發(fā)明領域
本發(fā)明涉及動物的寄生節(jié)肢動物侵襲的預防或治療。
發(fā)明背景
蠕形螨屬種（demodexspp.）螨是許多動物的皮膚的正常共生體，其寄生在與毛囊相連的皮脂腺內。如果它們的數(shù)目急劇增加，它們能夠產生被稱作蠕形螨病（demodicosis）或蠕形螨性獸疥癬的疾病。
蠕形螨病是一種由毛囊蠕形螨屬螨的過高種群密度造成的、非接觸傳染的炎癥性的寄生性皮膚病。根據(jù)損害的程度，可以將蠕形螨病分類為局部的或全身的。局部的蠕形螨病是一種良性疾病，且大多數(shù)病例在6-8周內自發(fā)地的消退。
全身的蠕形螨病是一種具有全身損害的嚴重疾病，其經常被繼發(fā)性細菌感染(膿蠕形螨病(pyodemodicosis))加重。伴隨的足皮膚炎是常見的。當看到深膿皮病、癤病或蜂窩織炎時，狗可以具有具有全身淋巴結病、嗜睡和發(fā)熱的全身性疾病。診斷是不難的，因為深皮膚碎屑或拔毛揭示高數(shù)量的螨、卵和幼蟲形式。
慢性全身的蠕形螨病是一種治療起來挫折性的和困難的皮膚疾病。對于在其它方面健康的狗，該疾病的全身形式不太可能在不治療的情況下消退。
目前可得到的治療選擇包括阿米曲士、伊維菌素、米爾倍霉素肟、口服用莫昔克丁和局部用莫昔克丁，大部分在多個時機使用(每天、每周或每月)，持續(xù)3個月或更久的時間段。
為了有效，這些治療方案要求在長時間段內的高主人順應性。當需要散布在長時間段上的多次劑量治療才能達到令人滿意的結果時，主人順應性可以成為治療成功的一個重要因素。
在狗的蠕形螨病的治療中經常遇到的一個問題是，不能確保狗在治療以后絕對沒有螨，且可以在最初認為成功的治療結束以后幾個月檢測到重新侵襲。
因此，合乎需要的是，提供一種治療動物、特別是狗中的蠕形螨屬種侵襲和蠕形螨病的方法，所述方法會有效地控制螨并且施用方便，且因此支持主人順應性并防止該疾病的重新侵襲和復發(fā)。
發(fā)明概述
本發(fā)明提供了式(i)的異噁唑啉化合物或其鹽或溶劑合物或n-氧化物用于制備藥物的用途，所述藥物用于治療哺乳動物、特別是伴侶動物、特別是狗中的蠕形螨病，
r1=鹵素、cf3、ocf3、cn，
n=0-3的整數(shù)，優(yōu)選1、2或3，
r2=c1-c3-鹵代烷基，優(yōu)選cf3或cf2cl，
t=5-或6-元環(huán)，其任選地被一個或多個基團y取代，
y=甲基、鹵代甲基、鹵素、cn、no2、nh2-c=s，或兩個鄰近的基團y一起形成鏈，特別是3或4元鏈；
q=x-nr3r4或5-元n-雜芳基環(huán)，其任選地被一個或多個基團取代；
x=ch2、ch(ch3)、ch(cn)、co、cs，
r3=氫、甲基、鹵代乙基、鹵代丙基、鹵代丁基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、鹵代甲氧基甲基、乙氧基甲基、鹵代乙氧基甲基、丙氧基甲基、乙基氨基羰基甲基、乙基氨基羰基乙基、二甲氧基乙基、丙炔基氨基羰基甲基、n-苯基-n-甲基-氨基、鹵代乙基氨基羰基甲基、鹵代乙基氨基羰基乙基、四氫呋喃基、甲基氨基羰基甲基、(n,n-二甲基氨基)-羰基甲基、丙基氨基羰基甲基、環(huán)丙基氨基羰基甲基、丙烯基氨基羰基甲基、鹵代乙基氨基羰基環(huán)丙基、
其中za=氫、鹵素、氰基、鹵代甲基(cf3)；
r4=氫、乙基、甲氧基甲基、鹵代甲氧基甲基、乙氧基甲基、鹵代乙氧基甲基、丙氧基甲基、甲基羰基、乙基羰基、丙基羰基、環(huán)丙基羰基、甲氧基羰基、甲氧基甲基羰基、氨基羰基、乙基氨基羰基甲基、乙基氨基羰基乙基、二甲氧基乙基、丙炔基氨基羰基甲基、鹵代乙基氨基羰基甲基、氰基甲基氨基羰基甲基或鹵代乙基氨基羰基乙基；
