃)之后蛋的剩余部分(remnant)。適合的手段例如在wo2004/080428和us8580315中描述，其內(nèi)容通過(guò)引用被并入本文。優(yōu)選地，esm通過(guò)在wo2015/058790(pct/ep2013/072049)中公開(kāi)的用于在商業(yè)蛋加工廠中在線(xiàn)收獲蛋殼膜的方法制備，其內(nèi)容通過(guò)引用被并入本文。wo2015/058790提供了處理蛋殼殘留物的方法，所述蛋殼殘留物源自蛋破碎單元并且包括蛋殼部分以及膜部分，所述方法包括將來(lái)自蛋破碎單元的蛋殼殘留物(例如，具有大約0.5mm至大約40mm的顆粒大小和大約3％至大約40％的濕基水分含量)供給至旋風(fēng)分離器，該旋風(fēng)分離器由具有低于大約85℃(優(yōu)選地低于大約60℃)和具有超過(guò)大約60m/s的速度(優(yōu)選地在大約70m/s和大約340m/s之間)的工藝氣體驅(qū)動(dòng)。在所述旋風(fēng)分離器內(nèi)，蛋殼殘留物的渦流加工降低了顆粒大小并脫去所述蛋殼部分的所述膜部分，使得所述蛋殼部分與所述膜部分分離。通過(guò)所述旋風(fēng)分離器的頂部出口，主要釋放工藝氣體、蒸汽和液滴的混合物，和通過(guò)所述旋風(fēng)分離器的底部出口，主要釋放分離的蛋殼部分和膜部分的混合物。所述釋放的混合物然后在分選裝置中被分離為蛋殼部分(portionpart)和膜部分。所得的esm部分然后可以進(jìn)一步被加工為如本文描述的esm顆粒，優(yōu)選地沒(méi)有中間步驟。

在某些實(shí)施方式中，制備esm的方法包括進(jìn)一步的步驟：通過(guò)調(diào)節(jié)與總工藝氣體供給速度相關(guān)的蛋殼殘留物供給速度來(lái)控制供給蛋殼殘留物進(jìn)入所述旋風(fēng)分離器和釋放所述混合物離開(kāi)所述旋風(fēng)分離器之間的時(shí)間，例如，大約0.5s至大約20s和優(yōu)選地大約1s至大約5s的時(shí)間間隔。在某些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括在將它們供給至所述旋風(fēng)分離器之前離心蛋殼殘留物的步驟。在某些實(shí)施方式中，供給步驟是連續(xù)的。在其它實(shí)施方式中，分選步驟包括氣動(dòng)地驅(qū)逐膜部分離開(kāi)分選篩并離開(kāi)分選裝置。該方法也可以包括干燥膜部分的最終步驟。

在大約1mm²至大約10mm²的大小范圍內(nèi)的以薄片形式的esm材料不能被再形成或加工為與完整esm具有相同特征的片。但是，本發(fā)明提供了將這種材料呈現(xiàn)至創(chuàng)傷表面并促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的手段。

在某些實(shí)施方式中，在本發(fā)明中使用的顆粒的esm(或至少其蛋白成分)將基本上獲得自殼膜分離過(guò)程。換句話(huà)說(shuō)，與來(lái)自相應(yīng)的鳥(niǎo)來(lái)源的天然存在的esm相比，在本發(fā)明中使用的顆粒的esm將基本上沒(méi)有被化學(xué)改性。

更具體地，與來(lái)自相應(yīng)的鳥(niǎo)來(lái)源的天然存在的esm相比，在本發(fā)明中使用的顆粒的esm將基本上沒(méi)有被化學(xué)降解、消化(例如化學(xué)或酶促)和/或變性。“基本上沒(méi)有被降解”意思是與來(lái)自相應(yīng)的鳥(niǎo)來(lái)源的天然存在的esm相比，少于20％，例如少于15％、10％、5％或1％的esm成分將顯示降解跡象。沒(méi)有被消化和沒(méi)有被變性應(yīng)當(dāng)依此理解。esm的降解/消化/變性程度可以通過(guò)測(cè)量esm的相對(duì)溶解度和/或esm中膠原纖維的相對(duì)大小或結(jié)構(gòu)來(lái)評(píng)估。這可以通過(guò)常規(guī)技術(shù)實(shí)現(xiàn)，所述常規(guī)技術(shù)包括免疫組織化學(xué)/免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)和/或生物分子(例如蛋白質(zhì))染色劑和染料。

具體而言，在本發(fā)明中使用的顆粒的esm將不暴露于水解反應(yīng)或二硫鍵還原反應(yīng)，例如化學(xué)或酶促，尤其是堿解反應(yīng)。換句話(huà)說(shuō)，在本發(fā)明中使用的顆粒的esm將基本上沒(méi)有被水解，其意思是，與來(lái)自相應(yīng)的鳥(niǎo)來(lái)源的天然存在的esm相比，少于20％，例如少于15％、10％、5％或1％的esm成分將顯示水解跡象。esm的水解程度可以通過(guò)測(cè)量esm的相對(duì)溶解度和/或膠原纖維的相對(duì)大小和/或esm中膠原蛋白交聯(lián)的程度來(lái)評(píng)估。這可以通過(guò)常規(guī)技術(shù)實(shí)現(xiàn)，所述常規(guī)技術(shù)包括免疫組織化學(xué)/免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)和/或蛋白質(zhì)染色劑和染料。

在其它實(shí)施方式中，在本發(fā)明中使用的顆粒的esm在中性ph例如ph6.8-7.2下將基本上，例如本質(zhì)上不溶于水。出于本發(fā)明的目的，不溶的物質(zhì)需要多于10l的溶劑來(lái)溶解1g溶質(zhì)。

在本發(fā)明中使用的顆粒的esm可以通過(guò)任何常規(guī)粒度破碎、微粉化、碾磨、粉碎或研磨技術(shù)手段——例如球磨、珠磨、噴射研磨、渦流研磨——微粉化，然后進(jìn)行大小選擇，例如篩分或篩選。選擇的粒度破碎方法可以干燥進(jìn)行或者利用液體介質(zhì)進(jìn)行。也可以采用冷凍粉碎。在某些實(shí)施方式中粒度破碎方法，和在某些實(shí)施方式中在前的esm制備方法基于產(chǎn)生需要大小的esm纖維(即微纖維和納米纖維)來(lái)選擇。尤其，在旋轉(zhuǎn)葉片攪拌機(jī)中粉碎干燥esm在這一點(diǎn)上已經(jīng)被顯示為是有效的(圖5)。

在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了用于制備包含如本文限定的顆粒的微粉化esm的方法，所述方法包括提供esm，例如如本文限定的，并使esm經(jīng)歷微粉化過(guò)程和顆粒大小選擇過(guò)程。優(yōu)選地，提供基本上不含非esm蛋成分的esm。更優(yōu)選地，提供基本上不含非esm蛋成分的esm包括將esm與非esm蛋成分分離，例如如在wo2015/058790(pct/ep2013/072049)中和上面描述的，并利用弱酸溶液(該術(shù)語(yǔ)包括弱酸性溶液)——例如，大約0.1％鹽酸或醋酸的水溶液——洗滌如此獲得的esm，從而去除esm中任何殘留的碳酸鈣。在其它實(shí)施方式中，微粉化esm利用所述弱酸溶液洗滌。該弱酸洗滌，尤其是利用大約0.1％hcl溶液處理，不僅對(duì)esm脫礦質(zhì)，因而使得esm中無(wú)機(jī)鹽的量最小化，而且去除傳染物和/或使傳染物失活，例如微生物(例如，如上面描述的)、阮病毒和病毒。

如圖5中所示，以這種方式制備的esm的微粉化產(chǎn)生了10-100μm長(zhǎng)度和1-5μm厚度的esm纖維(即微纖維和納米纖維)。

包含在本發(fā)明中使用的顆粒的微粉化esm的另外成分可以在微粉化過(guò)程之前、所述過(guò)程期間或所述過(guò)程之后被包括。通過(guò)所述方法獲得或可獲得的包含微粉化esm的顆粒是本發(fā)明的進(jìn)一步的方面。

在本發(fā)明中使用的顆粒將通常被提供作為許多所述顆粒的一部分，所述許多顆粒小于100μm的眾數(shù)粒徑，例如小于95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、25、20、15、10、5或1μm，例如小于900、850、800、750、700、650、600、550、500、450、400、350、300、250、200、150、100、50、10、5或1nm。

在某些實(shí)施方式中，許多顆粒也具有等于或大于1nm的眾數(shù)粒徑，例如等于或大于5、10、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900或950nm，或等于或大于1μm，例如等于或大于5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或95μm?？梢杂蛇@些值的任意組合衍生的任何和所有范圍端點(diǎn)特別地被考慮。

在某些實(shí)施方式中，少于25％，例如少于20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的在所述許多顆粒內(nèi)的顆粒數(shù)目具有等于或大于100μm的中值顆粒直徑。

在某些實(shí)施方式中，可以有利的是提供許多具有低分散性的顆粒。出于該原因，顆粒優(yōu)選地具有如此變異系數(shù)(cv)：其大約為小于10％，更優(yōu)選地小于5％，仍更優(yōu)選地小于2％的選擇的中值顆粒直徑(如上面所描述的)。cv以百分比被確定為

cv＝100x標(biāo)準(zhǔn)偏差/中值

其中中值是中值粒徑并且標(biāo)準(zhǔn)偏差是粒徑的標(biāo)準(zhǔn)偏差。cv優(yōu)選地以主要模式計(jì)算，即通過(guò)將單峰分布曲線(xiàn)與檢測(cè)的顆粒大小分布擬合。因而，眾數(shù)尺寸下面或上面的一些粒徑在計(jì)算中可以被不計(jì)數(shù)(discount)，該計(jì)算可以例如基于總顆粒數(shù)目(即可檢測(cè)的顆粒)的大約90％。這樣的cv測(cè)定可在coulterls130顆粒大小分析儀上執(zhí)行。

在其它實(shí)施方式中，許多顆粒是基本上單分散的。

在另一方面，在其它實(shí)施方式中，寬范圍的顆粒大小或許多更窄的顆粒大小范圍可以被選擇以實(shí)現(xiàn)本文描述的各種生理學(xué)作用中的一種或多種。不希望受理論束縛，在本發(fā)明中使用的中值粒徑在大小范圍的上端的esm顆粒可以通過(guò)提供更強(qiáng)的支架作用促進(jìn)創(chuàng)傷細(xì)胞遷移，而在本發(fā)明中使用的中值粒徑在大小范圍的下端的esm顆粒可以對(duì)mmp和炎癥具有更強(qiáng)的抑制作用。可以有利的是選擇不同的大小范圍以便于調(diào)制(tailor)在本發(fā)明中使用的esm顆粒的生理學(xué)作用。

在進(jìn)一步實(shí)施方式中，使用的esm的顆?？梢源笥谏厦婷枋龅?，例如顆?？梢跃哂卸噙_(dá)500μm，例如多達(dá)450、400、300、350、200、150、125μm的中值粒徑，以及由這些值和前面敘述的特別考慮的值的任意組合衍生的任何和所有范圍端點(diǎn)。本發(fā)明的該部分對(duì)esm顆粒和其產(chǎn)品的在前討論的物理特征適用必要的變通(mutatismutate)。

如上面所討論，創(chuàng)傷是感染特別是慢性感染的理想環(huán)境，這是由于其缺乏上皮屏障以及微生物附著和群集的基底和表面的可利用性。有問(wèn)題地，創(chuàng)傷的感染通常通過(guò)增加創(chuàng)傷和周?chē)鷦?chuàng)傷組織中的炎癥和壞死延遲愈合，并且因而致使創(chuàng)傷對(duì)建立的(慢性)感染更加敏感。許多難以愈合的創(chuàng)傷包括感染，并且因此，也可以處理創(chuàng)傷中的感染(所謂的創(chuàng)傷的生物負(fù)擔(dān))的創(chuàng)傷愈合治療將是尤其有利的。

在某些實(shí)施方式中，利用如本文限定的esm顆粒治療創(chuàng)傷以便于促進(jìn)愈合也可以抑制創(chuàng)傷中存在的微生物的生存力和/或生長(zhǎng)，并且從而打擊(combat)創(chuàng)傷中存在的微生物感染。因此，本發(fā)明可以被視為包括促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的方法，在該方法中存在于創(chuàng)傷中的微生物的生存力和/或生長(zhǎng)也被抑制，或者在該方法中創(chuàng)傷中的微生物感染也被打擊，其中如本文限定的一種或多種esm顆粒以足以抑制微生物的生存力和/或生長(zhǎng)，或足以打擊微生物感染的量被應(yīng)用至所述創(chuàng)傷。

如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“微生物”包括任何細(xì)胞微生物有機(jī)體，即：微觀的——即太小而通過(guò)肉眼不可見(jiàn)——任何細(xì)胞有機(jī)體。具體而言，如本文所施用，該術(shù)語(yǔ)包括通常被看作微生物的有機(jī)體，具體地細(xì)菌、真菌、古細(xì)菌、藻類(lèi)和原生生物。微生物可以是原核的或真核的，并且可以來(lái)自任何微生物種類(lèi)、屬或物種。微生物可以是需氧的或厭氧的。微生物可以是致病的或不致病的，或者可以是腐敗或指示微生物。微生物可以是耐藥的(例如抗微生物藥，例如抗菌或抗真菌藥)或多重耐藥的。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，微生物能夠移植(colonise)于創(chuàng)傷和延遲創(chuàng)傷愈合。

細(xì)菌或真菌代表優(yōu)選種類(lèi)的微生物，并且因此在本發(fā)明中使用的esm顆?？梢?xún)?yōu)選地被看作具有抗菌或抗真菌活性(例如，殺菌的或制菌的或殺真菌的或制真菌的)。

優(yōu)選地，細(xì)菌選自下列屬：無(wú)色桿菌屬、不動(dòng)桿菌屬、放線(xiàn)桿菌屬、氣單胞菌屬、土壤桿菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬、交替單胞菌屬、擬桿菌屬、巴爾通氏體屬、包柔氏螺旋體屬、博代氏桿菌屬、布魯氏菌屬、伯克霍爾德菌屬、彎曲菌屬、心桿菌屬、衣原體屬、嗜衣原體屬、色素桿菌屬、金黃桿菌屬(chyseobacterium)、淺黃金色單胞菌屬(chryseomonas)、檸檬酸桿菌屬、梭菌屬、叢毛單胞菌屬、棒狀桿菌屬、考克斯體屬、隱桿菌屬(cryptobacterium)、愛(ài)德華菌屬、?？暇鷮?、腸桿菌屬、腸球菌屬、歐文氏菌屬、金氏菌屬、克雷白氏菌屬、乳桿菌屬、乳球菌屬、軍團(tuán)桿菌屬、鉤端螺旋體屬、纖毛菌屬、明串珠菌屬、李斯特菌屬、利斯頓氏菌屬、動(dòng)彎桿菌屬(mobiluncus)、摩拉氏菌屬、摩根氏菌屬、分支桿菌屬、支原菌屬、奈瑟氏菌屬、諾卡氏菌屬、諾卡氏土壤菌屬、泛菌屬、副衣原體屬、巴斯德氏菌屬、消化球菌屬、消化鏈球菌屬、普氏菌屬、丙酸桿菌屬、變形菌屬、普羅維登斯菌屬、假單胞菌屬、羅爾斯頓菌屬(ralstonia)、立克次體、沙門(mén)氏菌屬、希瓦氏菌屬(shewenella)、志賀氏桿菌屬、鞘氨醇桿菌屬、鞘氨醇單胞菌屬、葡萄球菌屬、寡養(yǎng)單胞菌屬、鏈桿菌屬、鏈球菌屬、鏈霉菌屬、密螺旋體屬(treponem)和耶爾森氏菌屬。

