交叉參考相關(guān)申請

本申請要求2014年9月13日提交的美國臨時申請?zhí)?2/050,116、2014年10月3日提交的美國臨時申請?zhí)?2/059,788、2015年2月20日提交的美國臨時申請?zhí)?2/119,060和2015年7月30日提交的美國臨時申請?zhí)?2/199,030的權(quán)益，上述申請的內(nèi)容通過引用全文納入本文。

序列表

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背景技術(shù)：

t細(xì)胞介導(dǎo)針對抗原的免疫應(yīng)答能力需要兩種獨特的信號交互作用(viglietta,v.等.(2007)neurotherapeutics4:666-675；korman,a.j.等.(2007)adv.immunol.90:297-339)。首先，排列在抗原呈遞細(xì)胞(apc)表面的抗原被呈遞給抗原特異原初cd4⁺t細(xì)胞。這種呈遞通過t細(xì)胞受體(tcr)遞送信號，指引t細(xì)胞引發(fā)特異于所呈遞抗原的免疫應(yīng)答。第二，通過apc與不同t細(xì)胞表面分子之間相互作用介導(dǎo)的多種共刺激和抑制信號，啟動t細(xì)胞激活和增殖并最終導(dǎo)致其抑制。

免疫系統(tǒng)由共刺激和共抑制配體與受體的網(wǎng)絡(luò)緊密控制。這些分子提供t細(xì)胞激活的第二信號并提供正和負(fù)信號的平衡網(wǎng)絡(luò)以使抵御感染的免疫應(yīng)答最大化，同時限制自身免疫性(wang,l.等.(epub2011年7月11日)j.exp.med.208(3):577-92；lepenies,b.等.(2008)endocrine,metabolic&immunedisorders--drugtargets8:279-288)。共刺激信號示例包括apc的b7.1(cd80)和b7.2(cd86)配體與cd4⁺t淋巴細(xì)胞的cd28和ctla-4受體之間的結(jié)合(sharpe,a.h.等.(2002)naturerev.immunol.2:116-126；lindley,p.s.等.(2009)immunol.rev.229:307-321)。b7.1或b7.2與cd28的結(jié)合刺激t細(xì)胞活化，而b7.1或b7.2與ctla-4的結(jié)合抑制這類活化(dong,c.等.(2003)immunolog.res.28(1):39-48；greenwald,r.j.等.(2005)ann.rev.immunol.23:515-548)。cd28在t細(xì)胞表面組成型表達(dá)(gross,j.,等.(1992)j.immunol.149:380-388)，而ctla4表達(dá)在t細(xì)胞活化后迅速上調(diào)(linsley,p.等.(1996)immunity4:535-543)。

cd28受體的其它配體包括一組相關(guān)的b7分子，也稱為“b7超家族”(coyle,a.j.等.(2001)natureimmunol.2(3):203-209；sharpe,a.h.等.(2002)naturerev.immunol.2:116-126；collins,m.等.(2005)genomebiol.6:223.1-223.7；korman,a.j.等.(2007)adv.immunol.90:297-339)。已知b7超家族的數(shù)個成員，包括b7.1(cd80)、b7.2(cd86)、可誘導(dǎo)共刺激配體(icos-l)、程序性死亡配體-1(pd-l1；b7-h1)、程序性死亡配體-2(pd-l2；b7-dc)、b7-h3、b7-h4和b7-h6(collins,m.等.(2005)genomebiol.6:223.1-223.7)。

程序性死亡-1(pd-1)蛋白是t細(xì)胞調(diào)節(jié)子cd28/ctla4大家族的抑制性成員(okazaki等.(2002)curropinimmunol14:391779-82；bennett等.(2003)j.immunol.170:711-8)。其它cd28家族成員包括cd28、ctla-4、icos和btla。pd-1作為單體存在，缺乏其它cd28家族成員特有的未配對半胱氨酸殘基。pd-1在活化的b細(xì)胞、t細(xì)胞和單核細(xì)胞上表達(dá)。

pd-1基因編碼55kdai型跨膜蛋白(agata等.(1996)intimmunol.8:765-72)。盡管pd-1在結(jié)構(gòu)上與ctla-4類似，但缺乏對于b7-1和b7-2結(jié)合重要的myppy基序(seqidno:1)。已鑒定了2個pd-1配體pd-l1(b7-h1)和pd-l2(b7-dc)，其顯示在結(jié)合pd-1后下調(diào)t細(xì)胞活化(freeman等.(2000)j.exp.med.192:1027-34；carter等.(2002)eur.j.immunol.32:634-43)。pd-l1和pd-l2都是b7同源物，都結(jié)合pd-1但不結(jié)合其它cd28家族成員。pd-l1在多種人類癌癥中豐富(dong等.(2002)nat.med.8:787-9)。

已知pd-l1是負(fù)調(diào)節(jié)tcr信號的免疫抑制蛋白(ishida,y.等.(1992)emboj.11:3887-3895；blank,c.等.(epub2006年12月29日)immunol.immunother.56(5):739-745)。pd-1與pd-l1之間的相互作用能作為免疫檢查點，引起例如腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞減少、t細(xì)胞受體介導(dǎo)的增殖減少和/或癌細(xì)胞免疫逃避(dong等.(2003)j.mol.med.81:281-7；blank等.(2005)cancerimmunol.immunother.54:307-314；konishi等.(2004)clin.cancerres.10:5094-100)。腫瘤抑制能通過抑制pd-1與pd-l1或pd-l2的局部相互作用而逆轉(zhuǎn)；當(dāng)pd-1與pd-l2的相互作用也被阻斷時，效果疊加(iwai等.(2002)proc.nat'l.acad.sci.usa99:12293-7；brown等.(2003)j.immunol.170:1257-66)。

鑒于免疫檢查點通路對調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的重要性，需要開發(fā)激活免疫系統(tǒng)的新型聯(lián)合療法。

發(fā)明概述

本公開至少部分提供方法和組合，含免疫調(diào)節(jié)劑(例如以下一或多種：共刺激分子的激活劑或免疫檢查點分子的抑制劑)與第二治療劑ldk378的聯(lián)用。在一個實施方式中，免疫檢查點分子的抑制劑(例如一或多種pd-1、pd-l1、lag-3、tim-3、ceacam(如ceacam-1、-3和/或-5)或ctla4的抑制劑)能與ldk378組合。本文所述組合能例如在治療癌癥中提供有益效果，如提高抗癌效果、降低毒性和/或減少副作用。例如，免疫調(diào)節(jié)劑、第二治療劑或這兩者能以與單一療法劑量相比達(dá)到同一治療效果所需更低的劑量施用。因此，公開了采用上述組合治療包括癌在內(nèi)的過度增殖性疾病的組合物和方法。

因此，一方面，本公開的特征是治療對象中(如抑制、減少、緩解或預(yù)防)過度增殖性病癥或疾病(如癌)的方法。所述方法包括向?qū)ο笫┯妹庖哒{(diào)節(jié)劑(例如以下一或多種：共刺激分子的激活劑或免疫檢查點分子的抑制劑)與第二治療劑ldk378，從而治療過度增殖性病癥或疾病(如癌)。在某些實施方式中，所述免疫調(diào)節(jié)劑是免疫檢查點分子的抑制劑(例如pd-1、pd-l1、lag-3、tim-3、ceacam(如ceacam-1、-3和/或-5)或ctla4或其任意組合的抑制劑)。免疫調(diào)節(jié)劑與第二藥劑的組合能在單一組合物中共同施用或者在2個或更多不同組合物，分開施用例如本文所述組合物或劑型。免疫調(diào)節(jié)劑和第二藥劑能以任意順序施用。例如，免疫調(diào)節(jié)劑能與第二藥劑同時施用，在第二藥劑之前或之后施用。

另一方面，本公開的特征是降低過度增殖性(如癌)細(xì)胞活性(如生長、存活或活力或者全部)的方法。所述方法包括將細(xì)胞與免疫調(diào)節(jié)劑(例如以下一或多種：共刺激分子的激活劑或免疫檢查點分子的抑制劑)和ldk378接觸，從而降低細(xì)胞中的活性。在某些實施方式中，所述免疫調(diào)節(jié)劑是免疫檢查點分子的抑制劑(例如pd-1、pd-l1、lag-3、tim-3、ceacam(如ceacam-1、-3和/或-5)或ctla4或其任意組合的抑制劑)。本文所述方法能如在動物對象中或作為治療方案的一部分在體外或體內(nèi)使用。細(xì)胞與免疫調(diào)節(jié)劑和第二藥劑的接觸能采用任意順序。在某些實施方式中，所述細(xì)胞與免疫調(diào)節(jié)劑和第二藥劑同時接觸，與免疫調(diào)節(jié)劑在第二藥劑之前接觸或與免疫調(diào)節(jié)劑在第二藥劑之后接觸。

另一方面，本公開的特征是組合物(如一或多種組合物或劑型)，包括免疫調(diào)節(jié)劑(例如以下一或多種：共刺激分子的激活劑或免疫檢查點分子的抑制劑)與第二治療劑ldk378。在某些實施方式中，所述免疫調(diào)節(jié)劑是免疫檢查點分子的抑制劑(例如pd-1、pd-l1、lag-3、tim-3、ceacam(如ceacam-1、-3和/或-5)或ctla4或其任意組合的抑制劑)。在一個實施方式中，所述組合物包括藥學(xué)上可接受載劑。免疫調(diào)節(jié)劑和第二藥劑能存在于單一組合物中或作為兩種或更多不同組合物存在。免疫調(diào)節(jié)劑和第二藥劑能通過相同施用途徑或不同施用途徑施用。

在另一方面中，本公開提供藥物組合，包括(i)ldk378或其藥學(xué)上可接受鹽和(ii)尼魯單抗或其藥學(xué)上可接受鹽。

還公開了劑型如劑量劑型和藥盒如治療藥盒，其中包括免疫調(diào)節(jié)劑(例如以下一或多種：共刺激分子的激活劑或免疫檢查點分子的抑制劑)與第二治療劑ldk378，以及使用說明書。

描述其他單獨或組合的優(yōu)選實施方式的項目如下所列：

1.一種藥物組合，其包含(i)ldk378或其藥學(xué)上可接受鹽和(ii)尼魯單抗或其藥學(xué)上可接受鹽。

2.如項目1所述的藥物組合，包括分開或一起的組分(i)和(ii)。

3.如項目1或2所述用作藥的藥物組合，其中l(wèi)dk378和尼魯單抗同時獨立施用或在一定時間間隔內(nèi)分開施用。

4.如項目3所述的藥物組合，其中時間間隔允許組合伴侶具有聯(lián)合活性。

5.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的藥物組合，其中所述組合包括在治療上共同有效治療alk介導(dǎo)疾病的量。

6.如項目5所述的藥物組合，其中所述alk介導(dǎo)疾病是癌。

7.如項目6所述的藥物組合，其中所述alk介導(dǎo)疾病是nsclc或淋巴瘤。

8.如項目6所述的藥物組合，其中所述alk介導(dǎo)疾病是nsclc。

9.如權(quán)利要求1-8中任一項所述的藥物組合，其中所述組合用作藥。

10.如權(quán)利要求1-8中任一項所述的藥物組合，其中所述組合用于治療癌。

11.如項目10所述的藥物組合，其中所述癌是非小細(xì)胞肺癌。

12.ldk378與尼魯單抗的組合在生產(chǎn)用于alk介導(dǎo)疾病的藥物中的應(yīng)用。

13.如項目12所述的ldk378與尼魯單抗組合在生產(chǎn)藥物中的應(yīng)用，其中所述疾病是癌。

14.如項目13所述的ldk378與尼魯單抗組合在生產(chǎn)藥物中的應(yīng)用，其中所述疾病是非小細(xì)胞肺癌。

15.一種包括ldk378或其藥學(xué)上可接受鹽和尼魯單抗或其藥學(xué)上可接受鹽的藥物組合物，用于同時或分開施用以治療癌。

16.如項目15所述的藥物組合物，其中所述癌是非小細(xì)胞肺癌。

17.如項目22或23所述的藥物組合物，其中所述組合物包括有效量的ldk378和尼魯單抗。

18.如項目15-18中任一項所述的藥物組合物，其中所述組合物進(jìn)一步包括藥學(xué)上可接受載劑。

19.用作藥的ldk378，其中l(wèi)dk378或其藥學(xué)上可接受鹽與尼魯單抗或其藥學(xué)上可接受鹽聯(lián)合施用。

20.如項目19所述的用作藥的ldk378，用于治療癌。

21.如項目20所述的用作藥的ldk378，其中所述癌是非小細(xì)胞肺癌。

22.如項目1-11中任一項所述的藥物組合，其中所述組合采用成套藥盒形式以用于聯(lián)合施用。

23.如項目22所述的藥物組合，其中l(wèi)dk378或其藥學(xué)上可接受鹽與尼魯單抗或其藥學(xué)上可接受鹽聯(lián)合施用或同時獨立施用或在一定時間間隔內(nèi)分開施用。

24.一種治療對象中癌癥的方法，包括向所述對象施用治療有效量的(i)ldk378或其藥學(xué)上可接受鹽和(ii)尼魯單抗或其藥學(xué)上可接受鹽。

25.如項目3-11、22或23中任一項所述的藥物組合，如項目12-14中任一項所述的應(yīng)用，如項目24所述的治療癌癥的方法，如項目15-18中任一項所述的藥物組合物，或如項目19-21中任一項所述的用作藥的ldk378，其中l(wèi)dk378和尼魯單抗被施用于未用alk治療過的患者。

26.如項目3-11、22或23中任一項所述的藥物組合，如項目12-14中任一項所述的應(yīng)用，如項目24所述的治療癌癥的方法，如項目15-18中任一項所述的藥物組合物，或如項目19-21中任一項所述的用作藥的ldk378，其中所述ldk378和尼魯單抗被施用于用alk抑制劑預(yù)治療過的患者。

27.如項目3-11、22或23中任一項所述的藥物組合，如項目12-14中任一項所述的應(yīng)用，如項目24所述的治療癌癥的方法，如項目15-18中任一項所述的藥物組合物，或如項目19-21中任一項所述的用作藥的ldk378，其中所述ldk378和尼魯單抗被施用于用ldk378預(yù)治療過的患者。

28.如項目3-11、22、23或25-27中任一項所述的藥物組合，如項目12-14或25-27中任一項所述的應(yīng)用，如項目24-27中任一項所述的治療癌癥的方法，如項目15-18或25-27中任一項所述的藥物組合物，或如項目19-21或25-27中任一項所述的用作藥的ldk378，其中所述癌包括alk易位或重排。

29.如項目3-11、22、23或25-27中任一項所述的藥物組合，如項目12-14或25-27中任一項所述的應(yīng)用，如項目24-27中任一項所述的治療癌癥的方法，如項目15-18或25-27中任一項所述的藥物組合物，或如項目19-21或25-27中任一項所述的用作藥的ldk378，其中所述癌包括eml4-alk融合。

30.如項目3-11、22、23或25-27中任一項所述的藥物組合，如項目12-14或25-27中任一項所述的應(yīng)用，如項目24-27中任一項所述的治療癌癥的方法，如項目15-18或25-27中任一項所述的藥物組合物，或如項目19-21或25-27中任一項所述的用作藥的ldk378，其中所述癌包括alk-ros1融合。

31.如項目1-11、22、23或25-30中任一項所述的藥物組合，如項目12-14或25-30中任一項所述的應(yīng)用，如項目24-30中任一項所述的治療癌癥的方法，如項目15-18或25-30中任一項所述的藥物組合物，或如項目19-21或25-30中任一項所述的用作藥的ldk378，其中色瑞替尼劑量是450mg且尼魯單抗劑量是3mg/kg。

32.如項目1-11、22、23或25-30中任一項所述的藥物組合，如項目12-14或25-30中任一項所述的應(yīng)用，如項目24-30中任一項所述的治療癌癥的方法，如項目15-18或25-30中任一項所述的藥物組合物，或如項目19-21或25-30中任一項所述的用作藥的ldk378，其中色瑞替尼劑量是600mg且尼魯單抗劑量是3mg/kg。

33.如項目1-11、22、23或25-32中任一項所述的藥物組合，如項目12-14或25-32中任一項所述的應(yīng)用，如項目24-32中任一項所述的治療癌癥的方法，如項目15-18或25-32中任一項所述的藥物組合物，或如項目19-21或25-32中任一項所述的用作藥的ldk378，其中色瑞替尼伴服低脂餐施用。

本文所述方法、組合物、劑量劑型和藥盒的其他特征或?qū)嵤┓绞桨ㄒ韵乱换蚨喾N：

在某些實施方式中，所述免疫調(diào)節(jié)劑是共刺激分子的激活劑。在一個實施方式中，所述共刺激分子的激動劑選自ox40、cd2、cd27、cds、icam-1、lfa-1(cd11a/cd18)、icos(cd278)、4-1bb(cd137)、gitr、cd30、cd40、baffr、hvem、cd7、light、nkg2c、slamf7、nkp80、cd160、b7-h3或cd83配體的激動劑(如激動性抗體或其抗原結(jié)合片段或可溶性融合)。

在某些實施方式中，所述免疫調(diào)節(jié)劑是免疫檢查點分子的抑制劑。在一個實施方式中，所述免疫調(diào)節(jié)劑是pd-1、pd-l1、pd-l2、ctla4、tim-3、lag3、ceacam(如ceacam-1、-3和/或-5)、vista、btla、tigit、lair1、cd160、2b4和/或tgfrβ的抑制劑。在一個實施方式中，所述免疫檢查點分子的抑制劑可抑制pd-1、pd-l1、lag-3、tim-3、ceacam(如ceacam-1、-3和/或-5)或ctla4，或其任意組合。術(shù)語“抑制”或“抑制劑”包括指定分子例如免疫檢查點抑制劑的某一參數(shù)(如活性)減少。例如，這一術(shù)語包括使活性，如pd-1或pd-l1活性，抑制至少5％、10％、20％、30％、40％或更多。因此，抑制不需要是100％。

對抑制性分子的抑制能在dna、rna或蛋白水平進(jìn)行。在實施方式中，抑制性核酸(如dsrna、sirna或shrna)能用于抑制抑制性分子的表達(dá)。在其它實施方式中，抑制信號的抑制劑是多肽如可溶性配體(如pd-1-ig或ctla-4ig)，或結(jié)合抑制性分子的抗體或其抗原結(jié)合片段，例如結(jié)合pd-1、pd-l1、pd-l2、ctla4、tim-3、lag3、ceacam(如ceacam-1、-3和/或-5)、vista、btla、tigit、lair1、cd160、2b4和/或tgfrβ或其組合的抗體或其片段(本文也稱為“抗體分子”)。

在一個實施方式中，所述抗體分子是全抗體或其片段(如fab、f(ab')2、fv、或單鏈fv片段(scfv))。在其它實施方式中，所述抗體分子具有重鏈恒定區(qū)(fc)，選自例如igg1、igg2、igg3、igg4、igm、iga1、iga2、igd和ige的重鏈恒定區(qū)；特別地是選自例如igg1、igg2、igg3和igg4的重鏈恒定區(qū)，更特別地是igg1或igg4的重鏈恒定區(qū)(如人igg1或igg4)。在一個實施方式中，所述重鏈恒定區(qū)是人igg1或igg4。在一個實施方式中，所述恒定區(qū)被改變(如突變)以修飾抗體分子特性(例如增加或降低以下一或多種：fc受體結(jié)合、抗體糖基化、半胱氨酸殘基數(shù)目、效應(yīng)細(xì)胞功能或補體功能)。

在某些實施方式中，所述抗體分子采用雙特異或多特異性抗體分子的形式。在一個實施方式中，所述雙特異性抗體分子具有對pd-1或pd-l1的第一結(jié)合特異性和第二結(jié)合特異性，如對tim-3、lag-3或pd-l2的第二結(jié)合特異性。在一個實施方式中，所述雙特異性抗體分子結(jié)合pd-1或pd-l1和tim-3。在另一個實施方式中，所述雙特異性抗體分子結(jié)合pd-1或pd-l1和lag-3。在另一個實施方式中，所述雙特異性抗體分子結(jié)合pd-1或pd-l1和ceacam(如ceacam-1、-3和/或-5)。在另一個實施方式中，所述雙特異性抗體分子結(jié)合pd-1或pd-l1和ceacam-1。在另一個實施方式中，所述雙特異性抗體分子結(jié)合pd-1或pd-l1和ceacam-3。在另一個實施方式中，所述雙特異性抗體分子結(jié)合pd-1或pd-l1和ceacam-5。在另一個實施方式中，所述雙特異性抗體分子結(jié)合pd-1或pd-l1。在另一個實施方式中，所述雙特異性抗體分子結(jié)合pd-1和pd-l2。在另一個實施方式中，所述雙特異性抗體分子結(jié)合tim-3和lag-3。在另一個實施方式中，所述雙特異性抗體分子結(jié)合ceacam(如ceacam-1、-3和/或-5)和lag-3。在另一個實施方式中，所述雙特異性抗體分子結(jié)合ceacam(如ceacam-1、-3和/或-5)和tim-3。上述分子的任意組合可制備于多特異性抗體分子中，如三特異性抗體，其包括對pd-1或pd-1的第一結(jié)合特異性以及對以下兩種或更多的第二和第三結(jié)合特異性：tim-3、ceacam(如ceacam-1、-3和/或-5)、lag-3或pd-l2。在某些實施方式中，所述免疫調(diào)節(jié)劑是pd-1如人pd-1的抑制劑。在另一個實施方式中，所述免疫調(diào)節(jié)劑是pd-l1如人pd-l1的抑制劑。在一個實施方式中，所述pd-1或pd-l1抑制劑是pd-1或pd-l1的抗體分子。pd-1或pd-l1抑制劑能單獨施用，或與其它免疫調(diào)節(jié)劑聯(lián)用，如與lag3、tim-3、ceacam(如ceacam-1、-3和/或-5)或ctla4的抑制劑聯(lián)用。在一個示例性實施方式中，所述pd-1或pd-l1抑制劑如抗pd-1或pd-l1抗體分子與lag-3抑制劑如抗lag-3抗體分子聯(lián)合施用。在另一個實施方式中，所述pd-1或pd-l1抑制劑如抗pd-1或pd-l1抗體分子與tim-3抑制劑如抗tim-3抗體分子聯(lián)合施用。在其它實施方式中，所述pd-1或pd-l1抑制劑如抗pd-1抗體分子與lag-3抑制劑如抗lag-3抗體分子和tim-3抑制劑如抗tim-3抗體分子聯(lián)合施用。在另一個實施方式中，所述pd-1或pd-l1抑制劑如抗pd-1或pd-l1抗體分子與ceacam抑制劑(如ceacam-1、-3和/或-5抑制劑)如抗ceacam抗體分子聯(lián)合施用。在另一個實施方式中，所述pd-1或pd-l1抑制劑如抗pd-1或pd-l1抗體分子與ceacam-1抑制劑如抗ceacam-1抗體分子聯(lián)合施用。在另一個實施方式中，所述pd-1或pd-l1抑制劑如抗pd-1或pd-l1抗體分子與ceacam-5抑制劑如抗ceacam-5抗體分子聯(lián)合施用。本公開也包括免疫調(diào)節(jié)劑與pd-1抑制劑(例如pd-l2、ctla4、tim-3、ceacam(如ceacam-1、-3和/或-5)、lag3、vista、btla、tigit、lair1、cd160、2b4和/或tgfr中一或多種)的其它組合。本領(lǐng)域已知或本文公開的任意抗體分子能用于前述檢查點分子抑制劑組合。

免疫檢查點分子的示例性抑制劑

在一個實施方式中，所述pd-1抑制劑是抗pd-1抗體，選自尼魯單抗、派姆單抗或匹地利珠單抗。pd-1抑制劑優(yōu)選是尼魯單抗。

在一些實施方式中，所述抗pd-1抗體是尼魯單抗。尼魯單抗的別名包括mdx-1106、mdx-1106-04、ono-4538或bms-936558。在一些實施方式中，所述抗pd-1抗體是尼魯單抗(cas注冊號：946414-94-4)。尼魯單抗是特異性阻斷pd1的全人igg4單克隆抗體。us8,008,449和wo2006/121168公開了尼魯單抗(克隆5c4)和其它特異結(jié)合pd1的人單克隆抗體。尼魯單抗是優(yōu)選的pd-1抑制劑。

在其它實施方式中，所述抗pd-1抗體是派姆單抗。派姆單抗(商品名keytruda，之前是lambrolizumab，也稱為merck3745、mk-3475或sch-900475)是結(jié)合pd1的人源化igg4單克隆抗體。例如，派姆單抗公開于hamid,o.等.(2013)newenglandjournalofmedicine369(2):134–44,wo2009/114335和us8,354,509。

在一些實施方式中，所述抗pd-1抗體是匹地利珠單抗。匹地利珠單抗(ct-011；curetech)是結(jié)合pd1的人源化igg1k單克隆抗體。匹地利珠單抗和其它人源化抗pd-1單克隆抗體公開于wo2009/101611。其它抗pd-1抗體公開于us8,609,089、us2010028330和/或us20120114649。其它抗pd-1抗體包括amp514(amplimmune)。

在一些實施方式中，所述pd-1抑制劑是免疫粘附素(例如，免疫粘附素包括融合于恒定區(qū)(如免疫球蛋白序列的fc區(qū))的pd-ll或pd-l2胞外或pd-1結(jié)合部分)。在一些實施方式中，所述pd-1抑制劑是amp-224。

在一些實施方式中，所述pd-ll抑制劑是抗pd-ll抗體。在一些實施方式中，所述抗pd-ll抑制劑選自yw243.55.s70、mpdl3280a、medi-4736、msb-0010718c或mdx-1105。

在一個實施方式中，所述pd-ll抑制劑是mdx-1105。mdx-1105也稱為bms-936559，是wo2007/005874所述的抗pd-1抗體。

在一個實施方式中，所述pd-ll抑制劑是yw243.55.s70。yw243.55.s70抗體是wo2010/077634所述的抗pd-ll(重鏈和輕鏈可變區(qū)序列分別示于seqidno.20和21)。

在一個實施方式中，所述pd-ll抑制劑是mdpl3280a(基因泰克(genentech)/羅氏(roche))。mdpl3280a是結(jié)合pd-l1的人fc優(yōu)化igg1單克隆抗體。mdpl3280a和pd-l1的其它人單克隆抗體公開于美國專利號為7,943,743和美國公開號為20120039906的專利。