或r3和r4一起形成選自以下的取代基：
本發(fā)明也涉及在本申請中描述的異噁唑啉化合物或用于治療動物中的全身的蠕形螨病的包含這樣的異噁唑啉化合物的藥物組合物，所述藥物組合物包含有效量的在本說明書中描述的異噁唑啉化合物，和，在藥物制劑的情況下，藥學上可接受的載體。
本發(fā)明還提供了一種控制狗中的蠕形螨屬種螨的方法，所述方法包括單次施用在本說明書中描述的異噁唑啉化合物。
發(fā)明詳述
本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過施用有效量的在本申請中描述的異噁唑啉化合物可以治療哺乳動物的蠕形螨病。已經發(fā)現(xiàn)，這樣的異噁唑啉化合物的單次施用會導致針對蠕形螨屬種螨的完全殺螨效應和針對狗中的全身的蠕形螨病的高效力。
如已經在實施例中證實的，fluralaner作為bravecto?可咀嚼片劑向狗單次施用以后，皮膚碎屑中的螨數(shù)目在施用以后第28天減少了99.8%和在施用以后第56和84天減少了100%。與以28天間隔在三個時機接受現(xiàn)有技術advocate?(吡蟲啉/莫昔克丁)治療的狗相比，在bravecto?治療的狗上在第56和84天發(fā)現(xiàn)了統(tǒng)計上顯著地(p≤0.05)更少的螨。
用于控制全身的蠕形螨病的現(xiàn)有技術方法要求阿米曲士或大環(huán)內酯類諸如米爾倍霉素肟、莫昔克丁、伊維菌素、多拉克汀或司拉克丁在長時間段內的所有多次治療(每天或非常頻繁的施用)。
因為頻繁處理是必需的，因此這樣的多次治療是非常煩人的，其要求治療的動物的協(xié)作，事實并非總是如此。
現(xiàn)有技術方法的另一個短板和有限的主人順應性的原因是，與這樣的治療方案有關的高成本。
所述化合物的現(xiàn)有技術施用另外具有這樣的治療的副作用的高風險，因為所述殺螨化合物在長時間段中的相對高劑量在某些情況下會在治療的動物中導致嚴重毒性副作用，特別是對于伊維菌素敏感的狗品種例如柯利犬而言。
特別地，使用阿米曲士的現(xiàn)有技術浸浴治療另外要求主人采取特殊措施來避免與所述化合物接觸，并且浸浴應當在通氣良好的區(qū)域中進行。此外，完全效力要求修剪狗的皮毛。
但是，在沒有完成必要的治療計劃的情況下，因為主人順應性的缺乏，蠕形螨病的復發(fā)風險是非常高的。治療失敗的另一個原因是，使用的化合物具有有限的效力和一些蠕形螨屬螨從治療中存活下來。
本發(fā)明人令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，如果使用在本申請中所述的異噁唑啉化合物、特別是fluralaner，可以防止現(xiàn)有技術的這類缺點。
通過要求施用有效劑量的根據(jù)本發(fā)明的異噁唑啉化合物的本發(fā)明的方法，將會避免主人的過早治療停止。
用在本發(fā)明中的異噁唑啉化合物可以由式(i)描述：
其中
r1=鹵素、cf3、ocf3、cn，
n=0-3的整數(shù)，優(yōu)選1、2或3，
r2=c1-c3-鹵代烷基，優(yōu)選cf3或cf2cl，
t=5-或6-元環(huán)，其任選地被一個或多個基團y取代，
y=甲基、鹵代甲基、鹵素、cn、no2、nh2-c=s，或兩個鄰近的基團y一起形成鏈ch-ch=ch-ch、n-ch=ch-ch、ch-n=ch-ch、ch-ch=n-ch或ch-ch=ch-n、hc=hc-ch、ch-ch=ch、ch=ch-n、n-ch=ch；