因而，細(xì)菌可以是革蘭氏陽(yáng)性或革蘭氏陰性細(xì)菌，或者的確革蘭氏不確定細(xì)菌。革蘭氏陰性細(xì)菌具有重要性。在革蘭氏陰性細(xì)菌內(nèi)，腸桿菌科和革蘭氏陰性細(xì)菌非發(fā)酵細(xì)菌引起特別注意。

腸桿菌科包括但不限于來(lái)自如下的細(xì)菌屬：鉻(ⅵ)還原菌(alishewanella)、交替球菌屬、aquamonas、aranicola、azotivirga、布倫納氏菌屬(brenneria)、布戴維氏采菌屬(budvicia)、革蘭氏陰性兼性厭氧菌屬、革蘭氏陰性兼性厭氧桿菌屬、檸檬酸桿菌屬、阪崎腸桿菌(cronobacter)、dickeya、愛(ài)德華菌屬、腸桿菌屬、歐文氏菌屬、埃希氏桿菌屬、愛(ài)文氏菌屬、grimontella、哈夫尼菌屬、克雷白氏菌屬、克魯維菌屬(kluyvera)、勒克菌屬、勒米諾菌屬、米勒氏菌屬、摩根氏菌屬、脂桿菌屬、泛菌屬、果膠桿菌屬、phlomobacter、發(fā)光桿菌屬、鄰單胞菌屬、布拉格菌屬、變形菌屬、普羅維登斯菌屬、拉恩氏菌屬、拉烏爾菌屬(raoultella)、沙門(mén)氏菌屬、samsonia、沙雷氏菌屬、志賀氏桿菌屬、伴突屬(sodalis)、塔特姆菌屬、特布爾西氏菌屬(trabulsiella)、wigglesworthia、致病桿菌屬、耶爾森氏菌屬、預(yù)研菌屬(yokenella)。腸桿菌科的優(yōu)選的屬包括埃希氏桿菌屬、克雷白氏菌屬、沙門(mén)氏菌屬、志賀氏桿菌屬、耶爾森氏菌屬和普羅維登斯菌屬。

非發(fā)酵革蘭氏陰性細(xì)菌包括但不限于來(lái)自以下屬的細(xì)菌：假單胞菌屬、不動(dòng)桿菌屬、寡養(yǎng)單胞菌屬和伯克霍爾德菌屬、無(wú)色桿菌屬、algaligenes、博代氏桿菌屬、短波單胞菌屬、叢毛單胞菌屬、elizabethkingia(以前金黃桿菌屬)、甲基桿菌屬、摩拉氏菌屬、蒼白桿菌屬、寡源桿菌屬、嗜冷桿菌屬、羅爾斯頓菌屬、玫瑰單胞菌屬、希瓦氏菌屬、鞘氨醇桿菌屬，例如綠膿假單胞菌、鮑氏不動(dòng)桿菌、嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌和伯克霍爾德菌屬物種。

優(yōu)選地，細(xì)菌可以選自以下的屬：假單胞菌屬、不動(dòng)桿菌屬、伯克霍爾德菌屬、埃希氏桿菌屬、克雷白氏菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬、普羅維登斯菌屬、莫拉克斯氏菌屬(moraxalla)、葡萄球菌屬，例如綠膿假單胞菌、鮑氏不動(dòng)桿菌、伯克霍爾德菌屬物種、大腸桿菌、肺炎克雷白氏菌、洋蔥伯克霍爾德菌、多噬伯克霍爾德氏菌、鼻疽伯克霍爾德氏菌、類(lèi)鼻疽伯克霍爾德菌、魯氏不動(dòng)桿菌、斯氏普羅威登斯菌、雷氏普羅威登斯菌、產(chǎn)堿普羅威登斯菌、產(chǎn)酸克雷伯氏菌、鰻敗血假單胞菌、棲稻假單胞菌、變形假單胞菌、淺黃假單胞菌、粘膜炎莫拉菌、屎腸球菌、糞腸球菌、口腔鏈球菌、金黃色葡萄球菌(例如mrsa)。

因此，作為代表性實(shí)例，微生物可以是如下屬的細(xì)菌：葡萄球菌屬、假單胞菌屬、軍團(tuán)桿菌屬、分支桿菌屬、變形菌屬、克雷白氏菌屬、梭桿菌屬或其它腸道細(xì)菌或大腸桿菌類(lèi)。

微生物也可以是真菌或者也可以來(lái)自真菌，包括例如可以或已經(jīng)被分類(lèi)為原生生物的真菌，例如來(lái)自如下屬的真菌：念珠菌屬、曲霉屬、肺囊蟲(chóng)屬、青霉屬和鐮刀菌屬。有代表性的真菌物種包括但不限于白色念珠菌、都柏林念珠菌(candidadubliniensis)、新型隱球菌、組織胞漿菌(histoplamacapsulatum)、煙曲霉(aspergillusfumigatus)、粗球孢子菌、巴西副球孢子菌、皮炎芽生菌、卡氏肺孢子蟲(chóng)(pneomocystiscarnii)、馬尼弗青霉菌、鏈格孢菌(alternariaalternate)。

微生物也可以是原生動(dòng)物，例如下列族的成員：變形蟲(chóng)、孢子蟲(chóng)亞門(mén)、纖蟲(chóng)毛和鞭毛蟲(chóng)。有代表性的原生動(dòng)物包括弓形體物種例如鼠弓形體，瘧原蟲(chóng)物種例如鐮狀瘧原蟲(chóng)、間日瘧原蟲(chóng)、三日瘧原蟲(chóng)。錐蟲(chóng)屬物種例如布氏錐蟲(chóng)、克氏錐蟲(chóng)，利什曼原蟲(chóng)屬物種比如碩大利什曼原蟲(chóng)，和內(nèi)阿米巴屬物種比如溶組織內(nèi)阿米巴。

優(yōu)選地，微生物選自下列屬：檸檬酸桿菌屬、腸桿菌屬、埃希氏桿菌屬、哈夫尼菌屬、沙雷氏菌屬、耶爾森氏菌屬、消化鏈球菌屬、擬桿菌屬(bacteriodes)、假單胞菌屬、軍團(tuán)桿菌屬、葡萄球菌屬、腸球菌屬、鏈球菌屬、克雷白氏菌屬、念珠菌屬、變形菌屬、伯克霍爾德菌屬、梭桿菌屬和分支桿菌屬，例如大腸桿菌、糞腸球菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、嗜肺性軍團(tuán)病桿菌(legionellapneumophila)、白色念珠菌、綠膿假單胞菌、洋蔥伯克霍爾德菌和釀膿鏈球菌。由假單胞菌屬例如綠膿假單胞菌引起的感染引起特別注意。

微生物可以在生物膜中，或者換句話(huà)說(shuō)，微生物可以是生長(zhǎng)的生物膜模式?！吧锬ぁ币馑际且詿o(wú)柄細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)為特征的微生物群落，該無(wú)柄細(xì)胞附著至底質(zhì)或表面或彼此(一些游動(dòng)細(xì)胞也可以存在)并且該無(wú)柄細(xì)胞包埋在細(xì)胞外聚合物(更具體地，它們已經(jīng)產(chǎn)生的細(xì)胞外聚合物)的基質(zhì)中，該微生物群落的特征在于該菌落的微生物就生長(zhǎng)速度和基因轉(zhuǎn)錄而言展示了改變的表型(例如，與它們的“非生物膜”或自由浮動(dòng)的或浮游性對(duì)應(yīng)物相比)?！霸谏锬ぶ小币馑际俏⑸镌谏锬さ木酆衔锘|(zhì)內(nèi)(完全地或部分地)、在其上或與其相關(guān)聯(lián)。從不同角度而言，“不在生物膜中”的微生物是如此微生物：其是分離的，例如浮游的，或者如果處于許多微生物的聚集，則聚集是無(wú)組織的和/或缺乏生物膜的基質(zhì)特征。在每種情況下，單個(gè)微生物不展示改變的表型——其在停留對(duì)應(yīng)物的它們的生物膜中觀察到。

術(shù)語(yǔ)“微生物的生存力”意思是微生物在給定條件下，例如在創(chuàng)傷中生存的能力。生存可以被視為與保持活著等價(jià)。在本發(fā)明中使用的esm顆?？梢酝ㄟ^(guò)殺微生物作用降低微生物的生存力。確定微生物的生存力可以使用下面詳細(xì)描述的用于測(cè)量微生物細(xì)胞死亡(和生存力)的技術(shù)進(jìn)行。

因而，“抑制微生物的生存力”可以包括降低微生物的生存力的任何作用，或者致使微生物不太可能生存或者無(wú)法存活的任何作用。具體而言，該術(shù)語(yǔ)涵蓋殺死或者消滅微生物。

“殺死微生物”指的是使得微生物停止活著即死亡的行動(dòng)。如果當(dāng)將微生物置于將正常地支持所述微生物的生長(zhǎng)的培養(yǎng)基中和/或微生物代謝營(yíng)養(yǎng)物以釋放能量從而支持細(xì)胞功能時(shí)，微生物能夠被誘導(dǎo)以復(fù)制和/或生長(zhǎng)，或至少表現(xiàn)形態(tài)學(xué)變化，則微生物被視為是活著的。通常，如果細(xì)胞膜完整性失去，則微生物可以被認(rèn)為死亡。

許多常規(guī)分析可用于確定微生物是活著(或有活力)還是死亡。一種選擇是將微生物置于將正常地支持所述微生物的生長(zhǎng)和監(jiān)測(cè)微生物的生長(zhǎng)的條件下，通過(guò)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)方式，例如通過(guò)隨著時(shí)間的推移監(jiān)測(cè)微生物的大小、微生物的形態(tài)、菌落中微生物的數(shù)目、培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物的消耗等。另一種選擇是評(píng)估微生物細(xì)胞死亡的形態(tài)特征，例如壞死體或凋亡體、膜起泡、核濃縮和分裂dna為規(guī)則大小的片段、破裂的細(xì)胞壁或細(xì)胞膜和細(xì)胞內(nèi)含物滲入細(xì)胞外環(huán)境。其它方法利用死亡微生物中細(xì)胞膜完整性的特征丟失。不能滲透膜的染料(例如錐蟲(chóng)藍(lán)和碘化丙啶)常規(guī)地被用于評(píng)估膜完整性。仍進(jìn)一步的選擇是測(cè)量微生物的代謝。這可以以許多方式常規(guī)地進(jìn)行。例如，可以測(cè)量atp的水平。

“微生物的生長(zhǎng)”意思是微生物的大小或微生物的成分的量和/或體積(例如，核酸的量、蛋白質(zhì)的量、核的數(shù)目、細(xì)胞器的數(shù)目或大小、細(xì)胞質(zhì)的體積)的增加，和微生物的數(shù)目的增加即微生物的復(fù)制的增加二者。

“抑制微生物的生長(zhǎng)”意思是微生物的可測(cè)量的生長(zhǎng)(例如復(fù)制)或其速度降低。優(yōu)選地，微生物的可測(cè)量的生長(zhǎng)(例如復(fù)制)或其速度降低至少50％，或更優(yōu)選地至少60％、70％、80％或90％，例如至少95％。優(yōu)選地，可測(cè)量的生長(zhǎng)(例如復(fù)制)停止。在微生物大小增加或擴(kuò)展等方面的生長(zhǎng)可以獨(dú)立于復(fù)制而被抑制，反之亦然。在本發(fā)明中使用的esm顆粒可以通過(guò)抑微生物作用和/或殺微生物作用抑制微生物的生存力。

因而，本發(fā)明也可以被認(rèn)為提供如本文限定的用于打擊，并且具體而言治療創(chuàng)傷中的微生物感染的esm顆粒，或者如本文描述的esm顆粒在制造用于打擊并且具體而言治療創(chuàng)傷中的微生物感染的藥物中的用途。在該方面，可見(jiàn)感染可以通過(guò)抑制對(duì)象中微生物的生長(zhǎng)和/或生存力被打擊。感染可以是生物膜感染。

“打擊感染”可以被視為治療或預(yù)防感染，例如包括預(yù)防或抑制感染的形成、感染的減弱或消除、患有感染的菌落中微生物數(shù)目的減少、感染和/或在其中的微生物的生長(zhǎng)速度的降低或停止、感染中微生物的數(shù)目的擴(kuò)展速度的降低或停止。“打擊生物膜”包括預(yù)防性和保守性措施或治療二者。因此，打擊生物膜包括預(yù)防或抑制生物膜的形成、生物膜的消除或減小、生物膜大小的降低、生物膜菌落中微生物數(shù)目的減少、生物膜的生長(zhǎng)速度的降低或停止、生物膜菌落中微生物數(shù)目的擴(kuò)展速度的降低或停止、生物膜的生理完整性的降低、生物膜菌落中的微生物對(duì)抗微生物劑或宿主免疫防御機(jī)制的敏感性的增加、和生物膜對(duì)抗微生物劑或宿主免疫防御機(jī)制的滲透性的增加。

在這些實(shí)施方式中，在應(yīng)用顆粒至創(chuàng)傷之后，微生物將與在本發(fā)明中使用的esm顆粒接觸。術(shù)語(yǔ)“接觸”包括直接施加顆粒至微生物，或者施加顆粒至稍后與微生物接觸的創(chuàng)傷。

更具體地，微生物將與有效量的在本發(fā)明中使用的esm顆粒接觸，更具體地，對(duì)于抑制微生物的生存力(例如殺死微生物)或直接抑制微生物的生長(zhǎng)直接有效的本發(fā)明中使用的esm顆粒的量。

“直接地”意思是在本發(fā)明中使用的esm顆粒不募集(recruit)生理學(xué)系統(tǒng)或機(jī)制(例如免疫系統(tǒng))以賦予它們的殺微生物或抑微生物(例如它們的細(xì)胞毒性或細(xì)胞抑制)作用。而且，在本發(fā)明中使用的esm顆粒直接作用于微生物。

在這些實(shí)施方式中，在本發(fā)明中使用的esm顆粒的“足夠(或有效)量”是如此的esm顆粒的量：其導(dǎo)致上面描述的殺微生物或抑微生物作用，或者其有效地打擊感染，并且從而促進(jìn)創(chuàng)傷的愈合。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠容易地基于常規(guī)劑量反應(yīng)方案，和便利地用于評(píng)估微生物死亡或生長(zhǎng)抑制等的常規(guī)技術(shù)，確定esm顆粒的有效(足夠)量，如上面討論的。在本發(fā)明中使用的esm顆粒的直接作用可以通過(guò)使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的常規(guī)體外系統(tǒng)評(píng)估，該體外系統(tǒng)缺乏可以干擾殺微生物或抑微生物作用的評(píng)估的完整的生理學(xué)系統(tǒng)或機(jī)制(例如，簡(jiǎn)單的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、分離細(xì)胞/病毒系統(tǒng)，例如如實(shí)施例1中公開(kāi)的)。