在其它實施方式中，所述pd-l2抑制劑是amp-224。amp-224是阻斷pd1與b7-h1相互作用的pd-l2fc融合可溶性受體(b7-dcig；amplimmune；如公開于wo2010/027827和wo2011/066342)。

在一個實施方式中，所述lag-3抑制劑是抗lag-3抗體分子。在一個實施方式中，所述lag-3抑制劑是在下文中更詳細(xì)公開的bms-986016。

如下更特別地例示，一或多種上述免疫檢查點分子抑制劑能與ldk378聯(lián)用。

示例性聯(lián)合療法

在一個實施方式中，所述pd-1抑制劑是尼魯單抗(本文也稱為mdx-1106、ono-4538、bms0936558，cas注冊號:946414-94-4)，公開于例如us8,008,449，并具有本文公開的序列(或與其基本相同或相似的序列，例如與指定序列有至少85％、90％、95％相同或更高的序列)。

在另一個實施方式中，所述pd-1抑制劑是派姆單抗(本文也稱為lambrolizumab、mk-3475、mk03475或keytruda)，公開于例如us8,354,509和wo2009/114335，并具有本文公開的序列(或與其基本相同或相似的序列，例如與指定序列有至少85％、90％、95％相同或更高的序列)。

在另一個實施方式中，所述pd-l1抑制劑是msb0010718c(也稱為a09-246-2)，公開于例如wo2013/0179174，并具有本文公開的序列(或與其基本相同或相似的序列，例如與指定序列有至少85％、90％、95％相同或更高的序列)。

在某些實施方式中，所述pd-1抑制劑如抗pd-1抗體(例如尼魯單抗)用于本文所述方法或組合物。例如，pd-1抑制劑如抗pd-1抗體(例如尼魯單抗或派姆單抗)；或pd-l1抑制劑如抗pd-l1抗體(例如msb0010718c)(單獨或聯(lián)合其它免疫調(diào)節(jié)劑)與alk抑制劑ldk378聯(lián)用。在一個實施方式中，一或多種上述組合用于治療疾病，如本文所述疾病(例如表1公開的疾病)。在一個實施方式中，一或多種上述組合用于治療癌，如本文所述癌(例如表1公開的癌)。每一個這些組合將在下文更詳細(xì)討論。

根據(jù)本公開，pd-1抑制劑如抗pd-1抗體(例如尼魯單抗或派姆單抗)；或pd-l1抑制劑如抗pd-l1抗體(例如msb0010718c)(單獨或聯(lián)合其它免疫調(diào)節(jié)劑)與alk抑制劑ldk378聯(lián)用以治療癌，如本文所述癌(例如表1公開的癌，如非小細(xì)胞肺癌)。alk抑制劑ldk378公開于表1或表1引用的出版物。在一個實施方式中，所述alk抑制劑ldk378具有表1提供的結(jié)構(gòu)(化合物或通式結(jié)構(gòu))，或如表1引用的出版物所公開。在一個實施方式中，尼魯單抗、派姆單抗或msb0010718c之一與ldk378聯(lián)用以治療表1所述癌，例如實體瘤如肺癌(例如非小細(xì)胞肺癌(nsclc))、淋巴瘤(例如間變性大細(xì)胞淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤)、炎癥性肌纖維母細(xì)胞瘤(imt)或成神經(jīng)細(xì)胞瘤。在一些實施方式中，nsclc是iiib或iv期nsclc或復(fù)發(fā)性局部晚期或轉(zhuǎn)移nsclc。在一些實施方式中，所述癌(如肺癌、淋巴瘤、炎癥性肌纖維母細(xì)胞瘤或成神經(jīng)細(xì)胞瘤)具有或被鑒定為具有alk重排或易位，例如alk融合。在一個實施方式中，所述alk融合是eml4-alk融合，如本文所述的eml4-alk融合。在某些實施方式中，所述癌在另一alk抑制劑或ros1抑制劑后進(jìn)展，或抵抗或耐受另一alk抑制劑或ros1抑制劑。在一些實施方式中，所述癌在克唑替尼后進(jìn)展，或抵抗或耐受克唑替尼。

ldk378具有以下結(jié)構(gòu)：

本公開特別優(yōu)選的組合是含(i)ldk378或其藥學(xué)上可接受鹽和(ii)尼魯單抗或其藥學(xué)上可接受鹽的藥物組合。

ldk378(色瑞替尼)是間變性淋巴瘤激酶(alk)抑制劑。其化學(xué)式是5-氯-n²-(2-異丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-n⁴-[2-(丙烷-2-磺酰基)-苯基]-嘧啶-2,4-二胺。wo2008/073687公開了制備ldk378的工藝。該化合物經(jīng)美國fda批準(zhǔn)為用于治療間變性淋巴瘤激酶(alk)-陽性轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞肺癌(nsclc)患者，所述患者在克唑替尼后進(jìn)展或不耐受克唑替尼。目前批準(zhǔn)在nsclc中(單獨)使用ldk378的日劑量是空腹口服750mg(即不在就餐2小時內(nèi)施用)。

在臨床研究中，ldk378在750mg劑量組(rd)中治療的246名alk陽性nsclc患者中顯示出高比率的迅速且持久的反應(yīng)。這些患者中，總反應(yīng)率(orr)是58.5％。在144個確認(rèn)有完全響應(yīng)(cr)或部分響應(yīng)(pr)的alk陽性nsclc患者中，86.1％的這些患者在12周內(nèi)實現(xiàn)響應(yīng)，響應(yīng)的中位時間是6.1周。根據(jù)研究人員的評估，估計的中位響應(yīng)持續(xù)時間(dor)長至9.69個月。在所檢查的53.3％的患者中，中位無進(jìn)展存活期(pfs)是8.21個月。重要的是，無論先前alk抑制劑狀態(tài)如何(即患者是否接受過先前的alk抑制劑治療)，色瑞替尼都顯示出這一水平的高抗癌活性。在先前用alk抑制劑治療的患者和未用alk抑制劑治療的患者中分別觀察到54.6％和66.3％的高orr。

然而，轉(zhuǎn)移性alk陽性nsclc仍是不治之癥。利用免疫系統(tǒng)治療nsclc患者代表一種新型的治療方法，尼魯單抗能與ldk378安全組合。涉及靶向試劑ldk378與免疫治療(尼魯單抗)的聯(lián)合療法能改善nsclc患者的無進(jìn)展存活期和最終的總存活期。

色瑞替尼不具有預(yù)期拮抗免疫應(yīng)答的作用機制。此外，色瑞替尼試驗中未經(jīng)常報告免疫相關(guān)不良事件。色瑞替尼與尼魯單抗之間的潛在重疊毒性包括腹瀉、惡心、ast和alt升高、肺炎以及高血糖癥?？紤]到所述兩種化合物的作用機制和因而的安全概況可控制，不期望這些毒性機制相似。

ldk378與尼魯單抗的組合還能用于生產(chǎn)用于alk介導(dǎo)疾病的藥物。所述藥物組合物可包括有效量的ldk378或其藥學(xué)上可接受鹽和尼魯單抗或其藥學(xué)上可接受鹽，用于同時或分開施用以治療癌。同樣地，ldk378能用作藥，其中l(wèi)dk378或其藥學(xué)上可接受鹽與尼魯單抗或其藥學(xué)上可接受鹽聯(lián)合施用。

藥學(xué)上可接受鹽可形成為，例如酸加成鹽，優(yōu)選用有機或無機酸。合適的無機酸是例如氫鹵酸，如鹽酸。合適的有機酸是例如羧酸或磺酸，如富馬酸或甲磺酸。出于分離或純化目的，還能使用藥學(xué)上不可接受鹽，例如苦味酸鹽或高氯酸鹽。出于治療用途，僅使用藥學(xué)上可接受鹽或游離化合物(適用時采用藥物制劑形式)，且因此優(yōu)選這些。鑒于新化合物的游離形式與其鹽形式之間的緊密關(guān)系，上下文中任意提及的游離化合物在適當(dāng)和有利時應(yīng)理解為也指對應(yīng)鹽，所述鹽形式包括能用作中間物的那些鹽，如在純化或鑒定新化合物時。式(i)化合物的鹽優(yōu)選是藥學(xué)上可接受鹽；本領(lǐng)域已知合適的抗衡離子形成的藥學(xué)上可接受鹽。

根據(jù)上述第一個實施方式，本公開涉及藥物組合，尤其是藥物組合產(chǎn)品，其包含上述組合伴侶。

根據(jù)本公開，藥物組合的化合物組分(i)ldk378或其藥學(xué)上可接受鹽和(ii)尼魯單抗或其藥學(xué)上可接受鹽能分開或一起施用。

根據(jù)本公開，藥物組合用作藥，其中l(wèi)dk378和尼魯單抗同時獨立施用或在一定時間間隔內(nèi)分開施用，其中時間間隔允許組合伴侶具有聯(lián)合活性。

本文所用的術(shù)語“藥物組合”指通過在非固定組合中混合或組合活性成分而獲得的產(chǎn)品，所述活性成分例如是分開或一起的(i)ldk378或其藥學(xué)上可接受鹽和(ii)尼魯單抗或其藥學(xué)上可接受鹽。

術(shù)語“組合”指有或沒有聯(lián)用說明書或組合產(chǎn)品說明書的分開的伴侶的劑型。組合的化合物能由相同或不同廠商生產(chǎn)和/或配制。因此，組合伴侶可以是完全分開的藥物劑型或藥物組合物，其也彼此獨立銷售且僅：(i)在醫(yī)生取得組合產(chǎn)品前(如在含本公開化合物和其它治療劑的“成套藥盒”的情況中)提供其聯(lián)用的說明書；(ii)在臨施用前由醫(yī)生自身(或在醫(yī)生指導(dǎo)下)提供其聯(lián)用的說明書；(iii)通過醫(yī)生或醫(yī)務(wù)人員向患者自身提供其聯(lián)用的說明書。

術(shù)語“非固定組合”指活性成分如ldk378和尼魯單抗分開或一起施用、同時獨立施用或在一定時間間隔內(nèi)分開施用，其中這類施用在所需對象中提供治療有效水平的活性成分。后者還應(yīng)用于雞尾酒療法，如施用3種或更多活性成分。該術(shù)語特別定義“成套藥盒”，在此意義上，組合伴侶例如，如本文所定義的(i)ldk378和(ii)尼魯單抗(和(若存在)其它一或多種助劑)能彼此獨立給藥。

術(shù)語“聯(lián)合治療有效”指化合物在分開或一起施用、同時獨立施用或在一定時間間隔內(nèi)分開施用以治療所需對象如溫血動物尤其是人時，顯示協(xié)同相互作用。

顯示本公開的組合具備能用作藥的有益治療特性，如協(xié)同相互作用、強烈的體內(nèi)和體外抗腫瘤反應(yīng)。其特征使其尤其適用于治療癌。

能用本公開組合治療的合適癌包括但不限于間變性大細(xì)胞淋巴瘤(alcl)、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、肺癌、非小細(xì)胞肺癌(nsclc)。在一個優(yōu)選實施方式中，所述癌是nsclc。

除此之外或另外，本公開所述組合產(chǎn)品能被特別施用用于癌癥治療，與化療、放療、免疫療法、手術(shù)干預(yù)或其組合聯(lián)合。如上述，在其它治療策略背景下，長期療法同樣有可能是輔助療法。其它可能的治療是例如在有風(fēng)險的患者中在腫瘤消退或甚至化學(xué)預(yù)防療法后維持患者狀態(tài)的療法。

術(shù)語“治療”(treat、treating或treatment)任意疾病或紊亂指緩解疾病或紊亂(即減緩或阻滯或減少疾病發(fā)展或其至少一種臨床癥狀)，以預(yù)防或延遲疾病或紊亂的發(fā)生或發(fā)展或進(jìn)展。另外，這些術(shù)語指減輕或緩解至少一種物理參數(shù)，包括患者可能無法識別的那些參數(shù)，以及調(diào)節(jié)身體上(如可識別癥狀的穩(wěn)定)、生理上(如物理參數(shù)的穩(wěn)定)或兩者都有的疾病或紊亂。

術(shù)語“治療”包括，例如，將組合伴侶治療性施用于需要該治療的溫血動物，尤其是人，旨在治愈疾病或產(chǎn)生疾病消退或疾病進(jìn)展延遲的效果。

ldk378和尼魯單抗的組合能用于生產(chǎn)用于上述alk介導(dǎo)疾病的藥物。同樣地，該組合能用于上述alk治療方法，所述方法包括根據(jù)本公開向所需對象施用有效量的(i)ldk378或其藥學(xué)上可接受鹽和(ii)尼魯單抗或其藥學(xué)上可接受鹽的組合。

例如，術(shù)語“聯(lián)合(治療)活性”可指化合物可以一定時間間隔分開或依序(采用按時間順序交叉方式，特別是順序特異性方式)給予，從而其在待治療的溫血動物尤其是人中優(yōu)選仍顯示(優(yōu)選協(xié)同)相互作用(聯(lián)合治療效果)。聯(lián)合治療效果能依血液水平測定：顯示兩種化合物在至少某些時間間隔中均存在于待治療人的血液內(nèi)，但這并不排除以下情況：所述化合物盡管不同時存在于血液中，但是其具有聯(lián)合活性。

本公開還描述治療alk介導(dǎo)疾病的方法，其中組合(i)ldk378或其藥學(xué)上可接受鹽和(ii)尼魯單抗或其藥學(xué)上可接受鹽分開或一起。

本公開涉及藥物組合物，包括有效量的(i)ldk378或其藥學(xué)上可接受鹽和(ii)尼魯單抗或其藥學(xué)上可接受鹽。如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知，藥物組合物能用藥學(xué)上可接受載劑制備，其可以是例如任意合適的藥用賦形劑。所述載劑包括任意和所有粘合劑、填充劑、溶劑、分散介質(zhì)、包衣、表面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如抗菌劑、抗真菌劑)、等滲劑、吸收延遲劑、鹽、防腐劑、藥物穩(wěn)定劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、調(diào)味劑、染料等和其組合(參見例如《雷明頓藥物科學(xué)》(remington'spharmaceuticalsciences),第18版,麥克出版公司(mackprintingcompany),1990,第1289-1329頁；《雷明頓：藥學(xué)科學(xué)與實踐》(remington:thescienceandpracticeofpharmacy),第21版,醫(yī)藥出版社(pharmaceuticalpress)2011；和其后續(xù)版本)。除非任意常規(guī)載劑與活性成分不相容，否則考慮其在治療或藥物組合物中的應(yīng)用。還可遵循涉及藥物組合物的本文其它公開內(nèi)容。

根據(jù)本公開，組合伴侶能同時分開施用或在一定時間間隔內(nèi)采用分開的單位劑型獨立施用。兩種治療伴侶可以已知方式制備，且適合腸部如口服或直腸、局部和胃腸外施用于包括溫血動物在內(nèi)的所需對象，尤其是人。例如，合適的藥物組合物包含約0.1％-約99.9％活性成分。

藥物組合物能加工成制備最終劑型-片劑或膠囊。這能通過任選與一或多種賦形劑一起擠壓組合的終混合物實現(xiàn)。例如，擠壓能用旋轉(zhuǎn)壓片機完成?？芍苽洳煌螤畹钠瑒?圓形、橢圓形或其它合適形狀)。為延遲胃腸道中崩解和吸收并從而提供長期持續(xù)作用，片劑能通過已知技術(shù)來包衣或不包衣。如果沒有另外說明，這些以已知方式制備，如通過混合、?；?、包糖衣工藝。口服應(yīng)用的制劑可呈現(xiàn)為硬明膠膠囊，其中活性成分與惰性固體稀釋劑混合，例如碳酸鈣、磷酸鈣或纖維素基賦形劑，或作為軟明膠膠囊，其中活性成分與水或油介質(zhì)混合，例如橄欖油、液體石蠟或花生油。

術(shù)語“藥學(xué)上可接受”指適于接觸人和動物組織的那些化合物、材料、組合物和/或劑型，而沒有過度毒性、刺激、過敏反應(yīng)和其它問題或并發(fā)癥，并具有合理的效益/風(fēng)險比。

本公開另一方面是用作藥的ldk378，其中l(wèi)dk378或其藥學(xué)上可接受鹽與尼魯單抗或其藥學(xué)上可接受鹽聯(lián)合施用，用于治療alk介導(dǎo)疾病如癌。

癌和對象

術(shù)語“alk介導(dǎo)的疾病”指其中激酶活性導(dǎo)致調(diào)控通路活性異常的疾病，包括細(xì)胞中過表達(dá)、突變或相對缺乏其它調(diào)控通路活性導(dǎo)致過度細(xì)胞增殖，如癌。alk介導(dǎo)的疾病可以是非小細(xì)胞肺癌(nsclc)，由棘皮動物微管相關(guān)蛋白樣4(eml4)-間變性淋巴瘤激酶(alk)易位驅(qū)動。alk是胰島素受體超家族的受體酪氨酸激酶，在神經(jīng)發(fā)育和功能中發(fā)揮作用。alk在數(shù)個腫瘤類型中易位、突變或擴(kuò)增，因此除了nsclc，alk介導(dǎo)的疾病還包括成神經(jīng)細(xì)胞瘤和間變性大細(xì)胞淋巴瘤(alcl)。alk改變在這些腫瘤的發(fā)病機理中起關(guān)鍵作用。除了eml4之外，在alk介導(dǎo)的疾病中可能相關(guān)的其它alk融合伴侶是kif5b、tfg、klc1和ptpn3，但預(yù)期不如eml4常見。臨床前實驗顯示多種alk融合伴侶介導(dǎo)alk的非配體依賴性二聚化/寡聚化，引起體內(nèi)外的組成型激酶活性和有效致癌活性，因此一旦易位，alk就驅(qū)動，即介導(dǎo)疾病。

在本文所述組合物和方法的某些實施方式中，過度增殖性疾病或病癥如癌包括但不限于例如癌，包括但不限于實體瘤、軟組織腫瘤(如血液系統(tǒng)腫瘤、白血病、淋巴瘤或骨髓瘤)和任意上述癌的轉(zhuǎn)移病灶。在一個實施方式中，所述癌是實體瘤。實體瘤示例包括多個器官系統(tǒng)的惡性腫瘤，如肉瘤、腺癌和癌，例如影響肺、乳房、卵巢、淋巴、胃腸(如結(jié)腸)、肛門、生殖器和泌尿生殖道(如腎、尿路上皮、膀胱細(xì)胞、前列腺)、cns(如腦、神經(jīng)或膠質(zhì)細(xì)胞)、頭頸部、皮膚(如黑素瘤)和胰腺的那些，以及包括惡性腫瘤在內(nèi)的腺癌，如結(jié)腸癌、直腸癌、腎細(xì)胞癌、肝癌、非小細(xì)胞肺癌、小腸癌和食管癌。所述癌可以是早期、中期、晚期或轉(zhuǎn)移性癌。

在一個實施方式中，所述癌選自表1公開的癌。例如，癌能選自實體瘤，如肺癌(例如非小細(xì)胞肺癌(nsclc)(如有鱗狀和/或非鱗狀組織學(xué)的nsclc))、結(jié)直腸癌、黑素瘤(例如晚期黑素瘤)、頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細(xì)胞癌(hnscc))、消化/胃腸道癌癥、胃癌、神經(jīng)系統(tǒng)癌癥、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(例如多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤)、卵巢癌、腎癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、肝癌、乳腺癌、肛門癌、胃食管癌、甲狀腺癌、宮頸癌、炎癥性肌纖維母細(xì)胞瘤(imt)、成神經(jīng)細(xì)胞瘤；或血液系統(tǒng)腫瘤(例如選自霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、間變性大細(xì)胞淋巴瘤、淋巴細(xì)胞性白血病或骨髓性白血病)。

在一個實施方式中，所述癌是非小細(xì)胞肺癌(nsclc)，如alk+nsclc。本文所用的術(shù)語“alk+非小細(xì)胞肺癌”或“alk+nsclc”指具有活化(如組成型活化)間變性淋巴瘤激酶活性或具有間變性淋巴瘤激酶(alk)基因重排或易位的nsclc。典型地，相較一般nsclc群體，alk+nsclc患者一般更年輕，有輕度吸煙史(如<10年煙齡)或沒有吸煙史，呈現(xiàn)較低的東部腫瘤協(xié)作組表現(xiàn)狀態(tài)，或可具有更具侵襲性的疾病，并因此經(jīng)歷更早的疾病進(jìn)展(shaw等.jclinoncol.2009；27(26):4247-4253；sasaki等.eurjcancer.2010；46(10):1773-1780；shaw等.nengljmed.2013；368(25):2385-2394；socinski等.jclinoncol.2012；30(17):2055-2062；yang等.jthoraconcol.2012；7(1):90–97)。

在一個實施方式中，所述癌如nsclc具有alk基因重排或易位。在一個實施方式中，所述alk基因重排或易位導(dǎo)致融合(如alk啟動子區(qū)上游的融合)。在某些實施方式中，所述融合引起激酶活性組成型激活。

在一個實施方式中，所述融合是eml4-alk融合。示例性eml4-alk融合蛋白包括但不限于e13；a20(v1),e20；a20(v2),e6a/b；a20(v3a/b),e14；a20(v4),e2a/b；a20(v5a/b),e13b；a20(v6),e14；a20(v7),e15；a20(“v4”)或e18；a20(v5)(choi等.cancerres.2008；68(13):4971-6；horn等.jclinoncol.2009；27(26):4232-5；koivunen等.clincancerres.2008；14(13):4275-83；soda等.nature.2007；448(7153):561-6；takeuchi等.clincancerres.2008；14(20):6618-24；takeuchi等.clincancerres.2009；15(9):3143-9；wong等.cancer.2009年4月15日；115(8):1723-33)。

在某些實施方式中，所述alk基因融合非eml4伴侶。在一個實施方式中，所述融合是kif5b-alk融合。在另一個實施方式中，所述融合是tfg-alk融合。示例性kif5b-alk和tfg-alk融合描述于例如takeuchi等.clincancerres.2009；15(9):3143-9,rikova等.cell.2007；131(6):1190-203中。

alk基因重排或易位或具有alk基因重排或易位的癌細(xì)胞能例如使用熒光原位雜交(fish)檢測到，例如用alk分離探針。

本文公開的方法和組合物用于治療與上述癌癥相關(guān)的轉(zhuǎn)移病灶。

術(shù)語“所需對象”指溫血動物，尤其是生物學(xué)上、醫(yī)學(xué)上受益或通過治療使生命質(zhì)量獲益的人。能被施用組合的對象或患者涵蓋哺乳動物和非哺乳動物。哺乳動物的示例包括但不限于人、黑猩猩、猿、猴、牛、馬、綿羊、山羊、豬、兔、狗、貓、大鼠、小鼠、豚鼠等。非哺乳動物的示例包括但不限于鳥、魚等。在一個最優(yōu)選的實施方式中，所述對象或患者是人。其可以是診斷為需要治療本文所公開疾病或紊亂的人。

在其它實施方式中，所述對象是哺乳動物，如靈長類動物，優(yōu)選高等靈長類例如人(如患有、或有風(fēng)險患有本文所述疾病的患者)。在一個實施方式中，所述對象需要提高免疫應(yīng)答。在一個實施方式中，所述對象患有、或有風(fēng)險患有本文所述疾病，如本文所述癌癥。在某些實施方式中，所述對象免疫減弱或有免疫減弱風(fēng)險。例如，對象正接受或已接受化療和/或放療。另外，或當(dāng)聯(lián)合時，感染導(dǎo)致對象免疫減弱或有免疫減弱風(fēng)險。

在一個實施方式中，所述對象(例如具有肺癌(如非小細(xì)胞肺癌)、淋巴瘤(如間變性大細(xì)胞淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤)、炎癥性肌纖維母細(xì)胞瘤或成神經(jīng)細(xì)胞瘤的對象)正在或已用過另一alk抑制劑和/或ros1抑制劑如克唑替尼治療。例如，色瑞替尼能以750mg或更低的日口服劑量施用，如600mg或更低，如450mg或更低。

在另一個實施方式中，所述對象或癌(例如肺癌(如非小細(xì)胞肺癌)、淋巴瘤(如間變性大細(xì)胞淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤)、炎癥性肌纖維母細(xì)胞瘤或成神經(jīng)細(xì)胞瘤)在另一alk抑制劑和/或ros1抑制劑后進(jìn)展或抵抗或耐受另一alk抑制劑和/或ros1抑制劑，如克唑替尼。

在另一個實施方式中，所述對象或癌(例如肺癌(如非小細(xì)胞肺癌)、淋巴瘤(如間變性大細(xì)胞淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤)、炎癥性肌纖維母細(xì)胞瘤或成神經(jīng)細(xì)胞瘤)有以下風(fēng)險：進(jìn)展或發(fā)展出對另一alk抑制劑和/或ros1抑制劑如克唑替尼的抗性或耐受性。

在其它實施方式中，所述對象或癌抵抗或耐受酪氨酸激酶抑制劑(tki)如egfr酪氨酸激酶抑制劑，或有發(fā)展對其抵抗或耐受性的風(fēng)險。

在一些實施方式中，所述對象或癌具有無法檢測的egfr突變、kras突變或兩者都有。

劑量和施用

本文所述藥劑的劑量和治療方案能由技術(shù)人員確定。術(shù)語“有效量”指由研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)生或其他臨床醫(yī)生探尋的會引起細(xì)胞、組織、器官、系統(tǒng)、動物或人類中生物或醫(yī)學(xué)響應(yīng)的主題化合物的量。本公開組合所用各組合伴侶藥劑的有效劑量可根據(jù)所用特定化合物或藥物組合物、施用模式、所治療病癥、所治療病癥的嚴(yán)重性而變化。掌握普通技術(shù)的醫(yī)生、臨床醫(yī)生或獸醫(yī)能容易確定并處方預(yù)防、抵抗或阻滯病癥進(jìn)展所需的有效量藥物。在產(chǎn)生功效范圍內(nèi)達(dá)到藥物濃度的最優(yōu)精度需要基于組合藥物到靶位點可及性動力學(xué)的方案。這涉及考慮到藥物的分布、平衡和消除。