q=x-nr3r4或5-元n-雜芳基環(huán)，其任選地被一個或多個基團za、zbzd取代；
x=ch2、ch(ch3)、ch(cn)、co、cs，
r3=氫、甲基、鹵代乙基、鹵代丙基、鹵代丁基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、鹵代甲氧基甲基、乙氧基甲基、鹵代乙氧基甲基、丙氧基甲基、乙基氨基羰基甲基、乙基氨基羰基乙基、二甲氧基乙基、丙炔基氨基羰基甲基、n-苯基-n-甲基-氨基、鹵代乙基氨基羰基甲基、鹵代乙基氨基羰基乙基、四氫呋喃基、甲基氨基羰基甲基、(n,n-二甲基氨基)-羰基甲基、丙基氨基羰基甲基、環(huán)丙基氨基羰基甲基、丙烯基氨基羰基甲基、鹵代乙基氨基羰基環(huán)丙基、
r4=氫、乙基、甲氧基甲基、鹵代甲氧基甲基、乙氧基甲基、鹵代乙氧基甲基、丙氧基甲基、甲基羰基、乙基羰基、丙基羰基、環(huán)丙基羰基、甲氧基羰基、甲氧基甲基羰基、氨基羰基、乙基氨基羰基甲基、乙基氨基羰基乙基、二甲氧基乙基、丙炔基氨基羰基甲基、鹵代乙基氨基羰基甲基、氰基甲基氨基羰基甲基或鹵代乙基氨基羰基乙基；或者
r3和r4一起形成選自以下的取代基：
其中za=氫、鹵素、氰基、鹵代甲基(cf3)。
在一個優(yōu)選實施方案中，在式(i)中，t選自
其中在t-1、t-3和t-4中，基團y是氫、鹵素、甲基、鹵代甲基、乙基、鹵代乙基。
在一個優(yōu)選的實施方案中，在式(i)中，q選自
其中r3、r4、x和za如上面所定義。
用在本發(fā)明中的優(yōu)選的式(i)的異噁唑啉化合物是：
用在本發(fā)明中的特別優(yōu)選的異噁唑啉化合物是
用在本發(fā)明中的一種更優(yōu)選的異噁唑啉化合物具有式(ii),
其中
r1a、r1b、r1c彼此獨立地是氫、cl或cf3，優(yōu)選地r1a和r1c是cl或cf3，且r1b是氫，
t是
其中
y是甲基、溴、cl、f、cn或c(s)nh2，且
q如上所述。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，在式(ii)中，r3是h且r4是-ch2-c(o)-nh-ch2-cf3、-ch2-c(o)-nh-ch2-ch3、-ch2-ch2-cf3或-ch2-cf3。
在一個優(yōu)選的實施方案中，所述異噁唑啉化合物是4-[5-(3,5-二氯苯基)-5-三氟甲基-4,5-二氫異噁唑-3-基]-2-甲基-n-[(2,2,2-三氟-乙基氨甲?；?-甲基]-苯甲酰胺(casrn864731-61-3-usanfluralaner)。
在另一個實施方案中，所述異噁唑啉化合物是(z)-4-[5-(3,5-二氯苯基)-5-三氟甲基-4,5-二氫異噁唑-3-基]-n-[(甲氧基亞氨基)甲基]-2-甲基苯甲酰胺(casrn928789-76-8)。
在另一個實施方案中，所述異噁唑啉化合物是在wo2009/0080250中公開的4-[5-(3,5-二氯苯基)-5-(三氟甲基)-4h-異噁唑-3-基]-2-甲基-n-(硫雜環(huán)丁烷-3-基)苯甲酰胺(casrn1164267-94-0)。
在另一個實施方案中，所述異噁唑啉化合物是乙酮,1-[5'-[(5s)-5-(3,5-二氯-4-氟苯基)-4,5-二氫-5-(三氟甲基)-3-異噁唑基]螺[氮雜環(huán)丁烷-3,1'(3'h)-異苯并呋喃]-1-基]-2-(甲基磺?；?-(sarolaner)(casrn-1398609-39-6)。