在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法可以包括如此步驟：其中對(duì)象將被診斷為有創(chuàng)傷，該創(chuàng)傷也處于發(fā)展為感染的風(fēng)險(xiǎn)下或?qū)⑹芤嬗趯?duì)其中的感染進(jìn)行治療。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法可以包括，在將在本發(fā)明中使用的esm顆粒應(yīng)用至創(chuàng)傷之后，監(jiān)測(cè)創(chuàng)傷中的微生物的生長(zhǎng)和/或生存力或感染的程度的步驟。這些監(jiān)測(cè)步驟可以包括就在將在本發(fā)明中使用的esm顆粒應(yīng)用至創(chuàng)傷之前或者在對(duì)象的治療中甚至更早的其它點(diǎn)時(shí)與相同度量標(biāo)準(zhǔn)的比較。

如上面所討論的，正常的創(chuàng)傷愈合過(guò)程包括增殖階段：其中創(chuàng)傷組織的細(xì)胞遷移入創(chuàng)傷和/或增殖以形成新組織，但是在一些實(shí)施方式中，愈合過(guò)程在前面的步驟被卡住。

可以促進(jìn)創(chuàng)傷組織的細(xì)胞的生存力和/或生長(zhǎng)的創(chuàng)傷愈合治療因此將是特別有利的。

因而，在一些實(shí)施方式中，利用如本文限定的esm顆粒治療創(chuàng)傷以便于促進(jìn)愈合也可以促進(jìn)創(chuàng)傷組織的細(xì)胞的生存力和/或生長(zhǎng)。因此，本發(fā)明可以被視為包括促進(jìn)創(chuàng)傷的愈合的方法，在該方法中創(chuàng)傷組織的細(xì)胞的生存力和/或生長(zhǎng)也被促進(jìn)，其中如本文限定的esm顆粒以足以促進(jìn)創(chuàng)傷組織的細(xì)胞的生存力和/或生長(zhǎng)的量被施加至所述創(chuàng)傷。

術(shù)語(yǔ)“生存力和/或生長(zhǎng)”應(yīng)當(dāng)被解釋為與在微生物背景下的上述討論一致，但是在該情況下生長(zhǎng)也可以包括創(chuàng)傷組織的細(xì)胞的分化。

“促進(jìn)創(chuàng)傷組織的細(xì)胞的生長(zhǎng)”意思是創(chuàng)傷組織的細(xì)胞的可測(cè)量的生長(zhǎng)(例如復(fù)制和/或分化)或其速度被增加或至少被維持或者被阻止降低。優(yōu)選地，創(chuàng)傷組織的細(xì)胞的可測(cè)量的生長(zhǎng)(例如復(fù)制和/或分化)或其速度增加至少5％。更優(yōu)選地至少10％、20％、30％或40％，例如至少50％。

在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法可以包括如此步驟：其中對(duì)象將被診斷為患有創(chuàng)傷，該創(chuàng)傷也受益于創(chuàng)傷組織的細(xì)胞的生存力和/或生長(zhǎng)的促進(jìn)。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法可以包括，在將在本發(fā)明中使用的esm顆粒應(yīng)用至創(chuàng)傷之后，監(jiān)測(cè)創(chuàng)傷組織的細(xì)胞的生存力和/或生長(zhǎng)和/或新組織形成的步驟。這些監(jiān)測(cè)步驟可以包括就在將在本發(fā)明中使用的esm顆粒應(yīng)用至創(chuàng)傷之前或者在對(duì)象的治療中甚至更早的其它點(diǎn)時(shí)與相同度量標(biāo)準(zhǔn)的比較。

也可以促進(jìn)創(chuàng)傷組織的細(xì)胞遷移入創(chuàng)傷的創(chuàng)傷愈合治療因此也是特別有利的。

因而，在某些實(shí)施方式中，利用如本文限定的esm顆粒治療創(chuàng)傷以便于促進(jìn)愈合也可以促進(jìn)創(chuàng)傷組織的細(xì)胞遷移入創(chuàng)傷。因此，本發(fā)明可以被視為包括促進(jìn)創(chuàng)傷的愈合的方法，在該方法中創(chuàng)傷組織的細(xì)胞遷移入創(chuàng)傷也被促進(jìn)，其中如本文限定的esm顆粒以足以促進(jìn)創(chuàng)傷組織的細(xì)胞遷移入創(chuàng)傷的量被施加至所述創(chuàng)傷。

“促進(jìn)遷移”意思是創(chuàng)傷組織的細(xì)胞可測(cè)量的遷移入創(chuàng)傷或其速度被增加或至少被維持或被阻止減少。優(yōu)選地，創(chuàng)傷組織的細(xì)胞可測(cè)量的遷移或其速度被增加至少5％，更優(yōu)選地至少10％、20％、30％或40％，例如至少50％。

在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法可以包括如此步驟：其中對(duì)象將被診斷為患有創(chuàng)傷，該創(chuàng)傷也將受益于創(chuàng)傷組織的細(xì)胞遷移入創(chuàng)傷的促進(jìn)。

在進(jìn)一步實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法可以包括，在將在本發(fā)明中使用的esm顆粒應(yīng)用至創(chuàng)傷之后，監(jiān)測(cè)創(chuàng)傷組織的細(xì)胞遷移入創(chuàng)傷的程度和/或新組織形成的步驟。這些監(jiān)測(cè)步驟可以包括就在將在本發(fā)明中使用的esm顆粒應(yīng)用至創(chuàng)傷之前或者在對(duì)象的治療中甚至更早的其它點(diǎn)時(shí)與相同度量標(biāo)準(zhǔn)的比較。

創(chuàng)傷細(xì)胞的遷移和/或增殖的促進(jìn)可以是由于在本發(fā)明中使用的esm顆粒用作創(chuàng)傷組織的細(xì)胞的支架。遷移和/或增殖的促進(jìn)可以促進(jìn)新組織形成。創(chuàng)傷組織的細(xì)胞遷移入創(chuàng)傷，esm顆粒在提供支架和創(chuàng)傷中新組織形成中的作用，可以通過(guò)對(duì)創(chuàng)傷或其樣本的顯微鏡分析進(jìn)行監(jiān)測(cè)和量化。這樣的分析可以包括化學(xué)和/或免疫化學(xué)染色以檢測(cè)創(chuàng)傷組織的細(xì)胞和/或創(chuàng)傷中新組織上的分子標(biāo)記。

在這些實(shí)施方式中，如本文限定的esm顆粒的“足夠(或有效)量”是如此的esm顆粒的量：其導(dǎo)致上面描述的促增殖或促遷移作用，或者其促進(jìn)新組織形成，并且從而進(jìn)一步促進(jìn)創(chuàng)傷的愈合。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠容易地基于常規(guī)劑量反應(yīng)方案，和便利地用于評(píng)估上面描述的創(chuàng)傷細(xì)胞生存力、生長(zhǎng)和遷移的常規(guī)技術(shù)，確定esm顆粒的有效(足夠)量將是多少。

在這些實(shí)施方式中，創(chuàng)傷細(xì)胞將在應(yīng)用顆粒至創(chuàng)傷之后與在本發(fā)明中使用的esm顆粒接觸。更具體地，創(chuàng)傷細(xì)胞將與對(duì)促進(jìn)創(chuàng)傷組織的細(xì)胞的生存力和/或生長(zhǎng)、促進(jìn)創(chuàng)傷組織的細(xì)胞遷移入創(chuàng)傷或促進(jìn)新組織形成有效的在本發(fā)明中使用的有效量的esm顆粒接觸。

包含在本發(fā)明中使用的顆粒的微粉化esm具有另外的益處：易于配制不干擾維持潮濕愈合環(huán)境的制品(preparation)。因而，在本文公開(kāi)的發(fā)明的方法中，在本發(fā)明中使用的esm顆粒被施加至創(chuàng)傷以便不干擾潮濕愈合環(huán)境的維持，例如在適合以便不干擾維持潮濕愈合環(huán)境的配方或敷料中，例如本文描述的那些。

在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法實(shí)現(xiàn)創(chuàng)傷愈合的促進(jìn)以及上面描述的另外的創(chuàng)傷作用中的一種或多種，或所有，即(i)抑制ecm的降解和/或肽生長(zhǎng)或分化因子(具體而言，抑制針對(duì)ecm和/或肽生長(zhǎng)或分化因子的mmp活性的抑制)和上面描述的另外的創(chuàng)傷作用中的一種或多種，或全部，具體而言抗微生物作用和/或抗炎作用；和/或(ii)創(chuàng)傷中的炎癥的減弱和上面描述的另外的創(chuàng)傷作用中的一種或多種，或所有，具體而言抗微生物作用和/或mmp抑制作用。

創(chuàng)傷可以發(fā)現(xiàn)于對(duì)象中或?qū)ο笊?。術(shù)語(yǔ)“在對(duì)象中”在本文中寬泛地被用于包括對(duì)象內(nèi)或?qū)ο笊系牟课换蛭恢?，例如外部身體表面，并且可以尤其包括包含植入式醫(yī)療裝置的創(chuàng)傷。

因而，創(chuàng)傷因此可以發(fā)現(xiàn)于皮膚中或皮膚上，或口腔中任何易感染的表面中或上(例如牙齦、齦縫、牙周袋)、生殖系統(tǒng)(例如子宮頸、子宮、輸卵管)中或上、腹膜中或上、胃腸道中或上、耳朵中或上、眼睛中或上、前列腺中或上、泌尿道中或上、血管系統(tǒng)中或上、呼吸道中或上、心臟中或上、腎臟中或上、肝臟中或上、胰腺中或上、神經(jīng)系統(tǒng)中或上、或腦中或上。“創(chuàng)傷組織的細(xì)胞”應(yīng)當(dāng)據(jù)此解釋。優(yōu)選地，創(chuàng)傷是皮膚(表皮)創(chuàng)傷，換句話(huà)說(shuō)，真皮或皮膚科創(chuàng)傷，其包括上皮和/或真皮以及下面組織的任何深度的創(chuàng)傷。

植入式醫(yī)療裝置包括但不限于任何種類(lèi)的經(jīng)皮設(shè)備和/或?qū)е聞?chuàng)傷的線(xiàn)(line)(例如，中心靜脈導(dǎo)管，具體而言具有套箍(cuff)的導(dǎo)管，例如滌綸或膠原蛋白套箍)，假肢裝置例如心臟瓣膜、人工關(guān)節(jié)、種植牙和軟組織植入物(例如胸部、臀部和唇部植入物)，支架(stent)、起搏器和氣管造口管?！爸踩胧健贬t(yī)療裝置可以包括其任何部分包含在身體內(nèi)的設(shè)備，即該設(shè)備可以全部或部分被植入。

創(chuàng)傷可以由外科手術(shù)引起，通過(guò)物理?yè)p傷(例如，機(jī)械損傷；熱損傷，例如源于過(guò)熱或過(guò)冷的那些；電損傷，例如通過(guò)與電勢(shì)的來(lái)源接觸引起的那些；和例如通過(guò)延長(zhǎng)的、大量的暴露于紅外線(xiàn)、紫外線(xiàn)或電離輻射引起的輻射傷害)引起，或通過(guò)自發(fā)地形成損害比如皮膚潰瘍(例如，靜脈性潰瘍、糖尿病性潰瘍或壓迫性潰瘍)、肛裂、口腔潰瘍和尋常痤瘡引起。外科手術(shù)移植的組織被視為是創(chuàng)傷。

在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，創(chuàng)傷通常被限定為急性的或慢性的。急性創(chuàng)傷是如此創(chuàng)傷：其在止血之后順序地通過(guò)愈合過(guò)程的三個(gè)公認(rèn)階段(即，炎癥階段、增殖階段和重塑期)進(jìn)行，沒(méi)有拖延的時(shí)間進(jìn)程。慢性創(chuàng)傷被定義為未能愈合或者其中存在過(guò)多皮膚損失比如通過(guò)燒傷的那些。這些創(chuàng)傷不完成愈合過(guò)程的生物化學(xué)事件的有序順序，因?yàn)閯?chuàng)傷在愈合階段的一個(gè)中變得拖延。通常，慢性創(chuàng)傷在炎癥期中拖延。慢性創(chuàng)傷是患者發(fā)病率的主要來(lái)源。

根據(jù)本發(fā)明的具體方面，慢性創(chuàng)傷可以被視為在預(yù)期的時(shí)間量沒(méi)有愈合的創(chuàng)傷，例如比預(yù)期的長(zhǎng)至少5、10、15、20或30天。這可以被認(rèn)為在形成后至少30、至少40天、具體地至少50天、更具體地至少60天、最具體地至少70天還沒(méi)有愈合的創(chuàng)傷。

也特別注意的是已經(jīng)變?yōu)槁缘臒齻麆?chuàng)傷。任何燒傷，具體而言重度燒傷對(duì)對(duì)象的上皮和/或內(nèi)皮屏障的完整性具有顯著影響，并且這種創(chuàng)傷的愈合常常是很長(zhǎng)的過(guò)程。因此，本發(fā)明的方法可以被視為用于促進(jìn)由燒傷引起的慢性創(chuàng)傷的愈合的方法。

通常引起燒傷的要素(agent)是極端的溫度(例如，在極端溫度下的火以及液體和氣體)、電流、腐蝕性化學(xué)制品、摩擦和輻射。暴露的程度和持續(xù)時(shí)間，連同要素的強(qiáng)度/力量導(dǎo)致不同嚴(yán)重程度的燒傷。燙傷(即與高溫液體和/或氣體相關(guān)聯(lián)的外傷)被視為燒傷。

在某些實(shí)施方式中，目標(biāo)創(chuàng)傷是也處于微生物感染風(fēng)險(xiǎn)下，或者包含微生物感染的創(chuàng)傷，如本文中公開(kāi)的那些。感染可以是急性的，或者可選地慢性的，例如已經(jīng)持續(xù)至少5或至少10天、具體地至少20天、更具體地至少30天、更具體地至少40天的感染。

在某些實(shí)施方式中，目標(biāo)創(chuàng)傷是如此創(chuàng)傷：其也處于不適當(dāng)即不足水平的創(chuàng)傷組織細(xì)胞遷移入創(chuàng)傷和/或創(chuàng)傷組織細(xì)胞的增殖或分化和/或新組織形成的風(fēng)險(xiǎn)下，或者其中存在不適當(dāng)即不足水平的創(chuàng)傷組織細(xì)胞遷移入創(chuàng)傷和/或創(chuàng)傷組織細(xì)胞的增殖或分化和/或新組織形成。

在仍進(jìn)一步實(shí)施方式中，目標(biāo)創(chuàng)傷具有(i)mmp過(guò)度活性(具體而言針對(duì)ecm和生長(zhǎng)因子)或過(guò)度的ecm和生長(zhǎng)因子降解以及上面描述的創(chuàng)傷特征中的一種或多種，具體而言微生物感染和炎癥；和/或(ii)過(guò)度炎癥和上面描述的創(chuàng)傷特征中的一種或多種，具體而言微生物感染和mmp過(guò)度活性(具體而言針對(duì)ecm和生長(zhǎng)因子)或過(guò)度的ecm和生長(zhǎng)因子降解。