本公開還描述了根據(jù)本公開采用“成套藥盒”形式的用于聯(lián)合施用的藥物組合。組合可指一個劑量單位形式的固定組合，或用于聯(lián)合施用的成套藥盒，其中(i)ldk378或其藥學(xué)上可接受鹽和(ii)尼魯單抗或其藥學(xué)上可接受鹽可同時獨立施用或在一定時間間隔內(nèi)分開施用，尤其是這些時間間隔允許組合伴侶顯示共同(＝聯(lián)合)效果。所述獨立制劑或成套制劑、產(chǎn)品或組合物隨后能例如同時或按時間順序交叉施用，即在不同時間點且就成套藥盒任意部分而言時間間隔相同或不同。在本公開的聯(lián)合療法中，根據(jù)本公開使用的化合物可由相同或不同廠商生產(chǎn)和/或配制。此外，組合伴侶可(i)在醫(yī)生獲得組合產(chǎn)品前(例如，在含ldk378和尼魯單抗的藥盒的情況中)；(ii)由醫(yī)生自身在施用前(或在醫(yī)生指導(dǎo)下)；(iii)如在依序施用本公開化合物和另一治療劑期間在患者自身中被匯集成聯(lián)合療法。在一個實施方式中，所述組合的效果是協(xié)同的。

本公開組合或藥物組合物的治療有效劑量取決于對象種類、體重、年齡和個體狀況、所治療紊亂或疾病或其嚴(yán)重度，并能通過標(biāo)準(zhǔn)臨床技術(shù)確定。另外，體外或體內(nèi)試驗可任選用于協(xié)助鑒定最優(yōu)劑量范圍。待用的精確劑量還可取決于施用途徑和所治療病癥的嚴(yán)重度，并能根據(jù)例如發(fā)表的臨床研究基于從業(yè)者和各對象情況判斷來決定。一般，顯示令人滿意的結(jié)果是以150mg-750mgldk378的口服日劑量系統(tǒng)性獲得的。大部分情況下，ldk378的日劑量可為300mg-750m。

ldk378一般以約100-1000mg口服劑量施用，如約150mg-900mg、約200mg-800mg、約300mg-700mg或約400mg-600mg，例如約150mg、300mg、450mg、600mg或750mg。在某些實施方式中，ldk378以約750mg或更低的口服劑量施用，如約600mg或更低，例如約450mg或更低。在某些實施方式中，ldk378伴隨食物施用。在其它實施方式中，在禁食條件下給藥。施用方案可變，例如從每隔一天到每天，每天二次或三次。在一個實施方式中，ldk378每日施用。在一個實施方式中，ldk378以約150mg-750mg的口服劑量每日施用，與食物一起或在禁食條件下。在一個實施方式中，ldk378在禁食條件下以約750mg的口服劑量每日施用。在一個實施方式中，ldk378通過膠囊或片劑以約750mg的口服劑量每日施用。在另一個實施方式中，ldk378通過膠囊或片劑以約600mg的口服劑量每日施用。在另一個實施方式中，ldk378通過膠囊或片劑以約450mg的口服劑量每日施用。

與尼魯單抗聯(lián)合施用時，ldk378能以450mg與3mg/kg尼魯單抗施用，600mgldk378與3mg/kg尼魯單抗施用，或300mgldk378與3mg/kg尼魯單抗施用。用于聯(lián)合療法的兩種化合物的最優(yōu)選劑量是600mgldk378與3mg/kg尼魯單抗。尤其是600mgldk378與3mg/kg尼魯單抗是治療alk陽性(如eml4-alk)nsclc的最優(yōu)選給藥方案。尼魯單抗可作為固定劑量輸液每2周施用。色瑞替尼與低脂餐一起服用?？山邮苌鹛婺嵩跀z入低脂餐后30分鐘內(nèi)施用?；颊邞?yīng)在攝入色瑞替尼與低脂餐后至少1小時避免吃飯。預(yù)期伴隨每天膳食攝入的色瑞替尼施用能降低胃腸道事件發(fā)生率和/或嚴(yán)重度。結(jié)合從另一臨床研究估計的吸收參數(shù)，使用在一個臨床研究中建立的alk陽性癌癥患者群體藥代動力學(xué)模型，并如該模型臨床試驗?zāi)M所預(yù)測，相對于以750mg推薦ii期劑量空腹施用的色瑞替尼，估計伴隨每天低脂餐攝入的450mg和600mg色瑞替尼穩(wěn)態(tài)暴露在20％內(nèi)。

“低脂餐”在本文中指含1.5-15克脂肪和約100-500總卡路里的膳食。

在某些實施方式中，所述抗pd-1抗體分子(如皮下或靜脈內(nèi))注射施用，劑量為約1-30mg/kg，如約5-25mg/kg、約10-20mg/kg、約1-5mg/kg或約3mg/kg。給藥方案可變，例如從每周一次到每2、3或4周一次。在一個實施方式中，所述抗pd-1抗體分子以約10-20mg/kg劑量每隔一周施用。

在一個實施方式中，所述抗pd-1抗體分子如尼魯單抗以每2周約1mg/kg-3mg/kg劑量靜脈內(nèi)施用，例如約1mg/kg、2mg/kg或3mg/kg。在一個實施方式中，所述抗pd-1抗體分子如尼魯單抗以約2mg/kg劑量、3周間隔靜脈內(nèi)施用。

本文所述聯(lián)合療法能全身(如口服、胃腸外、皮下、靜脈內(nèi)、直腸、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、經(jīng)皮或者通過吸入或腔內(nèi)安裝)、局部施用于對象，或應(yīng)用到粘膜如鼻、喉嚨和支氣管。

本文所述方法和組合物能與其他藥劑或治療模式聯(lián)用。聯(lián)合療法可同時或以任意順序依序施用。能使用抗pd-1或pd-l1抗體分子和(如本文所述的)其它治療劑、程序或模式的任意組合和順序。聯(lián)合療法可在活動性疾病階段或疾病緩解或活動性較低的疾病階段中施用。聯(lián)合療法能在其它治療前、與治療同步、治療后或疾病緩解期間施用。

在某些實施方式中，本文所述方法和組合物與以下一或多種聯(lián)合施用：其它抗體分子、化療、其它抗癌療法(如靶向抗癌療法、基因治療、病毒治療、rna治療骨髓移植、納米療法或溶瘤細(xì)胞藥物)、細(xì)胞毒性藥劑、基于免疫的療法(如細(xì)胞因子或基于細(xì)胞的免疫療法)、手術(shù)治療(如乳房腫瘤切除術(shù)或乳房切除術(shù))或輻射治療，或上述任意的組合。額外療法可采用輔助或新輔助療法形式。在一些實施方式中，額外療法是酶抑制劑(如小分子酶抑制劑)或轉(zhuǎn)移抑制劑。能聯(lián)合施用的示例性細(xì)胞毒性藥劑包括抗微管劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、抗代謝物、有絲分裂抑制劑、烷化劑、蒽環(huán)類藥物、長春花生物堿、插入劑、能干擾信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的藥劑、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的藥劑、蛋白酶體抑制劑和輻射(如局部或全身照射(例如γ輻照)。在其它實施方式中，額外療法是手術(shù)或輻射，或其組合。在其它實施方式中，額外療法是靶向mtor通路的療法，hsp90抑制劑或微管蛋白抑制劑。

另外或與上述組合聯(lián)合時，本文所述方法和組合物能與以下一或多種聯(lián)合施用：疫苗如治療性癌疫苗；或其它形式的細(xì)胞免疫治療。

在另一個實施方式中，所述聯(lián)合療法與奧沙利鉑、甲酰四氫葉酸或5-fu(如folfox共治療)中的1種、2種或全部聯(lián)用?；蛘呗?lián)合時，組合還包括vegf抑制劑(如本文公開的vegf抑制劑)。在一些實施方式中，所述用該組合治療的癌癥選自黑素瘤、結(jié)直腸癌、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、血液系統(tǒng)腫瘤或腎細(xì)胞癌。所述癌可處于早期、中期或晚期。

在其它實施方式中，所述聯(lián)合療法與酪氨酸激酶抑制劑(如阿西替尼)一起施用以治療腎細(xì)胞癌和其它實體瘤。

在其它實施方式中，所述聯(lián)合療法與4-1bb受體靶向劑(如通過4-1bb(cd-137)刺激信號傳遞的抗體，例如pf-2566)一起施用。在一個實施方式中，所述聯(lián)合療法與酪氨酸激酶抑制劑(如阿西替尼)和4-1bb受體靶向劑聯(lián)合施用。

本文提及的所有出版物、專利申請、專利和其它參考文獻(xiàn)通過引用全文納入。

本公開的其它特征、目標(biāo)和優(yōu)勢通過說明書和附圖以及權(quán)利要求而顯見。

附圖說明

圖1顯示在體外有或沒有l(wèi)dk378下h3122細(xì)胞中的pd-l1mrna表達(dá)的圖示。h3122細(xì)胞是有alk易位的非小細(xì)胞肺癌(nsclc)細(xì)胞。

表1的簡要說明

表1是治療劑ldk378的概括，其能與本文所述免疫調(diào)節(jié)劑(例如一或多種：共刺激分子的激活劑和/或免疫檢查點分子的抑制劑)聯(lián)合施用。表1從左至右提供了ldk378的：第二治療劑的名稱和/或命名、化合物結(jié)構(gòu)、公開化合物的專利公開、選定適應(yīng)癥和通式結(jié)構(gòu)。

表1

發(fā)明詳述

公開了方法和組合物，包括免疫調(diào)節(jié)劑(例如一或多種：共刺激分子的激活劑和/或免疫檢查點分子的抑制劑)與第二治療劑ldk378的組合。在一個實施方式中，免疫檢查點分子的抑制劑(例如一或多種pd-1、pd-l1、lag-3、tim-3、或ctla4的抑制劑)能聯(lián)合第二治療劑ldk378。本文所述組合能例如在癌癥治療中提供有益效果，如抗癌效果提高、毒性降低和/或副作用減少。例如，免疫調(diào)節(jié)劑、第二治療劑或這兩者都能以與單一療法劑量相比達(dá)到同一治療效果所需更低的劑量施用。

術(shù)語“程序性死亡配體1”或“pd-1”包括哺乳動物亞型，如人pd-1、人pd-1的種同源物和含至少一個與pd-1共同表位的類似物。pd-1如人pd-1的氨基酸序列為本領(lǐng)域已知，如shinoharat等.(1994)genomics23(3):704-6；fingerlr,等.gene(1997)197(1-2):177-87。

術(shù)語“pd-配體1”或“pd-l1”包括哺乳動物亞型，如人pd-1、人pd-l1的種同源物和含至少一個與pd-l1共同表位的類似物。pd-l1如人pd-l1的氨基酸序列為本領(lǐng)域已知。

術(shù)語“淋巴細(xì)胞激活基因-3”或“l(fā)ag-3”包括所有哺乳動物亞型，如人lag-3、人lag-3的種同源物和含至少一個與lag-3共同表位的類似物。lag-3如人lag-3的氨基酸和核苷酸序列為本領(lǐng)域已知，例如triebel等.(1990)j.exp.med.171:1393-1405。

本文所用的“tim-3”指th1(t輔助1)細(xì)胞上表達(dá)的跨膜受體蛋白。tim-3在體內(nèi)調(diào)節(jié)免疫和耐受性中起作用(參見hastings等.,eurjimmunol.2009sep；39(9):2492-501)。

術(shù)語“癌胚抗原相關(guān)粘附分子”或“ceacam”包括所有家族成員(如ceacam-1、ceacam-3或ceacam-5)、哺乳動物亞型如人ceacam、人ceacam的種同源物和含至少一個與ceacam共同表位的類似物。ceacam如人ceacam的氨基酸序列為本領(lǐng)域已知，例如hinoda等.(1988)proc.natl.acad.sci.u.s.a.85(18),6959-6963；zimmermannw.等.(1987)proc.natl.acad.sci.u.s.a.84(9),2960-2964；thompsonj.等.(1989)biochem.biophys.res.commun.158(3),996-1004。

其他術(shù)語如下所定義并貫穿全篇申請。

本文所用的冠詞“一個”和“一種”指一種或大于一種(如至少一種)文章的語法對象。

除非上下文另有明確說明，本文所用的術(shù)語“或”指術(shù)語“和/或”，并可互換使用。

“約”和“大致”一般應(yīng)指根據(jù)測量的性質(zhì)或精度，所測量數(shù)目的誤差可接受程度。示例性誤差程度是在給定值或值范圍的百分之20(％)以內(nèi)，通常10％以內(nèi)，更通常5％以內(nèi)。

本公開的組合物和方法所涵蓋的多肽和核酸具有指定序列，或與其基本相同或相似的序列，如與指定序列有至少85％、90％、95％相同或更高的序列。在氨基酸序列的上下文中，本文所用的術(shù)語“基本相同”指第一氨基酸含有足夠或最少數(shù)目的氨基酸殘基，其i)與第二氨基酸序列的對齊氨基酸殘基相同或ii)是第二氨基酸序列的對齊氨基酸殘基的保守取代，從而第一和第二氨基酸序列能具有共同結(jié)構(gòu)域和/或共同功能活性。例如，含共同結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列具有與參比序列如本文所提供序列至少約85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的一致性。

在核苷酸序列的上下文中，本文所用的術(shù)語“基本相同”指第一核酸序列含有足夠或最少數(shù)目的核苷酸，所述核苷酸與第二核酸序列的對齊核苷酸相同，從而第一和第二核苷酸序列編碼具有共同功能活性的多肽，或編碼共同結(jié)構(gòu)性多肽結(jié)構(gòu)域或共同功能性多肽活性。例如，核苷酸序列具有與參比序列如本文所提供序列至少約85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的一致性。

術(shù)語“功能變體”指多肽，具有與天然產(chǎn)生序列基本相同的氨基酸序列，或由基本相同的核苷酸序列編碼，并且能具有天然產(chǎn)生序列的一或多種活性。

如下計算序列之間的同源性或序列一致性(術(shù)語在本文中互換使用)。

為確定兩個氨基酸序列或兩個核酸序列的百分比一致性，出于最優(yōu)的比較目的對齊序列(如空位能在第一和第二氨基酸或核酸序列之一或兩者引入以用于最優(yōu)比對，且非同源序列可出于比較目的而忽略)。在一個優(yōu)選實施方式中，出于比較目的對齊的參比序列長度是至少30％，優(yōu)選至少40％，更優(yōu)選至少50％、60％，且甚至更優(yōu)選至少70％、80％、90％、100％的參比序列長度。然后比較在對應(yīng)氨基酸位置或核苷酸位置處的氨基酸殘基或核苷酸。當(dāng)?shù)谝恍蛄兄械奈恢帽慌c第二序列對應(yīng)位置相同的氨基酸殘基或核苷酸占據(jù)時，那么該位置的分子相同(本文所用氨基酸或核酸的“一致性”等于氨基酸或核酸的“同源性”)。

兩個序列之間的百分比一致性是考慮了空位數(shù)和各空位長度的序列共有相同位置數(shù)目的函數(shù)，所述空位需要被引入用于兩個序列的最優(yōu)比對。

在兩個序列之間比較序列和確定百分比一致性能用數(shù)學(xué)算法完成。在一個優(yōu)選實施方式中，兩個氨基酸序列之間的百分比一致性用needleman和wunsch((1970)j.mol.biol.48:444-453)算法測定，所述算法被納入gcg軟件包(可獲自http://www.gcg.com)的gap程序，采用blossum62矩陣或pam250矩陣，空位權(quán)重是16、14、12、10、8、6或4，且長度權(quán)重是1、2、3、4、5或6。在另一個優(yōu)選實施方式中，兩個核苷酸序列之間的百分比一致性用gcg軟件包(可獲自http://www.gcg.com)的gap程序測定，其采用nwsgapdna.cmp矩陣，空位權(quán)重是40、50、60、70或80且長度權(quán)重是1、2、3、4、5或6。尤其優(yōu)選的參數(shù)集(和除非另有指定否則應(yīng)使用的參數(shù))是blossum62評分矩陣，空位罰分為12，空位延伸罰分為4，移碼空位罰分為5。

兩個氨基酸或核苷酸序列之間的百分比一致性能用e.meyers和w.miller((1989)cabios,4:11-17)算法測定，所述算法被納入align程序(2.0版)，采用pam120權(quán)重殘基表，空位長度罰分為12，空位罰分為4。

為例如鑒定其他家族成員或相關(guān)序列，本文所述核酸和蛋白序列能被用做“查詢序列”以進(jìn)行對公開數(shù)據(jù)庫的搜索。這類搜索能用altschul等.(1990)j.mol.biol.215:403-10的nblast和xblast程序(2.0版)進(jìn)行。blast核苷酸搜索能用nblast程序進(jìn)行，得分＝100，字長＝12，以獲得與本公開核酸分子同源的核苷酸序列。blast蛋白搜索能用xblast程序進(jìn)行，得分＝50，字長＝3，以獲得與本公開蛋白分子同源的氨基酸序列。為獲得出于比較目的的帶空位排列，可采用帶空位的blast，如altschul等.,(1997)nucleicacidsres.25:3389-3402所述。當(dāng)采用blast和帶空位的blast程序時，可使用各程序(如xblast和nblast)的默認(rèn)參數(shù)。參見http://www.ncbi.nlm.nih.gov。

本文所用的術(shù)語“在低嚴(yán)謹(jǐn)、中等嚴(yán)謹(jǐn)、高嚴(yán)謹(jǐn)或極高嚴(yán)謹(jǐn)條件下雜交”描述雜交和洗滌的條件。進(jìn)行雜交反應(yīng)的指南參見《最新分子生物學(xué)實驗指南》(currentprotocolsinmolecularbiology),紐約約翰威利父子出版公司(johnwiley&sons),(1989),6.3.1-6.3.6，其通過引用納入。水性和非水性方法描述于該參考文獻(xiàn)且可任意使用。本文提及的特異雜交條件如下：1)在約45c、6x氯化鈉/檸檬酸鈉(ssc)中的低嚴(yán)謹(jǐn)雜交條件，然后是在至少50℃的0.2xssc、0.1％sds中的2次洗滌(低嚴(yán)謹(jǐn)條件的洗滌溫度能增加到55℃)；2)在約45c、6xssc中的中等嚴(yán)謹(jǐn)雜交條件，然后是在60℃的0.2xssc、0.1％sds中的一次或多次洗滌；3)在約45c、6xssc中的高嚴(yán)謹(jǐn)雜交條件，然后是在65℃的0.2xssc、0.1％sds中的一次或多次洗滌；并優(yōu)選4)極高嚴(yán)謹(jǐn)雜交條件是在65℃的0.5m磷酸鈉、7％sds，然后是在65℃的0.2xssc、1％sds中的一次或多次洗滌。極高嚴(yán)謹(jǐn)條件(4)是優(yōu)選條件，且除非另有規(guī)定否則應(yīng)當(dāng)使用。

應(yīng)理解本公開的分子可具有對其功能沒有重大影響的額外保守或非必需氨基酸取代。

術(shù)語“氨基酸”意在涵蓋無論是天然還是合成的所有分子，其包括氨基官能團(tuán)和酸官能團(tuán)并且能被納入天然產(chǎn)生氨基酸的聚合物。示例性氨基酸包括天然產(chǎn)生氨基酸；其類似物、衍生物和同類物；有變體側(cè)鏈的氨基酸類似物；和任意上述的所有立體異構(gòu)體。本文所用的術(shù)語“氨基酸”包括d-或l-光學(xué)異構(gòu)體和肽模擬物。

“保守氨基酸置換”是其中氨基酸殘基被具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基取代的置換。本領(lǐng)域已定義了具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基家族。這些家族包括帶有堿性側(cè)鏈(如賴氨酸、精氨酸、組氨酸)、酸性側(cè)鏈(如天冬氨酸、谷氨酸)、不帶電側(cè)鏈(如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非極性側(cè)鏈(如丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β分支側(cè)鏈(如蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)和芳香族側(cè)鏈(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)的氨基酸。

術(shù)語“多肽”、“肽”和“蛋白”(若是單鏈)在本文中互換使用，指任意長度的氨基酸聚合物。聚合物可以是直鏈或支鏈，可包括修飾氨基酸，且可被非氨基酸中斷。該術(shù)語還包括經(jīng)修飾的氨基酸聚合物，例如二硫鍵形成、糖基化、脂化、乙?；⒘姿峄蛉我馄渌僮?，如綴合標(biāo)記組分。多肽能分離自天然來源，能通過重組技術(shù)從真核或原核宿主生成，或可以是合成過程的產(chǎn)物。

術(shù)語“核酸”、“核酸序列”、“核苷酸序列”或“多核苷酸序列”和“多核苷酸”互換使用。其指任意長度核苷酸的聚合形式，包括脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其類似物。多核苷酸可以是單鏈或雙鏈，且如果是單鏈，則可以是編碼鏈或非編碼(反義)鏈。多核苷酸能包括修飾核苷酸，如甲基化核苷酸和核苷酸類似物。核苷酸序列可被非核苷酸組分中斷。多核苷酸可在聚合后進(jìn)一步修飾，如綴合標(biāo)記組分。核酸可以是重組多核苷酸，或具有基因組、cdna、半合成或合成來源的多核苷酸，其不是天然產(chǎn)生或與非天然排列的另一多核苷酸相連。

本文所用的術(shù)語“分離的”指從其初始或自然環(huán)境(例如，若其天然產(chǎn)生則是自然環(huán)境)取出的材料。例如，生命物中存在的天然產(chǎn)生的多核苷酸或多肽是未分離的，但通過人為干預(yù)從自然系統(tǒng)中一些或全部共存材料中分出的相同多核苷酸或多肽是分離的。這種多核苷酸能是載劑的一部分和/或這種多核苷酸或多肽能是組合物的一部分，且仍在這類載劑或組合物中分離出不是其天然存在環(huán)境的一部分。

多個本公開方面如下進(jìn)一步詳細(xì)描述。其他定義在整篇說明書中列出。

抗體分子

在一個實施方式中，所述抗體分子結(jié)合哺乳動物如人的檢查點分子，例如pd-1、pd-l1、lag-3或tim-3。例如，抗體分子特異結(jié)合表位，如pd-1、pd-l1、lag-3或tim-3上的線性或構(gòu)象表位(例如本文所述表位)。

本文所用的術(shù)語“抗體分子”指含至少一種免疫球蛋白可變域序列的蛋白。術(shù)語抗體分子包括例如抗體的全長、成熟抗體和抗原結(jié)合片段。例如，抗體分子能包括重(h)鏈可變域序列(本文縮寫為vh)和輕(l)鏈可變域序列(本文縮寫為vl)。另一實施例中，抗體分子包括2個重(h)鏈可變域序列和2個輕(l)鏈可變域序列，從而形成2個抗原結(jié)合位點，如fab、fab’、f(ab’)2、fc、fd、fd’、fv、單鏈抗體(例如scfv)、單可變域抗體、雙價抗體(dab)(二價和雙特異性)和嵌合(例如人源化)抗體，其可通過修飾全抗體生成或是用重組dna技術(shù)重新合成。這些功能抗體片段保留選擇性結(jié)合其各自抗原或受體的能力?？贵w和抗體片段能來自任意抗體種類，包括但不限于igg、iga、igm、igd和ige，以及來自任意抗體亞類(如igg1、igg2、igg3和igg4)。本公開的抗體可以是單克隆或多克隆?？贵w還可以是人、人源化、cdr-移植或體外產(chǎn)生抗體?？贵w能具有選自例如igg1、igg2、igg3或igg4的重鏈恒定區(qū)?？贵w還能有選自例如κ或λ的輕鏈。

抗原結(jié)合片段示例包括：(i)fab片段，由vl、vh、cl和ch1結(jié)構(gòu)域組成的單價片段；(ii)f(ab')2片段，含2個fab片段的二價片段，由二硫鍵在鉸鏈區(qū)連接；(iii)fd片段，由vh和ch1結(jié)構(gòu)域組成；(iv)fv片段，由抗體單臂的vl和vh結(jié)構(gòu)域組成；(v)雙價抗體(dab)片段，由vh結(jié)構(gòu)域組成；(vi)駱駝或駱駝化可變域；(vii)單鏈fv(scfv)，參見例如bird等.(1988)science242:423-426；和huston等.(1988)proc.natl.acad.sci.usa85:5879-5883)；(viii)單域抗體。這些抗體片段用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)獲得，且用與完整抗體相同的的方式篩選片段的效用。

術(shù)語“抗體”包括完整分子及其功能片段?？贵w恒定區(qū)可改變?nèi)缤蛔儯孕揎椏贵w分子特性(例如增加或減少以下一或多種：fc受體結(jié)合、抗體糖基化、半胱氨酸殘基數(shù)目、效應(yīng)細(xì)胞功能或補體功能)。

抗體分子還可以是單域抗體。單域抗體能包括其互補決定區(qū)作為單域多肽的一部分的抗體。示例包括但不限于重鏈抗體、天然缺乏輕鏈的抗體、衍生自常規(guī)4鏈抗體的單域抗體、改造抗體和衍生自抗體以外的單域支架。單域抗體可以是本領(lǐng)域或任意未來單域抗體中的任意一種。單域抗體可衍生自任意物種，包括但不限于小鼠、人、駱駝、美洲駝、魚、鯊魚、山羊、兔和牛。根據(jù)本公開的另一方面，單域抗體是天然產(chǎn)生的單域抗體，已知是缺乏輕鏈的重鏈抗體。例如，wo9404678公開了這種單域抗體。出于闡明目的，該可變域衍生自天然缺乏輕鏈的重鏈抗體，在本文中稱為vhh或納米抗體，以與四鏈免疫球蛋白的常規(guī)vh區(qū)分。這種vhh分子能衍生自駱駝科中培養(yǎng)的抗體，例如駱駝、美洲駝、單峰駱駝、羊駝和原駝。除駱駝科以外的其他物種也可生成天然缺乏輕鏈的重鏈抗體；這類vhh在本公開范圍內(nèi)。

vh和vl區(qū)能細(xì)分成高變區(qū)，稱為“互補決定區(qū)”(cdr)，散布有稱為“框架區(qū)”(fr或fw)的更保守區(qū)域。

框架區(qū)和cdr的程度已通過一些方法方法精確界定，參見kabat,e.a.等.(1991)《免疫學(xué)感興趣的蛋白序列》(sequencesofproteinsofimmunologicalinterest)”,第5版,美國衛(wèi)生和人類服務(wù)部,nih公開號.91-3242；chothia,c.等.(1987)j.mol.biol.196:901-917；和oxfordmolecular'sabm抗體建模軟件所用的abm定義。一般參見例如《抗體可變域的蛋白序列和結(jié)構(gòu)分析》(proteinsequenceandstructureanalysisofantibodyvariabledomains)，收錄于“抗體工程實驗室手冊(antibodyengineeringlabmanual)”(編輯:duebel,s.和kontermann,r.,海德爾堡的施普林格出版社(springer-verlag))。