在另一個實施方案中，所述異噁唑啉化合物是2-噻吩甲酰胺,5-((5s)-4,5-二氫-5-(3,4,5-三氯苯基)-5-(三氟甲基)-3-異噁唑基)-3-甲基-n-(2-氧代-2-((2,2,2-三氟乙基)氨基)乙基)-(innlotilaner)(casrn-1369852-71-0)。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述異噁唑啉化合物是在wo2007/079162-中公開的4-[5-[3-氯-5-(三氟甲基)苯基]-4,5-二氫-5-(三氟甲基)-3-異噁唑基]-n-[2-氧代-2-[(2,2,2-三氟乙基)氨基]乙基]-1-萘甲酰胺(casrn1093861-60-9,usan-afoxolaner)。
在另一個實施方案中，所述異噁唑啉化合物是在wo2010/070068中公開的5-[5-(3,5-二氯苯基)-4,5-二氫-5-(三氟甲基)-3-異噁唑基]-3-甲基-n-[2-氧代-2-[(2,2,2-三氟乙基)氨基]乙基]-2-噻吩甲酰胺(casrn1231754-09-8)。
異噁唑啉化合物和它們作為抗寄生蟲藥的用途例如描述在美國專利申請us2007/0066617和國際專利申請wo2005/085216、wo2007/079162、wo2009/002809、wo2009/024541、wo2009/003075、wo2010/070068和wo2010/079077中。
本發(fā)明的方法(或用途)包括使用外消旋混合物，例如，等量的如上所述的這樣的異噁唑啉化合物的對映異構體。另外，本發(fā)明的方法包括與外消旋混合物相比富含式1的對映異構體的異噁唑啉化合物。還包括這樣的異噁唑啉化合物的基本上純的對映異構體。
當對映異構地富集時，一種對映異構體以比另一種更大的量存在，并且富集程度可以通過對映體過量(“ee”)的表達來定義，所述對映體過量(“ee”)定義為(2x-1)-100％，其中x是混合物中優(yōu)勢對映異構體的摩爾分數(shù)(例如，20％的ee對應于60:40的對映異構體比率)。優(yōu)選地，用在本發(fā)明中的組合物具有至少50%對映體過量、更優(yōu)選地至少75%對映體過量、仍更優(yōu)選地至少90%對映體過量和最優(yōu)選地至少94%對映體過量的更有活性的異構體。特別指出的是更有活性的異構體的對映異構純的實施方案。
如上所述的異噁唑啉化合物可以包含額外的手性中心。本發(fā)明的方法包括外消旋混合物以及富集的和基本上純的在這些額外手性中心處的立體構型。
在本說明書中對異噁唑啉化合物的提及包括可以通過常規(guī)方法生產的其對映異構體、鹽和溶劑合物以及n-氧化物。
“治療”（“treating”或“treat”或“treatment”）是指，將化合物或組合物應用或施用給具有寄生蟲侵襲的動物以根除所述寄生蟲或減少侵襲所述動物的寄生蟲的數(shù)目(消除現(xiàn)存的寄生蟲)。效果可以是例如殺卵的、殺幼蟲的、殺若蟲的或殺成蟲的或它們的組合。所述效果可以如下顯現(xiàn)它自身：直接地，即立即或在已經逝去一段時間以后殺死寄生蟲，例如當蛻皮發(fā)生時，或通過破壞它們的卵；或間接地，例如降低產卵數(shù)量和/或孵化率。
“有效量”是治療動物的蠕形螨屬種侵襲（即減輕或減少動物上的寄生蟲數(shù)目和/或完全地或部分地抑制動物上的寄生蟲感染的發(fā)展）所需的如上所述的異噁唑啉化合物的量或數(shù)量。
通過在將如上所述的異噁唑啉化合物施用給這樣的動物之前和之后觀察或檢測動物上的寄生蟲數(shù)目而容易地確定該量，例如在第一次施用以后寄生蟲計數(shù)減少了5%至約100%，優(yōu)選地減少了超過50%、超過70%、超過90%、超過95%、超過99%、特別是100%。