除了本文限定的包含微粉化esm的顆粒的慢性創(chuàng)傷愈合作用之外，預(yù)期的是外科手術(shù)切除瘤的部位也將受益于利用本文限定的esm顆粒的治療，因?yàn)檫@樣的治療被預(yù)測(cè)為能夠(i)通過(guò)抑制在外科手術(shù)切除過(guò)程之后保留的瘤的任何剩余部分中的血管生成來(lái)打擊瘤，和(ii)通過(guò)抑制在瘤的外科手術(shù)切除或消融的部位處的mmp活性來(lái)阻止在外科手術(shù)切除過(guò)程之后保留的瘤的任何剩余部分的轉(zhuǎn)移。

因而，本發(fā)明進(jìn)一步提供了用于在瘤或其部分已經(jīng)被外科手術(shù)切除的部位處打擊瘤或阻止瘤的轉(zhuǎn)移的方法，其中如本文限定的一種或多種esm顆粒以足以打擊任何剩余部分的瘤或阻止任何剩余部分的瘤轉(zhuǎn)移的量被施加至所述部位或所述部位的緊鄰位置。

在這些實(shí)施方式中，任何剩余部分的瘤的細(xì)胞將在施加顆粒至外科手術(shù)切除的部位或其緊鄰位置之后與如本文限定的esm顆粒接觸。術(shù)語(yǔ)“接觸”包括施加顆粒直接至任何剩余部分的瘤的細(xì)胞，或施加顆粒至外科手術(shù)切除的部位或其緊鄰位置和與任何剩余部分的瘤的細(xì)胞稍后接觸的部位?！熬o鄰位置”應(yīng)當(dāng)被解釋為相對(duì)于被切除的瘤的大小。在一些情況下，外科手術(shù)切除或消融的部位的緊鄰位置將是如此區(qū)域：其從外科手術(shù)切除的部位的邊界延伸的距離多達(dá)部位的最寬部分的50％，例如多達(dá)40％、30％、20％、10％、5％或2％。

“在瘤已經(jīng)被外科手術(shù)切除的部位處打擊瘤”可以被視為治療已經(jīng)被外科手術(shù)切除的瘤的任何剩余部分，從而阻止、限制或抑制所述瘤的再形成，減小或消除瘤的任何剩余部分，減小部位處任何剩余部分的瘤細(xì)胞的數(shù)目，降低或停止任何剩余部分的瘤和/或其中的或在部位處的任何瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)速度，降低或停止剩余部分的瘤中或部位處的瘤細(xì)胞的數(shù)目的擴(kuò)展速度。

如提及的，不希望受理論束縛，該打擊作用至少部分地通過(guò)阻止、抑制、限制或消除任何剩余部分的瘤中的血管生成實(shí)現(xiàn)，其又起因于針對(duì)本文描述的ecm蛋白的mmp活性的降低或限制。這樣的作用的詳細(xì)討論在本發(fā)明的該部分適用必要的變通。另一種機(jī)制可以包括利用esm顆粒自身阻礙生長(zhǎng)的血管。

“在瘤已經(jīng)被外科手術(shù)切除的部位處阻止瘤的轉(zhuǎn)移”可以被視為治療已經(jīng)被外科手術(shù)切除的瘤的任何剩余部分，以便于阻止、限制或抑制任何這樣的剩余部分的細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。治療可以阻止所有轉(zhuǎn)移事件或者可以限制這樣的事件至轉(zhuǎn)移的目前速度或可能性或更低的(抑制)速度或可能性。

如提及的，不希望受理論束縛，這種對(duì)轉(zhuǎn)移的作用通過(guò)降低或限制針對(duì)本文描述的ecm蛋白的mmp活性來(lái)實(shí)現(xiàn)。這樣的作用的詳細(xì)討論在本發(fā)明的該部分適用必要的變通。

本發(fā)明的該方面因此可以被視為包括阻止已經(jīng)通過(guò)外科手術(shù)從對(duì)象切除的瘤的再生長(zhǎng)或再發(fā)生的方法，和/或阻止對(duì)象的癌癥復(fù)發(fā)或再發(fā)生的方法，和/或在從對(duì)象外科手術(shù)切除瘤之后提高緩解的可能性的方法。

瘤可以是位于對(duì)象的身體的任何組織中的瘤，例如本文描述的那些組織和身體部分。在某些實(shí)施方式中，瘤是惡性瘤，具體而言具有高轉(zhuǎn)移潛能或可能性的瘤。因此，瘤可以是肉瘤、家族性癌(carcioma)、生殖細(xì)胞瘤、淋巴瘤(lymphoma)、白血病、胚細(xì)胞癌、乳突淋瘤(papilloma)和腺瘤，這些瘤的特征在于細(xì)胞的積聚(集結(jié)(mass))。這樣的積聚或集結(jié)可以被描述為“實(shí)體(solid)”，即使集結(jié)可以是散開(kāi)的和/或包括空隙。在某些實(shí)施方式中，腫瘤是惡性或癌變前的腫瘤，例如肉瘤、癌、生殖細(xì)胞瘤、胚細(xì)胞癌、淋巴瘤或白血病。

在更具體的實(shí)施方式中，瘤可以是結(jié)直腸腫瘤(也被稱(chēng)為結(jié)腸腫瘤、直腸腫瘤或腸腫瘤)、前列腺腫瘤、睪丸腫瘤、皮膚腫瘤(例如黑素瘤或非黑素瘤(例如基底細(xì)胞腫瘤、鱗狀細(xì)胞腫瘤))、乳腺腫瘤、腎臟(腎)腫瘤(例如維爾姆斯腫瘤)、卵巢腫瘤、胃(胃部)腫瘤、腸道腫瘤(例如十二指腸腫瘤、回腸腫瘤、空腸腫瘤、小腸腫瘤)、肝臟(肝)腫瘤、胰腺腫瘤、肺(肺部)腫瘤、食管腫瘤、口腔腫瘤、喉腫瘤、腦瘤(例如惡性膠質(zhì)瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤)、腎上腺腫瘤(例如腎上腺皮質(zhì)腫瘤)、甲狀腺腫瘤(例如甲狀腺未分化癌)、子宮瘤(例如子宮癌肉瘤)、血液學(xué)腫瘤(還已知為血液學(xué)惡性腫瘤)(例如造血和淋巴腫瘤惡性腫瘤，例如白血病、淋巴瘤和骨髓瘤)。

在更具體的實(shí)施方式中，腫瘤可以是結(jié)直腸癌(也被稱(chēng)為結(jié)腸癌、直腸癌或腸癌)、前列腺癌、睪丸癌、皮膚癌(例如黑素瘤或非黑素瘤(例如基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌))、乳腺癌、腎臟(腎)癌(例如維爾姆斯腫瘤)、卵巢癌、胃(胃部)癌、腸道癌(例如十二指腸癌、回腸癌、空腸癌、小腸癌)、肝臟(肝)癌、胰腺癌、肺(肺部)癌、食管癌、口腔癌、喉癌、腦癌(例如惡性膠質(zhì)瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤)、腎上腺癌(例如腎上腺皮質(zhì)癌)、甲狀腺癌(例如甲狀腺未分化癌)、子宮癌(例如子宮癌肉瘤)、血液學(xué)癌癥(還已知為血液學(xué)惡性腫瘤)(例如造血和淋巴癌惡性腫瘤，例如白血病、淋巴瘤和骨髓瘤)，或在這些解剖學(xué)部位的非惡性腫瘤(例如大腸息肉、毛基質(zhì)瘤、血管瘤、骨瘤、軟骨瘤、脂肪瘤、子宮肌瘤、淋巴管瘤、橫紋肌瘤、星形細(xì)胞瘤、腦膜瘤、神經(jīng)節(jié)瘤、乳頭狀瘤、腺瘤)。

外科手術(shù)切除的方式不被限制并且因此例如，可以通過(guò)切除術(shù)或消融，例如通過(guò)機(jī)械、熱或激光方式，或電療(cauterisation)。腫瘤消融是如此過(guò)程：通過(guò)該過(guò)程腫瘤或其部分通過(guò)物理方式被破壞，并且通常地，起源于消融步驟的腫瘤的剩余部分被原位保留。因此，外科手術(shù)“切除”應(yīng)當(dāng)被依此解釋。有代表性的腫瘤消融方法包括但不限于冷凍消融術(shù)、水熱消融、電離輻射消融(體外放射療法或近距離放射療法)、輻射消融(radioablation)、超聲波消融、激光消融、微波消融和電消融。這樣的方法在癌癥療法的領(lǐng)域中被很好地實(shí)踐。

對(duì)象可以是任何人或非人對(duì)象，但是更具體地可以是人或非人脊椎動(dòng)物，例如選自哺乳動(dòng)物、鳥(niǎo)類(lèi)、兩棲類(lèi)、魚(yú)和爬行動(dòng)物的非人動(dòng)物。哺乳動(dòng)物對(duì)象是優(yōu)選的。非人動(dòng)物可以是牲畜或家畜或有商業(yè)價(jià)值的動(dòng)物，包括實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物或者動(dòng)物園或野生動(dòng)物保護(hù)區(qū)中的動(dòng)物。有代表性的非人動(dòng)物因此包括狗、貓、兔、小鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠、馬、豬、綿羊、山羊、牛、雞、火雞、珍珠雞、鴨、鵝、鸚鵡、虎皮鸚鵡、鴿子、大馬哈魚(yú)、鱷魚(yú)、羅非魚(yú)、鯰魚(yú)、鯉科魚(yú)、澳洲肺魚(yú)、鯰科魚(yú)、鯔魚(yú)、琥珀魚(yú)、黃花魚(yú)、南亞野鯪、蝦虎魚(yú)、鱈魚(yú)、黑線(xiàn)鱈、黑鱸和鯉魚(yú)。本發(fā)明的獸醫(yī)用途因而被覆蓋。對(duì)象可以被視為患者。優(yōu)選地，對(duì)象是人。

當(dāng)關(guān)于對(duì)象中的醫(yī)學(xué)病癥(例如創(chuàng)傷)或感染的治療使用時(shí)，根據(jù)本發(fā)明的“治療”在本文中被寬泛地用于包括任何治療作用，即對(duì)病癥或關(guān)于感染的任何有益作用。因而，不僅包括病癥/感染的根除或消除，或?qū)ο蟮牟“Y/感染的治愈，而且還包括對(duì)象的感染/病癥的改善。因此，例如包括感染/病癥的任何癥狀或跡象，或感染/病癥的任何臨床接受的指標(biāo)的改善(例如創(chuàng)傷大小(深度/面積)的減小、愈合時(shí)間的加速、本文描述的創(chuàng)傷作用中的一種或多種、或一般不適或創(chuàng)傷或周?chē)M織中的疼痛的降低)。因而，治療包括例如先前存在的或診斷的感染/病癥的治愈性和姑息性療法二者，即保守治療。

如本文所使用，“預(yù)防”指的是任何預(yù)防的或預(yù)防性作用。其因此包括延遲、限制、降低或阻止病癥(例如創(chuàng)傷的大小的增加，或慢性或不愈合創(chuàng)傷的發(fā)展)或感染或病癥/感染，或其一種或多種癥狀或指示的開(kāi)始，例如相對(duì)于預(yù)防性治療之前的病癥/感染或癥狀或指示。因而，預(yù)防明確地包括絕對(duì)的阻止病癥/感染，或其癥狀或指示的發(fā)生或發(fā)展，和病癥/感染或癥狀或指示的開(kāi)始或發(fā)展的任何延遲，或病癥/感染或癥狀或指示的發(fā)展或進(jìn)展的降低或限制。

具體地，如本文限定的包含微粉化esm的顆?？梢员豢醋黝A(yù)防性治療，例如阻止或至少最小化創(chuàng)傷感染的風(fēng)險(xiǎn)，或阻止或至少最小化創(chuàng)傷大小的增加或不愈合或慢性創(chuàng)傷的發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)。

在本發(fā)明中使用的包含微粉化esm的顆粒的“藥學(xué)上有效的”或“生理學(xué)上有效的”量是可測(cè)量地促進(jìn)目標(biāo)創(chuàng)傷的愈合的顆粒的量。更具體地，這可以是上面描述的對(duì)于實(shí)現(xiàn)上面描述的各種生理學(xué)作用足夠(有效)的量。

可以實(shí)現(xiàn)藥學(xué)上/生理學(xué)上有效量的在本發(fā)明中使用的包含esm的顆粒的適合劑量將根據(jù)對(duì)象的不同而改變，并且可以由醫(yī)師或獸醫(yī)師根據(jù)如下要素確定：對(duì)象的體重、年齡和性別，病癥/感染的嚴(yán)重性，施用的模式以及選擇的具體的esm顆粒。

“施加至創(chuàng)傷”意思是在本發(fā)明中使用的包含微粉化esm的顆粒不被全身地施用至對(duì)象，其著眼于使esm顆粒經(jīng)由對(duì)象的血液或淋巴循環(huán)主要地到達(dá)創(chuàng)傷，即在本發(fā)明中使用的包含微粉化esm的顆粒從不是對(duì)象的血液或淋巴循環(huán)的點(diǎn)處與創(chuàng)傷接觸。這可以被視為局部或外部施用。通常，在本發(fā)明中使用的包含微粉化esm的顆粒被直接施加至創(chuàng)傷的表面和/或內(nèi)部。

在本發(fā)明中使用的包含微粉化esm的顆?？梢砸匀魏伪憷耐庥眯问奖皇┘?施用)至創(chuàng)傷。在其最簡(jiǎn)單的形式，顆?？梢宰鳛楦煞勰┒贿M(jìn)一步配制被施加。干粉制劑可以通過(guò)噴灑粉末從而為創(chuàng)傷表面覆蓋例如0.5mm或更小的層而被施加至創(chuàng)傷表面。esm不具有固有的水分吸收能力，因此在一些實(shí)施方式中，可以有利的是將另外的創(chuàng)傷敷料——例如下面討論的類(lèi)型中的那些——放置在粉末處理的創(chuàng)傷的上面。對(duì)于其中清創(chuàng)術(shù)被指示的干創(chuàng)傷，可以有利的是利用軟的或液體/流體凝膠制劑(例如水凝膠或軟的水膠體凝膠)處理創(chuàng)傷表面，然后在凝膠的上面施加esm的干燥顆粒。

但是，本領(lǐng)域技術(shù)人員也將能夠根據(jù)在本領(lǐng)域中已知的和文獻(xiàn)中廣泛描述的任何常規(guī)方法將在本發(fā)明中使用的包含微粉化esm的顆粒配制成為適合于外部施用的藥物組合物。

在本發(fā)明中使用的esm顆?？梢匀芜x地與其它活性劑，與一種或多種常規(guī)載體、稀釋劑和/或賦形劑一起摻合以產(chǎn)生常規(guī)外用制品，比如粉末、珠、囊劑、懸浮液、乳劑、溶液、氣溶膠(作為固體或在液體介質(zhì)中)、噴霧劑(例如鼻用噴霧劑)、軟膏、藥膏、霜?jiǎng)?、糊劑、?film)、凝膠(例如水凝膠和水膠體)、泡沫等。僅僅為了指導(dǎo)，實(shí)施例5描述了水膠體esm顆粒凝膠的產(chǎn)生。這樣的凝膠將被預(yù)期為與它們被施加至的創(chuàng)傷水合，允許水清創(chuàng)術(shù)并且?guī)?lái)上面討論的esm益處。這樣的組合物適合于在干燥的壞死創(chuàng)傷中使用。實(shí)施例6到9提供了進(jìn)一步的具體實(shí)施方式。