本文所用的術(shù)語“互補決定區(qū)”和“cdr”指賦予抗原特異性和結(jié)合親和性的抗體可變區(qū)內(nèi)的氨基酸序列。一般，各重鏈可變區(qū)有3個cdr(hcdr1、hcdr2、hcdr3)且各輕鏈可變區(qū)有3個cdr(lcdr1、lcdr2、lcdr3)。

給定cdr的精確氨基酸序列邊界能用多種熟知方案中的任一種確定，包括kabat等.(1991),“免疫學(xué)感興趣的蛋白序列”第5版.公共衛(wèi)生署,國立衛(wèi)生研究院,bethesda,md(“kabat”編號方案),al-lazikani等.,(1997)jmb273,927-948(“chothia”編號方案)所述的那些。如本文所用，根據(jù)“chothia”編號方案定義的cdr有時也稱為“高變環(huán)”。

例如，在kabat下，重鏈可變區(qū)(vh)的cdr氨基酸殘基編號為31-35(hcdr1)、50-65(hcdr2)和95-102(hcdr3)；輕鏈可變區(qū)(vl)的cdr氨基酸殘基編號為24-34(lcdr1)、50-56(lcdr2)和89-97(lcdr3)。在chothia下，vh的cdr氨基酸編號為26-32(hcdr1)、52-56(hcdr2)和95-102(hcdr3)；vl的氨基酸編號為26-32(lcdr1),50-52(lcdr2)和91-96(lcdr3)。通過組合kabat和chothia的cdr定義，cdr由人vh的氨基酸殘基26-35(hcdr1)、50-65(hcdr2)和95-102(hcdr3)以及人vl的氨基酸殘基24-34(lcdr1)、50-56(lcdr2)和89-97(lcdr3)組成。

本文所用的“免疫球蛋白可變域序列”指能形成免疫球蛋白可變域結(jié)構(gòu)的氨基酸序列。例如，所述序列可包括所有或部分天然產(chǎn)生的可變域氨基酸序列。例如，所述序列可包括或不包括1個、2個或更多n-或c-末端氨基酸，或可包括與形成蛋白結(jié)構(gòu)相容的其它改變。

術(shù)語“抗原結(jié)合位點”指含決定簇的抗體分子部分，所述決定簇形成結(jié)合pd-1多肽的界面或其表位。對于蛋白(或蛋白模擬物)，抗原結(jié)合位點通常包括一或多個環(huán)(有至少4個氨基酸或氨基酸模擬物)，所述環(huán)形成結(jié)合pd-1多肽的界面。通常，抗體分子的抗原結(jié)合位點包括至少1或2個cdr和/或高變環(huán)，或更通常是至少3、4、5或6個cdr和/或高變環(huán)。

本文所用的術(shù)語“單克隆抗體”或“單克隆抗體組合物”指制備單分子組合物的抗體分子。單克隆抗體組合物顯示對特定表位的單結(jié)合特異性和親和性。單克隆抗體能通過雜交瘤技術(shù)或不采用雜交瘤技術(shù)的方法(如重組方法)制備。

“有效人”蛋白是不引起中和抗體反應(yīng)的蛋白，如人抗鼠抗體(hama)反應(yīng)。hama可能在一些情況下成問題，例如若抗體分子重復(fù)施用，如治療慢性或復(fù)發(fā)疾病病癥時。由于來自血清的抗體清除增加(參見例如saleh等.,cancerimmunol.immunother.,32:180-190(1990))以及潛在過敏反應(yīng)(參見例如lobuglio等.,hybridoma,5:5117-5123(1986))，hama反應(yīng)可使重復(fù)抗體施用可能失效。

抗體分子可以是多克隆或單克隆抗體。在其它實施方式中，所述抗體能重組生成，例如通過噬菌體展示或組合方法生成。

本領(lǐng)域已知用于產(chǎn)生抗體的噬菌體展示和組合方法(例如描述于ladner等.美國專利號5,223,409；kang等.國際公開號wo92/18619；dower等.國際公開號wo91/17271；winter等.國際公開wo92/20791；markland等.國際公開號wo92/15679；breitling等.國際公開wo93/01288；mccafferty等.國際公開號wo92/01047；garrard等.國際公開號wo92/09690；ladner等.國際公開號wo90/02809；fuchs等.(1991)bio/technology9:1370-1372；hay等.(1992)humantibodhybridomas3:81-85；huse等.(1989)science246:1275-1281；griffths等.(1993)emboj12:725-734；hawkins等.(1992)jmolbiol226:889-896；clackson等.(1991)nature352:624-628；gram等.(1992)pnas89:3576-3580；garrad等.(1991)bio/technology9:1373-1377；hoogenboom等.(1991)nucacidres19:4133-4137；和barbas等.(1991)pnas88:7978-7982，所有文獻(xiàn)的內(nèi)容通過引用納入本文)。

在一個實施方式中，所述抗體是全人抗體(如在遺傳改造成從人免疫球蛋白序列中生成抗體的小鼠中制備的抗體)或非人抗體，如嚙齒動物(小鼠或大鼠)、山羊、靈長類動物(如猴)、駱駝抗體。非人抗體優(yōu)選是嚙齒動物(小鼠或大鼠抗體)。本領(lǐng)域已知生成嚙齒動物抗體的方法。

人單克隆抗體能用載有人免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生，而不是小鼠系統(tǒng)。來自這些用感興趣抗原免疫的轉(zhuǎn)基因小鼠的脾細(xì)胞用于生成雜交瘤，所述雜交瘤分泌人mab，對人蛋白表位有特異親和性(參見例如wood等.國際申請wo91/00906,kucherlapati等.pct公開wo91/10741；lonberg等.國際申請wo92/03918；kay等.國際申請92/03917；lonberg,n.等.1994nature368:856-859；green,l.l.等.1994naturegenet.7:13-21；morrison,s.l.等.1994proc.natl.acad.sci.usa81:6851-6855；bruggeman等.1993yearimmunol7:33-40；tuaillon等.1993pnas90:3720-3724；bruggeman等.1991eurjimmunol21:1323-1326)。

抗體中的可變區(qū)或其部分如cdr在非人生有機體如大鼠或小鼠內(nèi)生成。嵌合、cdr-移植和人源化抗體在本公開范圍內(nèi)。非人生有機體如大鼠或小鼠內(nèi)產(chǎn)生且隨后在例如可變框架或恒定區(qū)修飾以減少在人中抗原性的抗體在本公開范圍內(nèi)。

嵌合抗體能通過本領(lǐng)域已知的重組dna技術(shù)生成(參見例如robinson等.,國際專利公開pct/us86/02269；akira等.,歐洲專利申請184,187；taniguchi,m.,歐洲專利申請171,496；morrison等.,歐洲專利申請173,494；neuberger等.,國際申請wo86/01533；cabilly等.美國專利號4,816,567；cabilly等.,歐洲專利申請125,023；better等.(1988science240:1041-1043)；liu等.(1987)pnas84:3439-3443；liu等.,1987,j.immunol.139:3521-3526；sun等.(1987)pnas84:214-218；nishimura等.,1987,canc.res.47:999-1005；wood等.(1985)nature314:446-449；和shaw等.,1988,j.natlcancerinst.80:1553-1559)。

人源化或cdr-移植抗體具有用供體cdr取代的(免疫球蛋白重和/或輕鏈的)至少1或2個但通常是全部3個受體cdr?？贵w可用至少一部分非人cdr取代或僅一些cdr可用非人cdr取代。僅需要取代人源化抗體結(jié)合pd-1所需數(shù)目的cdr。優(yōu)選地，供體是嚙齒動物抗體如大鼠或小鼠抗體，受體是人框架或人共有框架。通常，提供cdr的免疫球蛋白稱為“供體”而提供框架的免疫球蛋白稱為“受體”。在一個實施方式中，所述供體免疫球蛋白是非人(如嚙齒動物)的。受體框架是天然產(chǎn)生(如人)框架或共有框架，或與其有約85％或更高一致性的序列，優(yōu)選90％、95％、99％或更高的一致性。

本文所用的術(shù)語“共有序列”指從相關(guān)序列家族中最常產(chǎn)生的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(參見例如winnaker,《從基因到克隆》(fromgenestoclones)(德國魏因海姆的verlagsgesellschaft,1987)。在蛋白家族中，共有序列內(nèi)的各位置被家族中該位置處最常出現(xiàn)的氨基酸占據(jù)。如果兩個氨基酸同樣頻繁出現(xiàn)，任一個都能納入共有序列。“共有框架”指共有免疫球蛋白序列中的框架區(qū)。

抗體能通過本領(lǐng)域已知的方法人源化(參見例如morrison,s.l.,1985,science229:1202-1207,oi等.,1986,biotechniques4:214,和queen等.us5,585,089,us5,693,761及us5,693,762，所有文獻(xiàn)的內(nèi)容通過引用納入本文)。

人源化或cdr-移植抗體能通過cdr-移植或cdr取代生成，其中能取代免疫球蛋白的1、2個或所有cdr。參見例如美國專利5,225,539；jones等.1986nature321:552-525；verhoeyan等.1988science239:1534；beidler等.1988j.immunol.141:4053-4060；winterus5,225,539，所有文獻(xiàn)的內(nèi)容通過引用明確納入本文。winter描述cdr-移植方法，其可用于制備本公開的人源化抗體(英國專利申請gb2188638a,1987年3月26日提交；winterus5,225,539)，其內(nèi)容通過引用明確納入。

人源化抗體也在本公開范圍內(nèi)，其中具體的氨基酸被取代、缺失或加入。從供體選擇氨基酸的標(biāo)準(zhǔn)描述于us5,585,089，如us5,585,089的第12-16列，如us5,585,089的第12-16列，其內(nèi)容通過引用納入本文。用于人源化抗體的其它技術(shù)描述于padlan等.ep519596a1，1992年12月23日發(fā)表。

抗體分子可以是單鏈抗體。單鏈抗體(scfv)可改造(參見例如colcher,d.等.(1999)annnyacadsci880:263-80；和reiter,y.(1996)clincancerres2:245-52)。單鏈抗體能二聚化或多聚化以產(chǎn)生對同一靶蛋白不同表位具有特異性的多價抗體。

在其它實施方式中，所述抗體分子具有重鏈恒定區(qū)，選自例如igg1、igg2、igg3、igg4、igm、iga1、iga2、igd和ige重鏈恒定區(qū)；特別是選自例如igg1、igg2、igg3和igg4(如人)的重鏈恒定區(qū)。在另一個實施方式中，所述抗體分子具有輕鏈恒定區(qū)，選自例如(如人)κ或λ輕鏈恒定區(qū)。恒定區(qū)能改變?nèi)缤蛔儯孕揎椏贵w特性(例如增加或減少以下一或多種：fc受體結(jié)合、抗體糖基化、半胱氨酸殘基數(shù)目、效應(yīng)細(xì)胞功能和/或補體功能)。在一個實施方式中，所述抗體具有：效應(yīng)子功能；且能固定補體。在其它實施方式中，所述抗體不招募效應(yīng)細(xì)胞；或固定補體。在另一個實施方式中，所述抗體結(jié)合fc受體的能力降低或沒有結(jié)合fc受體的能力。例如，它是同種型或亞型、片段或其它突變體，不支持結(jié)合fc受體，例如其具有突變或缺失的fc受體結(jié)合區(qū)。

本領(lǐng)域已知改變抗原恒定區(qū)的方法。功能改變的抗體能通過用不同殘基取代抗體恒定部分的至少一個氨基酸殘基而生成，所述功能改變是例如效應(yīng)配體(如細(xì)胞上fcr或補體的c1組分)的親和性改變(參見例如ep388,151a1,美國專利號5,624,821和美國專利號5,648,260，所有文獻(xiàn)的內(nèi)容通過引用納入本文)。相似類型的改變可得以描述，若應(yīng)用于小鼠或其他物種免疫球蛋白會減弱或消除這些功能。

抗體分子能衍生或連接另一功能分子(如另一肽或蛋白)。本文所用的“衍生”抗體分子是經(jīng)過修飾的。衍生方法包括但不限于加入熒光部分、放射性核苷酸、毒素、酶或親和配體如生物素。因此，本公開的抗體分子包括本文所述抗體的衍生和另外的修飾形式，包括免疫粘附分子。例如，抗體分子能(通過化學(xué)偶聯(lián)、基因融合、非共價締合或其他)功能性連接一或多種其它分子實體，如另一抗體(如雙特異性抗體或雙價抗體)、檢測劑、細(xì)胞毒性試劑、藥劑和/或能介導(dǎo)抗體或抗體部分與另一分子(如鏈霉親和素核心區(qū)或聚組氨酸標(biāo)簽)締合的蛋白或肽。

一種衍生抗體分子通過交聯(lián)2個或更多(相同類型或不同類型，如形成雙特異性抗體的)抗體生成。合適的交聯(lián)劑包括具有2個由合適間隔子分開的獨特反應(yīng)基團(tuán)(如m-馬來酰亞胺苯甲?；?n-羥基琥珀酰亞胺酯)的異雙功能交聯(lián)劑或同雙功能交聯(lián)劑(如雙琥珀酰亞胺辛二酸酯)。合適的接頭獲自伊利諾伊州羅克福德的皮爾斯化學(xué)公司(piercechemicalcompany)。

抗體分子可綴合另一分子實體，通常是標(biāo)記或治療(如細(xì)胞毒性或細(xì)胞抑制)劑或部分。放射性同位素能用于診斷或治療應(yīng)用。能偶聯(lián)抗psma抗體的放射性同位素包括但不限于α-、β-或γ-發(fā)射體或者β-和γ-發(fā)射體。這些放射性同位素包括但不限于碘(¹³¹i或¹²⁵i)、釔(⁹⁰y)、镥(¹⁷⁷lu)、錒(²²⁵ac),鐠、砹(²¹¹at)、錸(¹⁸⁶re)、鉍(²¹²bi或²¹³bi)、銦(¹¹¹in)、锝(⁹⁹mtc)、磷(³²p)、銠(¹⁸⁸rh)、硫(³⁵s)、碳(¹⁴c)、氚(³h)、鉻(⁵¹cr)、氯(³⁶cl)、鈷(⁵⁷co或⁵⁸co)、鐵(⁵⁹fe)、硒(⁷⁵se)或鎵(⁶⁷ga)。用作治療劑的放射性同位素包括釔(⁹⁰y)、镥(¹⁷⁷lu)、錒(²²⁵ac)、鐠、砹(²¹¹at)、錸(¹⁸⁶re)、鉍(²¹²bi或²¹³bi)和銠(¹⁸⁸rh)。用作標(biāo)記如用于診斷的放射性同位素包括碘(¹³¹i或¹²⁵i)、銦(¹¹¹in)、锝(⁹⁹mtc)、磷(³²p)、碳(¹⁴c)和氚(³h)，或一或多種以上所列的治療性同位素。

本公開提供放射標(biāo)記的抗體分子和標(biāo)記方法。在一個實施方式中，公開了標(biāo)記抗體的方法。所述方法包括將抗體分子接觸螯合劑，從而生成綴合抗體。綴合抗體用放射性同位素如¹¹¹銦、⁹⁰釔和¹⁷⁷镥進(jìn)行放射標(biāo)記，以生成標(biāo)記的抗體分子。

如上所討論，抗體分子能綴合治療劑。已提及治療活性的放射性同位素。其它治療劑示例包括紫杉醇、細(xì)胞松弛素b、短桿菌肽d、溴化乙錠、吐根堿、絲裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、長春新堿、長春堿、秋水仙堿、阿霉素、道諾霉素、二羥基炭疽素菌二酮、米托蒽醌、光神霉素、放線菌素d、l-去氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛爾和嘌呤霉素、美登木素如美登醇(參見美國專利號5,208,02)、cc-1065(參見美國專利號5,475,092,5,585,499,5,846,545)和其類似物或同源物。治療劑包括但不限于抗代謝物(如甲氨蝶呤、6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶氮烯咪胺)、烷化劑(如氮芥、噻替哌苯丁酸氮芥、cc-1065、美法侖、卡莫司汀(bsnu和和洛莫司汀(ccnu)、環(huán)磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、鏈脲菌素、絲裂霉素c和順二氯二氨基鉑(ii)(ddp)順鉑)、蒽環(huán)類藥(如道諾霉素和阿霉素)、抗生素(如更生霉素(之前稱為放線菌素)、博來霉素、光輝霉素和安曲霉素(amc))以及抗有絲分裂劑(如長春新堿、長春花堿、紫杉醇和美登木素)。

藥物組合物和藥盒

一方面，本公開提供組合物如藥學(xué)上可接受組合物，包括與藥學(xué)上可接受載劑一起配制的本文所述抗體分子。本文所用的“藥學(xué)上可接受載劑”包括生理上相容的任意和所有溶劑、分散介質(zhì)、等滲和吸收延遲劑等。載劑能適合靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、胃腸外、直腸、脊髓或表皮施用(如通過注射或輸注)。

本公開的組合物可采用多種形式。這些包括例如液體、半固體和固體劑型，如液體溶液(例如可注射和難溶溶液)、分散液或懸液、脂質(zhì)體和栓劑。優(yōu)選形式取決于施用和治療應(yīng)用的預(yù)期模式。典型的優(yōu)選組合物采用可注射或難溶溶液形式。優(yōu)選施用模式是胃腸外(如靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、肌肉內(nèi))。在一個優(yōu)選實施方式中，所述抗體通過靜脈輸注或注射施用。在另一個優(yōu)選實施方式中，所述抗體通過肌內(nèi)或皮下注射施用。

本文所用的短語“胃腸外施用”和“在胃腸外施用”指腸道和局部施用以外的施用模式，通常是注射，包括但不限于靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、囊內(nèi)、眶內(nèi)、心臟內(nèi)、真皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)氣管、皮下、表皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、包膜下、蛛網(wǎng)膜下、脊柱內(nèi)、硬腦膜外和胸骨內(nèi)注射和輸注。

治療組合物通常應(yīng)在制造和儲存條件下無菌且穩(wěn)定。組合物能配制成溶液、微乳液、分散液、脂質(zhì)體或其它適合高抗體濃度的有序結(jié)構(gòu)。無菌注射溶液能如下制備：根據(jù)需要將所需量的活性化合物(即抗體或抗體部分)與上面所列的成分或成分組合納入適當(dāng)溶劑，然后無菌過濾。一般地，分散液通過將活性化合物納入無菌載劑來制備，所述載劑包含基礎(chǔ)分散介質(zhì)和所需的來自上面列舉的其它成分。在制備無菌注射溶液的無菌粉末時，優(yōu)選制備方法是真空干燥和冷凍干燥，其產(chǎn)生活性成分粉末加上來自先前無菌過濾溶液的任意其他所需成分。可例如用包衣如卵磷脂，通過在分散液情況中維持所需粒度以及用表面活性劑來維持溶液的適當(dāng)流動性。將延遲吸收的藥劑如單硬脂酸鹽和明膠納入組合物能帶來可注射組合物的延長吸收。

抗體分子能通過本領(lǐng)域已知的多種方法施用，盡管許多治療應(yīng)用的優(yōu)選施用途徑/模式是靜脈注射或輸注。例如，抗體分子能通過速度小于10mg/min的靜脈輸注施用；優(yōu)選小于或等于5mg/min以達(dá)到約1-100mg/m²的劑量，優(yōu)選約5-50mg/m²、約7-25mg/m²，更優(yōu)選約10mg/m²。如技術(shù)人員所理解，施用途徑/模式將根據(jù)所需結(jié)果而變化。在某些實施方式中，所述活性化合物可用保護(hù)化合物防止快速釋放的載劑制備，如控釋制劑，包括植入物、透皮貼劑和微膠囊化遞送系統(tǒng)?？墒褂蒙锝到庑?、生物相容性聚合物，如乙烯醋酸乙烯酯、聚酐類、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。這類制劑的許多制備方法已獲得專利或通常為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知。參見例如《緩釋和控釋藥物遞送系統(tǒng)》(sustainedandcontrolledreleasedrugdeliverysystems)j.r.robinson編.,紐約馬塞爾德克出版公司(marceldekker,inc.),1978。

在某些實施方式中，抗體分子可例如用惰性稀釋劑或可吸收可食用的載劑口服施用?；衔?若需要，和其它成分)還能包封于硬或軟殼明膠膠囊，壓入片劑，或直接納入對象飲食。對于口服治療施用，化合物可與賦形劑一起納入并以可吸收片劑、口腔片、錠劑、膠囊、酏劑、懸液、糖漿、晶片等形式使用。為了以胃腸外施用以外的方式施用本公開化合物，可能需要用材料包衣化合物或與材料共施用化合物，以防止其失活。治療組合物還能用本領(lǐng)域已知的醫(yī)療設(shè)備施用。

劑量方案調(diào)整成提供最優(yōu)的所需反應(yīng)(如治療反應(yīng))。例如，可施用單丸劑，可隨時間施用數(shù)個分開劑量，或可根據(jù)治療情況的緊迫性成比例減少或增加劑量。以劑量單位形式配制胃腸外組合物以便于施用和劑量均勻度是尤其有利的。本文的劑量單位形式指適合作為待治療對象的單位劑量的物理離散單位；各單位包含計算為產(chǎn)生所需治療效果的預(yù)定量活性化合物以及所需藥物載劑。本公開的劑量單位形式說明書由以下決定并直接取決于：(a)活性化合物的獨特特征和待實現(xiàn)的特定治療效果和(b)復(fù)合該活性化合物以治療個體敏感性的領(lǐng)域中固有的限制。

“治療有效量”指為達(dá)到所需治療結(jié)果，在劑量和必要時間段上的有效量。修飾抗體或抗體片段的治療有效量可以根據(jù)因素如疾病狀態(tài)、年齡、性別和個體體重以及抗體或抗體部分引起個體中所需反應(yīng)的能力而變化。治療有效量還是治療有益效果超過其中修飾抗體或抗體片段的任意有毒或有害作用的量?！爸委熡行┝俊眱?yōu)選抑制可測量參數(shù)，如相對于未治療對象，腫瘤生長率抑制至少約20％，更優(yōu)選至少約40％，甚至更優(yōu)選至少約60％，且仍更優(yōu)選至少約80％?？稍趧游锬Ｐ拖到y(tǒng)中評估化合物抑制可測量參數(shù)如癌的能力，預(yù)測在人腫瘤中的功效?；蛘?，該組合物特性能通過檢測化合物抑制能力來評估，所述體外抑制通過熟練從業(yè)者已知的試驗來分析。

“預(yù)防有效量”指為達(dá)到所需預(yù)防結(jié)果，在劑量和必要時間段上的有效量。通常，由于預(yù)防劑量用于在疾病之前或處于疾病早期的對象，預(yù)防有效量小于治療有效量。

施用抗體分子的方法為本領(lǐng)域已知且如下所述。所用分子的合適劑量取決于對象的年齡和體重以及所用特定藥物?？筽d-1抗體分子的劑量和治療方案能由技術(shù)人員確定。在某些實施方式中，所述抗pd-1抗體分子(如皮下或靜脈內(nèi))注射施用，劑量是約1-30mg/kg，如約5-25mg/kg、約10-20mg/kg、約1-5mg/kg或約3mg/kg。給藥方案可變，例如從每周一次到每2、3或4周一次。在一個實施方式中，所述抗pd-1抗體分子以約10-20mg/kg劑量每隔一周施用。

示例性且非限制性的治療或預(yù)防有效量抗體分子范圍是0.1-30mg/kg，更優(yōu)選1-25mg/kg?？筽d-1抗體分子的劑量和治療方案能由技術(shù)人員確定。在某些實施方式中，所述抗pd-1抗體分子(如皮下或靜脈內(nèi))注射施用，劑量是約1-30mg/kg，如約5-25mg/kg、約10-20mg/kg、約1-5mg/kg、1-10mg/kg、5-15mg/kg、10-20mg/kg、15-25mg/kg或約3mg/kg。給藥方案可變，例如從每周一次到每2、3或4周一次。在一個實施方式中，所述抗pd-1抗體分子以約10-20mg/kg劑量每隔一周施用。抗體分子能通過速度小于10mg/min的靜脈輸注施用，優(yōu)選小于或等于5mg/min以達(dá)到約1-100mg/m²的劑量，優(yōu)選約5-50mg/m²、約7-25mg/m²，且更優(yōu)選約10mg/m²。應(yīng)注意劑量值可根據(jù)待緩解病癥的類型和嚴(yán)重度而變化。應(yīng)進(jìn)一步理解，對于任意具體對象，根據(jù)個體需求和施用或監(jiān)督施用組合物的人的專業(yè)判斷，特定給藥方案應(yīng)隨著時間調(diào)整，且本文所列劑量范圍僅是示例性的且不意在限制所要求權(quán)利的組合物的范圍或?qū)嵺`。

抗體分子能自身使用或綴合第二藥劑，如細(xì)胞毒性藥物、放射性同位素或蛋白如蛋白毒素或病毒蛋白。這一方法包括向需要該治療的對象單獨或綴合細(xì)胞毒性藥物施用抗體分子?？贵w分子能用于遞送多種治療劑，如細(xì)胞毒性部分，例如治療藥物，放射性同位素，植物、真菌或細(xì)菌來源的分子，或生物蛋白(如蛋白毒素)或粒子(如重組病毒粒子，例如通過病毒外殼蛋白)，或其混合物。

本公開范圍還包括含本文所述聯(lián)合療法的藥盒。所述藥盒包括一個或多個其它要素，包括使用說明書；其它試劑，如標(biāo)記、治療劑或用于螯合或另外偶合的試劑，標(biāo)記或治療劑的抗體，或輻射防護(hù)組合物；為制備用于施用的抗體的設(shè)備或其它材料；藥學(xué)上可接受載劑；和施用于對象的設(shè)備或其它材料。