優(yōu)選地，所述有效量導致微觀治愈，即沒有蠕形螨屬種螨存在于受影響的皮膚的深皮膚碎屑(優(yōu)選地最嚴重地受影響的區(qū)域的3-5個碎屑)中，優(yōu)選地在幾個時間點采取所述碎屑。
用于治療全身的蠕形螨病的有效量另外導致在本申請中描述的蠕形螨病的臨床征象的減少或消退。
通常，異噁唑啉化合物的有效(劑量)量是在1mg/kg治療的動物體重至50mg/kg體重、或5mg/kg體重至45mg/kg體重、或10mg/kg體重至40mg/kg體重、或20-30mg/kg體重之間。在一個實施方案中，所述有效劑量是25mg/kg體重。
在一個實施方案中，將單次劑量的有效量的異噁唑啉化合物施用給受蠕形螨屬種螨侵襲的哺乳動物，特別是狗。
在一個實施方案中，將單次劑量的有效量的異噁唑啉化合物施用給已經被診斷出全身性的狗蠕形螨病的狗。
在另一個實施方案中，將兩劑有效量的異噁唑啉化合物施用給受蠕形螨屬種螨侵襲的哺乳動物，特別是狗。
在一個實施方案中，將兩劑有效量的異噁唑啉化合物施用給已經被診斷出全身性的狗蠕形螨病的狗。
在另一個實施方案中，將三劑有效量的異噁唑啉化合物施用給受蠕形螨屬種螨侵襲的哺乳動物，特別是狗。
在一個實施方案中，將三劑有效量的異噁唑啉化合物施用給已經被診斷出全身性的狗蠕形螨病的狗。
優(yōu)選的是異噁唑啉化合物的全身施用?！叭硎┯谩笔窃谶h離至少一部分靶寄生蟲所在位置的位置處施用。采用全身施用，至少一部分異噁唑啉化合物經由動物受體的血流、其它體液（淋巴液）和/或組織（例如皮膚或脂肪組織）到達靶寄生蟲。這與“接觸活性”（其中寄生蟲蟲體的表面直接暴露于異噁唑啉化合物）不同。通常，寄生蟲將全身施用的異噁唑啉與動物受體的血液、其它體液和/或組織一起攝入。全身施用可以以幾種形式實現(xiàn)，例如口服、胃腸外或經由局部施用（其中透皮吸收異噁唑啉化合物）。
在某些實施方案中，經口服途徑以單位劑型，或經由動物受體的飼料或飲用水，全身性地施用異噁唑啉化合物，所述單位劑型是例如軟或硬膠囊、丸劑、粉劑、顆粒劑、片劑（例如，可咀嚼片劑）、糊劑、溶液、混懸劑（水性或非水性）、乳劑（水包油或油包水）、酏劑、糖漿劑、大丸劑、灌服劑?？商鎿Q地，可以通過動物受體的飼料或飲用水執(zhí)行口服施用，例如，它可以緊密地分散在動物受體的常規(guī)飼料中，用作表面裝飾，或呈添加到成品飼料中的丸粒或液體的形式。
口服施用的一種形式是一種劑型，例如可咀嚼組合物，諸如可咀嚼片劑。包含式(i)的異噁唑啉化合物的可咀嚼片劑的例子描述在wo2013/150052和wo2013/150055中。公開在這些文獻的實施例中的可咀嚼片劑的組合物通過引用并入。替代性的可咀嚼片劑描述在wo2013/119442中。
呈“可咀嚼片劑”（有時被稱作“軟質可咀嚼組合物”或“軟咀嚼劑”）形式的口服獸藥組合物經常便于施用給某些動物，特別是貓和狗，優(yōu)選狗，并可以有效地用于將獸藥施用給這些動物。
“可咀嚼片劑”、“軟咀嚼劑”或“軟質可咀嚼藥物產品”意指這樣的藥物單位劑量：其在室溫為固體，并且其在口服施用后是柔軟的以便被動物咀嚼，并且其在功能上是耐嚼的，因為該產品在口腔中咀嚼的過程中具有某種塑料質地。此類軟咀嚼劑具有類似于熟碎肉餅（groundmeatpetty）的柔軟度?？删捉榔瑒┗蜍浘捉绖┌d體和其它非活性成分。
可替換地(或額外地)可以使用透皮制劑（即穿透皮膚的制劑）局部地全身施用異噁唑啉化合物?？商鎿Q地(或額外地)，可以經由粘膜局部地全身施用該組合物?？商鎿Q地(或額外地)，可以胃腸外地全身施用異噁唑啉組合物，諸如經由肌肉內注射、靜脈內注射、皮下注射、植入（例如，皮下植入）、輸注、推注等。