因此，本發(fā)明還提供了例如用于上面提及的方法中的任一種或本發(fā)明的醫(yī)學(xué)治療的藥物組合物，其包括如本文限定的包含微粉化esm的顆粒連同至少一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。

適合的載體、賦形劑和稀釋劑的實(shí)例是乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯樹(shù)膠、磷酸鈣、惰性藻酸鹽、西黃蓍膠、明膠、果膠、纖連蛋白、彈性蛋白、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素(例如氧化再生纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素、羥乙基纖維素)、水糖漿、水、水/乙醇、水/乙二醇、水/聚乙烯、高滲鹽水、乙二醇、丙二醇、羥苯甲酯、羥苯丙酯、滑石、硬脂酸鎂、礦物油或脂肪物質(zhì)，比如硬脂，或其適合的混合物。組合物可以另外地包括潤(rùn)滑劑、濕潤(rùn)劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑等。單價(jià)、二價(jià)或三價(jià)金屬陽(yáng)離子藻酸鹽，具體而言藻酸鈉、鈣、鋅和銀是引人注目的。

在本發(fā)明中使用的包含微粉化esm的顆粒也可以摻入創(chuàng)傷敷料，例如編織和非編織干燥纖維(例如織物)敷料、膜基敷料、凝膠基敷料或?yàn)檫@些敷料類(lèi)型的組合的敷料。在本發(fā)明中使用的包含微粉化esm的顆?？梢栽趹?yīng)用至創(chuàng)傷之前或期間被施加至敷料，或者可以在制造期間摻入。敷料將通常采用或使用以使在使用時(shí)，在本發(fā)明中使用的包含微粉化esm的顆粒將暴露于創(chuàng)傷或創(chuàng)傷流體。

在本發(fā)明中使用的纖維敷料可以包括棉、藻酸鹽、纖維素(例如氧化再生纖維素、羧甲基纖維素、羥乙基纖維素)、纖維膠原蛋白和esm(us7767297，其通過(guò)引用并入本文)基敷料。

膜基敷料通常是對(duì)于水而言半滲透的或不滲透的和柔性的，并且可以由任何適合的塑料制品例如聚氨脂、聚氯乙烯形成。

凝膠基敷料——其包括水凝膠和水膠體凝膠——可以由大量的聚合物質(zhì)形成，包括但不限于藻酸鹽、纖維素(例如氧化再生纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素、羥乙基纖維素)、膠原蛋白、果膠、彈性蛋白、纖連蛋白。包含生物聚合物、樹(shù)膠或樹(shù)脂(例如明膠)可以有助于確保敷料輕輕地粘附至創(chuàng)傷表面。包含藻酸鹽可以增加凝膠基質(zhì)的保水性。用于創(chuàng)傷愈合的這樣的基礎(chǔ)藻酸鹽凝膠在美國(guó)專(zhuān)利6201164中描述。

凝膠基敷料可以適合于具有深腔或者可以在健康皮膚下面打開(kāi)通道(tunnel)的創(chuàng)傷。在后者創(chuàng)傷類(lèi)型中，凝膠可以被裝載入注射器，并且然后被遞送至腔以確保所有創(chuàng)傷表面被覆蓋。在使用時(shí)，可以有利的是利用第二敷料——例如纖維敷料和/或膜敷料——覆蓋凝膠基敷料以便于維持凝膠的布置和/或保持凝膠和創(chuàng)傷中的水分和/或充當(dāng)微生物的屏障。本發(fā)明的凝膠基敷料可以被設(shè)計(jì)為具有這樣的與凝膠元件一體的第二元件。

被設(shè)想為適合的進(jìn)一步的外用系統(tǒng)是原位藥物遞送系統(tǒng)，例如如此凝膠：其中固體、半固體、無(wú)定形或液晶凝膠基質(zhì)原位形成并且其可以包括在本發(fā)明中使用的包含微粉化esm的顆粒。這樣的基質(zhì)可以便利地被設(shè)計(jì)為控制顆粒從基質(zhì)的釋放，例如釋放可以延遲和/或持續(xù)選擇的時(shí)間段。這樣的系統(tǒng)僅僅在與生物學(xué)組織或流體接觸時(shí)可以形成凝膠。通常地，凝膠是生物粘附的。遞送至任何身體部位——其可以保持或適合于保持預(yù)凝膠組成——可以通過(guò)這樣的遞送系統(tǒng)靶向。這樣的系統(tǒng)在wo2005/023176中描述。

在創(chuàng)傷的管理中使用的水膠體凝膠可以被供應(yīng)為軟或流體/液體凝膠或硬和固體凝膠。硬水膠體凝膠的實(shí)例以商品名granuflex^rtm和duoderm^rtm出售。它們具有溫和的流體吸收能力和維持潮濕的創(chuàng)傷面，而不誘發(fā)對(duì)創(chuàng)傷面和周?chē)つw的浸漬作用。響應(yīng)于濕潤(rùn)，它們膨脹并保持粘性和保留吸收的流體。適合用于創(chuàng)傷的軟的或流體/液體水凝膠已經(jīng)在本領(lǐng)域中被描述，比如在美國(guó)專(zhuān)利5503847中。

在進(jìn)一步的具體實(shí)施方式中，本發(fā)明進(jìn)一步提供了創(chuàng)傷敷料，優(yōu)選地水膠體或水凝膠敷料，其包括如本文限定的包含微粉化esm的顆粒，例如在適當(dāng)時(shí)用于本發(fā)明的方法和醫(yī)學(xué)治療。

在優(yōu)選的實(shí)施方式中，選擇的載體系統(tǒng)也可以獨(dú)立于esm成分的貢獻(xiàn)加強(qiáng)創(chuàng)傷愈合過(guò)程。

在一個(gè)實(shí)例中，摻入在本發(fā)明中使用的包含微粉化esm的顆粒的功能性水膠體凝膠創(chuàng)傷敷料可以由果膠、羧甲基纖維素鈉和丙二醇制造，例如其中果膠以按重量計(jì)0.05％和1％存在，cmc以按重量計(jì)2％和4.5％存在，丙二醇以按重量計(jì)15-20％存在和esm顆粒以按重量計(jì)0.5％和10％存在，其中水構(gòu)成剩余部分至按重量計(jì)100％。在該實(shí)施方式中，制劑另外地能夠清洗和清除創(chuàng)傷并且吸收適度量的滲出液。這些功能增加了包含微粉化esm的顆粒的活性，該活性被認(rèn)為結(jié)合和轉(zhuǎn)移(deflect)來(lái)自創(chuàng)傷面破壞的蛋白酶，并且充當(dāng)支架以使得通過(guò)創(chuàng)傷面的細(xì)胞附著和遷移。該水膠體制劑理想地適合于具有深腔或者可以在健康皮膚下面打開(kāi)通道的創(chuàng)傷。在后者創(chuàng)傷類(lèi)型中，凝膠可以被裝載入注射器，并且然后被遞送至腔以確保所有創(chuàng)傷表面被覆蓋。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，在本發(fā)明中使用的包含微粉化esm的顆?？梢栽诨旧霞兊乃?羥乙基纖維素水凝膠中配制。這樣的制劑可以通過(guò)利用攪動(dòng)或攪拌將hec溶解在水中并且在所述水性hec溶液內(nèi)分散esm來(lái)制備。esm-hec水凝膠然后可以被包裝入方便的受器，例如包裝入管，并且然后充滿(mǎn)的受器可以利用γ輻射滅菌，例如在25kgy下。

固體或硬凝膠水膠體也可以被制造，其摻入半滲透的背襯片，該背襯片可以充當(dāng)無(wú)菌屏障以及在創(chuàng)傷表面內(nèi)的水分的管理中起作用。這樣的固體材料可以摻入聚合物或樹(shù)膠或樹(shù)脂或明膠以確保敷料輕輕地粘附至創(chuàng)傷表面。這樣的產(chǎn)品將適合于治療輕度至中度滲出非腔創(chuàng)傷。這樣的敷料將不需要第二敷料來(lái)保持它們就位或來(lái)提供抗微生物屏障。

任選地，水膠體凝膠可以包含藻酸鹽來(lái)增加基礎(chǔ)基質(zhì)凝膠的保水性。這在具有中度至高度滲出液的創(chuàng)傷中將是優(yōu)選的。這樣的基礎(chǔ)藻酸鹽凝膠在us6201164中描述。

從上述清楚的是，藻酸鹽基創(chuàng)傷敷料，例如纖維的或凝膠、干燥的、基本上干燥的或濕潤(rùn)的，是在本發(fā)明中使用的包含微粉化esm的顆粒的值得注意的遞送系統(tǒng)。藻酸鹽基敷料代表靈活的和適合的技術(shù)，其可以允許esm顆粒以許多不同的方式和格式被遞送至創(chuàng)傷。特別要注意的是esm藻酸鹽復(fù)合材料敷料由所述復(fù)合材料混合物制造或原位形成，在該esm藻酸鹽復(fù)合材料敷料中在本發(fā)明中使用的esm顆粒與藻酸鹽和創(chuàng)傷敷料或其成分組合。這樣的敷料在具有高滲出液的創(chuàng)傷的管理中是特別有用的。復(fù)合材料敷料維持創(chuàng)傷面中的有利的水分水平，吸收過(guò)多的滲出液同時(shí)促進(jìn)esm與再生組織接觸。這樣的敷料或包含其成分的esm藻酸鹽復(fù)合材料可以以能夠吸收創(chuàng)傷流體的干燥、基本上干燥或濕潤(rùn)形式提供。

因?yàn)樵逅猁}在足夠量的二價(jià)或三價(jià)金屬陽(yáng)離子(例如ca²⁺、be²⁺、mg²⁺、sr²⁺、ba²⁺、fe²⁺、fe³⁺、al³⁺或zn²⁺)的存在下具有形成交聯(lián)凝膠的能力，但是在不存在足夠量的二價(jià)或三價(jià)金屬陽(yáng)離子或存在單價(jià)金屬陽(yáng)離子(例如na⁺、li⁺、k⁺、rb⁺或cs⁺)的情況下，盡管具有高的保水性和形成非交聯(lián)凝膠的能力，藻酸鹽在水溶液中是基本可溶的，因此使得esm藻酸鹽復(fù)合材料敷料成為可能。最簡(jiǎn)單的來(lái)講，esm可以與流體藻酸鹽溶液混合，并且然后交聯(lián)或沉淀可以隨后例如在創(chuàng)傷自身中在創(chuàng)傷中與ca²⁺接觸后開(kāi)始。

二價(jià)或三價(jià)金屬離子藻酸鹽凝膠具有改變的物質(zhì)性質(zhì)，其尤其通過(guò)物質(zhì)的水分吸收能力來(lái)確定，其又通過(guò)二價(jià)或三價(jià)金屬離子置換的程度來(lái)確定。因而，通過(guò)改變?cè)诎逅猁}的混合物中二價(jià)或三價(jià)與單價(jià)金屬離子(例如ca²⁺和na⁺)的比率，可以制備大量的具有寬范圍的性質(zhì)的凝膠。通過(guò)在使用之前去除來(lái)自這樣的凝膠的水分，可以制備在使用時(shí)具有顯著水分吸收能力的干燥形式，包括纖維。有利地，吸收性藻酸鹽敷料可以基于二價(jià)或三價(jià)金屬離子藻酸鹽和單價(jià)金屬離子藻酸鹽的混合物。二價(jià)或三價(jià)金屬離子藻酸鹽有助于敷料的結(jié)構(gòu)增強(qiáng)，并且單價(jià)金屬離子藻酸鹽促進(jìn)吸收。平衡必須被達(dá)成，因?yàn)檫^(guò)量的二價(jià)或三價(jià)金屬離子藻酸鹽將導(dǎo)致敷料不能通過(guò)在創(chuàng)傷部位處發(fā)現(xiàn)的生理學(xué)溶液返回至靈活的凝膠形式，這是由于沒(méi)有抵消(counter)物質(zhì)中二價(jià)或三價(jià)金屬離子的濃度的能力。過(guò)量的單價(jià)金屬離子藻酸鹽將導(dǎo)致降低的強(qiáng)度和較差的處理性質(zhì)，特別是纖維品質(zhì)。然而，單價(jià)金屬離子藻酸鹽和esm顆粒的復(fù)合材料混合物可以證明是有用的，因?yàn)楸┞吨羉a²⁺可以發(fā)生在原位并且因此導(dǎo)致原位交聯(lián)的凝膠形成，即原位敷料的形成。

如實(shí)施例6到9中描述的，將在本發(fā)明中使用的esm顆粒加入到單價(jià)金屬離子藻酸鹽(藻酸鈉)的溶液和所述混合物與ca²⁺溶液(cacl2)或來(lái)自創(chuàng)傷自身的ca²⁺的隨后的凝膠化可以形成esm-藻酸鹽復(fù)合材料敷料的基礎(chǔ)，例如以顆粒劑、凝膠墊和纖維的形式。這樣的形式可以被干燥以降低水分含量，從而增強(qiáng)使用時(shí)的吸水性和貯存壽命并促進(jìn)運(yùn)輸和儲(chǔ)存。許多其它結(jié)構(gòu)形式對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將是顯而易見(jiàn)的并且可以在沒(méi)有過(guò)度負(fù)擔(dān)的情況下制備，例如粉末可以通過(guò)噴霧干燥或者將esm顆粒和單價(jià)金屬離子藻酸鹽的溶液噴射入二價(jià)或三價(jià)金屬離子溶液而形成。藻酸鹽纖維的制品的綜述是qin,y.，2008，polymerinternational，57:171-180，其內(nèi)容通過(guò)引用被并入本文。在本發(fā)明中使用的esm顆粒因此可以包含在鈣、鈉、鈣-鈉、鋅和銀的藻酸鹽以及藻酸纖維中，例如，如qin中描述的。

因而，在進(jìn)一步具體實(shí)施方式中，本發(fā)明進(jìn)一步提供了創(chuàng)傷敷料或其結(jié)構(gòu)成分，其包括(或由其形成)如本文限定的包含微粉化esm的顆粒與藻酸鹽的復(fù)合材料混合物。在適合的時(shí)候，敷料可以被提供用于本發(fā)明的方法和醫(yī)學(xué)治療。

提及藻酸鹽包括藻酸，除非上下文指示另外的方面。敷料的藻酸鹽可以是藻酸、二價(jià)金屬離子藻酸鹽、三價(jià)金屬離子藻酸鹽和/或單價(jià)金屬離子藻酸鹽，例如上面敘述的那些，具體而言分別為ca²⁺和/或na⁺藻酸鹽。優(yōu)選地，如本文限定的包含微粉化esm的顆粒與創(chuàng)傷敷料的藻酸鹽的復(fù)合材料混合物是凝膠，例如交聯(lián)凝膠，包括由這樣的凝膠形成的纖維、墊、顆粒劑和粉末。藻酸鹽將通常是例如至少35kda的聚合物，或者許多不同大小的聚合物，但是更小的低聚物可以被使用以代替所述聚合物或者與所述聚合物組合。