使用聯(lián)合療法

本文公開的聯(lián)合療法具有體外和體內(nèi)治療及預(yù)防效用。例如，這些分子能向?qū)ο?如人類對象)體外或離體施用培養(yǎng)的細(xì)胞，以治療、預(yù)防和/或診斷多種疾病如癌。

因此一方面，本公開提供修飾對象中免疫應(yīng)答的方法，包括向?qū)ο笫┯帽疚乃隹贵w分子從而修飾對象的免疫應(yīng)答。在一個實施方式中，所述免疫應(yīng)答增強、受激或上調(diào)。在一個實施方式中，所述抗體分子通過阻斷檢查點抑制劑(如d-1、pd-l1、lag-3或tim-3)來增強對象的免疫應(yīng)答。

本文所用的術(shù)語“對象”意在包括人和非人動物。在一個實施方式中，所述對象是人類對象，如患有表征為異常免疫功能的疾病或病癥的人類患者。術(shù)語“非人動物”包括哺乳動物和非哺乳動物，如非人靈長類。在一個實施方式中，所述對象是人。在一個實施方式中，所述對象是需要增強免疫應(yīng)答的人類患者。在一個實施方式中，所述對象免疫減弱，如所述對象正接受或已接受化療和/或放療?；蛘弋?dāng)聯(lián)合時，感染導(dǎo)致對象免疫減弱或有免疫減弱的風(fēng)險。本文所述方法和組合物適于治療患有能通過增強t細(xì)胞介導(dǎo)免疫應(yīng)答來治療的疾病的人類患者。例如，本文所述方法和組合物能提高免疫活性數(shù)量。在一個實施方式中，所述對象的腫瘤浸潤t淋巴細(xì)胞(til)的數(shù)目或活性增加。在另一個實施方式中，所述對象干擾素γ(ifn-γ)的表達(dá)或活性增加。在另一個實施方式中，所述對象的pd-l1表達(dá)或活性減少。

癌癥

阻斷檢查點抑制劑如pd-1能增強對象中對癌細(xì)胞的免疫應(yīng)答。pd-1的配體即pd-l1不在正常人細(xì)胞中表達(dá)，但在多種人類癌癥中豐富(dong等.(2002)natmed8:787-9)。pd-1與pd-l1之間的相互作用能引起腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞減少、t細(xì)胞受體介導(dǎo)的增殖減少和/或癌細(xì)胞免疫逃避減少(dong等.(2003)j.mol.med.81:281-7；blank等.(2005)cancerimmunol.immunother.54:307-314；konishi等.(2004)clin.cancerres.10:5094-100)。

一方面，本公開涉及用抗pd-1或pd-l1抗體分子體內(nèi)治療對象，從而抑制或減少癌變腫瘤的生長?？筽d-1或pd-l1抗體可單獨用于抑制癌變腫瘤的生長?；蛘?，抗pd-1或抗pd-l1抗體可與以下一或多種聯(lián)用：表1公開的藥劑，(如用于癌的)標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理治療，另一抗體或其抗原結(jié)合片段，另一免疫調(diào)節(jié)劑(如共刺激分子的激活劑或抑制分子的抑制劑)；疫苗如治療性癌疫苗；或如下所述的其它細(xì)胞免疫治療形式。

因此，在一個實施方式中，本公開提供抑制對象中腫瘤細(xì)胞生長的方法，包括向?qū)ο笫┯弥委熡行Я康谋疚乃_聯(lián)合療法。在一個實施方式中，所述方法適于體內(nèi)治療癌。當(dāng)pd-1的抗體與一或多種藥劑聯(lián)合施用時，所述組合可以任一順序施用或同時施用。

另一方面，提供治療對象的方法，如減少或緩解過度增殖性病癥或疾病(如癌)，例如實體瘤、軟組織腫瘤或轉(zhuǎn)移病灶。所述方法包括單獨或聯(lián)合其它藥劑或治療模式向?qū)ο笫┯靡换蚨喾N本文所述抗pd-1或pd-l1抗體分子。

本文所用的術(shù)語“癌”意在包括所有類型的癌生長或致癌過程、轉(zhuǎn)移組織或惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞、組織或器官，無論組織病理學(xué)類型或侵襲階段如何。癌癥示例包括但不限于實體瘤、軟組織腫瘤或轉(zhuǎn)移病灶。實體瘤示例包括多個器官系統(tǒng)的惡性腫瘤，如肉瘤、腺癌和癌，例如影響肝、肺、乳房、淋巴、胃腸(如結(jié)腸)、泌尿生殖道(如腎、尿路上皮細(xì)胞)、前列腺和咽部的那些。腺癌包括惡性腫瘤，如大多數(shù)結(jié)腸癌、直腸癌、腎細(xì)胞癌、肝癌、非小細(xì)胞肺癌、小腸癌和食管癌。在一個實施方式中，所述癌是黑素瘤，如晚期黑素瘤。上述癌的轉(zhuǎn)移病灶也能用本公開的方法和組合物治療或預(yù)防。

能用本文所公開抗體分子抑制其生長的示例性癌包括通常響應(yīng)免疫治療的癌。用于治療的優(yōu)選癌的非限制性示例包括黑素瘤(轉(zhuǎn)移性惡性黑素瘤)、腎癌(如透明細(xì)胞癌)、前列腺癌(如激素難治性前列腺癌)、乳腺癌、結(jié)腸癌和肺癌(如非小細(xì)胞肺癌)。另外，難治性或復(fù)發(fā)惡性腫瘤能用本文所述抗體分子治療。

能治療的其它癌示例包括骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼內(nèi)惡性黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門癌、胃食管癌、胃癌、睪丸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、食管癌、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)癌癥、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病包括急性髓細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、急性淋巴母細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病，兒童的實體瘤、淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎盂癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(cns)贅生物、原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤、腫瘤血管生成、脊髓軸腫瘤、腦干膠質(zhì)瘤、垂體腺瘤、卡波濟(jì)氏肉瘤、類上皮癌、鱗狀細(xì)胞癌、t細(xì)胞淋巴癌、環(huán)境因素包括石棉誘發(fā)的癌，和所述癌的組合。

治療轉(zhuǎn)移癌如表達(dá)pd-l1的轉(zhuǎn)移癌(iwai等.(2005)int.immunol.17:133-144)能用本文所述抗體分子實現(xiàn)。在一個實施方式中，所述癌表達(dá)pd-l1、ifn和/或cd8的水平升高。

血液系統(tǒng)腫瘤病癥是影響血液、骨髓和淋巴系統(tǒng)的癌類型，如白血病和惡性淋巴增殖性疾病。白血病能分類為急性白血病和慢性白血病。急性白血病能進(jìn)一步分類為急性髓細(xì)胞性白血病(aml)和急性淋巴細(xì)胞白血病(all)。慢性白血病包括慢性髓細(xì)胞性白血病(cml)和慢性淋巴細(xì)胞白血病(cll)。其它相關(guān)病癥包括骨髓增生異常綜合征(mds，之前稱為“白血病前期”)，其廣泛集合了由骨髓血細(xì)胞無效生成(或發(fā)育不良)和轉(zhuǎn)化成aml的風(fēng)險聯(lián)合起來的血液系統(tǒng)病癥。

在其它實施方式中，所述癌是血液惡性腫瘤或癌，包括但不限于白血病或淋巴瘤。例如，聯(lián)合療法能用于治療癌和惡性腫瘤，包括但不限于例如急性白血病，包括但不限于例如b細(xì)胞型急性淋巴細(xì)胞白血病(“ball”)、t細(xì)胞型急性淋巴細(xì)胞白血病(“tall”)、急性淋巴細(xì)胞白血病(all)；一或多種慢性白血病，包括但不限于例如慢性髓細(xì)胞性白血病(cml)、慢性淋巴細(xì)胞白血病(cll)；其他血液系統(tǒng)腫瘤或血液系統(tǒng)病癥，包括但不限于例如b細(xì)胞型幼淋巴細(xì)胞性白血病、母細(xì)胞性漿細(xì)胞樣樹突細(xì)胞腫瘤、伯基特淋巴瘤、彌漫性大b細(xì)胞性淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、毛細(xì)胞白血病、小細(xì)胞-或大細(xì)胞濾泡性淋巴瘤、惡性淋巴細(xì)胞增殖性病癥、malt淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤、邊緣帶淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、脊髓發(fā)育不良和骨髓增生異常綜合征、非霍奇金淋巴瘤、漿母細(xì)胞性淋巴瘤、漿細(xì)胞樣樹突細(xì)胞腫瘤、華氏巨球蛋白血癥和廣泛集合了由骨髓血細(xì)胞無效生成(或發(fā)育不良)聯(lián)合起來的血液系統(tǒng)病癥的“白血病前期”等。在一些實施方式中，所述淋巴瘤(如間變性大細(xì)胞淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤)具有或被鑒定為具有alk重排或易位，例如eml4-alk融合。

在一個實施方式中，所述癌選自肺癌(例如非小細(xì)胞肺癌(nsclc)(如帶有鱗狀和/或非鱗狀組織學(xué)的nsclc))、黑素瘤(例如晚期黑素瘤)、腎癌(例如腎細(xì)胞癌，如腎透明細(xì)胞癌)、肝癌、骨髓瘤(例如多發(fā)性骨髓瘤)、前列腺癌、乳腺癌(例如不表達(dá)1、2個或全部雌激素受體、孕酮受體或her2/neu的乳腺癌，如三陰乳腺癌)、結(jié)直腸癌、胰腺癌、頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細(xì)胞癌(hnscc))、肛門癌、胃食管癌、甲狀腺癌、宮頸癌、淋巴增殖性疾病(例如移植后淋巴增殖性疾病)或血液系統(tǒng)腫瘤、t細(xì)胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或白血病(例如骨髓性白血病)。

在另一個實施方式中，所述癌選自癌(如晚期或轉(zhuǎn)移癌)、黑素瘤或肺癌，例如非小細(xì)胞肺癌。

在一個實施方式中，所述癌是肺癌，如非小細(xì)胞肺癌。在某些實施方式中，所述肺癌如非小細(xì)胞肺癌具有或被鑒定為具有alk重排或易位，例如alk融合，如eml4-alk融合。

在另一個實施方式中，所述癌是有或沒有病毒感染的肝癌如晚期肝癌，例如慢性病毒性肝炎。

在另一個實施方式中，所述癌是前列腺癌，如晚期前列腺癌。

在另一個實施方式中，所述癌是骨髓瘤，如多發(fā)性骨髓瘤。

在另一個實施方式中，所述癌是腎癌，如腎細(xì)胞癌(rcc)(例如轉(zhuǎn)移性rcc或腎透明細(xì)胞癌)。

在一個實施方式中，所述癌是黑素瘤，如晚期黑素瘤。在一個實施方式中，所述癌是不響應(yīng)其它療法的晚期或不可切除的黑素瘤。在其它實施方式中，所述癌是有braf突變(如brafv600突變)的黑素瘤。在其它實施方式中，所述抗pd-1或pd-l1抗體分子在用抗ctla4抗體(如依匹單抗)與braf抑制劑(如維羅非尼或達(dá)拉非尼)或用抗ctla4抗體(如依匹單抗)而不用braf抑制劑(如維羅非尼或達(dá)拉非尼)治療后施用。

在另一個實施方式中，所述癌是炎癥性肌纖維母細(xì)胞瘤(imt)。在某些實施方式中，所述炎癥性肌纖維母細(xì)胞瘤具有或被鑒定為具有alk重排或易位，例如alk融合，如eml4-alk融合。

在另一個實施方式中，所述癌是成神經(jīng)細(xì)胞瘤。在某些實施方式中，所述成神經(jīng)細(xì)胞瘤具有或被鑒定為具有alk重排或易位，例如alk融合，如eml4-alk融合。本文公開的方法和組合物用于治療與上述癌相關(guān)的轉(zhuǎn)移病灶。

聯(lián)合療法

本文公開的方法和組合物能與以下一或多種聯(lián)合施用：免疫調(diào)節(jié)劑(例如共刺激分子的激活劑或抑制分子的抑制劑)；疫苗如治療性癌疫苗；或其它細(xì)胞免疫治療形式。

“聯(lián)合”不意在指療法或治療劑必須同時施用和/或被配制用于一起遞送，盡管這些遞送方法在本文所述范圍內(nèi)。免疫調(diào)節(jié)劑和第二治療劑能與一或多種其它額外療法或治療劑同時施用，在其它額外療法或治療劑之前或之后施用。組合中的藥劑能以任意順序施用。通常各藥劑以就該藥劑確定的劑量和/或時間安排來施用。應(yīng)理解該組合所用的額外治療劑可與單一組合物共同施用或在不同組合物中分開施用。通常預(yù)期組合所用的額外治療劑使用的水平不超過其單獨使用時的水平。在一些實施方式中，用于組合的水平低于單獨使用的水平。

在一個實施方式中，本文公開的聯(lián)合療法包括免疫檢查點分子的抑制性分子的抑制劑。術(shù)語“免疫檢查點”指cd4和cd8t細(xì)胞的細(xì)胞表面上的分子組。這些分子能有效充當(dāng)“剎車”以下調(diào)或抑制抗腫瘤免疫應(yīng)答。免疫檢查點分子包括但不限于程序性死亡分子1(pd-1)、細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(ctla-4)、b7h1、b7h4、ox-40、cd137、cd40和lag3，其直接抑制免疫細(xì)胞，本公開方法中能用作所用免疫檢查點分子抑制劑的免疫治療劑包括但不限于cd160、2b4和/或tgfrβ。對抑制性分子的抑制能在dna、rna或蛋白水平進(jìn)行。在實施方式中，抑制性核酸(如dsrna、sirna或shrna)能用于抑制抑制性分子的表達(dá)。在其它實施方式中，抑制信號的抑制劑是多肽如可溶性配體，或結(jié)合抑制性分子的抗體或其抗原結(jié)合片段。

在某些實施方式中，本文所述抗pd-1分子與一或多種本領(lǐng)域已知的pd-1、pd-l1和/或pd-l2抑制劑聯(lián)合施用。拮抗劑可以是抗體、其抗原結(jié)合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。

在一些實施方式中，所述其它抗pd-1抗體選自mdx-1106、merck3475或ct-011。

在一些實施方式中，所述pd-1抑制劑是免疫粘附素(例如，免疫粘附素包括融合恒定區(qū)(如免疫球蛋白序列的fc區(qū))的pd-ll或pd-l2胞外或pd-1結(jié)合部分)。

在一些實施方式中，所述pd-1抑制劑是amp-224。在一些實施方式中，所述pd-1抑制劑是抗pd-ll抗體。

在一些實施方式中，所述抗pd-ll結(jié)合拮抗劑選自yw243.55.s70、mpdl3280a、medi-4736、msb-0010718c或mdx-1105。mdx-1105也稱為bms-936559，是wo2007/005874所述的抗pd-ll抗體?？贵wyw243.55.s70(重鏈和輕鏈可變區(qū)序列分別示于seqidno.20和21)是wo2010/077634所述的抗pd-ll。

在一些實施方式中，所述pd-1抑制劑是尼魯單抗。尼魯單抗的別名包括mdx-1106、mdx-1106-04、ono-4538或bms-936558。在一些實施方式中，所述抗pd-1抗體是尼魯單抗(cas注冊號：946414-94-4)。尼魯單抗(也稱為bms-936558或mdx1106；百時美施貴寶(bristol-myerssquibb))是特異性阻斷pd1的全人igg4單克隆抗體。us8,008,449和wo2006/121168公開了尼魯單抗(克隆5c4)和其它特異性結(jié)合pd-1的人單克隆抗體。尼魯單抗的重鏈和輕鏈氨基酸序列如下：

重鏈(seqidno：2)

qvqlvesgggvvqpgrslrldckasgitfsnsgmhwvrqapgkglewvaviwydgskryyadsvkgrftisrdnskntlflqmnslraedtavyycatnddywgqgtlvtvssastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslgk

輕鏈(seqidno：3)

eivltqspatlslspgeratlscrasqsvssylawyqqkpgqaprlliydasnratgiparfsgsgsgtdftltisslepedfavyycqqssnwprtfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

尼魯單抗是優(yōu)選的組合伴侶。

在一些實施方式中，所述抗pd-1抗體是派姆單抗。派姆單抗(也稱為lambrolizumab、mk-3475、mk03475、sch-900475或；默克公司(merck))是結(jié)合pd-1的人源化igg4單克隆抗體。派姆單抗和其它人源化抗pd-1抗體公開于hamid，o.等.(2013)newenglandjournalofmedicine369(2)：134-44，us8,354,509和wo2009/114335。派姆單抗的重鏈和輕鏈氨基酸序列如下：

重鏈(seqidno：4)

輕鏈(seqidno：5)

匹地利珠單抗(ct-011；curetech)是結(jié)合pd1的人源化igg1k單克隆抗體。匹地利珠單抗和其它人源化抗pd-1單克隆抗體公開于wo2009/101611。

其它抗pd1抗體包括amp514(amplimmune)，例如us8,609,089、us2010028330和/或us20120114649公開的抗pd-1抗體。

在一些實施方式中，所述抗pd-l1抗體是msb0010718c(也稱為a09-246-2；默克雪蘭諾(merckserono))是結(jié)合pd-l1的單克隆抗體。派姆單抗和其它人源化抗pd-l1抗體公開于wo2013/079174。msb0010718c的重鏈和輕鏈氨基酸序列包括至少以下：

重鏈(wo2013/079174中公開的seqidno：24)(seqidno：6)

evqllesggglvqpggslrlscaasgftfssyimmwvrqapgkglewvssiypsggitfyadkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycariklgtvttvdywgqgtlvtvss

輕鏈(wo2013/079174中公開的seqidno：25)(seqidno：7)

qsaltqpasvsgspgqsitisctgtssdvggynyvswyqqhpgkapklmiydvsnrpsgvsnrfsgsksgntasltisglqaedeadyycssytssstrvfgtgtkvtvl

mdpl3280a(基因泰克/羅氏)是結(jié)合pd-l1的人fc優(yōu)化igg1單克隆抗體。mdpl3280a和其它pd-l1的人單克隆抗體公開于美國專利號：7,943,743和美國公開號：20120039906。其它抗pd-l1結(jié)合劑包括yw243.55.s70(重鏈和輕鏈可變區(qū)序列示于wo2010/077634的seqidno.20和21)和mdx-1105(也稱為bms-936559和例如wo2007/005874公開的抗pd-l1結(jié)合劑)。

amp-224(b7-dcig；amplimmune；如公開于wo2010/027827和wo2011/066342)是阻斷pd1與b7-h1相互作用的pd-l2fc融合可溶性受體。

在一些實施方式中，所述抗lag-3抗體是bms-986016。bms-986016(也稱為bms986016；百時美施貴寶)是結(jié)合lag-3的單克隆抗體。bms-986016和其它人源化抗lag-3抗體公開于us2011/0150892、wo2010/019570和wo2014/008218。

在某些實施方式中，本文所述聯(lián)合療法包括共刺激分子或抑制性分子的調(diào)節(jié)劑，如共抑制配體或受體。

在一個實施方式中，所述共刺激分子的共刺激調(diào)節(jié)劑如激動劑選自ox40、cd2、cd27、cds、icam-1、lfa-1(cd11a/cd18)、icos(cd278)、4-1bb(cd137)、gitr、cd30、cd40、baffr、hvem、cd7、light、nkg2c、slamf7、nkp80、cd160、b7-h3或cd83配體的激動劑(如激動性抗體或其抗原結(jié)合片段或可溶性融合)。

在另一個實施方式中，本文公開的聯(lián)合療法包括共刺激分子，如與正信號相關(guān)的激動劑，包括cd28、cd27、icos和gitr的共刺激結(jié)構(gòu)域。

示例性gitr激動劑包括例如gitr融合蛋白和抗gitr抗體(如二價抗gitr抗體)，如gitr融合蛋白，其描述于美國專利號:6,111,090、歐洲專利號:090505b1、美國專利號:8,586,023、pct公開號:wo2010/003118和2011/090754，或抗gitr抗體，其描述于例如美國專利號:7,025,962、歐洲專利號:1947183b1、美國專利號:7,812,135、美國專利號:8,388,967、美國專利號:8,591,886、歐洲專利號:ep1866339、pct公開號:wo2011/028683、pct公開號:wo2013/039954、pct公開號:wo2005/007190、pct公開號:wo2007/133822、pct公開號:wo2005/055808、pct公開號:wo99/40196、pct公開號:wo2001/03720、pct公開號:wo99/20758、pct公開號:wo2006/083289、pct公開號:wo2005/115451、美國專利號:7,618,632和pct公開號:wo2011/051726。

在一個實施方式中，所述抑制劑是可溶性配體(如ctla-4-ig)，或結(jié)合pd-l1、pd-l2或ctla4的抗體或抗體片段。例如，抗pd-1抗體分子能與抗ctla-4抗體如依匹單抗聯(lián)合施用，例如用于治療癌(例如，癌選自：黑素瘤如轉(zhuǎn)移性黑素瘤；肺癌如非小細(xì)胞肺癌；或前列腺癌)。示例性抗ctla4抗體包括曲美母單抗(來自輝瑞(pfizer)的igg2單克隆抗體，之前稱為替斯利單抗、cp-675,206)和依匹單抗(ctla-4抗體，也稱為mdx-010，cas號477202-00-9)。

在一個實施方式中，所述抗pd-1抗體分子在用抗ctla4抗體(如依匹單抗)治療后施用，無論有或沒有braf抑制劑(如維羅非尼或達(dá)拉非尼)。能用的示例性劑量包括約1-10mg/kg如3mg/kg的抗pd-1抗體分子劑量，和約3mg/kg的抗ctla-4抗體劑量，如依匹單抗。

在另一個實施方式中，所述抗pd-1或pd-l1抗體分子與抗lag-3抗體或其抗原結(jié)合片段聯(lián)合施用。在另一個實施方式中，所述抗pd-1或pd-l1抗體分子與抗tim-3抗體或其抗原結(jié)合片段聯(lián)合施用。在另一個實施方式中，所述抗pd-1或pd-l1抗體分子與抗lag-3抗體和抗tim-3抗體或其抗原結(jié)合片段聯(lián)合施用。本文引用的抗體組合能分開施用(如作為分開的抗體)，或相連施用(如作為雙特異或三特異性抗體分子)。在一個實施方式中，施用雙特異性抗體，所述抗體包括抗pd-1或pd-l1抗體分子與抗tim-3抗體或抗lag-3抗體或其抗原結(jié)合片段。在某些實施方式中，本文所用抗體組合用于治療癌，如本文所述癌(例如實體瘤)。上述組合的功效能在本領(lǐng)域已知的動物模型中測試。例如，測試抗pd-1和抗lag-3協(xié)同效應(yīng)的動物模型描述于例如woo等.(2012)cancerres.72(4):917-27)。

在另一個實施方式中，所述抗pd-1或pd-l1抗體分子與ceacam(如ceacam-1、-3和/或-5)抑制劑聯(lián)合施用。在一個實施方式中，ceacam(如ceacam-1、-3和/或-5)抑制劑是抗ceacam抗體分子。不受理論約束地認(rèn)為癌胚抗原細(xì)胞粘附分子(ceacam)如ceacam-1和-5至少部分介導(dǎo)抗腫瘤免疫應(yīng)答的抑制(參見例如markel等.jimmunol.2002年3月15日；168(6):2803-10；markel等.jimmunol.2006年11月1日；177(9):6062-71；markel等.immunology.2009年2月；126(2):186-200；markel等.cancerimmunolimmunother.2010年2月；59(2):215-30；ortenberg等.molcancerther.2012年6月；11(6):1300-10；stern等.jimmunol.2005年6月1日；174(11):6692-701；zheng等.plosone.2010年9月2日；5(9).pii:e12529)。例如，ceacam-1被描述為tim-3的嗜異性配體并在tim-3介導(dǎo)t細(xì)胞耐受及耗盡中起作用(參見例如wo2014/022332；huang等.(2014)naturedoi:10.1038/nature13848)。在實施方式中，共阻斷ceacam-1和tim-3顯示在異種移植結(jié)直腸癌模型中增強抗腫瘤免疫應(yīng)答(參見例如wo2014/022332；huang等.(2014)，同上)。在其它實施方式中，共阻斷ceacam-1和pd-1降低t細(xì)胞耐受，如wo2014/059251所描述。因此，ceacam抑制劑能與本文所述其它免疫調(diào)節(jié)劑(如抗pd-1和/或抗tim-3抑制劑)一起使用以增強免疫應(yīng)答抵御癌，如黑素瘤、肺癌(例如nsclc)、膀胱癌、結(jié)腸癌、卵巢癌和本文所述其它癌。

因此，在一些實施方式中，所述抗pd-1抗體分子與ceacam抑制劑(如ceacam-1、-3和/或-5抑制劑)聯(lián)合施用。在一個實施方式中，所述ceacam抑制劑是抗ceacam抗體分子。在一個實施方式中，所述抗pd-1抗體分子與ceacam-1抑制劑如抗ceacam-1抗體分子聯(lián)合施用。在另一個實施方式中，所述抗pd-1抗體分子與ceacam-3抑制劑如抗ceacam-3抗體分子聯(lián)合施用。在另一個實施方式中，所述抗pd-1抗體分子與ceacam-5抑制劑如抗ceacam-5抗體分子聯(lián)合施用。示例性抗ceacam-1抗體描述于wo2010/125571、wo2013/082366和wo2014/022332，例如單克隆抗體34b1、26h7和5f4；或其重組形式，描述于例如us2004/0047858、us7,132,255和wo99/052552。在其它實施方式中，所述抗ceacam抗體結(jié)合ceacam-5，描述于例如zheng等.plosone.2010年9月2日；5(9).pii:e12529(doi:10:1371/journal.pone.0021146)，或與ceacam-1和ceacam-5交叉反應(yīng)，描述于例如wo2013/054331和us2014/0271618。

在另一個實施方式中，所述聯(lián)合療法包括修飾t細(xì)胞，例如與采用嵌合抗原受體(car)t細(xì)胞的過繼性t細(xì)胞免疫療法組合(例如描述于johnlb等.(2013)clin.cancerres.19(20):5636-46)。

在其它實施方式中，本文所述聯(lián)合療法還能包括細(xì)胞因子，如白介素-21或白介素-2。在某些實施方式中，本文所述組合用于治療癌，如本文所述癌(例如實體瘤或黑素瘤)。