動物可以接受早前確定的異噁唑啉化合物1次、2次或3次，直到蠕形螨屬螨侵襲受到控制并且全身的蠕形螨病被成功地治療。一次治療會提供對蠕形螨屬種螨的有效性達至少4周、8周、12周、16周或20周或24周。
通常，可以將異噁唑啉化合物施用給具有蠕形螨屬種侵襲或需要治療蠕形螨病的所有動物物種。
所述產品的受體可以是家畜動物，例如綿羊、牛、豬、山羊；或伴侶動物，例如狗、貓、或馬。特別優(yōu)選的是用在伴侶動物中，例如狗或貓，特別是狗。
通過根據(jù)本發(fā)明的用途可以控制的蠕形螨屬種螨是例如犬蠕形螨（demodexcanis）、隱在蠕形螨（demodexinjai）、demodexcornei、貓蠕形螨（demodexcati）、戈托伊蠕形螨（demodexgatoi）、牛蠕形螨（demodexbovis）、綿羊蠕形螨（demodexovis）、山羊蠕形螨（demodexcaprae）、demodexaries。
“蠕形螨屬螨侵襲”表示一定數(shù)目的寄生蟲的存在，所述數(shù)目造成危害動物的風險。
通過使用在本申請中描述的異噁唑啉化合物，可以避免現(xiàn)有技術的缺點，因為為達到期望的效果將需要所述化合物的單次(或最大2或3次，取決于使用的異噁唑啉化合物)施用。
通過臨床評價和深皮膚碎屑（其使用顯微鏡分析存在的螨）來診斷蠕形螨病。當觀察到5個或更多個局部疾病區(qū)域或者在2只或更多只腳上觀察到足蠕形螨病時，或者當涉及整個身體區(qū)域時，認為蠕形螨病是全身的。還可以將蠕形螨病分類為幼年的(一直到18個月齡的狗)、成年發(fā)作的(通常大于4歲齡的以前沒有疾病史的狗)或慢性全身的(持續(xù)至少6個月的疾病)。
取決于使用的具體異噁唑啉化合物，所述施用允許完全地抑制或殺死存在于動物上的造成蠕形螨病的蠕形螨屬種螨。優(yōu)選地，通過施用異噁唑啉化合物得到微觀治愈，即沒有任何蠕形螨屬螨(卵、幼蟲、若蟲和成蟲)的多個皮膚碎屑。優(yōu)選地，僅一次施用是微觀治愈所必需的。
異噁唑啉化合物（例如fluralaner）的施用能夠減輕蠕形螨病的臨床征象，和優(yōu)選地皮膚病學征象中的至少一種，例如皮膚損害，諸如紅斑、脫皮、膿皰、鱗片和痂皮、滲出物、潰瘍形成和脫毛（直到與治療之前或沒有治療的情形相比顯著減輕脫毛）。
異噁唑啉化合物（例如fluralaner）的施用能夠與對癥療法(例如抗生素或殺菌劑)一起治愈全身性癥狀（諸如全身的淋巴結病、嗜睡和發(fā)熱）的出現(xiàn)。
在大多數(shù)情況下，狗全身的蠕形螨病的治療需要輔助治療。除了根據(jù)本發(fā)明的異噁唑啉化合物實現(xiàn)的有效殺螨治療以外，可能為了成功的治療進行并行的細菌皮膚感染、內部寄生蟲和現(xiàn)有基礎性全身疾病的治療。
在本申請中描述的異噁唑啉化合物可以與合適的抗生素并行地使用，以便控制經常與全身的蠕形螨病有關的繼發(fā)性細菌皮膚感染膿皮病?？梢杂每诜股鼗蚓植靠股刂委煖\表性膿皮病。在某些情況下，使用基于過氧化苯甲?；蚵燃憾ǖ南窗l(fā)劑的局部治療將可用于控制細菌繼發(fā)感染。
實施例
口服施用的fluralaner(作為bravecto?可咀嚼片劑13.64%fluralaner)相對于局部應用的advocate?(10-%吡蟲啉/2.5%莫昔克丁)對狗的全身的蠕形螨病的效力。
方法
研究方案