如本文限定的包含微粉化esm的顆粒與創(chuàng)傷敷料的藻酸鹽的復(fù)合材料混合物可以是干燥的(少于按重量計(jì)2％水分，如通過(guò)干燥失重測(cè)試方法測(cè)量的)、基本上干燥的(少于按重量計(jì)5％水分)或濕潤(rùn)的(多于按重量計(jì)5％水分)。

如本文限定的包含微粉化esm的顆粒與創(chuàng)傷敷料的藻酸鹽的復(fù)合材料混合物可以可選地為粉末、顆粒劑、大規(guī)模固體支持體(support)(例如墊或海綿)或纖維的形式。創(chuàng)傷敷料可以基本上由所述粉末、顆粒劑、大規(guī)模固體支持體或纖維的一種或多種組成。在其它實(shí)施方式中，創(chuàng)傷敷料可以包括至少第二結(jié)構(gòu)成分，例如在膜-、纖維-或凝膠-基敷料的背景下由上面描述的膜、纖維或凝膠形成的結(jié)構(gòu)成分。不可滲透的背襯可以是值得注意的。

另外的凝膠流變學(xué)改性材料，例如羧甲基纖維素、羥乙基纖維素、甲基纖維素或果膠可以被摻入復(fù)合材料混合物，例如以進(jìn)一步改變復(fù)合材料的保水性和/或復(fù)合材料的機(jī)械性質(zhì)。

在本發(fā)明中使用的包含微粉化esm的顆粒也可以被摻入植入式醫(yī)療裝置中或者被摻入至其上，并且因而應(yīng)用至創(chuàng)傷也可以以這種方式實(shí)現(xiàn)。這樣的醫(yī)療裝置可以是本文描述的那些，包括但不限于任何種類(lèi)的經(jīng)皮裝置和/或?qū)е聞?chuàng)傷的線(xiàn)(例如，中心靜脈導(dǎo)管，具體而言具有套箍的導(dǎo)管，例如滌綸或膠原蛋白套箍)，假肢裝置例如心臟瓣膜、人工關(guān)節(jié)、種植牙和人工軟組織植入物(例如胸部、臀部和唇部植入物)，支架、起搏器和氣管造口管。

導(dǎo)管例如血液透析導(dǎo)管的臨床有用性被限制，其中這些被感染(wayne等，2005；jamsocnephrol16:1453-1462)。出口部位可以用抗生素處理以降低細(xì)菌生長(zhǎng)，但是這樣的用途通常與抗生素抗性的發(fā)展相關(guān)聯(lián)。在許多情況下，一旦出口部位被慢性感染，導(dǎo)管必須被移除。例如，如本文限定的包含微粉化esm的顆粒，通過(guò)促進(jìn)創(chuàng)傷修復(fù)和出口部位周?chē)慕M織生長(zhǎng)以及抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，將延長(zhǎng)導(dǎo)管的無(wú)感染的有用臨床壽命。已經(jīng)涂覆有如本文限定的包含微粉化esm的顆粒的導(dǎo)管外部上的組織向內(nèi)生長(zhǎng)將有效地密封潛在感染通過(guò)出口部位的路徑。

因而，在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了植入式醫(yī)療裝置，其易感染的表面或其部分，例如經(jīng)皮套箍已經(jīng)利用如本文限定的包含微粉化esm的顆粒預(yù)處理。

“預(yù)處理”的意思是易感染的表面在植入對(duì)象中之前暴露于如本文限定的包含微粉化esm的顆粒，以如此方式：顆粒存留在表面上足以促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的持續(xù)時(shí)間或本文描述的任何效果或創(chuàng)傷效果持續(xù)顯著的持續(xù)時(shí)間。優(yōu)選地，顆粒將存留基本上持續(xù)表面的有用壽命，例如預(yù)處理導(dǎo)致如本文限定的包含微粉化esm的顆粒的基本上永久涂層。因此，預(yù)處理的表面/裝置是如本文限定的包含微粉化esm的顆粒被施加至其并且所述顆粒保留在其上的表面/裝置。這樣的裝置/表面可以是涂覆的和/或浸漬的裝置/表面。優(yōu)選地，涂層將包括許多即至少兩層esm顆粒。

預(yù)處理可以通過(guò)任何便利的方式實(shí)現(xiàn)，例如如下的任何形式：將如本文限定的包含微粉化esm的顆粒施加至表面，顯著地涂覆表面，例如噴霧干燥，用包含如本文限定的包含微粉化esm的顆粒的聚合物進(jìn)行聚合物涂覆，或在表面上布置硬水凝膠或水膠體。涂覆可以就在植入之前或期間發(fā)生。這樣的包含如本文限定的包含微粉化esm的顆粒的“涂層”組合物是本發(fā)明的進(jìn)一步方面?？蛇x地，如本文限定的包含微粉化esm的顆粒可以被摻入或者浸漬入裝置或其易感染的部分由其制造的材料。該途徑適合于由聚合物比如塑料制品和聚硅氧烷制造的裝置或其組成部分。包括無(wú)生命表面的植入式醫(yī)療裝置因此被考慮，該無(wú)生命表面包括包含微粉化esm的顆粒涂層或涂層組合物，或者摻入如本文限定的包含微粉化esm的顆?；蛴闷浣n。

本發(fā)明還提供了如本文限定的包含微粉化esm的顆粒用于制備或制造包括如本文限定的包含微粉化esm的顆粒的組合物、創(chuàng)傷敷料或者植入式裝置的用途。

根據(jù)本發(fā)明提出使用的包含微粉化esm的顆粒可以與其它治療劑組合使用，例如一起被施用，以單一藥物制劑或組合物或敷料或裝置(例如本文描述的那些)，或單獨(dú)地(即用于單獨(dú)、連續(xù)或同時(shí)施用)。因此在本發(fā)明中使用的包含微粉化esm的顆粒可以與第二(或進(jìn)一步)治療活性劑組合，例如在藥物試劑盒中或者作為組合的(“組合”)產(chǎn)品。進(jìn)一步的治療劑可以通過(guò)任何便利的方式被施用，并且因此未必通過(guò)外部方式，例如腸胃外或腸內(nèi)(例如口服、靜脈內(nèi)或通過(guò)吸入)。藥劑可以單獨(dú)地被使用，或者在相同的組合物或敷料或裝置中同時(shí)或順序地或單獨(dú)地——例如在任何期望的時(shí)間間隔下——一起被使用。

在本發(fā)明的一個(gè)有利實(shí)施方式中，如本文限定的包含微粉化esm的顆?？梢栽诒景l(fā)明的方法中與第二或進(jìn)一步臨床有用的抗微生物劑(在下文中稱(chēng)為“進(jìn)一步的抗微生物劑”)結(jié)合或組合使用。藥劑可以被單獨(dú)地使用，或者在相同的組合物或敷料或裝置中同時(shí)或順序地或單獨(dú)地——例如在任何期望的時(shí)間間隔下——一起被使用。

因此，作為代表性實(shí)例，進(jìn)一步的抗微生物劑可以在顆粒被施加至創(chuàng)傷之后使用，但是在前或同時(shí)使用在一些情況下可以是有利的。

代表性的抗生素包括但不限于氨基糖苷類(lèi)(例如阿米卡星、慶大霉素、卡那霉素、新霉素、奈替米星、鏈霉素、妥布霉素)；碳頭孢烯類(lèi)(carbecephems)(例如氯碳頭孢)；第1代頭孢菌素類(lèi)(例如頭孢羥氨芐、頭孢唑林、頭孢氨芐)；第2代頭孢菌素類(lèi)(例如頭孢克洛、頭孢羥唑、頭孢氨芐、頭孢西丁、頭孢羅齊、頭孢呋辛)；第3代頭孢菌素類(lèi)(例如頭孢克肟、頭孢地尼、頭孢妥侖、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢泊肟、頭孢他啶、頭孢布烯、頭孢唑肟、頭孢曲松)；第4代頭孢菌素類(lèi)(例如頭孢吡肟)；大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)(例如阿奇霉素、克拉霉素、地紅霉素、紅霉素、醋竹桃霉素)；單環(huán)內(nèi)酰胺類(lèi)(例如氨曲南)；青霉素類(lèi)(例如阿莫西林、氨芐青霉素、羧芐青霉素、鄰氯青霉素、雙氯青霉素、乙氧萘青霉素、苯唑西林、青霉素g、青霉素v、哌拉西林、鐵卡霉素)；多肽類(lèi)抗生素(例如桿菌肽、多粘菌素e、多粘菌素b)；喹諾酮類(lèi)(例如環(huán)丙沙星、依諾沙星、加替沙星、左氧氟沙星、洛美沙星、莫西沙星、諾氟沙星、氧氟沙星、曲伐沙星)；磺胺類(lèi)藥物(例如磺胺米隆、磺胺醋酰、磺胺甲噻二唑、柳氮磺胺吡啶、磺胺二甲基異噁唑、甲氧芐胺嘧啶-磺胺二甲基異噁唑)；四環(huán)素類(lèi)(例如地美環(huán)素、強(qiáng)力霉素、二甲胺四環(huán)素、氧四環(huán)素、四環(huán)素)；碳青霉烯類(lèi)(例如亞胺培南、美羅培南、厄他培南、多利培南、帕尼培南/倍他米隆、比阿培南、pz-601)；氯霉素；克林霉素；乙胺丁醇；磷霉素；異煙肼；利奈唑胺；甲硝唑；呋喃妥因；吡嗪酰胺；奎奴普丁/達(dá)福普汀；利福平；大觀霉素；和萬(wàn)古霉素。

有代表性的防腐劑包括但不限于氯漂白劑(次氯酸鈉)、季銨化合物(例如苯扎氯銨、溴化十六烷基三甲銨、氯化十六烷基吡啶)、過(guò)氧化氫、酚類(lèi)化合物(例如tcp三氯生)、醇類(lèi)(例如乙醇)、virkon^tm、碘化合物(例如聚乙烯吡咯酮碘)、銀化合物(例如單質(zhì)銀納米/微米顆粒)。

抗微生物表面活性劑是另一種類(lèi)的防腐劑。這些是如此化合物：其破壞微生物細(xì)胞膜和其它結(jié)構(gòu)成分，并且因此抑制微生物的生長(zhǎng)和/或生存力。抗微生物表面活性劑和它們?cè)诳刮⑸锝M合物中的用途在本領(lǐng)域中是公知的，如果需要進(jìn)一步的指導(dǎo)，“preservative-freeandself-preservingcosmeticsanddrugs-principlesandpractice”，ed.kabara和orth,marceldekker，紐約，1997中抗微生物表面活性劑的討論被明確地以其全部通過(guò)引用并入?？刮⑸锉砻婊钚詣┛梢允顷庪x子的、陽(yáng)離子的、非離子的或兩性的?？刮⑸镪庪x子表面活性劑的實(shí)例包括但不限于十二烷基硫酸鈉(硫酸月桂酯鈉)、十二烷基丙氨酸、蓖麻油酸鈉、膽汁酸、烷芳基磺酸鈉、grillosands7911、十一碳烯酸二鈉(disodiumundecylenicacid)、單乙醇氨基磺基琥珀酸酯。抗微生物陽(yáng)離子表面活性劑的實(shí)例包括但不限于季銨化合物、胺化酰亞胺和洗必泰化合物。抗微生物非離子表面活性劑的實(shí)例包括但不限于脂肪酸的單酯、烷基二羥基苯甲酸的聚乙二醇單酯(polyethyleneglycomonoester)、氨基葡萄糖衍生物和n-月桂酰二肽的二乙醇酰胺?？刮⑸飪尚员砻婊钚詣┑膶?shí)例包括但不限于烷基甜菜堿、烷基氨基丙基甜菜堿、烷基氨基丙酸酯、烷基亞氨基二丙酸酯和烷基咪唑啉。

有代表性的抗真菌劑包括但不限于多烯類(lèi)(例如游霉素、龜裂霉素、菲律賓霉素、制霉菌素、兩性霉素b、坎底辛)；咪唑類(lèi)(例如咪康唑、酮康唑、克霉唑、益康唑、聯(lián)苯芐唑、布康唑、芬替康唑、益康唑、奧昔康唑、舍他康唑、硫康唑、噻康唑)；三唑類(lèi)(例如氟康唑、伊曲康唑、艾沙康唑、拉夫康唑、泊沙康唑、伏立康唑、特康唑)；烯丙胺類(lèi)(例如特比康唑、阿莫羅芬、萘替芬、布替萘芬)；和棘白菌素類(lèi)(例如阿尼芬凈、卡泊芬凈、米卡芬凈)。

有代表性的抗病毒劑包括但不限于阿巴卡韋、阿昔洛韋、阿德福韋、金剛烷胺、安瑞那韋、阿比朵爾、阿扎那韋、立普妥、博賽潑維、西多福韋、雙汰芝、地瑞那韋、地拉夫定、雙脫氧胞甙、二十二醇、依度尿苷、依法韋侖、恩曲他濱、恩夫韋地、恩替卡韋、泛昔洛韋、福米韋生、福沙那韋、膦甲酸鈉(foscarnet)、膦乙酸鈉(fosfonet)、更昔洛韋、伊巴他濱、imunovir、皰疹凈、咪喹莫特、茚地那韋、肌苷、iii型干擾素、ii型干擾素、i型干擾素、拉米夫定、洛匹那韋、洛韋胺、馬拉維若、嗎啉胍、奈非那韋、奈韋拉平、nexavir、奧司他韋、噴昔洛韋、帕拉米韋、普來(lái)可那立、足葉草毒素、雷特格韋、病毒唑、金剛烷乙胺、利托那韋、沙奎那韋、司他夫定、替諾福韋(tenofovir)、替諾福韋酯(tenofovirdisoproxil)、替拉那韋、三氟尿苷、三協(xié)唯、曲金剛胺、特魯瓦達(dá)(truvada)、伐昔洛韋、纈更昔洛韋、vicriviroc、阿糖腺苷、塔利韋林、扎西他濱、扎那米韋和齊多夫定。

進(jìn)一步的抗微生物劑可以便利地在本發(fā)明中使用的包含微粉化esm的顆粒之前、同時(shí)或之后被應(yīng)用。便利地，進(jìn)一步的抗微生物劑基本上以與esm顆粒同時(shí)或在其后被應(yīng)用。例如，進(jìn)一步的抗微生物劑在esm顆粒被施用之后至少1小時(shí)、優(yōu)選地至少3小時(shí)、并且更優(yōu)選地至少5小時(shí)和最優(yōu)選地至少6小時(shí)時(shí)被應(yīng)用。在其它實(shí)施方式中，進(jìn)一步的抗微生物劑便利地在esm顆粒之前被應(yīng)用或被施用，例如在esm顆粒之前至少1小時(shí)、至少3小時(shí)、至少6小時(shí)。在這些實(shí)施方式中，esm顆粒可以在進(jìn)一步應(yīng)用或不進(jìn)一步應(yīng)用進(jìn)一步的抗微生物劑的情況下被應(yīng)用或被施用。為了優(yōu)化進(jìn)一步的抗微生物劑的抗微生物作用，其可以在適合于藥劑使用的時(shí)間點(diǎn)時(shí)被重復(fù)地給予(例如施用或遞送)。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠設(shè)計(jì)適合的劑量或使用方案。在長(zhǎng)期治療中，esm顆粒也可以被重復(fù)使用。這可以是與進(jìn)一步的抗微生物劑一樣頻繁，但是可以是不頻繁的。需要的頻率將取決于菌落組成、使用的抗微生物劑和其施用途徑，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠優(yōu)化劑量或使用模式以?xún)?yōu)化結(jié)果。