例如，能用于聯(lián)合療法的示例性免疫調(diào)節(jié)劑包括但不限于阿托珠單抗(獲自)；培非格司亭來那度胺(cc-5013,)；沙利度胺actimid(cc4047)；和細(xì)胞因子，如il-21或irx-2(人細(xì)胞因子混合物，包括白介素1、白介素2和干擾素γ,cas951209-71-5，獲自irx治療公司(irxtherapeutics))。

在其它實施方式中，所述聯(lián)合療法能結(jié)合(如在之前、同時或之后)以下一或多種施用于對象：骨髓移植、用化療劑如氟達(dá)拉濱的t細(xì)胞剝括療法、外放射治療(xrt)、環(huán)磷酰胺和/或抗體如okt3或campath。在一個實施方式中，所述抗pd-1或pd-l1抗體分子在b細(xì)胞剝括療法如能與cd20反應(yīng)的試劑之后施用，例如美羅華(rituxan)。例如，在一個實施方式中，對象可接受用高劑量化療的標(biāo)準(zhǔn)治療，然后是外周血干細(xì)胞移植。在某些實施方式中，移植后，對象接受抗pd-1或pd-l1抗體分子。在另外一個實施方式中，所述抗pd-1或pd-l1抗體分子在手術(shù)之前后或之后施用。

進(jìn)一步聯(lián)合療法的另一示例包括用于治療黑素瘤的達(dá)卡巴嗪。不受理論約束，認(rèn)為細(xì)胞死亡促進(jìn)pd-1阻斷與化療的聯(lián)用，這是大部分化療化合物細(xì)胞毒性作用的結(jié)果，能引起抗原呈遞通路中的腫瘤抗原水平增加?？梢鹋c細(xì)胞死亡中pd-1阻斷協(xié)同的其它聯(lián)合療法是輻射、手術(shù)和激素剝奪。這些操作中的每一個都在宿主中形成腫瘤抗原來源。血管生成抑制劑還可聯(lián)合pd-1阻斷。抑制血管生成可導(dǎo)致細(xì)胞死亡，這可能使腫瘤抗原進(jìn)入宿主抗原呈遞通路。

聯(lián)合療法還能與雙特異性抗體聯(lián)用。雙特異性抗體能用于靶向2個單獨抗原。例如，抗fc受體/抗腫瘤抗原(如her-2/neu)雙特異性抗體用于使巨噬細(xì)胞靶向腫瘤位點。這一靶向可更有效地激活腫瘤特異反應(yīng)。這些反應(yīng)的t細(xì)胞臂通過使用pd-1阻斷來增加?；蛘撸ㄟ^使用結(jié)合腫瘤抗原和樹突細(xì)胞特異性細(xì)胞表面標(biāo)記物的雙特異性抗體，抗原可直接遞送給dc。

腫瘤通過多種機制逃避宿主免疫監(jiān)視。許多這些機制可通過滅活蛋白來克服，所述蛋白由腫瘤表達(dá)且是免疫抑制性的。這些蛋白包括tgf-β(kehrl,j.等.(1986)j.exp.med.163:1037-1050)、il-10(howard,m.&o'garra,a.(1992)immunologytoday13:198-200)和fas配體(hahne,m.等.(1996)science274:1363-1365)。這些實體中每一個的抗體或其抗原結(jié)合片段可與抗pd-1聯(lián)用以抵消免疫抑制劑作用并促進(jìn)宿主的腫瘤免疫應(yīng)答。

可用于激活宿主免疫反應(yīng)性的其它抗體能與本文所述聯(lián)合療法聯(lián)用。其包括激活dc功能和抗原呈遞的樹突細(xì)胞表面上的分子。抗cd40抗體能有效替代t輔助細(xì)胞活性(ridge,j.等.(1998)nature393:474-478)并能與pd-1抗體聯(lián)用(ito,n.等.(2000)immunobiology201(5)527-40)。t細(xì)胞共刺激分子的抗體如ctla-4(如美國專利號5,811,097)、ox-40(weinberg,a.等.(2000)immunol164:2160-2169)、4-1bb(melero,i.等.(1997)naturemedicine3:682-685(1997))和icos(hutloff,a.等.(1999)nature397:262-266)也提供了增高水平的t細(xì)胞活化。

本文所述全部方法中，pd-1阻斷能聯(lián)合其它形式的免疫療法如細(xì)胞因子治療(例如干擾素、gm-csf、g-csf、il-2、il-21)或雙特異性抗體療法，提供增強的腫瘤細(xì)胞呈遞(參見例如holliger(1993)proc.natl.acad.sci.usa90:6444-6448；poljak(1994)structure2:1121-1123)。

本文公開的聯(lián)合療法能進(jìn)一步聯(lián)合免疫原試性劑如癌細(xì)胞、純化腫瘤抗原(包括重組蛋白、肽和碳水化合物分子)、細(xì)胞和轉(zhuǎn)染有免疫刺激細(xì)胞因子編碼基因的細(xì)胞(he等.(2004)j.immunol.173:4919-28)?？墒褂玫哪[瘤疫苗的非限制性示例包括黑素瘤抗原的肽，如gp100、mage抗原、trp-2、mart1和/或酪氨酸酶的肽，或轉(zhuǎn)染成表達(dá)細(xì)胞因子gm-csf的腫瘤細(xì)胞。

pd-1阻斷能與疫苗接種操作聯(lián)合。已設(shè)計了許多針對腫瘤接種疫苗的實驗策略(參見rosenberg,s.,2000,《癌疫苗開發(fā)》(developmentofcancervaccines),asco教育集(ascoeducationalbookspring):60-62；logothetis,c.,2000,asco教育集:300-302；khayat,d.2000,asco教育集:414-428；foon,k.2000,asco教育集:730-738；也參見restifo,n.和sznol,m.,《癌疫苗》(cancervaccines),第61章,3023-3043頁，收錄于devita,v.等.(編),1997,“癌癥：腫瘤學(xué)原理與實踐(cancer:principlesandpracticeofoncology)”.第5版)。在一種這類策略中，疫苗用自體或異基因腫瘤細(xì)胞制備。這些細(xì)胞疫苗已顯示在腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)表達(dá)gm-csf時最有效。顯示gm-csf是用于腫瘤疫苗接種的抗原呈遞的有力激活劑(dranoff等.(1993)proc.natl.acad.sci.u.s.a.90:3539-43)。

pd-1阻斷能與在腫瘤中表達(dá)的重組蛋白和/或肽集合聯(lián)用，以產(chǎn)生對這些蛋白的免疫應(yīng)答。這些蛋白通常被免疫系統(tǒng)視作自身抗原并因而對其耐受。腫瘤抗原還可包括蛋白端粒酶，其是合成染色體端粒所需且在超過85％人癌癥以及僅有限數(shù)量的體細(xì)胞組織中表達(dá)(kim,n等.(1994)science266:2011-2013)(這些體細(xì)胞組織可通過多種方式免于免疫攻擊)。腫瘤抗原還可以是癌細(xì)胞中表達(dá)的“新抗原”，因為體細(xì)胞突變改變2個未改變序列之間的蛋白序列或形成融合蛋白(即費城染色體中的bcr-abl)，或來自b細(xì)胞腫瘤的獨特型。

其它腫瘤疫苗包括來自涉及人癌癥的病毒的蛋白，如人乳頭狀瘤病毒(hpv)、肝炎病毒(hbv和hcv)和卡波濟(jì)氏皰疹肉瘤病毒(khsv)。另一可與pd-1阻斷聯(lián)用的腫瘤特異抗原形式是分離自腫瘤組織自身的純化熱激蛋白(hsp)。這些熱激蛋白包含來自腫瘤細(xì)胞的蛋白片段且這些hsp高效遞送抗原呈遞細(xì)胞以引發(fā)腫瘤免疫性(suot,r&srivastava,p(1995)science269:1585-1588；tamura,y.等.(1997)science278:117-120)。

樹突細(xì)胞(dc)是能用于刺激抗原特異反應(yīng)的有效抗原呈遞細(xì)胞。dc能離體生成并加載有多種蛋白和肽抗原以及腫瘤細(xì)胞提取物(nestle,f.等.(1998)naturemedicine4:328-332)。dc也可通過遺傳方式轉(zhuǎn)導(dǎo)以同樣表達(dá)這些腫瘤抗原。dc也直接融合腫瘤細(xì)胞用于免疫目的(kugler,a.等.(2000)naturemedicine6:332-336)。作為疫苗接種方法，dc免疫可有效聯(lián)合pd-1阻斷以激活更有力的抗腫瘤反應(yīng)。

額外聯(lián)合療法

本文公開的聯(lián)合療法能進(jìn)一步與一或多種額外治療劑如一或多種抗癌劑、細(xì)胞毒性或細(xì)胞抑制試劑、激素治療、疫苗和/或其它免疫療法共配制和/或共施用。在其它實施方式中，所述抗體分子與其它治療處理方式聯(lián)合施用，包括手術(shù)、放射、冷凍手術(shù)和/或溫?zé)岑煼?。這種聯(lián)合療法可有利地使用較低劑量的所施用治療劑，從而避免與多種單一療法相關(guān)的可能毒性或并發(fā)癥。

例如，本文公開的聯(lián)合療法還能聯(lián)合標(biāo)準(zhǔn)癌治療。例如，pd-1阻斷可有效組合化療方案。這些情況下，可降低施用的化療試劑劑量(mokyr,m.等.(1998)cancerresearch58:5301-5304)。在某些實施方式中，本文公開的方法和組合物與一或多種其他抗體分子、化療、其它抗癌療法(如靶向抗癌療法或溶瘤細(xì)胞藥物)、細(xì)胞毒性藥劑、基于免疫的療法(如細(xì)胞因子)、手術(shù)和/或輻射過程聯(lián)合施用。能聯(lián)合施用的示例性細(xì)胞毒性藥劑包括抗微管劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、抗代謝物、有絲分裂抑制劑、烷化劑、蒽環(huán)類藥物、長春花生物堿、插入劑、能干擾信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的試劑、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的藥劑、蛋白酶體抑制劑和輻射(如局部或全身照射)。

標(biāo)準(zhǔn)癌癥護(hù)理的示例性組合包括至少以下：

在某些實施方式中，所述聯(lián)合療法與標(biāo)準(zhǔn)癌癥護(hù)理化療劑聯(lián)用，包括但不限于阿那曲唑比卡魯胺硫酸博萊霉素白消安白消安注射液卡培他濱n4-戊氧羰基-5-脫氧-5-氟胞苷、卡鉑卡莫司汀苯丁酸氮芥順鉑克拉屈濱環(huán)磷酰胺(或)、賽得威、阿糖胞苷阿糖胞苷脂質(zhì)體注射液達(dá)卡巴嗪更生霉素(放線菌素d,cosmegan)、鹽酸道諾霉素檸檬酸道諾霉素脂質(zhì)體注射液地塞米松、多西他賽鹽酸阿霉素依托泊苷磷酸氟達(dá)拉濱5-氟尿嘧啶氟他米特tezacitibine,吉西他濱(二氟脫氧胞苷)、羥基脲依達(dá)比星異環(huán)磷酰胺伊立替康l-天冬酰胺酶亞葉酸鈣、美法侖6-巰嘌呤甲氨蝶呤米托蒽醌麥羅塔、紫杉醇蛋白結(jié)合型紫杉醇phoenix(yttrium90/mx-dtpa)、噴司他丁、有卡莫司汀植入物的聚苯丙生20枸櫞酸它莫西芬替尼泊苷6-硫鳥嘌呤、噻替派、替拉扎明注射用鹽酸拓?fù)涮婵?imgfile="bda00012949290600005263.gif"wi="346"he="61"img-content="drawing"img-format="gif"orientation="portrait"inline="no"/>長春花堿長春新堿和長春瑞濱。

示例性烷化劑包括但不限于氮芥、乙烯亞胺衍生物、烷基磺酸鹽、亞硝基脲和三嗪):尿嘧啶氮芥(aminouraciluracilnitrogen)、氮芥環(huán)磷酰胺(revimmune^tm)、異環(huán)磷酰胺美法侖苯丁酸氮芥哌泊溴烷曲他胺()、三亞乙基硫代磷胺(triethylenethiophosphoramine)、替莫唑胺噻替派白消安卡莫司汀洛莫司汀鏈脲菌素和達(dá)卡巴嗪額外的示例性烷化劑包括但不限于奧沙利鉑替莫唑胺(和)；更生霉素(也稱為放線菌素d,)；美法侖(也稱為l-pam、l-溶肉瘤素和苯丙氨酸氮芥、)；六甲蜜胺(也稱為六甲嘧胺(hmm)、)；卡莫司汀苯達(dá)莫司汀白消安(和)；卡鉑洛莫司汀(也稱為ccnu,)；順鉑(也稱為cddp、和)；苯丁酸氮芥環(huán)磷酰胺(和)；達(dá)卡巴嗪(也稱為dtic、dic和咪唑甲酰胺、)；六甲蜜胺(也稱為六甲嘧胺(hmm),)；異環(huán)磷酰胺prednumustine；甲基芐肼二氯甲基二乙胺(也稱為氮芥、氮介和甲氯乙胺鹽酸鹽、)；鏈脲菌素噻替派(也稱為硫代磷酰胺、tespa和tspa、)；環(huán)磷酰胺()；和鹽酸苯達(dá)莫司汀

例如，示例性蒽環(huán)類藥物包括多柔比星(和)；博來霉素道諾霉素(鹽酸道諾霉素、道諾霉素和鹽酸紅比霉素、)；道諾霉素脂質(zhì)體(檸檬酸道諾霉素脂質(zhì)體、)；米托蒽醌(dhad,)；表柔比星伊達(dá)比星(idamycin)；絲裂霉素c格爾德霉素；除莠霉素；近灰霉素；和去乙?；S霉素。

能與本文所公開聯(lián)合療法(如抗pd-1或pd-l1抗體分子，單獨或聯(lián)合另一免疫調(diào)節(jié)劑(如抗lag-3或抗tim-3抗體分子)和表1的化合物)聯(lián)用的示例性長春花生物堿包括但不限于酒石酸長春瑞濱長春新堿和長春地辛)；長春花堿(也稱為硫酸長春花堿、長春堿和vlb、和)；和長春瑞濱

能與本文所公開聯(lián)合療法(如抗pd-1或pd-l1抗體分子，單獨或聯(lián)合另一免疫調(diào)節(jié)劑(如抗lag-3或抗tim-3抗體分子)和ldk378)聯(lián)用的示例性蛋白酶體抑制劑包括但不限于硼替佐米卡非佐米(px-171-007,(s)-4-甲基-n-((s)-1-(((s)-4-甲基-1-((r)-2-甲基環(huán)氧乙烷-2-基)-1-氧戊烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯丙烷-2-基)-2-((s)-2-(2-嗎啉代乙酰氨基)-4-苯基丁酰氨)-戊酰胺)；marizomib(npi-0052)；檸檬酸艾沙佐米(mln-9708)；delanzomib(cep-18770)；o-甲基-n-[(2-甲基-5-噻唑基)羰基]-l-絲氨酰-o-甲基-n-[(1s)-2-[(2r)-2-甲基-2-環(huán)氧乙烷]-2-氧代-1-(苯基甲基)乙基]-l-絲氨酰胺(onx-0912)；danoprevir(rg7227,cas850876-88-9)；艾沙佐米(mln2238,cas1072833-77-2)；和(s)-n-[(苯基甲氧基)羰基]-l-亮氨酰-n-(1-甲酰-3-甲基丁基)-l-亮氨酸酰胺(mg-132,cas133407-82-6)。

在一些實施方式中，本文公開的聯(lián)合療法(如抗pd-1或pd-l1抗體分子，單獨或聯(lián)合另一免疫調(diào)節(jié)劑(如抗lag-3或抗tim-3抗體分子)和ldk378)聯(lián)合酪氨酸激酶抑制劑(如受體酪氨酸激酶(rtk)抑制劑)。示例性酪氨酸激酶抑制劑包括但不限于表皮生長因子(egf)通路抑制劑(如表皮生長因子受體(egfr)抑制劑)、血管內(nèi)皮生長因子(vegf)通路抑制劑(血管內(nèi)皮生長因子受體(vegfr)抑制劑(如vegfr-1抑制劑、vegfr-2抑制劑、vegfr-3抑制劑))、血小板衍生生長因子(pdgf)通路抑制劑(如血小板衍生生長因子受體(pdgfr)抑制劑(如pdgfr-β抑制劑))、raf-1抑制劑、kit抑制劑和ret抑制劑。在一些實施方式中，與hedgehog抑制劑聯(lián)用的抗癌劑選自下組：阿西替尼(ag013736)、博舒替尼(ski-606),西地尼布(recentin^tm,azd2171)、達(dá)沙替尼(bms-354825)、埃羅替尼吉非替尼伊馬替尼(cgp57148b、sti-571)、拉帕替尼來他替尼(cep-701)、來那替尼(hki-272)、尼羅替尼司馬沙尼(賽瑪西尼、su5416)、舒尼替尼(su11248)、toceranib凡德他尼(zd6474)、瓦他拉尼(ptk787、ptk/zk)、曲妥單抗貝伐單抗利妥昔單抗西妥昔單抗帕尼單抗雷珠單抗尼羅替尼索拉非尼阿侖單抗吉妥單抗enmd-2076、pci-32765、ac220、多韋替尼乳酸鹽(tki258,chir-258)、bibw2992(tovok^tm)、sgx523、pf-04217903、pf-02341066、pf-299804、bms-777607、abt-869、mp470、bibf1120ap24534、jnj-26483327、mgcd265、dcc-2036、bms-690154、cep-11981、tivozanib(av-951)、osi-930、mm-121、xl-184、xl-647、xl228、aee788、ag-490、ast-6、bms-599626、cudc-101、pd153035、培利替尼(ekb-569)、凡德他尼(凡他尼布)、wz3146、wz4002、wz8040、abt-869(利尼伐尼)、aee788、ap24534(普納替尼)、av-951(tivozanib)、阿西替尼、bay73-4506(瑞戈非尼)、丙氨酸布立尼布(bms-582664)、布立尼布(bms-540215)、西地尼布(azd2171)、chir-258(多韋替尼)、cp673451、cyc116、e7080、ki8751、馬賽替尼(ab1010)、mgcd-265、二磷酸莫替沙尼(amg-706)、mp-470、osi-930、鹽酸帕唑帕尼、pd173074、甲苯磺酸索拉非尼(bay43-9006)、su5402、tsu-68(su6668)、瓦他拉尼、xl880(gsk1363089、exel-2880)。更多hedgehog抑制劑的示例包括但不限于維莫德吉(2-氯-n-[4-氯-3-(2-吡啶)苯基]-4-(甲磺酰)-苯甲酰胺、gdc-0449，描述于pct公開號wo06/028958)；1-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-3-((3-(4-氟苯基)-3,4-二氫-4-氧代-2-喹唑啉)甲基)-尿素(cas330796-24-2)；

n-[(2s,3r,3'r,3as,4'ar,6s,6'ar,6'bs,7ar,12'as,12'bs)-2',3',3a,4,4',4'a,5,5',6,6',6'a,6'b,7,7',7a,8',10',12',12'a,12'b-二十氫-3,6,11',12'b-四甲基螺[氟[3,2-b]吡啶-2(3h),9'(1'h)-萘并[2,1-a]甘菊環(huán)(azulen)]-3'-基]-甲基磺酰胺(ipi926,cas1037210-93-7)；和4-氟-n-甲基-n-[1-[4-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-1-酞嗪基]-4-哌啶基]-2-(三氟甲基)-苯甲酰胺(ly2940680,cas1258861-20-9)；和erismodegib(lde225)。選定酪氨酸激酶抑制劑選自吉非替尼；鹽酸埃羅替尼利尼伐尼(n-[4-(3-氨基-1h-吲哚-4-基)苯基]-n'-(2-氟-5-甲基苯基)尿素，也稱為abt869，可獲自基因泰克(genentech))；蘋果酸舒尼替尼博舒替尼(4-[(2,4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基]喹啉-3-腈，也稱為ski-606，描述于美國專利號6,780,996)；達(dá)沙替尼帕唑帕尼索拉非尼凡他尼布(zd6474)；和伊馬替尼或甲磺酸伊馬替尼(和)。

在某些實施方式中，本文所公開聯(lián)合療法(如抗pd-1或pd-l1抗體分子，單獨或聯(lián)合另一免疫調(diào)節(jié)劑(如抗lag-3或抗tim-3抗體分子)和表1化合物ldk378)聯(lián)合血管內(nèi)皮生長因子(vegf)受體抑制劑，包括但不限于貝伐單抗阿西替尼丙氨酸布立尼布(bms-582664,(s)-((r)-1-(4-(4-氟-2-甲基-1h-吲哚-5-基氧基)-5-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基氧基)丙烷-2-基)2-氨基丙酸酯)；索拉非尼帕唑帕尼蘋果酸舒尼替尼西地尼布(azd2171、cas288383-20-1)；尼達(dá)尼布(bibf1120,cas928326-83-4)；foretinib(gsk1363089)；替拉替尼(bay57-9352,cas332012-40-5)；帕替尼(yn968d1,cas811803-05-1)；伊馬替尼帕納替尼(ap24534,cas943319-70-8)；tivozanib(av951,cas475108-18-0)；瑞格非尼(bay73-4506,cas755037-03-7)；瓦他拉尼二鹽酸鹽(ptk787,cas212141-51-0)；布立尼布(bms-540215,cas649735-46-6)；凡德他尼(或azd6474)；二磷酸莫替沙尼(amg706,cas857876-30-3,n-(2,3-二氫-3,3-二甲基-1h-吲哚-6-基)-2-[(4-吡啶基甲基)氨基]-3-吡啶甲酰胺，描述于pct公開號wo02/066470)；多韋替尼二乳酸(tki258,cas852433-84-2)；linfanib(abt869,cas796967-16-3)；卡博替尼(xl184,cas849217-68-1)；來他替尼(cas111358-88-4)；n-[5-[[[5-(1,1-二甲基乙基)-2-惡唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺(bms38703,cas345627-80-7)；(3r,4r)-4-氨基-1-((4-((3-甲氧基苯基)氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-醇(bms690514)；n-(3,4-二氯-2-氟苯基)-6-甲氧基-7-[[(3aα,5β,6aα)-八氫-2-甲基環(huán)戊[c]吡咯-5-基]甲氧基]-4-喹唑啉胺(xl647,cas781613-23-8)；4-甲基-3-[[1-甲基-6-(3-吡啶基)-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基]氨基]-n-[3-(三氟甲基)苯基]-苯甲酰胺(bhg712,cas940310-85-0)；和阿柏西普

示例性抗vegf抗體包括不限于：與雜交瘤atcchb10709所生成單克隆抗vegf抗體a4.6.1結(jié)合相同表位的單克隆抗體；根據(jù)presta等.(1997)cancerres.57:4593-4599產(chǎn)生的重組人源化抗vegf單克隆抗體。在一個實施方式中，所述抗vegf抗體是貝伐單抗(bv)，也稱為rhumabvegf或其包括突變?nèi)薸ggl框架區(qū)和阻斷人vegf與其受體的結(jié)合的來自鼠抗hvegf單克隆抗體a.4.6.1的抗原結(jié)合互補決定區(qū)。貝伐單抗和其它人源化抗vegf抗體進(jìn)一步描述于2005年2月26日提交的美國專利號6,884,879。額外抗體包括g6或b20系列抗體(如g6-31,b20-4.1)，如pct公開號wo2005/012359、pct公開號wo2005/044853所述，這些專利申請的內(nèi)容通過引用明確納入本文。額外抗體參見美國專利號7,060,269,6,582,959,6,703,020,6,054,297,w098/45332,wo96/30046,wo94/10202,ep0666868b1,美國專利申請公開號2006009360,20050186208,20030206899,20030190317,20030203409和20050112126；以及popkov等,journalofimmunologicalmethods288:149-164(2004)。其它抗體包括結(jié)合人vegf上功能表位的那些，包括殘基f17、ml8、d19、y21、y25、q89、191、kl01、el03和c104，或包括殘基f17、y21、q22、y25、d63、183和q89。

在一些實施方式中，本文所公開聯(lián)合療法(如抗pd-1或pd-l1抗體分子，單獨或聯(lián)合另一免疫調(diào)節(jié)劑(如抗lag-3或抗tim-3抗體分子)和表1化合物ldk378)聯(lián)合pi3k抑制劑。在一個實施方式中，所述pi3k抑制劑是pi3kδ和γ亞型的抑制劑。能聯(lián)用的示例性pi3k抑制劑描述于例如wo2010/036380,wo2010/006086,wo09/114870,wo05/113556,gsk2126458,gdc-0980,gdc-0941,sanofixl147,xl756,xl147,pf-46915032,bkm120,cal-101,cal263,sf1126,px-886和雙重pi3k抑制劑(如諾華bez235)。更多pi3k抑制劑示例包括但不限于4-[2-(1h-吲哚-4-基)-6-[[4-(甲磺酰)哌嗪-1-基]甲基]噻吩[3,2-d]嘧啶-4-基]嗎啉(gdc0941，描述于pct公開號wo09/036082和wo09/055730)；2-甲基-2-[4-[3-甲基-2-氧代-8-(喹啉-3-基)-2,3-二氫咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]苯基]丙腈(也稱為bez235或nvp-bez235，描述于pct公開號wo06/122806)；4-(三氟甲基)-5-(2,6-二嗎啉嘧啶-4-基)吡啶-2-胺(也稱為bkm120或nvp-bkm120，描述于pct公開號wo2007/084786)；陶扎色替(vx680或mk-0457,cas639089-54-6)；(5z)-5-[[4-(4-吡啶)-6-喹啉]亞甲基]-2,4-噻唑烷二酮(gsk1059615,cas958852-01-2)；(1e,4s,4ar,5r,6as,9ar)-5-(乙酰氧基)-1-[(二-2-丙烯基氨基)亞甲基]-4,4a,5,6,6a,8,9,9a-八氫-11-羥基-4-(甲氧基甲基)-4a,6a-二甲基-環(huán)戊[5,6]萘并[1,2-c]吡喃-2,7,10(1h)-三酮(px866,cas502632-66-8)；8-苯基-2-(嗎啉-4-基)-色滿-4-酮(ly294002,cas154447-36-6)；2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1h-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8h)-酮(sar245409或xl765)；1,3-二氫-8-(6-甲氧基-3-吡啶基)-3-甲基-1-[4-(1-哌嗪)-3-(三氟甲基)苯基]-2h-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮,,(2z)-2-丁烯二酸酯(1:1)(bgt226)；5-氟-3-苯基-2-[(1s)-1-(9h-嘌呤-6-基氨基)乙基]-4(3h)-喹唑啉酮(cal101)；2-氨基-n-[3-[n-[3-[(2-氯-5-甲氧基苯基)氨基]喹喔啉-2-基]氨磺酰]苯基]-2-甲基丙酰胺(sar245408或xl147)；和(s)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)-吡啶-4-基]-噻唑-2-基}-酰胺)(byl719)。