將研究設計為平行組、不知情的、隨機化的、單中心和陽性對照的效力研究。作為可咀嚼片劑在單個時機施用的bravecto?是試驗產品，并包括以28天間隔施用3次(根據(jù)產品標簽)的advocate?作為陽性對照。
試驗系統(tǒng)是單只狗。經它們的主人同意，在研究中招募具有全身的蠕形螨病的臨床征象（例如紅斑、脫毛、粉刺、毛囊脫皮和痂皮）的狗，并在動物階段結束后返回給它們的主人。
在研究中包括的狗主要是雜種狗并具有兩種性別，大于12個月，體重在3.5-13.7kg之間，且除了全身的蠕形螨病的臨床征象以外，所述狗是健康的，且可以確定的是，所述狗在被選中之前至少12周尚未用糖皮質激素或具有殺螨效應的任何產品治療過。選中的另外要求是，治療之前削刮的深皮膚碎屑必須是蠕形螨屬種螨陽性的。
在研究中包括16只狗(7只雄性和9只雌性)，將它們按照各自的治療前螨計數(shù)的遞減次序在性別內排序，并分配至2個平行組。將每只狗在室內/室外運行的研究過程中單獨圈養(yǎng)，動物之間不發(fā)生接觸，并根據(jù)食品生產商的推薦每天飼喂1次?？娠嬘玫氖姓呻S意得到。
在治療前至少14天使每只狗適應籠子和維持條件。作為預防措施，在第-14、-1、13和27天用適合用于治療膿皮病的抗生素(頭孢維星)皮下地治療所有狗。另外，在第-14和27天，在鎮(zhèn)靜后從每只狗采取深皮膚活組織檢查。活組織檢查指示，滲出性膿皮病在第-14天存在于每組的兩只狗中，并且它在不遲于第27天就已經被清除。在兩個時間，慢性皮炎、表皮棘層肥厚和角化過度存在于所有狗中且未發(fā)生改變。在第27天活組織檢查中沒有觀察到炎癥細胞或細菌，并且停止抗微生物療法。在習服過程中2次(第-14天和第-1天)和治療后第27/28、56和84天，由獸醫(yī)在臨床上檢查每只狗。
為了治療的劑量計算，為了使用鎮(zhèn)靜劑以獲得皮膚碎屑和在研究階段中記錄體重，在第-2、13、27、41、55、69和84天在標刻度的和經校驗的電子秤上稱量狗。在整個研究階段中每天執(zhí)行一般健康觀察。
治療
在第0天，基于狗的各自體重，將一組的狗用bravecto?可咀嚼片劑口服治療一次，以在治療后的12周中達到25mg/kg體重的最小劑量和效力。在已經提供食物以后20(±10)分鐘如下施用可咀嚼片劑：從舌上方放在口腔后面以引起吞咽。
也在第0天，根據(jù)產品標簽將商購可得的advocate?局部施用給其它組的狗(陽性對照)。由于advocate?的28天效力持續(xù)時間，在第28和56天重新治療這些狗。使狗處于站立位置，將皮毛分開直到皮膚可見，并將advocate?直接施用在皮膚上。
針對可能的不利事件，在治療之前觀察兩個治療組，并在最后一只動物治療以后的4小時中每小時再次觀察。執(zhí)行治療后觀察的人員對治療是不知情的。
螨評估
在第-4、28、56和84天在每只狗上從5個部位獲取深皮膚碎屑(~4cm2)，并在立體顯微鏡下檢查蠕形螨屬種螨的存在。在第28天和第56天分別在應用第二次或第三次治療之前削刮用advocate?治療的狗的皮膚碎屑。在每次后續(xù)檢查時削刮相同部位和/或新?lián)p害的部位。
在獲取皮膚碎屑當天評估每只狗上的蠕形螨損害的臨床征象和程度，并記錄在標準化的表格上。為每只狗評估下述參數(shù)并繪圖(左手和右手側)：表現(xiàn)出紅斑的身體區(qū)域；被脫皮、鱗片和痂皮覆蓋的身體區(qū)域；具有脫毛的身體區(qū)域(1=毛稍微變??；2=顯著脫毛；3=無毛)。在第-4天和隨后以大約每月間隔直到治療后第84天，拍攝每只狗的彩色照片，其顯示損害的程度和它們的消退。執(zhí)行毛重新生長的半定量評估，從而對比12周研究期間之前和之后的皮毛。