本文限定的包含微粉化esm的顆粒與生長(zhǎng)因子——例如，pdgf、fgf、egf、tgf、hgf——組合或結(jié)合使用也可以是有利的。適合的治療方案可以如在使用進(jìn)一步的抗微生物劑的背景下描述的。

本文限定的包含微粉化esm的顆粒與抗炎劑——例如，抗炎類(lèi)固醇或nasid——組合或結(jié)合使用可以是有利的。代表性的nasid包括但不限于水楊酸鹽類(lèi)(例如阿司匹林(乙酰水楊酸))、三水楊酸膽堿鎂、二氟尼柳、水楊酰水楊酸、丙酸衍生物(例如布洛芬、右旋布洛芬、右旋酮洛芬、非諾洛芬、氟比洛芬、酮洛芬、氯索洛芬、萘普生、奧沙普秦)、乙酸衍生物(例如醋氯芬酸、雙氯芬酸、依托度酸、消炎痛、酮咯酸、納布美通、甲苯酰吡啶乙酸、舒林酸)、烯酸衍生物(例如屈昔康、伊索昔康、氯諾昔康、美洛昔康、吡羅昔康、替諾昔康)、氨茴酸衍生物(例如氟滅酸、甲氯滅酸、甲滅酸、托滅酸)和選擇性cox-2抑制劑(昔布類(lèi)；例如塞來(lái)昔布、依托昔布、羅美昔布、帕瑞昔布、羅非昔布、伐地昔布)。丙酸衍生物(例如布洛芬、右旋布洛芬、右旋酮洛芬、非諾洛芬、氟比洛芬、酮洛芬、氯索洛芬、萘普生、奧沙普秦)是優(yōu)選的，布洛芬是最優(yōu)選的。適合的治療方案可以如在使用進(jìn)一步的抗微生物劑的背景下描述的。

附圖說(shuō)明

將參照下面的非限制性實(shí)施例進(jìn)行進(jìn)一步描述本發(fā)明，其中：

圖1顯示了在存在或不存在esm顆粒(0.003g或0.01g加入的esm顆粒)——其具有100μm的中值粒徑——的情況下大腸桿菌的細(xì)菌生長(zhǎng)曲線(xiàn)。下面的兩條跡線(xiàn)是加入esm的。

圖2顯示了具有小于100μm的中值粒徑的esm顆粒對(duì)于如通過(guò)nf-kb活性測(cè)量的包含nf-kb控制的熒光素酶報(bào)告基因構(gòu)建體的u937人單核細(xì)胞對(duì)lps的炎癥反應(yīng)的作用。對(duì)照＝不加入esm。非lps：左邊的柱；lps：右邊的柱。

圖3顯示了具有小于100μm的中值粒徑的esm顆粒對(duì)于重組體mmp-9的活性的作用。無(wú)mmp9：左邊的柱；有mmp9：右邊的柱。

圖4顯示了在與用于產(chǎn)生圖3中顯示的結(jié)果相同的分析中，mmp抑制劑gm6001對(duì)mmp-9活性的作用。

圖5顯示了在旋轉(zhuǎn)葉片攪拌器中粉碎干燥的esm薄片形成的esm纖維，所述干燥的esm薄片已經(jīng)通過(guò)如下步驟制備：從非esm蛋成分分離esm，如在2015/058790(pct/ep2013/072049)中和上面描述的，利用0.1％鹽酸洗滌如此獲得的esm薄片，從而去除esm薄片中任何殘留的碳酸鈣，和干燥esm薄片。

圖6顯示了esm顆粒的四種不同的制劑對(duì)db/db糖尿病小鼠中全層切除創(chuàng)傷的閉合(closure)的作用，如通過(guò)治療后剩余的百分比創(chuàng)傷面積測(cè)量的。四種esm制劑在實(shí)施例10中描述。來(lái)自這些治療的數(shù)據(jù)被繪制曲線(xiàn)，針對(duì)來(lái)自‘未治療’組(陰性對(duì)照)和陽(yáng)性組(用在0.5％hpmc(羥丙基甲基纖維素)中的血小板源生長(zhǎng)因子-bb(rh-pdgf-bb[10μg])和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α(rh-tgf-α[1μg])治療)的那些。

圖7顯示了來(lái)自圖6的陰性和陽(yáng)性對(duì)照的數(shù)據(jù)。

圖8顯示了來(lái)自圖6的陰性和陽(yáng)性對(duì)照以及esm-30的數(shù)據(jù)。

圖9顯示了來(lái)自圖6的陰性和陽(yáng)性對(duì)照以及esm-10的數(shù)據(jù)。

圖10顯示了來(lái)自圖6的陰性和陽(yáng)性對(duì)照以及esm-3的數(shù)據(jù)。

圖11顯示了來(lái)自圖6的陰性和陽(yáng)性對(duì)照以及esm-1的數(shù)據(jù)。

圖12顯示了具有不同中值粒徑的相同質(zhì)量的esm顆粒對(duì)于如通過(guò)nf-kb活性測(cè)量的包含nf-kb控制的熒光素酶報(bào)告基因構(gòu)建體的u937人單核細(xì)胞對(duì)lps的炎癥反應(yīng)的作用。未治療的：esm片段大于1mm；a&b：磨碎的esm顆粒的大小小于250μm；c：磨碎的esm顆粒的大小小于120μm；d：磨碎的esm顆粒的大小小于80μ。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

esm的抗菌活性

介紹

esm顆粒(中值粒徑100μm)的抗菌活性通過(guò)在自動(dòng)化生長(zhǎng)曲線(xiàn)分析儀(bioscreenc)系統(tǒng)中測(cè)定利用/不利用esm顆粒培育的細(xì)菌培養(yǎng)的生長(zhǎng)曲線(xiàn)來(lái)測(cè)試。

材料和方法

大腸桿菌在37℃下在bhi瓊脂(腦心浸液瓊脂)上培育24小時(shí)，大腸桿菌的接種物通過(guò)取自瓊脂板的一個(gè)菌落并將其重新懸浮在5ml的bhi肉湯中制備。隨后，將10μl的接種物接種在350μl的bhi肉湯中并在蜂窩狀微板中平板培養(yǎng)。不含大腸桿菌的接種物的無(wú)菌的bhi肉湯被用作對(duì)照。

在自動(dòng)化生長(zhǎng)曲線(xiàn)分析儀系統(tǒng)中不含esm顆粒的第一培育在37℃下進(jìn)行24小時(shí)，同時(shí)在每次測(cè)量od600(光密度)之前振蕩。在24小時(shí)的自動(dòng)化培育之后，將esm顆粒(0.003g和0.01g)加入至大腸桿菌的樣本和無(wú)菌肉湯。含有/不含有esm顆粒的無(wú)菌bhi肉湯被用作對(duì)照。

結(jié)果和結(jié)論

在40小時(shí)內(nèi)，加入0.003g或0.01g的esm顆粒之后的生長(zhǎng)曲線(xiàn)與沒(méi)有esm顆粒的樣本相同，并且其后顯著降低，同時(shí)沒(méi)有esm顆粒的樣本顯示增加。結(jié)果表明esm顆粒抑制大腸桿菌生長(zhǎng)的生存力和/或生長(zhǎng)(圖1)。

實(shí)施例2

esm的抗炎作用

介紹

轉(zhuǎn)錄因子nf-kb在應(yīng)激和炎癥反應(yīng)中起著重要作用。u9373xnf-kb-luc細(xì)胞系統(tǒng)——穩(wěn)定地用3xnf-kb-熒光素酶報(bào)告基因構(gòu)建體轉(zhuǎn)染的人單核細(xì)胞細(xì)胞系(u937)——被用于通過(guò)nf-kb表達(dá)的方式調(diào)查esm顆粒(中值粒徑100μm)對(duì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的潛在生物活性。

材料和方法

將非附著u9373xnf-kb-luc細(xì)胞接種在96孔滴定板中的dmem培養(yǎng)基(sigma)中并在37℃和5％co2下培養(yǎng)。不同濃度(0mg/ml、0.5和1mg/ml)的esm顆粒的抗炎作用通過(guò)孵育30min測(cè)試，然后lps處理(1.0μg/ml)5小時(shí)以誘發(fā)抗炎作用(與熒光素酶活性成比例)。在孵育結(jié)束時(shí)，熒光素酶活性通過(guò)使用bright-glo熒光素酶分析(promega)來(lái)測(cè)量。在該分析中，響應(yīng)于lps暴露的熒光素酶活性越低，抗炎作用越高。

結(jié)果和結(jié)論

lps誘發(fā)的炎癥反應(yīng)通過(guò)esm顆粒以劑量依賴(lài)性方式降低，這表明抗炎作用。圖2顯示了在1mg/ml濃度下的esm顆粒的作用。

實(shí)施例3

mmp調(diào)節(jié)作用

介紹

基質(zhì)金屬蛋白酶(mmp)是能夠消化細(xì)胞外基質(zhì)成分的分泌或膜相關(guān)蛋白的家族。esm顆粒(中值粒徑100μm)對(duì)mmp-9活性的作用通過(guò)使用通用mmp分析試劑盒“fluoremetric”(anaspec)來(lái)測(cè)試。通過(guò)該分析試劑盒，通過(guò)使用重組體mmp篩選mmp的誘導(dǎo)物或抑制劑是可能的。

材料和方法

sensolyte^rtm通用mmp分析試劑盒使用5-fam(熒光團(tuán))和qxl520^tm(猝滅劑)標(biāo)記的fret肽基底用于連續(xù)的測(cè)量酶活性。在完整的fret肽中，5-fam的熒光通過(guò)sensolyte^rtm猝滅。在通過(guò)mmp裂解fret肽之后，5-fam的熒光恢復(fù)，并且可以在激發(fā)/發(fā)射＝490nm/520nm下連續(xù)地監(jiān)測(cè)。

將不同量的esm顆粒加入至重組體mmp-9(anaspec)，并且酶活性根據(jù)制造過(guò)程測(cè)量。此外，gm6001——mmp活性的一般抑制劑——被用作陽(yáng)性對(duì)照用于在體外系統(tǒng)中抑制。

結(jié)果和結(jié)論

重組體mmp-9的活性通過(guò)加入esm顆粒降低，這表明esm顆粒對(duì)mmp活性的負(fù)向作用(圖3)。

實(shí)施例4

制備用于應(yīng)用至創(chuàng)傷的微粉化esm顆粒

在純化和研磨之后，esm是低內(nèi)毒素和低生物負(fù)載材料，適合于向前(onward)加工為醫(yī)療裝置。干粉制劑通過(guò)在1g囊——例如由鋁箔或tyvec材料制作——中包裝純化的esm材料來(lái)制造。密封的囊然后通過(guò)γ輻射(通常地25kgy)滅菌。

干粉制劑可以通過(guò)噴灑粉末被應(yīng)用至創(chuàng)傷表面從而為創(chuàng)傷表面覆蓋0.5mm或更小的層。esm不具有固有的水分吸收能力，因此另外的創(chuàng)傷敷料比如水膠體、藻酸鹽或纖維敷料應(yīng)當(dāng)被置于涂有敷料的(dressed)創(chuàng)傷的上面。同樣，對(duì)于其中清創(chuàng)術(shù)被指示的干燥創(chuàng)傷，創(chuàng)傷表面應(yīng)當(dāng)首先用水凝膠制劑處理，然后將干粉末esm噴灑在水凝膠的上面。

在處理期間和敷料改變時(shí)，esm產(chǎn)品可以通過(guò)用鹽水溶液或其它生理學(xué)溶液容易地從創(chuàng)傷洗掉。這在敷料改變期間可能需要或者以檢查創(chuàng)傷的愈合狀態(tài)的感染。

最佳地，esm處理的創(chuàng)傷用第二敷料覆蓋以維持esm就位并且促進(jìn)組織在生長(zhǎng)的濕潤(rùn)環(huán)境。在高滲出液創(chuàng)傷中，將優(yōu)選的是用高容量敷料比如親水性纖維敷料(hydrofibredressing)例如aquacel覆蓋創(chuàng)傷。

實(shí)施例5

水膠體esm顆粒凝膠的生產(chǎn)和應(yīng)用

水膠體凝膠在創(chuàng)傷的管理中使用并且可以被供應(yīng)為軟或水性凝膠或硬和固體凝膠。硬水凝膠以商品名granuflex和duoderm出售。它們具有溫和的流體吸收能力和維持潮濕的創(chuàng)傷面，而不誘發(fā)對(duì)創(chuàng)傷面和周?chē)つw的浸漬作用。響應(yīng)于濕潤(rùn)，它們膨脹并保持粘性和保留吸收的流體。軟或水性水凝膠已經(jīng)在本領(lǐng)域中比如在us5503847中被描述。

摻入esm的功能性水凝膠可以由果膠、羧甲基纖維素鈉和丙二醇制造。在該實(shí)施例中，果膠的濃度在0.05％和1％之間，cmc的濃度在2％和4.5％之間，丙二醇的濃度在15-20％之間，并且esm的濃度在0.5％和10％之間。水構(gòu)成剩余部分至按重量計(jì)100％。在該實(shí)施方式中，制劑另外地能夠清洗和清除創(chuàng)傷并吸收適度量的滲出液。這些功能增加了esm的活性，該esm結(jié)合和/或轉(zhuǎn)向(deflect)來(lái)自創(chuàng)傷面破壞的蛋白酶并充當(dāng)支架以使得通過(guò)創(chuàng)傷面的細(xì)胞附著和遷移。

通過(guò)適度的加熱至大約50℃，果膠首先分散并溶解在水內(nèi)。然后加入丙二醇并混合，然后逐漸加入cmc并強(qiáng)力混合。當(dāng)冷卻至20-30℃時(shí)，加入esm顆粒并混合。一旦被混合，esm顆粒在水膠體內(nèi)被均勻地分散為懸浮液。凝膠然后分散在鋁或類(lèi)似管或囊中并通過(guò)γ輻射滅菌，優(yōu)選地25kgy。凝膠可以在5℃下儲(chǔ)存，冷凍，或者可以在室溫下儲(chǔ)存。

水膠體制劑理想地適合于具有深腔或者可以在健康皮膚下面打開(kāi)通道的創(chuàng)傷。在后者類(lèi)型的創(chuàng)傷中，凝膠可以被裝載入注射器，并且然后被遞送至腔以確保所有創(chuàng)傷表面被覆蓋。

在進(jìn)一步實(shí)施方式中，esm可以在基本上純的水/羥乙基纖維素水凝膠中配制。這樣的制劑可以通過(guò)利用攪動(dòng)或攪拌將hec溶解在水中并且在所述水性hec溶液內(nèi)分散esm來(lái)制備。esm-hec水凝膠然后可以被包裝入方便的受器，例如包裝入管或囊，并且然后充滿(mǎn)的受器可以利用γ輻射滅菌，例如在25kgy下。