在一些實施方式中，本文所公開聯(lián)合療法(如抗pd-1或pd-l1抗體分子，單獨或聯(lián)合另一免疫調(diào)節(jié)劑(如抗lag-3或抗tim-3抗體分子)和表1化合物ldk378)聯(lián)合mtor抑制劑，如一或多種mtor抑制劑選自一或多種雷帕霉素、坦西莫司azd8055、bez235、bgt226,xl765、pf-4691502、gdc0980、sf1126、osi-027、gsk1059615、ku-0063794、wye-354、palomid529(p529)、pf-04691502或pki-587.地磷莫司(之前稱為deferolimus,(1r,2r,4s)-4-[(2r)-2[(1r,9s,12s,15r,16e,18r,19r,21r,23s,24e,26e,28z,30s,32s,35r)-1,18-二羥基-19,30-二甲氧基-15,17,21,23,29,35-六甲基-2,3,10,14,20-戊氧代-11,36-二惡-4-氮雜三環(huán)[30.3.1.0^4,9]三十六烷-16,24,26,28-四烯-12-基]丙基]-2-甲氧基環(huán)己基二甲基亞膦酸鹽，也稱為ap23573和mk8669，描述于pct公開號wo03/064383)；依維莫司(或rad001)；雷帕霉素(ay22989,)；塞馬莫德(cas164301-51-3)；emsirolimus,(5-{2,4-二[(3s)-3-甲基嗎啉-4-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-基}-2-甲氧基苯基)甲醇(azd8055)；2-氨基-8-[反式-4-(2-羥乙基)環(huán)己基]-6-(6-甲氧基-3-吡啶基)-4-甲基-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8h)-酮(pf04691502,cas1013101-36-4)；和n²-[1,4-二氧-4-[[4-(4-氧代-8-苯基-4h-1-苯并吡喃-2-基)嗎啉-4-基]甲氧基]丁基]-l-精氨酰甘氨酰-l-α-天冬氨酰l-絲氨酸-,內(nèi)鹽(sf1126,cas936487-67-1)、(1r,4r)-4-(4-氨基-5-(7-甲氧基-1h-吲哚-2-基)咪唑并[1,5-f][1,2,4]三嗪-7-基)環(huán)己甲酸(osi-027)；和xl765。

在一些實施方式中，本文所公開聯(lián)合療法(如抗pd-1或pd-l1抗體分子，單獨或聯(lián)合另一免疫調(diào)節(jié)劑(如抗lag-3或抗tim-3抗體分子)和表1化合物ldk378)聯(lián)合braf抑制劑，如gsk2118436、rg7204、plx4032、gdc-0879、plx4720和甲苯磺酸索拉非尼(bay43-9006)。在更多實施方式中，braf抑制劑包括但不限于瑞戈非尼(bay73-4506,cas755037-03-7)；tuvizanib(av951,cas475108-18-0)；維羅非尼(plx-4032、cas918504-65-1)；encorafenib(也稱為lgx818)；1-甲基-5-[[2-[5-(三氟甲基)-1h-咪唑-2-基]-4-吡啶]氧基]-n-[4-(三氟甲基)苯基-1h-苯并咪唑-2-胺(raf265,cas927880-90-8)；5-[1-(2-羥乙基)-3-(吡啶-4-基)-1h-吡唑-4-基]-2,3-二氫茚-1-酮肟(gdc-0879,cas905281-76-7)；5-[2-[4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]苯基]-5-(4-吡啶基)-1h-咪唑-4-基]-2,3-二氫-1h-茚-1-酮肟(gsk2118436或sb590885)；(+/-)-甲基(5-(2-(5-氯-2-甲基苯基)-1-羥基-3-氧代-2,3-二氫-1h-異吲哚-1-基)-1h-苯并咪唑-2-基)氨基甲酸酯(也稱為xl-281和bms908662)和n-(3-(5-氯-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羰基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺(也稱為plx4720)。

在一些實施方式中，本文所公開聯(lián)合療法(如抗pd-1或pd-l1抗體分子，單獨或聯(lián)合另一免疫調(diào)節(jié)劑(如抗lag-3或抗tim-3抗體分子)和表1化合物ldk378)聯(lián)合mek抑制劑。在一些實施方式中，所述抗pd-1抗體與mek抑制劑的組合用于治療癌(如本文所述癌)。在一些實施方式中，用所述組合治療的癌選自黑素瘤、結(jié)直腸癌、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、血液惡性腫瘤或腎細(xì)胞癌。在某些實施方式中，所述癌包括braf突變(如brafv600e突變)、braf野生型、kras野生型或激活kras突變。這些癌可處于早期、中期或晚期。任意mek抑制劑能聯(lián)用，包括但不限于司美替尼(5-[(4-溴-2-氯苯基)氨基]-4-氟-n-(2-羥乙氧基)-1-甲基-1h-苯并咪唑-6-甲酰胺,也稱為azd6244或arry142886，描述于pct公開號wo2003077914)；曲美替尼二甲亞砜(gsk-1120212,cas1204531-25-80)；rdea436；n-[3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-6-甲氧基苯基]-1-[(2r)-2,3-二羥基丙基]-環(huán)丙基磺酰胺(也稱為rdea119或bay869766，描述于pct公開號wo2007014011)；as703026；bix02188；bix02189；2-[(2-氯-4-碘苯基)氨基]-n-(環(huán)丙基甲氧基)-3,4-二氟-苯甲酰胺(也稱為ci-1040或pd184352，描述于pct公開號wo2000035436)；n-[(2r)-2,3-二羥基丙氧基]-3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-苯甲酰胺(也稱為pd0325901并描述于pct公開號wo2002006213)；2’-氨基-3’-甲氧基黃酮(也稱為pd98059，可獲自德國的biaffin公司(biaffingmbh&co.,kg,germany))；2,3-二[氨基[(2-氨基苯基)硫代]亞甲基]-丁二腈(也稱為u0126并描述于美國專利號2,779,780)；xl-518(也稱為gdc-0973,cas號1029872-29-4，可獲自acccorp.)；g-38963；和g02443714(也稱為as703206)，或其藥學(xué)上可接受鹽或溶劑合物。額外的mek抑制劑示例公開于wo2013/019906、wo03/077914、wo2005/121142、wo2007/04415、wo2008/024725和wo2009/085983，所述專利的內(nèi)容通過引用納入本文。其它mek抑制劑示例包括但不限于benimetinib(6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3h-苯并咪唑-5-羧酸(2-羥乙氧基)-酰胺,也稱為mek162,cas1073666-70-2，描述于pct公開號wo2003077914)；2,3-二[氨基[(2-氨基苯基)硫代]亞甲基]-丁二腈(也稱為u0126并描述于美國專利號2,779,780)；(3s,4r,5z,8s,9s,11e)-14-(乙氨基)-8,9,16-三羥基-3,4-二甲基-3,4,9,19-四氫-1h-2-苯并惡唑環(huán)四癸炔-1,7(8h)-二酮](也稱為e6201，描述于pct公開號wo2003076424)；威羅菲尼(plx-4032,cas918504-65-1)；(r)-3-(2,3-二羥基丙基)-6-氟-5-(2-氟-4-碘苯基氨基)-8-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-4,7(3h,8h)-二酮(tak-733,cas1035555-63-5)；pimasertib(as-703026,cas1204531-26-9)；2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-n-(2-羥乙氧基)-1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-甲酰胺(azd8330)；和3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-n-(2-羥乙氧基)-5-[(3-氧代-[1,2]惡嗪烷-2-基)甲基]苯甲酰胺(ch4987655orro4987655)。

在一些實施方式中，本文所公開聯(lián)合療法(如抗pd-1或pd-l1抗體分子，單獨或聯(lián)合另一免疫調(diào)節(jié)劑(如抗lag-3或抗tim-3抗體分子)和表1化合物ldk378)聯(lián)合jak2抑制劑，如cep-701、incb18424、cp-690550(他索西替尼)。示例性jak抑制劑包括但不限于魯索替尼托法替尼(cp690550)；阿西替尼(ag013736,cas319460-85-0)；5-氯-n2-[(1s)-1-(5-氟-2-嘧啶基)乙基]-n4-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-l2,4-嘧啶二胺(azd1480,cas935666-88-9)；(9e)-15-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]-7,12,26-三氧雜-19,21,24-三氮雜四環(huán)[18.3.1.12,5.114,18]-二十六-1(24),2,4,9,14,16,18(25),20,22-碳烯(nonaene)(sb-1578,cas937273-04-6)；momelotinib(cyt387)；巴瑞替尼(incb-028050或ly-3009104)；帕克替尼(sb1518)；(16e)-14-甲基-20-氧雜-5,7,14,27-四氮雜四環(huán)[19.3.1.12,6.18,12]二十七-1(25),2,4,6(27),8,10,12(26),16,21,23-碳烯(sb1317)；gandotinib(ly2784544)；和n,n-環(huán)丙基-4-[(1,5-二甲基-1h-吡唑-3-基)氨基]-6-乙基-1,6-二氫-1-甲基-咪唑并[4,5-d]吡咯并[2,3-b]吡啶-7-甲酰胺(bms911543)。

在一些實施方式中，本文所公開聯(lián)合療法包括紫杉醇或紫杉醇試劑例如蛋白結(jié)合型紫杉醇(例如)。示例性的紫杉醇試劑包括但不限于納米粒子白蛋白結(jié)合型紫杉醇(abraxane，由阿博利斯生物科學(xué)公司(abraxisbioscience銷售))、二十二碳六烯酸結(jié)合型紫杉醇(dha-紫杉醇,taxoprexin，由protarga銷售)、聚谷氨酸酯結(jié)合型紫杉醇(pg-紫杉醇,paclitaxelpoliglumex、ct-2103、xyotax，由細(xì)胞治療公司(celltherapeutic)銷售))、腫瘤活化前體藥物(tap)、ang105(angiopep-2結(jié)合三分子紫杉醇，由immunogen銷售)、紫杉醇-ec-1(紫杉醇結(jié)合erbb2識別肽ec-1；參見li等.,biopolymers(2007)87:225-230)和葡萄糖綴合型紫杉醇(如2'-紫杉醇甲基2-吡喃葡萄糖琥珀酸，參見liu等.,bioorganic&medicinalchemistryletters(2007)17:617-620)。

在某些實施方式中，所述抗pd-1或pd-l1抗體分子單獨或聯(lián)合另一免疫調(diào)節(jié)劑(如抗lag-3或抗tim-3抗體分子)，與針對殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體的抗體(本文也稱為“抗kir抗體”)聯(lián)合施用。在某些實施方式中，本文所述抗pd-1抗體分子和抗kir抗體的組合用于治療癌，如本文所述癌(例如實體瘤，如晚期實體瘤)。

在一個實施方式中，所述抗pd-1或pd-l1抗體分子單獨或聯(lián)合另一免疫調(diào)節(jié)劑(如抗lag-3或抗tim-3抗體分子)，與細(xì)胞免疫療法(如provenge(例如sipuleucel))聯(lián)合施用，且可任選聯(lián)合環(huán)磷酰胺。在某些實施方式中，所述抗pd-1抗體分子、provenge和/或環(huán)磷酰胺的組合用于治療癌，如本文所述癌(例如前列腺癌，如晚期前列腺癌)。

在另一個實施方式中，所述抗pd-1或pd-l1抗體分子單獨或聯(lián)合另一免疫調(diào)節(jié)劑(如抗lag-3或抗tim-3抗體分子)，與疫苗如樹突細(xì)胞腎細(xì)胞癌(dc-rcc)疫苗聯(lián)合施用。在某些實施方式中，所述抗pd-1抗體分子與dc-rcc疫苗的組合用于治療癌，如本文所述癌(例如腎癌，如轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌(rcc)或腎透明細(xì)胞癌(ccrcc))。

在另一個實施方式中，所述抗pd-1或pd-l1抗體分子單獨或聯(lián)合另一免疫調(diào)節(jié)劑(如抗lag-3或抗tim-3抗體分子)，與化療和/或免疫療法聯(lián)合施用。例如，抗pd-1或pd-l1抗體分子能單獨或聯(lián)合以下一或多種用于治療黑素瘤：化療或其它抗癌劑(如沙利度胺類似物，例如來那度胺)、抗tim3抗體、腫瘤抗原致敏的樹突狀細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞融合(如電融合)或用惡性漿細(xì)胞生成的免疫球蛋白特異型接種疫苗。在一個實施方式中，所述抗pd-1或pd-l1抗體分子與抗tim-3抗體聯(lián)用以治療骨髓瘤，如多發(fā)性骨髓瘤。

在一個實施方式中，所述抗pd-1或pd-l1抗體分子單獨或聯(lián)合另一免疫調(diào)節(jié)劑(如抗lag-3或抗tim-3抗體分子)，與化療聯(lián)用以治療肺癌，如非小細(xì)胞肺癌。在一個實施方式中，所述抗pd-1或pd-l1抗體分子與鉑雙重療法一起使用以治療肺癌。

在另一個實施方式中，所述抗pd-1或pd-l1抗體分子單獨或聯(lián)合另一免疫調(diào)節(jié)劑(如抗lag-3或抗tim-3抗體分子)，用于治療腎癌如腎細(xì)胞癌(rcc)(例如腎透明細(xì)胞癌(ccrcc)或轉(zhuǎn)移性rcc)?？筽d-1或pd-l1抗體分子能聯(lián)合以下一或多種：基于免疫的策略(如白介素-2或干擾素-α)、靶向劑(如vegf抑制劑如vegf的單克隆抗體)；vegf酪氨酸激酶抑制劑如舒尼替尼、索拉非尼、阿西替尼和帕唑帕尼；rnai抑制劑)、或vegf信號傳遞下游介導(dǎo)子的抑制劑，如哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mtor)的抑制劑，例如依維莫司和坦羅莫司。

聯(lián)用以治療胰腺癌的合適治療劑示例包括但不限于化療劑如紫杉醇或紫杉醇試劑(例如紫杉醇制劑如taxol、白蛋白穩(wěn)定的納米粒子紫杉醇制劑(如abraxane)或脂質(zhì)體紫杉醇制劑)；吉西他濱(例如單獨或聯(lián)合axp107-11的吉西他濱)；其它化療劑如奧沙利鉑、5-氟尿嘧啶、卡培他濱、魯比替康、鹽酸表柔比星、nc-6004、順鉑、多西他賽(例如taxotere)、絲裂霉素c、異環(huán)磷酰胺；干擾素；酪氨酸激酶抑制劑(例如egfr抑制劑(如埃羅替尼、帕尼單抗、西妥昔單抗、尼妥珠單抗)；her2/neu受體抑制劑(如曲妥單抗)；雙重激酶抑制劑(如博舒替尼、塞卡替尼、拉帕替尼、凡德他尼)；多重激酶抑制劑(例如索拉非尼、舒尼替尼、xl184、帕唑帕尼)；vegf抑制劑(例如貝伐單抗、av-951、布利伐尼)；放射免疫療法(例如xr303)；癌疫苗(例如gvax、存活素肽)；cox-2抑制劑(例如塞來昔布)；igf-1受體抑制劑(例如amg479、mk-0646)；mtor抑制劑(例如依維莫司、坦羅莫司)；il-6抑制劑(例如cnto328)；周期素依賴性激酶抑制劑(例如p276-00、ucn-01)；改變的能量代謝定向(aemd)化合物(例如cpi-613)；hdac抑制劑(例如伏立諾他)；trail受體2(tr-2)激動劑(例如conatumumab)；mek抑制劑(例如as703026、司美替尼、gsk1120212)；raf/mek雙重激酶抑制劑(例如ro5126766)；notch信號傳遞抑制劑(例如mk0752)；單克隆抗體-抗體融合蛋白(例如l19il2)；姜黃色素；hsp90抑制劑(例如坦螺旋霉素、sta-9090)；ril-2；地尼白介素(denileukindiftitox)；拓?fù)洚悩?gòu)酶1抑制劑(例如伊立替康、pep02)；他汀類(例如辛伐他汀)；因子viia抑制劑(例如pci-27483)；akt抑制劑(例如rx-0201)；缺氧激活的前體藥物(例如th-302)；鹽酸二甲雙胍、γ-分泌酶抑制劑(例如ro4929097)；核糖核苷酸還原酶抑制劑(例如3-ap)；免疫毒素(例如huc242-dm4)；parp抑制劑(例如ku-0059436、veliparib)；ctla-4抑制劑(例如cp-675,206、依匹單抗)；adv-tk療法；蛋白酶體抑制劑(例如硼替佐米(萬珂)、npi-0052)；噻唑烷二酮(例如吡格列酮)；npc-1c；極光激酶抑制劑(例如r763/as703569)、ctgf抑制劑(例如fg-3019)；sig12dloder；和放射療法(例如螺旋斷層放療、立體定向放射治療、質(zhì)子療法)、手術(shù)，和其組合。在某些實施方式中，紫杉醇或紫杉醇試劑與吉西他濱的組合能與本文所述抗pd-1抗體分子一起使用。

聯(lián)用以治療小細(xì)胞肺癌的合適治療劑示例包括但不限于化療劑如依托泊苷、卡鉑、順鉑、伊立替康、拓?fù)涮婵?、吉西他濱、脂質(zhì)體sn-38、苯達(dá)莫司汀、替莫唑胺、貝洛替康、nk012、fr901228、夫拉平度)；酪氨酸激酶抑制劑(例如egfr抑制劑(如埃羅替尼、吉非替尼、西妥昔單抗、帕尼單抗)；多重激酶抑制劑(例如索拉非尼、舒尼替尼)；vegf抑制劑(例如貝伐單抗、凡德他尼)；癌疫苗(例如gvax)；bcl-2抑制劑(例如奧利默森鈉、abt-263)；蛋白酶體抑制劑(例如硼替佐米(萬珂)、npi-0052)、紫杉醇或紫杉醇試劑；多西他賽；igf-1受體抑制劑(例如amg479)；hgf/sf抑制劑(例如amg102、mk-0646)；氯喹；極光激酶抑制劑(例如mln8237)；放射免疫療法(例如tf2)；hsp90抑制劑(例如坦螺旋霉素、sta-9090)；mtor抑制劑(例如依維莫司)；ep-cam-/cd3-雙特異性抗體(例如mt110)；ck-2抑制劑(例如cx-4945)；hdac抑制劑(例如貝利司他)；smo拮抗劑(例如bms833923)；肽癌癥疫苗和放射療法(例如調(diào)強放射療法(imrt)、大分割放療、缺氧引導(dǎo)放療)、手術(shù)，和其組合。

聯(lián)用以治療非小細(xì)胞肺癌的合適治療劑示例包括但不限于化療劑如長春瑞濱、順鉑、多西他賽、培美曲塞二鈉、依托泊苷、吉西他濱、卡鉑、脂質(zhì)體sn-38、tlk286、替莫唑胺、拓?fù)涮婵?、培美曲塞二鈉、阿扎胞苷、伊立替康、喃氟啶-吉美拉西-氧嗪酸鉀、沙帕他濱)；酪氨酸激酶抑制劑(例如egfr抑制劑(如埃羅替尼、吉非替尼、西妥昔單抗、帕尼單抗、耐昔妥珠單抗、pf-00299804、尼妥珠單抗、ro5083945)、met抑制劑(例如pf-02341066、arq197)、pi3k激酶抑制劑(例如xl147、gdc-0941)、raf/mek雙重激酶抑制劑(例如ro5126766)、pi3k/mtor雙重激酶抑制劑(例如xl765)、src抑制劑(例如達(dá)沙替尼)、雙重抑制劑(例如bibw2992、gsk1363089、zd6474、azd0530、ag-013736、拉帕替尼、mehd7945a、利尼伐尼)、多重激酶抑制劑(例如索拉非尼、舒尼替尼、帕唑帕尼、amg706、xl184、mgcd265、bms-690514、r935788)、vegf抑制劑(例如恩度、內(nèi)皮抑素、貝伐單抗、西地尼布、bibf1120、阿西替尼、替肟扎尼、azd2171)、癌疫苗(例如blp25脂質(zhì)體疫苗、gvax、重組dna和表達(dá)l523s蛋白的腺病毒)、bcl-2抑制劑(例如奧利默森鈉)、蛋白酶體抑制劑(例如硼替佐米、卡非佐米、npi-0052、mln9708)、紫杉醇或紫杉醇試劑、多西他賽、igf-1受體抑制劑(例如西妥木單抗、mk-0646、osi906、cp-751,871、biib022)、羥氯喹、hsp90抑制劑(例如坦螺旋霉素、sta-9090、auy922、xl888)、mtor抑制劑(例如依維莫司、坦羅莫司、地磷莫司)、ep-cam-/cd3-雙特異性抗體(例如mt110)、ck-2抑制劑(例如cx-4945)、hdac抑制劑(例如ms275、lbh589、伏立諾他、丙戊酸、fr901228)、dhfr抑制劑(例如普拉曲沙)、類視色素(例如貝沙羅汀、維甲酸)、抗體-藥物綴合物(例如sgn-15)、二磷酸鹽(例如唑來膦酸)、癌疫苗(例如belagenpumatucel-l)、低分子量肝素(lmwh)(例如亭扎肝素、依諾肝素)、gsk1572932a、褪黑激素、人乳鐵傳遞蛋白(talactoferrin)、地美司鈉、拓樸異構(gòu)酶抑制劑(例如氨柔比星,依托泊苷、karenitecin)、奈非那韋、西侖吉肽、erbb3抑制劑(例如mm-121、u3-1287)、存活素抑制劑(例如ym155,ly2181308)、甲磺酸艾日布林、cox-2抑制劑(例如塞來昔布)、培非格司亭、polo樣激酶1抑制劑(例如bi6727)、trail受體2(tr-2)激動劑(例如cs-1008)、cngrc肽-tnfα綴合物、二氯乙酸鹽(dca)、hgf抑制劑(例如sch900105)、sar240550、ppar-γ激動劑(例如cs-7017)、γ-分泌酶抑制劑(例如ro4929097)、表觀遺傳治療(例如5-阿扎胞苷)、硝酸甘油、mek抑制劑(例如azd6244)、周期素依賴性激酶抑制劑(例如ucn-01)、膽固醇-fus1、抗微管蛋白劑(例如e7389)、法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(例如洛那法尼)、免疫毒素(例如bb-10901、ss1(dsfv)pe38)、磺達(dá)肝癸鈉、血管阻斷劑(例如ave8062)、pd-l1抑制劑(例如mdx-1105、mdx-1106)、β-葡聚糖、ngr-htnf、emd521873、mek抑制劑(例如gsk1120212)、埃博霉素類似物(例如伊沙匹隆)、紡錘體驅(qū)動蛋白抑制劑(例如4sc-205)、端粒靶向劑(例如kml-001)、p70通路抑制劑(例如ly2584702)、akt抑制劑(例如mk-2206)、血管生成抑制劑(例如來那度胺)、notch信號傳遞抑制劑(例如omp-21m18)、放療、手術(shù)，和其組合。

聯(lián)用以治療卵巢癌的合適治療劑示例包括但不限于化療劑(如紫杉醇或紫杉醇試劑；多西他賽；卡鉑；吉西他濱；多柔比星；拓?fù)涮婵?；順鉑；伊立替康、tlk286、異環(huán)磷酰胺、奧拉帕尼、奧沙利鉑、美法侖、培美曲塞二鈉、sjg-136、環(huán)磷酰胺、依托泊苷、地西他濱)；胃饑餓素拮抗劑(例如aezs-130)、免疫療法(例如apc8024、奧戈伏單抗、opt-821)、酪氨酸激酶抑制劑(例如egfr抑制劑(如埃羅替尼)、雙重抑制劑(例如e7080)、多重激酶抑制劑(例如azd0530、ji-101、索拉非尼、舒尼替尼、帕唑帕尼)、on01910.na)、vegf抑制劑(例如貝伐單抗、bibf1120、西地尼布、azd2171)、pdgfr抑制劑(例如imc-3g3)、紫杉醇、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(例如karenitecin、伊立替康)、hdac抑制劑(例如丙戊酸、伏立諾他)、葉酸受體抑制劑(例如法勒珠單抗)、血管生成素抑制劑(例如amg386)、埃博霉素類似物(例如伊沙匹隆)、蛋白酶體抑制劑(例如卡非佐米)、igf-1受體抑制劑(例如osi906、amg479)、parp抑制劑(例如維利帕尼、ag014699、依尼帕尼、mk-4827)、aurora激酶抑制劑(例如mln8237、enmd-2076)、血管生成抑制劑(例如來那度胺)、dhfr抑制劑(例如普拉曲沙)、放射免疫治療劑(例如hu3s193)、他汀類(例如洛伐他汀)、拓?fù)洚悩?gòu)酶1抑制劑(例如nktr-102)、癌疫苗(例如p53合成長肽疫苗、自體oc-dc疫苗)、mtor抑制劑(例如坦羅莫司、依維莫司)、bcr/abl抑制劑(例如伊馬替尼)、et-a受體拮抗劑(例如zd4054)、trail受體2(tr-2)激動劑(例如cs-1008)、hgf/sf抑制劑(例如amg102)、egen-001、polo樣激酶1抑制劑(例如bi6727)、γ-分泌酶抑制劑(例如ro4929097)、wee-1抑制劑(例如mk-1775)、抗微管蛋白劑(例如長春瑞濱、e7389)、免疫毒素(例如地尼白介素)、sb-485232、血管阻斷劑(例如ave8062)、整合素抑制劑(例如emd525797)、紡錘體驅(qū)動蛋白抑制劑(例如4sc-205)、雷利米得、her2抑制劑(例如mgah22)、errb3抑制劑(例如mm-121)、放療；和其組合。