效力評價
在研究中的主要評估變量是在治療以后在皮膚碎屑中計數(shù)的螨(合并的未成熟螨和成熟活螨)的數(shù)目的下降。
用abbott的公式使用幾何平均值計算效力：
效力(%)=(mpre-mpost)/mprex100
其中mpre是治療前螨計數(shù)的平均數(shù)目，且mpost是治療后螨計數(shù)的平均數(shù)目。
另外，在螨(計數(shù)+1)數(shù)據(jù)的對數(shù)變換以后，使用anova(在sas中的procglm操作)對比各組的治療效果。
一只用advocate?治療的狗由于惡性淋巴瘤在第59天從研究除去。一直到第56天（在于第59天從研究排除它之前）的關于該狗的結果已經與用advocate?治療的組中的其它狗的那些結果一起被包括。
結果
在任何狗中沒有觀察到被認為與bravecto?可咀嚼片劑口服治療或advocate?局部治療有關的不利事件。
使用bravecto?可咀嚼片劑的治療導致存在于皮膚碎屑中的平均螨數(shù)目的以下下降：在治療后第28天99.8%，和在治療后第56和84天100%。使用advocate?的治療導致存在于皮膚碎屑中的平均螨數(shù)目的以下下降：在第28天98.0%，在第56天96.4%，和在第84天94.7%。與advocate?治療的狗相比，在bravecto?治療的狗上發(fā)現(xiàn)了統(tǒng)計上顯著地(p≤0.05)更少的螨(表1)。
表1:用bravecto?口服治療一次或以28天間隔在3個時機用advocate?局部治療的狗的蠕形螨屬種螨計數(shù)的幾何平均值減小
a幾何平均值
b排除一只在第59天安樂死的狗后計算的螨計數(shù)
c不適用。
在用bravecto?可咀嚼片劑口服治療一次的狗上的紅斑斑塊的發(fā)生率從治療之前第-4天所述狗的62.5%下降至治療開始以后12周所述狗的12.5%。
痂皮、脫皮或鱗片的發(fā)生率從治療之前的100%下降至治療開始以后12周的12.5%。
與此相比，以28天間隔用advocate?治療3次的狗上的紅斑斑塊的發(fā)生率從87.5%下降至0%，且痂皮、脫皮和鱗片的發(fā)生率從100%下降至42.9%(表2)。
表2.用bravecto?或advocate?治療以后在具有全身的蠕形螨病的狗中皮膚病學變化的發(fā)生率的下降
a在第0天口服治療狗一次
b在第0天、第28天以及第56天局部治療狗。在治療之前執(zhí)行皮膚評估。
c排除一只在第59天安樂死的狗后計算的螨計數(shù)。
毛重新生長相對于治療之前被毛覆蓋的身體區(qū)域的比率總結在表3中。與治療前評估相比，在不遲于治療開始以后第56和84天，在兩組的大多數(shù)狗上的毛重新生長超過狗的皮毛的90%。
表3.在用bravecto?或advocate?治療之后具有全身的蠕形螨性獸疥癬的狗上的毛重新生長
a在第0天口服治療狗一次
b在第0天、第28天以及第56天局部治療狗。在治療之前執(zhí)行皮膚評估。
c排除一只在第59天安樂死的狗后計算的螨計數(shù)。
在研究期間在兩組中每只狗的體重類似地增加。
結論
bravecto?(13.64%fluralaner)可咀嚼片劑的單次口服施用對全身的蠕形螨病是非常有效的，在治療以后56和84天沒有可檢測的螨。與此相比，以28天間隔施用3次的advocate?(10%吡蟲啉/2.5%莫昔克丁)對全身的蠕形螨病也是非常有效的，但是大多數(shù)狗仍然在所有評估時間點攜帶螨。在初次治療以后12周，兩種治療導致皮膚損害的顯著減少和毛生長的增加。