最佳地，創(chuàng)傷然后用第二敷料比如半透膜覆蓋以維持濕潤(rùn)環(huán)境和保持水膠體就位。

固體或硬凝膠水膠體也可以被制造，其摻入半滲透的背襯片，該背襯片可以充當(dāng)無(wú)菌屏障以及在創(chuàng)傷表面內(nèi)的水分的管理中起作用。這樣的固體材料可以摻入聚合物或樹(shù)膠或樹(shù)脂或明膠以確保敷料輕輕地粘附至創(chuàng)傷表面。這樣的產(chǎn)品將適合于治療輕度至中度滲出非腔創(chuàng)傷。這樣的敷料將不需要第二敷料來(lái)保持它們就位或來(lái)提供抗微生物屏障。

任選地，水膠體凝膠可以包含藻酸鹽來(lái)增加基礎(chǔ)基質(zhì)凝膠的保水性。這在具有中度至高度滲出液的創(chuàng)傷中將是優(yōu)選的。這樣的基礎(chǔ)藻酸鹽凝膠在us6201164中描述。

實(shí)施例6

生產(chǎn)esm藻酸鈉復(fù)合材料顆粒劑

在該實(shí)施例中，在本發(fā)明中使用的esm顆粒(纖維)與藻酸鈉組合以形成粒狀粉末。顆粒劑是直徑大約為100-200μm的相對(duì)大顆粒。通過(guò)直接從最終包裝容器手動(dòng)噴灑而分配至創(chuàng)傷，該大小范圍使得產(chǎn)品相對(duì)易于應(yīng)用。在與創(chuàng)傷接觸時(shí)，藻酸鹽成分吸收流體——?jiǎng)?chuàng)傷滲出液(其包含ca²⁺)，并膨脹至凝膠(原位敷料)。esm顆粒然后直接地與創(chuàng)傷或者間接地與凝膠水合并接觸創(chuàng)傷。

具體地，顆粒劑通過(guò)組合40％重量esm顆粒和60％重量的40％藻酸na溶液而形成。組合然后在轉(zhuǎn)筒式混合器中混合直到獲得均勻一致性。材料類(lèi)似于濕濾餅。這然后被轉(zhuǎn)移至流化床干燥器并且風(fēng)干，直到水分低于通過(guò)干燥失重測(cè)試方法或等價(jià)方法(equivalent)測(cè)量的按重量計(jì)少于5％重量。材料然后類(lèi)似于粗屑(crumb)。這然后用200μm篩網(wǎng)錐磨以產(chǎn)生低于200μm的結(jié)合esm和藻酸鹽的顆粒劑。可以進(jìn)一步篩選以去除較小的顆粒。粒狀產(chǎn)物然后被包裝和滅菌，優(yōu)選地通過(guò)γ輻射或通過(guò)環(huán)氧乙烷處理。

另外的材料比如羧甲基纖維素或羥乙基纖維素可以被摻入顆粒劑以進(jìn)一步修飾復(fù)合材料的保水性。

實(shí)施例7

產(chǎn)生esm藻酸鈉復(fù)合材料墊

40重量esm顆粒和60％重量的40％藻酸na溶液被組合并在轉(zhuǎn)筒式混合器中混合直到獲得均勻一致性。材料類(lèi)似于濕濾餅。濕濾餅然后被包裝入模具并且然后凍干或真空干燥以產(chǎn)生墊。進(jìn)行干燥直到水分濃度低于5％重量/干燥損失重量。

在與創(chuàng)傷接觸時(shí)，墊的藻酸鹽成分吸收流體——?jiǎng)?chuàng)傷滲出液(其包含ca²⁺)，并膨脹至凝膠(原位敷料)。esm顆粒然后直接地與創(chuàng)傷或者間接地與凝膠水合并接觸創(chuàng)傷表面。

墊也可以與其它材料組合以制造混合敷料，例如具有滲透性背襯的敷料以阻止來(lái)自高滲出液創(chuàng)傷的泄露。

另外的材料比如羧甲基纖維素或羥乙基纖維素可以被摻入墊以進(jìn)一步修飾復(fù)合材料的保水性。

實(shí)施例8

產(chǎn)生esm藻酸鈣復(fù)合材料墊

在該實(shí)施例中，esm顆粒與藻酸na在溶液中組合?？扇艿脑逅猁}然后通過(guò)加入cacl2從溶液沉淀，以形成其中esm被分配的藻酸ca的不可溶凝膠基質(zhì)。

具體而言，在本發(fā)明中使用的干燥esm顆粒(纖維)以1％重量/體積首先懸浮在水中，并且然后與足夠的藻酸na粉末組合以得到2％重量/體積藻酸鹽溶液。懸浮液可以需要加熱至大約50℃以溶解藻酸na。懸浮液然后置于模具中用于固化。10％cacl2溶液然后緩慢地加入至每個(gè)模具至2％的最終濃度，并且產(chǎn)物被允許在0-30℃之間充分固化24小時(shí)。在24小時(shí)之后，在固化和藻酸ca形成期間從凝膠釋放的過(guò)量水通過(guò)吸入而去除，并且將模具置于冷凍干燥器或真空干燥器中。進(jìn)行干燥直到水分濃度低于5％重量/干燥損失重量。產(chǎn)物然后被包裝和滅菌，優(yōu)選地通過(guò)γ輻射或通過(guò)環(huán)氧乙烷處理。

墊也可以與其它材料組合以制造混合敷料，例如具有不透水背襯的敷料以阻止來(lái)自高滲出液創(chuàng)傷的泄露。

另外的材料比如羧甲基纖維素或羥乙基纖維素可以被摻入墊以進(jìn)一步修飾復(fù)合材料的保水性。

實(shí)施例9

產(chǎn)生esm藻酸鈣復(fù)合材料纖維

在該實(shí)施例中，esm顆粒在旋絲(spinning)制造期間被摻入藻酸ca纖維。藻酸鈉與esm的混合物通過(guò)噴絲頭擠出進(jìn)入cacl2浴。cacl2處理使藻酸鹽聚合物沉淀為其中esm材料被摻入的不可溶纖維。顆粒劑和珠可以通過(guò)使用適合的噴射方式類(lèi)似地形成。

具體地，紡絲溶液(spinningsolution)由ph大約為7.0的去離子水、藻酸na和在本發(fā)明中使用的esm顆粒(纖維)制備。最終藻酸鹽纖維的厚度和直徑由溶液的粘度限定，其又取決于紡絲溶液的濃度。esm顆粒首先懸浮在水中，在1％和50％w/v之間，并且然后加入藻酸na粉末，至大約5-6％w/v的濃度。懸浮液通過(guò)剪切混合。懸浮液可以需要加熱至大約50℃以溶解藻酸na。混合物然后被旋轉(zhuǎn)入包含2％cacl2的水浴以使藻酸鹽沉淀為ca復(fù)合物(凝膠)。在該過(guò)程期間，esm顆粒在藻酸ca基質(zhì)內(nèi)變得分散以形成復(fù)合材料纖維結(jié)構(gòu)。

旋轉(zhuǎn)纖維然后在筒式輥上收集并且通過(guò)qin的描述被進(jìn)一步加工以修飾它們的凝膠和吸收性質(zhì)。在洗滌過(guò)程期間ca²⁺離子交換為na⁺導(dǎo)致具有增加的水分吸收能力的纖維。因而，獲得具有一系列性質(zhì)的纖維，其適合于一系列創(chuàng)傷類(lèi)型。與其它陽(yáng)離子(例如鋅和銀)的離子交換可以被執(zhí)行以進(jìn)一步功能化纖維。

旋轉(zhuǎn)纖維然后可以通過(guò)如qin描述的(上文)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)形成網(wǎng)。旋轉(zhuǎn)纖維也可以與其它材料組合來(lái)制造混合敷料，例如具有不透水背襯的敷料以阻止來(lái)自高滲透液創(chuàng)傷的泄露。這些產(chǎn)品然后可以被包裝并通過(guò)γ輻射滅菌，例如在使用之前。

另外的材料比如羧甲基纖維素或羥乙基纖維素可以被摻入纖維以進(jìn)一步修飾復(fù)合材料的保水性。

實(shí)施例10

調(diào)查esm顆粒對(duì)db/db糖尿病小鼠中全層切除創(chuàng)傷的愈合的影響

介紹

在糖尿病(db/db)小鼠模型(即bks.cg-mdock7^m+/+lepr^db/j小鼠)——公認(rèn)地和廣泛使用的延遲創(chuàng)傷愈合的動(dòng)物模型——中的該研究被執(zhí)行以評(píng)估四種esm顆粒制劑促進(jìn)在公認(rèn)的延遲創(chuàng)傷愈合的體內(nèi)模型中的組織修復(fù)的能力，著眼于它們?cè)趧?chuàng)傷管理&組織修復(fù)中的未來(lái)應(yīng)用。

將用四種制劑中的每種處理的創(chuàng)傷的愈合反應(yīng)進(jìn)行彼此比較并且與暴露于下列的創(chuàng)傷的愈合反應(yīng)進(jìn)行比較：(i)‘未處理’(陰性對(duì)照)和(ii)陽(yáng)性對(duì)照處理(在0.5％hpmc中的血小板源生長(zhǎng)因子-bb[rh-pdgf-bb]+轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α[rh-tgf-α])。

該實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明了這四種esm顆粒制劑對(duì)糖尿病小鼠中全層切除皮膚創(chuàng)傷的創(chuàng)傷閉合的影響(隨著時(shí)間的推移開(kāi)放性創(chuàng)傷面積的減小)。創(chuàng)傷閉合數(shù)據(jù)從在每個(gè)評(píng)估點(diǎn)處取的每個(gè)創(chuàng)傷的比例創(chuàng)傷圖像來(lái)確定。在給定時(shí)間點(diǎn)處的給定創(chuàng)傷的面積被表達(dá)為就在損傷之后(即0天)所述創(chuàng)傷的面積的百分比。每一組的剩余的創(chuàng)傷面積中值百分比(&中值標(biāo)準(zhǔn)偏差)被計(jì)算并且在圖6-11中用圖形展示。

表1–處理方案

*注意，對(duì)于處理組2、3、4&5處理在第4天時(shí)結(jié)束，這是因?yàn)榻邮誩sm-30和esm-10的創(chuàng)傷的表面上堅(jiān)硬產(chǎn)品的構(gòu)建。為了使研究標(biāo)準(zhǔn)化，在第4天時(shí)停止所有組中的治療。

材料和方法

esm顆粒全部來(lái)自相同批的純化材料，超量的(overage)等分入10ml帶塞子的和卷曲的玻璃瓶中并通過(guò)γ輻射(大約25kgy)滅菌。30和10mg單位作為干粉末直接地被應(yīng)用至創(chuàng)傷。3和1mg等分試樣在50μl水中水合用于注射，并且然后作為懸浮液用移液管移至創(chuàng)傷表面上。

陽(yáng)性對(duì)照在0.5％hpmc媒介(羥丙基甲基纖維素，sigmaaldric，uk)中制備。將0.5g的羥丙基甲基纖維素(hpmc)溶解在100ml蒸餾水中，借助于加熱、攪拌和冷卻。加入氫氧化鈉以調(diào)節(jié)ph至7.0。

結(jié)果

1)“隨著時(shí)間的過(guò)去剩余的％創(chuàng)傷面積”數(shù)據(jù)的創(chuàng)傷閉合曲線(xiàn)被發(fā)現(xiàn)為在不同處理組之間是顯著不同的(圖6)。接收生長(zhǎng)因子組合(陽(yáng)性對(duì)照)的創(chuàng)傷被發(fā)現(xiàn)為表現(xiàn)最快的閉合速度，這表明在受傷(wound)的16天后接近完全創(chuàng)傷閉合，和從研究時(shí)期開(kāi)始的第8天時(shí)，相對(duì)于未處理的創(chuàng)傷顯著更高水平的創(chuàng)傷閉合(p＝0.000，mann-whitneyu測(cè)試)(圖7)。

2)接收esm-30的創(chuàng)傷被發(fā)現(xiàn)為展示創(chuàng)傷面積的最初增加(在第4天時(shí)觀察的)。這被發(fā)現(xiàn)為相對(duì)于未處理的創(chuàng)傷是統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的(p≤0.02，mann-whitneyu測(cè)試)。創(chuàng)傷閉合(而不是創(chuàng)傷擴(kuò)張)在該處理組中從第8天開(kāi)始觀察到。但是，中值創(chuàng)傷面積在第8天時(shí)比未處理的創(chuàng)傷保持略大。相對(duì)于未處理的創(chuàng)傷顯著增加的創(chuàng)傷閉合從第12天開(kāi)始被觀察到(p≤0.005，mann-whitneyu測(cè)試)(圖8)。

3)在所有其他組：ems-10、ems-3和ems-1中的創(chuàng)傷被發(fā)現(xiàn)為從第8天起相對(duì)于未處理的創(chuàng)傷展示顯著增加的創(chuàng)傷閉合(p≤0.000，mann-whitneyutest)(圖9-11)。

4)在比較ems處理組時(shí)：

i.接收ems-30的創(chuàng)傷在第4和8天時(shí)被發(fā)現(xiàn)為比接收ems-10的創(chuàng)傷顯著更大(p＝0.001)。

ii.接收ems-30的創(chuàng)傷在第4-12天時(shí)被發(fā)現(xiàn)為比接收ems-3或ems-1的創(chuàng)傷顯著更大(p＝0.038)。

iii.在第8和12時(shí)，利用最高濃度的esm(esm-30)觀察到最低水平的閉合，和利用最低濃度的esm(esm-1)觀察到最大量的創(chuàng)傷閉合。

iv.在第8天時(shí)，利用esm-1觀察到的創(chuàng)傷閉合的增加被發(fā)現(xiàn)為與esm-10和esm-3相比是接近顯著的(分別地p＝0.075和p＝0.063，mann-whitneyu測(cè)試)。

v.與第16天時(shí)相比，在第20天時(shí)利用esm-30觀察到剩余的中值創(chuàng)傷面積的少量增加。

5)在陽(yáng)性對(duì)照與i)第16和20天時(shí)的esm-10和第20天時(shí)的esm-1之間沒(méi)有觀察到顯著區(qū)別。

實(shí)施例11

不同大小的esm顆粒的抗炎作用

材料和方法

將非附著u9373xnf-kb-luc細(xì)胞接種在96孔滴定板中的dmem培養(yǎng)基(sigma)中并在37℃和5％co2下培養(yǎng)。測(cè)試不同大小(小于250μm、小于120μm和小于80μm)的esm顆粒的抗炎作用。在lps處理(1.0μg/ml)之前30min，將一組顆粒應(yīng)用至細(xì)胞持續(xù)5小時(shí)以誘發(fā)炎癥作用(與熒光素酶活性成比例)。在孵育結(jié)束時(shí)，通過(guò)使用bright-glo熒光素酶分析(promega)測(cè)量熒光素酶活性。在該分析中，響應(yīng)于lps暴露的熒光素酶活性越低，測(cè)試物質(zhì)的抗炎作用越高。

結(jié)果和結(jié)論

如圖12中所示，在esm顆粒大小和抗炎活性之間存在間接關(guān)系。低于80μm的顆粒比高于該大小的顆粒更有效。大于1mm的esm的大顆?；蚱巍趫D12中標(biāo)記為未處理的——具有最低活性。