聯(lián)用以治療骨髓瘤的合適治療劑的示例是單獨或聯(lián)合以下一或多種：化療或其它抗癌劑(如沙利度胺類似物，例如來那度胺)、hsct(cook,r.(2008)jmanagcarepharm.14(增刊7):19-25)、抗tim3抗體(hallett,whd等.(2011)jofamericansocietyforbloodandmarrowtransplantation17(8):1133-145)、腫瘤抗原致敏的樹突狀細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞與樹突狀細(xì)胞融合(如電融合)、或用惡性漿細(xì)胞生成的免疫球蛋白特異型接種疫苗(綜述參見yi,q.(2009)cancerj.15(6):502-10)。

聯(lián)用以治療腎癌如腎細(xì)胞癌(rcc)或轉(zhuǎn)移性rcc的合適治療劑示例。抗pd-1抗體分子能與以下一或多種聯(lián)合施用：基于免疫的策略(如白介素-2或干擾素-α)、靶向劑(如vegf抑制劑如vegf的單克隆抗體，例如貝伐單抗(rini,b.i.等.(2010)j.clin.oncol.28(13):2137-2143))；vegf酪氨酸激酶抑制劑如舒尼替尼、索拉非尼、阿西替尼和帕唑帕尼(綜述參見pal.s.k.等.(2014)clin.advancesinhematology&oncology12(2):90-99))；rnai抑制劑)，或vegf信號傳遞下游介導(dǎo)子的抑制劑，如哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mtor)的抑制劑，例如依維莫司和坦羅莫司(hudes,g.等.(2007)n.engl.j.med.356(22):2271-2281,motzer,r.j.等.(2008)lancet372:449-456)。

聯(lián)用以治療本公開所述慢性髓細(xì)胞性白血病(aml)的合適治療劑示例包括但不限于化療劑(如阿糖孢苷、羥基脲、氯法拉濱、美法侖、噻替派、氟達(dá)拉濱、白消安、依托泊苷、蟲草素、噴司他丁、卡培他濱、阿扎胞苷、環(huán)磷酰胺、克拉屈濱、拓?fù)涮婵?、酪氨酸激酶抑制劑(例如bcr/abl抑制劑(如伊馬替尼、尼羅替尼)、on01910.na、雙重抑制劑(例如達(dá)沙替尼、博舒替尼)、多重激酶抑制劑(例如dcc-2036、帕唑帕尼、索拉非尼、舒尼替尼、rgb-286638)、干擾素α、類固醇、凋亡劑(例如高三尖杉酯堿)、免疫療法(例如同種異體cd4+記憶th1樣t細(xì)胞/微粒結(jié)合抗cd3/抗cd28、自身細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cik)、ahn-12)、cd52靶向劑(例如阿侖單抗)、hsp90抑制劑(例如坦螺旋霉素、sta-9090、auy922、xl888)、mtor抑制劑(例如依維莫司)、smo拮抗劑(例如bms833923)、核糖核苷酸還原酶抑制劑(例如3-ap)、jak-2抑制劑(例如incb018424)、羥氯喹、類視色素(例如芬維a胺)、周期素依賴性激酶抑制劑(例如ucn-01)、hdac抑制劑(例如貝利司他、伏立諾他、jnj-26481585)、parp抑制劑(例如維利帕尼)、mdm2拮抗劑(例如ro5045337)、極光b激酶抑制劑(例如tak-901)、放射免疫療法(例如錒-225-標(biāo)記的抗cd33抗體hum195)、hedgehog抑制劑(例如pf-04449913)、stat3抑制劑(例如opb-31121)、kb004、癌疫苗(例如ag858)、骨髓移植、干細(xì)胞移植、放療，和其組合。

聯(lián)用以治療慢性淋巴細(xì)胞白血病(cll)的合適治療劑示例包括但不限于化療劑(如氟達(dá)拉濱、環(huán)磷酰胺、多柔比星、長春新堿、苯丁酸氮芥、苯達(dá)莫司汀、苯丁酸氮芥、白消安、吉西他濱、美法侖、噴司他丁、米托蒽醌、5-氮雜胞苷、培美曲塞二鈉)、酪氨酸激酶抑制劑(例如egfr抑制劑(如埃羅替尼)、btk抑制劑(例如pci-32765)、多重激酶抑制劑(例如mgcd265、rgb-286638)、cd-20靶向劑(例如利妥昔單抗、奧法木單抗、ro5072759、lfb-r603)、cd52靶向劑(例如阿侖單抗)、潑尼松龍、阿法達(dá)貝泊汀、來那度胺、bcl-2抑制劑(例如abt-263)、免疫療法(例如同種異體cd4+記憶th1樣t細(xì)胞/微粒結(jié)合抗cd3/抗cd28、自身細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cik))、hdac抑制劑(例如伏立諾他、丙戊酸、lbh589、jnj-26481585、ar-42)、xiap抑制劑(例如aeg35156)、cd-74靶向劑(例如milatuzumab)、mtor抑制劑(例如依維莫司)、at-101、免疫毒素(例如cat-8015、抗tac(fv)-pe38(lmb-2))、cd37靶向劑(例如tru-016)、放射免疫療法(例如131-托西莫單抗)、羥氯喹、哌立福辛、src抑制劑(例如達(dá)沙替尼)、沙利度胺、pi3kδ抑制劑(例如cal-101)、類視色素(例如芬維a胺)、mdm2拮抗劑(例如ro5045337)、普樂沙福、aurora激酶抑制劑(例如mln8237、tak-901)、蛋白酶體抑制劑(例如硼替佐米)、cd-19靶向劑(例如medi-551、mor208)、mek抑制劑(例如abt-348)、jak-2抑制劑(例如incb018424)、缺氧激活的藥物(例如th-302)、紫杉醇或紫杉醇試劑、hsp90抑制劑、akt抑制劑(例如mk2206)、hmg-coa抑制劑(例如辛伐他汀)、gnkg186、放療、骨髓移植、干細(xì)胞移植，和其組合。

聯(lián)用以治療急性淋巴細(xì)胞白血病(all)的合適治療劑示例包括但不限于化療劑(如潑尼松龍、地塞米松、長春新堿、天冬酰胺酶、道諾霉素、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、依托泊苷、硫鳥嘌呤、巰嘌呤、氯法拉濱、脂質(zhì)體蒽環(huán)霉素、白消安、依托泊苷、卡培他濱、地西他濱、阿扎胞苷、拓?fù)涮婵怠⑻婺虬?、酪氨酸激酶抑制劑(例如bcr/abl抑制劑(如伊馬替尼、尼羅替尼)、on01910.na、多重激酶抑制劑(例如索拉非尼))、cd-20靶向劑(例如利妥昔單抗)、cd52靶向劑(例如阿侖單抗)、hsp90抑制劑(例如sta-9090)、mtor抑制劑(例如依維莫司、雷帕霉素)、jak-2抑制劑(例如incb018424)、her2/neu受體抑制劑(例如曲妥單抗)、蛋白酶體抑制劑(例如硼替佐米)、甲氨蝶呤、天冬酰胺酶、cd-22靶向劑(例如依帕珠單抗、伊珠單抗)、免疫療法(例如自身細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cik)、ahn-12)、博納吐單抗、周期素依賴性激酶抑制劑(例如ucn-01)、cd45靶向劑(例如bc8)、mdm2拮抗劑(例如ro5045337)、免疫毒素(例如cat-8015、dt2219arl)、hdac抑制劑(例如jnj-26481585)、jvrs-100、紫杉醇或紫杉醇試劑、stat3抑制劑(例如opb-31121)、parp抑制劑(例如維利帕尼)、ezn-2285、放療、類固醇、骨髓移植、干細(xì)胞移植，或其組合。

聯(lián)用以治療急性髓細(xì)胞性白血病(aml)的合適治療劑示例包括但不限于化療劑(如阿糖胞苷、道諾霉素、伊達(dá)比星、氯法拉濱、地西他濱、vosaroxin、阿扎胞苷、氯法拉濱、利巴韋林、cpx-351、蘇消安、elacytarabine、阿扎胞苷)、酪氨酸激酶抑制劑(例如bcr/abl抑制劑(如伊馬替尼、尼羅替尼)、on01910.na、多重激酶抑制劑(例如米哚妥林、su11248、奎扎替尼、索拉非尼))、免疫毒素(例如吉姆單抗奧佐米星)、dt388il3融合蛋白、hdac抑制劑(例如伏立諾他、lbh589)、普樂沙福、mtor抑制劑(例如依維莫司)、src抑制劑(例如達(dá)沙替尼)、hsp90抑制劑(例如sta-9090)、類視色素(例如貝沙羅汀、aurora激酶抑制劑(例如bi811283)、jak-2抑制劑(例如incb018424)、polo樣激酶抑制劑(例如bi6727)、cenersen、cd45靶向劑(例如bc8)、周期素依賴性激酶抑制劑(例如ucn-01)、mdm2拮抗劑(例如ro5045337)、mtor抑制劑(例如依維莫司)、ly573636-鈉、zrx-101、mln4924、來那度胺、免疫療法(例如ahn-12)、組胺二鹽酸鹽、放療、骨髓移植、干細(xì)胞移植，和其組合。

聯(lián)用以治療多發(fā)性骨髓瘤(mm)的合適治療劑示例包括但不限于化療劑(如美法侖、氨磷汀、環(huán)磷酰胺、多柔比星、氯法拉濱、苯達(dá)莫司汀、氟達(dá)拉濱、阿霉素、sybl-0501)、沙利度胺、來那度胺、地塞米松、強的松、泊馬度胺、蛋白酶體抑制劑(例如硼替佐米、卡非佐米、mln9708)、癌疫苗(例如gvax)、cd-40靶向劑(例如sgn-40、chir-12.12)、哌立福辛、唑來膦酸、免疫療法(例如mage-a3、ny-eso-1、humax-cd38)、hdac抑制劑(例如伏立諾他、lbh589、ar-42)、aplidin、周期素依賴性激酶抑制劑(例如pd-0332991、dinaciclib)、三氧化二砷、cb3304、hsp90抑制劑(例如kw-2478)、酪氨酸激酶抑制劑(例如egfr抑制劑(如西妥昔單抗)、多重激酶抑制劑(例如at9283))、vegf抑制劑(例如貝伐單抗)、普樂沙福、mek抑制劑(例如azd6244)、iph2101、阿托伐他汀、免疫毒素(例如bb-10901)、npi-0052、放射免疫療法(例如釔y90替伊莫單抗)、stat3抑制劑(例如opb-31121)、mln4924、極光激酶抑制劑(例如enmd-2076)、imgn901、ace-041、ck-2抑制劑(例如cx-4945)、放療、骨髓移植、干細(xì)胞移植，和其組合。

聯(lián)用以治療前列腺癌的合適治療劑示例包括但不限于化療劑(如多西他賽、卡鉑、氟達(dá)拉濱)、阿比特龍、激素療法(例如氟他米特、比卡魯胺、尼魯米特、環(huán)丙氯地孕、酮康唑、氨魯米特、阿巴瑞克、阿巴瑞克、亮丙瑞林、戈舍瑞林、曲普瑞林、乙基酰胺)、酪氨酸激酶抑制劑(例如雙重激酶抑制劑(如拉帕替尼)、多重激酶抑制劑(例如索拉非尼、舒尼替尼))、vegf抑制劑(例如貝伐單抗)、tak-700、癌疫苗(例如bpx-101,pep223)、來那度胺、tok-001、igf-1受體抑制劑(例如西妥木單抗)、trc105、auroraa激酶抑制劑(例如mln8237)、蛋白酶體抑制劑(例如硼替佐米)、ogx-011、放射免疫療法(例如huj591-gs)、hdac抑制劑(例如丙戊酸、sb939、lbh589)、羥氯喹、mtor抑制劑(例如依維莫司)、多韋替尼乳酸鹽、二吲哚基甲烷、依法韋侖、ogx-427、染料木素、imc-3g3、巴氟替尼、cp-675,206、放療、手術(shù)，或其組合。

聯(lián)合療法能與一或多種現(xiàn)有癌癥治療方式聯(lián)合施用，所述方式包括但不限于：手術(shù)；放射療法(例如涉及三個維度的外放射治療、其中設(shè)計放射野的適形放射治療、局部放射(如定向到預(yù)選靶標(biāo)或器官的放射)或聚焦輻射)。聚焦輻射可選自立體定向放射外科手術(shù)、分次立體定向放射外科手術(shù)和調(diào)強放射療法。如wo2012/177624所述，聚焦輻射的輻射源可選自粒子束(質(zhì)子)、鈷-60(光子)和直線加速器(x射線)。

放射療法能通過數(shù)種方法或方法組合中的一種來施用，包括但不限于外放射治療、內(nèi)放射治療、植入輻射、立體定向放射外科手術(shù)、全身放射治療、放療和永久或短暫間質(zhì)內(nèi)短距離放射治療。術(shù)語“短距離放射治療”指通過空間限制放射性材料遞送的放射療法，所述材料在腫瘤或其它增殖性組織疾病位點處或附近插入身體。所述術(shù)語意在無限制地包括暴露于放射性同位素(如at-211,i-131,i-125,y-90,re-186,re-188,sm-153,bi-212,p-32和lu的放射性同位素)。用作本公開細(xì)胞調(diào)節(jié)劑的合適輻射源包括固體和液體。以非限制性示例為例，輻射源可以是放射性核素，如作為固體源的i-125、i-131、yb-169、ir-192，作為固體源的i-125，或其它發(fā)射光子、β粒子、γ輻射或其它治療射線的放射性核素。放射性材料還可以是從任意放射性核素溶液制備的液體，如i-125或i-131溶液，或放射性液體能用含固體放射性核素(如au-198、y-90)小顆粒的合適液體漿生成。此外，放射性核素能呈現(xiàn)于凝膠或放射性微球中。

核酸

本公開還涉及含核苷酸序列的核酸，所述序列編碼本文所述抗體分子的重鏈和輕鏈可變區(qū)以及cdr或高變環(huán)。所述核酸能包括本文所列核苷酸序列，或與其基本相同的序列(如序列與其有至少約85％、90％、95％、99％或更高一致性，或與本文表格所示序列差異不超過3、6、15、30或45個核苷酸)。

載體

本文還提供含編碼本文所述抗體分子的核苷酸序列的載體。在一個實施方式中，所述載體包括編碼本文所述抗體分子的核苷酸。在一個實施方式中，所述載體包括本文所述核苷酸序列。載體包括但不限于病毒、質(zhì)粒、粘粒、λ噬菌體或酵母人工染色體(yac)。

可采用多種載體系統(tǒng)。例如，一類載體使用獲自動物病毒的dna元件，如牛乳頭狀瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、牛痘病毒、桿狀病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒(勞氏肉瘤病毒、mmtv或momlv)或sv40病毒。另一類載體使用獲自rna病毒的rna元件，如塞姆利基森林病毒、東方馬腦炎病毒和蟲媒病毒。

另外，將dna穩(wěn)定整合到其染色體內(nèi)的細(xì)胞可通過引入一個或多個允許選擇轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的標(biāo)記來選擇。例如，標(biāo)記可向營養(yǎng)缺陷型宿主提供質(zhì)子移變、殺蟲劑抗性(如抗生素)或?qū)χ亟饘偃玢~的抗性等。選擇性標(biāo)記基因能直接連接待表達(dá)的dna序列，或通過共轉(zhuǎn)化引入同一細(xì)胞。也可能需要額外元件用于最優(yōu)合成mrna。這些元件可包括剪接信號以及轉(zhuǎn)錄啟動子、增強子和終止信號。

一旦含構(gòu)建體的表達(dá)載體或dna序列被制備用于表達(dá)，表達(dá)載體可轉(zhuǎn)染或引入合適宿主細(xì)胞?？捎枚喾N技術(shù)實現(xiàn)，例如原生質(zhì)體融合、磷酸鈣沉淀、電穿孔、逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)、病毒轉(zhuǎn)染、基因槍、基于液體的轉(zhuǎn)染或其它常規(guī)技術(shù)。在原生質(zhì)體融合的情況中，細(xì)胞在培養(yǎng)基中生長并篩選合適活性。

培養(yǎng)所得轉(zhuǎn)染細(xì)胞和回收所生成抗體分子的方法和條件為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知，并基于本說明根據(jù)特定表達(dá)載體和所用哺乳動物宿主細(xì)胞可改變或優(yōu)化。

細(xì)胞

本公開還提供宿主細(xì)胞，包括編碼本文所述抗體分子的核酸。

在一個實施方式中，所述宿主細(xì)胞被遺傳改造成包括編碼抗體分子的核酸。

在一個實施方式中，所述宿主細(xì)胞用表達(dá)盒進(jìn)行遺傳改造。短語“表達(dá)盒”指能影響在與這類序列相容的宿主中基因表達(dá)的核苷酸序列。這類盒可包括啟動子、有或沒有內(nèi)含子的開放閱讀框以及終止信號。也能使用對影響表達(dá)必需或有幫助的額外因子，例如誘導(dǎo)型啟動子。

本公開還提供含本文所述載劑的宿主細(xì)胞。

所述細(xì)胞可以是但不限于真核細(xì)胞、細(xì)菌細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞或人細(xì)胞。合適的真核細(xì)胞包括但不限于vero細(xì)胞、hela細(xì)胞、cos細(xì)胞、cho細(xì)胞、hek293細(xì)胞、bhk細(xì)胞和mdckii細(xì)胞。合適的昆蟲細(xì)胞包括但不限于sf9細(xì)胞。

實施例

實施例1：靶向劑對pd-l1調(diào)節(jié)的影響

該實施例評估選定治療劑ldk378對pd-l1(cd274)調(diào)節(jié)的影響。ldk378通過在pd-l1水平上的實時pcr和流式細(xì)胞術(shù)檢測。觀察到ldk378在腫瘤細(xì)胞上顯著抑制pd-l1。

ldk378下調(diào)pd-l1mrna

開發(fā)taqmanrtpcr試驗以檢測在細(xì)胞系和異種移植腫瘤中的pd-l1(cd274)表達(dá)水平變化。用凱杰(qiagen)rneasy迷你試劑盒從冷凍細(xì)胞團(tuán)或腫瘤片段中分離mrna。分離的rna在-80℃冷凍。檢查rna質(zhì)量，并遵循安捷倫rna6000納米試劑盒操作用2100安捷倫(agilent)生物分析儀定量rna。用高容量rna-tocdna試劑盒(應(yīng)用生物系統(tǒng)公司(appliedbiosystems))制備cdna。

實時pcr反應(yīng)在20μl總體積中完成，包括10μl通用pcr主要混合物(應(yīng)用生物系統(tǒng)公司)、1μl人pd-l1(cd274)探針/引物組(應(yīng)用生物系統(tǒng)公司)和8μlcdna。各樣品一式三份運行。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中從25-50ngrna生成cdna的量用于各pcr反應(yīng)。由于pd-l1與gapdh之間的mrna水平差異，使用相同量的cdna在分開的管中完成2個實時pcr反應(yīng)。實時pcr反應(yīng)在c1000熱循環(huán)儀(伯樂(biorad))上運行，循環(huán)程序如下：95℃10分鐘孵育，然后是40輪的95℃、15秒和60℃、1分鐘。反應(yīng)完成后，pd-l1平均ct相對于來自gapdh參考反應(yīng)的各ct值標(biāo)準(zhǔn)化。各標(biāo)準(zhǔn)化的對數(shù)值隨后轉(zhuǎn)變成線性值。

在h3122(有alk易位的非小細(xì)胞肺癌(nsclc))中體外觀察到了ldk378抑制pd-l1mrna(圖1)。

本文所示結(jié)果證明ldk在調(diào)節(jié)癌的免疫檢查點分子中的作用。觀察到的ldk378抑制pd-l1表達(dá)顯示這一靶向劑除影響癌信號傳遞外還可能具有免疫調(diào)節(jié)活性。因此，本文所示結(jié)果表明施用靶向劑ldk378與免疫檢查點抑制劑如pd1、pd-l1、lag3和/或tim3的抑制劑，會實現(xiàn)免疫檢查點介導(dǎo)免疫抑制的更有力逆轉(zhuǎn)。

實施例2：評估色瑞替尼和尼魯單抗組合的功效和安全性的臨床試驗

可在開放標(biāo)簽、多中心劑量遞增和擴(kuò)展研究中評價色瑞替尼和尼魯單抗組合的功效和安全性。除了功效和安全性，還能評估色瑞替尼和尼魯單抗組合的耐受性及pk/pd以治療轉(zhuǎn)移性、alk陽性nsclc患者。為評價適格性，該研究可始于第一劑研究藥物之前的長至(含)28天的篩選期。治療期可始于第一周期的第一天。周期長達(dá)28天。

用色瑞替尼和尼魯單抗治療可例如持續(xù)直至患者經(jīng)歷排除進(jìn)一步治療的不可接受的毒性和/或疾病發(fā)展。

在單獨的腦進(jìn)展或其它局部進(jìn)展情況中，患者可另外接受姑息放射治療。

所述研究可由劑量遞增和擴(kuò)展期組成。

1.劑量遞增期

根據(jù)劑量限制性毒性(dlt)采用貝葉斯邏輯回歸模型(blrm)，研究的劑量遞增期能評估伴服低脂餐的每日口服色瑞替尼與每2周(q2w)靜脈內(nèi)尼魯單抗組合的最大耐受劑量(mtd)/擴(kuò)展推薦劑量(rde)。例如，該研究階段招募12名患者。初始色瑞替尼劑量水平可以是每日450mg且尼魯單抗以3mg/kgq2w劑量施用。臨時劑量水平如下：

-[-1劑量組]色瑞替尼300mg+尼魯單抗(3mg/kg)

-[第1劑量組]色瑞替尼450mg+尼魯單抗(3mg/kg)

-[第2劑量組]色瑞替尼600mg+尼魯單抗(3mg/kg)

mtd是兩種試劑不預(yù)期在治療前6周引起超過35％治療患者中dlt的最高藥物劑量。色瑞替尼和尼魯單抗組合的最終推薦mtd/rde是基于blrm的推薦，以及基于考慮耐受性和來自所測試劑量后續(xù)周期藥代動力學(xué)數(shù)據(jù)的總體安全性評估。如果在評估所有包括靶劑量色瑞替尼(600mg，伴服低脂餐)和尼魯單抗(3mg/kg)的計劃劑量水平后仍未確立色瑞替尼和尼魯單抗組合的mtd，則在評估所有可用安全性、pk和功效數(shù)據(jù)后確定rde。

2.擴(kuò)展期

一旦申報該組合的mtd和/或確定rde，其他患者在研究擴(kuò)展期中以rde組合劑量來評估。例如，研究擴(kuò)展期招募60名患者。擴(kuò)展期評估色瑞替尼和尼魯單抗組合在rde的安全性及初步效果，且由2個臂組成(每臂約30名患者)：

-臂1：經(jīng)alk抑制劑治療(允許任意除色瑞替尼外alk抑制劑的在先治療)

-臂2：alk抑制劑首次治療

一旦擴(kuò)展期的所有患者完成至少6個周期(24周)治療或更早中斷，初步臨床研究報告的數(shù)據(jù)截止就可產(chǎn)生。

實施例3：ldk378和尼魯單抗組合的臨床效果

如實施例2所概括，研究的第一劑量組招募8名患者，且以下僅是具有可及的有效腫瘤評價的患者數(shù)據(jù)。此患者中觀察到部分反應(yīng)。需要再次評價以確認(rèn)反應(yīng)。

所評價患者是64歲白人男性，診斷有iv期nsclc。疾病位置包括肺、腎上腺和腹部淋巴結(jié)?；颊呓邮苓^一次順鉑和培美曲塞的在先化療方案，并實現(xiàn)部分反應(yīng)。其他醫(yī)療狀況包括腎上腺功能不全、二尖瓣脫垂、高膽固醇血癥和尿石病。

患者的研究治療開始于ldk378450mgqd(口服)，伴服低脂餐施用，聯(lián)合每2周的尼魯單抗3mg/kg(靜脈內(nèi))。第一劑研究藥物(ldk378+尼魯單抗的組合)之后29天，患者呈現(xiàn)發(fā)燒、腹痛、惡心和嘔吐。腹部超聲為陰性，但腹部計算機斷層掃描(ct)顯示急性胰腺炎。此外脂肪酶、淀粉酶、alt、ast、膽紅素、alp和ggt有升高?；颊咦≡翰簳r中斷研究藥物ldk378治療。用靜脈注射液、醋氨酚、contramal(鹽酸曲馬多)和litican(阿立必利)治療。隨后幾天中，患者的實驗室結(jié)果改善且病情改善；不再有疼痛、發(fā)燒、惡心和嘔吐的不適。停止所有支持藥物，患者出院。

在臨床的后期評估中，沒有不適(無發(fā)燒、嘔吐、惡心或腹痛)?；颊叱鲈汉螅唇邮苤雇此幬锘蚩箛I劑。血液化學(xué)顯示：

脂肪酶和淀粉酶在正常范圍內(nèi)，gr1:膽紅素、ast和alt，gr2:堿性磷酸酶，3級:ggt

臨床評估后1天，ldk378以每日300mg的減少劑量重新開始。尼魯單抗治療在約1周后重新開始。

患者嘔吐一次，而沒有惡心或腹痛。盡管一度發(fā)燒到38度，但無熱度。患者沒有身體不適。

尼魯單抗重新開始時的實驗值：ast:120u/l，alt:139u/l，總膽紅素33umol/l，堿性磷酸酶551u/l。淀粉酶和脂肪酶正常。

ldk378停止使用并以300mg劑量重新開始。

腫瘤評價：

第一次腫瘤評價時的ct掃描證明右腎上腺和腹部淋巴結(jié)中的總體靶病變相比基線ct掃描減少62.9％。也有評估為存在的左下肺葉的非靶病變。

通過引用納入

本文提及的所有出版物、專利和登錄號通過引用全文納入本文，如各單獨出版物或?qū)＠囟ㄇ腋髯酝ㄟ^引用納入所示。

等同物

盡管討論了本公開的特定實施方式，上述說明書是說明性而非限制性的。通過回顧本說明書和以下權(quán)利要求，本公開的許多變體對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯見。本公開的全部范圍應(yīng)通過參考權(quán)利要求以及其全范圍的等同物、說明書以及這些變體來確定。

序列表

<110>諾華股份有限公司(novartisag)

<120>alk抑制劑的聯(lián)合療法

<130>c2160-7013wo

<140>

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<160>7

<170>patentin3.5版

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